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Portas y Cubres
Torundas
Esptulas de siembra
Asas de siembra
Papel celo
Cinta adhesiva
Guantes
REACTIVOS
Suero salino
Azul Algodn Lactofenol: colorante para el examen directo o para teir hongos de un medio de cultivo.
Tinta china
Alcohol de 70.
MEDIOS DE CULTIVO
Para el aislamiento primario de los hongos, se utilizan diversos medios de cultivo. Estos medios hay que seleccionarlos en funcin del
hongo que se sospeche y del tipo de muestra.
Los medios de cultivo se pueden utilizar en tubos cerrados con tapn de rosca o en placas de petri. La gran superficie de estas ltimas
facilita el aislamiento y la dilucin de sustancias inhibitorias en las muestras. Es importante que el medio no se deseque por lo que el
espesor de las mismas debe ser por lo menos de 25 mm, aproximadamente 35-40 mL de medio. Las placas se contaminan con facilidad
durante la incubacin por lo que es aconsejable sellarlas con cinta adhesiva. Los medios en tubo tienen la ventaja de que no se
deshidratan y se contaminan menos, pero en cambio tienen menos superficie.
Si la muestra es de una zona contaminada se deben incluir medios que contengan Cloranfenicol y Cicloheximida. El primero inhibe
los contaminantes bacterianos y el segundo inhibe el crecimiento de hongos saprofitos. Hay algunas especies patgenas que pueden
ser inhibidas por ambos, por esta razn es importante usar medios con y sin agentes inhibidores. Las muestras de zonas estriles
pueden inocularse en medios sin sustancias inhibitorias.
La temperatura de incubacin debe ser seleccionada teniendo en cuenta el tipo de hongo, en general, los medios deben incubarse a
25C y a 37C durante 4 semanas antes de considerarse como negativos. Si se emplean tubos con tapn de rosca deben estar flojos
para permitir la entrada de aire.
Medios ms utilizados
Agar Dextrosado de Saboureaud con Cicloheximida y Cloranfenicol: se utiliza para el aislamiento e identificacin de
dermatfitos y Cndidas.
Agar Dextrosado con Cloranfenicol sin Cicloheximida: se utiliza para el aislamiento e identificacin de patgenos ambientales
y oportunitas.
Suplementado con Tween 80: para diferenciar distintas especies de Cndida y para realizar subcultivos ya que
estimula la esporulacin de hongos miceliales.
Agar de Urea: se utiliza para diferenciar entre levaduras e identificar diferentes especies de Trichophyton.
En lquidos corporales: el volumen tiene que ser mayor de 2 mL. Se fragmenta y se centrfuga. Si las muestras son muy
densas, hay que diluirlas con agua destilada y centrifugar.
En LCR: centrifugar el LCR durante 10 minutos a 1500-2000 r.p.m. Retirar el sobrenadante con una pipeta estril y
resuspender el sedimento con el lquido que ha quedado. Sembrar.
Se realiza para la identificacin de hongos. Suelen ser Gram+ y la nica consideracin a tener en cuenta es que el cristal violeta hay que
mantenerlo por ms tiempo.
Otras tcnicas histolgicas o tinciones: Plata Metalamina; Hematoxilina; Tincin Wright.
EXAMEN DIRECTO Y CULTIVO
Las muestras a partir de las cuales se realizan son:
Exudados ticos
Secreciones respiratorias
Biopsias
Cepillados esofgicos
Escamas
Pelos y uas
Exudado balanoprepuciales
Exudado bucal-lingual
Coloracin
CARACTERSTICAS MICROSCPICAS
TCNICA CON PAPEL DE CELO CON AZUL
Cogemos un trozo de celo tocamos suavemente la parte superior del hongo del que queremos observar sus caractersticas
microscpicas y lo colocamos sobre un porta al que anteriormente habamos aadido una gota de colorante azul algodn de lactofenol.
Observamos al microscopio con el objetivo de 40x o 100x.
CULTIVO O MICROCULTIVO EN PORTA
No se alteran las estructuras fngicas. Se utiliza un medio Saboraud que se vierte sobre una placa de petri (capa delgada). Una vez
solidificado cortamos cuadrados con un bistur estril de 1-3 cm y los colocamos en un porta estril o flameado. El porta estar colocado
en una placa de petri estril, sobre un soporte. En el fondo de la placa aadiremos unas gotas de agua para evitar la desecacin durante
la incubacin.
Inoculamos o bien las esquinas, o bien los bordes del agar con el hongo a estudiar. Tomamos la muestra con un asa estril humedecida
con agua. Sellamos las placas con parafilm y llevamos a incubar.
EXAMEN DE FRAGMENTOS DE COLONIAS AL MICROSCOPIO
Mediante esta tcnica se rompen los conidios y las esporas. Consiste en cortar con el asa un fragmento de la colonia en el borde (asa
en forma de cua) y depositarlo sobre un porta con una gota de azul de lactofenol. Si se ha incluido agar, calentar suavemente para
fundirlo y aplastar el cubre.
TCNICA PARA CONFIRMAR EL DIMORFISMO
Consiste en incubar la misma muestra a 25C, temperatura a la que crecen los hongos miceliales, y a 37C temperatura a la que crecen
las levaduras (tejidos o medios especiales).
Las especies ms importantes dimrficas son: Histoplasma capsulatum, Blastomyces dermatidis, Paracoccidioides brasiliensis,
Coccidiodes imitis. Penicillium marneffei, Slorothrix schenckii.
Para la confirmacin es necesario convertir la fase filamentosa en levaduriforme. Para ello incubamos parte de la colonia micelial en una
placa de Agar Sangre (3-4 fragmentos). Sellamos e incubamos a 37C. Examinamos peridicamente el crecimiento buscando levaduras.
Si crece colonia micelial repetimos la siembra hasta conseguir fase levaduriforme.
MEDIOS DIFERENCIALES
IDENTIFICACIN DE LEVADURAS
Test de filamentacin
Preparamos una suspensin de levaduras en 0.5-1 mL de suero de conejo e incubamos a 35-37C no ms de 3 horas.
Transcurrido el tiempo observamos al microscopio la presencia o ausencia de tubos germinales, es decir, de filamentos que no
constrien su punto de origen en la levadura.
El test ser POSITIVO si se observan los tubos germinales (C. albicans)
El test ser NEGATIVO cuando no encontremos los tubos germinales ((otras especies de Cndida).
Medio diferenciador para levaduras
Posee cromgenos que colorean las colonias segn la especie. En el caso de la Cndida albicans, las colonias son de color azul.
Asimilacin de azcares (API)
Zygomycota
Ascomycota
Basidiomycota
Zygomycota
Basidiomycota
Mviles
Artroconidias (*)
Aleuroconidias (*)
Conidias Blsticas: se forman por gemacin a partir de las hifas o de las clulas conidigenas especializadas. Segn el
origen de la pared de la conidia se clasifican en:
Blastoconidias (*)
Simpodioconidias (Conidiosporas)
Aneloconidias (Conidiosporas)
Poroconidias (*)
Fialoconidias (*)
Talosporas
o
Artrosporas
Blastosporas
Clamidiosporas
Formas especializadas
Esporangios
Conidiosporas
Terminologa til
Coridio: polvo
Aleurio: harina de trigo
Artro: articulacin
Blastos: yema
Clamidio: manto
Esporangio: vaso
(*) Son los de mayor importancia para nosotros
REPRODUCCIN SEXUAL . CRITERIO DE AGRUPACIN PARA HONGOS
ZIGOSPORA: Clula grande y rodeada de una gruesa pared. Se produce por la fusin de dos clulas morfolgicamente semejantes
(mirar dibujo en fotocopia).
ASCOSPORAS: Se forman por la fusin nuclear de dos clulas morfolgicamente similares o distintas. Estas esporas se forman dentro
de una estructura en forma de saco llamada Asca (mirar dibujo en fotocopia).
BASIDIOSPORA: Se forman externamente sobre una base llamada basidio.
CLNICA
Agrupamos los hongos, en funcin de la situacin preferente de las lesiones producidas por ellos, en los siguientes grupos:
HONGOS PRODUCTORES DE MICOSIS SUPERFICIALES
DERMATOFITOS: Son hongos filamentosos, septados, con afinidad por la queratina, resistentes a la cicloheximida o actidiona.
En base a las caractersticas morfolgicas en cuanto a la reproduccin asexual se clasifican en tres gneros:
Microsporum
Trichophyton
Epidermophyton
Microsporum
Presenta abundantes macroconidias con pared gruesa y rugosa con septos transversales en nmero que oscila de 3 a 15. Su aspecto
suele ser fusiforme. Las microconidias son escasas o incluso ausentes, tienen forma piriforme.
Desde el punto de vista clnico, microsporum se puede encontrar infectando la piel, el cabello y excepcionalmente las uas.
El principal representante de este grupo es el Microsporum canis, que en un medio de cultivo presenta colonias planas, con un micelio
cereo corto, de color amarillento en la periferia y blanquecino en el centro. El reverso que es inicialmente amarillo, pasa posteriormente
anaranjado.
Trichophyton
Presenta unas macroconidias de pared delgada y lisa que se observa de forma individual o en racimos que presenta forma de maza con
un nmero de septos que depende de la longitud de la conidia.
Las microconidias son muy numerosas con forma esfrica, oval o periforme y aparecen formando racimos a lo largo de las hifas.
Las especies del gnero Trichophyton pueden infectar la piel, el pelo y las uas.
El principal representante de este grupo es el Trichophyton mentagrophytes que crece dando colonias planas, con el centro ligeramente
elevado, de superficie pulverulenta o algodonosa.
Epidermophyton
No presenta nunca microconidias. Desarrolla abundantes macroconidias con pared y septos delgados, completamente lisas, en forma
de mazas y dispuestas en racimos. No suelen presentar ms de 4 septos. Se encuentran infectando la piel, en ocasiones las uas y
nunca el pelo.
El principal representante de este gnero es Epidermophyton floccosum que presenta colonias de aspecto pulverulento o aterciopelado
de color amarillo-verdoso o de color marrn. El reverso es tambin de color amarillo-marrn.
Caractersticas morfolgicas de los dermatofitos
Microscpicamente observamos un micelio con hifas tabicadas, abundantes y ramificadas. Entre ellas aparecen hifas que generan
elementos de propagacin asexual y que pueden ser:
Macroconidias: clulas pluricelulares, grandes, en forma de huso o maza. Presentan septos transversales y paredes que
pueden ser finas o gruesas y lisas o rugosas.
Tonsunantes
Fvicas
Inflamatorias
Epidermofitias:
Herpes circinado
Epidemiologa de los dermatofitos: agrupamos los dermatofitos en funcin de las diferentes adaptaciones parasitarias en:
Producidas por un grupo de hongos que se denominan dermatiaceos (pigmentados negros). El hongo penetra en el tejido subcutneo,
generalmente por un traumatismo y queda localizado en el lugar de la lesin en los tejidos cutneos y subcutneos. La respuesta del
husped se caracteriza por la aparicin de ndulos verrucosos que sobresalen entre 1 -3 cm sobre la piel.
o
Suele ser una lesin crnica que se caracteriza por el desarrollo de ndulos en los tejidos cutneos y subcutneos que llegan a
ulcerarse y producir supuracin, acompandose de una afectacin de los ganglios linfticos de la zona. El hongo penetra generalmente
por traumatismos subcutneos con rboles y plantas, aunque tambin se puede producir la infeccin por mordedura de animales,
picaduras de insectos, etc.
o
Se caracterizan por la aparicin de tumoraciones mltiples y deformantes en las que se produce una fistulizacin por las que drena un
lquido que contiene el hongo infectante.
HONGOS PRODUCTORES DE MICOSIS SISTMICAS
Son infecciones fngicas de tejidos profundos del cuerpo que pueden afectar a distintos rganos. Suelen estar causadas por hongos
saprofitos que viven en el suelo y cuya transmisin se produce por inhalacin. Suelen comenzar de forma caracterstica en los pulmones
desde donde se extienden a otros tejidos. Por regla general no suele producirse el contagio del animal al hombre.
Micosis primarias: afectan a individuos inmunocompetentes
Es un hongo dimrfico, es decir, que se puede encontrar como parsito en estado levaduriforme (30-37C) o como saprofito en estado
filamentoso o micelial (25C). Se localiza primariamente en los pulmones y puede producir lesiones en diferentes rganos del cuerpo.
La sintomatologa es poco clara y se desarrolla de forma subclnica. Esta micosis se contrae por inhalacin de las conidias transportadas
por el aire, las cuales se han formado bajo condiciones particulares de humedad y pH. Estas condiciones suelen producirse cuando se
acumulan excrementos de aves que por su alto contenido en nitrgeno favorecen el desarrollo del hongo.
Se trata de un hongo dimrfico (igual que el anterior). La infeccin comienza en los pulmones y se disemina a otros rganos.
Frecuentemente aparecen lceras cutneas con formacin de abscesos y destruccin de tejidos. El m.o puede aislarse del pus y de las
biopsias de tejidos.
Se trata de un hongo dimrfico. Se produce por inhalacin de las conidias transportadas por el viento. Da lugar a una infeccin
respiratoria y se manifiesta con dolor torcico y a veces fiebre, aunque la mayora de las veces inaparentes
Micosis secundarias: afectan a individuos inmunodeprimidos (oportunistas)
Lo caracterstico de Criptococcus es la presencia de una cpsula que se observa mediante una tincin con tinta china. Se desarrolla
bien en los medios de cultivo habituales. Es caracterstica la infeccin pulmonar, que a menudo es asintomtica.
Formas filamentosas:
Se caracterizan porque producen infecciones muy graves en las cuales el hongo invade paredes arteriales produciendo embolias y
necrosis tisular.
CANDIDIASIS - CANDIDOSIS - CNDIDA
Las candidiasis son las infecciones agudas o crnicas, superficiales o profundas, causadas por levaduras del gnero Cndida.
Son clulas redondeadas u ovaladas que aparecen de forma individual o asociadas formando pseudomicelios. Son Gram+ y su
metabolismo es principalmente aerobio. Forman parte de la flora saprofita mucocutnea existiendo un equilibrio entre su virulencia y los
mecanismos de defensa del husped. Cndida albicans se encuentra habitualmente formando parte de la flora gastrointestinal y bucal
y tambin como parte de la flora vaginal.
Manifestaciones Clnicas
Candidiasis Cutneas:
o
Candidiasis oral: muget bucal ! recin nacidos cuando hay un descenso del pH y la flora habitual normal an no es
completa.
Candidiasis genitourinarias:
Candidiasis sistmicas: invasin de tejidos (localizacin renal, SNC, pulmonar, endocarditis, afectacin cardiaca, etc.)
ACTINOMICETOS
Son bacterias Gram+ que se asemejan a los mycobacterias. En la observacin al microscopio se presentan con morfologa variable, que
puede ser cocobacilar o filamentosa. El aspecto macroscpico de las colonias puede ser similar al de una bacteria o presentar hifas
areas recordando la morfologa de los hongos filamentosos. Se encuentran principalmente en suelos, plantas y vegetales, aunque
tambin se pueden aislar de la piel, orofaringe, y tracto gastrointestinal del hombre y de los animales. El hombre puede infectarse por
este tipo de bacterias por inhalacin o por contacto directo con una herida o traumatismo abierto.
ESPECIES DE IMPORTANCIA CLNICA
Gneros: Nocardia, Nocardiopsis, Streptomyces, Actinomadura, Rhodococcus.
N. asteroides, N. brasiliensis: mayor parte de las infecciones sistmicas
N. brasiliensis, Streptomyces somaliensis, Actinomadura madurae: micetoma
Rhodococcus: infecciones de heridas abiertas, abscesos, infecciones pulmonares, osteomielitis.
IDENTIFICACIN
Nocardia y Rhodococcus tienen tendencia a fraccionarse y aparecen al microscopio con morfologa cocobacilar.
Actinomadura y Streptomyces se presentan como masas filamentosas.
No hay un medio especfico para el aislamiento de estos microorganismos. Se puede emplear cualquier medio general como el
Saboraud con o sin antibiticos, Agar Sangre, etc.
Las especies de Nocardia sobreviven a menudo a los procesos de descontaminacin de mycobacterias, por lo que pueden crecer en
dichos medios.
Las placas para el aislamiento de Actinomices se incuban a 30C.
Los gneros Streptomyces y Nocardia se desarrollan en un tiempo que oscila entre 2 - 10 das, y las especies de Actinomadura pueden
tardar en desarrollarse hasta 3 semanas.
PRUEBAS BIOQUMICAS
PATOLOGA
Hidrlisis de Aminocidos: Casena, Tirosina y Lisina. Se utilizan medios slidos que contengan los aminocidos.
Alrededor de la colonia parece una zona clara.
Resistencia de la enzima Lisozima: los microorganismos resistentes no se lisan cuando se ponen en contacto
con ella. Esto les sucede a las especies que poseen la caracterstica de AAR (Nocardia y Rhodococcus).
Produccin de Ureasa
Licuefaccin de la Gelatina
Reduccin de Nitratos
Degradacin de Etilenglicol
Actividad - galactosidasa
La infeccin producida por este tipo de bacterias depende en gran medida del estado inmunolgico del husped. En individuos
inmunocompetentes son frecuentes los procesos alrgicos y el micetoma. En personas inmunodeprimidas es ms frecuente que se
produzcan infecciones pulmonares y sistmicas.
Enfermedad respiratoria alrgica: producida como una reaccin de hipersensibilidad frente a Ag de los Actynomicetos.
Nocardiosis cutnea
Micetoma
Aislamiento
Los gneros que se encuentra con relativa frecuencia en la naturaleza, por ejemplo sobre
los frutos en putrefaccin, semillas, forrajes, cueros, maderas, etc. Tambin se lo
encuentra normalmente en el suelo. Para aislarlo se tiene en cuenta su estado natural,
procediendo luego de acuerdo con las tcnicas siguientes:
Por dilucin en agar: Una serie de 4 a 6 tubos de cultivo, cada uno de los cuales contiene 10 ml de
un medio de agar adecuado (Medio de Czapeck, medio de Sabouraud, medio de malta), se calienta
en bao de agua para fundir el agar. Enfriar el contenido de los tubos a 45 C; se aade a cada uno de
ellos una pequea cantidad del material que contiene el moho agitando cuidadosamente, se lleva una
pequea porcin a un segundo tubo y el resto se vierte aspticamente en una placa de Petri; se agita
el segundo tubo y se separa una pequea porcin para el tercero, vertiendo el resto en la placa de
Petri. Se contina del mismo modo hasta obtener 4 o 6 muestras, y como el cultivo se va diluyendo
de una a otra, en alguna de ellas habr ya un cultivo puro.
Por separacin de esporas de una colonia. Una vez seleccionada una colonia que se presume pura,
se recogen de la misma unas cuantas esporas mediante una aguja esterilizada, llevndolas a un tubo
que contiene un medio favorable para el crecimiento. La operacin se efecta con ayuda de una lupa
o bien con el microscopio.
Mediante el micromanipulador: El micromanipulador ms conocido es el de Peterfi, construdo
por la Zeiss; es de tipo mecnico ya que las agujas, pipetas, ansas y escalpelo se mueven por juegos
de tornillos en todas direcciones. Consta de una camarita en la cual se coloca una gota del material a
aislar; se observa a travs del miscroscopio. Mediante los dispositivos laterales del
micromanipulador se mueven en todo sentido dos microagujas o dos micropipetas que permiten
recoger o aspirar un solo microrganismo de la suspensin.
Por germinacin de una sola espora: Se hace una dilucin de esporas en agua estril o salina hasta
que cada gota contenga solo una espora, lo que puede comprobarse con auxilio del microscopio. Se
ponen entonces varias gotas sobre la superficie de agar, marcando su posicin para poder localizar el
cultivo correcto en el caso de existencia de algn contaminante.
Por modificacin del mtodo de una sola espora de Keitt: Esta modificacin se debe a Ezekial
(1930). Con ayuda de una aguja de extremo plano cargada con el material que contiene las esporas,
se hacen varios trazos paralelos sobre la superficie de un medio agarizado convenientemente, se
invierte entonces la placa incubndola durante 16-24 hs. y observndola a travs del fondo con el
microscopio (objetivo de 16 mm). Una vez descubiertas las esporas, se marca con tinta su posicin.
Por medio de una aguja de punta cilndrica (que obra como sacabocado) se corta el cilindro de
agar que contiene el esporo. Este cilindro se siembra en una caja de Petri y se observa para estar
seguro de que existe un solo elemento, y luego de desarrollado se resiembra en un tubo con medio de
cultivo apropiado. Se incuba y aparecer la colonia de desarrollo monocitogentico.
Mtodo de Hansen: En este mtodo (Hansen 1926) se prepara una suspensin de esporas en agar,
que se aspira en tubos capilares de dimetro no mucho mayor que el de las esporas. Los tubos
capilares se observan al microscopio y cuando se descubre una espora aislada se rompe el tubo de
manera que el segmento contenga solo una espora. El cristal se trata con alcohol y luego se coloca en
un medio fresco. La espora se desarrolla dando lugar a una colonia. Este mtodo resulta eficaz con
esporas grandes y coloreadas, en cambio no lo es con esporas pequeas.
Peptona
20 gr.
Miel de abejas
80 gr.
Agar-Agar
20 gr.
Agua corriente
1000 ml
Modo operativo:
Colocar todos los componentes en un erlenmeyer de 2 litros, dejar reposar unos 10
minutos para que el agar se embeba en agua, llevar a pH 6,5 con cido sulfrico, colocar
primero el erlenmeyer en bao mara o en el microonda hasta que se consiga fundir el
agar, fraccionar en tubos, esterilizar en autoclave 20 minutos a 1 atm., inclinar los tubos y
dejar solidificar en pico de flauta, conservarlos en heladera hasta su uso, aunque es ms
recomendable tenerlos en el laboratorio a temperatura ambiente ya que en la heladera el
medio de cultivo se deseca ms rpidamente. A veces es conveniente, filtrar por algodn
antes de fraccionar.
Medio de Sabouraud-miel lquido
Se prepara igual al anterior, con la diferencia que no se agrega agar ni se inclinan los
tubos al final.
Medio de Czapek Se compone de:
Sacarosa
30 gr.
Nitrato de sodio
3 gr.
Fosfato de potasio
1 gr.
Cloruro de potasio
0,5 gr.
Sulfato de magnesio
0,5 gr.
Sulfato ferroso
0,01 gr.
Agar-Agar
15 gr.
agua corriente
1000 ml
Modo operativo:
Disolver las sales y la sacarosa en el agua, agregar el agar y dejar reposar unos 10
minutos para que el agar se embeba, llevar al microonda para fundir el agar, continuar el
proceso igual para preparar el medio de Sabouraud-miel slido, (al igual que en dicho
medio, hay que ajustar el pH a 6,5) . Algunos autores recomiendan agregar la sacarosa
despus que se hayan disuelto los dems componentes y fundido el agar, en el momento
previo a la filtracin, agitando bien.
Medio de zanahoria cida
Cortar trozos de zanahorias en forma de cua, de un largo de unos 6 a 8 cm. (con un
sacabocados se sacan los cilindros y luego con un cuchillo se les da la forma de cua), se
sumergen los trozos en una solucin acuosa de cido lctico al 3% hasta que estn bien
embebidos. Luego se los coloca en tubos de Roux, un trozo en cada tubo, la zanahoria
descansa en la estrangulacin, y en la ampolla inferior se coloca la solucin de cido
lctico haciendo que cubra la parte inferior de la zanahoria. Si no se dispone de tubos de
Roux, se coloca el trozo de zanahoria en un tubo de ensayo comn al que se le agrega la
solucin de cido lctico hasta una cuarta parte de la altura del trozo para evitar su
desecacin, taponar con algodn y esterilizar 20 minutos a 1 atm. La siembre de la
levadura se efecta en la parte superior del trozo.
De la misma se puede preparar este medio con papa en lugar de zanahoria para ser
utilizada por hongos filamentosos.
Medio de Papas Dextrosa Agar (PDA)
Agregar a 1 litro de agua corriente, 100 gr. de papa rallada y dejar macerar 30 minutos,
hervir durante 30 minutos y filtrar por Buchner o por algodn, 1,5% de agar, disolver el
agar en micoonda y agregar 2% de glcosa (dextrosa), repartir en tubos y esterilizar 20
minutos a 1 atm.
INCUBACIN
Generalmente se incuban a temperatura ambiente o a 30C; algunos hongos pueden
MTODO DE MICROCULTIVO
El preparado de microcultivo (tambin conocido como cultivo en portaobjeto) se realiza de
la siguiente manera:
En la superficie de una caja de petris se coloca un pedazo de papel de filtro o un trozo de algodon y
dos varillas de vidrio, cortadas de un tamao adecuado. Se coloca un portaobjeto sobre las varillas y
se esteriliza.
Se corta un pequeo bloque de agar papas o similar previamente vertido en una caja de Petris hasta
una profundidad de 4 mm. Esto puede hacerse usando una hoja de bistur estril o un tubo de ensayo
recto estril sin bordes.
Con el mismo bistur estril se coloca el bloque de agar sobre la superficie del portaobjeto.
Con un ansa aguja estril se remueven porciones pequeas de colonia de hongos que se desea
estudiar y se inocula en los cuatros cuadrantes del bloque de agar.
Luego de la inoculacin, se coloca un cubreobjeto estril sobre la superficie del agar.
Se controla que el papel o el trozo de algodn esten hmedo y se incuba.
La colonia crecer por debajo de la superficie del cubreobjeto. Se examina el montaje
peridicamente a simple vista para determinar si la colonia ha madurado y esta lista para su
observacin microscpica.
Cuando es evidente el crecimiento, se retira cuidadosamente el cubreobjeto con pinzas estriles y se
coloca en un portaobjeto que contiene una gota de lactofenol azul de algodn. Si se desea un montaje
permanente, se limpia la superficie del portaobjeto inmediatamente adyacente al borde del
cubreobjeto y se aplica esmalte para uas color claro.
OBSERVACIONES
a) Observacin macroscpica
Colonia gigante:
Sembrar con ansa aguja en el centro de botellas utilizadas en los hemocultivos o tubos
de ensayos con el medio dispuesto en pico de flauta, tambin se pueden usar cajas de
Petri, que contengan un sustrato de por lo menos 3-4 mm de espesor. Incubar.
Describir las caracteres macroscpicos de las colonias (dimetro, elevacin, aspecto
ptico, textura, bordes, color, etc.), haciendo las observaciones a los 3 4 das y luego
cada semana, durante un mes.
b) Observacin microscpica
Del cultivo anterior sembrado, se realiza un montaje y se efectuan las
observaciones correspondientes, respetando los mismos tiempos.
MOHOS
Hifas no tabicadas hifas tabicadas
Zygomycetes Dematiceos Hialinos
Comnmente
hallados:
Conidios
Conidiforos
multicelulares: que terminan
en una
Rhizopus
Tabiques
vescula
transversales dilatada
Mucor
y
longitudinales Especies de
Encontrados
Aspergillus
rara vez:
Alternaria
A. fumigatus
Syncephalastr Stemphyllum
um
A. flavus
Epicoccum
Circinella
A. niger
Curvularia
Cunninghamel
A. terreus
la
Drechsiera
Conidiforos
Absidia
Conidios
que se
unicelulares:
ramifican en
un "penicilio"
Clasdosporiu
m
Penicillium
Dermatofitos:
Especies de
Microsporum
M. canis
M. gypseum
Especies de
Trichophyton
T. rubrum
T. verrucosum
Actinomyces
T. schoenleinii
Nocardia
Especies de
Epidermophyt
on:
Acremonium
E. floccosum
Produccin de
Peritecios
Gliocladium
Chaetomium
Fusarium
Especies de
crecimiento
Conidios
transportados
Paracoccidiod
es brasiliensis
T. tonsurans
Scopulariopsis T. violaceum
Trichoderma
Coccidioides
innitis
Bacterias
filamentosas
ramificadas:
Aureabasidiu
m (Pullularia)
Phoma
Histoplasma
capsulatum
T.
mentagrophyt Sporothrix
es
schenckii
Paecilomyces
Conidios en
racimos:
Blastomyces
dermatitidis
M. audouinii
Nigrospora
Produccin de
Picnidios:
Mohos
dimrficos:
Streptomyces
lento:
aisladamente
Cladosporium
carrionii
Chrysosporiu
m
Phialophora
verrucosa
Sepedonium
Exophiala
jeanselmei
Fonsecaea
pedrosoi
Scedosporium
(Monosporium
)
apiospermum
(Pseudallesch
eria boydii)
LEVADURAS
Hifas formadas en agar-harina de maz-tween 80
Seudohifas:
Especies de Candida:
C. albicans
C. tropicalis
C. parapsilosis
C. pseudotropicalis
C. krusei
C. guilliermondii
Artroconidios:
Geotrichum
Trichosporon
Rhodotorula
Candida flabrata
Saccharomyces*
*Puede haber hifas rudimentarias