Materiales y Mtodos

Espectrofotmetro
Pizetas
Matraces Erlenmeyer
Agua destilada
Tubos de ensayo
Gradilla
100 ml. de almidn 1%
Beaker 100 ml
Suero Fisiolgico
Parafilm
Buffer Fosfato pH 7 100ml
Baguetas
Pipetas 10 ml, 5 ml.

Mtodos
EXPERIENCIA N 01: Preparacin de la muestra
1. Se agreg 60 ml de agua destilada en un beaker de 100ml.
2. Se escogi a un compaero de clase para que tome un sorbo del
beaker con agua destilada y realice enjuagues dentro de la boca
durante cinco segundos.
3. Se devolvi el aguaje con agua destilada y se rotul como muestra.
4. Luego, se dispuso de 2 matraces de los cuales se agregaron las
siguientes soluciones

BLANCO
PROBLEMA

MUESTRA

10 ml. NaCl 0.25

M

10 ml. NaCl
0.25 M

15 ml. almidn 1
%

15 ml. almidn
1%

10 ml. buffer
fosfato ph 7

10 ml. buffer
fosfato ph 7

15 ml. agua
destilada

13.5 ml. agua

destilada

Luego se
pre incubo
las
mezclas
homogeni
zadas

5. Luego que se incub a aproximadamente 37C (la incubacin fue

realizada manualmente por algn compaero del aula, simulando una
incubadora), se extrajo 5 ml. de cada matraz y se los coloc en tubos
de ensayo se tom los siguientes tiempos . Y se le agreg
inmediatamente 7 ml de agua destilada.
6. Posteriormente se le agreg a los tubos de ensayo 7 gotitas de yodo,
se mezcl y se dej reposar por 10 min.
7. Finalmente se llev al espectrofotmetro.

Recomendaciones

Manipular con precisin y exactitud las medidas de las soluciones a

preparar en el blanco y la muestra problema, as como la toma de
tiempo para posteriormente echar el agua destilada en los tubos de
ensayo debe hacer con precisin. Para esto se debe encargar a
ciertos compaeros de aula para que cada uno cumpla una funcin
determinada y se puedan tomas correctamente las medidas, as como
los tiempos.
En el momento de echar las gotitas de yodo en los tubos de ensayo,
se debe tener un correcto conteo de cada una de ellas, caso contrario
obtendremos una coloracin ms claro u oscura
En el uso del espectrofotmetro, observar correctamente la posicin
del blanco as como de los dems tubos. Para obtener un ptimo
resultado.

Discusin

En el desarrollo se utiliz la amilasa salival de un compaero de

aula y un sustrato el cual fue almidn. Por tanto como todas las
enzimas, tienen condiciones ptimas
del medio como
temperatura, ph, etc en donde su actividad enzimtica es mxima,
entonces utilizamos procesos en los cuales variamos estas
condiciones para determinar el punto ptimo.

Cuestionario

2. Por qu el modelo llave cerradura entre una enzima y un sustrato se ha

dejado de considerar en la actualidad?
En un principio, antes de que ciertos avances tecnolgicos se produjeran, se
pens que la interaccin entre el sitio cataltico de la enzima y el sustrato
era semejante a la que se da entre una llave y su cerradura. La teora se
llam Modelo de la llave y la cerradura y fue propuesto por el bioqumico
alemn E. Fisher en 1881. Aunque esta representacin explicaba la
especificacin, no poda explicar la catlisis en s misma. Como se observa

en la Fig. 01, el modelo plantea una interaccin relativamente rgida entre

los componentes; despus de ella, se origina el producto y la enzima
permanece sin transformacin estructurales ni funcionales.

Fig. 01. Modelo de la llave y la cerradura propuesto por E.

Fisher
Posteriormente, a partir de estudios de cristalografa de rayos X, se pudo
determinar que la interaccin entra a enzima y su sustrato no es tan rgida
como se pens en un inicio.(Koschland, 1958) propuso el modelo del ajuste
inducido, segn el cual la enzima, al interactuar con su sustrato, sufre un
cambio conformacional que permite una relacin ms estrecha entre ambos
y, de esta manera, como expreso, Wolfe (1993) se favorece
energticamente la formacin del estado de transicin de la reaccin. En la
fig. 02, se representa los ajustes que se deben llevar acabo en la enzima
para que la reaccin con un sustrato determinado pueda ocurrir.

Fig. 02 Modelo del ajuste inducido propuesto por Koschland, 1958

El modelo del ajuste inducido, que es el ms aceptado hoy en da y

revoluciono todo el concepto de la interaccin E S, pues de acuerdo con l,
en el momento de la unin, muchos sustratos modifican su conformacin y,
a la vez inducen un cambio en la de la enzima, sin embargo, solo se origina
un producto. El mecanismo propuesto se observa en la fig. 03. En este
modelo, la enzima y el sustrato sufren cambios conformacionales en el
estado de transicin, pero al final de la reaccin la enzima recupera su
estructura original.

Fig 03: La interaccin de la enzima con su sustrato especifico

Bibliografa:
Fornaguera Jaime (2004). Bioqumica: ciencia para la vida. 1 edicin. Pag
56 60. Ediciones EUNED