REA DE CIENCIAS QUMICO

BIOLGICAS
LABORATORIO DE BIOLOGA CELULAR

PRCTICA 4

OBSERVACIN DE CLULAS
SANGUINEAS

DOCENTE: ME MARISELA MORENO GALDEANO

TAMPICO, TAMAULIPAS, MEXICO A 6 DE MARZO DE 2011

OBJETIVOS

Realizar la tcnica de extensin o frotis sanguneo.

Reconocer las caractersticas de las clulas sanguneas y sus funciones.

Practicar la tcnica de tincin mediante el set de tincin rpida para frotis

sanguneo Diff-Quik.

INTRODUCCIN

Como todo tejido la sangre se compone de clulas y componentes extracelulares

(su matriz celular). Estas dos fracciones tisulares vienen representadas por:

Los elementos formes tambin llamados elementos figurados : son

elementos semislidos (es decir, mitad lquidos y mitad slidos) y
particulados (corpsculos) representados por clulas y componentes
derivados de clulas.

El plasma sanguneo: un fluido traslcido y amarillento que representa la

matriz extracelular lquida en la que estn suspendidos los elementos
formes.

Los elementos formes constituyen alrededor del 45% de la sangre. Tal magnitud
porcentual se conoce con el nombre de hematocrito (fraccin "celular"), adscribible
casi en totalidad a la masa eritrocitaria. El otro 55% est representado por el
plasma sanguneo (fraccin acelular).
Los elementos formes de la sangre son variados en tamao, estructura y funcin,
y se agrupan en:

las clulas sanguneas, que son los glbulos blancos o leucocitos, clulas
que "estn de paso" por la sangre para cumplir su funcin en otros tejidos;

los derivados celulares, que no son clulas estrictamente sino fragmentos

celulares; estn representados por los eritrocitos y las plaquetas; son los
nicos componentes sanguneos que cumplen sus funciones estrictamente
dentro del espacio vascular.

Las tinciones hematolgicas son un conjunto de procesos que conducen a la

coloracin de las estructuras que componen las clulas sanguneas. Esto tiene por
objeto el aumentar el contraste entre esas estructuras y el medio que las rodea, y
permite por tanto que las clulas sean visual izadas microscpicamente con mayor
facilidad.
La prctica del frotis sanguneo, tambin llamado extendido, es de gran
importancia en hematologa ya que el diagnstico de muchas enfermedades
hematolgicas puede realizarse con slo observar las caractersticas morfolgicas
de las clulas sanguneas.

ANTECEDENTES

Paul Ehrlich, es el autor de la tincin que posibilit el mtodo diagnstico de la

baciloscopa el cual fundamento en el carcter alcohol-cido resistente a la
decoloracin propio del bacilo, para evidenciar utiliz cido ntrico y tio con
violeta de genciana o fuesina, en presencia de anilina disuelta en agua. Este genio
alemn, naci el 14 de marzo de 1854 en Strehlen. Silesia, fue siempre un gran
aficionado a los colorantes y a las tinciones. De hecho su tesis para recibir su ttulo
de mdico, vers sobre la teora y la prctica de las tinciones de los tejidos
animales. El fue el primero que clasific los colorantes en cidos, bases y neutros,
y el mismo que revolucion las tinciones hematolgicas. En 1882 fue la fecha en
que comienza la inslita historia de la tincin.

Hoy en la actualidad la realizacin de extensiones y tinciones es prctica habitual

en el laboratorio. Pese a no realizarse a todas las muestras, al no ser considerado
procedimiento de rutina, es necesario en aquellos casos en los que se detecte
mediante anlisis previos alguna alteracin.
La correcta realizacin, as como una buena interpretacin de lo observado,
permite en muchos casos el diagnstico de hematopatas.

OBTENCION Y TINCION DE UN FROTIS DE SANGRE

IDENTIFICACIN DE LAS CLULAS SANGUNEAS
TIPO CELULAR
ERITROCITOS

ASPECTO
Forma de
disco
bicncavo,
anucleados,
dan color
rojo a la
sangre

TAMAO

EOSINFILOS

BASFILOS

GRANULOCITOS

FUNCIONES

7 m
de
referencia

LEUCOCITOS

NEUTRFILOS

ABUNDANCIA
RELATIVA

700 por cada

leucocito

Transporte de oxgeno
98% y, secundariamente
CO2 25%

1 por cada 700

eritrocitos
Ncleo con
3-5 lbulos
unidos por un
filamento.
Granulacin
muy fina,
difcilmente
perceptible.
Ncleo con
dos lbulos
unidos por un
delgado
filamento.
Las
granulacione
s acidfilas
dan una
coloracin
rojiza al
citoplasma.
Ncleo
voluminoso
bilobulado.

12 m

9 m

~1 de cada 2
Leucocitos

~3 de cada 100
Leucocitos

Fagocitosis. Pueden
abandonar el torrente
circulatorio y penetrar en
los tejidos para realizar
all la fagocitosis.

Fagocitan los complejos

antgenoanticuerpo. Su nmero
aumenta
en las reacciones
alrgicas
y en las infecciones
parasitarias.

Contienen heparina
(anticoagulante)

Los grnulos
basfilos
son gruesos,
tien el
citoplasma
de color
oscuro y
frecuenteme
nte dificultan
la
observacin
del ncleo.

LINFOCITOS

MONOCITOS

TROMBOCITOS

Ncleo
esfrico que
ocupa
la mayor
parte de la
clula.
Citoplasma
muy escaso.
Ncleo
ovoide, en
forma de
rin o de
herradura. El
ncleo
es ms claro
que el de
los linfocitos
(cromatina
menos
densa)
Anucleados.
Esfricos,
ovales
o alargados.
Aparecen
en grupos
(aglutinados)
en
las
extensiones.

12 m

~1 de cada 200
Leucocitos

~1 de cada 3
Leucocitos

e histamina
(vasodilatador).
Responsables de los
cambios
producidos en los vasos
sanguneos durante los
procesos
inflamatorios.

Producen anticuerpos.
Son responsables
del rechazo de los
injertos y los trasplantes

6-8 m

9-12 m

3 m

~1 de cada 15
Leucocitos

Difcil de
estimar
por aparecer
aglutinados

Fagocitosis. Se vuelven
muy
activos despus de
atravesar la
pared de los capilares y
penetrar
en el tejido conjuntivo.
Fagocitan
sobre todo virus, hongos
y protozoos.
Forman un tapn cuando
los
vasos sanguneos son
lesionados.
Liberan tromboplastina,
que
interviene en la
formacin del
cogulo, y serotonina ,
un vasoconstrictor.

Material
- Algodn
- Alcohol
- Lancetas estriles
- Portaobjetos
- Frascos de tincin
- Microscopio
Reactivos
- Set de coloracin rpida para frotis sanguneos Diff-Quik:

Solucin fijadora
(Fast Green en metanol)
Solucin colorante I
(Eosina G en tampn fosfato)
Solucin colorante II
(Tiazina en tampn fosfato)

Evita el deterioro de la estructura celular

Tie de rosa plido el citoplasma y las
granulaciones acidfilas
(eosinfilas)
Tie de color azul-violeta oscuro los
ncleos de las clulas y
las granulaciones basfilas.

Procedimiento
Con un algodn empapado en alcohol limpia el dedo que te vayas a pinchar.
Coge una lanceta estril por el extremo en el que no est el pincho, para que se
mantenga estril y pnchate en la yema del dedo. El pinchazo debe ser profundo, de tal
manera que la sangre salga por simple flexin de la falange, sin necesidad de apretar.
Una vez recogida la sangre necesaria vuelve a limpiar el dedo con el algodn mojado en
alcohol.
Deposita una gota de sangre en un extremo del porta.
Para realizar el frotis (extensin) se procede como indica el dibujo.

A. Deposita una pequea gota de sangre en un extremo del portaobjetos. Si la cantidad

de sangre es excesiva las clulas quedarn apelotonadas en la extensin y ser difcil
observarlas.
Coloca el segundo portaobjetos formando un ngulo de unos 45 con el primero y
asegurndote de que apoya todo el borde.
Desliza lentamente el portaobjetos hacia la gota de sangre hasta que entren en contacto.
Vers como la sangre se extiende por el borde.

B. Desliza ahora el porta en el sentido contrario en un movimiento rpido y procurando

que no pierda el contacto con el otro.
C. Todo el procedimiento se debe realizar apoyado en la mesa y sujetando el porta como
indica el dibujo.
D. Deja secar el frotis al aire antes de comenzar el proceso de tincin.

Sumerge el portaobjetos con la extensin de sangre durante un segundo en la solucin

fijadora, djalo escurrir y vuelve a sumergirlo durante otro segundo y repite el
procedimiento hasta haber completado diez inmersiones de un segundo.
Repite el procedimiento con las soluciones colorantes I y II. Es importante que no se
altere el orden de los colorantes, ya que, de otra manera, no se obtendra el resultado
esperado. Debes evitar tambin la contaminacin de unos lquidos con otros.
Por ltimo debe lavarse el exceso de colorante con abundante agua. El chorro de agua
no debe ser fuerte, para evitar que arrastre las clulas sanguneas. La mejor manera es
colocar el porta inclinado y dejar caer un pequeo chorro de agua sobre el extremo
superior.

Observacin
Las clulas ms abundantes son, con gran diferencia, los eritrocitos. Son clulas
anucleadas y quedan teidos de color anaranjado plido. Se puede observar distinta
intensidad de coloracin entre el centro y la periferia, debido a su forma caracterstica
de disco bicncavo.

Si recorremos la extensin lentamente, de vez en cuando nos llamarn la atencin los

leucocitos, generalmente ms grandes que los eritrocitos y con sus ncleos
intensamente teidos de color azul violeta.
Utiliza el cuadro de los elementos formas de la sangre para intentar identificar los
distintos tipos de leucocitos; los rasgos que te van a ser ms tiles en la identificacin
son: el tamao de las clulas, que podrs determinar por comparacin con los
glbulos rojos, la forma del ncleo y la coloracin del citoplasma.
Las plaquetas son difciles de identificar porque se confunden con partculas de polvo
u otras impurezas que aparecen dispersas por la extensin, pero son bastante
abundantes.

Dibujos
Dibuja los tipos celulares que observes, calcula su tamao aproximado utilizando
como referencia el de los glbulos rojos e indica el nmero de clulas de cada tipo
que has podido ver. Seala qu rasgos te han permitido identificar cada tipo de clula.
No olvides poner junto a cada dibujo los aumentos con los que has realizado la
observacin.

DIBUJO

ERITROCITOS

Tamao Aproximado: 7
m

OBSERVACIONES:

DIBUJO

NEUTRFILOS
OBSERVACIONES:

Tamao Aproximado:

DIBUJO

LINFOCITOS

Tamao Aproximado:

OBSERVACIONES:

DIBUJO

MONOCITOS
OBSERVACIONES:

Tamao Aproximado:

DIBUJO

EOSINFILOS
OBSERVACIONES:

Tamao Aproximado:

DIBUJO

BASFILOS
OBSERVACIONES:

Tamao Aproximado:

Cuestiones
Adems de los formes que aparecen en la tabla anterior, qu otros componentes
constituyen la sangre?
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Dnde se forman las clulas sanguneas?
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