Manuales Departamentales Bioquímica y

Manuales Departamentales
Programa Acadmico, objetivos del curso, contenido temtico y

manual de prcticas de laboratorio
Bioqumica y
Biologa Molecular
Primer ao
2009-2010
Departamento de Bioqumica
Facultad de Medicina
Universidad Nacional Autnoma de Mxico
Cd. Universitaria, D.F. Agosto de 2009.
FACULTAD DE MEDICINA
MANUALES DEPARTAMENTALES
Obra general ISBN: 968-36-2767-6

Este volumen ISBM: 970-32-1866-0
2004
Nueva edicin revisada y estructurada.
2005 primera reimpresin.
2006 primera reimpresin.
Derechos reservados conforme a la ley.

Facultad de medicina, UNAM.
Folio CAPES: 008/2005
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Derecho de Autor y no puede ser reproducido, total o
parcialmente, por ningn medio mecnico, electrnico o
cualquier otro, sin el permiso escrito del Comit Asesor de
publicaciones de la Facultad de Medicina de la Universidad
Autnoma de Mxico.
El cuidado editorial estuvo a cargo del Comit Asesor de
Publicaciones de la Facultad de Medicina, UNAM.
El contenido de este Manual es responsabilidad de sus
Autores ya que constituye un auxiliar en la enseanza.
FACULTAD DE MEDICINA
Dr. Enrique Luis Graue Wiechers
Director
Dra. Rosalinda Guevara Guzmn
Secretario General
Dr. Pelayo Vilar Puig
Jefe de la Divisin de Estudios de Posgrado

e Investigacin
Dr. Juan Jos Mazn Ramrez
Secretaria de Enseanza Clnica, Internado

y Servicio Social
Dra. Irene Durante Montiel

Dr. Melchor Snchez Mendiola
Secretaria Tcnica del H. Consejo Tcnico

Secretario de Educacin Mdica
Dr. Ricardo Valdivieso Calderon
Secretario de Servicios Escolares
Dr. Luis Felipe Abreu Hernndez
Secretario de Planeacin
Lic. Ral A Aguilar Tamayo

Dr. Guillermo Robles Daz
Dra. Teresa Fortoul G
Dr. Arturo Ruz R.
C.P. Francisco Cruz Ugarte
Secterara Jurdica y de Control Administrativo

Coordinador de Investigacin
Coordinadora de Ciencias Bsicas
Coordinador de Servicios a la Comunidad
Secretario Administrativo
DEPARTAMENTO DE BIOQUMICA
Dr. Edgar Zenteno Galindo
Jefe del Departamento de Bioqumica
M. en C. Alicia Cea Bonilla
Coordinadora de Enseanza de Bioqumica

y Biologa Molecular
Dr. Ral Chvez Snchez
Coordinador de Enseanza de Inmunologa
Dr. Guillermo Mendoza Hernndez

M. en C. Rebeca Miln Chvez
Coordinador de Investigacin
Coordinadora del Laboratorio de Prcticas
Colaboradores
OBJETIVOS DEL CURSO
metabolismo del colesterol, estructura y metabolismo

de las lipoprotenas, regulacin del metabolismo de
Guillermo lvarez Llera

Patricia del Arenal Mena
Alicia Cea Bonilla
lpidos).
Hayde
Leonor Fernndez Rivera Ro

Rebeca Miln Chvez
Torres
Guerrero
(modificaciones
postraduccionales).
Ada Uribe Medina (caractersticas de la materia viva).
Sara Morales Lpez

Celia Virginia Snchez Meza
Alejandro
Zentella
Dehesa
(virus,
oncogenes
transformacin).
SYLLABUS
Guillermo lvarez Llera (agua, ciclo de Krebs, oxidacin de
los
aminocidos,
qumica
metabolismo
de
carbohidratos, qumica y metabolismo de lpidos).

Patricia del Arenal Mena (ciclo celular).
Alicia
Cea
Bonilla
protenas,
(fundamentos
enzimas
del
coenzimas,
metabolismo,
estructura
de
carbohidratos,
metabolismo
de
carbohidratos,
regulacin de la glucemia, regulacin del metabolismo
de lpidos, sntesis y degradacin de fosfolpidos,
regulacin
e
integracin
metablica,
biologa
INTRODUCCIN AL MANUAL DE PRCTICAS

DE LABORATORIO Y CASOS DE CORRELACIN
BIOQUMICA Y PRCTICA MDICA
Alicia Cea Bonilla (potenciometra y electroforesis).
Rebeca Miln Chvez (gota).
Celia Virginia Snchez Meza.
ELABORACIN O REVISIN DE LAS PRCTICAS

DE LABORATORIO
molecular).
Leonor Fernndez Rivera Ro (nucletidos).
scar Flores Herrera (figuras: ciclo energtico, vas que
siguen los protones en las levaduras, ciclo de Krebs y
esquema de un potencimetro).
Alberto
Hamabata
Nishimuta
(aspectos
bsicos
de
fisicoqumica, niveles de regulacin de la expresin

gentica).
Noem Meraz Cruz (sntesis y degradacin de fosfolpidos,
regulacin del metabolismo de lpidos).
Rebeca Miln Chvez (equilibrio hidroelectroltico).
Sara Morales Lpez (agua, qumica y metabolismo de
carbohidratos, qumica y metabolismo de lpidos).
Celia Virginia Snchez Meza (tabla peridica, enlaces,
fundamentos
del
metabolismo,
equilibrio
hidroelectroltico,
protenas,
radicales
libres,
descarboxilacin del piruvato, regulacin de la
glucemia, sntesis y degradacin de fosfolpidos,
1. Soluciones. Celia Virginia Snchez Meza y Rebeca

Miln Chvez.
2. Regulacin del equilibrio cido-base despus de
ejercicio muscular intenso y de la ingestin de
bicarbonato de sodio. Concepcin Gonzlez Lpez,
Celia Virginia Snchez Meza y Juan Luis Rendn
Gmez.
3. Cintica enzimtica. Efecto de la concentracin del
sustrato en la velocidad de la reaccin enzimtica.
Celia Virginia Snchez Meza, Rebeca Miln Chvez y
Jess Antonio Oria Hernndez.
4. Estudio del bombeo de protones por levaduras; efecto
de los inhibidores de la cadena de transporte de
electrones y de los desacoplantes. Juan Pablo Pardo
Vzquez y Federico Martnez Montes.
5. Efecto de la insulina sobre la glucemia de la rata.
Leonor Fernndez Rivera Ro.
6. Radicales libres (lipoperoxidacin). Jos Gutirrez y

Celia Virginia Snchez Meza.
7. Estudio general del metabolismo de los carbohidratos.
Celia Virginia Snchez Meza y Rebeca Miln Chvez.
8. Determinacin de la transaminasa glutmico-pirvica
srica. Ma. Eugenia Garca Salazar y Celia Virginia
Snchez Meza.
9. Determinacin de glucosa en sangre total. Rebeca Miln
Chvez y Eugenia Flores Robles.
10. Integracin Metablica. Rebeca Miln Chvez y
Eugenia Flores Robles.
11. Huella gnica. Rebeca Miln Chvez y Eugenia Flores

Robles.
La revisin y la actualizacin de los Objetivos del curso se
realiz en colaboracin con el proyecto: Mejoramiento de la
Enseanza de la Bioqumica y Biologa Molecular (EN206603) del Programa de Apoyo a Proyectos
Institucionales para el Mejoramiento de la Enseanza
(PAPIME), siendo el responsable del proyecto el doctor
Federico Martnez Montes.
Correccin y cuidado de la edicin: Edgar Zenteno
Galindo, Alicia Cea Bonilla, Rebeca Miln Chavez y
Eugenia
Flores
Robles.
CONTENIDO
PROGRAMA ACADMICO
I.
Misin de la Facultad de Medicina 8
II.
Introduccin
III.
Datos generales de la asignatura 12 -----
IV.
Objetivos de aprendizaje
12
V.
Metodologa educativa
12
VI.
Estructura del curso
13
VII.
Lineamientos de evaluacin
19
VIII.
Obligaciones de los profesores y
IX.
10
alumnos
25
Bibliografa
25
Unidad Temtica 1: Estructura molecular

I. Lgica molecular de la vida
A. Caractersticas de la materia viva
B. Niveles de la organizacin celular
B.1 Bioelementos
B.2 Molculas precursoras y
macromolculas
B.3 Estructuras, orgnulos, clulas, tejidos
Organismos
27
29
29
29
y
29
II. Aspectos fisicoqumicos del funcionamiento

celular
A. Aspectos bsicos de fisicoqumica aplicados
a la bioqumica
31
B. Agua
33
C. Equilibrio hidroelectroltico y cido-base
35
D. Aminocidos y protenas
37
D.1. Aminocidos
37
D.2. Protenas
37
E. Enzimas y coenzimas
40
E.1. Caractersticas de un sistema enzimtico40
E.2. Cintica enzimtica
40
E.3. Aspectos mdicos de la
enzimologa
40
Unidad Temtica II: Metabolismo

III. Metabolismo y bioenergtica
A. Fundamentos del metabolismo celular
B. Carbohidratos
46
48
B.1. Estructura
48
B.2. Digestin y absorcin
48
C. Metabolismo energtico
50
C.1. Gluclisis
50
C.2. Papel de la mitocondria en las funciones
oxidativas
51
C.3. Descarboxilacin del piruvato
52
C.4. Ciclo de los cidos tricarboxlicos (ciclo
de Krebs)
52
C.5. Cadena de transporte de electrones
(cadena respiratoria)
54
C.6. Fosforilacin oxidativa
54
C.7. Radicales libres
56
D. Otras vas metablicas de los carbohidratos.58
D.1. Gluconeognesis
58
D.2. Glucogenlisis y glucognesis
59
D.3. Va del fosfogluconato (ciclo de las
pentosas)
59
D.4. Regulacin de la glucemia
60
E. Lpidos
62
E.1. Estructura
62
E.2. Digestin, absorcin y transporte
62
F. Metabolismo de lpidos
64
F.1. Oxidacin de los cidos grasos (oxidacin)
64
F.2. Sntesis y utilizacin de los cuerpos
cetnicos
65
F.3. Sntesis de cidos grasos
65
F.4. Sntesis y degradacin de triacilgliceroles
66
F.5. Sntesis y degradacin de fosfolpidos 67
F.6. Metabolismo del colesterol
67
F.7. Estructura y metabolismo de las
lipoprotenas
68
F.8. Regulacin y alteraciones del
metabolismo de lpidos
69
G. Metabolismo de los compuestos
nitrogenados.
72
G.1. Aminocidos y protenas
72
G.2. Nucletidos
74
H. Regulacin e integracin metablica
76
Unidad Temtica III: Biologa Molecular

IV Biologa Molecular
A. Organizacin del genoma
B. Flujo de la informacin gentica
B.1. Flujo de la informacin gentica
B.2. Sntesis del DNA (duplicacin)
B.3. Transcripcin
B.4. Traduccin
80
83
83
83
85
86
VI
C. Mutaciones y reparacin del DNA

D. Niveles de regulacin de la expresin
gentica
E. Virus, oncogenes y transformacin
F. Tcnicas de manipulacin del DNA
89
90
93
95
MANUAL DE PRCTICAS DE LABORATORIO

I. Conceptos tericos iniciales
El mtodo cientfico
99
El Sistema Internacional de Unidades (SI)
101
Matemticas para el laboratorio
104
Notacin cientfica o exponencial
104
El mtodo del factor unitario en los clculos 105
Logaritmos
106
Grficas
107
Algunos mtodos utilizados en bioqumica
109
Centrifugacin
109
Potenciometra
110
Electroforesis
113
Soluciones
116
Manejo de material biolgico
116
Medidas de seguridad
123
II. Experimentos
Prctica 1. Soluciones
133
Prctica 2. Regulacin del equilibrio cido-base
despus de ejercicio muscular intenso y de la
ingestin de bicarbonato de sodio
137
Prctica 3. Cintica enzimtica. Efecto de la
concentracin del sustrato en la velocidad
de la reaccin enzimtica
140
Prctica 4. Efecto de la insulina sobre la Glucemia
de la rata.
145
Prctica 5. Estudio del bombeo de protones
por levaduras; efecto de los inhibidores
de la cadena de transporte de electrones
y de los desacoplantes
146
Prctica 6. El efecto del etanol sobre la lipoperoxidacin
149
Prctica 7. Estudio general del metabolismo
de carbohidratos
150
Prctica 8. El efecto del tetracloruro de carbono
sobre las transaminasas
1155
Prctica 9.Determinain de glucosa en sangre
total.
156
Prctica 10. Integracin metablica
Prctica 11. Huella gnica
160
168
III. Casos de correlacin bioqumica y prctica

mdica
Caso 1. Clera
174
Caso 2. Oclusin intestinal. Acidosis metablica.
Deshidratacin grave
175
Caso 3. Hipoglucemia secundaria a intoxicacin
Alcohlica
177
Caso 4. Cetosis por inanicin. Obesidad
178
Caso 5. Hipercolesterolemia y aterosclerosis 179
Caso 6. Gota
181
VII
PROGRAMA ACADMICO
I. Misin de la Facultad de Medicina

Formar a los lderes de las prximas
generaciones de mdicos mexicanos y contribuir a
establecer un sistema de salud capaz de preservar
y desarrollar las capacidades fsicas y mentales de
nuestra poblacin y colaborar en la preparacin de
investigadores en el campo de las ciencias
mdicas.
Para ello, ser necesario fortalecer el compromiso

social de sus estudiantes y su vocacin
humanstica para tener a la vida humana y a la
dignidad del hombre como valores supremos, por
lo que ser necesario que los alumnos adquieran
los conocimientos cientficos ms avanzados para
responder cabalmente a las necesidades de salud
de la sociedad mexicana.
La educacin y la formacin mdica en la Facultad

debern ser factores de cambio e innovacin en
las instituciones de salud y contribuir a incrementar
las aportaciones de la medicina mexicana al
conocimiento universal.
El apego a la prestacin de servicios de la ms
alta calidad, la curiosidad cientfica y el
compromiso
irrestricto
con
los
principios
fundamentales de la tica mdica debern ser la
caracterstica de sus egresados. Para ello ser
necesario organizarse en un ambiente de libertad
intelectual, en el que se conjuguen el talento de
profesores y alumnos, fomentando la creatividad y
la productividad individual y colectiva.
En suma, la Facultad de Medicina deber
caracterizarse por su calidad acadmica, su
vitalidad, su compromiso decidido con la
investigacin original y los principios humansticos
de la profesin para poder consolidar el liderazgo
que legtimamente le corresponde.
Calidad
acadmica.
Que
significa
favorecer la formacin ms all de la
simple informacin en sus estudiantes,
fortaleciendo su preparacin en las
ciencias bsicas de la medicina que les
permita seguir el ritmo de los avances en
el conocimiento y sus aplicaciones en la
clnica.
Vitalidad. Para poder enfrentar el futuro
en el contexto del cambio cientfico y
tecnolgico y de las modificaciones que
experimenten
las
condiciones
socioeconmicas de nuestra poblacin.
Para ello, ser necesario rescatar la
enseanza tutorial orientada a la solucin
de problemas de manera original e
innovadora y capaz de inducir en el
estudiante una conciencia clara de sus
necesidades de actualizacin permanente
y educacin continua.
Investigacin original. Por cuanto que es
un elemento indispensable para alcanzar
un sistema de salud de alta calidad y
eficiencia, y porque es la nica va para
atender
cabalmente
los
complejos
fenmenos que inciden en el proceso de la
salud y la enfermedad en medicina,
educacin
e
investigacin
son
inseparables.
Humanismo. Porque el fin ltimo del
mdico es el hombre mismo. Para ello
habr de desarrollar una sensibilidad
singular ante el dolor y la angustia de los
enfermos, ante su ignorancia y sus
problemas, para que pueda ayudar a
superarlos. Para poder servir a la sociedad
y los individuos con plena conciencia de
sus valores y potencialidades habr que
inducir en nuestros estudiantes una actitud
humanitaria.
Liderazgo. Entendiendo ste como la

capacidad para mantener una actitud de
vanguardia y compartir conocimientos y
experiencia; para orientar la educacin
mdica nacional y fortalecer tanto la
investigacin en salud como nuestro
sistema de educacin superior; para
transformar la medicina mexicana y
responder cada vez mejor a una sociedad
que se esfuerza en superarse y demanda,
con razn, una mayor calidad a todo el
sistema de salud.
Congruente con la Misin de la Facultad de

Medicina, la funcin del mdico se caracteriza de
la siguiente manera:
El mdico es un profesional comprometido a
preservar, mejorar y restablecer la salud del
ser humano; sus acciones se fundamentan en
el conocimiento cientfico de los fenmenos
biolgicos, psicolgicos y sociales. Su
ejercicio
profesional
se
orienta
primordialmente a la prctica clnica, la cual
debe ejercer con conocimiento, diligencia,
humanismo, prudencia y juicio critico,
guindose por un cdigo tico que considera a
la vida humana como valor supremo.
EL PERFIL PROFESIONAL DEL EGRESADO DE
LA CARRERA DE MDICO CIRUJANO
El egresado de la Facultad de Medicina de la
Universidad Nacional Autnoma de Mxico que
cumple satisfactoriamente los objetivos y adquiere
los conocimientos, habilidades, destrezas y
actitudes que integran el Plan nico de Estudios:
aspectos
afectivos,
emocionales
y
conductuales de los pacientes bajo su
cuidado.
Conoce con detalle los problemas de
salud de mayor importancia en nuestro
pas y es capaz de ofrecer tratamiento
adecuado a los pacientes que los
presentan.
Promueve el trabajo en equipo con otros
mdicos y profesionales de la salud y
asume la responsabilidad y el liderazgo
que le corresponden, segn su nivel de
competencia y papel profesional.
Dispone de conocimientos slidos acerca
de las ciencias de la salud, lo que le
permite utilizar el mtodo cientfico como
herramienta de su prctica clnica habitual
y lo capacita para optar por estudios de
posgrado, tanto en investigacin como en
alguna especialidad mdica.
Tiene una actitud permanente de
bsqueda de nuevos conocimientos, por lo
que cultiva el aprendizaje independiente y
autodirigido, lo que le permite actualizarse
en los avances de la medicina y mejorar la
calidad de la atencin que otorga.
Se mantiene actualizado en relacin a los
avances cientficos y tecnolgicos ms
recientes; utiliza la informacin y la
tecnologa
computacional
para
la
adquisicin de nuevos conocimientos y
como una herramienta de trabajo dentro
de su prctica profesional.
Es un profesional capacitado para ofrecer

servicios de medicina general de alta
calidad y, en su caso, para referir con
prontitud y acierto aquellos pacientes que
requieren
cuidados
mdicos
especializados.
En la atencin de los pacientes, adems
de efectuar las acciones curativas, aplica
las medidas necesarias para el fomento a
la salud y la prevencin de las
enfermedades, apoyndose en el anlisis
de
los
determinantes
sociales
y
ambientales, especialmente el estilo de
vida.
Se conduce segn los principios ticos y
humanistas que exigen el cuidado de la
integridad fsica y mental de los pacientes.
Como parte integral de su prctica
profesional examina y atiende los
II. INTRODUCCIN:
1. Mapa curricular:
ANATOMA
PRIMER AO
BIOLOGA CELULAR Y TISULAR

BIOLOGA DEL DESARROLLO
BIOQUMICA Y BIOLOGA MOLECULAR
PSICOLOGA MEDICA I
SALUD PBLICA I
ASIGNATURAS DE LIBRE
ELECCIN***
ASIGNATURAS DE LIBRE ELECCIN***

CIRUGA I
SEGUNDO AO
FARMACOLOGA
FISIOLOGA
INMUNOLOGA
MICROBIOLOGA Y PARASITOLOGA
SALUD PBLICA II
ELECCIN***
TERCER AO
PROPEDUTICA Y
FISIOPATOLOGA*
PATOLOGA
MEDICINA GENERAL I*
PSICOLOGA MDICA II**
SALUD PBLICA III***
GENTICA CLNICA*
CUART
O AO
SEMINARIO CLNICO*
ELECCIN***
SALUD PBLICA IV**
HISTORIA Y FILOSOFA DE LA
MEDICINA
10
MEDICINA GENERAL II*

CIRUGA II*
ELECCIN***
SEXTO AO
S E R V I C I O
URGENCIAS
COMUNIDAD
GINECOLOGA Y
OBSTETRICIA
CIRUGA
MEDICINA
INTERNA
PEDIATRA
QUINTO AO
INTERNADO MDICO*
S O C I A L
* Estas asignaturas son la base del entrenamiento en el rea clnica, en llas el alumno
adquirir los conocimientos acerca de la patologa de los diversos aparatos y sistemas,
as como las habilidades y destrezas necesarias para el manejo de los problemas de
salud ms frecuentes.
** Estas asignaturas corresponden al rea sociomdica.
*** Su propsito es permitir que el alumno profundice o complemente de acuerdo a sus
preferencias algunos contenidos del plan de estudios; tenga la posibilidad de capacitarse
en ciertas reas no consideradas en dicho plan, as como tambin dar flexibilidad al
currculo.
reas de rotacin bimestral.
11
2. Importancia de la asignatura en la carrera.

La segunda mitad del siglo XX fue el marco
temporal de una expansin acelerada de nuestro
entendimiento del mundo y del Universo en
general y, como consecuencia, la orientacin de
una mayor cantidad de recursos humanos y
materiales hacia la investigacin en todas las
reas de la ciencia. El campo de la medicina ha
tenido grandes avances, particularmente en las
reas del conocimiento de la Bioqumica y de la
Biologa Molecular. La informacin generada por
estas disciplinas ha sido fundamental para
comprender mejor el fenmeno de la vida y para
abordar el estudio de las enfermedades.
Los conocimientos aportados por la Bioqumica y
la Biologa Molecular no slo permiten entender
mejor la manera en la que estn estructuradas las
clulas y los tejidos, el funcionamiento del
organismo y cules son las fundamentos de la
patognesis existente, sino que proporcionan las
bases para el uso racional de las estrategias
teraputicas, principalmente en el campo del
descubrimiento de frmacos efectivos con un
mnimo de efectos indeseables.
Si bien es cierto que los avances son
extraordinarios, an quedan muchas interrogantes
por contestar. Da con da se avanza en la
bsqueda de tales respuestas. En consecuencia,
la Bioqumica y la Biologa Molecular forman parte
de esa gran plataforma de los programas actuales
de formacin acadmica de los mdicos cirujanos.
El Departamento de Bioqumica ofrece a los
estudiantes de la carrera de mdico cirujano el
programa de contenidos de este curso, el cual est
dirigido e integrado con un enfoque mdico,
adaptado a las necesidades de una modernidad
inquisitiva, demandante de conocimientos cada
vez ms aproximados a un contexto que permita
esa aspiracin superior de contar con una
medicina de alta calidad.
Por otro lado, ahora que inicias tus estudios
profesionales es importante que sepas que el
aprendizaje
es
una
experiencia activa de descubrimiento, por lo que
no slo debers esperar que tus maestros te
guen a lo largo de tus estudios.
Entre las habilidades que debers adquirir durante
tu formacin profesional estn la bsqueda de
informacin y la autoenseanza.
Los conocimientos mnimos necesarios para
aprobar el curso de Bioqumica y Biologa
Molecular se encuentran descritos en este Manual

de objetivos del curso y prcticas de laboratorio,
por lo que te sugerimos que los revises
cuidadosamente; en caso de que algn concepto
no se estudie en la clase, es tu responsabilidad
buscar
la
informacin
correspondiente
y
aprenderla. Te deseamos que el aprendizaje de
esta disciplina te resulte grato y que lo lleves a
feliz trmino.
III DATOS GENERALES DE LA ASIGNATURA

1. Coordinacin:
Bioqumica
2. Tipo de Asignatura:
3. Ubicacin
4. Duracin
5. N de horas
Departamento
de
Terica y prctica
Primer ao
Anual
Teora: 160 h
Prctica: 120 h
6. N de crditos
22
7. Clave
1115
8. Requisitos acadmicos
Cubrir
los
requisitos de ingreso a la licenciatura
IV OBJETIVOS DE APRENDIZAJE
1. Que el estudiante entienda los fenmenos
biolgicos desde el punto de vista molecular y
que sea capaz de integrar este conocimiento
en la estructura fisiolgica de la clula, del
tejido y del organismo.
2. Que el estudiante conozca los mecanismos
moleculares del funcionamiento del organismo
humano de una manera dinmica e integral y,
al mismo tiempo, comprenda cmo esos
mecanismos se encuentran alterados en la
enfermedad.
3. Que el estudiante demuestre, mediante
actividades ex profeso, que ha podido integrar
el conocimiento a nivel molecular como una
herramienta fundamental para la comprensin
de los procesos fisiolgicos y de la
fisiopatologa y con ello entienda los principios
en los que se apoya la tecnologa empleada
en el diagnstico de enfermedades.
4. Que el estudiante aplique el mtodo cientfico
como una herramienta en la identificacin, el
anlisis y la solucin de problemas mdicos.
V. METODOLOGA EDUCATIVA
Con base en lo descrito en el Plan nico de
Estudios respecto a este tema en los puntos A. 1,
12
2, 4, 6, 7, 8 y 9 y B. 1 y 2, el profesor utilizar, en
la medida de lo posible, algunos procedimientos y
tcnicas que impliquen una metodologa centrada
en la solucin de problemas, la vinculacin tericoprctica de los conocimientos (el desarrollo y
discusin de prcticas de laboratorio de inters
mdico), la aplicacin de tcnicas de enseanza
que favorezcan la participacin activa de los
estudiantes (como seminarios, discusin de casos,
las semanas de integracin bsica-clnica), as
como la bsqueda y anlisis crtico de la
informacin, sea de libros como de fuentes
automatizadas, para lograr los objetivos de
aprendizaje.
VI. ESTRUCTURA DEL CURSO

1. ACTIVIDADES PROPUESTAS:
Inicio del curso 25 de agosto de 2008 y termino el
20 de mayo de 2009.
El curso se divide en TRES UNIDADES
TEMTICAS:
a) Estructura molecular (correspondiente al 25%
de la calificacin).
b) Metabolismo (correspondiente al 50% de la
calificacin).
c) Biologa molecular (correspondiente al 25% de
la calificacin).
El contenido educativo del curso consiste en:
a) Teora.
b) Trabajo de laboratorio y programas de
aprendizaje de la bioqumica asistida por
computadora.
c) Revisin de casos de correlacin bioqumicaprctica mdica.
d) Solucin de problemas.
e) Semanas de Integracin bsica-clnica
2.
UNIDADES TEMTICAS Y CONTENIDO

TEMTICO:
UNIDAD TEMTICA I: Estructura molecular

I. Lgica molecular de la vida
A. Caractersticas de la materia viva
B.1 Bioelementos
B.2 Molculas
precursoras
y
macromolculas
B.3 Estructuras, orgnulos, clulas, tejidos y
organismos
II. Aspectos
fisicoqumicos
del
funcionamiento celular
A. Aspectos bsicos de fisicoqumica aplicados
a la bioqumica
B. Agua
D. Aminocidos y protenas
D.1. Aminocidos
D.2. Protenas
E.1. Caractersticas
de
un
sistema
enzimtico
E.2. Cintica enzimtica
E.3. Aspectos mdicos de la enzimologa
UNIDAD TEMTICA II: Metabolismo

III. Metabolismo y bioenergtica
A. Fundamentos del metabolismo celular
B. Carbohidratos
B.1. Estructura
B.2. Digestin y absorcin
C.1. Gluclisis
C.2. Papel de la mitocondria en las funciones
oxidativas
C.3. Descarboxilacin del piruvato
C.4. Ciclo de los cidos tricarboxlicos (ciclo
de Krebs)
C.5. Cadena de transporte de electrones
(cadena respiratoria)
C.6. Fosforilacin oxidativa
C.7. Radicales libres
D. Otras vas metablicas de los carbohidratos
D.1. Gluconeognesis
D.2. Glucogenlisis y glucognesis
D.3. Va del fosfogluconato (ciclo de las
pentosas)
D.4. Regulacin de la glucemia
E. Lpidos
E.1. Estructura
E.2. Digestin, absorcin y transporte
F. Metabolismo de lpidos
F.1. Oxidacin de los cidos grasos (oxidacin)
F.2. Sntesis y utilizacin de los cuerpos
cetnicos
F.3. Sntesis de cidos grasos
F.4.Sntesis y degradacin de triacilgliceroles
F.5. Sntesis y degradacin de fosfolpidos
F.6. Metabolismo del colesterol
F.7. Estructura y metabolismo de las
lipoprotenas
F.8. Regulacin
y
alteraciones
del
metabolismo de lpidos
13
G. Metabolismo
de
los
compuestos
nitrogenados
G.1. Aminocidos y protenas
G.2. Nucletidos
UNIDAD
Molecular
TEMTICA
III:
Biologa

B.1. Flujo de la informacin gentica
B.2. Sntesis del DNA (duplicacin)
B.3. Transcripcin
B.4. Traduccin
C. Mutaciones y reparacin del DNA
D. Niveles de regulacin de la expresin
gentica
E. Virus, oncogenes y transformacin
IV Biologa Molecular
14
3. CALENDARIO DE ACTIVIDADES:
CALENDARIO SUGERIDO PARA CUBRIR LAS ACTIVIDADES DE LA PRIMERA UNIDAD TEMTICA
(BLOQUE 1)
Semana
Fecha
10 al 15 de agosto
17 al 22 de agosto
B. Agua
Prctica: Soluciones
24 al 29 de agosto
B. Agua
Amortiguadores
Prctica: Soluciones
Revisin del caso clnico: CLERA
31 de agosto al 5 de
septiembre

Revisin del caso clnico: OCLUSIN INTESTINAL
7 al 12 de septiembre
D. Aminocidos y Protenas
Prctica: Equilibrio cido-base
14 al 19 de septiembre**
D. Aminocidos y Protenas
Prctica: Equilibrio cido-base
21 al 26 de septiembre
Prctica: Cintica Enzimtica
28 de septiembre al 3 de
octubre
Prctica: Cintica enzimtica
5 al 10 de octubre
Tema
Lgica molecular de la vida: Caractersticas de la materia viva y
jerarqua de la organizacin celular.
A. Aspectos bsicos de Fisicoqumica aplicados a la
Bioqumica.
2 . Unidad
A. Fundamentos del metabolismo
B. Estructura y Digestin de carbohidratos
10
12 al 17 de octubre
B. Estructura y digestin de carbohidratos
16 DE OCTUBRE
PRIMER EXAMEN DEPARTAMENTAL: 9:00-11:00 HRS
* Da de asueto
/ Exmenes departamentales
15
CALENDARIO SUGERIDO PARA CUBRIR LAS ACTIVIDADES DE LA SEGUNDA UNIDAD TEMTICA

(BLOQUE 2)
Semana
Fecha
Tema
19 al 24 de octubre/
26 al 31 de octubre///
C. Gluclisis
Descarboxilacin del piruvato
C. Ciclo de los cidos tricarboxilicos
Prctica: Efecto de la insulina sobre la Glucemia
de la rata
3 al 7 de noviembre/
C. Ciclo de los cidos tricarboxilicos

Prctica: Efecto de la insulina sobre la Glucemia
de la rata
9 al 14 de noviembre
C. Cadena de transporte de electrones

C. Fosforilacin oxidativa
Prctica: Bombeo de Protones
16 al 21 de noviembre*
23 al 28 de noviembre
30 de noviembre al
5 de diciembre
7 al 11 de diciembre//
D. Regulacin de la glucemia
12 de diciembre 09
al 2 de enero 10
4 al 9 de enero 2010
Vacaciones de Navidad
10
7 de enero 2010
C. Radicales libres
D. Gluconeognesis
Prctica: El efecto del etanol sobre la Lipoperoxidacin
1. Semana de Integracin Bsica-Clnica
MIELOMENINGOCELE E INSUFICIENCIA RENAL
D. Va del fosfogluconato
D.Glucognesis y glucogenlisis
Discusin Semana de Integracin
D.
Regulacin de la glucemia
Revisin del caso clnico: HIPOGLUCEMIA E
INTOXICACIN ALCOHLICA
Prctica: El efecto del etanol sobre la Lipoperoxidacin
Prctica: Estudio General del metabolismo de

Carbohidratos
SEGUNDO EXAMEN DEPARTAMENTAL: 09:00 -11:00
* Da de asueto
16
CALENDARIO SUGERIDO PARA CUBRIR LAS ACTIVIDADES DE LA SEGUNDA UNIDAD TEMTICA

(BLOQUE 3)
Semana
Fecha
7 al 9 de enero 2010
Tema
11 al 16 de enero
F. Oxidacin de los cidos grasos

F. Sntesis y utilizacin de cuerpos cetnicos
18 al 23 de enero
F. Sntesis de cidos grasos

F. Sntesis y degradacin de triacilgliceroles
25 al 30 de enero
Revisin del caso clnico CETOSIS POR INANICIN Y OBESIDAD

F. Metabolismo del colesterol
Metabolismo de lipoprotenas
F. Regulacin y alteraciones del metabolismo de lpidos
Revisin del caso clnico: HIPERCOLESTEROLEMIA Y
ATEROSCLEROSIS
1
2
3
4
1 al 6 de febrero/
5
6
8 al 13 de febrero
15 al 20 de febrero
22 al 27 de febrero
8
1 al 6 de marzo
10
8 al 13 de marzo//
11
17 de marzo
E. Estructura y Digestin de lpidos
G. Metabolismo de los compuestos nitrogenados

1. Aminocidos y protenas
2. Ciclo de la urea
G. Nucletidos
1. Purinas
Prctica: El efecto del tetracloruro de carbono sobre las
Transaminasas
G. Nucletidos
2. Pirimidinas
Revisin del caso clnico: GOTA
Prctica: El efecto del tetracloruro de carbono sobre las
Transaminasas
Prctica: Integracin metablica
Prctica: Integracin metablica
TERCER EXAMEN DEPARTAMENTAL: 9:00-11:00 HRS.
Da de asueto
17
CALENDARIO SUGERIDO PARA CUBRIR LAS ACTIVIDADES DE LA TERCERA UNIDAD TEMTICA

(BLOQUE 4)
Semana
Fecha
Tema
18 al 20 de marzo
A. Flujo de la informacin gentica

B. Estructura de los cidos nucleicos y sus funciones
22 al 27 de marzo
C. y G Organizacin del DNA y organizacin del genoma

D. Mecanismos de sntesis del DNA
Semana Santa
2
3
29 de marzo al 3 abril
5 al 10 de abril
12 al 17 de abril
5
2. Semana de integracin bsica-clnica

E. Mecanismos de transcripcin
Modificacin postranscripcional
F. Mecanismos de traduccin
F. Mecanismos de traduccin
F. Modificacin postraduccional
19 al 24 de abril
H. Mutaciones y reparacin del DNA

I. Niveles de regulacin de la expresin gentica
Prctica: Huella Gnica
26 al 30 de abril
Niveles de regulacin de la expresin gentica

Prctica: Huella Gnica
3 al 7 de mayo//*
7 de mayo
J. Virus, oncogenes y transformacin

K. Tcnicas de manipulacin del DNA
CUARTO EXAMEN DEPARTAMENTAL: 9:00-11:00 hrs.
* Da de asueto
Los contenidos especficos correspondientes a este programa, tanto tericos, como las prcticas de
laboratorio y los casos clnicos a que hace referencia esta calendarizacin de actividades se encuentran en el
manual de objetivos y prcticas de laboratorio de la Asignatura de Bioqumica y Biologa Molecular.
18
VII. LINEAMIENTOS DE EVALUACIN

Pendiente
19
20
21
22
23
24
VIII OBLIGACIONES DE LOS PROFESORES Y

ALUMNOS
IX BIBLIOGRAFA
Profesores
BSICAS
Con base en el artculo 56 y 61 del Estatuto de

Personal Acadmico de la UNAM, el profesor de
Bioqumica y Biologa Molecular:
1. Devlin TM. Bioqumica. Libro de texto con

aplicaciones clnicas. 4a. ed. Barcelona:
Editorial Revert; 2004.
1. Impartir sus clases tericas y/o prcticas con

puntualidad, segn el horario que le haya asignado
el Departamento, en el calendario escolar
correspondiente.
2.
Impartir su enseanza y calificar los
conocimientos de sus estudiantes sin hacer
ninguna distincin entre ellos. Para realizar dicha
evaluacin considerar diversos aspectos como
asistencia, desempeo en teora y laboratorio,
como aparece en los lineamientos de evaluacin
de la seccin previa de este programa acadmico.
3. Cumplir con el programa de la asignatura de
Bioqumica y Biologa Molecular aprobado por el
Consejo Tcnico de la Facultad y se los dar a
conocer a sus estudiantes el primer da de clases,
as como la bibliografa correspondiente al curso.
4. Aplicar los exmenes departamentales en las
fechas y lugares indicados por la Coordinacin de
Enseanza de la asignatura. Har la retroalimentacin de sus estudiantes despus de los
exmenes departamentales y/o finales.
5. Se abstendr de impartir clases particulares
remuneradas o no a sus propios alumnos.
Alumnos
Los alumnos de la asignatura de Bioqumica y
Biologa Molecular:
1. debern cumplir con el 80% de asistencias al
curso terico y al laboratorio y aprobar este ltimo
para tener derecho a la calificacin final.
2. debern presentar los exmenes, tareas y
trabajos que el profesor considere indispensables
para tener derecho a calificacin final (Juicio del
Profesor).
3. debern adquirir y utilizar el Manual de objetivos
y de laboratorio en el aula, tanto de teora como de
laboratorio.
4. No podrn realizar la prctica del laboratorio si
no traen el manual correspondiente y una bata
blanca.
5. Se abstendrn de introducir alimentos a las
aulas y/o laboratorios de enseanza.
2. Laguna J, Pia E. Bioqumica de Laguna.

5a.ed. Mxico: Editorial El Manual Moderno;
2002.
3. Lehninger AL, Nelson, DL. Principios de
bioqumica. 4a. ed. Barcelona: Ediciones
Omega; 2005.
4. McKee T, McKee RJ. Bioqumica. 3a. ed.
Espaa: McGraw-Hill Interamericana Editores;
2003.
5. Murray KR, Granner DK, Mayes PA, Rodwell
VW. Bioqumica de Harper. 16a. ed. Mxico:
IPN/Editorial El Manual Moderno; 2004.
6. Stryer L. Bioqumica. 5a. ed. Barcelona:
COMPLEMENTARIAS
1. Alberts B, Bray D, Lewis J. Biologa molecular
de la clula. 3a. ed. Barcelona: Ediciones
Omega; 1992.
2. Bloomfield MM.Qumica de los organismos
vivos. Mxico: Editorial Limusa; 1997.
3. Holum JR. Fundamentos de qumica general,
orgnica y bioqumica para ciencias de la
salud. Mxico: Editorial Limusa Wiley; 2001.
25
CONTENIDO TEMTICO
Primera Unidad Temtica

ESTRUCTURA MOLECULAR
26
I
LGICA MOLECULAR DE LA VIDA
Al finalizar esta unidad, el alumno conocer la naturaleza qumica de los seres vivos y
su organizacin. La unidad se divide en:
A. Caractersticas generales de la materia viva.
B. Niveles de la organizacin celular.
A. Caractersticas generales de la
materia viva
Al finalizar esta subunidad, el alumno conocer las
caractersticas de la materia viva.
A.1
A.2
Discutir la organizacin de los seres vivos

(procariotos,
eucariotos,
auttrofos
y
hetertrofos) con base en la complejidad de
las estructuras que los constituyen y la
funcin especfica que tienen.
Discutir con base en la figura I.1 la
capacidad de los seres vivos para obtener,
transformar y utilizar la energa, as como su
capacidad
de
autorregulacin
y
de
autoduplicacin.
Los sistemas vivientes son organizaciones en

extremo complejas que operan bajo principios
fisicoqumicos. Esta organizacin de la vida hace
posible
un
elevado
nmero
de
procesos
fundamentales que se llevan a cabo en forma
organizada y regulada en todos los sistemas
vivientes. Se ha propuesto que la vida est limitada
por los principios de la fsica y la qumica, pero lo
cierto es que logra trascender hasta los ms
elevados principios biolgicos.
Todos los seres vivos son sistemas organizados y
funcionando en forma coordinada, constituidos
fundamentalmente por molculas de carbohidratos,
lpidos, protenas y cidos nucleicos. Estos sistemas
Fig. I.1. Ciclo del CO2 y del O2 en los seres vivos.

Modificada de: Lehninger AL, Nelson, DL. Principios de
bioqumica. 4a. ed. Barcelona: Ediciones Omega; 2005.
intercambian materia y energa con su entorno, del

cual estn separados por una membrana. Las
funciones bsicas de transformacin y utilizacin de
la energa realizadas por estos sistemas, as como su
reproduccin se llevan a cabo con un alto grado de
precisin por protenas catalticas especficas
llamadas enzimas. Estas enzimas estn presentes en
las clulas y actan como catalizadores que hacen
posible que se lleven a cabo reacciones sin que la
clula sufra dao alguno.
La materia evoluciona aumentando su
complejidad debido al incremento en la variedad de
unidades que la constituyen y a la especializacin
que stas alcanzan. Cuanto ms complejo es un
27
sistema ms especializadas son sus partes y, por

ello, ms dependen unas de otras.
Las caractersticas universales de los
sistemas se encuentran a nivel bioqumico. Todas las
clulas obtienen energa, ya sea de la luz del sol o de
las molculas de alimento ricas en energa y la
almacenan en una molcula con un alto contenido
energtico: el ATP. Las clulas han desarrollado
fundamentalmente tres vas para generar ATP:
fermentacin, respiracin y fotosntesis.
Todas las clulas tienen la capacidad de
autoduplicarse: las molculas en las que se
almacena esta propiedad son el DNA y el RNA. La
universalidad de estas molculas en todos los
organismos vivos revela que todas las formas de vida
sobre la Tierra tienen un origen comn.
La importancia del DNA en la reproduccin y
el crecimiento de las clulas residen en la
informacin contenida en los genes. Las molculas
de DNA son polmeros de unidades, llamadas
nucletidos, constituidos por un azcar, un fosfato y
una base nitrogenada de cuatro tipos diferentes. La
secuencia precisa de bases en el DNA constituye la
informacin gentica. La funcin clave de esta
informacin es la de especificar la composicin de las
protenas. Ms que ninguna otra molcula, las
protenas hacen que un organismo sea lo que es.
El copiado exacto del DNA, aunque esencial
para el desarrollo individual, no es suficiente para
permitir los cambios evolutivos; tiene que existir una
fuente de variacin que proviene, fundamentalmente,
de la aparicin de mutaciones o de la recombinacin
del material gentico. Las mutaciones surgen por un
error en el proceso de copiado.
Los organismos ms complejos a nuestro
alrededor son multicelulares. La clula es la unidad
estructural y funcional de los seres vivos, as como el
tomo es la unidad fundamental de las estructuras
qumicas.
Resumiendo, la diversidad de los organismos
depende de un programa gentico codificado por los
cidos nucleicos, ejecutado por medio de complejos
reguladores
que
controlan
las
actividades
bioqumicas de las clulas, lo que da como resultado
diferentes niveles estructurales en la organizacin
molecular y celular de dicho organismo.
Hay dos principales clases de clulas: las

procariticas y las eucariticas. Las clulas
procariticas tienen un solo cromosoma que ocupa
un espacio dentro de la clula denominado nucleoide
y se halla en contacto directo con el citoplasma. Las
clulas eucariticas poseen varios cromosomas
contenidos en un ncleo verdadero con una
envoltura nuclear. Adicionalmente presentan una
serie de orgnulos que realizan funciones
especializadas como por ejemplo, las mitocondrias
que son potentes generadoras de ATP.
Se ha propuesto en la teora de la
endosimbiosis que, desde el punto de vista evolutivo,
las clulas procariticas son antecesoras de las
eucariticas.
Con base en el mecanismo que utilizan para
obtener la energa necesaria para realizar sus
funciones vitales podemos agrupar a todas las
clulas y organismos en otras dos clases principales:
los auttrofos, que utilizan el proceso de fotosntesis
para transformar molculas inorgnicas en glucosa, a
partir de la cual se construyen molculas ms
complejas, y los hetertrofos, que obtienen la energa
de molculas complejas que han sido sintetizadas
por organismos auttrofos. La energa que contienen
estas
molculas
complejas
es
liberada
principalmente por su oxidacin hasta CO2 y agua en
un proceso llamado respiracin.
He
H
Li
Be
a Mg
K Ca
Sc Ti
Rb Sr
Cs Ba
B C O F
Ne
Al Si P S Cl
Ar
V Cr Mn Fe Co Ni Cu Zn Ga
Zr Nb
Mo Tc
Hf
Ta
Ru Rh Pd Ag Cd
Re Os
Ir
Pt
In
Au Hg Tl
Ge
As Se Br
Kr
Sn
Sb Te
Xe
Pb Bi
Po At Rn
Fr Ra
Figura I.2. Elementos que forman parte de la materia viva. Los

ms abundantes o macroelementos (negritas), los presentes en
pequeas cantidades en todos los organismos o microelementos
(cursivas), y los que son necesarios en algunos organismos en
cantidades mnimas o elementos traza (subrayados).
28
Se llama metabolismo al total de reacciones que

ocurren en la clula. Hay reacciones catablicas por
las cuales las sustancias complejas se degradan
a sustancias ms simples y reacciones anablicas
que realizan el proceso inverso.
En resumen, las clulas tienen las siguientes
caractersticas:
1) Un programa gentico especfico que permite la
reproduccin de nuevas clulas del mismo tipo. 2)
Una membrana celular que establece un lmite que
regula todos los intercambios de materia y energa.
3) Una maquinaria biolgica que puede utilizar la
energa adquirida por la clula a partir de la energa
luminosa o de los alimentos.
4) Una maquinaria para la sntesis de protenas y
todas las dems molculas que integran a las clulas
de un organismo.
B.1.3
B.2
que hacen que estos elementos

sean
apropiados
como
constituyentes de la materia viva.
Describir los tipos de enlace (tabla
I.1, pg. 4) y funciones qumicas que
aparecen en las molculas biolgicas
(alcohol, carboxilo, carbonilo, ster,
amida, amino, ter y tiol).
Molculas precursoras y macromolculas.

B.2.1
Conocer
los
aminocidos,
nucletidos, monosacridos y cidos
grasos
como
precursores
de
protenas,
cidos
nucleicos,
polisacridos y lpidos, as como las
diversas funciones que llevan a cabo
en el organismo.

B.3
Al finalizar esta subunidad, el alumno analizar y
discutir los diferentes niveles de la organizacin
celular.
B.1
Bioelementos.
B.1.1 Identificar en una tabla peridica
(figura I.2) los elementos que forman
parte de la materia viva.
B.1.2 Conocer
las
caractersticas
fisicoqumicas
(configuracin
electrnica, electronegatividad e
hibridacin) del carbono, nitrgeno,
oxgeno, hidrgeno, azufre y fsforo,
Estructuras, orgnulos, clulas, tejidos y

organismos.
B.3.1 Describir la manera cmo se
ensamblan las macromolculas para
obtener un nivel mayor de
organizacin.
B.3.2 Describir la estructura de las
membranas biolgicas.
B.3.3 Definir a la clula como la unidad
mnima de organizacin de la
materia viva.
29
Tabla I.1
CARACTERSTICAS DE LOS ENLACES QUMICOS
Tipo de enlace
INICO
COVALENTE
Simple
Coordinado
Polar
Mltiple
Enlaces
intermoleculares
PUENTE DE
HIDRGENO
FUERZAS DE
VAN DER WAALS
INTERACCIONES
HIDROFBICAS
INTERACCIN
IN DIPOLO
Descripcin general
Es la fuerza de atraccin entre iones con signos
contrarios que se forman por la transferencia completa
de electrones desde el tomo con mayor tendencia a
perderlos, al que tiene mayor afinidad por ellos.
Resulta de compartir electrones entre dos o ms
tomos que tienen una afinidad electrnica semejante
Se forma mediante la donacin de un electrn por parte
de cada tomo que participa en el enlace.
Ambos elctrones los da uno solo de los tomos que
participan en la formacin del enlace.
Se establece cuando los electrones del enlace
covalente se encuentran ms cerca del elemento de
mayor electronegatividad. En el enlace se forma un
polo relativamente positivo y otro relativamente
negativo.
En algunos compuestos de los tomos comparten ms
de un par electrnico (enlaces dobles o triples).
Fuerzas de atraccin dbiles entre diferentes
molculas y iones
Interaccin dipolo-dipolo. Se establece cuando un
tomo de hidrgeno sirve como puente entre dos
tomos electronegativos, unido a uno con un enlace
covalente, y al otro, con fuerzas de naturaleza
electrosttica.
Son fuerzas electrostticas transitorias. La atraccin se
establece entre los extremos de dipolos momentneos
con cargas opuestas.
Enlaces polares. Las molculas se reunen
conjuntamente asocindose entre s en el seno del
agua debido a que las interacciones agua-agua son
muy fuertes y rodean a las molculas apolares
Es la atraccin de un in positivo por el extremo
negativo de las molculas de un disolvente polar
(solvatacin). Cuando el disolvente es el agua, se dice
que las partculas de soluto se hidratan.
Energa de enlace
10-20 kcal/mol
42-84kJ/mol
Para la unin:
CC
83 kcal/mol
348 kJ/mol
___
OH
111kcal/mol
464kJ/mol
CC
146kcal
611kJ/mol
___
2.5kcal/mol
8-21kJ/mol
1kcal/mol
4kJ/mol
1-2kcal/mol
4-8kJ/mol
0.01 kcal/mol
0.04kJ/mol
30
II
ASPECTOS FISICOQUMICOS
DEL FUNCIONAMIENTO CELULAR
Al finalizar esta unidad, el alumno deber conocer y aplicar los conceptos
fundamentales de fisicoqumica a la comprensin de la estructura y comportamiento de
las molculas biolgicas en la clula y en su interaccin con el ambiente; adems,
conocer algunos aspectos mdicos de ellos. La unidad se divide en:
A.
A.
Aspectos bsicos de fisicoqumica aplicados a la bioqumica.
B.
Agua.
C.
Equilibrio hidroelectroltico y cido-base.
D.
Aminocidos y protenas.
E.
Enzimas y coenzimas.
Aspectos bsicos de fisicoqumica

aplicados a la bioqumica
Al finalizar esta subunidad, el alumno conocer los

conceptos bsicos de fisicoqumica necesarios para
la comprensin de la bioqumica.
A.4
A.5
A.6
A.1
Definir el concepto de sistema y conocer

sus diferentes tipos con base en su
capacidad de intercambiar materia y energa
con su ambiente (sistemas abiertos y
cerrados).
A.2
Conocer las leyes de la termodinmica y

definir el concepto de entropa, entalpa as
como energa interna.
A.3
Definir el concepto de energa libre de

Gibbs y de energa libre estndar de una
reaccin y su empleo como criterio de
espontaneidad de un proceso.
Identificar los procesos exergnicos y

endergnicos y los relacionar con procesos
reversibles e irreversibles.
Analizar la estrategia de las reacciones
acopladas. Se sugiere usar como ejemplo
una reaccin catalizada por una cinasa.
Definir los conceptos de energa de
activacin y de estado energizado de una
reaccin.
En termodinmica un sistema se define como la parte

del Universo en estudio. Por lo tanto, un sistema
puede ser un tubo de ensayo, una mquina, una
planta o el hombre.
El resto del Universo se conoce como
ambiente. El organismo humano es un sistema
abierto porque es capaz de intercambiar materia y
energa con el ambiente que lo rodea; toma los
nutrimientos, oxgeno y agua del ambiente; elimina
productos de desecho, y genera trabajo y calor.
31
La primera ley de la termodinmica, o ley de

la conservacin de la energa, dice que la energa no
se crea ni se destruye, slo se transforma.
U = U final U inicial = q w (1)
Esta expresin matemtica muestra que el
cambio de energa, prdida o ganancia que sufre un
sistema (U) corresponde a la diferencia entre el
contenido de energa al principio (U inicial) y al trmino
(U final) del estudio.
La segunda relacin matemtica: (U = q
w) significa que parte de ese cambio de energa se
utiliza para hacer trabajo (w) sobre el ambiente y el
resto se libera en forma de calor (q). Los procesos en
los cuales el sistema libera calor se llaman
exotrmicos (q con signo negativo por convencin), y
a los que absorben calor se les llama endotrmicos
(q con signo positivo).
La medida de este intercambio de calor,
liberado o absorbido con el ambiente, se llama
entalpa (H):
H = qp (2)
donde qp se lleva a cabo a presin constante.
La segunda ley de la termodinmica dice que
el Universo tiende hacia el mximo desorden. Esta
ley provee un criterio para determinar si un proceso
es espontneo. Un proceso espontneo ocurre en
una direccin que aumentara el desorden del
sistema y del ambiente. La medida del desorden del
sistema se llama entropa (S) y el cambio puede ser
en el sentido de aumentar el desorden (S con signo
positivo) o de disminuir el desorden (S con signo
negativo).
La tercera ley de la termodinmica o ley cero
dice que a una temperatura de 0K (-273 C) la
entropa de un sistema es igual a cero.
J. Willard Gibbs (1878) formul el concepto
de energa libre (G) que engloba los dos indicadores
de espontaneidad de un proceso a temperatura y
presin constantes:
G = H TS
y los cambios quedaran indicados como:

G = H TS (4)
De esta manera, un cambio en la energa
libre sera la suma algebraica del cambio de la
entalpa y el cambio de la entropa multiplicada por la
temperatura (K).
Un proceso con G negativo (espontneo y
exergnico) puede darse por una disminucin en la
entalpa (liberacin de calor) o por un aumento en la
entropa (aumento de desorden). Por el contrario, un
proceso endergnico, no espontneo, tiene un G
positivo, caracterizado por un aumento en la entalpa
(absorcin de calor) o por una disminucin en la
entropa. El G representa la energa que se emplea
para ejercer un trabajo.
En muchos sistemas, entre ellos los
biolgicos, un valor negativo grande predice que la
reaccin se puede llevar a cabo de manera
espontnea, pero no dice nada acerca de la
velocidad del proceso, ni del camino que ste sigue.
Por ejemplo, en algunas reacciones qumicas, el G
puede ser negativo, y esto predice que la reaccin
ser espontnea, pero como el camino ocurre a
travs de un estado energizado (de mayor contenido
de energa) de los reactivos, el proceso no se lleva a
cabo a menos que se introduzca energa al sistema
para que se alcance ese estado energizado (energa
de activacin); entonces, el proceso se realizara de
manera espontnea. La introduccin de enzimas
para realizar una reaccin, tiene el efecto de
disminuir la energa de activacin de dicha reaccin
(debido a la formacin del complejo enzima-sustrato).
Una estrategia que se sigue en los sistemas
biolgicos para lograr que las reacciones no
espontneas, con G positivo, se lleven a cabo,
consiste en acoplarlas a otras reacciones
relacionadas que tengan un G muy negativo. De
esta manera, en las vas metablicas las reacciones
exergnicas empujan o jalan a las reacciones
endergnicas y desplazan el equilibrio qumico. Por
ejemplo, la fosforilacin de la glucosa por ATP
catalizada por la hexocinasa:
(3)
32
B.3
Ecuacin:
(kcal/mol)
Glucosa + Pi = Glucosa 6 fosfato + H2O
+3.3
7.3
ATP + H2O = ADP + Pi + H
Glucosa + ATP = Glucosa 6 fosfato + ADP + H 4.0
B.
Agua

propiedades fisicoqumicas del agua y los conceptos
de reaccin qumica, pH, cido, base y amortiguador.
B.1
Conocer
las
siguientes
propiedades
fisicoqumicas del agua: su composicin, sus
enlaces qumicos, densidad electrnica,
caractersticas de dipolo, puentes de
hidrgeno, estructura en sus estados fsicos,
calor latente de vaporizacin, calor
especfico, tensin superficial, conductividad
trmica, constante dielctrica y su papel
como solvente.
B.2
Soluciones acuosas.
B.2.1 Definir qu es una solucin y los
diferentes tipos de soluciones que
existen.
B.2.2 Explicar los clculos y los
procedimientos
para
preparar
soluciones porcentuales molares,
osmolares y normales, as como las
diferentes diluciones de estas.
Conocer la composicin de las
siguientes soluciones utilizadas en
medicina: solucin istonica, de
Ringer, de Darrow, de Hartman.
B.2.3 Revisar las propiedades coligativas
de las soluciones y su importancia en la
medicina.
B.2.4 Definir
los
conceptos
de
osmolaridad,
osmolalidad,
hiper
e
hipoosmolaridad, as como el de isotonicidad.
Realizacin de la prctica 1 "Soluciones" (ver pg.
133)
Analizar el concepto de pH.

B.3.1 Definir lo que es una reaccin
qumica
y
sus
componentes.
Describir la ley de accin de masas
y definir la constante de equilibrio y
su significado.
B.3.2 Conocer la reaccin de ionizacin
del agua, su constante de equilibrio y
el producto inico del agua.
B.3.3 Conocer el concepto de pH y
establecer su escala de medicin.
Aplicar dicho concepto para calcular
los valores de pH a partir de la
concentracin de iones hidronio y de
la concentracin de H+ a partir de los
valores de pH.
Uno de los compuestos ms abundantes en nuestro

planeta es el agua. Se cree que fue en los ocanos
primitivos donde se originaron los primeros indicios
de vida. El agua constituye el medio en el cual se
realizan la mayora de los procesos celulares (de
hecho podra decirse que la conformacin que toman
las molculas dentro de las clulas depende del
agua). Es por ello que el agua es una molcula muy
importante para sostener la estructura de las clulas
y los organismos.
Las caractersticas peculiares del agua
derivan de su estructura qumica particular, en la cual
los dos hidrgenos y el oxgeno se encuentran
formando un tetraedro irregular en el que el oxgeno
ocupa el centro y los hidrgenos, junto con los dos
orbitales del oxgeno no compartidos, estn dirigidos
hacia los vrtices. La diferencia de electronegatividad
entre el oxgeno y los hidrgenos hace que los
enlaces entre ellos sean covalentes polares, dando
cargas parciales positivas y negativas a la molcula
que la constituyen como un dipolo. Esta
caracterstica permite que exista una fuerza de
atraccin entre los extremos cargados opuestamente
de las molculas vecinas.
La atraccin entre las molculas de agua
permite que se establezcan enlaces dbiles llamados
puentes de hidrgeno que configuran redes
transitorias cuya existencia continuada confiere al
agua sus propiedades fisico-qumicas caractersticas:
33
ser lquida a temperatura ambiente, alto punto de

fusin, alto punto de ebullicin, elevada tensin
superficial, alta constante dielctrica, alta capacidad
calorfica y baja tensin de vapor.
Todas esas propiedades permiten que el
agua desempee muy variadas funciones en los
seres vivos; por ejemplo, servir como medio universal
de solucin, de suspensin y de reaccin para todas
las molculas, o intercambiar cantidades importantes
de calor sin mucha variacin de su temperatura, lo
cual le permite mantener constante la temperatura
del organismo y controlarla mediante los fenmenos
de vasoconstriccin y de sudoracin. El transporte de
sustancias entre los diversos rganos y tejidos del
cuerpo humano se hace por el plasma y los lquidos
extracelulares, ambos de naturaleza acuosa. Las
interacciones del agua con las diversas molculas
permiten el mantenimiento de las estructuras
celulares. La presencia de partculas en solucin va a
modificar las propiedades caractersticas del agua y
da origen a lo que se conoce como propiedades
coligativas de las soluciones (propiedades que
dependen del nmero de partculas en la solucin y
no de su naturaleza). Entre stas, la ms notable es
la aparicin de la presin osmtica.
Una molcula de agua tiene la capacidad de
ceder un protn a la molcula vecina y esto ocasiona
que la molcula que cedi su protn quede con una
carga neta negativa y la molcula de agua que lo
acepta quede con una carga positiva. Esto indica que
el agua se ioniza, ya que acta como un cido al
+
donar protones (H ) y como una base al aceptarlos,
segn la teora de Brnsted y Lowry. As, el agua
puede encontrarse en dos especies inicas: el
+
hidronio H3O , que funcionara como cido, y el
hidroxilo OH , que es la especie que queda al ceder

la molcula de agua su protn, y que funciona como
una base, ya que puede aceptar protones. Para
facilitar la expresin de la ionizacin del agua se
simplifica as:
+
H 2O
H + OH
A las sustancias que tienen esta capacidad
se las llama anfteras o anfolitos.
La velocidad de las reacciones qumicas
depende de la concentracin de las molculas
implicadas en ellas, as como de una constante de
velocidad de la reaccin (k), que es una medida

indirecta de la capacidad intrnseca de las molculas
para reaccionar entre s. En la reaccin:
A+B
C+D
la velocidad (v) es igual a k [A][B].
Como la mayora de las reacciones son
reversibles, existen dos constantes de velocidad, una
correspondiente a la reaccin directa y una
correspondiente a la reaccin inversa. Cuando la
velocidad de la reaccin directa es igual a la
velocidad de la reaccin inversa se establece una
condicin de equilibrio en la que hay una relacin
particular del producto de las concentraciones de los
productos entre el producto de las concentraciones
de los reactivos. Esta relacin es lo que se conoce
como constante de equilibrio (Keq) y es igual a ki/kd
o [C] [D] / [A] [B]. La constante de equilibrio es
caracterstica para cada reaccin y permite conocer
si la reaccin es ms favorable hacia los productos (a
la derecha), en cuyo caso el valor ser siempre
mayor a la unidad, o ms favorable a la aparicin de
los reactantes (a la izquierda) cuando el valor de la
constante ser menor a la unidad. Si el valor es igual
a uno no hay una tendencia clara en ninguna de las
direcciones.
En el caso del agua, la Keq tiene un valor de
16
1.8 X 10 mol/l, que es mucho menor a la unidad, lo
cual indica que la molcula tiende a estar asociada;
la concentracin del agua sin disociar es tan elevada
que puede considerarse constante. Cuando el valor
de esta concentracin se multiplica por la Keq se
obtiene el valor del producto de la concentracin de
+
ambos iones H y OH , lo que se conoce como Kw o

+
producto inico del agua, donde Kw = [H ] [OH ] = 1

14
2 2
X 10 mol /l . Aqu la concentracin de ambos iones
7
es de 1 X 10 . A partir de esta constante (Kw) se
puede deducir el carcter de una solucin diluida
respecto a su grado de acidez o basicidad; se ha
+
+
elegido al ion hidronio (H3O ), simplificado como H ,
como valor numrico para expresarla. Como las
concentraciones que se manejan son tan pequeas,
aun
expresadas
matemticamente
como
submltiplos de 10 (potencias negativas de 10), su
manejo puede resultar complicado por lo que se
34
utiliza el -log de base 10 para expresarlo. Esto es lo

que se conoce como p y referido a la concentracin
+
de H se denomina pH. El pH, entonces, corresponde
al -log de la concentracin de hidrogeniones, o sea:
+
+
pH = log [H ] o bien pH = log 1/[H ]
Ntese que la p es minscula, ya que se
trata de una sigla que indica potencial.
Si se considera que el valor de la
7
concentracin de protones es de 1 x 10 , se tiene
que:
7
7
pH = log 1/ (1 x 10 ) = log 1 log 1 x 10 = 0 (7)
=7
Es a partir del agua que se define la escala
de pH, por lo cual se habla de soluciones cidas
cuando tienen valores de concentracin de
7
hidrogeniones mayores de 1 X 10 o pH menores de
7 y de soluciones alcalinas con concentraciones de
7
hidrogeniones menores de 1 X 10 y pH mayores a
7.
Cuando la concentracin de hidrogeniones
en solucin acuosa es de 1.0 M, el valor del pH es 0,
ya que el log10 1 es 0. En el otro extremo, cuando la
+
14
concentracin de H es (1 X 10 ) el pH es de 14. El
punto de neutralidad es de pH = 7 o en concentracin
+
7
de H de 1 X 10 . El intervalo de pH para indicar la
acidez de una solucin va del 0 al 7, mientras que el
correspondiente a la basicidad o alcalinidad de una
solucin va del 7 al 14.
C.
Equilibrio hidroelectroltico
y cido-base
Al finalizar esta subunidad, el alumno conocer los

conceptos de electrlito, cido, base y amortiguador;
as como la composicin de los compartimientos
lquidos del organismo, el balance del agua y de los
electrlitos.
C.1
Definir los conceptos de anin, catin,

electrlito, anfolito
y conocer la
composicin
electroltica
de
los
compartimentos lquidos del organismo
(plasma, lquidos intracelular e intersticial,
jugo gstrico, jugo pancretico y bilis).
C.2
Definir los conceptos de cido y base, su

fuerza, y analizar los cambios del pH de una
solucin al agregar un cido o una base
explicando el porqu de este fenmeno.
C.3
Analizar
el
concepto
de
sistema
amortiguador.
C.3.1 Definir
el
concepto
de
amortiguador, de pK y explicar la
importancia
de
los
sistemas
biolgicos de amortiguacin.
C.3.2 Aplicar la ecuacin de HendersonHasselbalch al clculo del pH y de la
concentracin de sal o de cido de
diferentes soluciones.
C.3.3 Identificar
los
sistemas
amortiguadores ms importantes en
los medios intra y extracelular.
Explicar cmo se regula el pH de los
lquidos orgnicos y la participacin de los
sistemas amortiguadores, el intercambio
inico,
as
como
los
mecanismos
respiratorios y renales.
C.4.1 Revisar las principales alteraciones
del equilibrio cido-base en el
organismo y los mecanismos para su
control.
C.4
Realizacin de la prctica 2 "Regulacin del equilibrio

cido-base despus del ejercicio muscular intenso y
de la ingestin de bicarbonato de sodio" (ver pg.
137).
Discusin de los casos clnicos 1 "Clera" y 2
"Oclusin
intestinal.
Acidosis
metablica.
Deshidratacin grave" (ver pgs. 174-175).
Es importante recordar que un in es una especie
qumica (tomo o conjunto de tomos) con carga
elctrica positiva (catin) o negativa (anin) por
ganancia o prdida de electrones; los iones disueltos
en agua pueden conducir la electricidad. El paso de
la electricidad a travs de una solucin con iones se
llama electrlisis. Los solutos que pueden liberar
iones en el agua por disociacin o ionizacin y que
35
forman una solucin conductora de electricidad se

llaman electrlitos.
El agua es el mayor constituyente de los
seres vivos; su cantidad debe mantenerse dentro de
un margen estrecho ya que tanto su carencia como
su exceso producen problemas clnicos que se
conocen como desequilibrios hdricos.
El agua corporal la encontramos en
diferentes compartimentos y su cantidad en stos,
depende de las concentraciones de ciertos
+
+
2+
2+
electrlitos como Na , K , Cl , HCO3 , Mg y Ca ,
fosfatos y proteinatos. Las concentraciones de estos
electrlitos se mantienen dentro de ciertos lmites
que al alterarse, producen desequilibrios que pueden
llegar hasta la muerte.
En la prctica mdica est indicada la
cuantificacin de electrlitos en cualquier paciente
con sntomas neuromusculares. El tratamiento de las
alteraciones hidroelectrolticas se basa en la
evaluacin del agua corporal total y su distribucin,
as como en las concentraciones de electrlitos y en
la osmolaridad del suero.
Agua corporal
El agua en el cuerpo humano ocupa cerca de 70%
del peso corporal dependiendo de la edad, el sexo y
la grasa corporal. La cantidad de agua puede variar
desde alrededor de un 40% en personas mayores a
ms de un 75% en nios recin nacidos. Su
porcentaje tambin es mayor en personas delgadas
que en obesas, as como un hombre tendr mayor
cantidad de agua que una mujer. La cantidad de
agua presente en los diferentes tejidos vara de
acuerdo con las funciones y caractersticas de cada
uno,
siendo
ms
abundante
en
clulas
metablicamente muy activas (~ 90%) y de menos
del 10% en el tejido adiposo o an menor, en
estructuras relativamente inactivas como el
esqueleto.
El agua se encuentra distribuida en el lquido
intracelular (30-40% del peso corporal total) y el
lquido extracelular que, a su vez, est conformado
por el lquido intersticial y la linfa (15%), el plasma
(4.5%) y los fluidos transcelulares que incluyen los
fluidos gastrointestinales, peritoneal, sinovial, lquido

cefalorraqudeo, entre otros.
Electrlitos
La composicin electroltica del lquido intracelular
(LIC) y del lquido extracelular (LEC) difiere en forma
+
sustancial. Para fines prcticos el LIC tiene al K
como el principal catin y como aniones al fosfato y a
+
las protenas, mientras que en el LEC, el Na es el
catin ms importante y el cloruro como anin.
La concentracin total de cationes presentes
en el plasma es aproximadamente de 150 mmol/l,
siendo la concentracin de sodio de 140 mmol/l. Los
aniones presentes en el plasma ms abundantes son
el cloruro, con una concentracin aproximada de 100
mmol/l y el bicarbonato, con una concentracin de 25
mmol/l. Dado que en cualquier sistema biolgico la
suma de los cationes debe ser igual a la suma de los
aniones, el resto de los aniones que constituyen la
diferencia o brecha aninica del plasma son el
fosfato, el sulfato, las protenas y los cidos
orgnicos como son el lactato, el citrato, el piruvato,
el acetoacetato y el 3--hidroxibutirato.
En la prctica, esta brecha aninica se
calcula de acuerdo a la siguiente ecuacin:
+
Brecha aninica = {[Na ] + [K ]} {[Cl ] + [HCO3 ]}

Calculada de esta forma, la brecha aninica
es de aproximadamente 12 mmol/l. Puede aumentar
muchas veces en ciertos desrdenes como cuando
los cidos inorgnicos y los aniones orgnicos se
acumulan, por ejemplo, en la cetoacidosis diabtica y
en la insuficiencia renal.
El potasio es el principal catin en el LIC,
cuya concentracin es de 110 mmol/l, es
aproximadamente 30 veces ms alta que la que se
encuentra en el LEC. La concentracin de sodio y
cloruro en el LIC es de 10 mmol/l y 4 mmol/l,
respectivamente.
La movilizacin y el metabolismo de los
principales cationes extra e intracelulares depende
de la actividad celular as como de transportadores
especficos, entre los cuales se encuentra la bomba
+ +
de Na /K . Los cambios en la concentracin de iones
conlleva a cambios en la osmolaridad del medio.
36
Osmolaridad
Las diferentes molculas disueltas en el agua
corporal contribuyen a la presin osmtica, la cual es
proporcional a la concentracin molar de la solucin.
Un cambio en la concentracin inica en cualquiera
de los compartimentos celulares crea un gradiente de
presin y como consecuencia, existe un cambio en la
cantidad de agua que fluye del compartimiento que
presenta una menor osmolaridad hacia el de mayor.
Para determinar la concentracin osmolar de
una solucin que contiene una mezcla de electrlitos
y no electrlitos hay que tener en cuenta las
concentraciones
individuales
de
todos
sus
componentes. Una frmula sencilla para cuantificar la
osmolaridad del suero y que ofrece una utilidad
clnica es:
+
Osmolaridad =2(Na mmol/l) + glucosa mmol/l + BUN
mmol/l
= 280 a 320 mOsm
Osmolaridad = 2(Na+ meq/l) + glucosa mg/dl + BUN mg/dl
---18
-----
2.8
donde el factor 2 se debe a que se consideran los

+
aniones asociados al Na (Cl y HCO3); 1 mOsm de

glucosa equivale a 180 mg/l (18 mg/dl) y 1 mOsm de
nitrgeno ureico (NUS o BUN de sus siglas en ingls)
a 28 mg/l (2.8 mg/dl) que corresponde a la masa
molecular de 2 tomos de nitrgeno en la urea.
+
Los electrlitos Na , Cl y HCO3, contribuyen

con ms del 92% a la osmolaridad del suero; los
otros electrlitos, junto con las protenas sricas,
glucosa y urea son responsables del restante 8%.
El mantenimiento del agua extracelular
+
depende bsicamente de la concentracin del Na . El
organismo mantiene esta concentracin por medio de
la hormona antidiurtica. Cambios de hasta 2 meq de
sodio en sangre estimulan los receptores osmolares
y causan retencin renal de agua cuando aumenta y
su eliminacin cuando la osmolaridad disminuye.
D.

caractersticas ms importantes de los aminocidos y
de las protenas, as como sus funciones generales.
D.1
Aminocidos.
D.1.1 Identificar en la frmula de un
aminocido los grupos funcionales
carboxilo y amino.
D.1.2 Relacionar las cadenas laterales de
los
aminocidos
con
sus
propiedades y los clasificar en
grupos.
D.1.3 Reconocer a los aminocidos como
cidos dbiles e identificar los
valores de sus pKs y su punto
isoelctrico.Usar
como
modelos
glicina, fenilalanina, cido asprtico,
lisina e histidina.
D.1.4 Identificar la carga elctrica de los
amino-cidos en soluciones de
diferentes valores de pH y su
movilidad en un campo elctrico.
D.1.5 Conocer las frmulas de los
aminocidos presentes en las
protenas.
D.1.6 Conocer las funciones generales
de los aminocidos proteicos y no
proteicos en los seres vivos.
D.2
Protenas.
D.2.1 Identificar
los
productos
de
hidrlisis de las protenas.
D.2.2 Clasificar a las protenas con base
en su composicin, funcin y
localizacin.
D.2.3 Conocer las caractersticas ms
importantes de la unin peptdica.
Describir qu es un pptido y
mencionar
algunos
de
los
polipptidos
importantes
en
medicina.
D.2.4 Describir el estado nativo de las
protenas y sus diferentes niveles de
organizacin: estructuras primaria,
secundaria, terciaria y cuaternaria y
mencionar las fuerzas que las
Aminocidos y protenas
37
D.2.5
D.2.6
D.2.7
estabilizan. Describir el proceso

general de la desnaturalizacin.
Relacionar la funcin de las
protenas con su estructura:
Globulares
(albmina
y
hemoglobina).
Fibrosas (colgena, miosina y
actina).
De reconocimiento (receptores de
insulina o complejo mayor de
histocompatibilidad).
De membrana (porina, ATPasa de
sodio/potasio).
Describir los diferentes mtodos de
purificacin de las protenas con
base
en
sus
propiedades:
ultracentrifugacin, precipitacin por
sales, electroforesis y cromatografa
por peso molecular, por intercambio
inico y por afinidad.
Conocer el propsito de estudiar las
protenas plasmticas en medicina.
Las protenas estn formadas por una o varias

cadenas polipeptdicas, cada una de las cuales est
constituida por 20 diferentes aminocidos unidos por
enlaces tipo amida (enlaces peptdicos) en una
secuencia especfica para cada protena. La masa
molecular de una protena vara desde cerca de 6
000 (>50 aminocidos) hasta 1 000 000 Da o ms.
(Da o Dalton es la unidad de masa atmica y es igual
27
a 1.6605655 X 10 kg).
Las protenas pueden dividirse, segn su
composicin, en dos grupos principales: protenas
simples y protenas conjugadas. Las protenas
simples estn constituidas slo por aminocidos,
mientras que las protenas conjugadas presentan,
adems de los aminocidos, otro componente, que
puede ser de diferente naturaleza qumica y en
ciertos casos es llamado grupo prosttico. Algunos
ejemplos de protenas conjugadas son las
glucoprotenas (contienen azcares como grupo
prosttico),
las
lipoprotenas
(contienen
triacilglicridos, fosfolpidos y colesterol), las
nucleoprotenas (asociadas a cidos nucleicos) y las
metaloprotenas (que pueden unir iones metlicos

como en el grupo hemo).
Los aminocidos son compuestos alifticos,
aromticos o heterocclicos que contienen por lo
menos un grupo amino y un grupo carboxilo. En los
aminocidos biolgicamente activos, el grupo amino
se encuentra en el tomo de carbono alfa con
respecto al grupo carboxilo. Este carbono alfa es un
carbono asimtrico (con excepcin de la glicina)
porque presenta cuatro grupos
funcionales
diferentes: el grupo amino, el grupo carboxilo, un
hidrgeno y una cadena lateral. Los aminocidos
proteicos pueden clasificarse en funcin de las
cadenas laterales que presentan. As, tenemos
aminocidos no polares, aminocidos polares sin
carga y aminocidos polares con carga, la que puede
ser negativa o positiva a pH neutro. Todos los
aminocidos (con excepcin de la glicina) son
pticamente activos y pertenecen a la serie L en los
organismos superiores. Los aminocidos tienen por
lo menos dos grupos ionizables: el grupo alfa amino y
un carboxilo. Cada aminocido en solucin tiene un
pH caracterstico en el que no se mueve en un
campo elctrico, es decir, tiene un pH en el que se
presenta en forma de ion dipolo o zwitterion, donde
tanto el grupo alfa amino como el grupo carboxilo se
encuentran ionizados y, por lo tanto, tiene el mismo
nmero de cargas positivas y negativas (punto
isoelctrico). Junto a los grupos ionizables
principales, algunos aminocidos contienen otros
grupos que pueden ionizarse: grupos amino,
carboxilo, sulfhidrilo, hidroxilo o imidazol. A pH
fisiolgico, estos grupos pueden estar ionizados y
confieren al aminocido que los contiene cargas
positivas o negativas, segn sea la naturaleza del
grupo
ionizado.
Las
protenas,
como
los
aminocidos, se encuentran cargadas en solucin; la
magnitud de la carga depende del tipo de protena y
del pH. Cada protena posee un punto isoelctrico
caracterstico; a pH por arriba del punto isoelctrico
presenta carga negativa, mientras que a pH por
abajo del punto isoelctrico tiene carga positiva.
Organizacin estructural de las protenas
38
La funcin de las protenas slo puede entenderse

en trminos de la estructura de la protena, es decir,
de las relaciones tridimensionales entre los tomos
que componen las protenas. Se han descrito cuatro
niveles de organizacin:
1. La estructura primaria es la secuencia de
aminocidos en la cadena polipeptdica unidos
mediante enlaces peptdicos.
2. La estructura secundaria es el arreglo espacial
local de los tomos del esqueleto de un polipptido
sin considerar la conformacin de sus cadenas
laterales. La estructura secundaria es mantenida
por puentes de hidrgeno entre el oxgeno y el
nitrgeno involucrados en los enlaces peptdicos
de aminocidos. El enlace peptdico tiene una
estructura plana, rgida, que es consecuencia de
interacciones de resonancia (a) que le dan 40% de
carcter de doble enlace entre los tomos de C y
N (b), esta ltima estructura es la que le permite
establecer puentes de hidrgeno.
a)
b)
O
C
O
N
C
H
N+
H
Pauling y Corey determinaron que los grupos

peptdicos asumen una configuracin trans, es
decir, los carbonos alfa sucesivos estn en lados
opuestos del enlace peptdico que los une.
Pueden existir varios tipos de estructura
secundaria; entre ellos destacan dos: la alfa hlice,
en la que los aminocidos de la cadena
polipeptdica se presentan formando una especie
de cilindro orientado a la derecha y la lmina beta
plegada, en la que los aminocidos se acomodan
de manera paralela o antiparalela, uno respecto al
otro y se conectan entre s por puentes de
hidrgeno.
3. La estructura terciaria se refiere al arreglo
tridimensional de un polipptido y est determinada
por las estructuras primaria y secundaria. Se forma
espontneamente y depende del tamao, forma y
polaridad de los aminocidos que forman la
protena, los que interactan entre s y con el
medio en el que se encuentran. Esta estructura

puede estar estabilizada por enlaces de hidrgeno,
enlaces inicos, interacciones hidrofbicas, los
enlaces covalentes disulfuro, etctera. Por ejemplo,
las cadenas peptdicas de las protenas globulares
se organizan en una forma muy compacta en la
que los aminocidos hidroflicos se encuentran en
la superficie externa mientras que los residuos
hidrofbicos permanecen enterrados en el interior
de la molcula.
4. La estructura cuaternaria es el arreglo espacial de
las diversas subunidades polipeptdicas que
componen algunas protenas.
Desnaturalizacin
Se dice que una protena se desnaturaliza cuando
pierde sus diversos niveles de organizacin
estructural. Algunos agentes que desnaturalizan las
protenas son: el calor, los pH extremos, los rayos X,
la luz UV, o la agitacin vigorosa. La
desnaturalizacin es causada por un colapso de la
estructura original con la ruptura de los enlaces de
hidrgeno, de los enlaces inicos y de las
interacciones hidrofbicas, sin cambios en la
estructura primaria. La desnaturalizacin va
acompaada de la disminucin de la solubilidad,
cambios en la rotacin ptica, prdida de la funcin
biolgica y una mayor susceptibilidad al ataque de
las enzimas digestivas. En algunos casos, al eliminar
los agentes que causan la desnaturalizacin, la
protena recupera su conformacin original; a este
fenmeno se le conoce como renaturalizacin.
Una mezcla de protenas puede separarse a
partir de las diferentes movilidades en un campo
elctrico (electroforesis), por cromatografa de
distintos tipos o por su diferente solubilidad.
Clasificacin de las protenas

Las protenas pueden ser clasificadas en funcin de
aspectos tan diversos como su composicin, su
disposicin espacial, su funcin biolgica y su
localizacin.
Atendiendo a su composicin la protenas pueden
ser:
39
Simples: aquellas compuestas nicamente de

aminocidos.
Conjugadas: cuando adems de aminocidos
poseen un componente no proteico, el que puede ser
de origen orgnico o inorgnico y que se denomina
grupo
prosttico.
Algunos
ejemplos
son:
nucleoprotenas, formadas por la asociacin de la
cadena polipeptdica con cidos nucleicos; las
glucoprotenas,
cuyo
grupo
prosttico
son
carbohidratos; las fosfoprotenas, asociadas con
fsforo o como las metaloprotenas, cuando un in
metlico est enlazado directamente a la protena,
entre otras.
Con base en su disposicin espacial, las protenas
pueden clasificarse en globulares y fibrosas. Las
protenas globulares son de forma esfrica y solubles
en agua. La mayor parte de las enzimas, hormonas y
anticuerpos tienen estructura globular.
Las protenas formadas por cadenas polipeptdicas
dispuestas paralelamente a un eje, reciben el nombre
de protenas fibrosas, como la colgena y la fibrina.
Estas protenas son de forma alargada, baja
solubilidad en agua y resistentes a la traccin.
Clasificacin de las protenas de acuerdo a su
funcin. Las protenas desempean una amplia
variedad de funciones muy importantes en el
organismo. La lista siguiente, aunque no es
exhaustiva, da una idea de la diversidad de las
funciones biolgicas en las cuales se sabe que
intervienen las protenas:
Cataltica: las enzimas catalizan casi todas las
reacciones que se efectan en los organismos vivos.
Estructural: las protenas proporcionan a las
clulas forma y soporte mecnico (como la colgena
y las protenas contrctiles).
Reguladora: algunas protenas son hormonas o
sirven como receptores de las hormonas (insulina y
glucagn).
Protectora: por ejemplo las inmunoglobulinas que
defienden al organismo contra las infecciones virales
y bacterianas.
Transporte: las protenas se pueden unir a otras
molculas a fin de transportarlas en el organismo
(albmina, transferrina).
Trabajo mecnico: por ejemplo la contraccin de

los msculos, el movimiento de los flagelos y la
separacin de cromosomas en la mitosis (miosina y
actina).
Entre las funciones que son comunes a todas las
protenas encontramos:
Capacidad amortiguadora: debido a que las
protenas son compuestos anfteros y poseen
muchos grupos ionizables (con valores diferentes de
pK), funcionan como amortiguadores para reducir al
mnimo cambios sbitos en el pH.
Energtica: liberan 4 kcal/g de protena oxidada
hasta CO2 y H2O. Los aminocidos pueden ser
desaminados para formar cetocidos, los cuales
pueden movilizarse para producir energa calrica o
transformarse en carbohidratos y lpidos.
Participan en el mantenimiento del equilibrio
osmtico entre los diferentes compartimentos del
organismo. Las protenas, por ser grandes molculas
coloidales, no son difusibles, esto es, no pueden
atravesar las membranas y ejercen una presin
osmtica coloidal, la cual sirve para mantener un
volumen normal de sangre y un contenido normal de
agua en el lquido intersticial y los tejidos.
Fuente de nutricin para los tejidos (sobre todo, la
albmina): por constituir una fuente de los
aminocidos indispensables para el organismo, las
protenas son una forma de almacenamiento de
aminocidos.
Por ltimo, en funcin de su localizacin, las
protenas pueden clasificarse en:
Hsticas o tisulares: son las protenas de los
tejidos.
Plasmticas o hemticas: son las protenas de la
sangre.
Las protenas de la sangre (la hemoglobina en los
eritrocitos y las protenas plasmticas), por su gran
accesibilidad, son muy utilizadas en el laboratorio
clnico.
E.
Enzimas y coenzimas
40
E.2.5
Al finalizar esta subunidad, el alumno conocer qu
es una enzima y cmo acta; podr calcular sus
principales parmetros cinticos y el efecto de
algunas molculas que modifican su accin y
describir ciertas aplicaciones mdicas de las
enzimas.
E.1
Caractersticas de un sistema enzimtico.
E.1.1 Conocer qu son las enzimas y su
clasificacin de acuerdo con su
funcin.
E.1.2 Identificar los componentes de un
sistema enzimtico y mencionar las
coenzimas
y
cofactores
que
participan.
E.1.3 Analizar el papel de vitaminas
hidrosolubles como precursores de
las coenzimas e identificar al
magnesio, al manganeso y al fierro
como
ejemplos
de
cofactores
metlicos.
E.1.4 Definir los conceptos de zimgeno
e isoenzima.
E.1.5 Conocer el modo de accin de las
enzimas y en qu consiste su
especificidad.
E.2
Cintica enzimtica.
E.2.1 Analizar una reaccin enzimtica
para identificar al sustrato, al
complejo enzima-sustrato y al
producto.
E.2.2 Definir lo que es la velocidad de
una reaccin enzimtica y conocer
cmo se calcula su constante de
equilibrio; mencionar el significado
de dicha constante.
E.2.3 Analizar
las
ecuaciones
de
Michaelis Menten y de LineweaverBurk; describir sus usos e
identificar el significado de los
valores de Vmx y de Km.
E.2.4 Conocer las estrategias de control
de la actividad de las enzimas: disponibilidad
de
sustrato,
modificacin
covalente,
alosterismo,
retroalimentacin
y
concentracin de la enzima.
E.2.6
E.3
Describir
la
accin
de
los
inhibidores
competitivos
y
no
competitivos y de los moduladores
alostricos sobre la actividad de las
enzimas.
Conocer el efecto del pH y de la
temperatura sobre la actividad
enzimtica.
Aspectos mdicos de la enzimologa.

E.3.1
Conocer que el uso de la

determinacin de la actividad de
algunas enzimas en el diagnstico
contribuye al seguimiento de ciertas
enfermedades
(transaminasas,
lactato deshidrogenasa, creatina
cinasa, fosfatasas y amilasa).
E.3.2 Describir la etiologa de algunos
padecimientos
congnitos
del
metabolismo
y
la
actividad
enzimtica empleada para su
diagnstico
(fenilcetonuria,
albinismo,
anemia
hemoltica,
glucogenosis).
E.3.3 Describir el uso de ciertas enzimas
como reactivos de laboratorio en la
cuantificacin de algunos metabolitos
(determinacin de glucosa, de
colesterol y de cido rico).
Realizacin de la prctica 3 "Cintica enzimtica.
Efecto de la concentracin de sustrato sobre la
velocidad de una reaccin enzimtica" (ver pg.140).
Las enzimas son protenas especializadas de
actividad cataltica. Algunas de ellas estn formadas
nicamente de aminocidos mientras que otras
presentan algn otro componente de naturaleza no
aminocida. La parte proteica se denomina
apoenzima, mientras que la parte no proteica se
denomina coenzima; cuando se encuentran aisladas,
ambas son no funcionales, pero juntas forman una
protena funcional denominada holoenzima.
Las coenzimas funcionan a menudo en la
transferencia de electrones o de grupos funcionales.
Generalmente son derivados de vitaminas, las cuales
41
no pueden ser sintetizadas en las clulas de los

organismos superiores, por lo que deben ser
adquiridas en la dieta.
Las enzimas presentan algunas caractersticas que
las diferencian de los catalizadores qumicos, como:
1. Mayor velocidad de reaccin, ya que las
reacciones catalizadas enzimticamente alcanzan
velocidades de reaccin de 106 a 1 012 veces
mayores que las reacciones no catalizadas y de
varios rdenes de magnitud mayor que las
catalizadas qumicamente.
2 .Condiciones de reaccin ms suaves, ya que
trabajan a temperaturas relativamente bajas, a
presin atmosfrica y en condiciones de pH neutro.
3. Mayor especificidad de reaccin, ya que presentan
una gran selectividad por la identidad de los grupos
qumicos de sus sustratos y productos, de tal
manera que rara vez se obtienen productos
colaterales o secundarios.
4. Capacidad de regulacin, es decir, que sus
actividades varan de acuerdo con la concentracin
de otras molculas diferentes de sus sustratos. Los
mecanismos de regulacin incluyen la inhibicin,
control alostrico, modificacin covalente de la
enzima y variacin en la cantidad de enzima
sintetizada.
Las enzimas aceleran las reacciones biolgicas al
disminuir la energa de activacin de una reaccin
dada sin alterar su equilibrio. Su mecanismo de
accin consiste en la formacin de un complejo entre
la enzima y el sustrato (ES), el cual realiza la
reaccin qumica adecuada y permite la recuperacin
de la enzima original en el momento en que el
complejo enzima-producto se rompe para liberar al
producto.
El sustrato se une a la enzima en el sitio activo, el
cual consiste en un arreglo espacial de algunos
aminocidos de la protena donde se encuentran
generalmente el grupo prosttico o la coenzima y que
tienen la capacidad de interactuar con el sustrato.
Hay algunas enzimas que se sintetizan directamente
en su forma activa, otras se sintetizan en forma de
proenzimas inactivas o zimgenos y deben ser
activadas por procesos especiales para llegar a ser
funcionales. Algunas otras enzimas presentan sitios
diferentes del sitio activo donde se asocian molculas
que modulan su actividad. Estas enzimas se conocen

como enzimas alostricas y el sitio donde interactan
con el modulador se llama sitio alostrico.
La velocidad de las reacciones enzimticas
depende de:
a) La concentracin y la actividad de la enzima.
La velocidad de las reacciones enzimticas se
ve modificada por la cantidad de enzima y por
su capacidad de interactuar con su sustrato.
Una enzima puede atacar, dado que interacta
con su sustrato, por un reconocimiento
espacial, tridimensional o estereoespecfico. Si
la especificidad es absoluta, la enzima puede
actuar sobre un nico compuesto, mientras
que, si es relativa, puede usar como sustrato
varios
compuestos
relacionados.
La
estereoespecificidad indica que una enzima
acepta slo un cierto estereoismero (L D).
Un sustrato puede ser transformado por una o
varias reacciones tericamente posibles
catalizadas por diferentes enzimas. Esto es
importante en algunos procesos de control
metablico.
Las unidades con que se mide la velocidad de
una enzima se determinan como unidades
internacionales (UI). Una UI es la cantidad de
enzima en miligramos que convierte un
micromol de sustrato por minuto, en katales
(kat), que es la cantidad de enzima que
convierte un mol de sustrato por segundo. La
actividad especfica de una enzima se expresa
en unidades por mg de protena.
b) La concentracin del sustrato. A bajas
concentraciones de sustrato la reaccin
enzimtica sigue una cintica de primer orden,
es decir, la velocidad de la reaccin es
proporcional a la concentracin del sustrato. A
altas concentraciones de sustrato, la reaccin
es de orden cero, es decir, la enzima est
saturada por su sustrato y, por lo tanto, se
encuentra en su velocidad mxima. Cada
enzima tiene su caracterstica constante de
Michaelis o Km, que define la concentracin de
sustrato a la que la reaccin enzimtica
alcanza la mitad de la velocidad mxima.
42
c)
El pH y la composicin de la solucin en que

se lleve a cabo la reaccin. Toda reaccin
catalizada enzimticamente tiene su pH
ptimo.
d) La temperatura. Toda reaccin catalizada
enzimticamente tiene una temperatura ptima.
e)
La presencia de activadores e inhibidores. La
actividad enzimtica puede ser modificada
positiva
o
negativamente
por
algunos
compuestos. Los activadores aumentan la
reaccin enzimtica propiciando la formacin de
un sitio activo funcional y a menudo son iones
2+
2+
metlicos como Mg , Zn , etctera. La
activacin de las enzimas alostricas que estn
compuestas por subunidades es de gran
importancia en el control de los sistemas
multienzimticos y se realiza generalmente por
varias molculas orgnicas.
Los inhibidores enzimticos pueden ser de
varios tipos; los ms importantes son los
competitivos y los no competitivos. Los
inhibidores competitivos interactan con el sitio
activo de la enzima y se parecen al sustrato en
su estructura, por lo que compiten con l para
unirse al sitio activo. En general, se remueven
con un exceso de sustrato.
Los inhibidores no competitivos reaccionan
con
otra
estructura
importante
de
la
molcula.enzimtica. La inhibicin puede ser
reversible o irreversible en el caso de que el
inhibidor realice un cambio permanente de un
grupo funcional de la enzima. El efecto de un
inhibidor no competitivo no puede revertirse por
un exceso de sustrato.
El comportamiento cintico de las enzimas,
as como el efecto de los diferentes tipos de
molculas sobre la actividad enzimtica, puede
ser estudiado mediante diversas tcnicas
cinticas y grficas. As, al graficar la velocidad
de la reaccin enzimtica contra la concentracin
de sustrato se obtiene una hiprbola rectangular
(fig. II.1), descrita matemticamente por la
ecuacin de Michaelis-Menten. Las enzimas
alostricas
presentan
un
comportamiento
sigmoidal y los moduladores positivos desplazan
la curva hacia la izquierda, mientras que los
moduladores negativos hacen ms pronunciado

el efecto sigmoidal (fig. II.2).
Otra manera de estudiar el comportamiento
cintico de las enzimas, es graficar la inversa de
la velocidad inicial contra la inversa de la
concentracin de sustrato, lo que genera una
lnea recta, descrita matemticamente por la
ecuacin de Lineweaver-Burk. En la figura II.3 se
observa este comportamiento lineal de la enzima
con y sin inhibidores.
43
In vivo, la mayora de las enzimas se organiza en

sistemas multienzimticos, los cuales se unen a
estructuras celulares o estn libres en diversos
compartimientos celulares y son una forma de hacer
ms eficiente la accin de las enzimas involucradas
en una va, as como su regulacin.
Las enzimas pueden clasificarse en seis grandes
grupos segn el tipo de reaccin que llevan a cabo:
OXIDORREDUCTASAS.
Transfieren
electrones
hidrgenos.
TRANSFERASAS. Transfieren
entre dos molculas.
grupos
funcionales
HIDROLASAS. Realizan reacciones de ruptura de
enlaces con entrada de la molcula de agua.

LIASAS. Realizan reacciones de adicin a dobles
enlaces y ruptura no hidroltica del sustrato.

ISOMERASAS.
Realizan
interconversiones
de
ismeros.
LIGASAS. Realizan reacciones de formacin de
enlaces con gasto de ATP.
44
CONTENIDO TEMTICO
Segunda Unidad Temtica

METABOLISMO
45
III
METABOLISMO Y BIOENERGTICA
Al finalizar esta unidad, el alumno conocer en forma integral las rutas metablicas de las diversas
molculas biolgicas en las clulas y las alteraciones que aparecen asociadas a su disfuncin en algunas
enfermedades. La unidad se compone de:
A.
B.
C.
D.
E.
F.
G.
H.
A.
Fundamentos del metabolismo celular.

Carbohidratos.
Metabolismo energtico.
Otras vas metablicas de los carbohidratos.
Lpidos.
Metabolismo de los lpidos.
Metabolismo de los compuestos nitrogenados.
Regulacin e integracin metablica.
Fundamentos del metabolismo celular
en nutrimientos y las vas metablicas a las

que entran para satisfacer las demandas de
energa y mantenimiento de los tejidos
(homeostasis) con base en el esquema
general del metabolismo
Al finalizar esta unidad, el alumno conocer los

principios generales del metabolismo intermediario
de una clula normal.
A.1
Conocer las
metabolismo.
funciones
generales
del
A.2
Definir los conceptos de va metablica,

complejo multienzimtico y encrucijada
metablica.
A.3
En un esquema general del metabolismo

identificar, con base en sus caractersticas,
las vas anablicas, catablicas y anfiblicas.
A.4
Describir el papel central del piruvato, la

+
acetil CoA, el par NAD(P) /NAD(P)H y el
ciclo del
ATP en
el metabolismo
intermediario. Definir los conceptos de
fosforilacin oxidativa y fosforilacin a nivel
de sustrato.
A.5
Conocer la transformacin de los diferentes

componentes de la dieta
A.6
Conocer los diferentes niveles de regulacin

del metabolismo: sntesis de enzimas
(induccin-represin), compartimentalizacin,
actividad enzimtica (activacin, inhibicin y
enzimas alostricas).
El metabolismo puede definirse como el conjunto de

todas las reacciones qumicas que ocurren en el
organismo. Los organismos se caracterizan por
poseer miles de reacciones catalizadas por enzimas,
constituyendo las vas metablicas. El objetivo del
metabolismo es mantener las funciones vitales del
organismo tales como el trabajo mecnico, el
transporte activo de molculas contra gradientes de
concentracin y la biosntesis de molculas
complejas, entre otras.
Las rutas o vas metablicas son secuencias
de reacciones en donde un precursor o sustrato se
convierte en un producto final a travs de una serie
de
intermediarios
metablicos.
El
trmino
metabolismo intermediario se aplica a las actividades
46
combinadas de todas las vas metablicas que

interconvierten sustratos, metabolitos y productos.
Por ejemplo, la secuencia consecutiva de A > B
> C > D > E tiene el mismo efecto neto que
A > E.
Toda esta actividad celular muy coordinada y
dirigida tiene como objetivo el que los sistemas
multienzimticos cooperen para cumplir cuatro
funciones bsicas:
1. Obtener energa qumica a partir de la energa
solar en los organismos fottrofos o de la energa
contenida en los nutrientes obtenidos del ambiente
en los organismos quimitrofos.
2. Convertir las molculas nutrientes en las
molculas caractersticas de la propia clula,
incluidos los precursores macromoleculares.
3. Transformar los precursores monomricos en
polmeros (protenas, cidos nucleicos, lpidos,
polisacridos y otros componentes celulares).
4. Sintetizar y degradar las biomolculas requeridas
en las funciones celulares especializadas.
El metabolismo
anabolismo
se
divide
en
catabolismo
El catabolismo, del griego kat, "abajo" es la fase

degradativa del metabolismo en la que nutrientes
orgnicos como carbohidratos, lpidos y protenas se
convierten en productos ms pequeos y sencillos
(H2O, CO2, NH3). Las rutas catablicas generan
transportadores electrnicos reducidos (NADH,
FADH2 y NADPH) y liberan energa, parte de la cual
se conserva en la molcula del ATP.
En el anabolismo, del griego an, "arriba",
tambin llamado biosntesis, los precursores
pequeos y sencillos se transforman en molculas
ms grandes y complejas propias de cada clula
(polisacridos, lpidos, protenas y cidos nucleicos).
Las reacciones anablicas requieren un aporte
energtico, que proviene generalmente de la
hidrlisis del ATP y del poder reductor del NAD(P)H.
En el siguiente cuadro aparece el resumen
de las caractersticas de estos dos tipos de procesos.
Catabolismo
Anabolismo
Biodegradativa.
Biosinttica.
Oxidativa.
Reductora.
Generador de energa.
Consumidor de energa.
Variedad de materiales
iniciales, pero productos
finales bien definidos
(convergente)
Materiales iniciales bien

definidos y variedad en
los productos
(divergente)
Dentro de la gran complejidad del

metabolismo es posible distinguir algunos puntos de
convergencia:
1. La mayora de las vas metablicas son
irreversibles y exergnicas.
2. Cada va tiene una etapa obligada. Generalmente,
al principio de cada va existe una reaccin
exergnica irreversible que permite que el
intermediario que produce contine a lo largo de la
va.
3. Todas las vas metablicas estn reguladas. La
regulacin tiene el objeto de ejercer un control
enzimtico sobre el flujo de metabolitos a travs de
una va metablica. En toda va existe una reaccin
enzimtica que funciona tan lentamente que impide
que sus sustratos y productos se equilibren. Dado
que la mayora de las otras enzimas funcionan
prximas al equilibrio, esta reaccin enzimtica es
la que determina la velocidad de la va, y por lo
tanto, su regulacin. Esta es la forma ms eficaz
de ejercer el control porque evita la sntesis
innecesaria de metabolitos de la va.
Una manera de controlar la actividad de la
enzima limitante es regulando su actividad cataltica,
mediante interacciones alostricas (como en la
inhibicin por producto) o por modificaciones
covalentes. Otra manera sera controlando la
velocidad de la sntesis de enzimas particulares.
El hecho de que las vas de sntesis y
degradacin de molculas
sean
diferentes,
contribuye tambin a la regulacin metablica.
47
4.
las
glicoprotenas
y
de
los
glicolpidos y conocer su funcin
como receptores y molculas de
reconocimiento.
En
las
clulas
eucariticas,
la
compartimentalizacin permite la localizacin
especfica de las vas metablicas y su control.
B. Carbohidratos
Al finalizar esta subunidad, el alumno explicar la
estructura qumica de los carbohidratos, sus fuentes,
su digestin, su absorcin y la funcin que
desempean en la clula.
B.1
Estructura.
B.1.1 Definir qu son los carbohidratos y
cul es su importancia biolgica.
B.1.2 Conocer la clasificacin de los
carbohidratos con base en el nmero
de unidades sacridas que los
componen (mono, di, tri, oligo y
polisacridos) y con base en su
composicin
(homo
y
heteropolisacridos).
B.1.3 Conocer la estructura qumica de
los monosacridos con base en su
grupo carbonilo, en su estructura
lineal o cclica y en el nmero de
tomos de carbono. Sealar las
siguientes
caractersticas
fisicoqumicas:
solubilidad
y
propiedades pticas. Definir el
concepto de carbono asimtrico y los
diferentes tipos de ismeros pticos:
epmero, enantimero y anmero.
B.1.4 Describir la estructura de los
carbohidratos
de
importancia
fisiolgica: ribosa, glucosa, fructosa,
manosa,
galactosa,
sacarosa,
lactosa, maltosa, almidn, glucgeno
y celulosa.
B.1.5 Describir
la
estructura
y
caractersticas de los principales
heteropolisacridos
(quitina,
heparina, sulfato de dermatan,
condroitin
sulfato,
glicosaminoglucanos,
peptidoglicanos). Reconocer los
carbohidratos como componentes de
B.2
Digestin y absorcin.
B.2.1 Sealar las fuentes dietticas de los
carbohidratos y el papel de la celulosa
en la dieta de los mamferos.
B.2.2 Conocer el proceso de la digestin y
la absorcin de los carbohidratos de la
dieta.
B.2.3 Conocer
los
cinco
principales
transportadores de glucosa (GLUT 1 a
GLUT 5) y su distribucin en los
diferentes tejidos.
Realizacin de la prctica 4 "Efecto de la insulina

sobre la glucemia de la rata" (ver pg.145).
Lecturas recomendadas
1.
Daz HD, Burgos HLC. Cmo se transporta
la glucosa a travs de la membrana celular?
IATREA. 2002; 15 (3): 179-189.
2.
Maeder T. Sweet Medicine. Scientific
American. 2002; 287(1): 24-31.
Los carbohidratos, o sacridos, son las biomolculas
ms abundantes en la naturaleza y son
indispensables en los organismos vivos. Se les llama
carbohidratos debido a que su estructura qumica
semeja formas hidratadas del carbono y se
representan con la frmula (CH2O)n; qumicamente
se definen como derivados aldehdicos y cetnicos
de alcoholes polivalentes y no puede haber menos
de 3C para constituir un carbohidrato.
48
Transportador
GLUT 1
Distribuidor
Propiedades
Eritrocitos,
Ingreso
barrera
de glucosa.
basal
hematoencefli
Km 1.6 mM.
ca,
placenta,
retina,
rin y cerebro.
GLUT 2
Hgado,
Transportador
pncreas
de
galactosa
intestino
delgado
glucosa,
y
fructosa.
Sensor
de
glucosa
en
pncreas.
Km de 15 mM o
ms.
GLUT 3
Cerebro,
placenta,
hgado, rin
y corazn.
Ingreso basal
de glucosa.
KM 2 mM.
Transportador
de glucosa y
galactosa.
maltosa, la lactosa y la celobiosa; oligosacridos, con

3 a 10 unidades de monosacrido y polisacridos,
con ms de 10 unidades de monosacrido, que
tienen alto peso molecular, como el almidn, el
glucgeno y la celulosa.
Los carbohidratos provienen de la dieta; se
encuentran en los cereales (maz, trigo y arroz),
hortalizas (bulbos, races, verduras), legumbres (frijol,
garbanzo, lenteja), tubrculos (papa, yuca), frutas,
leche y productos lcteos, as como en algunos
productos procesados como dulces, jaleas,
mermeladas y pastas. Los carbohidratos son los
componentes ms abundantes de la dieta del
humano, aportan aproximadamente el 55% de las
caloras de la dieta.
Los carbohidratos tienen diversas funciones
en el organismo son: a) La fuente principal de
energa (1 g de carbohidrato produce 4 Cal); b)
Precursores en la bio-sntesis de cidos grasos y
algunos aminocidos; c) Constituyentes de molculas
complejas
importantes
como
glucolpidos,
glucoprotenas, cidos nucleicos y nucletidos.
Estructura de los monosacridos

GLUT 4
GLUT 5
Tejido
adiposo,
corazn
y
msculo
esqueltico.
Yeyuno,
espermatozoi
des,
rin,
cerebro.
Dependiente
de insulina.
Km de 5 mM.
Transportador
de
fructosa.
Se clasifican segn el nmero de unidades

sacridas en monosacridos y polisacridos. Los
monosacridos, segn el nmero de carbonos en su
molcula, se dividen en triosas (3C), tetrosas (4C),
pentosas (5C), hexosas (6C), heptosas (7C),
etctera. Segn su funcin carbonilo pueden ser
aldosas o cetosas, por ejemplo, la glucosa es una
aldohexosa y la fructosa una cetohexosa. Los
polisacridos son carbohidratos que resultan de la
unin de varias molculas de monosacridos. Este
grupo se puede clasificar en disacridos, con dos
unidades monosacridas, como la sacarosa, la
Los alcoholes y los aldehdos o cetonas pueden

reaccionar entre s para producir hemiacetales y
hemicetales. Cuando existen estos grupos hidroxilo y
carbonilo en una misma molcula provocan que la
molcula se ciclice. La naturaleza del ciclo depende
de la posicin del grupo hidroxilo que participa. Si el
compuesto es una aldosa y tiene 5 carbonos ser el
C 4 el que reaccione y el anillo formado es un furano.
De la misma manera, si el compuesto tiene 6
carbonos, ser el C 5 el que reaccione y se formar
un anillo de pirano. La transferencia de un protn del
grupo hidroxilo al oxgeno del carbonilo ocasiona un
nuevo carbn asimtrico. La posicin del hidroxilo en
este carbono determina dos formas isomricas alfa o
beta que, en solucin, guardan un equilibrio con la
forma lineal (forma carbonilo).
Glucsidos
Son los compuestos resultantes de la unin
covalente de azcares con varias molculas. Se
clasifican en homoglucsidos, si se unen
exclusivamente carbohidratos (osas) mediante
49
enlaces glucosdicos, y en heteroglucsidos, si

forman enlaces con otro tipo de molculas como
protenas o lpidos. Los homoglucsidos pueden
clasificarse segn el nmero de unidades en:
disacridos, oligosacridos y polisacridos. Los
polisacridos, tambin llamados polisidos, pueden
clasificarse en homopolisacridos, que pueden ser de
reserva, como el almidn, el glucgeno, la inulina, o
estructurales, como la celulosa, la lignina y la quitina,
y en heteropolisacridos, que pueden dividirse en no
nitrogenados, como las pectinas, el agar y la goma
arbiga,
o
nitrogenados,
como
los
glucosaminoglucanos.
Muchos de los alimentos que se ingieren a
diario contienen almidn y glucgeno que son
polisacridos de reserva. El almidn forma grnulos
en las clulas de las plantas y el glucgeno se
encuentra en el citoplasma de las clulas musculares
y hepticas de los animales. El azcar que constituye
la unidad estructural de estas molculas es la
glucosa, la cual se encuentra formando dos tipos de
enlaces: los enlaces 1
4 se encuentran en la
amilosa (formada por unidades de maltosa) y el
enlace 1
6 conecta a la estructura llamada
amilopectina. La estructura del glucgeno es similar a
la del almidn, pero con una mayor cantidad de
ramificaciones. El almidn est compuesto por 3 000
residuos de glucosa y tiene un peso molecular
5
cercano a 5 X 10 ; el glucgeno tiene un peso
6
molecular de 1 a 4 X 10 . La degradacin de estos
polisacridos es diferente si se realiza en el aparato
digestivo o en el interior de las clulas; es hidroltico
en el primer caso y fosforoltico en las clulas.
Durante la digestin, la amilosa es
hidrolizada por una alfa amilasa, la cual rompe los
4. Los productos primarios son
enlaces 1
oligosacridos con 6 a 7 residuos; los ltimos
productos son una mezcla de maltosa y glucosa. En
la cadena de amilopectina, la alfa amilasa rompe los
enlaces 1
4, pero no los 1
6; stos son
hidrolizados por una 1
6 glucosidasa. El
resultado de la accin de las dos enzimas es la
hidrlisis de la amilopectina hasta glucosa y maltosa.
Existe tambin otra enzima llamada maltasa
(alfa amilasa), que hidroliza los enlaces 1
4
glucosdicos de la malto-sa; la accin de esta enzima
facilita la formacin de la dextrina lmite. Esta
partcula est constituida por molculas de

amilopectina que tienen una gran cantidad de
ramificaciones. Las dextrinas lmite son degradadas
por la 1
6 glucosidasa y se obtiene
una mezcla de glucosa y maltosa.
Los productos de la digestin de los
carbohidratos se absorben en el intestino a travs de
GLUT2 y GLUT5 o por cotransporte con sodio y
pasan a la circulacin portal.
vas involucradas directamente en la generacin de
la energa de la clula.
C.1
Gluclisis.
C.1.1 Describir las reacciones de la va
glucoltica, indicando las reacciones
irreversibles y aquellas que generan
NADH o ATP por fosforilacin a nivel
de sustrato.
C.1.2 Sealar los productos de la va y su
destino en presencia y en ausencia
de oxgeno; discutir la importancia
fisiolgica de la formacin de lactato.
C.1.3 Conocer el balance energtico y la
regulacin de la va glucoltica; har
nfasis en el papel de las siguientes
molculas: ATP, ADP, AMP, fructosa
2,6-bisfosfato, alanina y citrato.
C.1.4 Sealar la importancia de la
gluclisis en los eritrocitos, en las
clulas musculares, en las clulas
nerviosas y en los hepatocitos.
Las clulas de los organismos hetertrofos obtienen

su energa de reacciones oxidativas en las cuales los
electrones de un sustrato donador se transfieren a un
aceptor.
Bajo
condiciones
anaerbicas,
un
compuesto orgnico sirve como aceptor de
electrones; bajo condiciones aerbicas, el oxgeno es
el aceptor final.
Los sustratos preferidos por la clula para
obtener la energa requerida para sus funciones
vitales
son
los
azcares
(mono,
di
y
homopolisacridos). Asimismo, las clulas son
50
capaces de usarlos tambin como intermediarios

para la formacin de otros compuestos importantes
en biologa.
La gluclisis es la va metablica por la que
se degrada la glucosa; filogenticamente, es la va
ms antigua y consiste en una secuencia de
reacciones enzimticas en las cuales se degrada la
glucosa. La gluclisis puede dividirse en dos fases:
una de activacin y una oxidativa. La fase de
activacin consiste en la transferencia de fosfatos a
la glucosa con gasto de dos ATP y en su ruptura en
dos molculas de gliceraldehdo 3 fosfato; en la fase
oxidativa, el gliceraldehdo 3 fosfato es transformado
en piruvato con la obtencin de cuatro molculas de
ATP por fosforilacin a nivel de sustrato.
Las reacciones de la gluclisis ocurren en el
citoplasma y no estn ligadas a estructuras celulares.
El producto de la va es el piruvato, el cual
puede seguir diversos destinos segn las
condiciones de la clula. En condiciones
anaerbicas, el piruvato se transforma en lactato por
accin de la lactato deshidrogenasa en presencia del
+
NADH + H
obtenido en la oxidacin del
gliceraldehdo 3 fosfato. En las levaduras, el piruvato
se descarboxila a acetaldehdo y se forma etanol por
la reduccin del acetaldehdo con el NADH mediante
la accin de la deshidrogenasa alcohlica. Bajo
condiciones aerobias, el piruvato se descarboxila en
las mitocondrias y produce NADH y acetil CoA, la
cual es el sustrato principal del ciclo de Krebs.
Slo una pequea parte de la energa
almacenada en la molcula de la glucosa se libera en
la gluclisis (2 ATP netos por cada molcula de
glucosa). En estricta anaerobiosis, la gluclisis es la
nica fuente de energa de la clula.
La regulacin de la va glucoltica se realiza a
nivel de la transformacin de la fructosa 6 fosfato en
fructosa 1,6 bisfosfato. Esta reaccin es catalizada
por la fosfofructocinasa I, la que es una enzima
alostrica cuya actividad se estimula por AMP, ADP y
fructosa 2,6 bisfosfato y se inhibe por ATP y citrato.
La deshidrogenasa de gliceraldehdo 3 fosfato
tambin desempea un papel importante en la
regulacin de la gluclisis.
C.2
Papel de la mitocondria en las funciones

oxidativas.
C.2.1
C.2.2
C.2.3
Conocer la biognesis de la
mitocondria.
Sealar la estructura de la
mitocondria
y
describir
las
caractersticas
de
su
matriz,
membrana
externa,
membrana
interna y espacio intermembranal;
har nfasis en su papel en la
transduccin de energa.
Reconocer que en la mitocondria se
realizan, entre otras, las siguientes
vas: sntesis de algunas protenas,
descarboxilacin del piruvato, oxidacin, ciclo de Krebs, cadena de
transporte
de
electrones
y
fosforilacin oxidativa.
La respiracin celular es una secuencia de

reacciones de xidorreduccin de la que los
organismos
obtienen
energa
para
formar
compuestos como el ATP. La base molecular de este
proceso es una oxidacin, paso a paso, de los
compuestos orgnicos hasta CO2 y la transferencia
de hidrgeno (protones ms electrones) al oxgeno
con la formacin de una molcula de agua. La
energa obtenida por la respiracin celular es, por
tanto, una parte de la energa liberada en la reaccin
del hidrgeno con el oxgeno. Todos estos procesos
se realizan en las mitocondrias de los organismos
eucariotos y en las membranas plasmticas de los
organismos procariotos.
Las
mitocondrias
son
orgnulos
relativamente autnomos cuya estructura est
adaptada a su funcin principal, es decir, a la
conversin de la energa de oxidacin en aquella de
los compuestos de reserva con un alto contenido
energtico. Una mitocondria est constituida por dos
membranas separadas: una membrana externa lisa y
muy permeable y una membrana interna con
plegamientos irregulares (crestas) y selectivamente
permeable. El interior de la mitocondria est
constituido por la matriz. Cada compartimiento tiene
un contenido caracterstico de enzimas y molculas
de acuerdo con los procesos que se realizan en ellos.
La cadena de transporte de electrones (cadena
respiratoria) y la generacin de enlaces de alta
energa asociada a esta transferencia de electrones
51
tiene lugar en la membrana interna. La mitocondria

contiene adems un DNA circular especfico y todos
los componentes necesarios para la sntesis de
protenas, lo que podra indicar que el origen de la
mitocondria pudo ser una bacteria que estableci una
simbiosis con una clula eucaritica a la que infect.
C.3
Descarboxilacin del piruvato.

C.3.1 Conocer las reacciones de la
descarboxilacin
oxidativa
del
piruvato e indicar sus productos y el
destino de los mismos.
C.3.2 Analizar el carcter irreversible de
la descarboxilacin del piruvato y su
regulacin
por
producto,
por
alosterismo y por modificacin
covalente.
En los organismos aerbicos el piruvato, producto de

la gluclisis, entra a la mitocondria para ser oxidado a
acetil CoA y CO2. Este proceso oxidativo irreversible
es realizado por la piruvato deshidrogenasa, un
complejo de tres enzimas y cinco diferentes
coenzimas o grupos prostticos: pirofosfato de
tiamina (TPP), lipoato, flavin adenin dinucletido
(FAD), CoA y nicotin adenin dinucletido (NAD).
En la primera reaccin se forma CO2 y un
grupo -hidroxietilo derivado del piruvato, el cual se
une covalentemente al TPP de la piruvato
deshidrogenasa (E1). En el siguiente paso el grupo
-hidroxietilo es oxidado a acetato y se transfiere al
lipoato unido covalentemente a la dihidrolipoil
transacetilasa (E2). El TPP se regenera en este
paso.
La siguiente reaccin consiste en transferir el
grupo acetato del lipoato a la CoA para formar acetil
CoA. El lipoato permanece reducido. Los siguientes
pasos tienen como finalidad regenerar la forma
oxidada de este lipoato. Para ello, el FAD unido a la
dihidrolipoil deshidrogenasa (E3) remueve los
+
electrones del lipoato y los entrega al NAD
+
reducindolo a NADH + H
La actividad del complejo de la piruvato
deshidrogenasa es regulada por tres mecanismos:
1. Inhibicin por producto: tanto el acetil CoA como el
+
NADH + H actan como moduladores alostricos
negativos.
2. Por disponibilidad de sus sustratos: deben existir

concentraciones adecuadas de piruvato, CoA y
+
NAD .
3. Por modificacin covalente: la piruvato
deshidrogenasa (E1) existe en dos formas: una
fosforilada (inactiva) y otra desfosforilada, que es
activa. La fosforilacin es llevada a cabo por una
2+
protena cinasa dependiente de Mg
y ATP,
mientras que la desfosforilacin la realiza una
fosfoprotena fosfatasa, cuya actividad es
2+
estimulada por altas concentraciones de Ca . Este
ltimo evento ocurre cuando existe una
concentracin elevada de ADP, el cual es indicador
de carencia energtica.
Los individuos que tienen deficiencia de
tiamina, como ocurre en el beriberi, presentan
problemas a nivel neurolgico debido a que el
cerebro obtiene toda su energa por oxidacin
aerbica de la glucosa.
C.4
Ciclo de los cidos tricarboxlicos (ciclo de
Krebs).
C.4.1 Definir
el
concepto
de
xidorreduccin,
par
redox
y
potencial de xidorreduccin.
C.4.2 Sealar la localizacin subcelular
de la va en funcin de sus
alimentadores y precisar el papel
del ciclo en la generacin de la
energa celular.
C.4.3 Describir
las
reacciones
enzimticas involucradas en el ciclo,
sus sustratos y productos, as como
las sustancias que intervienen en la
regulacin de la va.
C.4.4 Conocer el papel anfiblico de la
va y los diferentes destinos de sus
intermediarios: citrato, isocitrato, cetoglutarato, succinil CoA, malato y
oxaloacetato.
C.4.5 Definir el concepto de reaccin
anaplertica y conocer las enzimas
involucradas en estas reacciones
para el ciclo de Krebs.
C.4.6 Conocer el balance energtico de la
va y har nfasis en el nmero y tipo
de coenzimas reducidas producidas
52
en la oxidacin de una molcula de

acetil CoA.
La mayor parte del ATP generado en los organismos

aerobios se produce en el proceso de la fosforilacin
oxidativa en el cual, los hidrgenos extrados de los
metabolitos
mediante
las
reacciones
de
deshidrogenacin son cedidos a la cadena
respiratoria, en donde se genera el potencial
protonmotriz que sirve de fuerza impulsora para la
sntesis
del
ATP.
La
mayora
de
las
deshidrogenaciones de los metabolitos se llevan a
cabo en una secuencia cclica de reacciones
conocida como ciclo de Krebs, ciclo del cido ctrico
o ciclo de los cidos tricarboxlicos. El ciclo de Krebs
se lleva a cabo por enzimas solubles (a excepcin de
la succinato deshidrogenasa que es parte integral de
la membrana interna) de la matriz mitocondrial y
durante l se oxidan los residuos de acetato activo
(acetil CoA) provenientes de la glucosa, los cidos
grasos y los aminocidos, hasta CO2 y coenzimas
reducidas. Aproximadamente dos tercios del ATP
utilizado por los organismos aerobios se genera
como resultado de la oxidacin de los restos de
acetato en el ciclo de Krebs.
El ciclo de Krebs es una va de confluencia
para el catabolismo celular (fig. III.1) que, en una
secuencia de ocho reacciones oxida al residuo
acetato de la acetil CoA conforme a la ecuacin
siguiente:
CH3 COOH + 2H2O
2CO2 + 4(2H )
En el ciclo ocurren dos reacciones en las que

se desprende CO2 y hay cuatro deshidrogenaciones,
+
de las cuales tres donan sus hidrgenos al NAD y
una al FAD.
a) La oxidacin de la Acetil CoA derivada de la
glucosa, los cidos grasos y los aminocidos es

la funcin primaria del ciclo de Krebs, el cual la
procesa en una serie de reacciones que se
inician y terminan con el oxaloacetato; en cada
vuelta del ciclo de Krebs se produce un GTP por
fosforilacin a nivel del sustrato y se liberan
cuatro pares de hidrgeno que alimentan la
b)
c)
d)
e)
f)
cadena respiratoria con la produccin de 9 ATP

en la fosforilacin oxidativa.
Adems de su papel central en la oxidacin de la
acetil CoA, el ciclo de Krebs participa en los
siguientes procesos metablicos:
Gluconeognesis. Rene numerosos sustratos que
se convierten en oxaloacetato. Este compuesto
sale de la mitocondria en forma de malato, citrato
o aspartato y se transforma en el citosol, primero
en fosfoenol piruvato y despus en glucosa.
Biosntesis de los cidos grasos. Aporta la molcula
de citrato que, al salir de la mitocondria, es
transformada con gasto de un ATP por la citrato
liasa en oxaloacetato y acetil CoA, que es el
alimentador inicial de la biosntesis de los cidos
grasos. El oxaloacetato se reduce a malato, el
cual es oxidado por la enzima mlica para la
produccin de NADPH, coenzima indispensable
en la biosntesis de los cidos grasos.
Interconversin
de
Aminocidos.
Numerosos
aminocidos entregan sus carbonos al ciclo de
Krebs al transformarse, por reacciones
sucesivas, en alguno de los metabolitos clave del
ciclo: -cetoglutarato, succinil-CoA, fumarato y
oxaloacetato; una vez ah, mediante las
reacciones del ciclo de Krebs, pueden
transformarse en algn otro aminocido que se
derive de otro intermediario del ciclo.
Biosntesis de Purinas y Pirimidinas. El ciclo de
Krebs alimenta la sntesis de bases pricas y
pirimdicas aportando, de manera indirecta,
aspartato y glutamina.
Biosntesis de Porfirinas. El ciclo de Krebs aporta
uno de los sustratos iniciales necesarios para
que se lleve a cabo esta va: la succinil-CoA.
Regulacin del ciclo de Krebs
Por el hecho de que entrega NADH y FADH2 a la

cadena respiratoria y recibe de ella las mismas
coenzimas oxidadas, el ciclo de Krebs funciona bajo
el control de la cadena respiratoria y depende en
ltima instancia de la fosforilacin oxidativa. Sin
embargo, el ciclo de Krebs responde a moduladores
53
C.5.2
C.5.3
C.5.4
C.5.5
Identificar los alimentadores de la

va, as como su sitio de entrada a
sta y el ltimo aceptor de los
electrones.
Sealar el sitio de accin de los
siguientes inhibidores de la cadena
respiratoria:
amital,
rotenona,
antimicina, cianuro, NaN3, CO y H2S.
Describir los sistemas de transporte
de los equivalentes reductores a la
mitocondria (lanzaderas).
Citar
algunos
ejemplos
de
alteraciones en los componentes
mitocondriales, como las isoenzimas
e isoformas de la citocromo c
oxidasa, entre otras.
1.
Schon EA. Mitochondrial genetics and disease.

TIBS. 2000; 25(11): 555-5560.
2.
Raha S, Robinson BH. Mitochondria, oxygen free

radicals, disease and aging. TIBS. 2000; 25(10):
502-508.
3.
Cardellach F, Casademont J. Enfermedades

mitocondriales: un diagnstico todava difcil.
Medicina Clnica. 2000; 114 (4): 139-140.
4.
Rubio JC, Matn MA, del Hoyo P, Bustos F,

Campos Y, Arenas J. Dficits de los complejos
enzimticos
de
la
cadena
respiratoria
mitocondrial. Rev Neurol. 1998; 26 (supl 1): S15-
alostricos generados en el propio ciclo y tambin en

otras vas del metabolismo; son moduladores
negativos NADH, ATP, citrato, succinil CoA y
2+
oxaloacetato y moduladores positivos ADPy Ca .
Las
enzimas
citrato
sintasa,
isocitrato
deshidrogenasa y -cetoglutarato deshidrogenasa
son las enzimas reguladoras del ciclo.
C.5
Cadena de transporte de electrones (cadena
respiratoria).
C.5.1 Describir la naturaleza de los
componentes de la cadena de
transporte de electrones y sealar
su secuencia con base en los
potenciales
de
oxidorreduccin.
Calcular la energa generada en
cada paso del transporte de
electrones.
S20.
5.
Castro-Gago M, Novo MI, Eirs J. Tratamiento de

las
enfermedades
mitocondriales
durante
la
infancia y adolescencia. Rev Neurol. 1998; 26

(supl 1): S92-S98.
C.6
Fosforilacin oxidativa.
C.6.1 Describir brevemente la hiptesis
quimiosmtica
propuesta
para
explicar la sntesis de ATP y los
datos que existen en favor de ella.
Definir
los
conceptos
de
vectorialidad,
impermea-bilidad,
fuerza protonmotriz e ionforo,
empleados en esta hiptesis.
C.6.2 Con base en el clculo de energa
libre de Gibbs, sealar el nmero
54
C.6.3
de ATP que se genera al reoxidarse

las coenzimas NADH y FADH2 en la
cadena respiratoria. Definir el
concepto de control respiratorio
indicando el papel del ADP, del
transportador de adenin nucletidos
y del acarreador de fosfatos y su
efecto sobre la sntesis de ATP.
Sealar el sitio de accin de los
inhibidores de la ATP sintasa
(oligomicina y venturicidina), de los
desacoplantes sintticos y naturales
(dinitrofenol y termogenina) de los
procesos de transporte de electrones
y la fosforilacin oxidativa
y el
inhibidor del translocador de adenin
nucletidos (atractilsido) y har
nfasis en su efecto sobre la sntesis
de ATP.
Realizacin de la prctica 5 "Estudio del bombeo de

protones por levaduras; efecto de los inhibidores de
la cadena de transporte de electrones y de los
desacoplantes" (ver pg.146).
Lectura recomendada
1. Hinkle PC. Cmo fabrican ATP las clulas?
Investigacin y Ciencia 1978; 20: 58-75.
Mientras que el CO2 se forma por la oxidacin del
sustrato durante el ciclo del cido ctrico en la matriz
mitocondrial, la secuencia de las reacciones que
participan en la transferencia de hidrgenos y
electrones (la cadena respiratoria) se localiza en la
membrana interna de la mitocondria. La cadena se
puede dividir en cuatro complejos: el complejo I o
NADH deshidrogenasa (que cede sus electrones a la
coenzima Q); el complejo II o las deshidrogenasas
que ceden sus electrones al FADH2 (como la
succinato deshidrogenasa) y a travs de l a la
misma coenzima Q; el complejo III o citocromo c
reductasa, y el complejo IV o citocromo c oxidasa,
que transfiere los electrones al oxgeno, que es el
aceptor final.
Los componentes de la cadena respiratoria
estn arreglados de acuerdo con potenciales de
oxidorreduccin crecientes (de valores negativos a
positivos). La energa liberada en el curso de la

transferencia de hidrgeno y electrones a travs de la
cadena respiratoria se utiliza para la formacin de
ATP por la llamada fosforilacin oxidativa. La energa
requerida para la formacin de un ATP a partir de un
ADP es equivalente a una diferencia de potencial
redox de 0.15 V. En promedio, la oxidacin de una
molcula de NADH da origen a 2.5 molculas de
ATP, mientras que se forman 1.5 molculas de ATP
cuando se oxida FADH2 va succinato (no involucra
NADH). El rendimiento de energa de la fosforilacin
oxidativa es alrededor de 40% del valor terico de la
energa liberada en la reaccin del hidrgeno con el
oxgeno.
El transporte de los electrones entre los
diferentes componentes de la cadena respiratoria
puede ser inhibido por diversos compuestos, entre
ellos: los barbituratos, la rotenona, la antimicina, el
CO, las azidas, el H2S y el cianuro, los que actan en
distintos sitios de la cadena respiratoria.
Las reacciones de la cadena respiratoria y la
fosforilacin oxidativa estn acopladas; si se
desacoplan, la energa se pierde como calor y no hay
sntesis de ATP. Pueden desacoplarse in vitro por 2,4
dinitrofenol o compuestos similares e, in vivo, por la
termogenina presente en tejido adiposo pardo, el que
es abundante en recin nacidos.
La membrana interna de la mitocondria debe
estar intacta para generar ATP. Las molculas de
ATP formadas en el interior de la mitocondria son
translocadas al exterior en intercambio con molculas
de ADP presentes fuera de la mitocondria por medio
de un acarreador altamente especfico presente en la
membrana mitocondrial: la translocasa de los adeninnucletidos.
Hay otro mecanismo de sntesis de ATP no
asociado al transporte de electrones en el que los
donadores de la energa y del fosfato final del ATP
son compuestos con enlaces fosfato de alta energa.
Este tipo de fosforilacin se conoce como
fosforilacin a nivel de sustrato.
Los sustratos metabolizados dentro de la
mitocondria son transportados al exterior por
mecanismos especficos (transporte de cidos
dicarboxlicos, de aminocidos, de iones, etctera).
Este transporte, como el del ATP, se convierte en
55
uno de los factores de control en la funcin

mitocondrial.
Dado que la membrana interna de la
+
mitocondria es impermeable para el NAD y el NADH
y a que una forma eficiente, energticamente
hablando, de reoxidar al NADH que se obtiene en la
gluclisis es un proceso mitocondrial, existen
lanzaderas que son sistemas de transporte de los
hidrgenos citoplasmticos (equivalentes reductores)
a travs de la membrana mitocondrial. Las dos
lanzaderas ms importantes son la del glicerol fosfato
y la del malato.
C.7
Radicales libres.
C.7.1 Definir el concepto de radicales
libres y cules son derivados del
oxgeno.
C.7.2 Describir cmo y dnde se generan
los radicales superxido, hidroxilo y
otras molculas reactivas: perxido
de hidrgeno y singulete de oxgeno.
C.7.3 Describir el efecto de estos
radicales y molculas reactivas sobre
otras
molculas,
clulas
y
organismos y su contribucin en las
siguientes condiciones: fagocitosis,
inflamacin,
lipoperoxidacin
y
perfusin postisquemia.
C.7.4 Describir las condiciones en las que
se genera el radical NO y su relevancia
fisiolgica.
C.7.5 Describir los mecanismos protectores
del organismo contra las especies
reactivas de O2: superxido dismutasa,
catalasa,
glutatin
peroxidasa,
vitaminas E y C y -carotenos.
Realizacin de la prctica 6 "El efecto del etanol

sobre la lipoperoxidacin" (ver pg.149).
1.
Pia GE, Huberman A, Chvez R, Lascurain
R, Zenteno E, Frenk S. Los radicales libres.
Beneficios y problemas. Gac Md Mx 1996;
132 (2): 183-203.
2.
Fernndez AA, Abudara V, Morales FR. El
xido ntrico como neurotransmisor y
3.
neuromodulador. Actas de Fisiologa. 1999;

5: 39-77.
Raha S, Robinson BH. Mitochondria, oxygen
free radicals, disease and aging. TIBS. 2000;
25 (10): 502-508.
Un gran nmero de enfermedades, como el

Parkinson, aterosclerosis, enfisema pulmonar y
cncer, entre otras, tienen su origen en una
produccin excesiva o anormal de derivados del
oxgeno, qumicamente muy activos: los radicales
libres.
Un radical libre es cualquier especie qumica,
molcula o tomo, portadora de uno o ms
electrones desapareados. Se llama electrn
desapareado al electrn que se encuentra solo en un
orbital. La presencia de un electrn desapareado
hace que los radicales libres sean muy reactivos,
pues buscan con avidez completar su par electrnico.
No obstante, existen radicales libres relativamente
estables, como las molculas con estructuras
resonantes (con mltiples enlaces dobles), que
permiten la deslocalizacin del electrn desapareado.
La colocacin de un punto, generalmente al final de
la frmula qumica, indica el carcter de radical libre
de una molcula ().
Los radicales libres son capaces de alterar
reversible
o
irreversiblemente
compuestos
bioqumicos de todo tipo y pueden modificar en forma
importante su estructura y, como consecuencia,
alterar la capacidad funcional de las sustancias
atacadas. El principal blanco de los radicales libres
son las insaturaciones de los lpidos de membrana en
los cuales provocan una peroxidacin. La presencia
de lpidos peroxidados en las membranas biolgicas
disminuye su fluidez, lo que se traduce en
alteraciones de la permeabilidad a sustancias o,
incluso, su integridad, lo que provoca la lisis celular.
Los radicales libres tambin son capaces de inactivar
o destruir enzimas y otras protenas y atacar a los
cidos nucleicos. El dao al DNA puede causar
mutaciones y dar origen a cnceres. La accin sobre
los carbohidratos puede alterar su funcin como
receptores (de hormonas o neurotransmisores). Es
decir, los radicales libres influyen sobre actividades
celulares tanto a nivel de la membrana como en las
vas metablicas y en la expresin gentica.
56
Una de las caractersticas ms importantes

de las reacciones de los radicales libres es que se
forman por reacciones en cadena; esto significa que
un radical libre puede dar lugar a la formacin de
otro, de manera que este mecanismo permite que la
actividad se propague y que el dao se generalice.
Los radicales derivados del oxgeno

Las especies reactivas del oxgeno son el anin
superxido, el perxido de hidrgeno, el hidroxilo y el
singulete de oxgeno.
Anin superxido. La transformacin del
oxgeno en radical libre puede efectuarse cuando el
oxgeno acepta un electrn que transforma este
elemento en un radical con carga negativa, el anin
superxido: O2 .
Probablemente la fuente ms importante de
produccin de radicales superxido sea el estallido
respiratorio (aumento sbito del consumo de
oxgeno) de los macrfagos y de los leucocitos
polimorfonucleares en respuesta a una seal
inmunitaria provocada por alguna infeccin.
Perxido de hidrgeno. El anin superxido
sufre espontneamente, o bajo la accin de la
enzima superxido dismutasa (SOD), una reaccin
de dismutacin: dos radicales libres reaccionan entre
s, uno de ellos perdiendo electrones y el otro
ganndolos. Esta dismutacin produce agua
oxigenada, que no es realmente un radical libre, pero
este compuesto por captacin de un electrn y de un
protn, puede dar lugar a la formacin de especies
oxigenadas muy activas, especialmente al radical
hidroxilo.
Radical hidroxilo. El OH es un oxidante
extremadamente reactivo que interacta con casi
todas las molculas a velocidades slo limitadas por
su difusin. El radical hidroxilo es formado por la
ruptura de una molcula de agua bajo el efecto de
una radiacin gamma o en el ciclo de Haber-Weiss:
1. 2 O2 + 2 H
O 2 + H 2O 2
2+
3+
2. H2O2 + Fe
Fe + OH + OH
3+
2+
3. Fe + O2
Fe + O2
el ciclo global se expresa:
2+
1. La dismutacin del radical anin superxido

produce perxido de hidrgeno.
2. El perxido de hidrgeno se descompone en el
2+
radical hidroxilo con intervencin del Fe (reaccin
de Fenton).
2+
3. La regeneracin del Fe por medio del radical
anin superxido.
Singulete de oxgeno. El singulete de
1
oxgeno, representado grficamente como O2*, se
caracteriza por tener un par electrnico antiparalelo
en su ltima rbita; no es realmente un radical, sin
embargo, es incluido aqu por ser un derivado muy
oxidante del oxgeno. Se forma principalmente en
reacciones en las que los pigmentos biolgicos,
como el retinal, las flavinas o las porfirinas, son
expuestos a la luz en presencia de oxgeno.
Antioxidantes
Para controlar los efectos devastadores de los
radicales libres existen mecanismos protectores.
Estos sistemas tienen la funcin de neutralizar el
efecto de los radicales libres o evitar su aparicin. El
nivel primario de defensa lo constituyen tres enzimas
especializadas.
1. Superxido dismutasa. Existe en las mitocondrias
2+
2+
(SOD de Mn ) y en el citosol (SOD de Cu y de
2+
Zn ). Cataliza la dismutacin del radical anin
superxido para dar oxgeno molecular y perxido
de hidrgeno:
2 O2 + 2 H
O 2 + H 2O 2
2. Glutatin peroxidasa. Existe principalmente en el

citosol y contiene selenio. Cataliza la siguiente
reaccin:
2GSH + H2O2
GSSG + 2H2O
(donde: GSH-glutatin reducido y GSSG-glutatin

oxidado).
3. Catalasa. Existe principalmente en los
peroxisomas y su funcin es destruir el agua
oxigenada por dismutacin:
H 2O 2 + H 2O 2
2H2O + O2
3+
Fe /Fe
O2 + H2O2
O2 + OH + OH
57
Otro tipo de proteccin contra los radicales

libres es la que prestan unas sustancias capaces de
neutralizar a los radicales o limitar su reactividad,
llamadas atrapadoras. Entre ellas cabe mencionar:
Vitamina E (tocoferol) y beta caroteno.
Reaccionan con los radicales perxido y suspenden
la cadena de reacciones radicalares. Son liposolubles
y por eso pueden proteger las membranas.
Vitamina C. Reacciona directamente con los
superxidos, con el singulete de oxgeno y con el
radical hidroxilo; regenera la vitamina E al reaccionar
con el radical tocoferilo y lo convierte en radical
ascorbilo, tambin muy estable.
Algunos minerales como el selenio, el cinc, el
cobre y el manganeso, constituyentes de las enzimas
antes mencionadas; protenas y pptidos como el
glutatin, la albmina, la ceruloplasmina, la ferritina,
la transferrina, etctera y, por ltimo, sustancias
quelantes que evitan que el hierro, cobre y otros
metales de transicin catalicen reacciones de
oxidacin.
D.
Otras
vas
metablicas
carbohidratos
de
los
Al finalizar esta subunidad, el alumno podr analizar

en forma integral el metabolismo de los
carbohidratos, identificar su papel como combustible
celular y como generador de intermediarios de otras
vas metablicas y podr explicar en forma integral la
regulacin de la glucemia.
D.1
Gluconeognesis.
D.1.1 Sealar en qu consiste la
gluconeognesis,
los
sustratos
gluconeognicos,
los
compartimentos celulares de la va y
los tejidos con mayor actividad
gluconeognica.
D.1.2 Comparar
y
analizar
las
reacciones de esta va con las de la
gluclisis desde el punto de vista
energtico
y
describir
los
mecanismos empleados para evitar
las barreras energticas.
D.1.3
D.1.4
D.1.5
Indicar el destino metablico del

producto de la gluconeognesis
heptica.
Describir el ciclo de Cori y el ciclo
de la alanina y el significado
fisiolgico de ambos.
Elaborar el balance energtico y
explicar la regulacin de la
gluconeognesis y har nfasis en
el papel de la fructosa 2,6 bisfosfato.
Es el proceso por el cual se sintetiza la glucosa a

partir de diversos sustratos como son:
a) Lactato o piruvato.
b) Aminocidos glucognicos (Ala, Arg, Cys, Asp,
Glu, Gly, His, Met, Pro, Ser, Tre, Val).
c) Cualquier otro intermediario que pueda ser
metabolizado va piruvato (o que entre al ciclo de
Krebs).
La gluconeognesis no puede verse como la
va en sentido contrario de la gluclisis ya que
algunas de las reacciones de esta ltima son muy
exergnicas, lo que las hace irreversibles. Tal es el
caso de las reacciones catalizadas por la
piruvatocinasa (transforma al fosfoenolpiruvato en
piruvato), la fosfofructocinasa (paso de fructosa 6
fosfato a fructosa 1,6 bisfosfato) y la hexocinasa
(glucosa a glucosa 6 fosfato). Estas reacciones se
evitan por medio de las siguientes alternativas:
1. La formacin del fosfoenolpiruvato a partir de
oxaloacetato. El oxaloacetato se forma en la
mitocondria por carboxilacin del piruvato con una
enzima dependiente de biotina y ATP llamada
carboxilasa del piruvato. Tambin se puede obtener
el oxaloacetato en el citoplasma por carboxilacin del
piruvato y reduccin con NADPH para formar el
malato, el cual se deshidrogena para producir el
oxaloacetato.
Estas reacciones son llevadas a cabo por la enzima
mlica. La fosforilacin del oxaloacetato con GTP o
ITP y su descarboxilacin simultnea por la
fosfoenolpiruvato
carboxicinasa
producen
el
fosfoenolpiruvato.
2. La degradacin hidroltica de la fructosa 1,6
bisfosfato a fructosa 6 fosfato catalizada por la
fructosa 1,6 bisfosfatasa.
58
3. La degradacin de la glucosa 6 fosfato a glucosa

por la glucosa 6 fosfatasa.
La sntesis de una molcula de glucosa a
partir de dos molculas del piruvato requiere seis
molculas de ATP.
La posibilidad de que la gluconeognesis
proceda completamente (es decir, que su producto
final sea glucosa) depende de la presencia de todas
las enzimas clave en un tejido determinado. Se lleva
a cabo con facilidad en el hgado y en los riones; no
ocurre en el cerebro ni en el msculo esqueltico ya
que la glucosa 6 fosfatasa se encuentra ausente en
estos tejidos. Es por esto que el producto de la
degradacin del glucgeno muscular (glucosa 6
fosfato) no puede servir como una fuente para
mantener el nivel de la glucosa sangunea. En el
msculo, el glucgeno se degrada hasta lactato que
sale a la circulacin sangunea y se transfiere al
hgado donde se transforma en glucgeno heptico o
en glucosa libre por la va de la gluconeognesis.
Esta contribucin indirecta del lactato del msculo a
la glucosa sangunea se conoce como el ciclo de
Cori. El msculo tambin contribuye a mantener la
glucemia, al transformar el piruvato en alanina, la que
sale a la circulacin y en el hgado se convierte otra
vez en piruvato para entrar a la gluconeognesis.
D.2
Glucogenlisis y glucognesis.
D.2.1
D.2.2
D.2.3
D.2.4
Conocer la distribucin tisular del

glucgeno.
Describir las reacciones de la
glucogenlisis y de la glucognesis e
indicar
los
sustratos
y
los
productos, as como la localizacin
subcelular de las vas.
Discutir el balance energtico y la
regulacin de ambas vas por
alosterismo (glucosa, glucosa 6
2+
fosfato, AMP y Ca ). Revisar el
papel de las las hormonas epinefrina,
glucagn e insulina en la regulacin
de estas vas.
Indicar
las
diferencias
del
metabolismo del glucgeno en el
msculo y en el hgado.
D.2.5
Mencionar los defectos enzimticos

de las siguientes glucogenosis: von
Gierke, McArdle y Andersen.
El glucgeno es un polisacrido de reserva localizado

en forma de grnulos en el citoplasma de las clulas;
es osmticamente inactivo y facilita la rpida y
reversible transformacin de la glucosa en una
molcula de reserva, segn la situacin energtica
de la clula. La degradacin del glucgeno se
conoce como glucogenlisis y su sntesis como
glucognesis (glucogenognesis).
La glucogenlisis se inicia por una ruptura
fosforoltica del glucgeno por la fosforilasa. En
presencia de fosfato, se separa una glucosa del
glucgeno como glucosa 1 fosfato y sta, por accin
de una fosfoglucomutasa, se transforma en glucosa 6
fosfato, la que puede entrar entonces a la va
glucoltica. La energa invertida para la inclusin de
una molcula de glucosa en el glucgeno y su
regreso a glucosa 6 fosfato es de dos molculas de
ATP.
La sntesis de glucgeno se inicia con la
fosforilacin de la glucosa para formar glucosa 6
fosfato que se transforma posteriormente en glucosa
1 fosfato por accin de la fosfoglucomutasa. Esta
molcula reacciona con UTP por accin de la UDPglucosa pirofosforilasa y origina UDP-glucosa, que es
el sustrato de la glucgeno sintetasa. Las numerosas
ramificaciones presentes en el glucgeno son
introducidas por la accin de una enzima ramificante.
La degradacin y la sntesis de glucgeno
estn finamente reguladas por el AMP cclico a
travs de la actividad de la protena cinasa. En una
secuencia de reacciones, este compuesto se
involucra en la conversin de la fosforilasa b
(inactiva, no fosforilada) en fosforilasa a (activa,
fosforilada).Inversamente, la glucgeno sintetasa que
est en su forma activa (no fosforilada o forma I)
cambia a su estado inactivo (fosforilado o forma D).
La concentracin intracelular de AMP cclico (AMPc)
es regulada por las hormonas epinefrina y glucagon,
las que aumentan la concentracin de AMPc, y por la
insulina, que la disminuye.
D.3
Va
pentosas).
del
fosfogluconato
(ciclo
de
las
59
D.3.1
D.3.2
D.3.3
D.3.4
D.3.5
Indicar la distribucin tisular de

esta va.
Sealar las reacciones de la fase
oxidativa y de la no oxidativa e
indicar sus productos y su destino
metablico.
Mencionar las relaciones de la va
del fosfogluconato con otras vas
metablicas como la gluclisis, la
sntesis de nucletidos, la sntesis de
cidos grasos, la sntesis de
colesterol y los sistemas oxidantes
de las clulas fagocticas.
Discutir la regulacin de la actividad
de la va y har nfasis en su
importancia
para
las
sntesis
reductoras.
Mencionar la consecuencia de la
deficiencia de la glucosa 6 fosfato
deshidrogenasa en eritrocitos.
El ciclo de las pentosas es una va colateral a la

gluclisis. Presenta dos fases: una oxidativa y una no
oxidativa. En la fase oxidativa, una molcula de
glucosa es gradualmente degradada y se forma el
NADPH; en la fase no oxidativa, la ribosa 5-fosfato y
la eritrosa 4 fosfato son formadas por una
interconversin de steres fosfricos de azcares de
3C, 4C, 5C, 6C y 7C.
En el sentido biosinttico, las reacciones del
ciclo de las pentosas sirven para la fijacin de bixido
de carbono durante la fotosntesis.
Algunos de los intermediarios de esta va
estn relacionados con la gluclisis como la glucosa
6 fosfato, la fructosa 6 fosfato y el gliceraldehdo 3
fosfato. Las enzimas del ciclo de las pentosas, al
igual que las de la gluclisis, son solubles en el
citoplasma.
El ciclo de las pentosas no es una va
principal para el metabolismo de la glucosa y sus
relaciones con la gluclisis pueden variar de acuerdo
con el tipo de tejido y sus funciones biolgicas.
Las reacciones de este ciclo no pueden ser
utilizadas en la obtencin de energa, ya que la
oxidacin del NADPH no forma ATP directamente.
El ciclo de las pentosas es importante en
todas las clulas ya que es la principal forma de
obtener el NADPH necesario en los procesos de

sntesis (reductoras); asimismo, es la fuente de la
ribosa 5-fosfato, la cual es precursora de la
biosntesis de nucletidos y cidos nucleicos.
D.4
Regulacin de la glucemia.
D.4.1 Explicar el significado de los trminos:
glucemia, hipo e hiperglucemia.
D.4.2 Discutir la importancia biolgica de
mantener una glucemia normal.
D.4.3 Discutir el papel de las siguientes
hormonas:
epinefrina,
glucagon,
cortisol e insulina en la regulacin de la
glucemia normal indicando las vas
metablicas, los tejidos involucrados y
las fuentes endgenas y exgenas de
los carbohidratos.
D.4.4 Reconocer
la
glucosilacin
no
enzimtica
de
las
protenas
(hemoglobina
glucosilada
y
fructosaminas) como consecuencia de
una hiperglucemia prolongada.
Realizacin de la prctica 7 "Estudio general del

metabolismo de los carbohidratos" (ver pg.150).
Discusin del caso clnico no. 3 Hipoglucemia
secundaria a intoxicacin alcohlica (ver pg. 177).
1.
Beisswenger PJ, Szwergold BS, Yeo KT.
Glycated proteins in diabetes. Clin Lab Med.
2001; 21 (1): 53-78.
2.
Cohen MP. Intervention strategies to prevent
pathogenetic effects of glycated albumin.
Arch Biochem Biophys. 2003; 419 (1): 25-30.
3.
Desmond A. Glicosilacin no enzimtica de
protenas: su rol en las complicaciones
crnicas de la diabetes y el envejecimiento.
Acta Bioqum Cln Latinoamer. 1995; 29 (2):
173-190.
La concentracin sangunea de la glucosa o glucemia
debe mantenerse dentro de lmites muy estrechos
debido a que algunas clulas como las nerviosas y
los eritrocitos utilizan a la glucosa como nica fuente
de energa, lo que las hace especialmente sensibles
60
a la disminucin de la glucemia. Por otro lado, el

aumento de las concentraciones de glucosa en
sangre se asocia a problemas de hiperosmolaridad y
a la aparicin de protenas glucosiladas que se
asocian a algunas patologas, como la diabetes y sus
consecuencias.
La concentracin normal de glucosa en
sangre en ayunas es de 80-100 mg/dl, y sus lmites
extremos son 65 y 120 mg/dl. Los niveles superiores
a los valores normales se conocen como
hiperglucemia, mientras que los inferiores se
designan como hipoglucemia.
La glucosa sangunea puede provenir de dos
fuentes: una exgena (la dieta) y una endgena
(glucogenlisis y gluconeognesis heptica). En el
primer caso, despus de una comida que contenga
carbohidratos, la glucemia se incrementa para volver
en unas dos horas a los niveles basales. Si por el
contrario, el individuo est en ayunas la glucosa
desciende pero nunca por debajo de 60 mg/dl. Esto
hace un contraste notable con las grandes
variaciones en la concentracin de los cidos grasos
que pueden aumentar hasta 10 veces y en el caso de
los cuerpos cetnicos hasta 100 veces.
La principal regulacin de la glucemia se
realiza por hormonas. Las principales son: glucagon,
insulina, epinefrina, gluco-corticoides y las hormonas
tiroideas.
Cuando la concentracin de glucosa
disminuye, como en el ayuno, el pncreas secreta
glucagn El resultado neto es que en el hgado se
detienen las vas de utilizacin de la glucosa
(glucognesis y gluclisis) y se activan las vas
productoras
de
glucosa
(glucogenlisis
y
gluconeognesis). Por otra parte, la disminucin en el
consumo de glucosa por los tejidos insulinodependientes (msculo y tejido adiposo), causada
por la disminucin en los niveles de esta hormona,
contribuye a preservar la glucosa para que pueda ser
utilizada por el cerebro, ya que la glicemia inferior a
los 60 mg/dl, provoca que este rgano no reciba las
cantidades de glucosa suficientes para obtener la
energa necesaria para realizar adecuadamente sus
funciones, por lo que, si esta situacin se prolonga,
pueden sobrevenir el coma y la muerte. Otras
hormonas que intervienen para aumentar la glucemia
en el caso de ayunos prolongados son los
glucocorticoides, quienes provocan la hidrlisis de

protenas musculares a fin de proveer de sustratos
gluconeognicos al hgado, mientras que las
hormonas tiroideas estimulan la glucogenlisis
heptica.
Por otro lado, cuando la glucemia aumenta,
como despus de una dieta rica en carbohidratos, los
islotes de Langerhans detectan este aumento y
secretan insulina. Esta hormona produce un
incremento en el transporte de glucosa al interior del
msculo y del tejido adiposo, por los receptores
GLUT 4 y, activa la glucgeno sintasa, tanto
muscular como heptica. De esta manera, la
glucemia disminuye y los depsitos de glucgeno
heptico y muscular aumentan.
El aumento de los valores de glucosa en
sangre presenta algunos efectos fisiolgicos que
pueden explicarse por las propiedades osmticas y
qumicas de la glucosa. Entre dichos efectos se
encuentran la deshidratacin de los tejidos y el
envejecimiento de protenas. En el primer caso, la
salida del agua al torrente circulatorio causa que los
tejidos pierdan, adems del agua, algunos iones
importantes, como el potasio. En el segundo caso,
las concentraciones altas de glucosa sangunea
(superiores a 120 mg/dl) aceleran el envejecimiento
protenico por glucosilacin no enzimtica o glicacin.
La glucosa reacciona con los grupos amino
expuestos de las protenas y cambia las propiedades
catalticas y estructurales de las mismas. La
hemoglobina, la colgena, las protenas del cristalino
y muchas ms sufren glicacin en proporcin a la
concentracin de glucosa en la circulacin. Este
efecto permite comprender el origen de algunas de
las complicaciones que aparecen en el caso de los
diabticos, como la aparicin de cataratas por la
glicacin irreversible de las protenas del cristalino, o
los elevados niveles de hemoglobina glicada
(hemoglobina A1c), que en los diabticos llegan a ser
de dos a tres veces mayores que en los individuos
normales. El nivel de hemoglobina A1c revela la
concentracin de glucosa en sangre durante un
perodo de varias semanas, por lo que su
determinacin puede ser muy til para comprobar si
los pacientes diabticos han sido tratados
adecuadamente.
61
E. Lpidos
Al finalizar esta subunidad, el alumno explicar las
caractersticas principales de los lpidos, sus
estructuras, el papel que desempean en los seres
vivos, as como su digestin y absorcin.
E.1
E.2
Estructura.
E.1.1 Definir qu son los lpidos, cul es
su importancia biolgica.
E.1.2 Conocer
las
propiedades
fisicoqumicas
de
los
lpidos:
solubilidad,
naturaleza
qumica,
apolaridad.
E.1.2 Reconocer las frmulas de los
lpidos que emplea la clula: cidos
grasos,
triacigliceroles,
fosfoglicridos
y
glicolpidos,
terpenos y esteroides.
E.1.3 Clasificar a los lpidos con base en
su composicin, en su grado de
complejidad y en su grado de
polaridad.
E.1.4 Identificar a los lpidos como los
componentes principales de las
membranas celulares y relacionar el
contenido y las caractersticas
qumicas de los lpidos con la
impermeabilidad y fluidez de la
membrana.
E.1.5
Mencionar las diferencias en cuanto
a la asimetra y la composicin de las
membranas celulares (citoplasmtica
y mitocondrial).
Digestin, absorcin y transporte.
E.2.1
E.2.2
E.2.3
Sealar la fuente diettica de los

lpidos.
Conocer el mecanismo por el cual
el organismo realiza la digestin y
absorcin de los lpidos.
Conocer el transporte de los lpidos
de la dieta en el organismo
(quilomicrones).
Los lpidos son sustancias biolgicas solubles en

solventes orgnicos, pero escasamente solubles en
el agua. Pertenecen a este grupo molculas tan
diversas como las grasas, los aceites, algunas
vitaminas y hormonas, as como todos los
componentes no proteicos de las membranas.
Los lpidos pueden clasificarse en dos
grandes grupos: los saponificables y los no
saponificables. Los primeros tienen la caracterstica
de que, en soluciones alcalinas, se hidrolizan
produciendo steres de cidos grasos, mientras que
los segundos no son objeto de hidrlisis alcalina. A
los
lpidos
saponificables
pertenecen
los
acilgliceroles, los fosfoacilgliceroles, los esfingolpidos y las ceras, mientras que en el grupo de los
lpidos insaponificables encontramos los terpenos,
los esteroides y las prostaglandinas, as como los
compuestos relacionados con stos. Asimismo,
existen lpidos con un grupo extremo polar y otro
grupo opuesto no polar. Este grupo se conoce como
lpidos anfipticos y son los responsables de
estabilizar las emulsiones o forman parte de la bicapa
lipdica de las membranas.
Los
cidos
grasos
biolgicamente
importantes son cidos monocarboxlicos con
cadenas alifticas de diverso tamao, con un nmero
par de tomos de carbono, que pueden ser saturados
o insaturados. En el caso de los insaturados, los de
origen natural son ismeros geomtricos cis; pueden
ser monoinsaturados o poliinsaturados y son lquidos
a temperatura ambiente. Los cidos grasos
poliinsaturados no son sintetizados en el organismo
por lo que se consideran esenciales. En soluciones
fisiolgicas se encuentran en forma ionizada
formando sales o "jabones". Los cidos grasos de
cadena larga son insolubles en agua, pero los
jabones forman micelas. Los cidos grasos forman
steres con alcoholes y tiosteres con la coenzima A.
Las prostaglandinas, tromboxanos y leucotrienos son
derivados de cidos grasos poliinsaturados de 20
carbonos, especialmente del cido araquidnico.
Los acilgliceroles son compuestos en los que
uno o ms de los grupos hidroxilo del glicerol estn
esterificados. Pueden dividirse en monoacilgliceroles,
diacilgliceroles
y
triacilgliceroles.
En
los
triacilgliceroles los tres grupos hidroxilo estn
62
esterificados con cidos grasos, que pueden o no ser

iguales. Las propiedades de los triacilgliceroles estn
determinadas por la naturaleza de sus cidos grasos
componentes y se dividen en aceites (lquidos) o
grasas (slidos) de acuerdo con la longitud de sus
cadenas o con su grado de saturacin. Los
triacilgliceroles son hidrofbicos y no forman micelas.
Los fosfoacilgliceroles o fosfoglicridos son
derivados del cido fosfatdico, es decir, del Lglicerolfosfato esterificado con dos cidos grasos. El
cido fosfatdico se esterifica, a su vez, a travs de
su grupo fosfato, con un alcohol y forma las diversas
familias de fosfoglicridos, las cuales poseen un
carcter anfiptico.
Los plasmalgenos son glicerofosfolpidos en
los que la posicin 1 del glicerol fosfato est
combinado con un alcohol de cadena larga mediante
una unin tipo ter.
Los esfingolpidos son lpidos complejos
derivados de un alcohol insaturado llamado
esfingosina, el que se une con un cido graso de
cadena larga por medio de un enlace amida para
formar una ceramida. Las esfingomielinas contienen
una ceramida esterificada con fosforilcolina o
fosforiletanolamina. Cuando la ceramida se combina
con un azcar forma los glucoesfingolpidos, que
pueden subdividirse en cerebrsidos (si slo
contienen una unidad de azcar), sulftidos
(contienen un sulfato esterificado en la unidad de
azcar) y ganglisidos (contienen oligosacridos con
uno o ms cidos N-acetilneuramnicos).
Los
esteroides
son
derivados
del
ciclopentanoperhidrofenantreno. El ncleo esteroide
es una estructura rgida, casi plana, no polar. Los
esteroides ms importantes son el colesterol y sus
derivados (los cidos biliares, las hormonas
esteroidales
estrgenos,
progestgenos,
glucocorticoides, mineralcorticoides y andrgenos y
la vitamina D que, aunque no es propiamente un
esteroide, deriva del colesterol).
Los terpenos son polmeros de dos o ms
unidades de isopreno, que pueden ser lineales o
cclicos, con dobles enlaces trans en su mayora. Las
vitaminas A y K, as como el escualeno, pertenecen a
este grupo.
En la dieta, la grasa constituye cerca de 60 g,
de los cuales 90% son triacilgliceroles. Es de todos
conocida la dificultad para digerir la grasa, que en

mucho est determinada por su casi nula solubilidad
en agua. Esto ocasiona que se aglomere la grasa y
que forme vacuolas, lo que impide que sea atacada
fcilmente por las enzimas digestivas. Para facilitar
su hidrlisis, durante el proceso digestivo que se
inicia en la boca la lipasa lingual hidroliza algunos
triacilglicridos y produce cidos grasos libres y
monoacilglicridos que, junto con otros cidos grasos
libres, posibilitan que las vacuolas de grasa se hagan
ms pequeas y formen gotitas. Tanto los
monoacilglicridos como los fosfolpidos funcionan
como factores tensoactivos. La accin de esta lipasa
lingual es muy breve ya que, al llegar al estmago, es
inhibida por el pH cido y es hasta llegar al duodeno
donde se contina el proceso de digestin. Puede
considerarse que la dificultad de la digestin de los
lpidos se supera si se aumenta el rea entre la fase
acuosa y la lipdica y se logra un aumento en la
solubilizacin de los productos de hidrlisis con
detergentes (sales biliares). El aumento del rea y la
solubilizacin suceden cuando en el duodeno, por
efecto de la colecistocinina, que es una hormona
secretada por la llegada de los lpidos al duodeno, se
estimula la contraccin de la vescula biliar con la
consecutiva salida de sales biliares y otros lpidos,
que forman agregados que reciben el nombre de
micelas mixtas; stas son diferentes a las gotitas
emulsionadas. La accin de las sales biliares es
romper la tensin superficial de la gotita de grasa
favoreciendo la interaccin con el agua y su
fragmentacin; as se origina la micela. Este proceso
tambin recibe el nombre de emulsificacin. Al
mismo tiempo, la lipasa pancretica, que es
secretada como proenzima, hidroliza, al igual que la
lingual, la unin alfa ster de los triacilglicridos y
deja libres dos cidos grasos y un monoacilglicrido
que tambin sern emulsificados por las sales
biliares.
Adems de la lipasa, el jugo pancretico
contiene otras esterasas que actan sobre los
steres de colesterol, monoacilglicridos y los
steres de vitamina A. Los fosfolpidos son
hidrolizados por fosfolipasas especficas, pero la ms
abundante en el jugo pancretico es la fosfolipasa A2
que hidroliza la unin ster beta del cido graso. La
presencia de sales biliares es necesaria para la
63
absorcin de otros lpidos, como el colesterol y las

vitaminas A y K.
Se ha calculado que una persona sana
absorbe cerca de 70 a 90% de los lpidos, tanto
exgenos como endgenos; otro de los productos
derivados de la hidrlisis de los acilglicridos, el
glicerol, se absorbe por difusin facilitada. Las sales
biliares son absorbidas en forma muy eficaz por el
intestino y son llevadas por la vena porta
nuevamente al hgado, de ah a la bilis y una vez ms
al intestino; a esta circulacin de las sales biliares se
le llama circulacin enteroheptica.
En la clula intestinal los lpidos son
resintetizados formando triacilglicridos por efecto de
una enzima que activa a los cidos grasos y los une
a los monoacilglicridos; tambin se forman
fosfolpidos y steres de colesterol. La absorcin de
los lpidos y la actividad del retculo endoplsmico
liso de la clula intestinal dan como resultado la
formacin de vesculas que se enriquecen con
protenas (apoprotenas), lo que genera los
quilomicrones, partculas ricas en triacilglicridos.
F.
Metabolismo de los lpidos
Al finalizar esta subunidad, el alumno podr definir en

forma integral el metabolismo de los lpidos en
relacin con su funcin como combustibles. Analizar
la regulacin del metabolismo de los lpidos en
algunos estados fisiolgicos.
F.1
Oxidacin de los cidos grasos (-oxidacin).

F.1.1 Describir la reaccin de activacin
de los cidos grasos en el citoplasma
y el mecanismo de transporte al
interior de la mitocondria.
F.1.2 Describir las reacciones de la oxidacin e identificar sus sustratos
y productos.
F.1.3 Conocer las reacciones adicionales
necesarias para la oxidacin de los
cidos grasos insaturados y de
cadena impar.
F.1.4 Calcular el nmero de molculas de
ATP generadas en la oxidacin
completa del cido palmtico y
sealar los tejidos que dependen

energticamente de esta va.
Los cidos grasos almacenados en los tejidos son

utilizados por la clula para la produccin de energa
en magnitudes que varan de tejido a tejido, as como
del nivel metablico del organismo. Son los
msculos, principalmente el cardiaco y el esqueltico,
los que ms dependen de los cidos grasos como
fuente de energa.
La mayora de los cidos grasos que se
oxidan en los tejidos provienen de los triacilglicridos
del tejido adiposo, desde donde son liberados por la
accin de la enzima lipasa sensible a hormonas y
transportados en la circulacin como complejos
albmina-cidos grasos. Al llegar al hgado y a las
clulas de otros tejidos, el cido graso es activado en
el citosol mediante la accin de la acil coenzima A
sintetasa (tiocinasa) con gasto de ATP, en esta
reaccin se produce un acil coenzima A (acil CoA) y
AMP. El proceso de oxidacin del cido graso se
realiza dentro de la mitocondria; sin embargo, su
membrana es impermeable a los cidos grasos y
derivados del acil CoA, por lo que se requiere de un
transportador: la molcula de carnitina es la
encargada de llevar al cido graso al interior de la
mitocondria. Una vez dentro de la mitocondria, el acil
CoA sufre una serie de cambios que permiten
obtener un fragmento de dos carbonos, la acetil CoA.
Los cambios preparan al acilo para quedar
nuevamente activado y stos son realizados por: a)
Una deshidrogenasa que requiere de FAD y
transforma al grupo acilo en uno enoilo (molcula con
un doble enlace entre el carbono alfa y beta); b) Una
hidratasa que elimina la doble ligadura y deja un
hidroxilo en el carbono beta. Esta molcula se llama
-hidroxiacil-CoA; c) Otra deshidrogenasa especfica,
+
cuya coenzima es el NAD , transforma el grupo
hidroxilo de la posicin beta en un grupo ceto; d) Una
tiolasa que requiere de una coenzima A (HSCoA)
para unirla al carbono que tiene la nueva funcin
cetona y romper entre el carbono beta y alfa para
producir una molcula de acetil-CoA. Estas cuatro
enzimas siguen trabajando con el acil CoA que en
cada vuelta pierde dos carbonos como acetil CoA. Al
mismo tiempo, el FADH2 y el NADH obtenido en cada
64
ciclo de la oxidacin generan 4 ATP en la cadena

respiratoria y las acetil CoA entran al ciclo de Krebs
para ser totalmente oxidadas con la ganancia de 10
ATP netos por cada acetil CoA que entra al ciclo. As
tenemos que, por ejemplo, un palmitato (16C) genera
108 ATP al oxidarse hasta CO2 y H2O. Si
consideramos el gasto de la fase de activacin del
cido graso, obtenemos una ganancia neta de 106
ATP.
F.2
Sntesis
cetnicos.
F.2.1
F.2.2
F.2.3
F.2.4
utilizacin
de
los
cuerpos
Describir la estructura de los

cuerpos cetnicos: acetoacetato, hidroxibutirato y acetona.
Conocer las vas de sntesis y de
utilizacin de los cuerpos cetnicos e
indicar sus sustratos y sus
productos.
Sealar los tejidos involucrados en
la sntesis y utilizacin de los
cuerpos cetnicos.
Analizar la importancia fisiolgica
de los cuerpos cetnicos en el
ayuno, la diabetes
y dietas
deficientes en carbohidratos.
Cuando bajan los niveles de glucosa se estimula la

gluconeognesis a partir del oxaloacetato y se
incrementa la va de oxidacin de los cidos grasos,
lo que provoca el aumento concomitante de los
niveles de acetil CoA. En el hgado, el exceso de
acetil CoA se transforma en un grupo de molculas
conocidas genricamente como cuerpos cetnicos.
La va de sntesis de los cuerpos cetnicos
(cetognesis) se inicia con la condensacin de dos
molculas de acetil coenzima A; al producto de la
reaccin, acetoacetil CoA, se le une una tercera
molcula de acetil CoA para formar el -hidroxi-metil glutaril CoA. Esta molcula, al romperse por
una liasa (HMGCoA liasa), produce una acetil CoA y
un cido acetoactico o acetoacetato. Este producto
+
se reduce con NAD y forma el -hidroxi-butirato; el
acetoacetato,
por
una
descarboxilacin
no
enzimtica, produce la acetona.
El acetoacetato es utilizado por otros

rganos, como el msculo cardiaco y el cerebro,
donde, por accin de una transferasa en presencia
de succinil coenzima A, se transforma en acetoacetilCoA, molcula que se rompe por una tilisis, en
presencia de otra CoA para formar dos acetil CoA; la
enzima responsable de esta reaccin es una tiolasa.
Las dos acetil CoA resultantes son oxidadas para la
obtencin de energa en los rganos mencionados.
Al incremento de acetoacetato en la sangre
se le llama cetonemia. Puede deberse a una
deficiencia en el metabolismo de los carbohidratos
con el consiguiente aumento en el catabolismo de las
grasas y la desviacin de la acetil CoA a la sntesis
de cuerpos cetnicos. Algunos ejemplos de
situaciones en las que ocurre lo anterior son: la
diabetes, el ayuno prolongado y la dieta deficiente en
carbohidratos.
F.3
Sntesis de cidos grasos.

F.3.1
Indicar
las
fuentes
de
los
alimentadores de la -reduccin:
acetil CoA y NADPH. Mencionar el
papel del citrato y de las lanzaderas
(malato-aspartato y citrato) como
transportadores
del
acetil-CoA
mitocondrial.
F.3.2
Describir la sntesis de novo de un
cido graso e indicar las enzimas
involucradas, sustratos, coenzimas y
productos.
F.3.3
Describir las reacciones necesarias
para el alargamiento e insaturacin
de los cidos grasos, as como la
localizacin
subcelular
de
los
sistemas involucrados en este
proceso.
F.3.4
Sealar la fuente de los carbonos
del cido palmtico y calcular el
gasto energtico de la sntesis de
dicho cido.
F.3.5
Conocer la funcin de los cidos
grasos
poliinsaturados
como
precursores de prostaglandinas,
tromboxanos,
leucotrienos
y
lipoximas e indicar la funcin de
65
estos eicosanoides en el organismo

humano.
Cuando el requerimiento de energa en la clula ha
sido satisfecho y existen suficientes sustratos
oxidables, procede su almacenamiento bajo la forma
de triacilglicridos que constituyen la reserva de
energa a largo plazo ms importante de las clulas y
del organismo. El primer paso de este proceso es la
biosntesis de los cidos grasos, la cual se realiza en
el citoplasma celular a partir de la acetil CoA, el ATP
y el NADPH proveniente del ciclo de las pentosas y
de otros sistemas generadores de poder reductor.
La biosntesis de los cidos grasos se inicia
con la salida de la acetil-CoA desde la mitocondria en
forma de citrato y su transformacin en malonil CoA
mediante la fijacin del CO2 por una sintetasa
dependiente de biotina, que utiliza ATP. Tanto la
acetil CoA como la malonil-CoA se unen a un
complejo multienzimtico llamado sintetasa de los
cidos grasos. Este complejo est formado por un
conjunto de protenas enzimticas dispuestas
alrededor de la protena transportadora de acilos
(PTA). En pasos sucesivos ocurre la condensacin
de la acetil y la malonil CoA con desprendimiento de
CO2 y el resto del acetoacetilo de cuatro carbonos es
llevado por el brazo central de la PTA a los sitios
activos de las enzimas del complejo para
transformarlo, sucesivamente, en hidroxiacilo, enoilo
y acilo saturado, mediante el gasto de dos NADPH.
El ciclo se repite al incorporar dos carbonos del
malonil-CoA en cada vuelta, hasta que se completa
el cido palmtico, un cido graso saturado de 16 C.
El citrato desempea un papel muy
importante en la sntesis de los cidos grasos ya que
al salir al citoplasma se convierte en acetil CoA y
oxaloacetato. Este proceso alimenta con carbonos a
la sntesis de los cidos grasos y aporta NADPH por
la accin de la enzima mlica sobre el sistema
oxaloacetato-malato-piruvato. Por otra parte, el
citrato es un modulador positivo de la malonil CoA
sintetasa (tambin llamada acetil CoA carboxilasa),
que es la principal enzima reguladora de la sntesis
de los cidos grasos.
F.4
Sntesis y degradacin de triacilgliceroles.
F.4.1
F.4.2
F.4.3
F.4.4
F.4.5
Conocer la estructura qumica y la

distribucin
tisular
de
los
triacilglicridos en funcin de su
carcter
de
combustible
con
importancia fisiolgica.
Describir la va de degradacin de
los tri-acilglicridos (liplisis) e
identificar sus enzimas, sustratos,
productos y funcin en el organismo.
Sealar las fuentes de sustratos
para la sntesis de triacilglicridos:
acil CoA y glicerol fosfato.
Describir la sntesis de los
triacilglicridos
(lipognesis)
e
identificar sus intermediarios y
enzimas.
Explicar
tanto
la
regulacin
hormonal como la metablica de la
liplisis y de la lipognesis e indicar
el papel de la concentracin de
sustratos y productos de las vas, as
como el estado energtico celular.
Una vez formados los cidos grasos procede la

lipognesis o sntesis de los triacilglicridos: dos
cidos grasos activados como acil CoA reaccionan
con una molcula del glicerol fosfato para formar el
cido fosfatdico. Esta ltima molcula es precursora
de los triacilglicridos y de los fosfolpidos. Para
sintetizar los primeros se hidroliza el fosfato, con
produccin del diacilglicerol, el cual recibe enseguida
otra molcula de acil CoA, con la cual se completa el
triacilglicrido. La mayora de las enzimas
participantes en este proceso son aciltransferasas y
tiocinasas.
En el organismo humano la accin de la
insulina estimula todo el proceso de la lipognesis al
favorecer la entrada de la glucosa a los adipocitos, el
ciclo de las pentosas, la descarboxilacin del
piruvato, la biosntesis de los cidos grasos y la
acumulacin de los triacilglicridos.
La hidrlisis de los triacilglicridos en el tejido
adiposo, llamada tambin liplisis, es estimulada a
nivel de la triacilglicrido lipasa en una accin
mediada a travs de AMP cclico, por numerosas
hormonas entre las cuales se cuentan: la epinefrina,
el glucagn, los glucocorticoides, la tiroxina y el
66
ACTH; mientras que es inhibida por la insulina y por

el incremento de la concentracin de cidos grasos
libres. La hidrlisis se completa por la accin de la
diacilglicrido lipasa y la monoacilglicrido lipasa que
en conjunto liberan un glicerol y tres cidos grasos de
cada triacilglicrido.
F.5
de la cabeza polar de la fosfatidiletanolamina por una

serina.
Las fosfatidilcolinas proporcionan cidos
grasos para la sntesis de los steres de colesterol de
las HDL por la reaccin de LCAT, mientras que la
dipalmitoilfosfa-tidilcolina es el principal componente
del surfactante pulmonar.
Sntesis y degradacin de fosfolpidos.

F.5.1
Describir la sntesis de novo de los

fosfoglicridos
y
de
los
esfingolpidos,
indicando
los
sustratos, intermediarios, enzimas y
productos de las vas.
F.5.2 Describir la degradacin de los
fosfoglicridos
y
de
los
esfingolpidos.
La sntesis de los fosfoglicridos es similar en los
pasos iniciales a la sntesis de los TAG: el glicerol 3fosfato se esterifica con dos acil CoA para formar
cido fosfatdico. Este compuesto es el precursor de
todos los fosfoglicridos. Existen dos estrategias para
la obtencin de los fosfolpidos que contienen
glicerol, segn la naturaleza de la cabeza polar.
En la formacin de fosfatidilinositoles y de
cardiolipina, el cido fosfatdico reacciona con CTP
para formar CDP-diacilglicerol, el cul reacciona con
la cabeza polar (inositol o fosfatidilglicerol) para
formar el fosfoglicrido correspondiente.
El fosfatidilinositol puede ser fosforilado para
formar la familia de los fosfatidilinositol 4,5 bisfosfato.
Estos compuestos son hidrolizados por la fosfolipasa
C en respuesta al estmulo de algunas hormonas y
producen dos segundos mensajeros muy potentes:
IP3 y el diacilglicerol, los cuales causan movilizacin
2+
de Ca del retculo endoplsmico y proveen de cido
araquidnico para la sntesis de prostaglandinas,
tromboxanos y leucotrienos.
En la sntesis de fosfadiletanolamina y de
fosfatidilcolina, el cido fosfatdico pierde su fosfato y
el diacilglicerol resultante reacciona con CDP-colina o
CDP-etanolamina.
La fosfatidiletanolamina tambin puede
obtenerse por descarboxilacin de fosfatidilserina y la
fosfatidilcolina por metilacin de fosfatidiletanolamina,
utilizando S-adenosil metionina como donador de
metilos. La fosfatidilserina se obtiene por recambio
Degradacin de fosfoglicridos.
Los fosfoglicridos son hidrolizados por diversos
tipos de fosfolipasas que se clasifican segn su sitio
de accin: la fosfolipasa A1 libera los cidos grasos
de la posicin de 1; la fosfolipasa A2 los libera de la
posicin 2. La fosfolipasa C libera la cabeza polar
fosforilada que se encuentra en la posicin 3 del
glicerol, mientras que, la fosfolipasa D libera la
cabeza polar.
Sntesis de esfingolpidos
Los esfingolpidos contienen una molcula de
esfingosina en lugar del glicerol. Sus precursores son
serina y palmitoil CoA. Los cidos grasos activados
(acil CoA) reaccionan con el grupo amino de la
esfingosina para formar las ceramidas, quienes son
las precursoras de esfingomielinas, cerebrsidos y
ganglisidos.
Las esfingomielinas se obtienen de la reaccin de la
ceramida con CDP-colina.
Los cerebrsidos se obtienen por la unin
directa de galactosa o glucosa a la ceramida. El
donador del azcar es UDP-galactosa o UDPglucosa.
Los ganglisidos se forman por la adicin
secuencial y ordenada de residuos de azcar a la
ceramida. Los donadores de estos azcares son
UDP-azcares o el CMP-NeuAc (cido Nacetilneuramnico o cido silico).
Los esfingolpidos son degradados por
enzimas
lisosomales
(hexosaminidasas,
galactosidasa, la sialidasa o la esfingomielinasa)
hasta
dar
ceramidas
y
los
azcares
correspondientes. Existen una serie de defectos
genticos en los que faltan estas enzimas lo que
conduce a una acumulacin de ganglisidos que
causan graves consecuencias a la salud.
F.6
Metabolismo del colesterol.
67
F.6.1
F.6.2
F.6.3
F.6.4
Mencionar la importancia fisiolgica

del colesterol.
Describir la va de sntesis del
colesterol
e
identificar
sus
sustratos, intermediarios y enzimas.
Conocer la regulacin de la
colesterognesis a nivel enzimtico,
a nivel de la sntesis de las enzimas,
as como por modificacin covalente
inducida por hormonas (glucagon,
insulina y ACTH).
Describir las modificaciones que
sufre el colesterol para la sntesis de
sales biliares, hormonas esteroidales
y vitamina D.
El colesterol es una molcula muy importante por su

inters clnico y el gran nmero de compuestos que a
partir de l se sintetizan, como las hormonas
esteroidales, las sales biliares y la vitamina D.
La sntesis del colesterol (colesterognesis)
es una va citoplsmica que se inicia a partir de la
unin de tres molculas de acetil CoA, las que
forman el -hidroxi--metilglutaril-CoA, precursor del
mevalonato. La enzima que produce este ltimo
compuesto en la colesterognesis es la -hidroxi-metil glutaril-CoA reductasa, dependiente de NADPH.
Despus de tres fosforilaciones para activar la
molcula, el mevalonato se descarboxila para formar
el isopentenil pirofosfato, unidad isoprenoide de
todos los terpenos. El isopentenil pirofosfato se une
con uno de sus ismeros para formar el geranil
pirofosfato, de 10 tomos de carbono que, por
combinacin con otra molcula de isopentenil
pirofosfato, forma el farnesil pirofosfato, de 15
carbonos. Dos molculas de farnesil pirofosfato se
unen por un enlace especial (cabeza-cabeza) para
formar el escualeno, de 30 carbonos.
El escualeno se cicliza y, por cambios
sucesivos
de
oxidacin, descarboxilacin
y
reacomodo de electrones y grupos qumicos, forma el
lanosterol, el zimosterol y finalmente el colesterol. La
va de la colesterognesis se regula principalmente
por colesterol endgeno o el que se obtiene a partir
de la dieta a nivel de la enzima -hidroxi-metilglutaril-CoA reductasa.
El colesterol puede seguir diversos caminos:

a) Migra a la membrana, donde regula la fluidez de la
misma; b) Se transforma qumicamente para producir
cidos biliares por oxidacin de su cadena lateral; c)
Pierde una cadena de seis tomos de carbono para
producir la pregnenolona, el precursor de todas las
hormonas esteroidales, sean progestgenos (como la
progesterona),
mineralcorticoides
(como
la
aldosterona), glucocorticoides (como el cortisol),
andrgenos (testosterona) y estrgenos (estrona y
estradiol); d) El colesterol tambin es precursor de la
vitamina D, que se obtiene por la ruptura del anillo B.
El colesterol se excreta principalmente como
sales biliares, aunque una parte puede eliminarse en
las heces como coprostanol, producto de la
degradacin bacteriana del colesterol en el intestino
grueso.
F.7
Estructura
y
metabolismo
de
las
lipoprotenas.
F.7.1 Describir los mecanismos de
transporte de los cidos grasos
provenientes de la liplisis y el de los
otros lpidos (TAG, steres de
colesterol y fosfolpidos) en el
organismo.
F.7.2 Conocer la composicin y la funcin
de las lipoprotenas (quilomicrones,
LDL, VLDL, HDL y Lp[a]).
F.7.3 Describir el metabolismo de las
diferentes lipoprotenas.
Los lpidos son compuestos prcticamente insolubles

en agua que se transportan en el torrente circulatorio
mediante las lipoprotenas.
Las lipoprotenas son partculas globulares
de alto peso molecular con un ncleo formado por
lpidos hidrofbicos TAG y steres de colesterol,
los cuales aportan la mayor parte de la masa de la
partcula, y por una sola capa superficial de
molculas de fosfolpidos, colesterol y protenas o
polipptidos que rodean al ncleo y estabilizan la
partcula para que permanezca en solucin dentro
del plasma.
La fraccin proteica de las lipoprotenas se
conoce como apolipoprotena o apoprotena, de las
que se han aislado y caracterizado seis clases
68
principales: A, B, C, D, E y (a). Algunas de stas son

integrales y no pueden ser removidas, en tanto que
otras pueden ser transferidas a otras lipoprotenas.
Las lipoprotenas principales que circulan en
el plasma humano se clasifican con base en su
densidad en quilomicrones, lipoprotenas de muy
baja densidad (LMBD o segn la sigla inglesa
VLDL), las lipoprotenas de baja densidad (LBD o
LDL) y las lipoprotenas de alta densidad (LAD o
HDL). La densidad de las lipoprotenas refleja la
relacin existente entre la cantidad de lpidos y de
protenas.
Los quilomicrones transportan los lpidos de
la dieta desde el enterocito al tejido adiposo, la
glndula mamaria, el msculo y el hgado. Los lpidos
endgenos, principalmente los triacilglicridos y el
colesterol se transportan desde el hgado a los
tejidos mediante las lipoprotenas VLDL. Las
apoprotenas caractersticas de las VLDL son la apo
B-100, apo-C y apo-E, de las cuales las dos ltimas
son compartidas con los quilomicrones, los que
tienen adems la apo-B48 y la apo-A. Tanto los
quilomicrones como las VLDL son llevados hasta los
capilares de los tejidos en donde su apo-CII activa a
la lipoprotena lipasa, quien hidroliza la mayor parte
de los triacilgliceroles de estas lipoprotenas hasta
glicerol y cidos grasos, los que son tomados por los
tejidos para ser oxidados o almacenados en el tejido
adiposo.
Los restos de VLDL, que han perdido la
mayor parte de sus triacilgliceroles y algunas
apoprotenas y fosfolpidos, se convierten en LDL.
Las LDL contienen apo B-100 y transportan
colesterol a los tejidos.
Las lipoprotenas ms pequeas son las
HDL; stas son ricas en fosfolpidos y protenas y
dentro de sus funciones se cuenta el intercambio de
apoprotenas A, C y E con las dems lipoprotenas y
el transporte del colesterol extraheptico al hgado
(transporte inverso del colesterol).
El colesterol es transportado en la sangre por
tres diferentes lipoprotenas: las LDL (60 a 75%), las
HDL (15 a 35%) y las VLDL (10%). Las LDL y las
HDL tienen una funcin combinada en la
conservacin del equilibrio del colesterol; las LDL
llevan el colesterol hacia las clulas y regulan la
sntesis de novo del colesterol en ellas; las HDL lo
eliminan de las clulas, es decir, captan el colesterol

liberado en el plasma procedente del recambio de
membranas y de clulas que mueren y lo llevan al
hgado para su metabolismo o excrecin.
Adems de las clases ya mencionadas de
lipoprotenas existe la lipoprotena (a) [Lp(a)], la cual
tiene una composicin lipdica muy similar a la LDL,
contiene apoB-100 y una glucoprotena llamada
apo(a). La apo(a) es polimrfica (de longitud y
secuencia) y tiene una gran homologa con el
plasmingeno. Esta homologa es importante porque
la Lp(a) se asocia con el bloqueo de la activacin del
plasmingeno y la consiguiente lisis de los cogulos
de fibrina, as como con la estimulacin de la
proliferacin de clulas musculares lisas, procesos
que pueden estar en el origen de lesiones
aterosclerticas. Adems, la apo(a) dificulta el
catabolismo mediado por el receptor de LDL al que
se fija e interfiere, de esta manera, con el
metabolismo y transporte del colesterol. La
concentracin de Lp(a) en sujetos normales es de ~5
mg/dl; las cifras >30 mg/dl constituyen otro valor de
prediccin de un alto riesgo de aterosclerosis y
trombosis.
F.8
Regulacin y alteraciones del metabolismo

de lpidos.
F.8.1 Describir el estado del metabolismo
lipdico y sus alteraciones en el
estrs,
obesidad,
dislipoproteinemias,
hgado
graso
e
hipercolesterolemias, quienes son
factores de riesgo de aterosclerosis.
F.8.2 Identificar el papel de la leptina en
la regulacin del peso corporal y del
apetito.
Discusin de los casos clnicos 4 Cetosis por

inanicin. Obesidad y 5 Hipercolesterolemia y
aterosclerosis ver pg. (178 y 179).
1.
Libby P. Atherosclerosis the new view.
Scientific American. 2002; 286( 5): 28-37.
2.
NIH (National Institutes of Health) consensus
conference. Triglyceride, HDL, and coronary
heart disease. JAMA. 1993; 269 (4): 505-510.
69
3.
4.
5.
6.
Alba ZayasL, Pereira RG, Aguilar BA.

Lipoprotena (a): estructura, metabolismo,
gentica y mecanismos patognicos. Rev
Cub Invest Biomed. 2003; 22(1): 32-40.
Martnez AE, Gonzlez MO. La leptina, una
hormona novedosa. Investigadores Mdicos.
2003; IV (5):1097-1103.
Sabath EFS. Leptina. Rev Inv Cln. 2002; 54
(2): 161-165.
Villaseor A. El papel de la leptina en el
desarrollo de la obesidad. Rev Endocrin
Nutr. 2002; 10 (3):135-139.
Los lpidos son compuestos que se han relacionado

con varias patologas.
La regulacin del metabolismo lipdico se
ejerce en respuesta a las diferentes necesidades
energticas y los estados de la dieta de un
organismo (ayuno-alimentacin). La sntesis y la
degradacin de los TAG y del colesterol son
procesos que afectan a todo el organismo, con sus
rganos y tejidos formando una red interdependiente
conectada por la corriente sangunea. La sangre
transporta los TAG en forma de quilomicrones y
VLDL, los cidos grasos en forma de complejos con
albmina y el colesterol asociado a VLDL, LDL y
HDL. Las clulas pancreticas perciben los estados
de la dieta del organismo y responden liberando
hormonas (insulina o glucagon) que regulan la
velocidad de las rutas opuestas del metabolismo de
lpidos y controlan si se han de degradar o sintetizar
los cidos grasos, los TAG, los fosfolpidos o el
colesterol.
La regulacin metablica se puede ejercer a
corto plazo (disponibilidad de sustratos, interacciones
alostricas y modificaciones covalentes) o a largo
plazo (control de la sntesis y degradacin de las
enzimas). Otro nivel de regulacin se relaciona con el
transporte de los lpidos de un tejido a otro.
Los lpidos ms abundantes del organismo
son los TAG almacenados en el tejido adiposo, los
cuales se hidrolizan por la accin de una lipasa
sensible a hormonas como el glucagon, la epinefrina
y los glucocorticoides, obteniendo glicerol y cidos
grasos que salen a la circulacin. Estos ltimos se
asocian a albmina y se transportan al hgado,
corazn y msculo para ser oxidados hasta CO2 y
H2O, con la produccin consecuente de ATP. Las

condiciones
fisiolgicas
y
metablicas
que
determinan la movilizacin de grasas del tejido
adiposo pueden ser alteradas por situaciones de
estrs (dolor, fiebre, infecciones, miedo, hemorragia,
hipoglucemia) en las que se estimula la
adenohipfisis, que secreta ACTH, induciendo la
secrecin de glucocorticoides. La ACTH y los
glucocorticoides aceleran la hidrlisis de los TAG.
La concentracin de los TAG almacenados
en los adipocitos depende de la velocidad de su
recambio (sntesis e hidrlisis). Cuando el
almacenamiento de energa en forma de TAG en el
tejido adiposo es excesivo, se establece una
condicin llamada obesidad, la cual correlaciona con
un promedio de vida menor y con un aumento en
problemas de salud, principalmente de tipo
cardiovascular. Muchos factores conducen a ella,
pero la causa bsica es una ingesta calrica por
encima de los requerimientos energticos estndar.
El apetito se regula por la presencia de
compuestos antianorxicos. La sntesis de estos
compuestos se ve afectada por la presencia de una
protena pequea que se libera por las clulas
adiposas: la leptina. La ausencia de esta protena o
de su receptor en las clulas del hipotlamo
implicadas en la regulacin del apetito se asocia con
la aparicin de obesidad en ratones. Su papel est
actualmente en estudio en humanos.
Existen otras alteraciones de los lpidos
asociadas al metabolismo de las lipoprotenas. Estas
alteraciones se conocen en general como
dislipoproteinemias, en las que hay modificaciones
de los niveles de colesterol y/o TAG en sangre.
En las hipercolesterolemias familiares, los
receptores celulares para lipoprotenas de baja
densidad (LDL) son deficientes. Por lo tanto las LDL
no pueden ser captadas por las clulas y degradadas
por las enzimas lisosomales. El consecuente
incremento de LDL en sangre se asocia con
xantomas (depsitos de lpidos, frecuentemente
encontrados bajo la piel) y enfermedades de arterias
coronarias. En las hipertriacilgliceridemias se
encuentran bajos niveles de lipoprotena lipasa (LPL)
o apo CII (el activador de LPL) y TAG aumentados.
Estas deficiencias se asocian con xantomas
caractersticos e intolerancia a comidas ricas en
70
grasas. El tratamiento involucra dietas bajas en

cidos grasos saturados y colesterol y el uso de
agentes
hipolipemiantes
como
las
resinas
secuestradoras de cidos biliares, la niacina y los
inhibidores de la 3-hidroxi-3 metilglutaril- CoA (HMGCoA) reductasa.
En condiciones de estrs metablico, la
capacidad para secretar VLDL no es suficiente para
la sntesis aumentada de TAG. Esto ocasiona que el
depsito de AG y TAG en el tejido heptico se vuelva
excesivo
establecindose una condicin txica
llamada hgado graso. Sin embargo, el hgado graso
ocurre especialmente en condiciones txicas graves,
cuando la sntesis de las apolipoprotenas,
requeridas para la formacin de VLDL, es inferior a la
disponibilidad de cidos grasos, ocasionando su
acumulacin.
Esta
situacin
se
observa
frecuentemente en las personas que ingieren
constantemente grandes cantidades de etanol y una
dieta hipoproteica. La oxidacin del etanol
proporciona la energa necesaria para mantener las
funciones celulares, pero tambin favorece la sntesis
de cidos grasos debido a un aumento en la
disponibilidad de NADH y al aumento en la actividad
de la fosfatidato fosfohidrolasa.
Finalmente la obesidad, sobre todo el patrn
masculino de depsito centrpeto o visceral de la
grasa, favorece una dislipidemia aterognica que se
caracteriza por el aumento de los TAG plasmticos,
la disminucin de HDL y la intolerancia a la glucosa.
La aterosclerosis involucra la formacin de placas
ricas en lpidos en la ntima de las arterias. Las
placas empiezan como rayas grasas conteniendo
clulas espumosas, las cuales son inicialmente
macrfagos llenos de lpidos, particularmente steres
de colesterol. Estas lesiones primarias desarrollan
placas fibrosas que pueden ocluir la arteria y causar
un infarto cerebral o al miocardio. La formacin de
estas placas est frecuentemente asociada como se
mencion anteriormente, con anormalidades en el
metabolismo
de lipoprotenas plasmticas. En
contraste con estas lipoprotenas, las lipoprotenas
de alta densidad (HDL) tienen un efecto protector.
Como parte de la estrategia general para limitar la
aterosclerosis hay que controlar la hipertensin, si
fuera necesario con farmacoterapia. La mayora de
los enfermos con diabetes mellitus fallece a
consecuencia
de
aterosclerosis
o
sus
complicaciones. El control riguroso de la glucemia en
estos enfermos disminuye las complicaciones
microvasculares de la diabetes, por lo que se
recomienda prestar atencin al control de la
glucemia.
La leptina es una hormona de naturaleza
proteica constituida por 167 aminocidos que circula
en el plasma sanguneo y regula el peso corporal y
los depsitos de grasa, a travs de sus efectos en el
metabolismo y el apetito. En general, induce una
disminucin en el apetito y un incremento en el gasto
energtico.
La leptina es producida y liberada por el
tejido adiposo blanco fundamentalmente como una
seal de saciedad, aunque se ha visto tambin que
se produce en tejido adiposo marrn, en la placenta y
en algunos tejidos fetales, como el corazn, hueso y
cartlago.
La sntesis y la secrecin de leptina estn
directamente relacionadas con la cantidad de grasa
corporal y el tamao del adipocito. Aunque factores
como la edad, el sexo, el ndice de masa corporal, la
actividad fsica, el fumar, la hipertensin, el colesterol
en HDL, la concentracin plasmtica en ayuno de
triacilgliceroles, de glucosa y de insulina tambin
afectan la secrecin de leptina. As por ejemplo, la
concentracin de la hormona es hasta cuatro veces
mayor en mujeres que en hombres. El fumar puede
traer cambios en el peso corporal, al modificar la
sensibilidad de los receptores del hipotlamo a la
leptina y en consecuencia modular la sntesis de
hormona, reduciendo el peso corporal.
El hipotlamo es el sitio de mayor accin de
leptina. La accin ms importante de la leptina en
este rgano es la disminucin en la produccin del
neuropptido Y (NPY). Las implicaciones de estos
cambios son las siguientes:
Incremento en el NPY
Incremento en la leptina
(disminucin de leptina)
(diminucin en el NPY)
Se presenta hiperfagia.
Hipofagia.
Aumento en la secrecin de
Incremento
insulina mayor respuesta a la
energtico.
en
el
gasto
insulina en tejido adiposo.
Aumento de peso.
Prdida de peso.
71
proceso;
sealar
sus
consecuencias fisiolgicas.
G.1.7 Identificar a los aminocidos
precursores
de
-cetoglutarato,
piruvato, acetoacetato, fumarato y
oxaloacetato.
G.1.8 Identificar a los aminocidos
precursores
de
las
siguientes
aminas: acetilcolina, catecolaminas,
serotonina, carnitina, poliaminas y
creatinina.
G.1.9 Conocer las bases metablicas de las
siguientes alteraciones congnitas
del
metabolismo:
acidemia
propinica, acidemia metilmalnica,
hipervalinemia,
fenilcetonuria
y
alcaptonuria.
En general podemos decir que la concentracin de la

leptina aumenta despus de la ingesta de alimento y
disminuye durante el ayuno y la diabetes. La insulina
y los glucocorticoides aumentan la sntesis de esta
hormona, mientras que las catecolaminas, los
andrgenos y los cidos grasos de cadena larga la
inhiben.
G. Metabolismo
nitrogenados
de
los
compuestos
Al finalizar esta subunidad, el alumno describir los

procesos ms importantes del metabolismo de los
compuestos nitrogenados.
G.1
Aminocidos y protenas.
G.1.1 Conocer de manera general cmo
se realiza en el organismo la
digestin de las protenas y la
absorcin de los aminocidos.
G.1.2 Identificar las fuentes nutricionales
de los aminocidos.
G.1.3 Describir
las
reacciones
de
transaminacin y desaminacin e
identificar la localizacin subcelular,
sustratos, enzimas y productos de la
actividad de estas enzimas.
G.1.4 Identificar el papel de la glutamina y
del
cido
glutmico
en
el
metabolismo de los compuestos
nitrogenados. Describir el papel de
la glutamino sintetasa, de la
glutamato deshidrogenasa, de las
transaminasas y de la glutaminasa
en
el
metabolismo
de
los
compuestos nitrogenados.
G.1.5 Sealar las causas de la toxicidad
del in amonio y los mecanismos del
organismo para combatirla.
G.1.6 Describir el proceso de sntesis de
la urea e indicar la localizacin
subcelular, sustratos, enzimas y
productos de la va. Describir la
regulacin de la sntesis de urea, as
como los defectos en el metabolismo
que producen alteraciones en este
Realizacin de la prctica 8
"El efecto del
tetracloruro de carbono sobre las transaminasas (ver
pg. 155).
Los aminocidos son el sustrato ms importante del
metabolismo nitrogenado en los organismos
superiores pues de ellos derivan protenas, purinas,
pirimidinas, porfirinas, pptidos y hormonas, entre
otros compuestos y, adems, sus esqueletos
carbonados se oxidan para liberar energa.
Todos los aminocidos de los sistemas vivos
se encuentran como parte de un pool o poza
(reserva) metablica cuya magnitud se mantiene
constante mediante un equilibrio entre la entrada y la
salida de aminocidos. Desde la poza, los
aminocidos son llamados hacia sus diferentes
destinos metablicos:
1. Participar en el proceso de la nutricin por medio
de la sntesis de nuevas protenas.
2. La sntesis de compuestos nitrogenados no
proteicos.
3. Su entrada a la gluconeognesis para sintetizar
glucosa.
4. Su degradacin oxidativa para la produccin de
energa.
1.
Nutricin. Los aminocidos son oxidados

constantemente en los animales y el nitrgeno
excretado tiene que ser repuesto para mantener un
72
balance nitrogenado que, en los adultos normales,

se encuentra en equilibrio; en los jvenes, las
embarazadas y los convalecientes es positivo y en
los ancianos, los enfermos y los desnutridos el
balance nitrogenado es negativo.
Los aminocidos ingresan al organismo
humano formando parte de las protenas de la
dieta que, por lo general, aportan alrededor de 10%
de las kilocaloras diarias; sin embargo, el valor
principal de los aminocidos recibidos reside en el
aporte de las estructuras moleculares que el
organismo humano no puede sintetizar por s
mismo y que son los aminocidos indispensables o
esenciales cuya presencia determina en gran parte
la calidad de la dieta; ellos son: ARGinina, LISina,
METionina,
HIStidina,
TREonina,
VALina,
FENilalanina, LEUcina, IsoLEucina y TRIptofano
(ALM-HTV-FLIT).
Compuestos nitrogenados. Los aminocidos

participan en la sntesis de numerosos compuestos
nitrogenados que no son protenas, por ejemplo,
los oligopptidos glutatin y carnosina; las bases
nitrogenadas de los cidos nucleicos y los
fosfolpidos;
las
hormonas
derivadas
de
aminocidos como la epinefrina, tiroxina y
serotonina; las hormonas peptdicas como el
glucagn, la ACTH y la oxitocina; los
neurotransmisores como la dopamina y el
aminobutirato gamma; los neuropptidos como las
endorfinas y los factores liberadores; las porfirinas
como el grupo hemo; los pigmentos como la
melanina; las aminas como la histamina y varios
compuestos ms.
3. Gluconeognesis. Una porcin considerable de la
sntesis diaria de glucosa que se realiza en el
hgado se hace a partir de los aminocidos que
reciben, por esto, el nombre de aminocidos
glucognicos. Con la excepcin de la leucina y la
lisina, todos los aminocidos tienen la capacidad
de aportar todo o parte de su esqueleto carbonado
para que se incorpore a la sntesis de la glucosa y
esto se logra, en un primer paso, mediante la
prdida del grupo amino por transaminacin, lo
cual deja libre la cadena carbonada bajo la forma
de un cetocido.
2.
Los cetocidos mitocondriales resultantes:

alfa-cetoglutarato,
succinil-CoA,
fumarato,
oxaloacetato y piruvato confluyen hacia la
formacin del oxaloacetato citoplsmico que
ingresa al eje central del metabolismo y se
transforman en fosfoenol piruvato que alimenta la
gluconeognesis. Dos molculas de este ltimo
siguen el reverso de la va glucoltica hasta su
transformacin en glucosa.
4. Oxidacin. Para la oxidacin de su esqueleto
carbonado los aminocidos pierden primero al
grupo amino, lo cual se lleva comnmente a cabo
mediante la transaminacin acoplada a la
desaminacin
oxidativa
(transdesaminacin),
proceso reversible en el cual un aminocido
transamina primero con el alfa-cetoglutarato y le
transfiere su grupo amino para formar glutamato y
ste es desaminado enseguida por la glutamato
deshidrogenasa con produccin de NADH y
liberacin de amonio. El metabolismo del esqueleto
de carbono se aparta entonces de la ruta seguida
por el grupo amino ya que, para el primer caso, los
carbonos pueden ser llevados hacia la oxidacin
en el ciclo de Krebs y la cadena respiratoria, o
bien, incorporarse a la gluconeognesis en el
hgado para la sntesis de glucosa; en tanto que el
ion amonio ser transportado hasta el hgado en
donde ser tomado por la va metablica del ciclo
de la urea.
La oxidacin del esqueleto carbonado de
los aminocidos procede mediante su agrupacin
en familias o grupos de aminocidos que, al
transformarse en el metabolismo, confluyen hacia
alguno de los intermediarios de la gluclisis, la
descarboxilacin del piruvato o del ciclo de Krebs.
Los glucognicos son de la familia del:
Piruvato:Tre, Gli, Ser, Ala, Met, Cis y Tri
Alfa-cetoglutarato: Pro, His, Arg, Gln y Glu
Succinil-CoA: Ile, Val, Met
Fumarato: Tir, Fen, Asp
Oxaloacetato: Asn, Asp
Y los cetognicos son de la familia del:
Acetoacetato: Leu, Tir, Fen
Acetoacetil-CoA: Tri, Lis
Acetil-CoA: Tre, Leu, Ile
73
El ciclo de la urea
El mecanismo de la transdesaminacin permite el
acopio de los grupos amino de los diferentes
aminocidos en la molcula del glutamato, la cual, al
ser
desaminada
oxidativamente
por
la
deshidrogenasa del glutamato, libera el ion amonio.
Dado que este compuesto es muy txico para el
sistema nervioso central, se elimina mediante la
sntesis de urea. Esta sntesis se lleva a cabo en el
hgado mediante un proceso metablico denominado
el ciclo de la urea, la primera parte del cual se realiza
en la mitocondria y el resto en el citoplasma de la
clula heptica.
El ciclo de la urea (fig. III.2) que permite
mantener una muy baja concentracin de amonio
libre, se inicia con la sntesis del carbamil fosfato a
partir del amonio y el CO2 con un gasto de 2 enlaces
de alta energa. El carbamil fosfato entrega el grupo
carbamino a la molcula de ornitina, la cual acta
como portadora de grupos en las cuatro reacciones
del ciclo:
1. Transferencia del carbamino a la ornitina para
formar citrulina: ornitina transcarbamilasa.
2. Condensacin de la citrulina con el aspartato. Se
forma el arginino-succinato con gasto de 2ATP:
arginino-succinato sintetasa.
3. Ruptura del arginino-succinato. Se desprende
fumarato y se produce arginina: arginino-succinato
liasa.
4. Hidrlisis de la arginina para regenerar a la ornitina
y liberar urea: arginasa.
G.2.2 Con base en un esquema general de

la sntesis de las bases pricas y
pirimdicas
describir
sus
mecanismos de regulacin.
G.2.3 Identificar los sustratos y productos
de las vas de ahorro en la sntesis
de purinas.
G.2.4 Identificar
las
causas
y
consecuencias fisiolgicas de la
sobreproduccin de cido rico.
G.2.5 Describir el efecto del alopurinol
sobre la xantina oxidasa y el que
ejercen
algunas
drogas
anticancergenas,
como
la
mercaptopurina, el 5-fluorouracilo, el
metotrexato y la tioguanosina sobre
la sntesis de purinas y pirimidinas.
Discusin del caso clnico 6 "Gota" (ver pg.
En resumen, para formar una molcula de urea se

requiere de un ion amonio, un CO2 y un aspartato. Se
produce una molcula de fumarato y una de urea,
con gasto de cuatro enlaces de alta energa
provenientes del ATP.
G.2
Nucletidos.
G.2.1
Conocer
las
caractersticas
generales de las bases nitrogenadas,
los nuclesidos y nucletidos:
estructura qumica y funciones.
181).
Los nucletidos estn formados por ribosa o
desoxirribosa, una base nitrogenada que puede ser
una purina o una pirimidina, y una, dos o tres
molculas de cido fosfrico. Dependiendo del
74
nmero de grupos de fosfato presentes, los

nucletidos pueden ser mono, di, o trifosforilados.
cido fosfricoRibosaBase nitrogenada
Los nuclesidos se diferencian de
nucletidos en que no tienen cido fosfrico.
los
Ribosa Base nitrogenada

Las bases nitrogenadas pueden ser purinas o
pirimidinas. Las purinas estn formadas por dos
anillos heterocclicos (formados por diferentes tipos
de tomos), uno con seis miembros y otro con cinco
miembros, y son la adenina y la guanina. Las
pirimidinas estn formadas por un anillo heterocclico
de seis miembros y las ms importantes son: uracilo,
timina y citosina.
Los nucletidos y nuclesidos pricos tienen
funciones muy variadas en los seres vivos; entre las
ms importantes estn la de servir como sustratos
acarreadores de energa, segundos mensajeros,
neurotransmisores, coenzimas, etctera.
Los nucletidos pirimdicos intervienen como
acarreadores en la biosntesis de polisacridos y de
fosfolpidos. Los nucletidos pricos y pirimdicos
forman parte de los cidos nucleicos y
desoxirribonucleicos.
La sntesis de purinas se lleva a cabo en el
citoplasma celular y comprende las siguientes tres
fases:
1. Activacin, en la que la ribosa 5 fosfato adquiere
dos molculas de fosfato que se asocian al
carbono 1 de la molcula; esta reaccin es llevada
a cabo por la fosforribosil pirofosfato sintetasa, la
cual es una de las enzimas reguladoras de la
sntesis de purinas y de pirimidinas.
2. Formacin de los anillos heterocclicos, en donde
varias enzimas intervienen aadiendo los
diferentes tomos que componen al anillo purnico
hasta formar inosina monofosfato.
La primera reaccin, catalizada por la enzima
fosforribosilglicinamida sintetasa, es reguladora de la
sntesis de purinas y su velocidad depende de las
concentraciones de sus sustratos.
3. A partir de la inosina monofosfato se sintetizan la
guanosina monofosfato y la adenosina monofosfato
por medio de dos vas metablicas que se regulan

mutuamente. Las altas concentraciones de GTP
estimulan la sntesis de AMP y las altas
concentraciones de ATP estimulan la sntesis de
GMP.
La sntesis de pirimidinas tambin se lleva a
cabo en el citoplasma y se inicia con la sntesis de
carbamilfosfato a partir de glutamina, CO2 y ATP en
una reaccin catalizada por la enzima carbamilfosfato
sintetasa citoplasmtica que es una reaccin
parecida a la que ocurre en la mitocondria para la
biosntesis de la urea; posteriormente, se adiciona
cido asprtico para producir cido ortico al cual se
une una molcula de fosforribosilpirofosfato y se
descarboxila para dar la uridina monofosfato. A partir
de sta se sintetizan la citidina monofosfato y la
timidina monofosfato.
Las purinas se catabolizan por dos caminos
metablicos:
1. En la va del ahorro de las purinas, la adenina, la
hipoxantina o la guanina son reaprovechadas y,
por medio de la enzima fosforribosiltransferasa
correspondiente, se vuelve a formar el AMP, IMP o
GMP.
2. En una secuencia de reacciones cuyo producto
final es el cido rico, que es la forma en la que se
excretan las bases pricas.
El catabolismo de las pirimidinas se lleva a
cabo por una serie de reacciones cuyos productos
finales son la malonil-CoA y la metilmalonil CoA;
estos dos productos se catabolizan hasta CO2 y
agua. El exceso en el catabolismo de purinas genera
una sobreproduccin de cido rico que tiende a
acumularse en las articulaciones distales, lo que
produce el sndrome de gota. Esto se debe a que el
cido rico es insoluble en ambientes con un pH
menor a 6.0, lo que hace que no se pueda eliminar
por la orina. Este sndrome se produce cuando las
concentraciones de purinas son altas, ya sea por
aporte elevado o por exceso en el catabolismo de las
mismas.
Los anlogos de los nucletidos se han
utilizado como inhibidores de algunas enzimas; por
ejemplo, la azaserina y la acivicina, anlogos de la
glutamina, se usan como inhibidores de la enzima
glutamina amino transferasa que interviene en la
sntesis de purinas. El metotrexato y el 5-fluorouracilo
75
se usan como inhibidores de la sntesis de dTMP. La

aplicacin de estos inhibidores en pacientes con
procesos neoplsicos da como resultado la
disminucin de la sntesis del DNA y del crecimiento
celular.
El alopurinol se usa en el tratamiento del
sndrome de gota porque es un anlogo de la
hipoxantina y acta como inhibidor de la enzima
xantina oxidasa y de la produccin de cido rico.
H.
Regulacin e integracin metablica
Al finalizar esta subunidad, el alumno ser capaz de

analizar los mecanismos de regulacin del
metabolismo y de su integracin en algunas
condiciones fisiolgicas.
H.1
H.2
H.3
Conocer cmo se lleva a cabo la regulacin

del metabolismo.
Analizar los cambios adaptativos que
ocurren en las siguientes condiciones
normales y patolgicas: ejercicio intenso,
embarazo-lactancia, vejez, ayuno, obesidad,
desnutricin, diabetes mellitus y gota.
Conocer los mecanismos de accin
hormonal e identificar los receptores
membranales
y
las
cascadas
de
amplificacin: la adenilato ciclasa (AMP
cclico), la fosfolipasa C (fosfoinostidos,
calcio) y la GMPc fosfodiesterasa (GMP
cclico).
Realizacin de la prctica
Metablica (ver pg. 168).
10
"Integracin
1.
Scott JD, Pawson T. Cell communication the
inside story. Scientific American. 2000; 282
(6): 54-61.
2.
Kholodenko BN, Westerhoff HU. The
macroworld
versus
microworld
of
biochemical regulation and control. TIBS.
1995; 20: 52-54.
Las clulas y los organismos son sistemas
relativamente aislados en un estado casi
estacionario. Las funciones de los organismos vivos
como un todo o como sus partes estn reguladas con

el objetivo de asegurar un mximo de supervivencia.
Ya que los sistemas vivos reaccionan en el espacio y
el tiempo, se emplea tanto una regulacin en el
espacio y en el tiempo.
La regulacin espacial se expresa a travs
del grado de organizacin de las estructuras; el
mantenimiento de la estabilidad estructural de las
protenas, en la asociacin de las enzimas que
cooperan en los complejos multienzimticos, su
localizacin
en
compartimentos
definidos
(mitocondria, retculo endoplsmico) y por la
especializacin de clulas y tejidos mediante
procesos de diferenciacin.
El tiempo est involucrado en la regulacin
principalmente en trminos de modificacin de las
velocidades de reaccin (metablica, de transporte y
otras). En la prctica, se utilizan ambas dimensiones
simultneamente.
En bioqumica una de las principales seales
para regular los procesos metablicos es la
concentracin de molculas. Los mecanismos
regulatorios son efectivos a diferentes niveles de
organizacin pero sus bases son siempre
moleculares. Las funciones de un organismo pueden
regularse a travs de reacciones que se realizan en
las clulas (regulacin metablica) y a nivel de todo
el organismo (control hormonal y nervioso). En una
clula, los procesos metablicos estn controlados
principalmente por regulacin de la actividad de las
enzimas individuales.
Las enzimas pueden regularse de varias
maneras:
1. Cambiando la concentracin de los sustratos
(como una seal metablica) lo que resulta en
cambios en la actividad enzimtica, permaneciendo
constante la cantidad de enzima involucrada. Los
cambios en la concentracin de un compuesto
seal se logran muchas veces a travs de la
compartimentalizacin, es decir, a travs de
membranas que separan la clula del medio
extracelular y por los pequeos compartimentos en
el interior de la clula, stas siendo separadas
espacialmente (por membranas) o funcionalmente
(por acarreadores).
2. Cambiando la concentracin de los efectores
(activadores o inhibidores) en las enzimas
76
alostricas. Al interactuar con el sitio alostrico de

la enzima, estos efectores pueden aumentar o
disminuir la actividad enzimtica con base en los
cambios cooperativos de la conformacin de las
subunidades que componen a la enzima. La
cantidad de la enzima alostrica no cambia durante
el proceso.
3.
Por induccin o por represin cuando, en
contraste con los dos mecanismos anteriores, la
cantidad de enzima y, por tanto, su actividad total
en el sistema cambian. La cantidad de enzima por
clula depende de la presencia de una protena
represora que es codificada por un gen regulador y
que, en su forma activa, se une a una regin del
DNA (operador) e impide la unin de la RNA
polimerasa al promotor. De esta manera, inhibe la
sntesis de algunas enzimas (represin). Algunos
compuestos de bajo peso molecular (inductores)
pueden interactuar con el represor y cambiarlo a
una forma inactiva que no puede inhibir la sntesis
de una enzima dada esto es la induccin de su
sntesis Fundamentalmente, no se abren nuevas
vas metablicas, simplemente se liberan o se
bloquean las ya existentes, principalmente por el
principio de retroalimentacin, en el que la
regulacin se ejerce sobre la actividad de la
enzima en una forma prcticamente instantnea y
reversible.
Los sistemas multienzimticos son aquellos
en los cuales las enzimas individuales estn
organizadas de tal manera que el producto de una
reaccin sirva como sustrato de la siguiente enzima.
Aqu, la regulacin por retroalimentacin juega un
papel importante, ya que el producto de una
secuencia de reacciones controla la actividad de una
de las enzimas precedentes, generalmente la primera
de la secuencia. El control por retroalimentacin
generalmente es negativo, es decir, un aumento en la
concentracin del producto inhibe a la enzima
regulatoria. En los sistemas multienzimticos, una de
las reacciones parece ser la reaccin limitante de la
velocidad, es decir, procede a su velocidad mxima
posible. Otra manera de regular los procesos es a
travs de isoenzimas.
La regulacin al nivel de un organismo
requiere la existencia de clulas y de estructuras
diferenciadas especiales con una funcin de control
(clulas nerviosas, glndulas endcrinas). Se sabe

que estas clulas producen ciertos compuestos que
pueden ser considerados como portadores de
informacin, seales que se transportan de una parte
del organismo a otra.
La regulacin del metabolismo celular puede
llevarse a cabo por las hormonas, molculas de
diversa naturaleza qumica que pueden alcanzar a
algunas clulas del organismo quienes presentan
receptores para ellas (tejidos blanco) y afectar su
funcin, Para aumentar la eficiencia de la regulacin,
las hormonas se transportan a menudo de la clula
que las origina hasta el tejido blanco en asociacin
con una protena especfica. Se ha asumido que el
proceso bsico de la regulacin hormonal es la unin
de la hormona a su receptor, el que puede
encontrarse en la superficie celular o en el
citoplasma.
En el primer caso la hormona no penetra en
la clula sino que, en algunos casos, reacciona con
una protena asociada a la adenilato ciclasa, que a
su vez cataliza la formacin de AMP cclico a partir
de ATP. Por eso el AMP cclico se conoce a menudo
como el "segundo mensajero" porque afecta a un
gran nmero de reacciones intracelulares (por
ejemplo, la activacin de la protena cinasa A). La
fosforilacin de protenas produce cambios en la
actividad de algunas enzimas claves en el
metabolismo de los carbohidratos y de los lpidos.
Otras hormonas, al interactuar con su receptor
extracelular activan a la fosfolipasa C, produciendo
los segundos mensajeros Inositol trifosfato y
diacilglicerol, los cuales regulan la concentracin de
calcio citoplsmico, quien es una nueva seal de
regulacin metablica. Una tercera molcula que
acta como segundo mensajero intracelular es el
GMP cclico.
Existe otro mecanismo por el que actan las
hormonas cuyo receptor se encuentra en la
membrana. En este caso, la interaccin de la
hormona con el receptor, provoca que ste se
autofosforile y una vez ocurrido este evento, el
receptor fosforila a otras protenas blanco. El proceso
secuencial fosforilacin de protenas, se convierte en
la manera en la que la seal se transmite a las
molculas implicadas en la regulacin de algunas
77
vas. La hormona insulina acta mediante este

mecanismo.
Otras hormonas como las esteroidales y las
tiroideas cruzan la membrana celular y reaccionan
con una protena receptora en el citoplasma. El
complejo viaja entonces hasta el ncleo donde, a
nivel del DNA, aumenta la produccin del RNAm y

del RNAr especficos. stos controlan entonces la
sntesis de las enzimas que intervienen en la
regulacin de los procesos metablicos.
78
CONTENIDO TEMTICO
Tercera Unidad Temtica

BIOLOGA MOLECULAR
79
IV
Biologa molecular
Al finalizar esta unidad, el alumno ser capaz de identificar las diferentes molculas
informacionales de la clula y su organizacin; los mecanismos por los que fluye la
informacin gentica; los mecanismos por los que se regula la expresin gentica en los
diferentes estadios del ciclo celular, y el empleo de algunas tcnicas de manipulacin del
DNA tiles en medicina. La unidad se divide en:
A. Organizacin del genoma.

B. Flujo de la informacin gentica.
C. Mutaciones y reparacin del DNA.
D. Niveles de regulacin de la expresin gentica.
E. Virus, oncogenes y transformacin.
F. Tcnicas de manipulacin del DNA.

Al finalizar esta unidad el alumno conocer la
estructura de los cidos nucleicos y sus
diferentes niveles de organizacin.
A.1 Estructura de los cidos nucleicos.

A.1.1 Identificar
los
diversos
componentes de los cidos
nucleicos
y
sealar
las
diferencias que existen entre el
DNA y los diversos tipos de RNA.
Conocer el significado de los
patrones de metilacin del DNA
como
mecanismo
de
identificacin de su origen.
A.1.2 Reconocer
las
diferentes
conformaciones del DNA (A, B y
Z).
A.1.3 Describir
las
estructuras
primaria, secundaria y terciaria
de los cidos nucleicos y har
nfasis en lo dinmico de estas
molculas.
La informacin gentica es el conjunto de
datos que determinan la estructura y
propiedades funcionales en las clulas. La
informacin gentica es almacenada en el
ncleo de los eucariotos en estructuras
llamadas cromosomas. En el caso de los
procariotos, el cromosoma se encuentra
disperso en el citosol. El ncleo es un
orgnulo separado del citoplasma por la
membrana nuclear, que de hecho, es una
doble membrana que presenta poros con un
dimetro de 30 a 100 nm, a travs de los
cuales
las
macromolculas
pueden
intercambiarse entre el citoplasma y el
ncleo. La membrana nuclear, adems,
participa directamente en la duplicacin del
80
DNA y permite la comunicacin directa del

ncleo con el medio que lo rodea. La mayora
del material nuclear est formado por
nucleoprotenas cuyo principal componente
es el cido desoxirribonucleico (DNA); en un
ncleo en interfase las nucleoprotenas
forman filamentos de grosor variable (30 nm
en promedio). El grosor de estos filamentos
depende de la presencia o la ausencia de
protenas que interactan con la doble hlice
del DNA, mientras que su longitud depende
del peso molecular de las cadenas del DNA.
As, un cromosoma contiene olculas del
DNA de varios centmetros de longitud y
10
tiene aproximadamente 10
de peso
molecular.
Adems
del
cido
desoxirribonucleico, existe otro tipo de cido
nucleico: el RNA. Se conocen tres tipos
diferentes del RNA: los RNA mensajeros
(RNAm), que llevan la informacin para una
cadena polipeptdica; los RNA ribosomales
(RNAr), que forman parte de la estructura de
los ribosomas y que son de diferente tamao
(16S, 5S y 23S, en el caso de procariotos;
18S, 5S, 5.8S y 28S, en el caso de
eucariotos; los RNA 16S y 18S se
encuentran en la subunidad pequea de los
ribosomas, mientras que los otros se
encuentran en la subunidad grande de los
mismos) y los RNA de transferencia (RNAt),
que sirven de adaptadores en el proceso de
sntesis de protenas porque traducen el
mensaje codificado en nucletidos a un
lenguaje de aminocidos. En los organismos
eucariotos, los cidos ribonucleicos (RNA) se
sintetizan en el ncleo.
Las molculas del DNA son
polinucletidos, o sea, cadenas compuestas
de mononucletidos en las que la parte
externa de la estructura est constituida por
los esqueletos de desoxirribosa fosfato
unidos entre s por enlaces fosfodister, de
tal manera que el grupo 5'-fosfato de la
desoxirribosa de un nucletido est
esterificado con el grupo 3'-OH de la
desoxirribosa del nucletido vecino. Las

molculas de DNA contienen dos tipos de
bases nitrogenadas, dos bases pirimdicas
(timina T y citosina C) y dos bases pricas
(adenina A y guanina G). Estas bases se
1
1
unen entre el C de la desoxirribosa y el N
9
de las pirimidinas o el N de las purinas por
enlaces N-glucosdicos. La secuencia de
bases es altamente especfica para cada
molcula del DNA.
Las molculas del DNA en solucin
presentan la estructura de una doble hlice
que gira a la derecha alrededor de un eje
comn.
Las
dos
cadenas
son
complementarias,
corren
de
manera
antiparalela entre ellas. Se conectan entre s
a travs de puentes de hidrgeno que se
forman entre bases yuxtapuestas A-T (dos
puentes de hidrgeno) y C-G (tres puentes
de hidrgeno); las bases se mantienen
perpendicularmente al eje longitudinal de la
molcula del DNA. Adems, se estabilizan
por interacciones hidrofbicas entre bases
vecinas de la misma hebra.
Las bases son hidrofbicas y estn
colocadas en forma muy empaquetada y
prcticamente no entran en contacto con el
agua. El agua interacciona con la parte
hidroflica de la molcula formada por
residuos de azcar y grupos fosfato cargados
negativamente. Dependiendo del contenido
de agua del medio, las molculas de DNA
pueden existir en tres formas: A, B y Z. Las
diferentes formas difieren en el nmero de
nucletidos
por
vuelta
y
en
sus
caractersticas estructurales. Se supone que
la forma B es la predominante de las
molculas del DNA in vivo.
Aparte del DNA lineal, existen
molculas de DNA en forma de crculos
cerrados que pueden arreglarse en
estructuras similares a eslabones de una
cadena (en mitocondrias, bacterias y virus).
A.2
Organizacin del DNA.
81
A.2.1 Identificar los distintos niveles

de
organizacin
del
DNA;
reconocer al nucleosoma, la
fibra de 30 nm (solenoide), el superenrollamiento
de
300
nm
(dominios estructurales en bucle)

y el cromosoma en metafase.
A.2.2 Reconocer a las histonas y a
otras protenas no histonas como
responsables
empaquetamiento
del
del
DNA.
Reconocer la importancia de los

siguientes
dominios
proteicos:
hlice-vuelta-hlice, cremalleras
de leucina, dedos de cinc, en su
interaccin con el DNA y entre
protenas que interactan con el
DNA.
A.2.3 Relacionar los cambios en el
empaquetamiento
del
cromosoma con la funcin del

DNA. Definir el significado de
los
siguientes
conceptos:
cromatina, centrmero, telmero,

eucromatina y heterocromatina.
1.
Collins
FS,
Jegalian
KG.
Deciphering the code of the life.
Scientific
American.
1999;
281(6): 86-91.
2.
Kornberg RD, Lorch Y. Twentyfive years of the nucleosome,
fundamental particle of the
eukaryote chomosome. Cell.
1999; 98: 285-294.
Dado que el tamao del ncleo impedira la
existencia de los cromosomas en forma
extendida, el DNA se compacta formando
estructuras superenrolladas que se asocian
a protenas bsicas (histonas) para formar
superestructuras cada vez ms complejas
como son: los nucleosomas, el solenoide o
fibra de 30 nm, las fibras de 300, 700 y 1
400 nm y, finalmente, las macroestructuras
de los cromosomas mitticos en donde se

alcanza la mxima condensacin posible,
como se ve en el microscopio electrnico.
Las protenas nucleares pueden
dividirse, en general, en protenas del tipo de
las histonas y protenas no histonas. Las
histonas son protenas de peso molecular
entre 10 000 y 25 000 con un alto contenido
de aminocidos bsicos como arginina y
lisina, los cuales pueden representar de 23 a
30% de todos los aminocidos que
componen a la protena.
Las histonas pueden clasificarse en
cinco diferentes grupos segn su tamao y
su composicin de aminocidos. La funcin
de las histonas consiste en organizar los
largos filamentos de DNA en formas ms
compactas
que
permitan
su
empaquetamiento en el ncleo. Esto se lleva
a cabo a travs de las interacciones
electrostticas de las histonas con las cargas
negativas de los grupos fosfato del DNA.
Adems de las histonas existen protenas no
histonas que interactan con el DNA.
Las no histonas son una gran
variedad de protenas que difieren en
abundancia, tamao y composicin de
aminocidos. Algunas de ellas presentan
dominios que son muy comunes como los
dedos de cinc y los zippers o cremalleras de
leucina. Estas protenas son responsables de
la selectividad e inhibicin transitoria en la
transcripcin del RNA a travs de su unin a
ciertos segmentos de DNA implicados en su
regulacin o a travs de la modificacin de la
organizacin del DNA. Adems, regulan la
transcripcin de los genes de las mismas
histonas.
A.3
Organizacin del genoma.

A.3.1 Discutir el concepto de gen y
sealar el nmero aproximado
de
genes
contenidos
en
el
genoma humano.
A.3.2 Sealar las caractersticas ms
importantes de los genes nicos
82
y redundantes, de mantenimiento
y tejido especficos, estructurales
y
reguladores,
recesivos
dominantes,
ligados
al
sexo
(conocer las Leyes de Mendel).

A.3.3 Sealar
las
regiones
hiperconservadas y las regiones

hipervariables del DNA (intrones
y exones).
celular. Este DNA es de origen materno y

constituye la llamada "herencia de Eva".
La mayora de los genes para
preRNA (RNAhn) son genes nicos, pero
pueden ser transcritos miles de veces. Los
RNAm resultantes de la maduracin de estos
preRNA pueden traducirse cientos de veces,
lo que provoca la aparicin de una gran
cantidad de protena codificada en dichos
genes.
A.3.4 Conocer las diferentes clases

de DNA: genes que codifican
protenas, genes que codifican

para RNA de transferencia y
ribosomales, seudogenes, DNA
repetitivo y DNA espaciador.
Al finalizar esta subunidad el alum no

conocer los procesos involucrados
en el flujo de la inform acin gentica.
A.3.5 Sealar las caractersticas del

DNA
mito-condrial
la
B.1. Flujo de la informacin gentica.
informacin contenida en l.
B.1.1 Conocer las funciones de los

cidos nucleicos y los flujos de la
Realizacin de la prctica 11 Huella gnica

(ver pg. 168).
Cuando se analiza el contenido del DNA que
se expresa como preRNAm, RNAr, RNAt y
otros tipos de RNA, se observa que ste
constituye slo 10% del DNA total (este DNA
se conoce como DNA informativo); el
restante 90% contiene seudogenes, DNA
espaciador y DNA repetitivo. Todo esto
constituye el genoma. De todo el DNA, el
repetitivo constituye 30 a 40% y est
compuesto de secuencias de longitud
variable que pueden estar repetidas diez, mil
o ms veces. Las secuencias repetidas
pueden agruparse, como el caso del DNA
satlite asociado al centrmero del
cromosoma, o presentarse disperso, como la
secuencia ALU, de la cual existen 500 000
copias dispersas en todos los cromosomas y
que est posiblemente relacionada con los
orgenes de la duplicacin.
Del DNA celular, 0.1% es mitocondrial. En l
hay 13 genes que codifican para protenas
de gran importancia para la bioenergtica
informacin
gentica
(dogma
central de la Biologa Molecular).

B.2 Sntesis del DNA (duplicacin).
B.2.1 Describir el ciclo celular con sus
fases y conocer las diferentes
molculas que se generan en
cada una de stas.
B.2.2 Examinar qu es la duplicacin
del DNA y en qu fase del ciclo
celular ocurre.
B.2.3 Identificar
los
sucesos
ms
importantes catalizados por el

replicosoma.
1.
2-
Hbscher U. Eukaryotic DNA
polymerases a growing family.
TIBS. 2000; 25 (3): 143-147.
Collins
FS,
Jegalian
KG.
Deciphering the code of the life.
Scientific American. 1999; 281
(6): 86-91.
83
Las molculas del DNA son

sintetizadas a partir de desoxirribonucletidos
en presencia de un molde de DNA y de
varios tipos de enzimas, entre las que se
encuentran dos DNA polimerasas, con
diferente funcin en el proceso: una RNA
polimerasa (primasa), una topoisomerasa de
tipo II denominada DNA girasa y una serie de
protenas que catalizan la separacin de las
dos hebras del DNA, entre las que destacan
las helicasas.
Las DNA polimerasas son enzimas
que pueden unir desoxirribonucletidos slo
en la direccin 5
3, aunque tambin
tienen actividad de exonucleasas en la
direccin
5
3y en la direccin
3
5. Esta capacidad de polimerizacin
slo en la direccin 5
3 se conoce
como direccionalidad de la duplicacin y es la
responsable de algunas peculiaridades del
proceso.
Dado que las DNA polimerasas no
pueden iniciar la sntesis del DNA a menos
que posean un extremo 3OH terminal al que
puedan aadir el desoxirribonucletido
entrante, se hace necesaria la actividad de
una RNA polimerasa (primasa) que genere
dicho extremo 3 OH terminal. Tomando
como molde una de las hebras, la primasa
cataliza la formacin de un pequeo
segmento (5-20 ribonucletidos) de RNA que
sirve como cebador" para la sntesis de la
nueva cadena de DNA por la DNA
polimerasa III. Las cadenas formadas de
novo son antiparalelas a la cadena que les
sirve de molde. Despus de la sustitucin del
"cebador" del RNA a cargo de la DNA
polimerasa I, los segmentos de la cadena
formada de DNA son unidos por la DNA
ligasa. El papel de la DNA polimerasa I,
adems de la funcin de sustitucin de los
"cebadores" del RNA, se encarga de la
reparacin de las hebras del DNA.
Diversos
experimentos
han
demostrado que una de las cadenas del DNA
resultante provienen del progenitor y la otra
es la que se sintetiz de novo, la cual indica

que
la
duplicacin
del
DNA
es
semiconservativa. Este mecanismo permite
la transmisin de la informacin gentica de
una generacin a la siguiente.
A consecuencia de la direccionalidad
de la actividad de la DNA polimerasa III se
descubri que hay una diferencia en la
velocidad de sntesis entre las dos cadenas
del DNA, encontrndose que hay una cadena
lder y una retardada. Esto permiti
determinar que la duplicacin de la cadena
retardada se realiza en forma discontinua,
apareciendo una serie de secciones
pequeas de DNA (entre 100 y 1 000 pares
de bases), conocidas como fragmentos de
Okazaki, y que son posteriormente unidas
por la DNA ligasa para formar la hebra
completa.
Durante su vida, las clulas realizan
diversas funciones, a veces se dedican
principalmente a crecer, otras a dividir su
material gentico, o a repartirlo en lo que
sern, dos nuevas clulas hijas. Estas
diferentes etapas constituyen lo que se
conoce como el ciclo celular, integrado por 4
fases bien definidas: M (mitosis), G1 (unin
1), S (sntesis)
y G2 (unin 2).
Morfolgicamente slo se han definido dos
etapas de divisin e interfase, en esta ltima
estn incluidas G1, S y G2.
Durante la etapa G1, la clula crece,
lo que implica un gran gasto energtico y
sntesis de sus componentes. El paso a la
etapa S, requiere de seales precisas para
que se inicie la sntesis del DNA, de tal forma
que, al terminar esta etapa, la clula tiene ya
un contenido equivalente al doble de DNA.
Para poder distribuir este DNA entre dos
clulas hijas y dividirse (fase M), la clula
pasa por una etapa de preparacin para la
mitosis llamada G2. Numerosos genes se
prenden y apagan durante cada etapa del
ciclo celular en forma especfica y altamente
precisa.
84
Cuando una clula se diferencia,

como es el caso de las neuronas, al llegar a
la etapa G1, la clula toma un camino
alternativo a S, dejando de dividirse para
estacionarse en una etapa llamada G0.
Durante esta etapa, un gran nmero de
genes tejido-especfico se prenden dando a
la clula la identidad de acuerdo a la estirpe
a la cual pertenece.
B.3
Transcripcin.
B.3.1 Identificar en qu consiste, en
qu compartimiento subcelular y
en qu fase del ciclo celular se
lleva a cabo la transcripcin.
B.3.2 Identificar
las
enzimas,
sustratos y los sucesos ms
importantes del proceso de
transcripcin.
B.3.3 Describir en qu consisten los
procesos
de
modificacin
postranscripcional que sufren el
RNAm, el RNAt y el RNAr y har
nfasis en el papel de las
ribozimas.
B.3.4 Revisar el efecto de la
rifamicina, de la actinomicina D y
de la -amanitina sobre la
transcripcin.
Lectura recomendada
1Proudfoot
N.
Connecting
transcription to messenger RNA
processing. TIBS 2000; 25 (6):
290-293.
Todas las molculas del RNA son
sintetizadas
en
el
ncleo
mediante
transcripcin de la informacin gentica
codificada en la secuencia de las bases del
DNA mediante la accin de una RNA
polimerasa dependiente de DNA.
La RNA polimerasa dependiente del
DNA es una enzima que est compuesta de
6 subunidades: 2, , , y una protena
acdica designada como que se requiere
para la identificacin y unin al promotor, es

decir, el sitio donde debe iniciarse la
transcripcin. Esta enzima utiliza un molde
de DNA para sintetizar una cadena de RNA,
la cual crece en la direccin 5
3' hasta
llegar a una seal de terminacin en el DNA,
lo que provoca la entrada de la protena rho
la cual separa la RNA polimerasa de la
cadena molde del DNA.
En el caso de los organismos
eucariotos, sus RNA polimerasas son
diferentes,
aunque
el
proceso
es
bsicamente el mismo. Una de las
diferencias en la transcripcin entre
procariotos y eucariotos es que los RNAm de
los procariotos suelen ser policistrnicos, es
decir, llevan la informacin para ms de una
cadena polipeptdica, mientras que los de
eucariotos son monocistrnicos.
Los productos de la transcripcin en
eucariotos sufren, a su vez, una serie de
modificaciones postranscripcionales. Los
RNA mensajeros adquieren en su extremo 5
terminal un "casquete", es decir, un
nucletido poco comn con un enlace
especial (7 metilguanosina unida por un
enlace 5
5) que lo protege de la
accin de las nucleasas. Asimismo,
adquieren una cola de poli A en el extremo 3
terminal y pierden algunas secuencias que
no llevan informacin para ninguna cadena
polipeptdica (intrones). El producto de este
proceso de edicin es el que ser ledo en
los ribosomas durante la traduccin o sntesis
de protenas.
Los RNA ribosomales se sintetizan
principalmente en el nucleolo, se asocian a
las
protenas
ribosomales
y
las
nucleoprotenas formadas son transportadas
al citoplasma donde llevan a cabo su funcin.
Los RNA de transferencia tambin
son editados, es decir, se modifican hasta
adquirir la estructura funcional. Pierden
secuencias o algunas de sus bases sufren
modificaciones (por ejemplo, se reducen para
producir dihidrouridina, se metilan para
85
producir ribotimina, etctera) lo que les

confiere resistencia a las nucleasas.
proceso participan los tres diferentes tipos de

RNA (el mensajero, el ribosomal y el de
transferencia);
uno
contribuye,
de
manera especfica, a la obtencin de una
B.4 Traduccin.
B.4.1 Proceso de la traduccin.
B.4.1.1 Describir en qu consiste
y en qu compartimiento
subcelular se realiza la
traduccin,
tanto
de
protenas
intracelulares,
como
protenas
de
de
secrecin.
B.4.1.2 Conocer el alfabeto del
cdigo
gentico
concepto
de
codn
el
y
anticodn.
B.4.1.3 Identificar las molculas
que
intervienen
en
el
proceso de traduccin.
B.4.1.4 Conocer las fases del
proceso y la funcin que
desempea el ribosoma
en el mismo.
B.4.1.5 Conocer el efecto de los
siguientes
sobre
la
protenas:
inhibidores
sntesis
de
tetraciclinas,
estreptomicina,
cloranfenicol, eritromicina,
puromicina,
dehidroemetina,
cicloheximida y la toxina
diftrica.
La sntesis de protenas es un proceso
complejo en el que intervienen de manera
coordinada ms de cien macromolculas
para unir los residuos de los 20 aminocidos
en una secuencia codificada en el RNA
mensajero.
cada
Asimismo,
la
sntesis
de
protenas requiere de grandes cantidades de

energa y se regula rigurosamente. En este
protena funcional.
El lenguaje codificado en nucletidos
en los cidos nucleicos es traducido a un
lenguaje de aminocidos mediante una serie
de RNAs de transferencia (RNAt) cargados
cada uno con un aminocido determinado, el
que es especificado por el asa del anticodn,
segn un cdigo de lectura: el cdigo
gentico. Este cdigo presenta cuatro
caractersticas:
1. Est basado en tripletas, es decir, una
secuencia de 3 nucletidos determina un
aminocido.
2. El cdigo no se sobrepone y no tiene
espacios, es decir, que la informacin se
almacena en tripletas de bases seguidas.
3. El cdigo es universal. Es el mismo para
todos los organismos.
4. El cdigo es degenerado. Esto significa
que ms de una tripleta puede codificar
para un aminocido. Sin embargo, los
primeros dos nucletidos de una tripleta
son generalmente los mismos para un
aminocido determinado.
El proceso de la sntesis de
protenas puede dividirse en diferentes
etapas:
a) La activacin de los aminocidos, es
decir, la formacin de los aminoacil RNAt
por sintetasas especficas.
b) La iniciacin es la primera fase del
proceso; en ella se requiere la presencia
de tres protenas conocidas como
factores de iniciacin necesarios para
disociar
los
ribosomas
en
sus
subunidades y para acarrear el aminoacil
RNAt inicial (generalmente metionil RNAt
o su anlogo formilado). Adems, se
necesita la asociacin del RNA
mensajero con la seal de inicio de la
traduccin (generalmente la tripleta
AUG) a la subunidad pequea del
86
ribosoma y del aminoacil RNAt inicial al

sitio peptidilo (P) del ribosoma. Todo este
complejo de protenas, de RNAs y de la
subunidad
pequea
del ribosoma
constituye el complejo de iniciacin, al
que se une la subunidad grande para
formar el ribosoma activo.
c) El
alargamiento
de
la
cadena
polipeptdica se realiza a partir de este
momento por la llegada del siguiente
aminoacil RNAt al sitio aminoacilo (A) del
ribosoma con la ayuda de un factor de
alargamiento asociado a GTP, que lo
coloca en el sitio adecuado con gasto de
un enlace de alta energa. Enseguida se
forma el enlace peptdico por la accin
de la peptidil transferasa que se
encuentra asociada a la subunidad
grande del ribosoma y el movimiento del
ribosoma sobre la molcula de RNAm
para colocar al nuevo peptidil RNAt en el
sitio P y dejar libre el sitio A del ribosoma
y continuar el alargamiento de la cadena.
El movimiento del ribosoma se realiza
por la accin de otro factor de
alargamiento (factor G) con hidrlisis de
una nueva molcula de GTP.
d) La terminacin se realiza cuando los
factores de terminacin (factores R)
encuentran una tripleta sin sentido (UAA,
UGA, UAG), lo que provoca la activacin
de la peptidil transferasa que hidroliza el
enlace peptidil RNAt y libera a la cadena
polipeptdica. El RNAt y el RNAm se
liberan al igual que el ribosoma, que
ahora puede volver a disociarse para
iniciar un nuevo ciclo de traduccin. El
polipptido
liberado
adquiere
sus
estructuras
secundaria
y
terciaria
correspondientes.
Esta descripcin de la sntesis de
protenas
corresponde
protenas
que
permanecern intracelularmente. En el caso

de los organismos eucariticos, las protenas
que sern excretadas, o que forman parte de
la
membrana
plasmtica,
del
retculo
endoplsmico, del aparato de Golgi o de los

lisosomas,
se
forman
en
ribosomas
firmemente unidos al retculo endoplsmico.

Conforme el polipptido se va sintetizando,
entra en cisternas endoplsmicas y es
transportado al aparato de Golgi donde se
concentra y se modifica, por ejemplo, con
adicin
de
azcares.
Ms
tarde
estas
protenas son englobadas en vesculas que

viajan a la superficie celular y se fusionan
con la membrana para verter su contenido al
espacio extracelular. Las protenas cuyo
destino son los organelos intracelulares se
sintetizan en retculo endoplsmico y se
transportan a su destino mediante una seal
interna que es reconocida en dicho organelo.
B.4.2 Modificacin
postraduccional
degradacin de protenas.
B.4.2.1 Mencionar
en
qu
consisten
las
modificaciones
postraduccionales:
plegamiento,
modificaciones
lentes
covareversibles
(fosforilacin, acetilacin y
ADP
ribosilacin)
irreversibles
(glucosilacin,
hidroxilacin,
protelisis
controlada, unin a grupos

prostticos) y cul es su
posible funcin.
B.4.2.2 Comprender el concepto
de vida media de una
protena.
B.4.2.3 Describir cules son los
procesos lisosomal y no
lisosomal,
que
se
mediante
los
degradan
las
protenas.
87
Lectura recomendada
1.
Goldberg AL. The cellular
chamber of pomm. Scientific
American. 2001; 284 (1): 56-61.
se les realice un corte de tipo proteoltico

para que adquieran su forma activa, como es
el caso de los zimgenos y las prohormonas.
El corte de la preprotena hacia su forma
Las modificaciones postraduccionales de las

protenas
pueden
incluir
desde
el
plegamiento de los polipptidos con la ayuda
de protenas como las chaperonas y
chaperoninas, cambios en el extremo aminoterminal y en aminocidos especficos,
procesamiento proteoltico,
formacin de
puentes disulfuro y otras como la unin de
carbohidratos, metales, grupos prostticos,
etctera.
Una de las modificaciones ms
comunes en el extremo amino terminal que
se da en las clulas eucariticas es el de
remover los residuos de metionina, con las
que se inicia la sntesis de la misma; en las
clulas bacterianas se remueve la formilacin
presente en la metionina y, en algunos
casos, sta tambin es recortada. Adems
de este tipo de modificaciones que ocurren
en la secuencia del extremo amino terminal
de una protena, los aminocidos presentes
en la protena tambin se pueden modificar;
por ejemplo, los aminocidos serina, treonina
y tirosina pueden unir grupos fosfatos a sus
cadenas laterales, es decir, son susceptibles
de ser fosforilados en sus cadenas laterales.
Este tipo de transformaciones se usa por la
clula para comunicar cambios en el medio
ambiente
que
tienen
como
respuesta
modificaciones en la regulacin de vas

metablicas. Algunos aminocidos, como la
lisina,
puede
metilarse,
otros
como
la
cistena, aadir grupos isoprenlicos u otros

lpidos a su cadena lateral, lo cual facilita la
unin de la protena con la membrana. Los
residuos de cistena pueden formar de
manera
especfica
puentes
disulfuro.
Finalmente, muchas de las protenas son

sintetizadas de tal forma que requieren que
biolgicamente activa se realiza por una

proteasa especfica y se encuentra regulado
por los diferentes eventos celulares.
Qu determina la estabilidad de las
protenas?
Todas las clulas contienen gran cantidad
de proteasas con diferente especificidad.
Estas las podemos dividir en tres grupos
generales:
1. Algunas proteasas cortan a la protena en
sitios especficos dando origen a protenas
maduras que son de menor tamao que su
protena precursora. Estas proteasas
participan en diferentes procesos que
incluyen el corte de la secuencia seal de
una protena de exportacin y el
procesamiento de protenas citoslicas
para dar origen a sus formas maduras.
2. La internalizacion de protenas de
membrana
(algunos
receptores)
en
respuesta a la unin del ligando genera
como primer evento la unin de clatrina
alrededor de la membrana; sta se
invagina al citoplasma y forma vesculas
rodeadas de clatrina . El destino de estas
vesculas son los endosomas temprano,
tardo y finalmente el lisosoma que es el
responsable de la degradacin de
macromolculas por medio de enzimas
hidrolticas.
3. Finalmente, la vida media de las protenas
vara entre algunos segundos, das y
excepcionalmente toda la vida (cristalino).
Para ser degradadas, las protenas son
marcadas para ser reconocidas por el
proteosoma, el cual es un complejo de alto
peso molecular que se encarga de la
degradacin de protenas citoslicas. Los
sustratos
de
este
sistema
son
principalmente
protenas
que
estn
alteradas en su plegamiento, por lo que el
88
proteosoma acta como un sistema de

control
de
calidad.
Tambin
est
involucrado en la degradacin de protenas
como un mecanismo de regulacin, por
ejemplo en el caso de las ciclinas para que
se complete el ciclo celular. El primer paso
en este sistema es el marcar a la protena
alterada (protena blanco) para que sea
degradada. La marca es una pequea
protena llamada ubiquitina, la cual se
une covalentemente a la protena blanco.
Son tres los componentes del sistema de
ubiquitinacin:
a) E1 enzima activadora de la ubiquitina,
dependiente de ATP
b) E2 enzima que conjuga a la ubiquitina
con la protena blanco
c) E3 ligasa de ubiquitina, selecciona a la
protena blanco
d) El complejo multiproteico del proteosoma
(20S) degrada rpidamente a las
protenas unidas a la ubiquitina. Este
complejo
est
formado
por
14
subunidades apiladas una sobre otra y
que son las responsables de la actividad
proteoltica.
Para que la protena sea degradada
intrones, exones y genes estructurales

y dar ejemplos: talasemias, anemia
de clulas falciformes, etctera.
C.3
Identificar
los
mecanismos
que
existen para la reparacin del DNA:

uvr, fotoliasa, excinucleasa, sistema
SOS, entre otros.
Durante
la
duplicacin
puede
ocurrir
espontneamente un nmero pequeo de

errores en el orden o tipo de las bases
nitrogenadas. La probabilidad de uno de
estos errores puede incrementarse bajo la
influencia de diferentes agentes mutgenos
(qumicos o fsicos). Estos cambios en la
secuencia de bases nitrogenadas en el DNA
se conocen con el nombre de mutaciones.
Existen varios tipos de mutaciones:
las
que
cambian
una
base
por
otra
(sustitucin) y pueden ser de una base prica

por otra base prica o de una pirimidina por
otra pirimidina; lo que se conoce como
transicin. Si el cambio es de una purina por
una pirimidina, o viceversa, la mutacin se
conoce como transversin. Existe otro tipo de
necesita tener varias ubiquitinas unidas.
mutaciones en las que hay un cambio de

marco de lectura para la traduccin. Hay dos
C. Mutaciones y reparacin del dna
tipos de mutaciones de este tipo: la insercin,

alumno
en la que la entrada de uno o dos nucletidos
conocer los diferentes cambios que puede
modifica el marco en que se leer el mensaje
sufrir el DNA y sus consecuencias. Conocer
por los ribosomas, y la supresin (delecin),
tambin los mecanismos de reparacin del
en la que la prdida de uno o dos nucletidos
DNA.
provoca el mismo efecto.
C.1
puntuales, en las que slo hay cambio de
Al
finalizar
esta
subunidad
el
En
Conocer
los
diferentes
tipos
de
UV,
cambiada casi imperceptiblemente y las
acridina,
mutantes pueden sobrevivir. Cuando cambia
naranja
de
bromuro de etidio, 5 bromouracilo.

Efecto de mutaciones en promotores,
operadores,
genes
reguladores,
un
mayor
informacin
mutaciones
agentes
radiaciones,
C.2
las
una
luz
la
caso de
mutaciones y la accin de algunos

mutgenos:
base,
el
nmero
de
gentica
bases,
es
ocurren
alteraciones importantes en la secuencia de

un gen, lo que puede ser incompatible con la
existencia de esa mutante.
89
secuencias
especiales,
vida
media del RNAm.
D.3.5 Regulacin del proceso de
sntesis proteica.
Con el fin de sobrevivir, la clula tiene

mecanismos para reparar el DNA daado. En
ese
sentido
la
actividad
exonucleasa
5 de las DNA polimerasas, la de los
productos de algunos genes, como los uvr

ABC, los de la fotoliasa y la de la uracilo-DNA
glucosidasa
desempean
un
D.4
Revisar un modelo de regulacin en

procariotos y otro en eucariotos
(opern de lactosa y regulacin de la
expresin de los genes de las
inmunoglobulinas).
D.5
Conocer la relacin que existe entre

el ciclo celular, el tipo de clula y los
procesos antes descritos, y el proceso
de diferenciacin celular.
papel
importante.
D. Niveles de regulacin de la
expresin gentica
Al
finalizar
esta
subunidad
el
alumno
conocer los diferentes niveles de regulacin

gentica (en procariotos y en eucariotos), as
como los diversos mecanismos implicados en
ella.
D.1
1.
Describir los niveles de posible control

de la expresin de la informacin
gentica
(transcripcionales,
traduccionales,
postranscripcionales
postraduccionales).
D.2
2.
modificaciones
3.
Conocer cmo la informacin que el

organismo recibe del medio exterior se
4.
transforma en seales que se traducen

en diferentes acciones.
D.3
Conocer los posibles mecanismos

que operan en los diferentes niveles de
regulacin:
D.3.1 Cambios en la molcula del
DNA: prdida amplificacin y
rearreglo de genes.
D.3.2 Control de la transcripcin en
eucariotos (a nivel del rearreglo
de la cromatina, de la iniciacin y
a nivel de los mecanismos de
accin
de
los
receptores
intracelulares).
D.3.3 Control de modificaciones del
transcrito primario.
D.3.4 Control de la traduccin por la
presencia del casquete, de
5.
Etchergary P. Rhytmic histone

acetylation
underlies
transcription in the mammalian
circadian clock. Nature. 2003;
421: 177-182.
Pombo A. Cellular genomics:
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TIBS. 2003; 28(4): 215-220.
Las bacterias son capaces de controlar la

expresin de las enzimas necesarias para
utilizar nutrientes del medio, o bien, aquellas
enzimas requeridas para la sntesis de
biomolculas que intervienen en su
funcionamiento
y
proliferacin.
Estos
cambios de expresin ocurren con gran
rapidez y precisin y fueron el primer ejemplo
claro de la manera en que se regula la
expresin gnica. Cuando una enzima se
expresa en respuesta a una necesidad
bacteriana se habla de un proceso de
90
induccin gnica, mientras que, cuando su

expresin se apaga, se habla de represin
gnica.
Los cambios en la expresin de un
gen estn controlados por la interaccin de
su regin reguladora con diversas protenas
nucleares que favorecen o interfieren con la
unin de la RNA polimerasa al sitio de
iniciacin de la transcripcin. El ejemplo ms
sencillo de esta regulacin es la manera
como se controla la expresin de un conjunto
de genes, llamado opern de lactosa, cuya
expresin depende de la presencia de
lactosa en el medio; normalmente, la
expresin de este opern se encuentra
reprimida. El gen regulador codifica para una
protena que se une con gran afinidad a la
regin del DNA que controla la expresin del
opern y que previene que la RNA
polimerasa pueda iniciar la transcripcin. Por
su funcin, a esta protena se le denomina el
represor del opern de lactosa. La presencia
de lactosa, en ausencia de otros nutrientes,
favorece que una pequea porcin de dicha
lactosa sea transformada enzimticamente a
un metabolito que puede unirse al represor
con gran afinidad; el resultado de esta unin
es una inactivacin alostrica del represor. A
este metabolito de la lactosa se le denomina
inductor del opern ya que, al disminuir la
cantidad de represor funcional, favorece de
manera indirecta la iniciacin de la
transcripcin de los otros genes del opern.
Un nivel ms de control queda de manifiesto
cuando las bacterias reprimen la expresin
del opern de lactosa cuando en el medio
aparecen otros nutrientes como la glucosa. A
este efecto represor de la glucosa se le
conoce como represin catablica y ocurre
gracias a que la presencia de glucosa reduce
los niveles intracelulares de AMP cclico
(cAMP). Normalmente, el cAMP se une a una
protena denominada protena receptora de
cAMP (CRP, tambin denominada CAP) y
forma un complejo que se une a la regin
reguladora de los operones y favorece su
transcripcin. Por tanto, cuando la glucosa

reduce los niveles de cAMP, la protena CRP
pierde su afinidad por la regin reguladora
del opern y se interrumpe la expresin.
Una forma alternativa de regular la
expresin gnica es acoplar la transcripcin a
la traduccin lo cual favorece la terminacin
temprana de la transcripcin. Este proceso
se conoce como atenuacin y el opern de
triptofano constituye un buen ejemplo.
Cuando hay triptofano en el medio se
favorece la terminacin de la transcripcin y
el opern nunca logra expresarse; sin
embargo, cuando el triptofano se agota, la
transcripcin contina y se expresan las
enzimas necesarias para su sntesis. La
expresin de otros operones necesarios para
la sntesis de aminocidos, como histidina,
fenilalanina, leucina, treonina e isoleucina, es
controlada por atenuacin.
Mientras que en las bacterias
cualquier individuo puede expresar todos sus
genes, en las clulas animales esto no
siempre es cierto. Por ejemplo, todas las
clulas del cuerpo humano poseen la misma
informacin
gentica
codificada
5
aproximadamente en 10 genes distintos; sin
embargo, no hay ningn tipo celular que
exprese todos estos genes simultneamente.
De hecho, cualquier clula expresa slo un
nmero reducido de estos genes, la gran
mayora de los cuales codifica para protenas
necesarias para las funciones generales de
cualquier tipo celular. La expresin de estos
genes es lo que hace similares a los distintos
tipos celulares; un ejemplo claro de este tipo
de genes lo constituye los que codifican para
las enzimas glucolticas, protenas que se
expresan de manera constitutiva como
resultado de que las regiones reguladoras de
estos genes responden a factores de
transcripcin presentes en todas las clulas.
Los transcritos primarios son editados
inmediatamente para dar origen al RNA
mensajero maduro que es traducido por
ribosomas libres para sintetizar un pptido
91
que, al adquirir su conformacin nativa,

posee actividad enzimtica. As como la
expresin de los genes constitutivos confiere
similitudes a los distintos tipos celulares, la
expresin de genes tejido especfico es la
que le da a cada tipo celular sus
caractersticas. Los hepatocitos, por ejemplo,
expresan albmina, pero no miosina, como lo
hacen las clulas musculares, ni tampoco
expresan las enzimas que permiten la
sntesis de neurotransmisores como lo hacen
las neuronas. La expresin de estos genes
tejido-especfico est controlada por sus
regiones reguladoras las cuales requieren de
factores de transcripcin especiales que
aparecen en dos etapas. En la primera, la
expresin de estos factores ocurre en
respuesta a estmulos hormonales o de
factores
de
crecimiento
durante
la
diferenciacin celular. En la segunda, la
presencia de estos factores de transcripcin
se hace independiente del estmulo hormonal
y de factores de crecimiento o diferenciacin
y se convierte en protenas que se expresan
de manera permanente en la clula
diferenciada. Muchas de las hormonas que
activan este proceso requieren de receptores
de membrana y sistemas de transduccin
que llevan la seal al ncleo a travs del
citoplasma. Otros, como las hormonas
esteroides, se unen a receptores nucleares
que sirven como factores de transcripcin.
En algunas ocasiones la regulacin
implica un cambio de la secuencia del DNA,
como se ejemplifica a continuacin. En el
humano, como en todos los organismos
diploides, la mayora de los genes est
presente en dos copias, una de origen
paterno y una de origen materno. Algunas
veces, el origen paterno o materno del gen
determina que este gen pueda ser transcrito
o no, fenmeno al que se le denomina
impronta gentica. El resultado de esta
inactivacin es que la expresin del gen se
reduce a la mitad, ya que slo una de las dos
copias es activa, como es el caso de los
genes localizados en el cromosoma X. En

contraposicin, existen genes que pueden
estar presentes en un mayor nmero de
copias como resultado de una amplificacin;
tal es el caso de los genes que codifican para
los RNA ribosomales, de los cuales las
clulas requieren muchas copias. En genes
que codifican para los anticuerpos en clulas
B y los receptores de las clulas T ocurre un
rearreglo de las secuencias primarias del
DNA, lo que es responsable de la gran
diversidad de antgenos naturales y
artificiales que pueden ser reconocidos por el
sistema inmune. Este proceso es controlado
por los distintos factores que regulan la
maduracin de las clulas B y las clulas T.
Adems de la capacidad de
transcribir o no ciertos genes con mayor o
menor eficiencia, existen otros niveles en los
que se puede regular la funcin del producto
final por medio de la modulacin tanto en
cantidad como en calidad. El primer nivel de
regulacin se refiere al control de la vida
media de los RNA mensajeros determinada
por la existencia de secuencias en los
extremos no codificantes que regulan su
velocidad de degradacin. Durante el
proceso de maduracin de los mensajeros,
en el cual se eliminan intrones, tambin
pueden eliminarse uno o varios exones y dar
lugar a una mayor diversidad de protenas; a
este proceso se le denomina edicin
alternativa. Una vez que el mensajero ha
madurado, existen varios mecanismos que
pueden aumentar o disminuir la eficiencia
con la que los ribosomas traducen la
informacin a un pptido.
En muchas
ocasiones la protena tiene un destino final
diferente al citoplasma, el cual puede ser
mitocondrial, lisosomal, de membrana celular
o una protena de secrecin; esta informacin
se encuentra codificada en el extremo amino
terminal del pptido naciente y puede
constituir un punto ms de control. El ltimo
punto de regulacin consiste en aumentar o
disminuir la velocidad de degradacin de las
92
protenas por el sistema de la ubiquitina; este

mecanismo
nuevamente
contribuye
a
controlar la cantidad del producto gnico. A
pesar de la diversidad de los niveles de
regulacin de la expresin gnica, los
mecanismos ms comunes son los que
modulan la eficiencia de la transcripcin y los
que modulan la actividad biolgica por
modificaciones postraduccionales, entre los
que destacan la fosforilacin y la
desfosforilacin.
Hemos mencionado los rasgos ms
sobresalientes de la manera en que las
clulas regulan la expresin gnica, pero an
es poco lo que se sabe con respecto a cmo
se integran e interaccionan. Por ejemplo, an
resulta difcil explicar cmo distintos factores
de crecimiento, con diferentes receptores de
membrana y sistemas de transduccin,
estimulan a los mismos factores de
transcripcin, pero conducen a respuestas
celulares diversas. El gran nmero de niveles
a los cuales se puede regular la expresin
gnica y las mltiples combinaciones y
secuencias en las que pueden presentarse
sugiere una gran complejidad. El resultado
final de esta complejidad determina al tipo de
genes que participan y la secuencia en la que
se expresan para dar origen a los diferentes
tipos celulares.
E. Virus, oncogenes y
transformacin
Al finalizar esta subunidad el alumno
conocer la estructura general de los virus,
su clasificacin y su posible implicacin en la
transformacin celular. Conocer la relacin
entre la funcin de los productos de los
oncogenes y la transformacin celular.
E.1
Describir la estructura general de los

virus.
E.2
Conocer la clasificacin de los virus

con base en su cido nucleico y dar
ejemplos de cada uno.
E.3
Definir los conceptos de oncogn y

protooncogn.
E.4
Revisar algunos mecanismos por los

cuales un protooncogn se transforma
en oncogn, como:
E.4.1 Insercin de un promotor o de un
intensificador (amplificador).
E.4.2 Mutacin puntual.
E.4.3 Traslocaciones cromosmicas.
E.4.4 Amplificacin.
E.5
Estudiar el producto de algunos

oncogenes como son: src, sis, erb B,
ras y myc y establecer la relacin
entre la funcin de dichos productos y
la transformacin celular.
Los virus son partculas subcelulares

constituidas por cidos nucleicos en forma de
DNA o de RNA de cadena doble o sencilla,
protenas y, en ocasiones, membranas
lipdicas. Su genoma compacto est
constituido por un reducido nmero de genes
que codifican para protenas estructurales de
la cpside, enzimas de duplicacin, as como
enzimas y secuencias de DNA que permiten
la insercin del genoma viral al genoma de la
clula husped, entre otros.
Los virus son incapaces de
multiplicarse de manera autnoma, pero
pueden hacerlo cuando se encuentran en el
interior de una clula. En la mayora de los
casos la infeccin viral conduce a la
multiplicacin viral a expensas de la clula
infectada. El dao ocasionado al destruir las
clulas es responsable de una gran variedad
de enfermedades de menor gravedad, como
la influenza, o enfermedades ms serias,
como la viruela, e incluso enfermedades
mortales,
como
el
sndrome
de
inmunodeficiencia adquirida. En algunos
casos la infeccin viral se asocia a una
mayor frecuencia en el desarrollo de tumores
y cncer, como es el caso del virus del
papiloma y el cncer cervicouterino. Es
93
interesante notar que un tipo de virus slo

puede infectar a un restringido tipo de clulas
y a ninguna otra, por ejemplo, el virus del
herpes infecta las clulas de los nervios
perifricos. A este fenmeno de especificidad
de infeccin se le denomina tropismo y se
debe a que el virus y su clula blanco
interactan por la unin de una protena de la
envoltura viral con un antgeno presente en la
membrana celular.
Las enfermedades por virus son
difciles de tratar debido a que, fuera del
momento en que las partculas virales viajan
hasta sus clulas blanco y penetran en su
interior, no pueden ser neutralizadas por
anticuerpos.
El problema del reconocimiento de
antgenos virales por anticuerpos se dificulta
si uno considera que en poco tiempo emerge
un gran nmero de partculas virales de una
clula infectada y que el tiempo en que se
logran ttulos protectores de anticuerpos es
relativamente largo. A estas dificultades se
suma una caracterstica gentica de los virus
que les permite tolerar cambios de
secuencias o incluso eliminar o adquirir
nuevos genes a lo largo de su multiplicacin,
lo que les confiere una gran diversidad
gentica. Estos cambios en secuencias son
particularmente nocivos cuando ocurren en
regiones del DNA que codifican para los
antgenos que son reconocidos por
anticuerpos.
Las protenas virales que se
seleccionan son aquellas que continan
teniendo la funcin requerida por el virus,
pero que no pueden ser reconocidas por los
anticuerpos. La velocidad con la que estos
cambios se propagan a toda la poblacin
viral es sorprendentemente rpida y
previenen el uso eficaz de vacunas contra
varias enfermedades virales. Adems de los
anticuerpos, el organismo produce factores
proteicos solubles llamados interferones que
aceleran la muerte de la clula infectada e
interrumpen la expresin de protenas virales.
El que los virus se aslen del sistema inmune,

su ciclo de vida y su gran diversidad
gentica, son responsables de que no haya
medidas eficaces para su eliminacin y son
la causa de su gran impacto, tanto en la
salud pblica, como en la economa
agropecuaria y agrcola.
En su mayora, los virus son capaces
de activar la maquinaria de sntesis del DNA
de la clula infectada, evento ligado al ciclo
celular y al control mismo de la proliferacin;
al interferir con este aspecto de la vida
celular los virus aseguran su multiplicacin.
No es sorprendente entonces que en
ocasiones los virus hayan incorporado a su
reducido genoma versiones de genes
celulares que controlan la proliferacin
celular. Un ejemplo de este tipo de genes es
ras, que codifica para una protena G
monomrica que transduce la seal
proliferativa de diversos factores de
crecimiento. La versin celular de ras (c-ras)
posee homlogos virales (v-ras), la mayora
de los cuales presenta alteraciones que dan
lugar a una protena permanentemente activa
y que no est sujeta a la regulacin celular.
As, mientras que c-ras slo entra en funcin
cuando los receptores o factores de
crecimiento
son
activados,
v-ras
constantemente obliga a la clula a proliferar.
Cuando los virus, en lugar de lisar a una
clula, integran su genoma al material
gentico de sta, los genes virales pueden
expresarse de manera constitutiva; si esto
ocurre con genes como v-ras, se favorece
una proliferacin celular descontrolada y se
dice que la clula ha sido transformada. Hay
protenas virales que pueden interferir con la
proliferacin celular, como el antgeno grande
T del adenovirus o las protenas E7 del virus
del papiloma.
No slo la integracin viral puede dar
origen a la expresin de genes que
promueven la proliferacin celular, tambin la
aparicin de mutaciones espontneas puede
dar origen a versiones de c-ras que al igual
94
que v-ras estimulan continuamente la

proliferacin. A estas versiones mutadas se
les denomina oncogenes, ya que estn
asociadas al desarrollo de neoplasias,
tumores y diversos tipos de cncer. A los
genes celulares que al ser mutados pueden
dar origen a oncogenes se les denomina
protooncogenes; a stos pertenece una larga
lista de receptores y protenas de
transduccin de diferentes factores de
crecimiento y protenas que controlan el ciclo
celular. Mientras que los protooncogenes son
todos parte de las seales que activan la
proliferacin, tambin existen genes cuyos
productos sirven para frenarla. A estos frenos
de la proliferacin se les denomina genes
supresores de tumores o antioncogenes. Si
un gen supresor de tumores se muta y pierde
su funcin, el resultado puede compararse
con la prdida de un freno de la proliferacin
celular. Cuando esto ocurre tambin puede
presentarse un crecimiento descontrolado,
ahora como resultado de la falta de un
mecanismo de freno.
Las clulas transformadas poseen
mutaciones, tanto en protooncogenes como
en genes supresores de tumores, lo que da
como resultado una seal permanente de
proliferacin, por un lado, y la falta de
mecanismos de freno, por el otro. Esta
combinacin hace que estas clulas
presenten una duplicacin descontrolada y
mucho ms veloz que las clulas normales,
lo que, en parte, es responsable del
crecimiento desmesurado de las masas
tumorales.

Al finalizar esta subunidad el alumno
conocer las diferentes tcnicas de
manipulacin del DNA y sus posibles
aplicaciones.
F.1
Sealar la importancia de la
tecnologa del DNA recombinante en el
campo de la medicina.
F.2
Definir qu son las enzimas de

restriccin y conocer cul es su
utilidad y funcin en el estudio y la
manipulacin del DNA.
F.3
Definir qu es un vector de clonacin

y un vector de expresin; tomar como
ejemplo los plsmidos.
F.4
Conocer
en
qu
consiste
el
procedimiento
bsico
de
la
metodologa de clonacin y cul es su
utilidad, al tomar en cuenta:
F.4.1 Cmo se fragmenta el DNA.
F.4.2 Cmo se unen los fragmentos de
DNA a los vectores.
F.4.3 Cmo se introduce el DNA
recombinante en las clulas
hospederas (transfeccin).
F.4.4 Cmo se seleccionan las clulas
que
contienen
DNA
recombinante.
F.4.5 Cul es la utilidad del DNA
recombinante.
F.5
Conocer
los
mecanismos
de
recombinacin in vitro (ingeniera
gentica).
F.6
Conocer el significado de los tminos:

transgen, sobreexpresin, knock out,
huella digital del DNA y polimorfismo.
Las tcnicas modernas de biologa molecular

han permitido un gran control sobre la
caracterizacin y manipulacin del material
gentico tanto de DNA como de los distintos
tipos de RNA. Debido a su especificidad y
gran capacidad de deteccin, estas tcnicas
han tenido un gran impacto en la medicina.
Inicialmente, la biologa molecular se ha
aplicado al diagnstico de entidades
patolgicas y para determinar la presencia de
agentes infecciosos como microorganismos y
95
virus. En la actualidad se estudia con gran

inters la posibilidad de una teraputica
gnica que pueda corregir alteraciones
fisiopatolgicas derivadas de la prdida de la
funcin parcial o total de un gen; esto abre
una nueva era en las aplicaciones de la
biologa molecular en la medicina.
La biologa molecular recibi un gran
impulso con el descubrimiento de entidades
circulares de DNA llamadas plsmidos que,
adems de poseer genes que confieren
resistencia a los antimicrobianos, pueden
contener y expresar muchos otros genes.
Dos herramientas cruciales de la biologa
molecular son la posibilidad de cortar el DNA
con enzimas de restriccin, endonucleasas
que slo cortan secuencias especficas, y el
uso de ligasas, que generan un enlace
covalente entre los extremos obtenidos por la
accin de las enzimas de restriccin. Estos
dos principios bsicos permiten remover o
insertar cualquier porcin de DNA contenida
entre dos sitios de restriccin y se dice que
se ha clonado esta secuencia de DNA. La
clonacin hace posible introducir en un
plsmido, no slo secuencias de DNA de
otros plsmidos, sino tambin de cualquier
origen: viral, bacteriano, animal o vegetal. La
reciente aplicacin de transcriptasas reversas
de origen viral, enzimas que sintetizan DNA
complementario mediante RNA como molde,
y de polimerasas termostables que permiten
amplificar un segmento de DNA, ha
simplificado an ms el uso de tcnicas de
biologa molecular.
El tener secuencias de DNA o DNA
complementario al RNA mensajero ha
resultado de gran utilidad para el estudio de
genes y RNA mensajeros. Los fragmentos de
DNA obtenidos de la clonacin en plsmidos,
o por transcripcin reversa y amplificacin,
pueden unirse a nucletidos marcados con el
32
P, o
istopo radiactivo del fsforo
"derivatizados" con molculas fluorescentes;
la marca permite seguir a estas molculas
que sirven como sondas para localizar a sus
secuencias complementarias. La gran

especificidad y elevada capacidad de
deteccin de la hibridacin de la sonda con
su secuencia complementaria permite el
anlisis de DNA para detectar la presencia y
nmero de copias de un gen (tcnica
denominada Southern); tambin se aplica en
la identificacin y la cuantificacin de RNA
mensajeros (tcnica a la que se le denomina
Northern).
Los segmentos de DNA cuyo estudio
ha resultado de mayor inters son aquellos
que contienen toda la informacin de un gen
o de las regiones reguladoras. Sin embargo,
introducir un gen o un promotor a unas
cuantas molculas de plsmido sera
problemtico para estudios bioqumicos,
genticos y estructurales por la reducida
cantidad de material. Esta limitacin haba
sido resuelta previamente, ya que los
plsmidos pueden ser introducidos a
bacterias a travs del proceso de
transformacin. Normalmente los plsmidos
contienen secuencias que les permiten
multiplicarse una vez que estn dentro de
una bacteria; a estas secuencias se les
denomina origen de duplicacin. Gracias a
que los plsmidos contienen genes que
confieren resistencia a los antimicrobianos,
las bacterias que han sido transformadas con
un plsmido pueden distinguirse de las que
no lo han sido al hacerlas crecer en medio de
cultivo que contiene al antimicrobiano en
cuestin; los antimicrobianos ms utilizados
son la ampicilina y la kanamicina. Este simple
proceso de seleccin logra dos resultados
prcticos: por una parte, elimina a las
bacterias no transformadas y, por otra,
asegura la multiplicacin masiva del plsmido
que se duplica junto con el genoma
bacteriano. El resultado es un cultivo de
bacterias con un alto contenido de plsmidos
y, por tanto, del segmento de DNA que se
desea estudiar. La multiplicacin del
segmento de DNA por estudiar asegura
96
suficiente material para cualquier otro

propsito.
A los plsmidos que sirven para
insertar DNA ajeno al plsmido y permiten su
multiplicacin se les denomina vectores de
clonacin, pero existen tambin plsmidos
ms complejos en los que el sitio en el que
se puede insertar el DNA exgeno se
encuentra frente a una regin reguladora que
permite la sntesis de RNA mensajero. A
estos plsmidos se les llama vectores de
expresin, ya que permiten que el DNA sea
transcrito a RNA; estos plsmidos pueden
presentar regiones reguladoras reconocidas
por bacterias o por clulas de animales.
Hemos dicho que la transformacin consiste
en introducir el DNA a una bacteria y
expresarlo; cuando esto ocurre en una clula
eucaritica: levadura, clula animal o vegetal,
el proceso se denomina transfeccin. Una
aplicacin particularmente til de la biologa
molecular se ha derivado del uso de vectores
de expresin en bacterias y clulas animales.
La expresin de protenas exgenas por
bacterias y levaduras ha permitido obtener

cantidades
suficientes
para
estudios
bioqumicos, estructurales e, incluso, ha sido
la principal fuente para la cristalizacin. La
transfeccin y la expresin de protenas
exgenas en clulas de mamferos y en
clulas vegetales ha permitido identificar
versiones
de
genes
que
contienen
alteraciones en sus secuencias que dan
como resultado protenas con una funcin
alterada. Con esta aproximacin se han
identificado mutaciones responsables de
enfermedades como el cncer y la diabetes.
Una aplicacin sorprendente ha sido la de
identificar la funcin de genes recin
descubiertos que al ser insertados en
vectores de expresin no slo han permitido
obtener protenas puras en cantidades
suficientes
para
su
caracterizacin
bioqumica, sino tambin han dado la
oportunidad de conocer su funcin, al
expresarlas en un ambiente celular normal.
97
I
CONCEPTOS TERICOS INICIALES
98
EL MTODO CIENTFICO
La cultura no puede comprenderse sin hacer
cientfico, tomado aisladamente, forma parte
referencia al mtodo cientfico. La ciencia no
de la actuacin cotidiana de todos los seres
es un sector de la civilizacin que pueda
humanos, pero, en su conjunto, utilizados
separarse del resto de ella, sino un esfuerzo
sistemticamente,
creativo con su propio sistema de valores
poderosa herramienta que ha diseado la
que, poco a poco, ha llegado a formar parte
humanidad para conocer y controlar a la
de los valores generales en la sociedad
naturaleza.
constituyen
la
ms
moderna.
La ciencia est basada en el mtodo
Observacin
cientfico; su capacidad y limitaciones estn

definidas por l y dondequiera que el mtodo
El
cientfico sea aplicable, puede haber ciencia.
observacin. Lo que no puede observarse,
El origen de la ciencia se pierde en
mtodo
cientfico
se
directa o indirectamente
inicia
con
la
por medio de
el ms remoto pasado. Mucho antes de que
instrumentos o de modificaciones de la
existieran los registros histricos de la
conducta, no puede ser investigado por la
humanidad, la magia primitiva dio origen
ciencia.
tambin a la religin y, mucho antes, al arte.
La observacin debe ser repetida en
Ciencia, religin y arte difieren en mtodos,
forma
independiente
por
observadores
pero coinciden en metas: comprender e
diversos. Las observaciones nicas, que no
interpretar al universo y la interaccin de sus
se repiten ni actual ni potencialmente, no
partes para promover el progreso material y
pueden ser objeto de estudio cientfico.
espiritual de la humanidad.
Problema
El objetivo de la ciencia es hacer
teoras. Las teoras cientficas explican los
Despus de que una observacin se hace y
hechos
se repite, el segundo tiempo del mtodo
y predicen con alto grado de
probabilidad
la
ocurrencia
de
hechos
similares.
cientfico es plantear un problema; en otras

palabras, se hacen preguntas sobre la
La secuencia del mtodo cientfico
observacin: Cmo es que los hechos
es: observar, plantear problemas, hacer
ocurren de esta manera? Qu es lo que
hiptesis, experimentar y formular teoras.
determina su desarrollo, evolucin y trmino?
Cada uno de los procesos del mtodo
Es en este punto donde el cientfico difiere
99
del
hombre
comn;
hacen
problema a dos alternativas posibles que
observaciones pero slo el primero muestra
puedan contestarse con claridad, afirmativa o
curiosidad cientfica sobre ellas.
negativamente; pero en muchas ocasiones
Plantear
un
ambos
problema
es
hacer
preguntas, pero, hacer buenas preguntas al
los resultados del experimento slo conducen

a soluciones parciales.
igual que hacer buenas observaciones es
La experimentacin es la parte ms
un arte muy preciado. Para que tengan valor
ardua
cientfico
experimento es un caso en s mismo; el
los
significativos
problemas
y
deben
tener
ser
respuestas
comprobables por tcnicas apropiadas.

o
qu?
se
resuelven
mtodo
conocimiento
anterior
cientfico.
y
la
Cada
experiencia
ayudan tcnicamente para decidir la forma en
Las preguntas que se inician por

cmo?
del
que una hiptesis puede ser comprobada
mejor,
experimentalmente. La eleccin correcta del
cientficamente, que las que comienzan con
experimento y su interpretacin es lo que
por qu?, pero los investigadores pueden
separa
formular los problemas para que adopten la
investigacin.
al
genio
del
aficionado
la
forma adecuada.
Teora
Hiptesis
Las pruebas experimentales son la base del

quinto peldao, final del mtodo cientfico: la
Una vez planteado un problema adecuado, el
formulacin de una teora. Cuando una
cientfico
hiptesis se ha sostenido por pruebas
procede
al
tercer
tiempo
del
mtodo: formular una explicacin o hiptesis.
convincentes,
Por supuesto que un problema puede tener
laboratorios e investigadores independientes,
varias explicaciones posibles, pero slo una
se propone una teora que consiste en una
de ellas es la verdadera. Las respuestas
afirmacin con lmites mucho ms amplios
casuales a un problema son generalmente
que los experimentos en que se basa y que
errneas; pero el cientfico con su intuicin,
expresa la creencia o probabilidad de que
su experiencia y, a veces por incidentes
sea valedera en cualquier combinacin de
afortunados, acierta en la hiptesis. Esto se
sujeto, tiempo y lugar en donde se renan
sabe al emplear el cuarto tiempo del mtodo
condiciones similares.
cientfico.
obtenidas
por
muchos
Desde este punto de vista una buena

teora permite hacer predicciones. Las
Experimentacin
El
objetivo
predicciones cientficas tienen siempre un
de
es
soporte experimental muy slido y aun
comprobar la validez de la hiptesis. Si los
cuando no afirman que un hecho ocurrir con
experimentos demuestran que la hiptesis es
certidumbre, s plantean que tiene una gran
errnea, se hace una nueva y se la sujeta a
probabilidad de ocurrir.
comprobacin.
la
puede
Unas pocas teoras han probado su
prolongarse por mucho tiempo al formular
validez tan universalmente, y expresan tan
nuevas hiptesis y tratar de comprobarlas
alto grado de probabilidad, que se las conoce
experimentalmente.
con el nombre de leyes naturales. Por
La
El
experimentacin
procedimiento
situacin
experimentacin
consiste
ideal
en
la
ejemplo, ninguna excepcin se conoce al
en
reducir
el
hecho de que una manzana desprendida de
100
su rbol caer al suelo si no es sostenida de
Un sistema de medidas
preciso
alguna manera. La ley de gravitacin se basa
requiere unidades bien definidas. La Oficina
en esta observacin.
Internacional de Pesas y Medidas revisa

la
peridicamente el sistema para incorporar los
investigacin cientfica. Si en el anlisis de un
Las
leyes
naturales
orientan
adelantos tecnolgicos y mejorar la exactitud
hecho se elimina lo imposible, aquello que es
y precisin de las medidas.
contrario a las leyes naturales, lo que resta,
Se han hecho muchos esfuerzos
aunque sea muy raro y poco probable, debe
para desarrollar un sistema de unidades
ser la verdad. La verdad son los hechos que
universalmente aceptable. El producto de
nos rodean. Aunque acontecen sin cesar a
estos esfuerzos es el Sistema Internacional
nuestro alrededor, muy pocas personas y
de Unidades (cuya abreviatura es SI en todos
muy pocas veces se hace un anlisis
los
cientfico de ellas.
intercambio de informacin cientfica este
idiomas).
partir
del
creciente
Si se emplean las leyes naturales
sistema ha sido aceptado por toda la
para marcar lo imposible, con el resto posible
comunidad y en especial en medicina. El SI
se hacen nuevas hiptesis, se comprueban
es esencialmente una versin ampliada del
por
sistema mtrico decimal.
experimentos,
teoras
se
se
acumula
formulan
el
nuevas
conocimiento
El
SI
comprende
tres
tipos
de
cientfico que ha permitido al hombre situarse
unidades: las unidades de base, las unidades
en un Universo observable que tiene un radio
derivadas, las unidades suplementarias y una
(r) de millares de millones de aos luz y que
serie de prefijos que permiten tomar mltiplos
incluye un microcosmos tan pequeo que se
y submltiplos decimales de las unidades
expresa en rdenes de magnitud menores de
utilizadas.
10
20
m y adquirir un dominio incuestionable
sobre su ambiente.
Unidades de base
SISTEMA INTERNACIONAL DE UNIDADES
El SI consta de siete unidades bsicas que
(SI)
son dimensionalmente independientes. Las

unidades bsicas estn anotadas en el
Los resultados de todos los experimentos en
cuadro I.1, junto con los smbolos que hay
que se basan las teoras cientficas y las
que utilizar para indicar estas cantidades.
leyes naturales derivan de las mediciones de

objetos o de sus propiedades.
Unidades SI derivadas
Medir es comparar magnitudes; toda
Al multiplicar una unidad de base por s
medicin comprende un nmero y una
misma o al asociar dos o ms unidades de
unidad. La unidad identifica la clase de
base por una simple multiplicacin o divisin,
dimensin y el nmero expresa las veces que
se puede formar un amplio grupo de
la unidad est contenida en el objeto o la
unidades llamadas SI derivadas (cuadro I.2).
propiedad medida. La medicin es un arte
Ejemplo: la unidad derivada de volumen es el
muy refinado; en la actualidad emplea
metro elevado al cubo, o metro cbico.
instrumentos muy complejos y alcanza una

precisin extraordinaria.
La combinacin de unidades de base

para formar las unidades derivadas es una
101
de las grandes ventajas del SI. En el SI no es
una serie de prefijos que permiten formar
preciso memorizar factores de conversin; el
mltiplos y submltiplos decimales de las
factor a que se recurre para formar las
unidades SI (cuadro I.4).

Los
unidades derivadas es 1 (unidad), cualidad
prefijos
SI
se
anteponen
directamente al nombre de la unidad, sin
que hace al SI coherente.
signo
de
puntuacin
alguno
(ejemplo:
Cuadro I.1. Unidades bsicas del SI.
nanmetro y no nano-metro).
Magnitud
Longitud
Masa
Tiempo
Cantidad de
sustancia
Temperatura
termodinmica
Intensidad luminosa
Nombre
metro
kilogramo
segundo
mol
Smbolo
m
kg
s
mol
tambin directamente al smbolo de la
kelvin
candela
cd
Intensidad de
corriente elctrica
ampere
El smbolo del prefijo se antepone

unidad, sin espacios intermedios ni signos de
puntuacin (ejemplo: mm, milmetros; nmol,
nanomol que equivale 10
moles).
Cuadro I.3. Unidades SI derivadas con
nombres especiales
Magnitud
Cuadro I.2. Algunas unidades derivadas

simples
Nombre
Smbolo
Definicin
2
Fuerza
Newton
Nm.
kgm/s
Presin
Pascal
Pa
N/m2
Trabajo;
Joule
Nm
Coulomb
Watt
J/s
Volt
W/A
energa;
Magnitud
Superficie
Volumen
Concentracin
de sustancia
Velocidad
Nombre
metro
cuadrado
metro
cbico
mol/metro
cbico
metro
por
segundo
Smbolo
2
m
m
calor
Carga
mol/m
cantidad de
A.s
elctrica;
3
cantidad de
electricidad
m/s
Potencia;
flujo
A cierto nmero de unidades SI derivadas se
energtico
les ha dado nombres especiales, en su
Tensin
mayor parte tomados de los hombres de
elctrica;
ciencia
contribuciones
potencial
notables al conocimiento del tema de estudio
elctrico
correspondiente (cuadro I.3).
Temperatura
Grado
Celsius
Celsius
que
han
hecho
K273,16
Prefijos SI
Cuando las unidades SI derivadas resultan
demasiado grandes o demasiado pequeas
para
determinados
fines
(sera
desproporcionado, por ejemplo, utilizar el

metro cbico para expresar el volumen de
sangre del cuerpo humano), el SI contiene
102
Cuadro I.4. Prefijos SI.

Factor
10
10
10
10
10
10
10
exa
Peta
12
10
10
Smbolo
15
10
10
Prefijo
18
10
Los smbolos de las unidades no toman la
9
6
3
12
15
se escribe 2 ml, y no 2 mls).

Los smbolos de las unidades jams
van seguidos de un punto, salvo si estn al
Tera
Giga
Mega
Kilo
Mili
tros, dispuestos a la derecha y a la izquierda
Micro
de la coma, y separados entre s por un
Nano
pequeo espacio. Ejemplo:
Pico
Femo
ato
3
6
terminacin del plural (ejemplo: dos mililitros
18
final de una frase (ejemplo: 5 ml y no 5 ml.).

Cuando se escriben cifras, la coma
slo se puede utilizar para indicar los
decimales; las cifras deben agruparse en
forma correcta:
1 000 000
0,003 278
0.003 278
forma incorrecta: 1,000,000
Unidades no pertenecientes al SI
0.003,278
Ciertas unidades ajenas al SI son de uso tan

frecuente que en cierto modo forman parte
La multiplicacin de las unidades se
de nuestra vida cotidiana y se acord
indica con un punto a nivel o elevado
utilizarlas juntamente con el SI (cuadro I.5).
(newton.metro=N.m) o un espacio (N m). La
Algunas
de
estas
unidades,
en
especial el litro y las unidades de tiempo, son
divisin se puede indicar mediante una barra

oblicua o por exponentes negativos:
de gran importancia en las profesiones de la
1/s = s
salud. Conviene sealar que el litro es un

nombre especial que se da al submltiplo,
mol por metro cbico puede expresarse por:
decmetro cbico, de la unidad SI de

volumen.
tiene
muchas
mol/m o mol.m
El
SI
ventajas
algunas desventajas, pero se reconoce la

Cuadro
I.5.
Algunas
unidades
no
pertenecientes al SI.
Magnitud
Unidad
realidad del esfuerzo para implantarlo como

una forma de expresar los datos cientficos,
Smbolo
Valor en
comprensible para todos. Se recomienda
SI
desechar las unidades que no pertenecen al
minuto
min
60 s
SI a la mayor brevedad posible, pero la
hora
3 600 s
realidad del uso de otras unidades en textos
Da
86 400 s
y comunicaciones cientficas no se puede
Volumen
Litro
loL
10 m
-3
negar. En este Manual las unidades SI se
Energa
calora
cal
4.185J
Tiempo
anotarn entre parntesis cuando se juzgue

conveniente.
Reglas de escritura de smbolos y cifras.
103
Algunas recomendaciones para utilizar
Concentracin de iones hidrgeno.
el SI en bioqumica
La concentracin de hidrogeniones en los

lquidos biolgicos se expresa en nmol/l, as
PARA EXPRESAR CONCENTRACIONES
como en unidades de pH. El valor del pH se
La concentracin de sustancias cuya masa
define como el logaritmo negativo de la
molecular se conoce se expresa en forma de
actividad de los iones hidrgeno (pH = -log
cantidad de sustancia, es decir, en moles (o
H ),
en
potenciomtricamente con la ayuda de un
submltiplos
como el
milimol
el
nanomol) por litro. Ejemplo:
esta
actividad
puede
determinarse
pH-metro.
cido rico en el suero o plasma:
Actividad enzimtica. La unidad SI de
Varones: 0.18 a 0.53 mmol/l.
actividad cataltica es mol por segundo: mol/s
Mujeres: 0.15 a 0.45 mmol/l.
(tambin llamado katal, smbolo: kat) y
Colesterol en el suero o plasma: 3.9 a 7.2
corresponde
mmol/l.
Glucosa en el suero o plasma: 3.6 a 6.1
transformado por segundo como resultado de
mmol/l.
la
catlisis.
proporcional
Vitamina A en el suero: 0.53 a 2.1 mol/l.

La
cantidad
concentracin
de
denominada
sustancia
en
forma
de
no
debe
ser
concentracin
molar
molaridad, ni utilizar el smbolo M en vez de

mol/l (como tampoco mM, nM, etctera, en
vez de mmol/l, nmol/l, etctera).
La concentracin de sustancias cuya
masa molecular se desconoce o es dudosa
se expresa en kg/l, g/l, mg/l, etctera.
Ejemplo:
la
La
a
cantidad
velocidad
la
cantidad
de
sustrato
medida
de
es
enzima
presente.
La actividad tambin puede ser
expresada en trminos de unidades (smbolo:
U). Por definicin, una unidad es igual a la
concentracin de enzima necesaria para la
formacin de un micromol de producto por
minuto (mol/min). La actividad especfica de
una enzima se define como la concentracin
de producto que se forma por 1 miligramo de
enzima por minuto.
MATEMTICAS PARA EL LABORATORIO
Protena srica total: 60 a 80 g/l.

Albmina srica: 33 a 55 g/l.
Notacin cientfica o exponencial.
Globulina srica: 20 a 36 g/l.
Cuando se expresan cantidades muy

grandes o muy pequeas, como es el caso
frecuente en bioqumica, la dificultad de
Fibringeno en el plasma: 2 a 6 g/l.

Hormona antidiurtica en plasma: 2 a 12
pg/ml
Concentracin de sustancias en tejidos.

Se expresa en unidades de masa (si no se
conoce la masa molecular) o en moles (si se
conoce la masa molecular) por kilogramo de
tejido seco o hmedo. Ejemplo:
g/kg, mg/kg o mol/kg, mmol/kg, etctera.
No se recomienda expresarla en unidades
de volumen, es decir en mg/ml, g/l, etctera.
escribir y manipular muchos ceros se evita

con el uso de la notacin exponencial o
cientfica.
En la notacin exponencial todo
nmero puede expresarse como una
potencia entera de 10, o como un producto
de dos nmeros, uno de los cuales es una
potencia entera de 10. Ejemplo: el nmero de
Avogadro seiscientos dos sextillones se
escribe:
104
602 000 000 000 000 000 000 000

y en la notacin exponencial como una
cantidad decimal multiplicada por 10 elevada

23
a la potencia apropiada = 6.02 x 10 . Como
ya que 6 x 3 = 18 y 10
6
6+3
= 10
6 x 10 entre 3 x 10 = 2 x 10
ejercicio, examine las cantidades siguientes:

200 = 2 x 10 x 10 = 2 x 10
6 x 10 por 3 x 10 = 18 x 10 = 1.8 x 10
ya que 6/3 = 2 y 10
63
= 10
10
205 = 2.05 x 10
5
205 000 = 2.05 x 10
1
0.205 = 2.05 x 10
Para la adicin y la sustraccin usando

notacin cientfica, primero se escribe cada
4
0.000 205 = 2.05 x 10

7
0.000 000 1= 1/10 000 000 = 1 x 10
El exponente de la base 10 para
nmeros mayores de la unidad es el nmero
de lugares desde la coma o punto decimal
separada de la primera cifra significativa:
cantidad con el mismo exponente n. Luego

se realiza la operacin deseada entre los
valores N1 y N2, donde N1 y N2 son los
nmeros obtenidos con el mismo exponente;
estos ltimos permanecen iguales. Ejemplo:
2
(5.1 x 10 ) + (3.4 x 10 ) = (0.51 x 10 ) + (3.4 x

3
10 ) = 3.91 x 10
205 = 2.05 x 10 = 2 lugares
El mtodo del factor unitario en los

Para fracciones decimales menores
de la unidad se separa la primera cifra
distinta de cero despus de la coma decimal
Clculos.
y se cuentan los lugares hacia la izquierda

hasta la coma decimal, incluso la cifra
separada y el nmero es el exponente
de unidades se denomina mtodo del factor
negativo:
Cualquier nmero al ser multiplicado por
El
procedimiento
que
se
utilizar
para
resolver problemas que incluyan conversin

unitario.
Esta
tcnica
se
basa
en
las
propiedades del nmero 1, es decir:

uno, sigue siendo el mismo nmero (1 x 5 =
0.000 205 = 0.000 205
5).
del 2 a la coma decimal son 4 lugares; por lo
4
tanto, es 2.05 x 10 .
Las operaciones de multiplicar y

dividir, elevar a potencias o extraer races se
facilitan manipulando los exponentes segn
reglas muy sencillas. La porcin decimal no
exponencial se opera en forma ordinaria, lo
que
reduce
el
manejo
tres
cifras
El nmero 1 puede ser escrito como el

cociente de cualquier nmero dividido por si
mismo (3/3 6/6).
Se puede tomar cualquier ecuacin y
dividirla por uno de los miembros para
obtener una razn igual al nmero 1.
Por ejemplo, dada la ecuacin:
1 minuto = 60 segundos, obtener la razn
igual al nmero 1.
significativas como mximo; los exponentes

se suman algebraicamente para multiplicar,
se restan para dividir, se multiplican por una
potencia deseada para tener el exponente de
la misma y para encontrar races se divide el
exponente
Ejemplos:
entre
el
ndice
de
la
raz.
1 minuto
1 minuto
1=
60 segundos
1 minuto
60 segundos
1 minuto
1=
1 minuto
60 segundos
105
Estas razones o factores que son
requiere para obtener el nmero. Si el
equivalentes al nmero 1 se conocen como
nmero a elevado a la potencia n (a ) es
factores unitarios, factores de conversin o
igual al nmero N, entonces n es el
coeficientes de conversin.
logaritmo de base a del nmero N. Es
El
recproco
de
cualquier
factor
decir:
n
unitario es tambin un factor unitario.
si a = N entonces n = loga de N
En ambos casos el numerador y el

denominador describen la misma cantidad,
La base a puede ser cualquier
por lo que se puede efectuar conversiones
nmero; en la prctica mdica se usa como
entre diferentes unidades que miden la
base
misma cantidad.
resultantes se conocen como logaritmos
El mtodo del factor unitario consiste en:
comunes o de Briggs. Su smbolo es: log o

log.10
el
nmero
10
los
logaritmos
Los logaritmos son indispensables
1. Tomar una relacin entre unidades y

expresarla en forma de una ecuacin,
para manejar los datos bioqumicos; constan
2. Luego expresar la relacin en forma de
de dos partes que se separan por una coma
una
fraccin
(llamada
factor
de
punto
decimal;
caracterstica
conversin) y, por ltimo;

3. Multiplicar la cantidad dada por ese factor.
la
corresponde
izquierda,
al
orden
la
de
magnitud y puede ser positiva o negativa
unidades
segn sea la cantidad mayor o menor de la
idnticas se multiplican o cancelan como
unidad. El exponente de la base 10 para
si fueran nmeros.
nmeros mayores de la unidad es siempre
En
esta
multiplicacin,
las
Ejemplo: Cuntos l hay en 0.00005 L (5 x

-5
positivo. Cuando es negativo se indica con el

signo menos arriba del nmero que la
10 L)?
representa:
-6
1) 1 l = 10 L 1 L = 10 l
2)
10 l
0.001 = 10
-3
caracterstica 3
1 000 = 10
-3
caracterstica 3
1L
A la derecha, la mantisa es la
3) 5 x 10
-5
L x= 5 x 10
[-5+ 6]
= 5 x 10 l =
fraccin
decimal
de
exponente
que
corresponde a los dgitos que ocupan el
50l.
orden de magnitud; se obtiene de tablas o de

En este mtodo las unidades
se
acarrean en todo el proceso del clculo, por

lo tanto si la ecuacin se establece en forma
calculadoras electrnicas y siempre tiene

valor positivo:
2
log = 0,3010 esto es 10
0.3010
=2
correcta, todas las unidades se cancelan

excepto la deseada.
Cuando la caracterstica y la mantisa

son de diferente signo (+ o ) se opera con el
Logaritmos
cologaritmo que se obtiene por la suma

algebraica de la mantisa positiva con la
El logaritmo de un nmero es el exponente o

potencia de una base determinada que se
caracterstica negativa es un nmero todo

negativo, ver el siguiente ejemplo:
106
Log 0.002 = 3.3010 = -2.6990

0.9079
3.000
+ 0.0001
+0.3010
0.9080; log 8091 = 3.9080
-2.6990 cologaritmo
El
antilogaritmo
es
el
nmero
que
La caracterstica indica la posicin del punto
corresponde a un logaritmo dado. Para
decimal en la cifra representada por la
encontrarlo se busca la mantisa en la tabla
mantisa y se determina por inspeccin del
de antilogaritmos, se determina el nmero a
nmero.
que corresponde y se fija la posicin del
Para un nmero mayor que 1, la
punto decimal segn la caracterstica. Por
caracterstica es uno menos que el nmero
ejemplo el antilogaritmo de 1.6747 es 47.29:
de cifras antes del punto decimal; as: la
la caracterstica es 1 (hay dos dgitos a la
caracterstica de 100 es 2 porque el nmero
izquierda del punto decimal) y la mantisa es
cien tiene 3 dgitos a la izquierda del punto
0.6747, que se buscara en la tabla de
decimal. Para un nmero menor que 1, la
logaritmos
caracterstica es numricamente uno ms
corresponde a 4 729.
donde
se
hallara
que
que el nmero de ceros que siguen al punto
Los estudiantes deben familiarizarse
decimal; as: la caracterstica de 0.000 000 1
con el uso de logaritmos en las operaciones
es 7 con signo negativo.
comunes.
Para encontrar el logaritmo de un
El logaritmo del producto de dos
nmero, por ejemplo: 0.000 809, se busca en
nmeros es igual a la suma de sus
la tabla las dos primeras cifras distintas de
logaritmos:
cero de izquierda a derecha (80) en la

primera columna vertical de las tablas
se
log a x b = log a + log b
columna 9, que es el otro nmero, en donde
El logaritmo del cociente de dos

nmeros es igual al logaritmo del dividendo
menos el logaritmo del divisor:
se lee 9 079, que es la mantisa requerida. La
log a/b = log a log b
mantisa para 809, 8.09, 0.0809, etctera; es
El logaritmo de la potencia n de un
nmero es igual a "n" veces el logaritmo del
nmero:
sigue la horizontal correspondiente hasta la
la
misma
(9
079),
pero
difiere
la
caracterstica. As:
log a = 3 x log a
Log 0.000 809 = 4.9079 = -3.0921

Si el nmero del cual se requiere el
Grficas
logaritmo tiene cuatro cifras, la cuarta se
"Una figura equivale a mil datos en una tabla
busca en la misma columna horizontal en la
numrica" y as como se construye un
parte
partes
modelo para visualizar un conjunto complejo
y debe agregarse a la
de hechos, se utiliza una grfica para
de
la
proporcionales
tabla
que
dice
mantisa como diez milsimos.

Por ejemplo, para el nmero 8 091:
presentar los datos experimentales en tal

forma que fcilmente se asimilen y aprecien
sus relaciones cuantitativas.
Mantisa para 809 = 9 079

parte proporcional para 1 = 1
Se llama grfica a la representacin

esquemtica de las variaciones que sufren
107
las distintas magnitudes que intervienen en
Nota: por lo general, es mejor que la
los fenmenos fsicos, qumicos, biolgicos,
curva llene una parte considerable de la
sociales o de cualquier otra ndole. Tiene por
pgina. Muy bien puede usarse la misma
objeto mostrar rpida e intuitivamente la
unidad de medida sobre los dos ejes, pero a
relacin
menudo los valores tienen un campo de
que
guardan
las
magnitudes
comparadas.
Entre
variabilidad
las
diferentes
clases
de
grficas que existen las ms importantes son:
muy
amplio,
lo
cual
hace
necesario usar diferente escala para cada

uno de los ejes.
en
Diagrama en barras. Cuando se
expresar las variaciones de un fenmeno
quieren expresar simples comparaciones de
continuo
de
medidas entre s o para representar un
representar la marcha de dicho fenmeno por
fenmeno discontinuo se emplean las barras,
medio de una lnea que une esos puntos.
que pueden ser horizontales o verticales.
Grfica
por
poligonal.
medio
de
Consiste
puntos
Para elaborar una grfica poligonal
Barras verticales. Las magnitudes se
se trazan en un papel, de preferencia
representan por medio de rectngulos, barras
milimtrico, dos rectas perpendiculares entre
de base igual que descansan en el eje de las
s que se corten en cero. En cada una de
abscisas y cuya altura es proporcional a la
ellas se representar una de las magnitudes
intensidad del fenmeno y se mide en el eje
que se van a relacionar. El punto cero (0) se
de las ordenadas.
Barras
llama origen y la rectas son los ejes; 0X es el
horizontales.
Las
barras
eje X y 0Y es el eje Y. Para referirse al eje X
descansan sus bases en el eje de las
generalmente se dice: eje horizontal o eje de
ordenadas y el fenmeno se mide en el eje
las abscisas (variable independiente) y para
de las abscisas.
Grfica de sectores circulares. Para
el eje Y: eje vertical o eje de las ordenadas

(variable dependiente).
hacer una grfica de este tipo hay que tener
Los ejes dividen su propio plano en

cuatro regiones llamadas cuadrantes que se
en cuenta que el crculo debe tener el total de

las magnitudes que se van a representar.
numeran I, II, III y IV. En el laboratorio

utilizamos
habitualmente
slo
el
primer
cuadrante (figura I.1).
Los
sectores
proporcionales
las
circulares
son
magnitudes
que
representan; magnitud que se mide en
Las distancias a la derecha de 0, a lo
grados de circunferencia. Para determinar el
largo del eje X, se consideran como positivas
nmero de grados que deben tener dichas
y las de la izquierda como negativas.
partes se plantearn una serie de reglas de
Similarmente, hacia arriba de 0, a lo largo del
tres para cada una de ellas en las cuales se
eje Y, se miden las distancias positivas y
consideran:
hacia abajo de 0 las negativas.
como
Despus se trazan los puntos cuyas

distancias
uno
de
los
ejes
sean
proporcionales a la magnitud que se va a
100%
la
suma
total
de
las
magnitudes que se quieren graficar, para

obtener
correspon
en
cada
diente;
caso
el
una
vez
porcentaje
obtenido
representar y, finalmente, al unir estos puntos

por medio de segmentos de recta, se tiene la
grfica poligonal.
108
de agua en un tubo de centrfuga y se rota a

2 000 rpm (revoluciones por minuto) a una
distancia radial de 16 cm, la fuerza es:
2
f = 0.01096 x 2000 x 1 x 16 = 701 440 dinas

Si transformamos las dinas a peso,
entonces el gramo de agua tiene peso
porque es atrado al centro de la Tierra de
acuerdo con la ley de la gravitacin y es
atrado en estado normal, con 980 dinas de
fuerza. Si usamos, por lo tanto, peso en vez
de dinas como la unidad de nuestro problema
tendremos:
2
ste, se pasar a grados, considerando

360o como 100% y procediendo entonces a
hacer la grfica.
f = 0.01096 x n mr = 717 g
980
o sea, interpretando la frmula, la fuerza de
contencin para sostener la unidad masa (el
ALGUNOS MTODOS UTILIZADOS EN
gramo) e impedir que se vaya del centro de
BIOQUMICA
rotacin es la fuerza que la gravedad ejerca

sobre 716 g o, dicho de otra manera, el
Centrifugacin
gramo a esa velocidad pesa en el fondo del
Un mtodo muy til en el laboratorio para

separar sustancias de diferente densidad
suspendidas
en
un
lquido
es
la
centrifugacin; en ella, la accin de la fuerza

centrfuga (fuerza necesaria para desplazar
hacia
afuera
un
determinado
peso
en
direccin radial) da como resultado que las

partculas ms pesadas se sedimenten ms
rpido que las partculas ligeras.
tubo de la centrfuga 716 gramos comparado

con el tubo en reposo o 716 veces la fuerza
de la gravedad (g).
La
centrifugacin
ultracentrifugacin son operaciones que se

basan en el principio anterior y que permiten
separar los componentes de una mezcla.
Las centrfugas ordinarias operan a
rotaciones menores de 10 000 revoluciones
por minuto (rpm). Las condiciones que limitan
La fuerza centrfuga depende de la
esta velocidad son la resistencia de la parte
cantidad de materia (m) que se desplaza
de la centrfuga que sostiene el rotor (brazo),
hacia afuera cuando est rotando a una
la friccin con el aire y el calentamiento.
velocidad por minuto de (n) veces a una
Las
ultracentrfugas
operan
en
distancia radial (r) y se expresa por la
cmaras refrigeradas, evacuadas de aire, y el
frmula:
rotor no gira sostenido por un brazo sino

2
f (en dinas) = 0.01096 n m r
impulsado por chorros de aceite o aire

comprimido que se aplica a una porcin
En el sistema mtrico decimal, la unidad de f
externa del rotor sostenido por una pared
es la dina, la de m es el gramo y la de r es el
muy gruesa de una cmara cilndrica de
centmetro. Ejemplo: si se coloca un gramo
109
rotacin. Se alcanzan velocidades de 20 000
peso determinado debe estar otro, en la
misma posicin, con el mismo peso. El
70 000 rpm.
La
sedimentacin
ultracentrfuga
se
expresa
en
en
la
unidades
descuido de esta regla implica un desnivel

que,
las
velocidades
fuerzas
Svedberg (smbolo: S) y se aplica a la
sealadas, puede romper los tubos y
comparacin
tamaos
daar el aparato. Para balancear por
moleculares que no slo dependen de la
pares los tubos lo mejor es usar una
masa de las molculas implicadas sino
balanza de dos brazos y ajustar el peso
tambin
hasta que sea idntico.
de
prctica
su
forma.
de
Es
importante
considerar que los valores de Svedberg no
2. Para no forzar el motor arrnquese
son aditivos, es decir, dos partculas 5S no
gradualmente la centrfuga hasta alcanzar
crean una partcula 10S. Sin embargo, hay

una correspondencia tosca que para las
protenas esfricas es de:
la velocidad requerida.
3. Nunca se frene una centrfuga; djese
parar por su propia inercia; el no hacer
esto conduce a que se agite el contenido
2 S = 10 kdal
4 S = 50 kdal
8 S = 160 kdal
16 S = 400 kdal
de los tubos y se eche a perder el trabajo.

4. No alzar las tapas de la centrfuga cuando
est en movimiento.
5. Ante cualquier dificultad o duda consulte
La unidad Svedberg es igual a 10
13
al profesor.
segundos; no pertenece al SI y puede
Potenciometra
suplirse por 0,1 picosegundo (ps) o 100
Muchas de las reacciones que se realizan en
femtosegundo (fs). En las molculas menos
las clulas son reacciones de oxidacin y de
densas que el medio de suspensin, como
reduccin, es decir, en las que se transfieren
las lipoprotenas, el desplazamiento es hacia
electrones.
la superficie y se expresa en Svedberg de
La
flotacin (Sf) y permite la clasificacin en:
reacciones
LDL, HDL y VHDL (low density, high density
transferencia de uno o ms electrones.
y very high density) con Sf de 0 a 10, 10 a
La oxidacin es la prdida o liberacin de
400 y las muy densas que no flotan y tienen
electrones y la molcula que los cede se
una densidad mayor de 1.
denomina agente reductor.
El peligro del mal uso de la centrfuga deriva
La reduccin es la ganancia de electrones y
de la enorme fuerza que alcanza en el radio
la molcula que los acepta se denomina
de rotacin y el peso de las sustancias
agente oxidante.
colocadas en el campo gravitacional del

aparato.
Se debe tener cuidado con los
electroqumica
qumicas
en
estudia
las
que
las
hay
Cuando se oxida un agente reductor,

se transforma en su forma oxidada y como la
reaccin es reversible las formas oxidada y
siguientes puntos:
reducida del compuesto constituyen un par
1. Los tubos en las centrfugas debern
conjugado llamado par redox o par de
colocarse por pares para que no haya
oxidorreduccin.
diferencia de peso en un lado de la
El proceso de oxidacin siempre va
centrfuga. Enfrente de un tubo de un
acompaado del proceso de reduccin ya
110
que los electrones que cede una molcula
electrodo (E) a la diferencia de potencial
reductora son aceptados por una molcula
respecto
oxidante, lo cual constituye las reacciones de
arbitrario y depende de la concentracin de
oxidorreduccin o reacciones redox.
las molculas en la solucin y de la
La determinacin cuantitativa de la
un
electrodo
de
referencia
temperatura.
concentracin de las molculas oxidantes y
En general, el potencial de los
reductoras en una solucin es el objeto de
electrodos
estudio de la potenciometra. En esta tcnica
electrodo de hidrgeno al que se le ha
se determina el potencial elctrico generado
asignado.
por la transferencia de electrones en una
En general, el potencial de los electrodos se
reaccin redox en la cual estn involucradas
mide
las molculas a estudiar. Este potencial se
hidrgeno
mide en una celda electroqumica. La celda
arbitrariamente un potencial de cero a 25o C
ms comn es la de Daniell (Fig. I.2), en la
a una concentracin de 1 mmol/L y una
que en dos compartimientos separados que

contienen ZnSO4 y CuSO4 se colocan cinc y
presin del gas de una atmsfera. Sin
cobre metlico, respectivamente; las dos
porque se trata de un electrodo gaseoso.
se
con
mide
con
referencia
al
que
al
se
le
referencia
electrodo
ha
al
de
asignado
embargo, en la prctica es inconveniente
soluciones se conectan por un puente salino

(un tubo que contiene agar embebido en una
solucin de un electrolito como el KCl).
Cuando los dos electrolitos se conectan por
un alambre metlico, ocurre un flujo de
electrones del electrodo de cinc al electrodo
de cobre, el cual puede ser medido por
medio de un voltmetro. Cuando el cinc cede
los electrones se convierte en ion soluble,
mientras que el cobre disuelto, al aceptar los
electrones, se convierte en cobre metlico
que se deposita en el electrodo. El puente
salino cierra el circuito elctrico entre las dos
soluciones.
El hecho de que fluya una corriente
elctrica del polo positivo (nodo, que en
este caso es el electrodo de cinc) al polo
negativo (ctodo, que en este caso es el
electrodo de cobre), significa que hay una
diferencia de potencial entre los electrodos
denominada fuerza electromotriz (fem) de la
celda. Dado que el potencial de un electrodo
est relacionado con la magnitud de cargas
positivas existentes, la diferencia de potencial
compara las cargas relativas existentes en
dos puntos. Se denomina potencial de
Fig. 1.2 Celda de Daniell

Es por ello, que se usan otros
electrodos de referencia, como el de calomel,
en el cual el sistema de medicin es mercurio
y cloruro mercuroso. En el caso de este
electrodo, como sucede con todos los pares
redox, debe calibrarse con respecto al
electrodo de hidrgeno.
Los pares redox de inters para el
bioqumico
incluyen
menudo
al
ion
hidrgeno como reactivo o como producto,

por lo que tales sistemas estn en funcin del
pH del medio.
111
Hay diferentes tipos de electrodos:
El electrodo de vidrio consiste en una
los metlicos (como los de la celda de
membrana de vidrio situada al final de un
Daniell), los metlicos-sal insoluble (como el
tubo de vidrio o plstico de paredes ms
de plata/cloruro de plata), los gaseosos
gruesas. En el tubo se encuentra cido
(como el de hidrgeno, que se adsorbe sobre
clorhdrico diluido saturado de cloruro de
platino), los electrodos selectivos de iones
plata y un hilo de plata que conecta a la
(que pueden ser para aniones o para
terminal del voltmetro con un electrodo de
cationes) y los de vidrio (que son electrodos
referencia. El pH se determina midiendo la
selectivos
para
diferencia de potencial a travs de la
determinar H ). Estos ltimos son los ms
membrana de vidrio que separa la solucin a
utilizados ya que una de las aplicaciones
la cual se quiere determinar el pH, de la
prcticas
solucin de referencia cuya concentracin de
de
iones,
especiales
ms
importantes
de
la
potenciometra es la determinacin del pH.
hidrogeniones se conoce.
Dentro del electrodo de vidrio hay un
El
esquema
del
circuito
de
un
alambre de plata con un extremo sumergido
potencimetro tpico se encuentra en la figura
en una solucin de HCl 0.1M. El bulbo de la
I.3. La sensibilidad del medidor se puede
parte inferior es de un vidrio especial,
ajustar para cambios de acuerdo a la
permeable a los iones H . La superficie
temperatura
interior de esta membrana de vidrio est en
temperatura). Con el botn de calibracin a
contacto con la solucin de HCl y la exterior
cero se introduce un voltaje lateral en el
con la solucin cuyo pH se quiere determinar.
circuito
En las dos superficies la membrana de vidrio
corresponda al pH de la solucin reguladora
absorbe agua y forma una capa de gel a
tipo. Los medidores de pH se construyen de
travs
de
la
cual
difunden
los
que
(botn
permite
de
que
control
la
de
lectura
iones
tal manera que el cero de la escala del
hidrgeno y desplazan a otros iones de la
potencimetro corresponda a un pH de 7. El
estructura del vidrio (como sodio) y esto
medidor se calibra antes de usarlo, primero
provoca el establecimiento de un potencial.

En una solucin amortiguadora que contenga
Cl se sumerge un electrodo de Ag/AgCl.

Cuando el electrodo se coloca en una
solucin cuyo pH es diferente al de la
solucin
amortiguadora,
diferencia
de
potencial
aparece
entre
los
una
dos
extremos, lo cual es una medida de la

diferencia de los dos valores de pH.
La determinacin ms precisa del pH
se realiza en un pH-metro que consiste,
fundamentalmente,
en un
potencimetro
diseado para emplearse con un sistema de

electrodo de vidrio. Como una unidad de pH
corresponde a 59 milivoltios a 25 C, el
con una solucin reguladora de pH 7,
mismo medidor se puede usar con dos
ajustando el cero para que d la lectura
escalas para hacer lecturas en mv o en pH.
exacta; se lava el electrodo con agua
112
destilada o desionizada y se calibra con una
del medio en que se mueve, la facilidad con
segunda solucin reguladora de pH 4 10;
la que se mueve una partcula cargada
se ajusta nuevamente el medidor, ahora con
depende
el control de temperatura, para que d la
inversamente
lectura exacta; luego se determina el pH de
viscosidad del medio.
la solucin problema.
directamente
de
su
de
su
tamao
carga
y
de
e
la
Existen dos tipos de electroforesis: la
frontal y la zonal.
Electroforesis
Electroforesis frontal o en medio
Una partcula coloidal o un ion provistos de
lquido. Es el mtodo clsico de Tiselius en el
carga elctrica emigran hacia el nodo o el
que la separacin de los componentes de
ctodo bajo la influencia de un campo
una mezcla se realiza en varios frentes o
elctrico externo. Si las partculas de una
lmites que se traslapan a lo largo del
mezcla tienen diferentes velocidades de
procedimiento. El movimiento de los frentes
desplazamiento, puede aprovecharse esta
se realiza en un canal vertical y la densidad
propiedad para separarlas. El empleo de
de la solucin por debajo del frente debe ser
fuerzas elctricas para lograr esta separacin
mayor que la de arriba, ya que en caso
se
depende
contrario el sistema de frentes se destruira.
fundamentalmente de la carga y no de la
En el mtodo, la solucin a separar se coloca
masa molar de las partculas cargadas. Esta
encima del medio amortiguador conductor.
tcnica
llama
se
electroforesis
la
La tcnica es difcil y costosa, aunque puede
pptidos,
presentar la ventaja de que se evitan las
nucletidos, cidos orgnicos y porfirinas,
interacciones de los solutos con cualquier
entre
importante
superficie y se eliminan as los efectos
considerar que en el caso de una protena su
adsorbentes y desnaturalizantes. Adems,
carga depende del pH del medio, por lo que
puede operarse en medios acuosos, a baja
es posible emplear la tcnica para determinar
temperatura y bajo condiciones favorables de
el punto isoelctrico de la misma.
pH y fuerza inica.
Electroforesis zonal. Uno de los
separacin
otros
ha
de
empleado
protenas,
compuestos.
Es
en
Si se aplica un campo elctrico a

travs de una solucin, la fuerza que acta
sobre las molculas cargadas de soluto
depende de la carga elctrica (e); del nmero
de cargas en la molcula (z), y de la fuerza
del campo elctrico (E). Inmediatamente
despus de poner a funcionar el campo, las
partculas cargadas se aceleran hasta que
alcanzan un equilibrio, o sea, cuando la
carga electrosttica queda equilibrada por la
fuerza de friccin que ejerce el medio
disolvente; entonces, se mueven a una
velocidad constante. La velocidad por unidad
de campo elctrico se denomina movilidad
electrofortica. Dado que la friccin depende
del tamao de la partcula y de la viscosidad
problemas que presenta la tcnica anterior es

la necesidad de estabilizar las zonas de
soluto contra la conveccin gravitacional y la
difusin. Esto origin el empleo de otra
tcnica de electroforesis: la electroforesis
zonal. En ella, el empleo de gradientes de
densidad, slidos porosos o fibrosos y geles
permite resolver el problema de la difusin y
de la conveccin gravitacional.
En este tipo de electroforesis la
mezcla de solutos a separar se aplica como
una mancha o una banda delgada en un
punto del canal electrofortico. Los solutos
migran con distintas velocidades (de acuerdo
a su movilidad) y se separan en zonas
discretas. La distancia de migracin es
113
directamente proporcional al voltaje aplicado

y al tiempo. Los solutos migran a travs del
solvente que baa un soporte slido. Este
soporte puede ser de diversa naturaleza y
cada uno presenta algunas ventajas y
desventajas en su uso. Los soportes ms
comunes son papel, acetato de celulosa,
almidn, agar, agarosa y poliacrilamida.
Dado que en el caso de los geles es posible
un manejo del tamao del tamizado para
lograr una mxima eficiencia en la
separacin, este mtodo es el ms usado en
bioqumica.
tal manera que se establezca el contacto con

las soluciones en que estn los electrodos.
Los
aparatos
se
tapan
para
evitar
la
evaporacin y para mantener una atmsfera

hmeda dentro del aparato.
Electroforesis en geles de agar y

agarosa.
El
agar
polisacridos que
es
una
mezcla
de
se obtiene de ciertas
especies de algas marinas. Est constituido

de dos componentes principales: uno lineal o
agarosa y uno ramificado y muy cido
llamado agar o pectina. El agar y la agarosa
son solubles en soluciones acuosas a 100oC
En la tcnica hay que cuidar algunos
y solidifican a temperatura ambiente; forman
aspectos que pueden afectar la separacin
geles de buena firmeza cuando se usan a
como: la seleccin adecuada del soporte, del
una concentracin de 0.5 a 2%. Su estructura
amortiguador, vigilar la temperatura de la
se mantiene por numerosos puentes de
cmara, la intensidad del campo elctrico, el
hidrgeno entre cadenas adyacentes de
tiempo, etctera.
polisacridos. El gel de agarosa ofrece
Electroforesis en papel y en acetato
ciertas ventajas sobre otros soportes; posee
de celulosa. La electroforesis en papel fue el
una porosidad elevada y uniforme, lo que
primer mtodo de separacin en zonas en un
favorece
campo elctrico. Es una tcnica sencilla y
sustancias cargadas, lo cual se traduce en
rpida, que requiere pequeas cantidades de
una mayor resolucin.
la
migracin
regular
de
las
muestra y que es especialmente til en las
Para realizar la electroforesis en
electroforesis de alto voltaje para separar
estos medios se prepara el gel sobre una
molculas de bajo peso molecular como
superficie de vidrio. Una vez solidificado el
aminocidos, pptidos, oligonucletidos y
gel, se hacen pocillos en l para aplicar en
otros compuestos orgnicos con grupos
ellos la muestra. Se lleva a cabo, o se
cargados. Ha sido muy utilizada en el mapeo
"corre", la electroforesis y, al final, se fija la
bidimensional de protenas (huella gnica),
preparacin, se tie y se seca. La tcnica se
para identificar diferencias entre protenas
ha
similares,
inmunodifusin en el anlisis inmunolgico
probar
que
una
protena
es
producto de otra de mayor tamao, etctera.

Dado que el papel tiene una alta
usado
en
combinacin
con
la
de protenas y en la cuantificacin de
protenas inmunoprecipitables.
actividad endosmtica*, lo que causa algunos
La electroforesis en agarosa ha
problemas en la electroforesis, ha sido
permitido el estudio de las molculas del
sustituido por el acetato de celulosa, que
DNA, cuyo tamao impide que puedan
tiene una estructura microporosa uniforme,
penetrar en los geles de poliacrilamida, pero
actividad endosmtica baja y en el que la
que penetran fcilmente en geles de agarosa
adsorcin de las protenas ha sido eliminada.
a 0.2%, si tienen un peso hasta de 150 x 10 ,
En los aparatos en que se realizan
o a 0.8% si pesan hasta 50 x 10 .
estas tcnicas el soporte se humedece al

sumergirlo en el amortiguador y colocarlo de
114
Es posible separar molculas de
como la urea y el SDS sin que sean
DNA que difieren slo 1% de peso molecular
afectados.
Tambin
segn sea la concentracin de la agarosa.
agentes
reductores
Para detectar las bandas, se sumerge el gel
mercaptoetanol o ditiotreitol para romper los
en una solucin de bromuro de etidio el cual
puentes disulfuro de las protenas.
se pega al DNA y fluoresce cuando se excita
pueden
emplearse
como
el
Las dos aplicaciones principales de
con luz ultravioleta. El peso molecular se
la
determina por la distancia de migracin.
determinacin de la pureza de protenas y el
Tambin se han usado estos geles de
anlisis de los componentes de una mezcla.
agarosa para la obtencin de mapas de
La electroforesis en gel de poliacrilamida en
restriccin, los que permiten ver diferencias
presencia de SDS tambin se ha empleado
entre dos molculas de DNA, localizar
en la determinacin de los pesos moleculares
mutaciones, detectar recombinaciones de
de protenas.
fagos, aislar fragmentos de DNA deseados,
Electroenfoque. Si se coloca una protena en
distinguir entre el DNA lineal, circular o
un gradiente de pH sujeto a un campo
superenrollado.
elctrico, se mover hasta alcanzar su punto
Electroforesis
en
geles
de
electroforesis
isoelctrico,
discontinua
donde
son
permanecer
la
sin
poliacrilamida. Los geles de poliacrilamida
moverse. Esta tcnica es lo que se conoce
son geles totalmente sintticos que han
como
sustituido a los geles de almidn en el
gradiente estable y continuo de pH se usan
estudio rutinario de protenas por mtodos
anfolitos sintticos de una gran variedad de
electroforticos. Esto ha sido posible gracias
pesos moleculares y rangos de pH. Cuando
a la gran facilidad con que puede variarse
se establece el campo elctrico, los anfolitos
segn el contenido total del monmero y su
migran y generan el gradiente de pH segn
grado
su
sus propios puntos isoelctricos. Esta tcnica
capacidad de filtrador molecular, se ha
ha sido utilizada en combinacin con la
empleado para separar compuestos con
separacin por pesos moleculares en la
base en su peso molecular para lo que se
electroforesis bidimensional como mtodo de
usa lauril sulfato de sodio (SDS) con el objeto
anlisis de protenas.
de evitar las diferencias individuales en las
*Nota:
cargas de las protenas.
elctrico a un lquido contenido en un soporte
Los amortiguadores que se usan pueden ser
no conductor el lquido se mover hacia uno
continuos (en los que se utiliza el mismo
u otro electrodo, en favor o en contra del
amortiguador
movimiento
de
entrecruzamiento.
en
los
Dada
tanques
de
los
electroenfoque.
Cuando
se
Para
aplica
electrofortico,
formar
un
un
potencial
alterando
la
electrodos y los sistemas electroforticos) y
movilidad electrofortica de las partculas
discontinuos, en los que hay dos tipos de
cargadas. Este fenmeno se conoce como
geles: el de separacin, o de poro cerrado,
endosmosis. Si el soporte est cargado,
en el cual se resuelven los componentes de
induce la orientacin de las cargas con signo
una mezcla (aqu es importante el uso del
opuesto en el lquido, lo que ocasionar al
amortiguador
aplicar la corriente elctrica que ocurra un
adecuado)
el
gel
concentrador, o de poro abierto, que sirve
flujo
para concentrar la muestra. A los geles se les
electrofortico. Este fenmeno es lo que se
puede
conoce como actividad endosmtica y puede
incorporar
sustancias
disociantes
del
lquido
dentro
del
canal
115
causar
problemas
en
las
separaciones
electroforticas.
cuantitativa, el soluto ni el solvente; los

mtodos cuantitativos ms comunes, que
sirven para expresar
la concentracin (la
SOLUCIONES
medida numrica de la cantidad relativa de
Una solucin es una mezcla homognea de
soluto en la solucin) de las soluciones, son
por lo menos dos componentes: una fase
las porcentuales, las molares y las normales.
dispersa, que es el soluto (sustancia que se

disuelve), y una dispersora que constituye el
Soluciones porcentuales
solvente o disolvente (la sustancia que
En las soluciones porcentuales no se toma
disuelve al soluto) y que, generalmente, se
en cuenta el peso frmula del soluto. En este
encuentra
Las
tipo de soluciones se debe especificar si la
soluciones ms utilizadas en bioqumica son
relacin es peso a peso (p/p), peso a
las que tienen agua como solvente.
volumen (p/v) o volumen a volumen (v/v).
en
mayor
proporcin.
La solubilidad de un soluto en un
Ejemplos:
solvente depende de la naturaleza de stos,
Solucin porcentual p/p. Solucin al
de la temperatura y, en el caso de un gas, de
10% de NaCl contiene 10 g de la sal por 100
la presin. La solubilidad generalmente est
g de solucin. El peso/peso porcentual
dada en gramos de soluto por 100 g de
expresa el nmero de gramos del soluto en
solvente.
100 gramos de la solucin final.
Se llaman soluciones diluidas las que

contienen
una
proporcin
relativamente
%p/p = g de soluto
pequea de soluto; se llaman soluciones
x 100
100 g de solucin
concentradas las que contienen una gran

cantidad
posibles
Solucin porcentual p/v. Solucin de NaCl
soluciones concentradas cuando el soluto es
de
soluto.
Slo
son
a 10% p/v: 10 g de NaCl en 100 ml de
muy soluble.
solucin. Esto expresa el nmero de gramos
Una solucin saturada contiene la
de soluto en 100 ml de la solucin final. En
cantidad de soluto disuelto necesaria para la
bioqumica, si no se especifica otra situacin,
existencia
las
de
un
equilibrio
entre
las
molculas disueltas y las molculas en
soluciones
porcentuales
deben
entenderse como p/v.
exceso que no estn disueltas. Esta solucin

se forma por medio de una vigorosa agitacin
con exceso de soluto. Existe una solucin
sobresaturada cuando en la solucin hay

presente ms soluto que en una solucin
saturada. Para prepararla se forma una
solucin saturada a temperatura elevada y se
enfra
cuidadosamente
para
evitar
la
cristalizacin. Las soluciones sobresaturadas

son inestables y con facilidad se convierten
en soluciones saturadas.
Las mencionadas soluciones son
poco precisas y no indican, de manera
%p/p = g de soluto
x 100
100 ml de solucin
Solucin porcentual v/v. Se utiliza

cuando el soluto y el solvente son lquidos. El
v/v indica el nmero de volmenes de soluto
por 100 volmenes de solucin. Solucin de
etanol a 30% v/v: 30 ml de ste en 100 ml de
solucin. Esto quiere decir que por cada 100
ml de solucin, 30 ml corresponden al soluto
y el resto, hasta completar 100 ml, al agua
destilada o al solvente empleado.
116
%v/v = volumen de soluto
x 100
Resultado: necesitamos 10.41 ml de
100 volmenes de solucin

Es
importante
insistir
alcohol de 96% y completar con agua

que
los
destilada hasta un volumen final de 50 ml.
trminos porcentuales expresan siempre una

relacin,
es
decir,
podemos
variar
los
volmenes siempre y cuando no perdamos

dicha relacin. Por ejemplo, si nos pidieran
preparar 50 ml de una solucin de alcohol
etlico a 20%, seguiramos el siguiente
Soluciones molares
Una solucin molar se define como el
nmero de moles de soluto en un litro de
solucin:
M= No. de moles
planteamiento:
litro de solucin
100 ml de sol. tienen 20 ml de alcohol puro

50 ml de sol. tienen x ml de alcohol puro
donde un mol es igual al peso atmico o

molecular expresado en gramos (tomo
X = 20 x 50 x 10
100
gramo o molcula gramo). Un mol contiene el

nmero
de
23
Avogadro
(6.023x10 )
de
partculas, tomos o molculas.

Resultado: necesitamos 10 ml de
alcohol puro y completar un volumen de 50
ml.
El alcohol etlico comn es de 96%
de pureza (v/v). Por lo tanto, si no contamos
con alcohol puro y quisiramos preparar una
solucin de alcohol a 20%, seguiramos el
siguiente planteamiento:
100 ml de sol. tienen 96 ml de alcohol puro
Si un mol de una sustancia se

disuelve en agua hasta un volumen de un
litro, se obtiene una solucin 1 molar (1M).
Por ejemplo, si quisiramos preparar
una solucin 1 molar de NaCl, tendramos
que considerar, primero, su peso molecular
(Na: 23 + Cl: 35.5 = 58.5) y este valor en
gramos disolverlo en agua, hasta completar
un litro.
X ml de sol. tienen 20 ml de alcohol puro
Ahora bien, si nos piden preparar 400

ml de una solucin 0.5 M de NaCl: cuntos
X= 20 x 100 = ml de solucin
96
Resultado: necesitamos 20.83 ml de
solucin de alcohol a 96% y completar un
volumen de 100 ml.
Si tan slo queremos 50 ml de esta
nueva solucin, entonces:
100 ml de sol. de alcohol a 20% tienen
gramos de NaCl deben pesarse?

1. Sabemos que un mol de NaCl es de 58.5
g.
2. Haremos el siguiente planteamiento:
Una sol. 1M tiene 58.5g de NaCl.
Una sol. 0.5M tiene X g de NaCl.
X= 0.5 x 58.5 = 29.25 g de NaCl
20.83 ml de alcohol a 96%
100
50 ml de sol. de alcohol a 20% tienen X ml

de alcohol a 96%
3. De acuerdo con la definicin de solucin

molar,
X= 50 x 20.83 = 10.41ml
los
29.25
de
NaCl
los
consideramos en un litro de solucin, pero
100
117
como nos piden preparar 400 ml haremos
Ejemplo: el peso equivalente de un
el siguiente planteamiento:
cido se calcula dividiendo el peso molecular
En 1000 ml de sol. hay: 29.25g de NaCl
entre el nmero de tomos de hidrgeno
En 400 ml de sol. hay: X g de NaCl
sustituibles en la molcula. El cido sulfrico

(H2SO4), de peso molecular 98, tiene dos
X= 400 x 29.25 = 11.7 g de NaCl
tomos de hidrgeno sustituibles en cada
1000
molcula; por lo tanto, su peso equivalente

es: 98/2 = 49.
Resultado: necesitamos 11.7 g de

NaCl
disolverlo
hasta
completar
El peso equivalente de un hidrxido
un
se calcula dividiendo el peso molecular entre
En este ejemplo, como podemos ver,
el nmero de grupos hidroxilo (OH ) de la

molcula. El hidrxido de aluminio Al (OH)3
volumen de 400 ml.

hemos
multiplicado
la
molaridad
del
contiene tres grupos OH por molcula; su
problema (0.5 mol/L) por el peso molecular
peso molecular es de 78; por lo tanto, su
de NaCl (58.5 g) y por el volumen del pro-
peso equivalente es 78/3 = 26.
blema (400 ml). Posteriormente dividiremos
El peso equivalente de una sal se
entre 1 litro (1 000 ml). Para simplificar el
calcula dividiendo el peso molecular entre la
procedimiento podemos aplicar la siguiente
valencia
frmula:
positivas) que contenga la frmula. La
V x PM x M = gramos de la sustancia
1000
total
de
los
cationes
(cargas
valencia del sodio es 1, y el sulfato de sodio

Na2SO4 (peso mo-lecular 144) tiene dos
iones de sodio en cada molcula; por lo
tanto, el peso equivalente del sulfato de sodio
En donde:
V=
Volumen del problema en ml.
PM =
Peso molecular de la sustancia en g.
M=
Molaridad del problema.
ser 144/2 = 72.

El peso equivalente de un oxidante
(reductor) se calcula dividiendo el peso

molecular entre el nmero de electrones
ganados (o perdidos) que puedan aportar por
Soluciones normales
Son las que contienen el peso equivalente de
una sustancia en gramos por litro de
solucin:
molcula.
Recordemos la frmula utilizada para
calcular la cantidad de sustancia necesaria
para preparar cualquier cantidad de una
N = peso equivalente
litro de solucin
solucin determinada:
Para calcular la cantidad de una sustancia
que se necesita pesar para preparar un
donde el peso equivalente de una sustancia

es el nmero de unidades de esta sustancia
que puede combinarse con una unidad de
hidrgeno:
volumen determinado de una solucin de

cualquier normalidad, se aplica una frmula
semejante:
V x Eq x N = gramos de la sustancia
Peso equivalente = peso molecular
1000
n
n = nmero de hidrgenos sustituibles.
118
Ejemplo: preparar una solucin 0.1 N

de cloruro de calcio (CaCl2) para obtener un
osmolalidad; en las soluciones muy diluidas,
volumen de 300 ml:
medidas son tan cercanas que con gran
como son las del cuerpo humano, las dos

frecuencia se utilizan indistintamente.
V =
300 ml
N =
Eq =
0.1
peso molecular del CaCl2
111/2 = 55.5
Sustituyendo=300 ml x 55.5 g x 0.01 N= 1.67
1000
La presin osmtica depende del

nmero de partculas y no de su carga, ni de
su masa; la misma fuerza osmtica es
ejercida por una molcula grande, como una
protena, con peso molecular de varios miles
y muchas cargas, como por una molcula de
+
Resultado: necesitamos 1.67 g de

CaCl2 para preparar 300 ml de una solucin
glucosa o un ion de Na o de Cl . As para

determinar
el
efecto
osmtico
de
una
solucin hay que sumar los efectos de todas
0.1 N.
las partculas incapaces de atravesar la

membrana independientemente de su peso
Soluciones osmolares
molecular.
El fenmeno de la smosis se presenta

cuando una solucin est separada de su
Por ejemplo: el cloruro de sodio en

solucin
acuosa
se
disocia
casi
solvente por una membrana semipermeable.
completamente en iones sodio (Na ) y cloruro
La smosis es la difusin de solvente a
(Cl ). Por lo tanto, cada molcula da origen a
travs de la membrana desde la parte de
dos partculas osmticamente activas, y una
menor a la de mayor concentracin. La
solucin osmolar contiene media molcula
presin osmtica es la presin que debe
gramo
aplicarse
gramos) por litro, o sea:
sobre
la
solucin
de
mayor
(peso
molecular
expresado
en
concentracin a fin de impedir el paso del

1 osm/l = 58.5/2 = 29.25 g/l tambin
solvente (smosis) a travs de la membrana.
1 mol de NaCl = 2 osm/l
Las membranas biolgicas tienen

permeabilidades dis-tintas y se dice que son
semipermeables,
es
decir,
que
son
permeables de forma selectiva para las

molculas
del
solvente
En cambio, la glucosa en solucin no

se disocia y para esta sustancia la solucin
osmolar contiene un mol en gramos por litro:
pequeas
1 mol de glucosa = 180 g/l = 1 osm/l
molculas, pero no permiten el paso libre de
La mayora de los lquidos corporales
todas las molculas disueltas.

cuantitativas
tiene una presin osmtica que concuerda
demuestran que la presin osmtica es
con la de una solucin de cloruro de sodio a
proporcional a la concentracin molar (para
0.9 % y se dice que esta solucin es
sustancias no disociables) del soluto, por lo
isosmtica con los lquidos fisiolgicos.
Las
mediciones
que una solucin osmolar es aquella que

contiene un mol de la sustancia en gramos
Soluciones isotnicas
en un litro de solucin; el osmol es una
Las soluciones isotnicas con respecto unas
medida del nmero total de partculas en
a otras ejercen la misma presin osmtica;
solucin. La concentracin expresada en
es decir, contienen la misma concentracin
osmol por litro se llama osmolaridad; el osmol
de partculas osmticamente activas. Cuando
por kilogramo de disolvente se denomina
se
habla
de
soluciones
isotnicas
en
119
el
laboratorio, suele tratarse de las que
tienen la misma presin osmtica que el

plasma
sanguneo,
ximadamente
de
que
0.3
es
osmolar
apro(300
miliosmoles). Las soluciones fisiolgicas de

concentracin menor a 300 mosm/l se llaman
hipotnicas; cuando su concentracin es
mayor
de
300
mosm/l
se
denominan
hipertnicas.
Una solucin es isotnica con
respecto a una clula viva cuando no ocurre
unidad de solucin original diluida a un

volumen final de 10, esto es, 1 volumen de
solucin original con 9 volmenes
solvente (volumen final = 10).
Para calcular la concentracin de la

solucin diluida se multiplica la concentracin
de la solucin original por la dilucin
expresada como fraccin.
Ejemplo: una solucin de 300 mg/100
ml se diluye en la razn 1:10. La
concentracin de la solucin final es:
ganancia ni prdida neta de agua en la

clula, ni se produce ningn otro cambio en
sta cuando entra en contacto con la
solucin.
El trmino isotnico, que significa:
igualdad de tono, se emplea en medicina
como sinnimo de isosmtico; pero los
trminos isotnico y tonicidad slo deben
emplearse en relacin con un lquido
fisiolgico. Por ejemplo, una solucin de
cido brico que es isosmtica con la sangre
y el lquido lagrimal, slo es isotnica con el
lquido lagrimal, ya que esta solucin
ocasiona hemlisis de los eritrocitos porque
las molculas de cido brico atraviesan
libremente la membrana eritrocitaria a
cualquier concentracin. En consecuencia,
isotonicidad
connota
compatibilidad
fisiolgica, mientras que isoosmoticidad, no
necesariamente. En otras palabras, la
tonicidad es una fraccin de la presin
osmtica total de la solucin; por tanto, la
tonicidad de una solucin no se puede
predecir nicamente por su composicin ya
que intervienen tambin las propiedades
distintivas de la membrana limitante.
de
300 x 1/10 = 30 mg /100 ml.

Si se hace ms de una dilucin, a
partir
de
una
misma
solucin,
la
concentracin de la solucin final se obtiene
al multiplicar la concentracin original por el
producto de las diluciones. Ejemplo: la
solucin anterior se diluye a su vez en la
razn 1:100. La concentracin de la solucin
ser: 300 x 1/10 x 1/100 = 0.3 mg/100 ml.
La dilucin y redilucin sistemticas
de
una
solucin
se
llaman
diluciones
seriadas. Para encontrar la concentracin en

un tubo dado de la serie, se multiplica la
dilucin en ese tubo por cada una de las
diluciones precedentes, incluida la del tubo
original.
Ejemplo: hacer una dilucin seriada
1:2, 1:4, 1:8, etctera, a un volumen final de
1 ml.
Paso 1: a 0.5 ml de la solucin a
diluir,
aadirle
etiquetarlo
0.5
como
ml
tubo
del
1
diluyente
(dilucin
1:2,
volumen 1 ml).
Paso 2: transferir a otro tubo 0.5 ml
de la dilucin anterior y agregarle 0.5 ml de
diluyente (dilucin 1:2). La dilucin final
Clculo y expresin de diluciones

La dilucin consiste en preparar una solucin
menos concentrada a partir de una solucin
inicial ms concentrada. Las diluciones se
expresan usualmente como una razn
matemtica, como 1:10. Esto significa una
obtenida se calcula al multiplicar la dilucin

del tubo 1 (o anterior) con la nueva dilucin
(1/2 x 1/2), igual a 1:4. Los pasos siguientes
se hacen igual que para el paso 2. En el
siguiente cuadro se muestra un resumen de
lo anterior.
120
Tubo
Dilucin
1. 0.5 ml(1)
= 0.5 ml (1) = 1:2(4)
0.5 ml (1) + 0.5 ml (2)

2. 0.5 ml(1)
1 ml (3)
= 0.5 ml (1) = 1:4 (4)
0.5 ml (1) + 0.5 ml (2)
1 ml (3)
es decir:
1/2 x 1/2
= 1:4
3.
1/4 x 1/2
= 1:8
4.
1/8 x 1/2
= 1:16
5.
1/16 x 1/2
= 1:32
(1) Volumen de la solucin original a diluir.

(2) Volumen del agua necesaria para la
dilucin.
(3) Volumen final.
(4) Dilucin obtenida.
(5) Volumen de la solucin diluida 1:2 (o
anterior).
MANEJO DE MATERIAL BIOLGICO

Se le llama material biolgico al conjunto de
seres vivos o sus productos utilizado en el
desarrollo del trabajo en el laboratorio. La
utilidad e importancia de este material es
muy grande ya que muchos fenmenos de
los seres vivos slo pueden estudiarse en
ellos
mismos,
por
ejemplo,
la
experimentacin de nuevos frmacos o los
mecanismos que se presentan en entidades
patolgicas y la produccin de las mismas en
forma experimental. Del correcto manejo
depender en gran parte el xito de la
experimentacin y la veracidad de los
resultados obtenidos. A continuacin se
darn algunas generalidades sobre el manejo
del material biolgico utilizado en las
prcticas de este Manual.
Animales
El animal utilizado ms comnmente en el
laboratorio de bioqumica es la rata. Para su
correcto manejo es importante la forma cmo
se sujeta, lo cual se har con firmeza, pero a
la vez, en forma suave para no lesionarla; no
debe demostrrsele miedo o repugnancia

para evitar que se ponga nerviosa e
intranquila, lo que puede ocasionar que
muerda.
La palma de la mano se coloca sobre
el dorso del animal; la cabeza de ste entre
el dedo pulgar y el dedo ndice; de esta
manera se logra su inmovilidad y es posible
levantar el animal y moverlo de lugar.
Muchas veces es necesaria la
inyeccin intraperitoneal de alguna sustancia,
para lo cual se sostendr al animal con una
mano, como se indic antes, mientras con la
otra se introduce la aguja de la jeringa
formando un ngulo de 10 con la pared
abdominal en el cuadrante inferior izquierdo,
ligeramente a la izquierda de la lnea media;
es importante mantener el ngulo de la aguja
porque, si ste se abre, la aguja puede llegar
a la vejiga o al intestino. Para tener la
seguridad de estar en la cavidad peritoneal,
hay que jalar el mbolo de la jeringa para que
se haga el vaco; si el vaco no se hace y, por
el contrario, se extrae lquido, es probable
que se haya puncionado la vejiga.
Para la extraccin de vsceras, como el
hgado, es necesario sacrificar al animal, lo
cual se logra fcilmente y con menor
sufrimiento para la rata anestesindola
descerebrndola, o sea, seccionando la

mdula espinal a nivel del cuello mediante un
golpe certero en este lugar contra el borde de
una mesa. Despus se prosigue a la
extraccin de la vscera y se abre la pared
abdominal con unas tijeras o bistur.
Extraccin de sangre para anlisis

El profesor a cargo del grupo deber estar
presente en el momento de la extraccin; de
lo contrario, por ningn motivo, el alumno
podr hacerla por su cuenta.
Procedimiento para obtener una muestra
de sangre venosa:
121
1. Para que un alumno sea considerado
obtener la muestra (por lo general,
como voluntario debern tomarse en
aparece una gota de sangre en la base de
cuenta algunos antecedentes como: no
la aguja). Una succin excesiva puede
padecer o haber padecido hepatitis o
causar colapso de la vena. Tirar del
alguna
mbolo de la jeringa hasta que se haya
otra
enfermedad
infectocontagiosa; no tener problemas de
extrado la cantidad de sangre deseada.
coagulacin y no ser muy aprensivo. El
5. Soltar la ligadura antes de extraer la aguja
donador (de preferencia con las venas
con un movimiento rpido y uniforme
visibles), estar sentado con el brazo
mientras que se ejerce una presin sobre
sobre la mesa.
la herida con una torunda.
2. Con una ligadura elstica, aplicar un
6. Mantener la presin por un momento o
torniquete en el brazo por encima del sitio
hasta que se haya detenido el sangrado.
de la puncin (esto causa congestin
Cubrir la puncin con una cinta adhesiva.
venosa y evita el retorno de la sangre). El
7. Retirar la aguja de la jeringa en el
uso prolongado del torniquete causa
contenedor de punzocortantes y vaciar lo
estasis
ms pronto posible la muestra de sangre
hemoconcentracin. Si las venas no se
de
la
sangre
en un tubo de centrfuga procurando
hacen prominentes, pedir al donador que
deslizar la sangre suavemente por la
cierre y abra la mano varias veces.
pared del tubo (si es que no se utiliz el
Escoger una vena fija y de buen calibre,
sistema Vacutainer).
localizarla y palparla con el dedo para

sentir su consistencia y trayectoria; antes
de puncionar, asegurarse de que la
jeringa no contenga aire y que el mbolo
se deslice suavemente. Las dimensiones
de la aguja y la jeringa dependen de la
cantidad de sangre que se necesita as
como del tamao e integridad de la vena
que se usa. Tambin se puede usar el
sistema Vacutainer que consiste en un
tubo al vaco, un mango y una aguja
recolectora de muestras mltiples.
3. Limpiar minuciosamente la zona con una
torunda humedecida con alcohol de 70 y
dejar secar espontneamente. Sujetar la
piel con el pulgar izquierdo; puncionar
primero la piel y luego penetrar la vena
con el bisel de la aguja hacia arriba
siguiendo el trayecto de la vena.
4. Despus que se ha entrado a la vena, la
sangre llenar los tubos vacos del
sistema vacutainer. Si se usa jeringa, se
necesita una ligera succin con sta para
Alerta clnica
Si es difcil detener el sangrado de la
puncin, elevar la zona y aplicar una cubierta
que presione. Los hematomas se pueden
evitar:
Usando una buena tcnica.
Aflojando el torniquete antes de retirar la
aguja.
Aplicando la presin suficiente sobre el
sitio de puncin despus de completar el
procedimiento.
La sangre obtenida puede tratarse de
diferentes maneras segn el empleo que se
le vaya a dar.
Para obtener suero. La sangre se
recibe en un tubo de ensayo o de centrfuga
seco y se deja coagular a temperatura
ambiente o en una estufa o bao de agua a
37 C. Si se va a trabajar inmediatamente
con el suero, separar con un aplicador de
madera el cogulo y centrifugar el resto del
tubo. Si se desea la separacin espontnea
del suero, se deja a temperatura ambiente
122
por unas horas para que el cogulo se
Precauciones generales: Se refieren a las
retraiga. Debe evitarse que el suero se
medidas
mezcle con porciones de cogulo; si esto
enfermedades transmisibles, especialmente
sucede, es necesario centrifugar y volver a
hepatitis B o SIDA y para evitar incendios,
separar el suero con una pipeta Pasteur.
cortaduras o exposiciones simples, de corta
Para obtener plasma. Hay que evitar

la
coagulacin
por
medio
de
un
anticoagulante (heparina, citrato de sodio o

EDTA) en el tubo que recibe la sangre.
para minimizar
duracin
la difusin de
accidentales
sustancias
qumicas peligrosas.
1. Manejar
cualquier
sangre,
plasma,
lquido
suero,
corporal,
orina,
tejido,
Mezclar suavemente por inversin.
cadver o cultivo como potencialmente
Centrifugar a 2 500 rpm durante 5 minutos y
infeccioso. Todas las sustancias qumicas
extraer enseguida el plasma sobrenadante
proporcionadas, equipos y materiales del
con una pipeta Pasteur; pasarlo a otro tubo.
laboratorio debern ser utilizados con el
La sangre, el plasma o el suero y

todos los recipientes que los contengan
deben
considerarse
potencialmente
como
infectante,
material
atendiendo
las
indicaciones de peligrosidad y cuidados

especficos, segn el caso.
2. Se debe conocer los smbolos y los
(torundas, agujas, tubos, etctera) debern
cdigos de color sobre las precauciones y
depositarse, de acuerdo a su clasificacin,
los peligros en el laboratorio. Asegurarse
en envases que tengan impreso el smbolo
de
de riesgo biolgico y entregarse a la
extinguidores, del botiqun y de las salidas
coordinacin
de emergencia.
laboratorio
lo
cuidado,
que
del
por
mximo
para
su
desinfeccin y desecho.
el
la
localizacin
de
3. Usar bata en el laboratorio, la cual deber

estar cerrada durante todo el tiempo que
MEDIDAS DE SEGURIDAD
Durante
conocer
desarrollo
del
curso
de
se permanezca en el laboratorio.
bioqumica, en el laboratorio se pueden llegar
4. Lavar las manos y usar guantes. Los
a utilizar sustancias o muestras biolgicas
guantes deben usarse para efectuar
que,
riesgos
punciones vasculares y para manipular
potenciales a la salud, debido a que pueden
sangre, lquidos corporales, cultivos de
ser: corrosivas, reactivas, explosivas, txicas,
microorganismos, sustancias o superficies
inflamables o biolgico infecciosas.
contaminadas.
en
ocasiones
Aunque
representan
los
laboratorios
se
Despus
del
uso
de
cualquier material biolgico, se procede al
consideran en general lugares de trabajo
lavado
seguros, esto es as slo cuando conocemos
puestos. Despus de quitarse los guantes
debemos
seguimos
las
normas
de
seguridad
existentes en la materia acerca de la

clasificacin, manejo y disposicin final de
estas
sustancias,
lo
cual
nos
permite
identificar los peligros y disminuir los riesgos.
de
manos
lavarnos
con
los
guantes
nuevamente
las
manos.
5. Todos los materiales desechables y no
desechables se deben descontaminar en
una solucin 1:10 de hipoclorito de sodio
de 4 a 7 % de concentracin, durante ms
Manejo
de
materiales
peligrosos
y/o
de 20 minutos antes de ser desechados.
biolgico infecciosos
123
6. Los
elementos
punzocortantes
desecharse en recipientes
deben
especiales
destinados para ello, los cuales deben

estar etiquetados con la leyenda que
indique "Peligro, residuos punzocortantes
biolgico-infecciosos" y marcados con el
smbolo universal de riesgo biolgico.
Nunca reencapuchar las agujas
contaminadas con hipoclorito de sodio al

1%, con alcohol al 70% o con agua
oxigenada.
las
fuertes y compuestos venenosos.

9. Seguir las indicaciones del profesor y del
personal a cargo del rea de prcticas. Es
una regla de laboratorio que todos los
accidentes personales, por triviales que
sean, se comuniquen inmediatamente al
profesor.
7. Limpiar las superficies potencialmente
8. Todas
fuertes, productos custicos, oxidantes
Nunca
realizar
actividades
experimentales sin la supervisin del

responsable del grupo.
10. Manejar
adecuadamente
los
residuos
peligrosos derivados de las prcticas,
sustancias
qumicas
son
identifique
su
nivel
de
riesgo
el
potencialmente txicas y peligrosas, por
mecanismo para su desecho. Queda
lo que se deber:
prohibido desechar sustancias a la tarja o
a) Conocer las propiedades (venenosas,

custicas o corrosivas) y el uso correcto
de las mismas.
del responsable del grupo. Las hojas de

seguridad correspondientes incluyen qu
hacer en caso de accidentes y la forma
b) Nunca probar, as como tampoco inhalar,

directamente
por cualquier otro medio, sin autorizacin
las
sustancias.
Para
determinar el olor se acerca la tapa del

frasco cuidadosamente a la nariz, o bien,
si se trata de sustancias voltiles o
vapores acercar stos con la mano a la
nariz.
c) Evitar el contacto de sustancias con la

piel, especialmente la cara; usar bata y
guantes para proteger la ropa y el cuerpo;
nunca dirigir un tubo de ensayo o la boca
correcta de desechar los residuos.

11. Indicaciones
incendios
generales
para
explosiones
solventes
al
evitar
utilizar
inflama-
bles. Los solventes inflamables (alcohol,

ter, cloroformo, acetona, tolueno, xilol,
etctera)
se
utilizan
en
todos
los
laboratorios, por lo que se recomiendan

las siguientes precauciones:
a) No fumar en el interior del laboratorio.
de un matraz con lquidos en ebullicin o
b) No utilizar la llama del mechero sin
material de reaccin hacia el vecino, o a
cerciorarse de que no hay cerca lquidos
s mismo, ya que puede proyectarse el
inflamables. No mantener el mechero
contenido; para las sustancias que no
encendido cuando est fuera de uso.
tienen un efecto pronunciado sobre la

piel, pero cuya ingestin es peligrosa,
evitar la contaminacin de alimentos,
cigarros o manos que despus se llevarn
a la boca o con las que se tocarn
c) Si se vierten accidentalmente sobre las

mesas, secar de inmediato con un trapo
hmedo y enjuagar ste en el chorro de
agua, exprimindolo.
alimentos (nunca ingerir alimentos en el
d) Nunca calentar un lquido orgnico sobre
laboratorio). Por ltimo, nunca pipetear
una flama. Para calentar, usar bao de
con la boca, especialmente los cidos
agua o parrilla elctrica.
124
En caso de incendio debe hacerse lo
encontrar
pictogramas
(smbolos
siguiente: para un incendio pequeo en un
internacionalmente aceptados y reconocidos)
vaso, un matraz, etctera, ste se cubrir con
que indican los riesgos principales. Los
un recipiente mayor o se ahogar el fuego
pictogramas de seguridad son:
con un trapo mojado o se combatir con un

extinguidor.
RIESGO BIOLGICO
Cuando el fuego sea de un solvente

derramado sobre la mesa o el piso, se
utilizar
un
extinguidor
de
bixido
de
carbono. Si el fuego no puede vencerse de

inmediato, se evacuar el laboratorio y se
avisar al departamento contra incendios de
Todo aquello que pueda contener
la institucin.
bacterias, virus u otros microorganismos con

12. Los
accidentes
ms
frecuentes
que
capacidad de infeccin o cuando contiene
ocurren en el laboratorio son las lesiones
toxinas producidas por microorganismos que
debidas a cortes, laceraciones, etctera,
causen efectos nocivos a los seres vivos.
por cristalera rota.
Ejemplo: jeringas, sangre.
En caso de heridas pequeas dejar
Medidas de prevencin: evitar el
que sangre unos segundos; tener cuidado de
contacto con los ojos, la piel y las vas
no dejar partculas de vidrio en la herida y
respiratorias. Utilizar elementos de proteccin
aplicar un desinfectante.
personal.
Las heridas de mayor importancia

deben ser atendidas por un mdico. Mientras
E = EXPLOSIVO
tanto, evitar el sangrado aplicando presin en

un punto ms arriba la herida o antes de ella
(no mantener la presin por ms de 5
minutos).
10. Casi siempre, los choques elctricos en
el laboratorio son de poca importancia;
las
precauciones
de
seguridad
se
deducen de la naturaleza del peligro.

Nunca tocar un aparato elctrico con las
manos hmedas o cuando se est
parado sobre un piso hmedo. Siempre
apagar y desconectar los aparatos antes
de cualquier manipulacin.
Es toda sustancia slida o lquida o

mezcla
de
sustancias
que
pueden
desprender gases a una temperatura, presin

y velocidad tales que pueden detonar,
producir violentas deflagraciones, o explotar
al
exponerse
al
calor
cuando
estn
parcialmente confinadas. Ejemplo: azida de

plomo, fluoruro de carbono.
Medidas
Pictogramas de seguridad
de
prevencin:
En las etiquetas de productos qumicos de
almacenarlas alejadas de otros productos,
uso
la
evitar todo choque, friccin y mantener
identificacin del contenido, calidad y lmite
alejadas de fuentes de calor, chispas o
de pureza de lo que contiene, podemos
fuego.
en
el
laboratorio
adems
de
125
F+ = EXTREMADAMENTE INFLAMABLE
Sustancias cuyo punto de ignicin es menor
O = OXIDANTE
de 0C y su punto de ebullicin mximo de

Sustancias
oxgeno
cuando
capaces
de
reaccionan
aportar
con
otra
35C.
F = INFLAMABLE
sustancia, por lo que cuando entran en
Sustancias lquidas cuyo punto de ignicin es
contacto con combustibles o inflamables
menor a 40C. Ejemplo: etanol, tolueno, ter
avivan
dietlico.
la
reaccin
pudiendo
desarrollar
reacciones violentas. Ejemplo: nitrito de

sodio, hiposulfito de sodio.
Medidas de prevencin: mantener

alejado de fuentes de calor, de ignicin o
Medidas de prevencin: mantener

alejadas de las sustancias combustibles o
eventuales
chispas,
de
materiales
combustibles y oxidantes.
inflamables, ya que pueden favorecer los

incendios y dificultar su extincin.
N = NOCIVO PARA EL MEDIO

AMBIENTE
Xn = NOCIVO
Sustancias de menor toxicidad pero
Aquellas
sustancias
preparados
que
pueden causar daos a la salud. Tambin se
cuando son liberados al medio ambiente
incluyen aquellas mezclas o preparados que
pueden presentar un efecto inmediato o
tienen alguna sustancia que puede ser txica
diferido,
pero
especie. Ejemplo: tiourea, o-toluidina.
que
se
encuentra
una
baja
peligro
alguna
los derrames alcancen los desages, tratar
Xi = IRRITANTE
que
en
Medidas de prevencin: evitar que
concentracin en la mezcla.
Sustancias
poniendo
pueden
causar
irritacin a la piel, mucosas, o los ojos, por
los residuos en condiciones ambientalmente

adecuadas.
contacto inmediato, prolongado o repetido,

pudiendo
tambin
provocar
inflamacin.
Ejemplo: cloroformo, SDS, hipoclorito de

sodio, aminoantipirina.
personal.
T+ = ALTAMENTE TXICO, T TXICO

Sustancias que pueden causar dao en
forma aguda o crnica a la salud o causar la
126
muerte si son inhaladas, ingeridas o se
El smbolo de la N.F.P.A. (National Fire
absorben por la piel, an en pequeas
Protection Association)
cantidades.
Ejemplo:
azida
de
sodio,
dinitrofenol, bromuro de etidio.
identificacin de riesgos de un producto
Medidas de prevencin: evitar todo

contacto
directo.
proteccin
Utilizar
personal.
El smbolo de la N.F.P.A. es un sistema de
elementos
Emplear
de
qumico,
en
tres
categoras
"salud",
"inflamabilidad"
principales:
"reactividad"
estrictas
indicando el grado de severidad por medio de
medidas de higiene personal y del ambiente
una escala numrica desde (4) que indica el
del laboratorio.
riesgo mayor, (3) riesgo severo, (2) riesgo

moderado, (1) riesgo menor, hasta (0) que
representa ausencia de riesgo.
Este smbolo es til para alertar
acerca del riesgo de ese producto y, a su
vez, puede ayudar a determinar los cuidados
a tener en cuenta en el almacenamiento y en
C = CORROSIVO
caso
Sustancias capaces de atacar y destruir los

tejidos orgnicos si entran en contacto con
ellos
bien
atacar
ciertos
metales
materiales. Ejemplo: hidrxido de sodio,

cido clorhdrico, cido actico.
de
derrames
informacin
se
presenta
por
medio de una estructura espacial en forma

de rombo principal, dividido a su vez en otros
cuatro.

personal.
El rombo azul a la izquierda identifica

el riesgo para la salud. El rombo rojo en la
parte
superior
indica
el
riesgo
por
inflamabilidad. El rombo amarillo a la derecha

seala
Identificacin
sobre
los
riesgos
especficos y los consejos de prudencia

asignado
esa
el
riesgo
por
reactividad
inestabilidad. El rombo blanco en la parte

inferior indica riesgos especiales tales como:
Frases "R" stas advierten acerca del riesgo

comn
emergencias,
La
ms
de
salpicaduras.
sustancia
W reactivo al agua, COR corrosivo, AIR

reactivo al aire, OXY oxidante. Ejemplo:
qumica, por medio de la enumeracin de

riesgos especficos en frases cortas que son
adaptables a las distintas sustancias.
Las frases "S" brindan los consejos
de prudencia o las medidas de prevencin
ms importantes relacionadas con el riesgo
C
o
n
asignado a esa sustancia qumica y que

permitirn
su
almacenamiento
manipulacin
en
forma
segura.
y
En
algunos casos se mencionan combinaciones
cido clorhdrico
de frases R o de frases S, cuando dos o ms

riesgos tienen relacin entre s (cuadro I.6).
127
Hojas de seguridad
Residuos
especiales
CRETI:
son
Cada prctica cuenta con las hojas de
aquellos residuos que constituyen un peligro
seguridad para cada reactivo o sustancia que
para
se utilice en el laboratorio.
agresivas
Las
hojas
de
seguridad
proveen
la
salud
por
tales
Reactividad,
sus
caractersticas
Corrosividad,
como:
Explosividad,
Toxicidad
informacin sobre (cuadro I.7, pg. 100):
Inflamabilidad Es importante no olvidar que,
Los componentes de un producto, su
la mezcla de residuos municipales con
reactividad,
las
principales
medidas
las
precautorias
advertencias
ms
importantes.
residuos biolgico infecciosos hace que se

consideren en su totalidad como biolgico
infecciosos, mientras que la mezcla de
Los elementos de proteccin personal que
residuos biolgico infecciosos con peligrosos
se recomienda emplear en la manipulacin.
CRETI se deben consideran como peligrosos
Las vas de ingreso y los rganos blanco.
CRETI.
Las medidas por derrame accidental y de

primeros auxilios.
Envasado y etiquetado de RPBI para su
La informacin toxicolgica.
Las
recomendaciones
para
su
almacenamiento.
Las condiciones para la disposicin de los
residuos.
instituciones
de
enseanza
investigacin as como en hospitales y

clnicas contienen residuos no peligrosos o
municipales, residuos biolgico infecciosos y
residuos especiales.
Residuos
peligrosos
biolgico
infecciosos (RPBI): es todo aquello que ha

en
contacto
con
pacientes
animales, sus muestras biolgicas y/o cepas

de microorganismos, se clasifican en: sangre,
cultivos, patolgicos (tejidos, rganos, partes
y fluidos corporales, etctera), no anatmicos
(gasas, algodones, jeringas, etctera)
punzocortantes (lancetas, agujas, pipetas

Pasteur, etctera).
Residuos municipales: son aquellos

que no representan peligro para la salud y
sus
acuerdo con sus caractersticas fsicas y

biolgico infecciosas conforme la norma
Es importante destacar que todos los
Los residuos que se generan en laboratorios
entrado
Los residuos RPBI deben ser envasados de
oficial mexicana 087-ECOL-95 (cuadro I.8).
Clasificacin de los residuos

de
desecho.
caractersticas
son similares
residuos domsticos comunes.
a los
envases tengan impreso el smbolo universal

de riesgo biolgico y leyendas que indiquen
la peligrosidad de los residuos y el tipo de
residuos que contienen.
Los
contenedores
para
punzocortantes deben de ser: De color rojo.

De paredes rgidas.
De polipropileno.
Resistentes
fracturas
prdida
del
contenido al caerse.
Destruibles por mtodos fisicoqumicos.
Esterilizables y con tapa, la que puede tener
o no separador de agujas.
Precauciones: depositar los RPBI, de
acuerdo a su clasificacin, inmediatamente
despus de su generacin.
No compactar los residuos durante el
envasado y no mezclar residuos de diferente
clasificacin.
Una vez identificados, separados y
envasados
peligrosos,
correctamente
el
personal
los
residuos
responsable
del
128
laboratorio se encargar de su recoleccin,

tratamiento y disposicin final as como de
las medidas necesarias para la desinfeccin,
esterilizacin y limpieza del material y equipo
utilizado en el laboratorio.
Frases R
Frases S
Combinacin de frases
R7
Puede provocar incendios
S3
Conservar en sitio fresco R 20/21
Nocivo por inhalacin y contacto por la piel
R 23
Txico por inhalacin
S 20
No comer ni beber
durante la manipulacin
R 39/25
Txico: peligro de efectos irreversibles graves por

ingestin
R 36
Irrita los ojos
S 29
No tirar los residuos por

los desages
S 3/7
Mantenga el contenedor bien cerrado y en un lugar

fresco
R 45
Puede ser cancergeno
S 37
Llevar guantes de
proteccin adecuados
S 36/37/39
Utilice ropa protectora adecuada, guantes y

proteccin facial o gafas
Cuadro I.6 Ejemplos de frases S y R
Manejo de residuos CRETI

El manejo, consistente en la separacin,
envasado y almacenamiento de cada uno de
los reactivos peligrosos CRETI utilizados en
las prcticas deber realizarse de acuerdo a
cada reactivo en cuestin segn lo indicado
en las hojas de seguridad.
El manejo de accidentes, tales como
derrames, ingestin o salpicaduras, as como
la aplicacin de primeros auxilios debern de
realizarse de acuerdo al reactivo en cuestin
segn lo indicado en la hoja de seguridad.
Las hojas de seguridad sern proporcionadas
para cada prctica en el laboratorio.
De manera general, los envases

destinados a los residuos CRETI deben
ser de cristal de color mbar, con
capacidad de uno a cuatro litros, latas de
aluminio para solventes (capacidad
mxima de 20 litros) y, en algunos casos
recipientes de plstico, siempre y cuando
las caractersticas fisicoqumicas de la
sustancia a envasar lo permita. Cada
residuo debe envasarse en forma
individual y colocar en el frasco
respectivo el pictograma de seguridad
correspondiente.
129
cido clorhdrico
Identificacin
Frmula qumica: HCl
Apariencia y olor: solucin de color ligeramente
amarillo o incolora
con olor caracterstico muy penetrante.
Marcaje liqudo corrosivo
Sinnimos: cido muritico, cloruro de hidrgeno.
Generalidades
Est presente en el sistema digestivo de muchos
mamiferos y una deficiencia de ste provoca
problemas en la digestin; un exceso provoca
lceras gastricas. La disolucin acuosa grado
reactivo contiene aproximadamente 38% de HCl.
Propiedades fsica y qumicas
PM: 36.46
Solubilidad: soluble en agua
pH de disoluciones acuosas: 0.1 (1.0N), 4.0(0.001N).
Reacciona con la mayora de los metales
desprendiendo hidrgeno.
Con agentes oxidantes como perxido de hidrogeno
genera cloro, el cual es muy peligroso.
Niveles de toxicidad.
DL50 (oral en conejos): 900 mg/Kg, inhalacin en
ratas): 3124 ppm/1 h.
CLMo
(concentracin
(inhalacin
en
letal
humanos)
minima
1300
publicada):
ppm/30
min;
3000ppm/5 min.
Riesgos
Produce gas inflamable cuando se encuentra en
contacto con metales. Se generan v apores txicos e
irritantes de cloruro de hidrgeno cuando se calienta.
Inhalacin: elgas causa dificultad para respirar, tos,
inflamacin y ulceracin de nariz, trquea y laringe.
Exposiciones severas causan espasmo de la laringe
y edema en los pulmones.
Contaco con los ojos y piel: es un irritante severo de
ojos y piel, puede causar quemaduras serias,
dermatitis, reducir la visin o, incluso, la prdida total
de sta.
Ingestin: produce corrosin de las membranas
Primeros auxilios
Ojos: lavar inmediatamente con agua corriente
durante 15 mi nutos.
Piel: quitar ropa y zapatos contaminados, lavar
inmediatamente la zona daada con abundante
agua.
Inhalacin: mover a la persona al aire fresco; si se
dificulta la respiracin proporcionar oxigeno y
mantenerlo caliente y en reposo, no dar a ingerir
nada.
Ingestin: no provocar vmito y dar a beber agua
continuamente, por ejemplo, una cucharada cada 10
minutos o dar a beber leche de magnesia.
En todos los casos de exposicin, el afectado debe
ser transportado al hospital tan pronto como sea
posible.
Manejo y almacenamiento
Peligro: corrosivo y venenoMantngase en envase
de vidrio, en lugares secos, bien ventilados, alejados
de materiales oxidantes y fuentes de ignicin o calor.
Tratamiento en caso de accidente
Control de fuego: en caso de accidente utilizar CO2,
polvo qumico seco o arena seca. Los extinguidotes
de fuego se eligen dependiendo de los alrededores,
ya que el HCl no arde.
Fugas y derrames: ventilar el rea y protegerse con
el equipo de seguridad necesario. Cubrir el derrame
con bicarbonato de sodio o una mezcla de 50:50 de
hidroxido de calcio y cal
sodada, mezclar
cuidadosamente. Mantener el materil lejos de fuentes
de agua y drenajes hasta no ser neutralizado como
se indic anteriormente.
Desechos
Neutralizar las soluciones concentradas de cido
clorhdrico con carbonato de calcio o cal y diluir con
agua cuidadosamente. La disolucin resultante
puede verterse al drenaje, con abundante agua. En
caso de soluciones diluidas,
mucosas de la boca, esfago y estmago, causa

nusea, vmito, disfagia, sed intensa y diarrea
Cuadro I.7. Hoja de seguridad para el cido Clorhdrico.
130
Cuadro I.8 Envasado y etiquetado de RPBI para su desecho.
TIPO DE RESIDUO
ESTADO FSICO
ENVASADO
COLOR
Sangre
Slido
Lquido
Bolsa de plstico
Recipiente hermtico
Rojo
Cultivos y cepas de
agentes infecciosos
Slidos
Lquidos
Bolsa de plstico
Recipiente hermtico
Rojo
Residuos
anatmicos
Slidos
Lquidos
Bolsa de plstico
Recipiente hermtico
Rojo
Slidos
Lquidos
Bolsa de plstico
Recipiente hermtico
Amarillo
Slidos
Recipientes rgidos
Rojo
Patolgicos
Objetos
punzocortantes
usados y sin usar
no
131
II
EXPERIMENTOS
132
Prctica 1
Soluciones
Tiempo de la prctica 3 horas
Objetivos
Que el alumno:
1. Identifique la existencia de soluciones en los sistemas biolgicos.
2. Explique los clculos y procedimientos para preparar soluciones porcentuales, molares
y normales, as como las diferentes diluciones de stas.
3. Presente ejemplos de soluciones utilizadas en medicina (solucin isotnica, Ringer,
Darrow y Hartman).
Responda a las siguientes preguntas:
1.Qu es una solucin?
2.Cuntas clases de soluciones existen?
3.Qu significan los siguientes trminos: mol, solucin molar y solucin normal?
4.Qu significan: v/v, p/v, p/p y ppm?
5.Cul es la composicin de las siguientes soluciones: solucin isotnica de cloruro de
sodio, suero glucosado al 5%, Ringer-lactato?
6.Cules son los tipos de soluciones que existen in vivo? Mencionar ejemplos.
7.Qu es una solucin isotnica?
8.Qu es una solucin osmolar?
9.Cmo se calcula la osmolaridad de una solucin?
10.Qu les pasa a los eritrocitos cuando se ponen en contacto con soluciones salinas de
diferente osmolaridad?
11.Qu se entiende por dilucin y dilucin seriada de las soluciones?
Material
Por equipo:
3 vasos de precipitado de 10 ml
3 pipetas de 1.0 ml
3 pipetas de 5.0 ml
3 pipetas de 10.0 ml
Gradilla con 6 tubos de ensayo
Eritrocitos humanos lavados en solucin
Salina isotnica
Solucin de azul de metileno al 1.0%
Cloruro de sodio en cristales (NaCl)
Balanza granataria
Por grupo:
1 Microscopio marca Leica.
Procedimiento
1. Hacer los clculos correspondientes para comprobar que la solucin a 0.9% de NaCl es
isotnica con respecto al plasma (ver pag. 121). Considerar que:
133
a) El cloruro de sodio se disocia en solucin acuosa en los iones sodio y cloruro, por lo
que la concentracin inica se duplica (1 mmol/l = 2 mosm/l).
b) La presin osmtica normal del plasma es de 290-310 mosm/l.
2. Preparar 20 ml de una solucin de NaCl a 4.5% (etiquetar como solucin 1).
3. A partir de la solucin anterior, preparar 25 ml a 0.9% (solucin 2) y 50 ml a 0.045%
(solucin 3).
4. Colocar en tres tubos de ensayo las diferentes soluciones de cloruro de sodio
preparadas en los puntos 1 y 2. Con la ayuda de un gotero (dejando caer lentamente por
las paredes del tubo) 2 gotas de eritrocitos lavados. Mezclar con cuidado y dejar reposar a
temperatura ambiente unos minutos. Valorar el grado de hemlisis que sufren los
eritrocitos cuando se ponen en contacto con las diferentes soluciones.
5. De las 3 soluciones prepradas tomar una gota de cada una y por separado colocarlas
en un porta-objetos, colocar un cubre-objetos y observarlas al microscopio, para valorar el
efecto de los eritrocitos.
Ver las intrucciones para el uso del microscopio
6. Hacer la dilucin y redilucin (dilucin seriada) de la solucin de azul de metileno como
se muestra en el siguiente cuadro:
DILUCIN SERIADA DE AZUL DE METILENO
de
Tubo H2O (ml) Sol
azul
de
metileno
1
2
0.5 ml*
2
2
3
2
4
2
5
2
6
2
-
Volumen de
transferenci
a
0.5 ml
0.5 ml
0.5 ml
0.5 ml
0.5 ml
*Nota: para mezclar al hacer las diluciones se debe succionar y soplar con cuidado la
pipeta en cada tubo varias veces antes de transferir la dilucin al siguiente tubo.
Resultados
1. Expresar en forma ordenada los clculos efectuados para cada uno de los ejercicios.
2. Deducir el movimiento o no del solvente cuando se ponen en contacto eritrocitos con
soluciones hipo, hiper e isoosmticas.
3.
Calcular la dilucin y la concentracin de azul de metileno en cada uno de los seis
tubos de la dilucin seriada (ver pg. 93). Asegrese que la coloracin obtenida disminuya
gradualmente conforme avanza la dilucin.
Problemas
1. Hacer los clculos para preparar una solucin de KCl al 3%.
2. Hacer los clculos para prepara una solucin de CaCl2 0.25 M se requieren 15 ml.
134
3. Calcular el volumen de H2SO4 se requiere para preparar una solucin 3N 40 ml

volumen final.
4.- Prepare 500 ml de una solucin 0.125 M de NaHC03
5.- 250 ml de H2SO4 0.1 M
6.-100 ml de glucosa 0.5 M
7.-Cuantos mililitros de HCl 0.1M contiene 0.025 mol de HCl
8.-Cuantos gramos de soluto se requieren para preparar las siguientes soluciones:
125 ml de NaCl al 10%
50 ml de Ca(NO3) al 3.35 %
750 ml de CaCl2 al1.5%
9.-Cual presenta la osmolaridad ms alta NaCl 0.1M o Na2SO4 0.08 M
10.-Cunta agua habr que aadirles para que resulte un suero 0.4 osmolar?
11.- Calcular la osmolaridad a partir de la composicin de algunas soluciones como
Dextrosa a 10 % en solucin salina a 0.45%.
12.-Dextrosa a 5 % en solucin salina a 0.2 %.
Hartman, Ringer y Darrow
Referencias
1. Villazn SA, Crdenas CO,Villazn DO, Sierra UA. Fluidos y electrlitos. Mxico: JGH
Editores; 2000.
2. Pea-Daz A, Arroyo BA, Gmez PA, Tapia IR, Gmez EC. Bioqumica. Undcima
reimpresin de la 2a. ed. Mxico: Editorial Limusa; 2004.
3. Laguna J, Pia E. Bioqumica de Laguna. 5a.ed. Mxico: Editorial El Manual Moderno;
2002: p. 41-56.
4. Holum JR. Fundamentos de qumica general, orgnica y bioqumica para ciencias de la
salud. Mxico: Editorial Limusa Wiley; 2001.
5. Farias GM. Qumica clnica. Dcima edicin Mxico: Editorial El Manual Moderno;
1999.
6. Bloomfield MM.Qumica de los organismos vivos. Mxico: Editorial Limusa; 1997.
135
INSTRUCCIONES PARA EL USO DEL MICROSCOPIO MARCA LEICA

1. Nunca use un adaptador entre el
cable y la fuente de alimentacin.
2. Use siempre el microscopio sobre una
superficie dura y estable.
3. Conecte el cable de alimentacin del
microscopio a una toma de corriente con
conexin a tierra. Se suministra un cable
de tres terminales con toma a tierra.
4. Encienda el microscopio girando el
interruptor de control de la iluminacin
situado en la parte inferior izquierda del
instrumento.
5. Coloque el interruptor de control de la
iluminacin en el nivel ms bajo. El
control de iluminacin le permite ajustar
la intensidad de luz.
6. Abra completamente el diafragma de
apertura del condensador girando el
anillo hacia el extremo derecho.
7. Usando el botn de enfoque del
condensador, suba el condensador hasta
el
extremo
superior
de
su
desplazamiento.
Iluminacin
critica
nicamente: si el desplazamiento del
condensador es excesivo, limtelo con
el tornillo situado debajo de la platina
hasta que la lente superior del
condensador se encuentre debajo de la
superficie de la platina.
8. Coloque la preparacin de la muestra
con la muestra en la platina.
utilizando el
micromtrico.
mando
de
enfoque
11. Ajuste los tubos oculares a la

distancia de los ojos.
12. Al trmino del uso del microscopio
retirar la muestra de la platina.
13. Bajar la platina hasta el tope y
regresarla a su posicin original si es
necesario.
14. Colocar el revolver de los objetivos
de manera que el objetivo de 4X sea el
que quede en direccin de la lmpara.
15. Desconectar el equipo y enrollar el
cable.
16. Limpiar la platina y oculares con un
pao humedecido con metanol o con un
limpia cristal comercial.
17. Colocar al microscopio la funda
contra el polvo para mantenerlo en
buenas condiciones fsicas y mecnicas.
Partes del microscopio:
1) Oculares.
2) Revolver con 4 objetivos 4X, 10X, 40X
y 100X.
3) Platina.
4) Diafragma.
5) Lmpara.
Tornillo de la platina para desplazar la
muestra.
Interruptor de control de la iluminacin.
Tornillo macromtrico.
Tornillo micromtrico.
9. Gire el revlver hasta situar el

objetivo 4X en la posicin de trabajo.
(pag X)
10. Suba la platina girando el mando de
enfoque macromtrico
hasta que
observe la preparacin y, finalmente,
enfoque la muestra con precisin
6
9
3
4
136
Prctica 2
Regulacin del equilibrio cido-base

despus del ejercicio muscular intenso
y de la ingestin de bicarbonato de sodio
Tiempo de prctica: 3 horas
Objetivos
1. Al finalizar la prctica, el alumno
constatar las actividades reguladoras
del pulmn y el rin para mantener el
equilibrio cido-base en condiciones que
tienden a romperlo.
2. Mediante la determinacin del pH
observar
la
variacin
de
la
concentracin de hidrogeniones en la
orina de un individuo que ha realizado
ejercicio muscular intenso.
3. Relacionar los resultados obtenidos
con los cambios metablicos originados
por el ejercicio muscular intenso.
Conteste las siguientes preguntas:
1. Por qu es importante que se
mantenga constante, dentro de ciertos
lmites, el pH en el organismo?
+
2. Cules son las fuentes de iones H
en el organismo?
3. Cules son los sistemas reguladores
+
que facilitan la eliminacin del H
producido en el organismo con el fin de
mantener constante el pH sanguneo?
4. Cules son las reacciones de
formacin del cido carbnico (H2CO3) a
partir de CO2 y H2O, y de su disociacin
para formar el ion bicarbonato?
Escrbalas.
5. Qu sistemas amortiguadores
participan directamente en la regulacin
del pH sanguneo?
6.
Cules
son
los
sistemas
extrasanguneos que tienden a mantener
el pH extracelular?
Escriba la ecuacin de Henderson y
Hasselbalch aplicada al sistema HCO3

/H2CO3 y, con base en ella, conteste la
siguiente pregunta:
a).Cmo
participan
el
aparato
respiratorio y el rin en el control del pH
sanguneo?
INTRODUCCIN
Dentro de los mecanismos de regulacin
de que dispone el organismo para
mantener la integridad fisiolgica,
aquellos involucrados en la homeostasis
del pH en los fluidos extracelulares
desempean un papel crucial para la
supervivencia del individuo. En este
sentido cabe sealar que, como
resultado de la oxidacin de los
alimentos, un humano adulto promedio
produce alrededor de 20 moles de CO2
al da, Al difundir a la sangre, gran parte
de dicho gas se combina con al agua en
el interior de los eritrocitos, produciendo
cido carbnico (H2CO3), reaccin que
es seguida por la disociacin del H2CO3
para producir el anin bicarbonato HCO3y un in hidrgeno (H+). Dado el carcter
de cido dbil del H2CO3, la fraccin
disociada del mismo es pequea; sin
embargo, considerando la gran cantidad
de CO2 que produce el organismo, la
acidificacin de los fluidos extracelulares
sera importante en ausencia de
mecanismos reguladores. En el hombre,
la intervencin de los pulmones y los
riones evita que ocurra tal acidificacin
manteniendo en un nivel constante la
137
concentracin de H+ y, por consiguiente,

del pH.
Para entender el papel que
juegan
ambos
rganos
en
la
homeostasis del equilibrio cido-base,
debe tenerse presente que el sistema del
cido carbnico implica la participacin
de un componente gaseoso o voltil (el
CO2) y dos componentes no voltiles (el
HCO3- y el H+). En la sangre, el equilibrio
entre dichos componentes determina el
valor del pH sanguneo, que puede
evaluarse mediante la bien conocida
ecuacin de Henderson-Hasselbach. En
el individuo normal, dicho valor fluctua en
un promedio 7.4, siendo la sangre
venosa enriquecida en CO2 ligeramente
ms cida en relacin con la sangre
arterial. Ahora bien, ya que a
temperatura ambiente el CO2 existe en
estado gaseoso, la cantidad de CO2
disuelto en la sangre depender de la
presin parcial (PCO2) ejercida por el
mismo a nivel de los alvolos
pulmonares. En el mundo, la magnitud
de dicha PCO2 es de aproximadamente 40
mmHg , lo que se traduce en una
concentracin de CO2 sanguneo de
aproximadamente 25 mM; este ltimo
valor incluye no solo el CO2 como tal,
sino tambin el bicarbonato y el cido
carbnico.
Considerando
el
pH
sanguneo normal y el pKa del sistema
bicarbonato-cido carbnico, la relacin
[HCO3-] / [H2CO3
+ CO2] es de
aproximadamente 20. Es precisamente
la PCO2 la que es controlada por los
pulmones, ya que durante el proceso de
la
exhalacin
se
elimina
CO2,
manteniendo constante la PCO2 en los
alvolos y evitando as que que aumente
el nivel de CO2, disuelto en la sangre.
Todo proceso o patologa que se
Por lo que respecta a los riones,
su participacin en el mantenimiento de
un pH extracelular constante se da a
travs de dos mecanismos: la excrecin
de equivalentes cidos (H+) hacia la orina
y la regulacin de la cantidad de HCO3reabsorbido hacia la sangre desde el
filtrado glomerular. A diferencia del
intercambio gaseoso en los pulmones,

los mecanismos de regulacin renal son
de situaciones patolgicas donde se
altera el intercambio de gases pulmonar
(es decir, en la acidosis y alcalosis
respiratorias), en cuyo caso es necesario
aumentar o disminuir la tasa de
reabsorcin del HCO3- , o bien en
estados fisiolgicos que producen
cantidades importantes de cidos
orgnicos (por ejemplo, en la diabetes no
controlada o durante el ejercicio intenso)
donde se incrementa la excrecin de H+
Gran parte de este ltimo aparece en la
orina acomplejado con el amoniaco en
forma de in amonio (NH4+) o asociado
con el fosfato en forma de fosfato
monobsico de sodio (NaH2PO4),
representando este ltimo la llamada
acidez titulable. En general, el pH de la
orina ser un reflejo de la produccin de
cidos no voltiles por el organismo.
El resultado final de los
mecanismos fisiolgicos que participan
en el mantenimiento del equilibrio cidobase es el de mantener el pH
extracelular en un rango compatible con
el
funcionamiento
adecuado
del
organismo manifieste en una alteracin
en la frecuencia y/o profundidad del
proceso de inhalacin-exhalacin, dar
como resultado una alteracin de la PCO2
alveolar
aumentandola
o
disminuyndole
-con
la
siguiente
modificacin del del nivel de CO2]
Material
Diez probetas o vasos de precipitado.
Orina.
Solucin de bicarbonato de sodio a 3%.
Potencimetro.
Mtodo
Un alumno por equipo desayunar o
comer normalmente (evitar ingestin de
jugos cidos); despus har lo que se
indica a continuacin.
1. Tomar 250 ml de agua una hora antes
de la clase prctica. Vaciar la vejiga y
descartar esa orina.
138
2.
Tomar
250
ml
de
inmediatamente antes de la
prctica.
agua
clase
3. Orinar en un vaso de precipitado de

100 ml. Anotar el volumen de la muestra.
4. Ingerir 250 ml de agua.
5. Realizar ejercicio muscular intenso,
como subir y bajar varias veces las
escaleras de tres o cuatro pisos u otro
ejercicio sugerido por el profesor.
6. Obtener muestras de orina cada 15
minutos, como en el inciso 3, hasta
completar por lo menos cinco muestras.
7. A cada muestra se le determinar el
pH inmediatamente despus de haber
sido obtenida ya que con el tiempo el pH
tiende a aumentar debido a la prdida de
dixido de carbono y a que el
crecimiento
bacteriano
produce
amoniaco a partir de la urea.
Anlisis de resultados
Una vez obtenido el valor del pH para
cada una de las 5 muestras de orina,
trazar una grfica de pH contra tiempo;
interpretar los resultados y discutirlos en
grupo.
Objetivos (Segunda parte)
1. El alumno constatar el papel del rin
en el mantenimiento del equilibrio cidobase en una situacin de alcalosis
metablica provocada por la ingestin de
bicarbonato de sodio.
2. Mediante la medicin del pH, observar
la variacin de la concentracin de
hidrogeniones en la orina de un individuo
que ha ingerido una carga de
Orina
Solucin de bicarbonato de sodi al 3%
Potencimetro
Mtodo
1. Tomar 250 ml de agua una hora antes
de la clase prctica. Vaciar la vejiga y
descartar esa orina.
2.
Tomar
250
ml
de
inmediatamente antes de la
prctica.
agua
clase
3. Orinar en una probeta de 100 ml.

Anotar el volumen de la muestra.
4. Ingerir 250 ml de agua con 7.5 g de
5. Obtener muestras de orina cada 15
minutos, hasta completar por lo menos 5
muestras.
6. A cada muestra se le determinar el
pH inmediatamente despus de haber
sido obtenida.
Una vez obtenido el valor del pH para
cada una de las cinco muestras de orina,
trazar una grfica de pH contra tiempo;
interpretar los resultados y discutirlos en
grupo.
Referencias
1. Devlin TM. Bioqumica. Libro de texto
con aplicaciones clnicas. 4a. ed.
Barcelona: Editorial Reverte; 2004.
2. Montgomery R. Bioqumica: casos y
texto. 6a. ed. Editorial Harcourt-Brace;
1998: cap.4.
3. Villazn SA, Crdenas CO, Villazn.
Hiptesis
Elabore la hiptesis apropiada.
Material
139
Prctica 3
Cintica enzimtica.
Efecto de la concentracin del sustrato
sobre la velocidad de reaccin enzimtica
Objetivo
El alumno:
1. Explicar el efecto de la concentracin
de sustrato sobre la velocidad de una
reaccin enzimtica.
2. Calcular por mtodos grficos la
velocidad mxima y la constante de
Michaelis de una reaccin enzimtica.
3. Conocer los diferentes tipos de
inhibidores que existen y estudiar su efecto
sobre la Km y V mx.
4. Conocer
aspectos
bsicos
de
fotocolorimetra (ver pg, 115).
Para lograr los objetivos de esta prctica
contestar las siguientes preguntas:
1. Qu es la velocidad de una reaccin
enzimtica?
2. Cmo se define la constante de
Michaelis (Km) de una reaccin enzimtica?
3. Cmo se define la velocidad mxima (V
mx) de una reaccin?
4. Para qu le sirve a un mdico la
determinacin de la actividad de algunas
enzimas?
5. Cules son las
enzimas cuya
determinacin tiene valor diagnstico?
Hiptesis
Si la velocidad de una reaccin enzimtica
es proporcional a la concentracin del
sustrato; cuando la concentracin del
sustrato es muy alta, por lo tanto la enzima

se satura y alcanza su velocidad mxima.
La enzima que sirve de modelo en esta
prctica es la glucosa oxidasa acoplada a la
peroxidasa.
INTRODUCCIN
Las enzimas son las protenas ms
notables de la naturaleza; sin ellas, la vida
como la conocemos no sera posible. Las
enzimas son catalizadores, esto es,
aceleran la velocidad de las reacciones
sobre las que actan sin consumirse en el
proceso. El poder cataltico de las enzimas
es mucho mayor que el de los catalizadores
inorgnicos, algunas de ellas estn
limitadas solo por la velocidad con que
colisionan
con
sus
sustratos;
son
catalizadores perfectos.
Aunque las reacciones que ocurren
en la clula son termodinmicamente
favorables, la velocidad a la cual transcurren
la mayora de ellas es extremadamente
lenta; sin la presencia de las enzimas, las
reacciones necesarias para sostener la vida
ocurriran a una velocidad incompatible con
sta. Adems de su enorme poder
cataltico, las enzimas son altamente
especficas por sus sustratos y tienen la
capacidad de regular su velocidad en
respuesta a las concentraciones de sustrato
y la presencia de inhibidores, activadores,
reguladores alostricos, etc. As pues, las
enzimas desempean un papel central en
los
procesos
biolgicos,
son
las
responsables de degradar y sintetizar las
molculas que nos forman y de extraer,
140
transformar y utilizar toda la energa

relacionada con estos procesos. Por ltimo,
las enzimas son las responsables de regular
y coordinar todas las reacciones que
ocurren en un organismo para lograr el
delicado balance que representa la vida.
El primer modelo matemtico que
explic de manera general la cintica de las
enzimas no alostricas, donde la velocidad
de
la
reaccin
se
incrementa
hiperblicamente conforme aumenta la
concentracin de sustrato, fue propuesto en
1913 por Leonor Michaelis y Maud Menten a
partir de los trabajos previos de Victor Henri
y Archibald Hill. Este modelo postula la idea
central de que la enzima y el sustrato libres
establecen un equilibrio rpido con el
complejo enzima-sustrato; en un segundo
paso ms lento, este complejo se rompe
liberando el producto y regenerando la
enzima libre. La ecuacin de MichelisMenten explica la relacin entre la velocidad
de la reaccin catalizada por una enzima y
la concentracin de sustrato a travs de los
dos parmetros de la ecuacin, Vmax y Km.
La ecuacin de Michaelis-Menten puede ser
re-arreglada matemticamente para obtener
su forma lineal, permitiendo determinar de
manera sencilla los parmetros cinticos de
una enzima a travs del grafico de
Lineweaver-Burk. Este mismo grfico
permite inspeccionar rpida y visualmente
las diferentes formas de inhibicin
enzimtica.
El estudio de las enzimas es de
suma importancia dentro de las ciencias
mdicas; las enzimas estn implicadas en el
origen, diagnostico y tratamiento de una
gran cantidad de patologas y es claro que
en el futuro, su preponderancia ser cada
vez mayor. Por ejemplo, la deficiencia de
algunas enzimas, como las proteasas de la
coagulacin en la hemofilia, es causa de
enfermedades hereditarias. La presencia
anormal de algunas enzimas en el torrente
sanguneo ayuda a diagnosticar el dao
especfico de tejidos, este es el caso de la
amilasa y lipasa en las patologas
pancreticas y las transaminasas en las
enfermedades hepticas. Las enzimas son
tambin el blanco de varios frmacos: la
aspirina inhibe a la ciclooxigenasa, el

omeprazol a la ATPasa de protones y el
captopril a la enzima convertidora de
angiotensina; estas inhibiciones redundan
en un efecto teraputico. La capacidad de
producir enzimas recombinantes abri la
posibilidad de utilizarlas rutinariamente con
fines teraputicos, tal es el caso de la
estreptocinasa para la terapia fibrinoltica en
el infarto agudo al miocardio. Es claro que
todas estas aplicaciones no serian posibles
sin la previa y profunda comprensin de la
estructura y funcin de estas fascinantes
molculas.
Fundamento
El mtodo se basa en el hecho de que la
glucosa, en presencia del oxgeno del aire y
con la participacin de la glucosa oxidasa,
se oxida hasta cido glucnico. El perxido
de hidrgeno que se forma en el curso del
proceso se descompone mediante la
peroxidasa. El oxgeno atmico que se
desprende en esta ltima reaccin se
combina con un cromgeno que se colorea
al oxidarse. La intensidad de la coloracin
del cromgeno oxidado es proporcional a la
concentracin de glucosa.
La glucosa oxidasa (-D-glucosa: oxgeno
xidorreductasa, EC1.1.2.4) tiene un peso
molecular de 160 000. Existe en forma
dimrica y contiene dos moles de FAD
como grupo prosttico por mol de enzima.
La glucosa oxidasa es altamente especfica,
hecho que ha permitido su empleo para el
anlisis cuantitativo de glucosa. La reaccin
consiste de dos pasos:
1. Glucosa+glucosa oxidasa-FAD
-gluconolactona + glucosa oxidasa-FADH2
2. Glucosa oxidasa-FADH2 + O2
glucosa oxidasa-FAD + H2O2
La
4-gluconolactona
se
hidrata
espontneamente dando cido glucnico.
La reaccin global se expresa:
Glucosa oxidasa
141
Glucosa + O2
Acido glucnico +
H2O2
La peroxidasa cataliza la transferencia de
oxgeno del perxido a un aceptor que es
cromgeno como la ortotoluidina, la
ortodianisidina,
la
2,2-azino-bis
(3etilbencentiazolin-6-sulfnico) o la 4-aminoantipirina (y fenol) que se colorean al
oxidarse. La reaccin se expresa:
E+S
ES
E+P
Material y reactivos
2 Gradillas con 8 tubos de ensaye cada
una.
1 Pipeta de 5 ml.
2 Pipetas de 5 ml.
1 Matraz Erlemeyer de 100 ml.
Fotocolormetro con filtro azul.
Solucin estndar de glucosa 40 mmol/l y
una dilucin 1:10 de sta para los tubos 2, 3
y 4.
2 frascos con solucin de enzimas: 41.6
Uml1 de glucosa oxidasa, 4.6 Uml1 de
peroxidasa, ortodianisidina 0.21 mmol/l.
Solucin de azida de sodio 400 mmol/l
como inhibidor.
Gotero con HCl.
Mtodo I (con azida de sodio)
1. En un matraz Erlenmeyer de 100 ml
preincubar 20 minutos la solucin de
enzimas con 0.3 ml del inhibidor.
2. Preparar la siguiente serie de tubos (tabla
1).
3.- Considerar un intervalo de 30 segundos
para cada tubo al agregar la enzima.
4.- Agitar cada tubo e incubar 5 minutos
temperatura ambiente y de inmediato
detener la reaccin agregando 3 gotas de
HCl concentrado. Considerar un intervalo de
Tubo Solucin
No.
glucosa (ml)
1
2
3
4
5
6
7
8
dil 1:10
dil 1:10
dil 1:10
de H2O
(ml)
0.0
0.1
0.25
0.5
0.1
0.25
05.
1.0
1.0
0.9
0.75
0.5
0.9
0.75
0.5
0.0
Soucin
de
enzimas
(ml)
3
3
3
3
3
3
3
3
30 segundos para cada tubo al agregar el

HCl.
Mtodo II (sin inhibidor)
1.- Preparar nuevamente una serie de tubos
como lo indica la tabla 1.
2.- Repetir los paos 3 y 4 del Mtodo I
Leer ambas series de tubos en el
fotocolormetro; utilizar como blanco el tubo
1
Resultados (cuadro 5.2)
1. Clculo de la concentracin inicial de
sustrato en cada tubo; tomar en cuenta que
la solucin de glucosa contiene 40 molas
ml1.
2. La velocidad ser igual a las unidades
Klett por .5 min-1 de incubacin.
3. Con los datos obtenidos completar el
cuadro 5.2 y hacer las dos grficas en papel
milimtrico.
4. Hacer una segunda grfica con los
valores de 1/v vs 1/[S].
5. Calcular el valor de la velocidad mxima
(Vmx) y de la constante de Michaelis (Km)
con y sin inhibidor.
6. Determinar el tipo de inhibidor de
acuerdo con las grficas del punto anterior.
7. Analizar si los resultados obtenidos estn
de acuerdo con la hiptesis planteada.
142
Instrucciones para la operacin del

fotocolormetro Klett-Summerson
1. Antes de encender el fotocolormetro
cercirese que el filtro (F) est en su
sitio. La luz sin el filtro puede daar la
fotocelda.
2. Asegrese que la aguja indicadora (C)
est en cero. En caso contrario, ajstese
a cero con la perilla (D) que slo debe
usarse cuando la lmpara del colormetro
est apagada.
3. Encienda el foco con el interruptor de la
derecha y deje que el instrumento se
caliente hasta que se equilibre su
operacin.
Cinco
minutos
son
suficientes.
4. Ajuste la escala del potencimetro (B) a
cero usando la perilla (A).
5. Ponga una cubeta limpia llena con el
blanco de reactivos en el hueco del
instrumento en tal forma que la marca
del tubo (ej. Pyrex) se site directamente
al frente. Es una buena prctica limpiar la
superficie externa de la cubeta con un
pauelo desechable antes de cada
lectura. Slo deben usarse tubos
seleccionados como "cubetas" para las
determinaciones.
6. Por medio de la perilla (G) ajuste la
lectura del galvanmetro a cero; esto es,
la aguja (C) debe coincidir con el trazo
central y, al mismo tiempo, con la escala
(B) en cero.
7. Para leer las soluciones problema retire
el blanco y ponga en el hueco del
instrumento la cubeta con la solucin
problema. La aguja (C) se desviar de su
posicin en la lnea de cero; por medio
de la perilla (A) grese la escala (B) hasta
que la aguja (C) sea llevada
exactamente a cero. La lectura de la
escala (B) se anota y corresponde a la
lectura del problema; lase nicamente
hasta la marca ms prxima. Cualquier
intento de apreciar mayor exactitud es
innecesario, pues la construccin del
instrumento no proporciona una precisin

mayor.
8. Contine con la lectura de otros
problemas y, de vez en cuando,
compruebe el cero con el blanco.
Referencias
Omega; 2005.
3. Mathews CK, van Holde KE. Bioqumica.
3a.
ed.
Espaa:
McGraw-Hill
Interamericana; 2003.
4. Voet D, Voet JG, Pratt C. Fundamentals
of biochemistry. USA: John Wiley and
Sons; 1999.
143
Tubo
No.
Concentracin de
sustrato molas
de glucosa inicial
ml-1
ABCISAS (X)
Velocidad de la
reaccin unidades
Klett 5 min-1 1/V
ORDENADAS (Y)
1
2
3
4
5
6
7
8
Velocidad de la
reaccin con
INHIBIDOR 1/V
Unidades Klett
5 min1 (Y)
Tubo
No.
Concentracin de
sustrato molas
de glucosa inicial
ml-1
ABCISAS (1/X)
Velocidad de la
reaccin unidades
Klett 5 min-1
ORDENADAS (1/Y)
Velocidad de la
reaccin con
INHIBIDOR
Unidades Klett
5 min -1
1
2
3
4
5
6
7
8
Cuadro 5.2 Resultados

Cuadro 5.3 Resultados (inverso)
144
Prctica 4
Efecto de la insulina sobre la glucemia de la rata

Tiempo de Prctica: 2 Horas
Esta
prctica
es
una
simulacin
compuratizada de un fenmeno bioqumico;
tiene el propsito de que los alumnos se
ejerciten en el manejo de los datos
obtenidos por medio de experimentacin
simulada estrictamente controlada.
Objetivos
1. Que el alumno compruebe el efecto de la
insulina sobre la glucemia de la rata.
2. Relacione sus conocimientos sobre el
metabolismo de la glucosa y los
mecanismos del control de la glucemia y los
mecanismos del control de la glucemia en
un modelo experimental sencillo.
Conteste a las siguientes preguntas:
1. Qu es la insulina y cul es su funcin?
2. Dnde se sintetiza y cuntas cadenas
tiene?
3. Qu se sabe del mecanismo por medio
del cual acta?
4. Por qu la insulina se tiene que inyectar
y no se debe administrar por va bucal?
Hiptesis
Si la glucemia en la rata se modifica por la
accin de la insulina, la rata control
mostrar una glucemia diferente a la
experimental.
Analizar
la
hiptesis
apropiada.
Mtodo
1. Encender la computadora y localizar el
icono del programa. El efecto de la insulina
sobre la glucemia de la rata. Hacer doble
clic sobre este icono.
2. Hacer clic sobre los botones que indican
cada de las partes de la prctica; empezar
por leer las
instrucciones, los objetivos y el fundamento

de la prctica para continuar con la parte
experimental.
3. Seguir todos los pasos de la prctica;
poner especial atencin en la obtencin de
los datos experimentales que dbern ser
anotados en papel como cualquier prctica
convencional.
4. Repetir el experimento las veces que el
usuario quiera, o las veces que sean
necesario, hasta obtener los datos
completos del experimento. Se sugiere
repetirlo por lo menos dos veces y hacer un
promedio de los datos obtenidos.
5. Hacer una tabla con dichos datos,
graficarlo, analizar el significado de los
mismos y, de acuerdo a lo anterior, validar o
rechazar la hiptesis del experimento.
1. Analizar si los resultados obtenidos estn
de acuerdo con la hiptesis planteada.
2. Plantear cul sera el resultado esperado
si se hubiera trabajado con ratas diabticas.
3. Relacionar los datos con el control
hormonal de la glucemia.
4. Hacer el informe de la prctica con los
resultados y las conclusiones que de stos
se deriven.
Referencias
Omega; 2005.
145
Prctica 5
Estudio del bombeo de protones por levaduras;

efecto de los inhibidores de la cadena de
transporte de electrones y de los desacoplantes
Objetivos
1. Que el alumno relacione el consumo de
glucosa con los cambios de pH producidos
por las levaduras.
2. Que el alumno describa las vas por las
cuales la glucosa genera los cambios de
pH.
3. Que el alumno interprete el efecto de
los inhibidores y los desacoplantes sobre
la salida de protones.
Responda a las siguientes preguntas:
1. Cules son las fuentes de carbono
que usa la levadura?
2. Cules son las vas metablicas que
catabolizan a los carbohidratos?
3. En qu consisten la gluclisis y la
fosforilacin oxidativa?
4. Cules son los productos finales del
catabolismo de los carbohidratos en las
levaduras?
5. Cules son los inhibidores de la
cadena respiratoria de los sitios I, II y III?
Describa su efecto sobre el consumo de
O2 y la sntesis del ATP.
6. Cul es el mecanismo por medio del
cual los protonforos desacoplan la
fosforilacin oxidativa? Describa su efecto
sobre el consumo de O2 y la sntesis del
ATP.
Las levaduras Saccharomyces cerevisiae
son organismos unicelulares que se
dividen por gemacin. En comn con otras
clulas eucariontes, las levaduras tienen
un
ncleoen
donde
reside
la
informacin gentica de la clula,

mitocondrias en donde se lleva a cabo la
sntesis de ATP y un retculo
endoplsmico y aparato de Golgi que se
encargan de la sntesis de protenas cuya
localizacin final es la membrana
plasmtica o el exterior.
A nivel de la membrana plasmtica, las
levaduras tienen una ATPasa de H+ que
acopla la hidrlisis del ATP con el bombeo
de protones hacia afuera de la clula.
Esta protena es semejante desde un
punto de vista estructural y funcional a la
ATPasa de Na+/K+ de las clulas animales
y, al igual que la bomba de sodio/potasio,
se
inhibe
con
concentraciones
micromolares
de
vanadato.
Como
resultado de la actividad de la ATPasa de
H+ en la levadura, se genera un gradiente
electroqumico de protones que se utiliza
para impulsar el transporte de nutrientes al
interior de la clula, proceso catalizado por
sistemas
de
transporte
llamados
simportadores o uniportadores. Para darse
una idea de la importancia de esta enzima
en la economa celular y en la
energizacin de la membrana celular,
basta decir que la ATPasa de H+ consume
hasta un 25 % del ATP que se sintetiza en
la clula.
+
Adems de esta ATPasa de H de la
membrana plasmtica, las levaduras
tienen otra bomba de protones en la
membrana interna de las mitocondrias, la
ATP sintasa, que se encarga de la sntesis
del ATP. En contraste con la enzima de
membrana plasmtica, el flujo de protones
146
a travs de la ATP sintasa induce la

sntesis de ATP. Uno de los inhibidores
ms efectivos de esta enzima es la
oligomicina.
As, se puede proponer uno de los
muchos ciclos en los que interviene el
ATP en la levadura: por un lado, el ATP se
sintetiza en la mitocondria por medio de la
ATP sintasa, y a nivel de la membrana
+
plasmtica, la ATPasa de H lo hidroliza
para bombear protones al exterior de la
clula. El factor comn en ambos casos es
un flujo de protones a travs de la
membrana.
Hiptesis
Si las levaduras consumen glucosa, se
observar una disminucin progresiva de
su concentracin en el medio de cultivo
con el tiempo y cambios en el pH
extracelular.
2. Determinar el pH de la solucin y repetir

la medicin dos veces ms con intervalos
de 3 minutos para obtener la lnea basal.
3. Adicionar 5 ml de glucosa a 10 %, agitar
y medir el pH.
4. Determinar el pH de la solucin cada 5
minutos 4 veces, y luego cada 10 minutos
2 veces ms.
EXPERIMENTO 2 (DINITROFENOL)
1. Diluir 5 ml de la levadura con 40 ml de
agua destilada.
2. Aadir por decantacin (no pipetear) 0.2
ml de la solucin de dinitrofenol 40 mmol/l,
concentracin final de 200 mol/l.
4. Esperar 5 minutos.
5. Repetir los pasos 3 y 4 del experimento
control.
Material
Tres vasos de precipitado de 100 ml.
Pipetas de 5 y 10 ml.
Potencimetro.
Piceta para enjuagar el electrodo del
potencimetro.
Levadura (Saccharomyces cerevisiae)
200 mg/ml.
Solucin de glucosa (10%) para una
concentracin final de 1%.
Solucin de dinitrofenol 40 mmol/l en
etanol.
Solucin de azida de sodio 400 mmol/l.
Agua destilada.
Mtodo
Experimento 1 (control)
EXPERIMENTO 3 (AZIDA)
1. Diluir 5 ml de la levadura con 40 ml de
agua destilada.
2. Aadir por decantacin (no pipetear) 0.5
ml de la solucin de azida de sodio 400
mmol/l, concentracin final de 5 mmol/l.
Agitar con cuidado.
4. Esperar 5 minutos.
5. Repetir los pasos 3 y 4 del experimento
control.
6. Registrar sus datos en la siguiente
tabla.
1 .Diluir 5 ml de la levadura con 40 ml de

agua destilada.
147
Tiempo
(min)
pH
Glucosa
Azida de
Dinitrofe
sodio
nol
0
5
10
15
20
30
40
mamferos
(ver
3. Hacer una relacin de las vas que

producen estos cambios; tomar en cuenta
que las levaduras poseen una ATPasa de
protones en la membrana mitocondrial que
se encarga de sintetizar ATP y que tienen
otra ATPasa de protones en la membrana
plasmtica cuya funcin es similar a la
+
+
bomba de Na /K en las clulas de los
7.1).
Referencias
1. Pea A. Studies on the mechanism of
K+ transport in yeast. Arch Biochem
Biophys. 1975; 167:397-409.
+
2. Pardo JP. La ATPasa de H de la
membrana plasmtica de los hongos.
Mensaje Bioqumico. 1990; 13: 119-172.
Glucosa
1. Hacer una grfica de cada uno de los

experimentos; utilizar los valores de las
lecturas de pH contra tiempo.
2. Analizar el significado de los cambios
de pH en el experimento control, con
dinitrofenol como desacoplante y con
azida de sodio.
fig.
ADP + Pi
Glucosa
H
ATP
ADP
ATP
Etanol
+
H H
NAD NADH ADP + Pi

ATP
Acetaldehdo
Mitocondria
ADP
ADP
148
Prctica 6
El efecto del etanol sobre la lipoperoxidacin

Esta
prctica
es
una
simulacin
compuratizada de un fenmeno bioqumica;
tiene el propsito de que los alumnos se
ejerciten en el manejo de los datos
obtenidos por medio de experimentacin
simulada estrictamente controlada.
Mtodo
icono del programa. El efecto de la insulina
sobre la glucemia de la rata. Hacer doble
clic sobre este icono.
2. Hacer clic sobre los botones que indican
cada de las partes de la prctica; empezar
por leer las instrucciones, los objetivos y el
fundamento de la prctica para continuar
con la parte experimental.
poner especial atencin en la obtencin de
los datos experimentales que debern ser
anotados en papel como cualquier prctica
convencional.
4. Repetir el experimento las veces que el

usuario quiera, o las veces que sean
repetirlo por lo menos dos veces y hacer un
promedio de los datos obtenidos.
mismos y, de acuerdo a lo anterior, validar o
rechazar la hiptesis del experimento.
Referencias
Omega; 2005.
149
Prctica 7
Estudio general del metabolismo

de los carbohidratos
Objetivos
1. Aplicar los conocimientos generales
sobre los carbohidratos a su estudio en los
tejidos o lquidos corporales.
2. Conocer el metabolismo de la glucosa.
3. Conocer las alteraciones ms
frecuentes del metabolismo de los
carbohidratos.
4. Conocer los aspectos bsicos de las
determinaciones del laboratorio clnico
para valorar el funcionamiento del
metabolismo de los carbohidratos.
5. Describir los principios analticos para la
determinacin de glucosa y fructosaminas,
llevar a cabo sus determinaciones y
correlacionar los valores obtenidos con
los valores normales de glucosa y
fructosaminas en suero o plasma.
Conteste las siguientes preguntas:
1. Qu son los carbohidratos y cmo se
clasifican?
2. Cules son las funciones que
desempean los carbohidratos en el
organismo humano?
3. Cmo se lleva a cabo la digestin y
absorcin de los carbohidratos?
4. Cules son las vas metablicas en las
que participan los carbohidratos?
5. Qu es la glucemia y cmo se regula?
6. Cules son las principales alteraciones
de la digestin, absorcin y metabolismo
de
los
carbohidratos
(dficit
de
glucosidasas intestinales, malabsorcin
intestinal de azcares, enfermedades del
metabolismo de la fructosa y de la
galactosa, diabetes mellitus, secuelas de

la diabetes, glucogenosis, etctera)?
7. Cul es el mecanismo por el cual la
glucosa puede causar dao a los tejidos
(glucosilacin proteica: formacin de
bases de Schiff, puentes glucosdicos
AGE).
8. Cules son las pruebas de laboratorio
ms utilizadas para el estudio de los
carbohidratos corporales?
INTRODUCCIN
La glucosa es cuantitativamente el
carbohidrato ms importante del que
dispone el cuerpo, ya sea por absorcin
de la dieta o por sntesis interna. Por
consiguiente, la mayora de las pruebas
clnicas estn basadas en el estudio del
metabolismo de la glucosa. Se conocen
varias alteraciones de este metabolismo,
clasificndolas como:
Primarias, alteraciones en el metabolismo
de carbohidratos (diabetes mellitus,
hiperinsulinismo, entre otras).
Secundarias,
manifestaciones
que
acompaan
a
otras
enfermedades
(sndrome
de
Cushing,
afecciones
hepticas, hipofisiarias o tiroideas, entre
otras).
Entre los procedimientos diagnsticos
para valorar el funcionamiento del
metabolismo de los carbohidratos los ms
importantes son los siguientes:
Glucosa plasmtica en ayunas.
Glucosa en orina.
Cuerpos
cetnicos
en
sangre
(cetonemia) y en orina (cetonuria).
150
Prueba oral de tolerancia a la glucosa.

Hemoglobina glucosilada.
Fructosaminas.
Determinacin
de
hormonas
relacionadas con el metabolismo de
carbohidratos (insulina, pptido "C" y
glucagn).
Determinaciones de enzimas y sustratos
hidrocarbonados en clulas y tejidos.
Otras
determinaciones
(microalbuminuria,
determinaciones
inmunolgicas
y
determinacin
de
receptores).
Para llevar a cabo la determinacin de
glucosa plasmtica en ayunas (basal)
utilizaremos un mtodo enzimtico
colorimtrico y para la determinacin de
glucosa y cuerpos cetnicos en orina
utilizaremos tiras reactivas.
Material
Gradilla con 3 tubos de ensayo.
Pipetas de 0.1 y 1 ml.
Solucin reactiva para glucosa: TRIS 92
mmol/l, pH 7.4; fenol 0.3 mmol/l, glucosa
oxidasa 15 000 U/l, peroxidasa 1000 U/l y
4-aminofenazona 2.6 mmol/l.
Solucin reactiva para determinacin de
fructosaminas 1: proteinasa K 786 U/ml,
peroxidasa 60 U/ml, amortiguador de pH y
diversos estabilizadores.
Solucin reactiva para determinacin de
fructosaminas 2: cetoamina oxidasa 9
U/ml, 4-aminoantipirina 10.5 mmol/l, EDTA
50 mmol/l, amortiguador de pH y
estabilizadores.
Solucin estndar de glucosa 100 mg/dl.
Solucin estndar de fructosamina 150
mol/l.
Curva patrn de fructosaminas (DA
contra concentracin) 50, 100, 200, 400
mol/l. Grfica proporcionada por la
coordinacin.
Suero o plasma problema (estable 3 das
a 2-8C).
Espectrofotmetro a 505 y 620 nm.
Mtodo
DETERMINACIN DE LA GLUCEMIA BASAL
POR GOD-POD/TRINDER
El mtodo ms utilizado en el laboratorio
clnico es el de la glucosa oxidasa (GOD).
Esta enzima cataliza la reaccin de la
glucosa presente en la muestra.
GOD
Glucosa + O2 + H2O
H2O2 +
Gluconato
La cuantificacin de los resultados puede
llevarse a cabo de la siguiente manera:
Mediante polarografa, determinacin del
consumo de oxgeno con la ayuda de un
electrodo de oxgeno. La cantidad de
glucosa en la muestra es directamente
proporcional a la cantidad de oxgeno
consumido. Mtodo muy utilizado en
sistemas automatizados de anlisis
clnico.
Enzimtico
colorimtrico,
por
determinacin de la quinona producida por
la accin de la peroxidasa (POD), en
donde un cromgeno pasa de su forma
reducida (incolora) a su forma oxidada
(coloreada). El mtodo utilizado para esta
determinacin es el de Trinder. En l la
intensidad del color es directamente
proporcional a la cantidad de glucosa
presente en la muestra.
POD
2H2O + Fenol + 4-AF

Quinona +
H2O
Preparar la siguiente serie de tubos:
No. de tubo
1. Blanco
2. Estndar
3. Suero
Estndar
10 l
Suero
10 l
1 ml
1 ml
1 ml
problema
-
problema
Solucin
reactiva para
glucosa
Mezclar e incubar
temperatura ambiente.
15
minutos
151
La coloracin es estable 30 minutos.

Medir la absorbencia (A) frente a blanco
de reactivos a 505 nm.
Clculo:
ASuero
X[Estndar.g / dl] = [Glucosa.g / dl]
AEstndar
El resultado se obtiene en mg/dl (x 0.0555
= mmol/l).
El mtodo es lineal hasta valores de 500
mg/dl.
Diluir el suero 1:2, si la concentracin de
glucosa es mayor a 500 mg/dl con
solucin salina.
La hemlisis hasta 0.3 g/dl de
hemoglobina no interfiere.
Los anticoagulantes como el EDTA,
oxalato, heparina o fluoruro no afectan a
los resultados.
La glucosa en suero o plasma es estable
tres das a 2-8C. A temperatura
ambiente, la glucosa presente en una
muestra de sangre entera puede
desaparecer por completo al cabo de 6
horas debido a la gluclisis en los
eritrocitos. Adems, la contaminacin
bacteriana y la presencia de cantidades
elevadas de leucocitos, pueden tambin
aumentar
dicho
proceso,
por
consiguiente:
Siempre que la muestra sea sangre total,
la determinacin de la glucosa debe
realizarse durante la media hora siguiente
a su recoleccin.
De lo contrario, aadir un conservador que
inhiba la gluclisis (fluoruro sdico).
libres de las protenas, por un mecanismo

diferente al empleado en la reaccin
catalizada
por
las
enzimas
glucosiltransferasas, por lo que la unin
que se establece entre el azcar y la
protena no es de naturaleza glucosdica.
Se prefiere el uso del trmino glicacin en
lugar de glicosilacin o glucosilacin (para
el caso de la unin de glucosa con la
protena) para este tipo de reaccin. La
glicacin
es
una
reaccin
de
condensacin entre la funcin aldehdo o
cetona de un azcar reductor y un grupo
amino libre de una protena (residuo
amino terminal o psilon amino de una
lisina) en la que se genera una base de
Schiff, que se transforma en una
cetoamina estable llamada producto de
Amadori o fructosamina.
Los productos de Amadori pueden sufrir
una serie de modificaciones como la
condensacin entre dos de ellos para
formar productos complejos de estructura
qumica no del todo aclarada llamados
AGE (Advanced Glycation End products, o
productos de glicacin avanzada) ver la
figura 10.1.
La glicacin depende exclusivamente de
los niveles de glucosa en los lquidos
corporales y del tiempo de contacto entre
sta y las protenas. De ah que, la
determinacin de los productos de
glicacin puede emplearse como medida
del nivel promedio de la glucosa
sangunea durante un cierto perodo de
tiempo, el cual depender de la vida
media de la protena que se analice.
GLICACIN NO ENZIMTICA DE PROTENAS.

FRUCTOSAMINAS Y HEMOGLOBINA GLICADA
El trmino glicosilacin no enzimtico de
las protenas se refiere a la reaccin entre
los azcares reductores con los grupos
amino
152
a
n
e
t
o
r
P
a
n
e
t
o
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P
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o
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C C
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HO
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l
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A
e
d
o
t
c
u
d
o
r
P
Productos de la glicacin
La hemoglobina glicada y las protenas

sricas glicadas (fructosaminas) se utilizan
como parmetros de medida a largo plazo
de la evaluacin del estado del
metabolismo de los carbohidratos en el
diagnstico, control y tratamiento de la
diabetes (una enfermedad caracterizada
por los niveles de glucosa circulante
elevados). Hay un consenso general en
que las complicaciones crnicas de la
diabetes
como
las
retinopatas,
nefropatas,
neuropatas
y
la
aterosclerosis acelerada, entre otras, son
consecuencia de los niveles altos de
glucosa en la sangre, los que pueden ser
determinados midiendo la concentracin
de protenas glicadas.
El primer indicador retrospectivo del curso
de la glicemia en el tiempo, que se puso al
alcance de los laboratorios clnicos fue la
hemoglobina glicada (HbA1 HbA1c).
sta refleja el promedio de la glucemia de
las 6 a 8 semanas previas a la toma de la
muestra. La hemoglobina tiene una
velocidad de recambio menor que las
protenas plasmticas, por lo que, la
determinacin de fructosaminas puede
emplearse como ndice del control de la
glucemia en un periodo ms corto, de
alrededor de dos semanas previas a la
toma de sangre. Es decir, que cubre un
periodo de tiempo intermedio
E
G
A
a
d
a
z
n
a
v
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a
n
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a
o
t
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C
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B
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s
2o
Hu
c
Cl
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t
o
r
P
H
O
2
H
C
H
O
2
H
C
H
O
C
H
Fig. 10.1.
avanzada
entre la determinacin instantnea de la

glucemia y la valoracin a largo plazo
dada por la HbA1.
La determinacin de la Hb glicada puede
diferenciar un proceso agudo que cursa
con hiperglucemia, una hiperglucemia
transitoria secundaria al estrs y una
diabetes mellitus.
La determinacin del nivel de glicacin de
la albmina plasmtica (glicoAlb), que
tiene una vida media de 14 a 20 das,
refleja el promedio de la glucemia (y por
tanto, el grado de control del paciente) en
un periodo que va desde 1 a 3 semanas
previas a la extraccin de sangre. Aunque
la albmina es el componente srico
glicado cuantitativamente ms importante,
otras protenas sricas tambin sufren
glicacin. La vida media de estas
protenas circulantes es de slo unos
pocos das, por lo cual la determinacin de
las protenas sricas glicadas totales
(PSG) refleja la glucemia promedio de los
15 das previos a la toma de muestra.
La determinacin de estos productos
glicados se lleva a cabo mediante las
siguientes reacciones: La proteinasa K
digiere las protenas glucosiladas para dar
fragmentos de protenas, los cuales por
medio de la cetoamida oxidasa, oxidan
sus enlaces cetoamida, dando como
resultado aminocidos y perxido de
hidrgeno. La peroxidasa cataliza la
transferencia de oxgeno del perxido a un
aceptor que es un cromgeno, que se
colorea al oxidarse. La absorbencia del
cromgeno oxidado a 620 nm es
proporcional a la concentracin de
protena glicada.
La reaccin completa es la siguiente:
Proteinasa K
Protena glicada
Fragmentos de protena
glicada
153
Cetoamina oxidasa
Fragmentos de protena
Aminocidos + H2O2
Peroxidasa
H2O2 + Cromgeno
Cromgeno
oxidado + H2O
Procedimiento para la determinacin de
fructosaminas:
1. Vaciar en un tubo de ensayo 0.5 ml (500 l)
de reactivo 1 para fructosaminas.
2. Agregar 0.02 ml (20 l) de suero o plasma
problema.
3. Incubar
ambiente.
10
minutos
temperatura
4. Agregar 0.1 ml (100 l) de reactivo 2 para

fructosaminas.
5. Mezclar, leer la absorbencia inicial al cabo
de 30 segundos a 620 nm.
6. Leer nuevamente la absorbencia al cabo de
1 minuto.
Clculo:
Anotar la A del tubo e interpolar en la grfica
de A contra concentracin de fructosamina
en mol/l que ser proporcionada en la
coordinacin de prcticas.
Valores esperados 122 - 236 mol/l.
El mtodo es lineal hasta 1734 mol/l.
Determinacin de glucosa y de cuerpos
cetnicos en orina con tiras reactivas
Aunque los cuerpos cetnicos son productos
intermedios del metabolismo de los cidos
grasos, la variacin de sus niveles en sangre
y en orina informa indirectamente acerca del
metabolismo de los carbohidratos.
Colocar la tira reactiva horizontalmente

sobre un papel absorbente, en el
transcurso de 30 segundos a 2 minutos
interpretar los resultados para ello:
Comparar la tira reactiva con los bloques
de colores que aparecen en la caja de las
tiras reactivas (cambios en la coloracin
despus de 2 minutos no tienen
importancia clnica).
Composicin de las tiras reactivas es la
siguiente:
Glucosa, 10.54% de glucosa oxidasa
(Aspergillus, 250 UI), 0.2% de peroxidasa
(rbano, 2500 UI) y 5% yoduro de potasio.
Cetonas, 4.5% de nitroprusiato de sodio.
Referencias
1.Gonzlez de Buitrago JM. Bioqumica
clnica.
McGraw-Hill
Interamericana
Editores; 1999.
2.DOcon, C. Fundamentos y tcnicas de
anlisis bioqumico. Editorial Paraninfo;
1998.
3.Chernecky CC. Pruebas de Laboratorio
y Procedimientos Diagnsticos. 2a. ed.
McGraw-Hill Interamericana Editores;
1999.
4.Gaw, A. Bioqumica clnica. 2a. ed.
Editorial Harcourt; 2001.
5.Anderson SC, Cockayne S. Qumica
clnica.
Mxico:
McGraw-Hill
Interamericana Editores; 1995.
6.Actis SM, Rebolledo O. Avances en la
valoracin de fructosamina: ventajas de un
nuevo equipo diagnstico aplicado a
estudios poblacionales. Acta Bioqum Cln
Latinoamer. 1991; 25 (4): 391-402.
Recolectar una muestra de orina en un

recipiente de plstico o de vidrio limpios (si la
muestra no se procesa durante la primera
hora despus de su obtencin, deber
refrigerarse).
Sumergir la tira reactiva en la orina y retirarla
inmediatamente.
154
Prctica 8
El efecto del tetracloruro de carbono sobre

las transaminasas
Esta prctica es una simulacin
compuratizada
de
un
fenmeno
bioqumica; tiene el propsito de que los
alumnos se ejerciten en el manejo de los
datos
obtenidos
por
medio
de
experimentacin simulada estrictamente
controlada.
Mtodo
icono del programa. El efecto de la
insulina sobre la glucemia de la rata.
Hacer doble clic sobre este icono.
2. Hacer clic sobre los botones que
indican cada de las partes de la prctica;
empezar por leer las instrucciones, los
objetivos y el fundamento de la prctica
para continuar con la parte experimental.
poner especial atencin en la obtencin
de los datos experimentales que debern
ser anotados en papel como cualquier
prctica convencional.
4. Repetir el experimento las veces que

el usuario quiera, o las veces que sean
repetirlo por lo menos dos veces y hacer
un promedio de los datos obtenidos.
mismos y, de acuerdo a lo anterior,
validar o rechazar la hiptesis del
experimento.
Referencias
1. Stryer L. Bioqumica. 5a. ed.
Barcelona: Editorial Revert; 2003.
155
Prctica 9
Determinacin de glucosa en sangre total

Objetivos
1. Que el estudiante comprenda el
metabolismo de la glucosa en sujetos
sanos en diferentes condiciones
metablicas.
2. Que el estudiante corrobore los
cambios de glucosa que ocurren
despus de la ingesta de alimentos.
4. Que el alumno sea capaz de analizar
e interpretar los resultados obtenidos a
partir de la determinacin de glucosa
en sangre total.
INTRODUCCIN
La glucosa es el proveedor de energa
ms importante del organismo junto
con los cidos grasos y los cuerpos
cetnicos.
El principal aporte proviene del intestino
(glucosa alimentaria), el hgado y los
riones.
En los animales superiores el
metabolismo de los carbohidratos est
sujeto a mecanismos de regulacin
complejos en los que participan las
hormonas, los metabolitos y las
coenzimas.
El cerebro, la mdula suprarrenal y los
eritrocitos son los que ms dependen
del suministro continuo de glucosa, por
que no disponen de ninguna reserva
importante de la misma1.
El sistema nervioso requiere de
aproximadamente 150 gr de glucosa al
da para realizar sus funciones
normales2.
La principal funcin bioqumica de la
glucosa es la de proporcionar energa
para los procesos de la vida. El
adenosn trifosfato ("ATP") es la fuente
de energa universal para las
reacciones biolgicas. La oxidacin de
la glucosa por las vas glucoltica y del
cido ctrico es la fuente principal de energa

para la biosntesis del ATP.
El exceso de glucosa es almacenado en las
clulas como el polmero glucgeno para
demandas posteriores de energa.
El papel de la insulina es desviar la glucosa
extracelular a los sitios de almacenamiento
intracelular en la forma de macromolculas
(como el glucgeno, lpidos y protenas). Es as
que la glucosa es almacenada en tiempos de
abundancia para los momentos de necesidad.
Algunos minutos despus de la ingesta de una
comida, los niveles de insulina sangunea
aumentan. La glucosa y los aminocidos de la
dieta tales como la leucina, isoleucina y lisina,
son estimulantes potentes de las clulas beta del
pncreas haciendo que stas segreguen insulina.
La mayor parte de las clulas perifricas
responden al aumento de la glucosa sangunea
con un aumento rpido del transporte de la
glucosa dentro de las clulas. De esta manera,
los niveles de glucosa sangunea aumentan
solamente de un 20% a un 40% en los individuos
no-diabticos. Sin embargo, aproximadamente el
80% de la entrada de glucosa no es insulino
dependiente, ya que el cerebro, los glbulos
rojos, el hgado y los intestinos no requieren de
insulina para la entrada creciente de glucosa
cuando est presente glucosa sangunea
elevada. El msculo es el tejido dependiente de
insulina ms importante. Los niveles crecientes
de insulina y glucosa sanguneas inhiben la
liplisis as como a aproximadamente el 60% de
la liberacin normal de glucosa heptica3.
Se han realizado estudios del comportamiento de
la glucosa en sangre en sujetos normales en la
cual se puede observar que a los 30 a 60
minutos posteriores a la ingesta de alimentos la
concentracin
de
glucosa
alcanza
su
concentracin mxima y a las dos horas vuelve a
su estado basal6.
Algunos minutos despus de la ingesta de
una comida, los niveles de insulina sangunea
aumentan6.
Las concentraciones de glucosa en el suero son
aproximadamente 15% ms altas que las
156
concentraciones de glucosa en la
sangre total esto es debido a que la
gluclisis contina en los eritrocitos.
El uso del glucmetro es de mucha
utilidad en el autocontrol de pacientes
diabticos, lo que ayuda a medir una
glucosa en sangre casual.
El valor calrico total diario de los
alimentos deber ser entre 25 y 30
Kcal/Kg/da,
para
las
personas
sedentarias y de 30 a 40 Kcal/Kg/da
para una persona fsicamente activa o
que realiza ejercicio de manera
regular4,5.
Referencias
1.-Koolman J, Roehm KH (2004).
Bioqumica Texto y Atlas: 3 Edicin,
Ed. Mdica Panamericana, pp.: 158,
308-310
2.-Smith, C; Marks, A. D. & Lieberman, M.
(2005). Marks Basic Madical
Biochemestry. 2a Edicin. Ed. Lippincott
Williams & Wilkins. Pag. 24-26
3.-Kaplan LA, Pesce AJ. (2002). Qumica
Clnica. Teora, anlisis y correlacin. 3
Edicin. Ed. Pesce Kaplan Publicaciones,
Captulo: 32.
4.- NORMA OFICIAL MEXICANA, NOM015-SSA2-1994, Para la prevencin,
tratamiento y control de la diabetes
mellitus en la atencin primaria. Listado
de Normas Oficiales Mexicanas de la
Secretara de Salud.
5.-MODIFICACIN a la Norma Oficial
Mexicana NOM-015-SSA2-1994, Para la
prevencin, tratamiento y control de la
diabetes. Listado de Normas Oficiales
Mexicanas de la Secretara de Salud.
6.- Manual para el manejo de las insulinas
2001. 2 Edicin. Subsecretara de
Prevencin y Proteccin de la Salud.
Centro
Nacional
de
Vigilancia
Epidemiolgica. SSA. Mexico.
Material
Dietas:
a).-Rica en carbohidratos (X gr. spaghetti).
b).- Dieta rica en lpidos (hamburguesa).
Dos sujetos sanos sedentarios y dos horas

mnimas de ayuno.
Dos sujetos con actividad fsica constante y
dos horas mnimas de ayuno.
Glucmetros One Touch Ultra.
Tiras reactivas One Touch Ultra [Glucosa
oxidasa (Aspergillus nger)].
Dispositivo de puncin.
Lancetas estriles con discos protectores
One Touch UltraSoft.
Recipiente para material punzo cortante.
Recipiente para material biolgico-infeccioso.
Jabn para manos.
Torundas de algodn con alcohol.
Mtodo
1.- Dos sujetos sedentarios, uno de los cuales
consumir una dieta rica en carbohidratos y el
otro una dieta rica en protenas.
2.- Dos sujetos con actividad fsica constante,
uno de los cuales consumir una dieta rica en
carbohidratos y el otro una dieta rica en lpidos.
3.- A cada uno de los sujetos en cualquiera de
las condiciones y consumo de dietas se les
determinar la concentracin de glucosa en
sangre total por medio de un glucmetro en los
siguientes tiempos:
0 minutos (antes de ingerir los alimentos).
30 minutos, 60 minutos y 120 minutos, despus
de ingerir los alimentos
Para realizar la determinacin de glucosa en
sangre total seguir los siguientes pasos:
4.-Para Insertar la lanceta
a) Gire la tapa One Touch
UltraSoft hacia la izquierda
para quitarla
b) Inserte una lanceta en el
portalancetas
y
empjela
firmemente hasta que quede
bien asentada
5.- Cargue el dispositivo de

puncin. Deslice el botn
cargador hacia atrs hasta que
haga clic. El dispositivo de
puncin ya esta preparado
para su uso.
157
6.- Lave sus manos y limpie

con una torunda de algodn
con alcohol la zona donde
se realizar la puncin.
12.- Inserte la tira reactiva en

el puerto de anlisis, con el
extremo de las barras e
contacto de primero y
mirando hacia arriba.
Empjela hasta que no
7.- Coloque el dispositivo de

puncin
en
posicin.
Sostenga
el
dispositivo
firmemente
contra
el
costado
de
su
dedo.
Presione el botn de
liberacin
avance ms.
13.-Lectura. El resultado de la
prueba de glucosa de su
sangre aparecer despus de
que el medidor cuente en
forma regresiva de 5 a 1.
Anotar el resultado en la tabla
correspondiente Tabla 14.1.
8.- Aplique masaje a la

punta de su dedo.
Un suave masaje en la
punta del dedo le
ayudar a obtener una
gota
de
sangre
adecuada. No exprima
en exceso el rea de puncin.
P9.- Inserte la tira reactiva en el
puerto de anlisis, con el extremo de
las barras de contacto de primero y
mirando hacia arriba.
Empjela hasta que no avance ms
10.-Acerque
y
mantenga la gota de
sangre en el canal
estrecho del borde
superior de la tira
reactiva
14.-Es
importante
desechar
con
mucho
cuidado la lanceta usada
luego de cada uso, con el
fin de evitar que se
produzcan
lesiones
accidentales con las
puntas de la lancetas. Para el desecho de las
lancetas siga los siguientes pasos:
15.- Gire la tapa One Touch Ultra Soft en
direccin contraria a las manecillas del reloj.
16.Apunte
el
dispositivo
de
puncin hacia a hacia
usted. Presione el
botn de liberacin
para asegurarse que
el
dispositivo
de
puncin no est en posicin de cargado.
Deslice el botn cargador hacia delante y
deposite la lanceta en un recipiente para
material punzo cortante
11.- Hasta que la

ventana
de
confirmacin
este
completamente llena
de sangre, antes que
el medidor comience
la cuenta regresiva.
17.- Desechar las tiras reactivas en una bolsa

para material biolgico-infeccioso junto con las
torundas de algodn empleadas en la prctica.
a)
Muestra
adecuada
b) Muestra
insuficiente
18.-Con los datos obtenidos completar el

cuadro 14.1 y hacer una grfica de todas las
variantes en papel milimtrico.
a
158
Tabla 14.1 Resultados

Fecha:_________________
Nombre:
Edad:
Sexo:
Sedentario:
Actividad fsica constante:
Tipo de dieta
Tiempo
(min.)
[Glucosa mg/dl]
0
30
60
120
159
Prctica 10
Integracin Metablica
Objetivos
1.-Que el alumno pueda integrar las vas
metablicas de los carbohidratos, de los
lpidos y protenas en (condiciones
normales) en un paciente sano.
2.-Que el alumno reconozca los sitios
denominados encrucijadas metablicas y
las enzimas de las vas reguladoras.
3.-Que el alumno pueda correlacionar el
papel que tienen las hormonas en la
regulacin de las vas.
4.-Que el alumno sea capaz de analizar
los datos de las pruebas clnicas en un
sujeto normal.
5.-Que el alumno relacione que vas se
encuentran alteradas en un paciente
diabtico.
Los alimentos que ingerimos deben estar
constituidos por los 6 componentes
bsicos que son protenas, carbohidratos,
lpidos, vitaminas, minerales y agua, la
cantidad que se requiere ingerir de cada
uno de los componentes vara de acuerdo
a la constitucin y la actividad fsica que se
realiza, tanto la falta como en el exceso de
consumo de alguno de los componentes
bsicos conlleva a diversos trastornos
metablicos.
Aproximadamente del 40 al 45% de
nuestra ingesta calrica proviene del
consumo
diario
de
carbohidratos
complejos los cuales al ser digeridos dan
lugar a los diferentes monosacridos entre
los que se encuentra la glucosa, la cul se
distribuye por la sangre a las clulas para
poder captar la glucosa, siendo la principal
fuente de energa. Algunos tipos celulares
son dependientes de la liberacin de
insulina por el pncreas como es el caso
de las clulas musculares. Si la insulina no
funciona adecuadamente, la glucosa se

queda en el flujo sanguneo causando
elevacin de los niveles de glucosa en la
sangre y a esto se le denomina
hiperglucemia; una de las enfermedades
que se caracteriza por la hiperglucemia en
sus primeras etapas es la diabetes
mellitus.
La diabetes mellitus esta caracterizada por
una hiperglucemia resultante de defectos
en la secrecin de insulina, en la accin de
la insulina o en ambas. La hiperglucemia
crnica de la diabetes est asociada a
lesiones, disfuncin y fallo de varios
rganos, especialmente de los ojos, los
riones, el corazn y los vasos
sanguneos.
Varios procesos patognicos estn
implicados en el desarrollo de la diabetes.
Estos van desde una destruccin
autoinmunolgica de las clulas del
pncreas, con la consiguiente deficiencia
de insulina, hasta anormalidades, en las
que el pncreas no produce suficiente
insulina o la que produce no es eficiente.
La accin deficiente de la insulina en los
tejidos diana es la responsable del
metabolismo anmalo de los carbohidratos
de carbono, grasas y protenas en la
diabetes.
La accin deficiente de la insulina
ocasiona una respuesta inadecuada en
uno o ms puntos de la compleja trama
metablica en la que esta hormona tiene
papel regulatorio.
Frecuentemente coexisten en el mismo
paciente una inadecuada secrecin de
insulina as como defectos de la accin de
sta, en la actualidad no se sabe si una de
estas anormalidades es la consecuencia o
160
la causa de la otra. En cualquier caso, el

resultado es la hiperglucemia.
La gran mayora de los casos de diabetes
pueden incluirse en dos amplias
categoras etiopatognicas. En el primer
caso (diabetes de tipo I) la causa es una
deficiencia absoluta en la secrecin de
insulina. Los individuos con alto riesgo de
desarrollar este tipo de diabetes pueden
ser a menudo identificados mediante
evidencias serolgicas de un proceso
autoinmune que se produce en los islotes
pancreticos
y
tambin
mediante
marcadores genticos. En la segunda
categora (diabetes de tipo II), mucho ms
prevalente, la causa es una combinacin
de una resistencia a la accin de la
insulina y de una inadecuada respuesta
secretora compensadora. La diabetes tipo
II se caracteriza por estar presente
muchos aos antes de ser detectada una
hiperglucemia sin sntomas clnicos (sed,
perdida de peso), pero suficiente para
ocasionar
cambios
patolgicos
y
funcionales sobre los rganos blanco.
Durante este perodo asintomtico, es
posible demostrar trastornos en el
metabolismo
de
los
carbohidratos
midiendo la glucosa plasmtica en ayunas
o despus de una sobrecarga de glucosa
por va oral.
El exceso en la ingesta de carbohidratos
no solamente mantiene la reserva de
energa en forma de glucgeno sino que
tambin el exceso de carbohidratos es
convertido en triacilgliceroles. En el hgado
los triacilgliceroles se sintetizan a partir de
acil CoA y glicerol 3-fosfato siendo
empaquetados con apoprotenas y en
lipoprotenas de muy baja densidad
(VLDL), secretados al torrente sanguneo
siendo almacenados en tejido adiposo.
Para su consumo los triacilgliceroles son
hidrolizados a glicerol y cidos grasos. En
la dieta es importante la presencia de
lpidos ya que son precursores de
diferentes componentes de la clula como

los fosfolipidos, uno de los lpidos que
tiene una gran importancia en la clula es
el colesterol, ya que proporciona rigidez a
las membranas celulares y es precursor de
las sales biliares as como de hormonas
esteroideas. El colesterol se puede
obtener por la alimentacin y por sntesis
del propio organismo, siendo las clulas
hepticas y las suprarrenales las de mayor
sntesis. Para llevar a cabo la sntesis de
colesterol se requiere la presencia de
acetil-CoA el cual proviene de la
degradacin de glucosa, cidos grasos y
aminocidos por lo cual se denomina a la
acetil-CoA la encrucijada metablica.
El colesterol es insoluble en agua por lo
que transportado en la sangre por tres
lipoprotenas que son de muy baja
densidad (VLDL), de baja densidad (LDL)
y las de alta densidad (HDL). Los niveles
normales de colesterol total en sangre en
un adulto son de < 200 mg/dl y cuando
estos valores se ven aumentados se
asocian a la formacin de placas
ateroscleroticas que pueden ocluir los
vasos sanguneos y como consecuencia
provocar infarto al miocardio y alteraciones
cardiovasculares.
La cuantificacin de las LDL representa un
papel clave en la esclerosis coronaria ya
que concentraciones elevadas indican
desarrollo de la aterosclerosis.
En el caso de las HDL al dismunuir su
concentracin aumenta el riesgo de
desarrollar aterosclerosis.
Las protenas constituyen la fuente
primaria del metabolismo del nitrgeno en
el organismo,
Los aminocidos producto de la digestin
de las protenas que se consumen en los
alimentos, son utilizados para la sntesis
de
protenas
y
de
compuestos
nitrogenados o se puede oxidar para
producir energa.
161
El hgado es el rgano principal en donde

se realiza la oxidacin de los aminocidos.
El nitrgeno de los aminocidos forma
amoniaco el cual es toxico para el
organismo. El amoniaco y los grupos
amino se convierten en urea en el hgado,
que no es toxica y se elimina fcilmente
por la orina ya que es hidrosoluble.
Otro de los componentes del metabolismo
nitrogenado son los nucleotidos. Las
purinas y las pirimidinas, que son
esenciales para la sntesis de nucletidos
y cidos nucleicos.
Los nucletidos son precursores del DNA
y el RNA, as como tambin forman parte
de la estructura de muchas coenzimas
adems de ser componentes del
metabolismo energtico.
La degradacin de las purinas no genera
energa y el producto de la degradacin
del anillo purnico es el cido rico, que se
elimina por la orina, tiene una solubilidad
limitada por lo que su exceso da como
resultado la formacin de cristales en
regiones del organismo como pueden ser
los dedos gordos del pie, trastorno que se
conoce como gota.
Los valores elevados de cido rico se
presentan en: ingestin de alimentos ricos
en nucleoprotenas, insuficiencia renal,
azoemias prerrenales.
Otro de los componentes del metabolismo
nitrogenado es la creatinina que en el
msculo en su forma fosorilada sirve como
almacn de alta energa y se transforma
con facilidad en ATP por la enzima
creatina fosfocinasa. La creatina fosfato es
inestable y se cicla espontneamente
forma la creatinina que se elimina en la
orina. La produccin de creatinina es
proporcional a la masa muscular corporal.
La cantidad de creatinina que se elimina
diariamente
puede
utilizarse
como
indicador de la normalidad de la funcin
renal
Material.
Dietas:
Dos sujetos sanos sedentarios y dos horas
mnimas de ayuno.
Dos sujetos con actividad fsica constante
y dos horas mnimas de ayuno.
a).-Dieta rica en carbohidratos (g
spaghetti).
b).-Dieta rica en protenas.
Determinacin de glucosa
Glucmetros One Touch Ultra.
Tiras reactivas One Touch Ultra [Glucosa
oxidasa (Aspergillus nger)].
Dispositivo de puncin.
Lancetas estriles con discos protectores
One Touch UltraSoft.
Recipiente para material punzo cortante.
Recipiente
para
material
biolgicoinfeccioso.
Jabn para manos.
Torundas de algodn con alcohol.
Glucmetros.
Determinacin
de
colesterol
y
triacilgliceroles
Accutrend Roche para determinacin de
colesterol y triacilgliceroles.
Tiras reactivas para determinacin de
colesterol.
Tiras reactivas para determinacin de
triacilgliceroles.
Lancetas estriles.
Determinacin
de
hemoglobina
glicosilada.
Micromat
HbA1c
BIO-RAD
para
determinacin de hemoglobina glicosilada
en sangre total.
Lancetas estriles.
Las determinaciones de urea, creatinina y
cido rico, se realizaran en orina.
La muestra de orina deber ser del alumno
a quien se le haya determinado glucosa,
colesterol y triacilgliceroles para poder
discutir todos los valores en conjunto y
162
poder enlazar en un mismo individuo el

efecto que tiene la dieta sobre el
metabolismo.
Determinacin de urea
Pipetas automticas (10 a 200l)
Puntas para micropipetas
Propipetas.
Reactivo para urea.
Estndar de urea (50 mg/dl).
Espectrofotmetro.
Celdas.
Agua destilada.
Pipetas Pasteur de plstico.
Determinacin de creatinina
Reactivo para creatinina.
Estndar de creatinina (2 mg/dl).
Determinacin de cido rico
Pipetas de 5 ml.
Gradilla con 2 tubos de ensaye.
Reactivo para cido rico.
Estndar de cido rico (6 mg/dl).
Mtodo
Determinacin de glucosa
1.-Dos sujetos sedentarios, uno de los
cuales consumir una dieta rica en
carbohidratos y el otro una dieta rica en
lpidos.
2.-Dos sujetos con actividad fsica
constante, uno de los cuales consumir
una dieta rica en carbohidratos y el otro
una dieta rica en lpidos.
3.-A cada uno de los sujetos en cualquiera
de las condiciones y consumo de dietas se
les determinar la concentracin de
glucosa en sangre total por medio de un
glucmetro en los siguientes tiempos:
0 minutos (antes de ingerir los alimentos).
30 minutos, 60 minutos y 120 minutos,
despus de ingerir los alimentos. Para
realizar la determinacin de
glucosa en sangre total
seguir los siguientes pasos:
UltraSoft hacia la izquierda para quitarla.

b) Inserte una lanceta en el
portalancetas
y
empjela
firmemente hasta que quede
bien asentada.
5.- Cargue el dispositivo de

puncin. Deslice el botn
cargador hacia atrs hasta
que haga clic. El dispositivo de
puncin ya esta preparado para
su uso.
6.- Lave sus manos y limpie
con una torunda de algodn
con alcohol la zona donde se
realizar la puncin.
7.- Coloque el dispositivo de

puncin en posicin. Sostenga
el dispositivo firmemente contra
el costado de su dedo.
Presione el botn de liberacin.
8.- Aplique un suave masaje a
la punta de su dedo que le
ayudar a obtener una gota de
sangre adecuada No exprima
en exceso el rea de puncin.
9.-Acerque y mantenga la gota
de sangre en el canal estrecho
del borde superior de la tira
reactiva
10 a) Muestra adecuada
b) Muestra insuficiente
4.-Para Insertar la lanceta

a) Gire la tapa One Touch
163
11.- Inserte la tira reactiva en el puerto de

anlisis, con el extremo de
las barras de contacto de
primero y mirando hacia
arriba. Empjela hasta
que no avance ms.
Deslice el botn cargador hacia delante

y deposite la lanceta en un recipiente
para material punzo cortante.
12.- Hasta que la ventana

de confirmacin este
completamente llena de
sangre, antes que el
medidor comience la
cuenta regresiva.
13.-Lectura el resultado de la prueba de
glucosa de su sangre aparecer despus
de que el medidor cuente en forma
regresiva de 5 a 1.
18.-Con los datos obtenidos

completar el cuadro 15.1 y hacer
una grfica de todas las variantes
en papel milimtrico.
Anotar el resultado
correspondiente
Tabla 15.1
en
la
tabla
14.-Es importante desechar con mucho

cuidado la lanceta usada luego de cada
uso, con el fin de evitar que se produzcan
lesiones accidentales con las puntas de la
lancetas.
Para el desecho de las lancetas siga los
siguientes pasos:
15.- Gire la tapa One
Touch Ultra Sof en
direccin contraria a las
manecillas del reloj.
16.- Apunte el dispositivo de
puncin hacia el recipiente
para el material punzo
cortante Presione el botn
de
liberacin
para
asegurarse
que
el
dispositivo de puncin no est en posicin
de cargado.
17.- Desechar las tiras reactivas en una

bolsa para material biolgico-infeccioso
junto con las torundas de algodn
empleadas en la prctica.
Cuadro 15.1 Resultados

Fecha:_________________
Nombre:
Edad:
Sexo:
Sedentario:
Actividad fsica constante:
Tipo de dieta
Tiempo
(min.)
0
30
60
120
[Glucosa mg/dl]
Determinacin
de
colesterol
y
triacilgliceroles
AccutrendGCT.
1.-Lavarse las manos cuidadosamente
esto es con la finalidad de retirar residuos
de crema o grasa en las manos para
evitar
determinaciones
errneas
principalmente cuando se realiza la
determinacin de triacilgliceroles.
2.- Con la ayuda de unas pinzas extraer
una tira reactiva del envase y taparlo
inmediatamente para evitar que las tiras
se sequen.
3.-Con la tapa cerrada D inserte en la
ranura F, en la direccin indicada por la
164
flecha, la tira reactiva con el cuadrado

amarillo hacia arriba hasta que encaje y
deje verse la marca TG o CHOL impresa
en la tira reactiva.
4.-Frote y masajee la yema del dedo para
facilitar la extraccin y aplicacin de la
sangre.
5.-Con la lanceta introduzca para hacer la
puncin y realice la toma de muestra.
6.-Aplicar directamente la gota de sangre a
la tira reactiva y proceder a la lectura de la
concentracin
de
colesterol
y
triacilgliceroles segn sea el caso, si no se
llena completamente el equipo le marca R5.
7.-Realice la lectura.
8.-Anote la lectura.
9.-Si esto llegara a suceder volver a tomar
otra tira reactiva para proceder a iniciar
completamente desde el paso uno.
Determinacin
de
hemoglobina
glicosilada
Gua rpida Micromat II. (Deteccin de
hemoglobina glicosilada).
1.-Insertar el cartucho de anlisis.
2.-Girar el cartucho a la posicin 1.
3.-Extraccin de muestra capilar o venosa.
4.-Comenzar la incubacin, presionar
enter
5.-Invertir 3 veces.
6.-Dispensar la muestra en el embudo
central.
7.-Girar el cartucho a la posicin 2, sacar
Celda
1
2
Muestra
25 l
-Estndar
-25 l
Solucin reactiva
1 ml
1 ml
para urea
el tubo de la solucin de lavado (tapn
azul).
8.-Verter la solucin de lavado al embudo
central.
9.-Girar el cartucho a la posicin 3, sacar

el tubo de la solucin eluyente (tapn
transparente).
10.-Verter el eluyente al embudo central.
11.-Girar el cartucho a la posicin de
partida.
12.-Extraer el cartucho de anlisis, el
resultado se observar en la pantalla.
13.-Presionar enter para un nuevo anlisis.
Determinacin de urea en orina
La urea presente en la muestra reacciona
con el o-ftaldehdo en medio cido
originando un complejo coloreado puede
identificar
Celda
1
2
se
Orina
100
espectrof
l
otomtric
Estndar
100
amente.
l
Solucin
reactiva
de creatinina
1 ml
1 ml
Urea + oftaldehdo
Isoindolina
La urea es estable 5 das a 2-8 C.
1.-Diluir la muestra 1:50 con agua
destilada mezclar y multiplicar el resultado
por el factor de dilucin (50).
2.-Para realizar la dilucin 1:50 recupere la
orina con la pipeta
Pasteur de plstico hasta la marca (lo que
corresponde a 0.5 ml) y colquelo en un
tubo Falcn que ya contiene 24.5 ml de
agua, con ello se tendr una dilucin 1:50,
de ah tomar la muestra como se
esquematiza en el cuadro.
La determinacin se realiza directamente
en las celdas con la finalidad de tomar la
lectura de las absorbancias exactamente
al minuto (A1) y a los dos minutos (A2).
Mezclar y poner en marcha el cronmetro,
anotar las absorbancias a los 60 (A1) y 120
(A2) segundos.
165
Leer frente blanco de reactivos en el

espectrofotmetro a 520 nm.
Calcular el incremento de la absorbencia
A = A2 A1.
Con las diferencias de absorbancias
anotadas A, aplicar la siguiente ecuacin:
A Muestra X [Estndar] = [Urea]
A Estndar
El resultado se obtiene en mg/dl.
Determinacin de creatinina en orina
destilada mezclar y multiplicar el resultado
2.-Para realizar la dilucin 1:50 recupere la
orina con la pipeta Pasteur de plstico
hasta la marca (lo que corresponde a 0.5
ml) y colquelo en un tubo Falcn que ya
contiene 24.5 ml de agua, con ello se
tendr una dilucin 1:50, de ah tomar la
muestra como se esquematiza en el
cuadro.
La determinacin se realiza directamente
en las celdas con la finalidad de tomar la
lectura de las absorbancias exactamente a
los 30 (A1) y a los 90 (A2) segundos.
Mezclar y poner en marcha el cronmetro,
anotar las absorbancias a los 30 (A1) y a
los 90 (A2) segundos.
Leer frente blanco de reactivos en el
espectrofotmetro a 492 nm.
Calcular el incremento de la absorbencia
A = A2 A1.
Con las diferencias de absorbancias
anotadas A, aplicar la siguiente ecuacin:
A Muestra X [Estndar] = [Creatinina]
A Estndar
Determinacin de cido rico en orina.
destilada, mezclar y multiplicar el resultado
2.-Para realizar la dilucin 1:10 recupere

la orina con la pipeta Pasteur de plstico
hasta la marca (lo que corresponde a 0.5
ml) y colquelo en un tubo Falcn que ya
contiene 9.5 ml de agua, con ello agregue
agua hasta la marca de 5 ml con ello
tendr una dilucin 1:10 de ah tomar la
muestra como se esquematiza en el
cuadro.
La determinacin se realiza en tubos de
ensaye.
Mezclar e incubar 10 minutos a
temperatura ambiente.
Leer
la
absorbancia
(A)
en
el
espectrofotmetro frente a blanco de
reactivos a 520 mn.
Clculo de la concentracin de cido rico.
A Muestra X [Estndar] = [cido rico]
A Estndar
Referencias
1.-Koolman J, Roehm KH (2004).
Bioqumica Texto y Atlas: 3 Edicin, Ed.
Mdica Panamericana, pp.: 158, 308-310
2.-Smith, C; Marks, A. D. & Lieberman, M.
(2005). Marks Basic Madical
Biochemestry. 2a Edicin. Ed. Lippincott
Williams & Wilkins. Pag. 24-26
3.-Kaplan LA, Pesce AJ. (2002). Qumica
Clnica. Teora, anlisis y correlacin. 3
Edicin. Ed. Pesce Kaplan Publicaciones,
Captulo: 32.
4.- NORMA OFICIAL MEXICANA, NOM015-SSA2-1994, Para la prevencin,
tratamiento y control de la diabetes
mellitus en la atencin primaria. Listado
de Normas Oficiales Mexicanas de la
Tubo
1
2
Orina
100 l
Estndar
100 l
Solucin reactiva
1 ml
1 ml
de cido rico
166
Secretara de Salud.
5.-MODIFICACIN a la Norma Oficial
Mexicana NOM-015-SSA2-1994, Para la
prevencin, tratamiento y control de la
diabetes. Listado de Normas Oficiales
Mexicanas de la Secretara de Salud.
7.- NORMA OFICIAL MEXICANA NOM030-SSA2-1999, Para la prevencin,

tratamiento
y
control
de
la
hipertensin arterial. Listado de Normas
Oficiales Mexicanas de la Secretara de
Salud.
6.- Manual para el manejo de las insulinas

2001. 2 Edicin. Subsecretara de
Prevencin y Proteccin de la Salud.
Centro
Nacional
de
Vigilancia
Epidemiolgica. SSA. Mxico.
167
Prctica 11
Huella gnica
Objetivos
1. Que el estudiante conozca la aplicacin de
las tcnicas de DNA recombinante.
2. Que el estudiante sea capaz de analizar e
interpretar los datos generados a partir de una
prueba de huella gnica.
3. El alumno adquirir la capacidad de
manejar muestras para anlisis de cidos
nucleicos.
4. El alumno desarrollar destreza en la
interpretacin de resultados de metodologas
bsicas de anlisis molecular.
FUNDAMENTO
El DNA es un polmero lineal formado
por desoxirribonucletidos que contienen a las
bases
nitrogenadas
adenina,
guanina,
citosina, timidina. La interaccin de las bases
nitrogenadas por puentes de hidrgeno
permite la formacin de la doble cadena de
DNA. Cada grupo fosfato est unido al
carbono 5 de una subunidad de azcar y al
carbono 3 de la subunidad de azcar del
nucletido contiguo.
Las cadenas se mantienen unidas por
puentes de hidrgeno entre las bases. Las
cuales son completamente lineales.
En la molcula de DNA que reside la
informacin gentica de un organismo,
especficamente en la secuencia de los
nucletidos, de tal manera que cada tres
bases forman un codn que corresponde a su
vez a uno de los 20 aminocidos, teniendo un
total de 64 codones posibles, los cuales
conforman el cdigo gentico. En el DNA se
encuentran dos tipos de secuencia, la que es
capaz de ser leda para dar origen a una
protena lo que permite que una clula u
organismo crezca desarrolle tambin la no
codificante una que codifica para las
funciones celulares y otra no codificante, que
participa en la regulacin de su expresin.
Algunas de las secuencias de nucletidos no
codificantes se caracterizan por ser cortas,
estn alineadas en tndem y se repiten miles
de veces de manera constante a lo largo del
DNA. Un ejemplo de esta secuencia puede

ser
la
siguiente.
ATTCGGTATTCGGTATTCGGT.
A estas
secuencias se les denomina STR por sus
siglas en ingls (Short Tandem Repeat). El
genoma eucaritico contiene muchas de estas
secuencias de DNA, y se ha visto que el
nmero de unidades repetidas presenta
diferencias de individuo a individuo que con
las huellas digitales. En el caso de gemelos
idnticos estas secuencias son idnticas.
Estas regiones pueden ser aisladas del DNA
con enzimas de restriccin apropiadas y
separadas de acuerdo a su longitud mediante
electroforesis en gel. Cuando se completa el
proceso de separacin el resultado se parece
a un cdigo de barras de un envase de
supermercado. Este cdigo de barras de DNA
ha permitido esclarecer algunos hechos
criminales y pruebas de paternidad, a la cual
se denomina tcnica de Huella gnica
Es muy frecuente que en la escena de
un crimen se encuentren, en pequeas
cantidades muestras de naturaleza biolgica a
partir de las cuales se puede extraer el DNA
como son la sangre, la saliva, la piel, el
msculo, el cabello, el semen, los dientes y el
hueso, entre otros.
Un mtodo que permite tomar una
pequea cantidad de DNA y en pocas horas
sintetizar millones de copias de una porcin,
es el mtodo de amplificacin conocido como
PCR (reaccin en cadena de la polimerasa),
el cual se desarrollo por K. Mullis (1990), En
este mtodo se requiere conocer la secuencia
de nucletidos de los extremos del fragmento
que se desea amplificar. Estas secuencias se
usan para disear desoxioligonucletidos
sintticos de DNA complementarios a cada
uno de estos extremos de la cadena de la
doble hlice. La muestra de DNA se coloca en
una solucin que contiene una DNA
polimerasa,
grandes
cantidades
de
desoxinucletidos y los desoxioligonucletidos
sintetizados previamente. El mtodo se basa
en la repeticin cclica de tres reacciones
168
sucesivas: en la primera reaccin, la solucin

se calienta para que el molde de DNA se
separe en sus dos cadenas. En la segunda
reaccin, la temperatura se reduce para
permitir que los desoxioligonucletidos se
apareen por complementariedad de bases
con el DNA molde y en la tercera reaccin, la
DNA
polimerasa
cataliza
la
sntesis
simultnea de las dos cadenas a partir de
cada desoxioligonucletido que acta como
cebador. Al cabo del primer ciclo de tres
reacciones, el fragmento de DNA elegido se
ha duplicado y por lo tanto, la cantidad de
DNA molde disponible para el segundo ciclo
es doble, lo mismo ocurre cada ciclo de
duplicacin.
La obtencin de mltiples copias requiere 20
a 40 veces la repeticin de los ciclos. El xito
de esta tcnica radica en el uso de una DNA
polimerasa termoestable, que no se
desnaturaliza por los repetidos ciclos de
calentamiento. Esta enzima se aisl
originalmente de la bacteria termfila Thermus
aquaticus.
La base de la tcnica conocida como
huella gnica se basa en las diferencias
individuales de estas secuencias. Esto,
generalmente se trata de cambios en un solo
par de bases pertenecientes a diferentes
individuos, que se presentan una vez cada
500 a 1,000 pares de bases, como promedio.
forense. Acta Cientfica Venezolana. 50: 2428, 1999.

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169
SESIN 1 DE LABORATORIO PARA LA

PRCTICA DE HUELLA GNICA
ESCENA DEL CRIMEN
El crimen se lleva a cabo en la calle Lago
Manitoba No. 520, Col. Ampliacin Granada,
Delegacin Miguel Hidalgo, en el sof de la
sala se encuentra el cuerpo de la duea de la
casa, una mujer de 42 aos de edad. El
cadver presenta signos de estrangulamiento
pero sin marcas de sogas o cinturones;
tampoco se encuentran huellas digitales en su
cuello. La vctima presenta una lesin
defensiva en el brazo derecho con arma
punzo cortante. En el sof se observan varias
manchas de sangre, algunas de ellas secas.
Las ms abundantes todava estn frescas.
Se ignora si la sangre pertenece a la vctima o
a sus agresores.
El laboratorio forense se encarga de recopilar
la informacin de la escena dando a conocer
los siguientes aspectos: el cuerpo de la
vctima se descubri 20 minutos despus del
asesinato. Presentaba con un golpe en la
cabeza, presenta seales de forcejeo en su
brazo y debajo de las uas se encuentran
depositados restos de piel, sangre, y de
cabellos. Algunos de ellos presentan folculos.
Todo seala que la vctima forceje con su o
sus agresores.
En el lugar tambin se hall un florero con
restos de sangre, la cual no se sabe si
corresponde a la de la vctima o a los
agresores. En un extremo del sof se
encuentra una pieza dental y, debido a que la
vctima conserva su dentadura completa, es
probable que el diente sea del victimario. En
el brazo izquierdo, la victima presenta varias
mordidas, algunas con sangre coagulada y
otras con restos de saliva mezclados con
sangre.
En el interior de la casa faltan algunas piezas
de valor, lo que sugiere que el mvil fu el
robo.
La polica cuenta con varios sospechosos,

entre los que se encuentra el esposo, con el
cual la vctima tuvo una discusin la noche
anterior. Se desconoce el tema de la
discusin y el paradero el esposo. Otros
sospechosos son los dos repartidores del gas
que una hora antes haban proporcionado el
servicio. Uno de ellos tiene problemas con la
dentadura y aclara que se encuentra en
tratamiento dental, ya que ha presentado
sangrado y prdida de algunas piezas
dentales. Los otros sospechosos son los dos
empleados de la casa, el jardinero que tiene
una antigedad de 4 aos y presenta una
lesin en el brazo que confiesa se hizo
arreglando el jardn y la cocinera quien tiene
slo 3 meses laborando en la casa.
Con esta evidencia se compara el DNA de
cada sospechoso para encontrar al culpable
o culpables del crimen, por lo que debe
determinar si las muestras de sangre,
cabellos, pieza dental y saliva sirven para
estudiar
el
DNA y establecer las
caractersticas que permiten utilizar alguna o
todas las muestras para el estudio.
Cada equipo debe escoger alguna de las
evidencias previamente descritas y justificar
su eleccin.
Para realizar la comparacin entre el DNA
encontrado en la escena con el DNA de los
sospechosos deben contarse con muestras
proporcionadas por los mismos. Mencione de
dnde obtendra dicho material. En el caso del
esposo debe tenerse en cuenta que no se
conoce su paradero, por lo cual la muestra
debe ser extrada de algn objeto de uso
personal; defina cul sera ste y justifique la
eleccin del mismo.
170
SESION 2 DE LABORATORIO PARA LA

PRCTICA FINGERPRINTING
MATERIAL
- DNA de la escena del crimen con
amortiguador.
- DNA del sospechoso 1 con amortiguador.
- DNA del sospechoso 4 con Amortiguador.
- Mezcla de enzimas de restriccin EcoRI/Pstl,
1800 U.
- Agua estril, 2.5 ml.
- Marcador de DNA de fago lambda digerido
con Hind III 0.2g /l, 100 l.
1.- 23,130 pb
2.9,416 pb
3.6,557 pb
4.4,361 pb
5.2,322 pb
6.2,027 pb
- Colorante de DNA (Biorad biosafe).
- Microtubos de colores.
- Microtubos blancos.
- Geles de agarosa al 1.0%.
- Amortiguador de electroforesis TAE (TrisAcetato-EDTA). Tris-base 39 mM, cido
actico glacial 18 mM, EDTA 10 mM.
- Gradillas para microtubos.
- Recipiente para teir geles.
- Pipeta automtica de 10-100 l.
- Puntas para pipetas automticas.
- Marcador indeleble.
- Fuente de poder.
- Cmara horizontal de electroforesis.
- Parrilla para bao mara.
- Vaso de precipitado de 300 ml.
- Recipiente con hielo.
- Microfuga.
3.-A cada tubo adicionar 10 l de la muestra

correspondiente; utilizar una punta nueva para
cada muestra.
4.-Adicionar 10 l de la mezcla de enzimas de
restriccin a cada uno de los tubos que
contienen la muestra de DNA. Se debe tener
cuidado de no contaminar la mezcla de
enzimas, por lo cual se sugiere el empleo de
una punta nueva por cada tubo.
Muestra de
la escena
Sospechoso
1 azul
Sospechoso
2 naranja
Sospechoso
3 violeta
Sospechoso
4 rojo
Sospechoso
5 amarillo
Muestras
de DNA
Enzimas de
restriccin
EcoRI y
PstI
Volumen total
de la
reaccin
10 l
10 l
20 l
10 l
10 l
20 l
10 l
10 l
20 l
10 l
10 l
20 l
10 l
10 l
20 l
10 l
10 l
20 l
5.-Cierre los microtubos y mezcle la muestra

golpeando suavemente los tubos con los
dedos. Si se cuenta con una microfuga
aplique un pulso de 2 segundos para
asegurarse que toda la muestra se quede en
el fondo del microtubo, permitiendo que se
mezcle adecuadamente y se lleve a cabo la
reaccin.
6.-Coloque los tubos en la gradilla e incbelos
a 37C por 45 minutos.
PROCEDIMIENTO
1.-Marcar los microtubos de la siguiente
forma:
a) Tubo verde (muestra de la escena)
b) Tubo azul (sospechoso 1)
c) Tubo naranja (sospechoso 2)
d) Tubo violeta (sospechoso 3)
e) Tubo rojo (sospechoso 4)
f) Tubo amarillo (sospechoso 5)
7.-Transcurrido el tiempo de incubacin,

adicione 10 l del amortiguador de carga a
cada tubo tpelos y agtelos suavemente con
los dedos.
2.-Colocar los tubos marcados en la gradilla.
9.-Adicione 275 ml del amortiguador de

corrida o lo que se requiera para que se
cubran los pozos.
8.-Coloque en la cmara de electroforesis el

gel de agarosa, teniendo cuidado que los
pozos se encuentren orientados hacia el
ctodo [polo negativo (terminal negra)].
171
10.-Coloque las muestras en el gel

empleando una punta nueva para cada
muestra, las cuales se depositan de izquierda
a derecha amortiguador en el siguiente orden:
Referencias
1.-Biotechnology Explorer DNA Fingerprinting

Kit
Instruction Manual BIORAD
a) Carril 1: marcador de peso

molecular, HindIII,10 l
b) Carril 2: escena del crimen verde,
10 l
c) Carril 3: sospechoso 1 azul, 10 l
d) Carril 4: sospechoso 2 naranja, 10
l
e) Carril 5: sospechoso 3 violeta, 20
l
f) Carril 6: sospechoso 4 rojo, 10 l
g) Carril 7: sospechoso 5 amarillo,
10 l
11-Cierre la cmara de electroforesis y
asegrese que concuerden las terminales rojo
con rojo y negro con negro. Conecte la
cmara a la fuente de poder, manteniendo la
orientacin de las terminales.
12.-Encienda la fuente de poder. Ajuste el
voltaje a 100 V y realice la electroforesis por
40 60 minutos.
13.-Detenga la electroforesis cuando la
muestra llegue a una distancia aproximada de
2 cm del final del gel. Apague la fuente de
poder, remueva la tapa y
retire
cuidadosamente el gel.
14.-Coloque en una charola 120 ml de la
solucin teidora 100X y el gel, asegurndose
que se encuentre sumergido en la solucin.
Tia los geles por 2 minutos.
Cortar en pequeas
piezas con enzimas
de restriccin
DNA total
de
una
persona
-ve
Ms
grandes
Fragmentos
de DNA en el
gel
+ve
Fragmentos separados y
transferidos a membrana
de nylon
Ms
pequeas
15.- Despus se deben colocar los geles en

una charola que contenga 500 700 ml de
agua limpia y caliente (40-55C), agite
suavemente el gel por aproximadamente 10
segundos y retire el agua, realizar los lavados
que sean necesarios con agua limpia hasta la
aparicin de las bandas de DNA y hacer la
comparacin de las muestras.
172
III
Casos de correlacin bioqumica
y prctica mdica
173
Caso 1
Clera
Un hombre de 38 aos de edad con peso

de 71 kg relata que su padecimiento actual
se inici con anorexia, dolor abdominal y
diarrea. Un da despus sigui con nusea
intensa, vmito y diarrea muy abundante y
lquida. Ingres al hospital con hipotensin
postural y deshidratacin. Se pudo aislar
Vibrio cholerae toxgeno de sus heces. El
paciente mejor rpidamente al reponerle
agua, electrlitos y administrarle tetraciclina
por va oral.
Preguntas de bioqumica
1. Qu procesos de la membrana
resultan afectados por Vibrio cholerae
en un caso de clera?
2. Qu valores de laboratorio clnico
podran estar alterados en este
paciente?
3. Cules seran los datos de laboratorio
que permitiran precisar el tratamiento
hidroelectroltico?
4. Por qu en este caso hay que aadir
glucosa al tratamiento hidroelectroltico
por va oral?
5. Cules
son
los
signos
de
deshidratacin?
6. Cul fue la situacin cido-base del
paciente al momento de su ingreso al
hospital?
Conceptos y reas de aprendizaje

1. Describir
la
composicin,
las
propiedades y las funciones de las
membranas biolgicas.
2. Estudiar la base bioqumica de algunos
trastornos que afectan la funcin de las
membranas.
3. Modelos de transporte transepitelial.
4. Describir los mecanismos por los cuales
los
organismos
enteropatgenos
ocasionan prdida intestinal de agua y
electrolitos.
5. Control del agua y de la osmolaridad.
6. Equilibrio cido-base.
7. Deshidratacin
y
tratamiento
de
reposicin hidroelectroltica.
REFERENCIAS
1. Villazn SA, Crdenas CO, Villazn DO,
Sierra UA. Fluidos y electrlitos. Mxico:
JGH Editores; 2000.
3. Montgomery R. Bioqumica: Casos y
texto. 6a. ed. Barcelona: Editorial
Harcourt-Brace; 1998: cap. 4 y 12.
174
Caso 2
Oclusin intestinal. Acidosis metablica.
Deshidratacin grave.
Se trata de un paciente masculino de 35

aos de edad quien acude al servicio de
urgencias de un hospital por presentar
dolor abdominal intenso acompaado de
vmitos frecuentes y abundantes de
contenido intestinal. El paciente presenta
un cuadro de deshidratacin importante.
A la exploracin fsica se obtuvieron los
siguientes datos:
Tensin arterial (TA): 80/50 mmHg
Frecuencia cardiaca (Fc): 120/min
Frecuencia respiratoria (Fr): 32/min
Temperatura (T): 36o C
Los estudios de laboratorio mostraron lo
siguiente:
Electrolitos sricos:
+
Na = 128 mEq/l
+
K = 2.8 mEq/l
Cl = 100 mEq/l
Gasometra arterial:
t
CO2 = 12
pH = 7.29
pCO2 = 24 mmHg
pO2 = 95 mmHg
HCO - = 11.2 mmol/l
3
EB (exceso de base) = 20
Qumica sangunea:
Glucosa = 5.2 mmol/l (95 mg/dl)
BUN = 15 mmol/l
El tratamiento consisti, primero, en el

restablecimiento del balance de lquidos
con solucin salina a 0.9%, electrlitos
+
(reposicin de K ) y ciruga.
1. Evaluar el estado cido-base del
paciente; tomar en cuenta los valores
de pH y presin parcial de bixido de
carbono (pCO2), el valor de bicarbonato
plasmtico (HCO3 ), etctera.

2. Es normal el estado cido-base del
paciente? Qu tipo de desequilibrio
presenta? Cul podra ser la causa de
ese desequilibrio?
3. Qu
relacin
existe
entre
el
metabolismo de los electrolitos y el
agua y entre los trastornos cido-base y
los electrolitos?
4. Qu tipos de alteraciones de lquidos y
electrolitos corporales existen?
5. Calcule la osmolaridad srica (tome en
cuenta la concentracin de las
sustancias que mayormente contribuyen
a establecerla) como aparecen en las
pags. 98 y 113.
6. Cules
son
los
signos
de
deshidratacin?
7. Qu teraputica recomendara a este
paciente para equilibrar sus lquidos y
electrolitos?

1. Propiedades fisicoqumicas del agua.
2. Concepto de pH.
3. Explicar el significado de las variaciones
de los valores normales de pH y de la
composicin electroltica de la sangre.
175
4. Sistemas amortiguadores del plasma,

lquido intersticial y clulas. La
aplicacin de la ecuacin de Henderson
y Hasselbalch al clculo del pH y de la
concentracin de bixido de carbono y
bicarbonato.
5. Equilibrio
cido-base
y
su
mantenimiento.
6. Equilibrio
hidroelectroltico
y
su
mantenimiento.
REFERENCIAS
1. Harrison. Principios de medicina interna.
15a.
ed.
Madrid:
McGraw-Hill
Interamericana
Editores; 2001; cap:
Lquidos y electrlitos y Obstruccin
intestinal aguda. p. 184.
3. Montgomery R. Bioqumica: Casos y
texto. 6a. ed. Barcelona: Editorial
Harcourt-Brace, 1998; cap. 4.
4. Laguna J, Pia E. Bioqumica de
Laguna. 5a.ed. Mxico: Editorial El
Manual Moderno; 2002: 41-76.
5. Villazn SA, Crdenas CO,Villazn DO,
Sierra UA. Fluidos y electrlitos. Mxico:
JGH Editores; 2000.
176
Caso 3
Hipoglucemia secundaria
a intoxicacin alcohlica
Se trata de un paciente de 58 aos,
alcohlico crnico, cuyos familiares relatan
que ha ingerido una gran cantidad de
alcohol en los dos ltimos das con un
consumo muy escaso de alimentos. Inici
su padecimiento con nusea, vmito,
mareo, sudacin, cefalea, visin borrosa y
confusin; present, en una sola ocasin,
una convulsin, por lo que es llevado al
servicio de urgencias. A la exploracin se
encuentra semiconsciente con aliento
alcohlico e hipotermia.
Se procede a un lavado gstrico para
remover el alcohol an no absorbido; se
mantienen
permeables
las
vas
respiratorias; se instala oxgenoterapia y se
le administra solucin glucosada por va
endovenosa.
Los resultados de laboratorio muestran:
Alcohol
300 mg/dl
Glucosa
2.0 mmol/l
Lactato
9.0 mmol/l
pH
7.2
1. Cules son los sntomas de la
hipoglucemia?
2. De qu forma el etanol produce acidosis
lctica e hipoglucemia? Cmo se
encuentra la relacin intracelular de
+
NADH/NAD ? Qu procesos metablicos
se favorecen con los niveles altos de
NADH?
3. El alcoholismo es la base de muchas

deficiencias
vitamnicas.
Qu
implicaciones metablicas tienen estas
deficiencias (complejo B)?

1. Hipoglucemia. Regulacin de la glucemia.
2. Acidosis lctica.
3. Metabolismo de carbohidratos.
4. Trastornos del metabolismo de vitaminas.
5. Metabolismo del etanol.
REFERENCIAS
1. Murray KR, Granner DK, Mayes PA,
Rodwell VW. Bioqumica de Harper. 16a.
ed. Mxico: Editorial El Manual Moderno;
2004. p. 980-981
15a.
ed.
Madrid:
McGraw-Hill
Interamericana Editores; 2001. Captulos:
Acidosis lctica, hipoglucemia, alcohol y
alcoholismo, deficiencia y exceso de
vitaminas.
4. Academia Nacional de Medicina. Tratado
de medicina interna. 2a. ed. Mxico:
Editorial El Manual Moderno; 1994.
Captulos: Acidosis lctica e intoxicacin
aguda por alcohol etlico.
177
Caso 4
Cetosis por inanicin.
Obesidad
Una mujer de 27 aos llega al servicio de
urgencias mdicas despus de haber sufrido
un desmayo. Al interrogarla, relata que lleva
15 das a dieta de agua, t y verduras
cocidas para bajar de peso, sin ningn
control mdico. Se detect aliento con olor a
manzana, cetonuria, cetonemia, cidos
grasos libres elevados, triacilgliceroles
elevados, hipoglucemia y presin arterial
baja; su peso al iniciar la dieta era de 78 kg y
su estatura de 1.59 m. Se diagnostica
cetoacidosis por inanicin y obesidad
exgena.
El estudio de su dieta mostr que gran
parte de su ingesta calrica era en forma de
carbohidratos (galletas, chocolates, pasteles,
refrescos, dulces, etctera).
El tratamiento consisti en administrar
parenteralmente solucin glucosada y
continuar con una dieta normocalrica.
1. En esta mujer de 27 aos: corresponde
el peso a su talla? Determinar su ndice
de masa corporal, grado de obesidad y el
porcentaje de sobrepeso.
2. Cmo es posible que se formen grandes
almacenes de energa en forma de
grasas,
si
la
dieta
contiene
predominantemente carbohidratos?
3. Cules
son
las
interrelaciones
metablicas de los principales tejidos
(hgado, tejido adiposo,
cerebro, msculo, etctera) en la
obesidad?
4. Cules
son
las
interrelaciones
metablicas de los principales tejidos en
el estado de ayuno temprano y en la

inanicin?
5. Cul es el papel de los cuerpos
cetnicos en el metabolismo?
6. Qu rgimen diettico recomendara a
esta persona para bajar de peso?

1. Describir las principales rutas de
biosntesis,
catabolismo
y
almacenamiento de lpidos.
2. Conocer la estructura y funcin de los
triacilgliceroles, cidos grasos y cuerpos
cetnicos.
3. Establecer las bases bioqumicas de la
cetosis y obesidad producidas por
anomalas en el metabolismo de los
lpidos.
4. Describir las alteraciones del equilibrio
cido-base que se producen en la cetosis.
5. Conocer las interrelaciones metablicas
de los principales tejidos corporales en los
estados de buena nutricin, de ayuno
temprano, de inanicin, de renutricin, de
homeostasis calrica, etctera.
REFERENCIAS
15a.
ed.
Madrid:
McGraw-Hill
3. Montgomery R. Bioqumica: Casos y texto.
6a. ed. Harcourt-Brace; 1998.
4. Casanova E. Nutriologa mdica. Editorial
Mdica Panamericana; 1995.
178
Caso 5
Hipercolesterolemia y aterosclerosis
Un hombre de 56 aos acudi al mdico
por presentar dolor precordial en reposo que
se incrementaba con el esfuerzo. Se le
detect hipercolesterolemia que, al anlisis
de los lpidos plasmticos, mostr que la
mayora del colesterol plasmtico elevado se
encontraba en la fraccin de lipoprotena de
baja densidad (LDL). Se le realiz una
arteriografa coronaria la cual mostr un
estrechamiento de las arterias. La evaluacin
de la dieta indic que consuma gran
cantidad de alimentos ricos en colesterol,
aunque en los ltimos meses haba seguido
una dieta baja en grasas.
Fue diagnosticado de aterosclerosis en las
arterias coronarias.
El tratamiento consisti en una dieta sin
colesterol y en administrar preparados de
lovastatina, un inhibidor de la HMGCoA
reductasa.
Fue tratado tambin con colestiramina,
una resina que capta las sales biliares. La
resina no se absorbe y permanece en la luz
intestinal donde se une a las sales y aumenta
la cantidad de las mismas que se excreta con
las heces.
1. Cules son algunos alimentos ricos en
colesterol?
2. Cul es el destino del colesterol de la dieta?
3. Cul es la funcin de la bilis en la digestin?
4. Qu conexin metablica existe entre el
colesterol y las sales biliares?
5. Cmo disminuye la resina de colestiramina
la concentracin plasmtica de colesterol?
6. Por qu se le ha llamado al colesterol-LDL:
colesterol malo y al colesterol-HDL:
colesterol bueno?
7. Cmo puede la hipercolesterolemia producir

aterosclerosis,
infarto
del
miocardio,
xantomatosis, etctera?
8. Por qu el hecho de disminuir la
concentracin plasmtica de colesterol puede
ser til para la salud de este paciente?
9. Qu papel desempea la HMG-CoA
reductasa en la biosntesis del colesterol?
10. Cul es la razn del uso de la lovastatina
para el tratamiento del paciente?

1. Estructura del colesterol y otros esteroles
importantes.
2. Biosntesis, metabolismo y excrecin del
colesterol y de los cidos biliares.
3. Describir la funcin de la bilis y su relacin
con el colesterol.
4. Considerar el papel del colesterol en el
desarrollo de la aterosclerosis y de la relacin
entre hipercolesterolemia e ingesta diettica
de lpidos en esta enfermedad.
5. Comentar los principios del transporte de
lpidos en el sistema circulatorio.
6. Describir
la
composicin,
estructura,
metabolismo y funcin de los principales
tipos de lipoprotenas plasmticas.
7. Describir los defectos del metabolismo
lipdico que tienen relevancia clnica en
relacin con la hipercolesterolemia.
REFERENCIAS
1. PLM.
Diccionario
de
especialidades
farmacolgicas. 49 ed. 2004.
2. Montgomery R. Bioqumica. Casos y texto.
6a. ed. Barcelona: Editorial Harcourt-Brace,
1998: cap. 10 y 11.
3. Harrison. Principios de medicina interna. 15a.
ed. Madrid: McGraw-Hill Interamericana
Editores; 2001: Captulos: Aterosclerosis y
179
otras
formas
de
arteriosclerosis
e
hiperlipoproteinemias y otros trastornos del
metabolismo lipdico.
4. Pennachio D. Lineamientos para la deteccin
de hipercolesterolemia. Atencin Mdica
1997;10/2:30-43.
5. Vogel RA. Coronary risk factors, endothelial
function, and atherosclerosis. Clin Cardiol
1997; 20:426-432.
6. Goodman & Gilmans. The pharmacological
basis of therapeutics. 10th ed. McGraw-Hill
7.
Mecanismo
de
accin
de
los
hipercolesterolemiantes.
Rev
Mdico
General. 1997; 2(7): 71-74.
180
Caso 6
GOTA
Un hombre de 53 aos relata que su

padecimiento actual se inici con una
inflamacin aguda del ortejo mayor del pie
derecho e intenso dolor, el cual se
intensificaba con el fro y el movimiento.
Adems, asegura que poco antes de
presentar este episodio agudo el paciente
haba incrementado el consumo de carne,
vsceras, leguminosas y vino de mesa en
abundancia.
Fue tratado con fenilbutazona, pero
present dao gstrico, por lo que se cambi
el medicamento por alopurinol y naproxn.
1. Qu alteraciones metablicas pueden traer
como consecuencia un aumento en los
niveles sricos de cido rico?
2. Son necesarias las purinas y las pirimidinas
en la dieta?
3. Qu alimentos son ricos en purinas y
pirimidinas?
4. Qu valores de laboratorio podran estar
alterados en este paciente?
5. Son importantes los antecedentes familiares
de este paciente?
6. Cul es la base bioqumica para sospechar
que una dieta rica en protenas puede
provocar ataques de gota en pacientes
susceptibles?
7. Cmo se relaciona la ingestin de etanol
con el incremento de la concentracin
plasmtica de cido rico?
8. Qu rgimen diettico le recomendara a

esta persona para mejorar sus niveles de
cido rico?
9. Cul es la base bioqumica para la accin
de los medicamentos utilizados en la gota?

1. Caractersticas estructurales de los cidos
nucleicos.
2. Biosntesis y catabolismo de purinas y
pirimidinas.
3. Explicar
cmo
interfieren
algunos
medicamentos utilizados en el tratamiento de
la gota con el metabolismo de los
nucletidos.
REFERENCIAS
1. Harrison. Principios de medicina interna. 15a.
ed. Madrid: McGraw-Hill Interamericana
Editores; 2001.
3. Montgomery R. Bioqumica: Casos y texto.
6a. ed. Barcelona: Editorial Harcourt-Brace;
1998: Cap. 13.
4. Rodrguez Carranza R y col. Vademcum
acadmico de medicamentos. 4a. ed.
Mxico: Facultad de Medicina, UNAM y
McGraw-Hill Interamericana Editores; 2004.
181

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11. Huella gnica. Rebeca Miln Chvez y Eugenia Flores

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C. Mutaciones y reparacin del DNA

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BIOLOGA CELULAR Y TISULAR

ASIGNATURAS DE LIBRE ELECCIN***

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SALUD PBLICA IV**

MEDICINA GENERAL II*

ASIGNATURAS DE LIBRE ELECCIN***

2. Importancia de la asignatura en la carrera.

Molecular se encuentran descritos en este Manual

III DATOS GENERALES DE LA ASIGNATURA

VI. ESTRUCTURA DEL CURSO

UNIDADES TEMTICAS Y CONTENIDO

UNIDAD TEMTICA I: Estructura molecular