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EXTRACIN DEL ADN

CROMOSOMAl
Objetivo:
Observar la estructura del ADN
Realizar bien la prctica, para ello debemos de saber bien el
procedimiento
Extraer y purificar DNA cromosomal de leucocitos.

Fundamento:
El material gentico, es la informacin hereditaria y es contenido en las
estructuras del cromosoma, los cromosomas tienen clulas y estas se
duplican antes de que se lleve a cabo la divisin celular.
Analizamos como extraer el material gentico, como su caracterizacin
como ser: clonacin, pruebas de paternidad, etc.
La extraccin de ADN requiere algunas etapas:
1. romper la pared celular y la membrana plasmtica para poder acceder al
ncleo de la clula.
2. tambin tiene que romperse la membrana nuclear, para poder dejar libre
al ADN.
Los jabones utilizados, emulsionan los lpidos de las membranas celulares.
La sal evita la unin de protenas al ADN, para aislar el ADN tiene que
precipitar en alcohol, ya que este es soluble en agua.
Pero cuando se encuentra en el alcohol se desenrolla y precipita en la
interface, entra alcohol y el agua. El alcohol separa el ADN de otros
componentes celulares.
ADN:
Es el material gentico de todos los organismos celulares y casi todos los
virus, el ADN lleva la informacin necesaria para dirigir la sntesis de
protenas y tambin la replicacin.

Procedimiento:
Extraer 5ml de sangre
Colocar la sangre en un tubo de ensayo, que contenga
anticoagulante EDTA al 10% (10 gotas)
Centrifugar 5min. A 2500 rpm desechar el plasma
Desechar el plasma y dejar 5mm
Agregar 5ml de la solucin I, e incubar la muestra en hielo durante 10
min.
Centrifugar durante 5min. A 2500rpm, luego desechar la solucin I
Agregar:
800 L de la solucin de lisis
800 L de SDS al 21%
1000 L de cloruro de sodio 4.8M
Luego incubar a 0 C y luego cambiar por la noche a 4 C
Extraer el ADN, con una mezcla de cloroformo y alcohol isomilico
(1ml de la mezcla), realizar las extracciones, colectar las soluciones
polares.
Agregar 1ml de fenol, cloroformo, isomilico.
Invertir 10 veces
Centrifugar durante 10min a 2500rpm
Separar el sobrenadante en otro tubo
Agregar 2ml de agua y 1ml de fenol y cloroformo
Centrifugar a 2500rpm, durante 5min.
Separar el sobrenadante en la solucin polar
Aadir 2ml de etanol a la solucin polar y 200 L de acetato
Pasar a otro tubo cnico para la separacin a - 83 C
Solucin de resuspensin
La auxiliar agrego los 10 L de bromuro de etidio, porque es peligroso

OBSERVACIONES

Al tener la sangre en el tubo de ensaye, despus de someterlo a una


centrifugacin para separar los leucocitos, rompindolos y quedando
suspendidos en la parte de abajo del tubo contenido de estos (DNA y otros
residuos celulares ajenos, etctera), prosiguindose a seguir limpiando el
DNA sometindose a varios ciclos de centrifugacin para obtener una
suspensin blanquecina (botn blanco) en el tubo con la solucin. Una vez
obtenido este DNA, se prosigui finalmente a deshidratarse segn lo indica
el procedimiento indicado, obtenindose despus el botn blanco
suspendido en agua destilada, el cual qued en el refrigerador para su
posterior uso.

DISCUSIN.

Durante el procedimiento fuimos observando que poco a poco se iba


obteniendo la purificacin del DNA, y finalmente se logr obtener un
producto que presentaba un aspecto blanquecino transparente y muy
condensado. As podemos decir que observamos claramente el aspecto del
DNA.

CONCLUSIN.

Con la tcnica de Miller se logr hacer la extraccin y purificacin correcta


del DNA de clulas sanguneas como fueron los leucocitos. Por medio de
esta tcnica se pudo lograr nuestro objetivo.