Western blot

El Western blot, o inmunoblot, es una tcnica analtica usada para detectar protenas
especficas en una muestra determinada (una mezcla compleja de protenas, como un
extracto tisular). Mediante una electroforesis en gel se separan las protenas atendiendo
al criterio que se desee: peso molecular, estructura, hidrofobicidad, etc. Hay casi tantas
posibilidades como tipos de electroforesis existen. Luego son transferidas a una
membrana adsorbente (tpicamente de nitrocelulosa o de PVDF) para poder buscar la
protena de inters con anticuerpos especficos contra ella.[1] [2] Finalmente, se detecta la
unin antgeno-anticuerpo por actividad enzimtica, fluorescencia... De esta forma se
puede estudiar la presencia de la protena en el extracto y analizar su cantidad relativa
respecto a otras protenas.
Esta tcnica es hoy en da imprescindible en varios campos de la biologa, como la
biologa molecular, la bioqumica, la biotecnologa o la inmunologa. Existe toda una
industria especializada en la venta de anticuerpos (monoclonales y policlonales) contra
decenas de miles de protenas diferentes.[3] [4]
El Western blot fue desarrollado en el laboratorio de George Stark, en la Universidad de
Stanford.[2] El nombre (Western, occidental en ingls) le fue dado por W. Neal Burnette,
[5]
y consiste en un juego de palabras con una tcnica anloga pero que usa DNA, el
Southern (sureo) blot, que en este caso debe su nombre a su descubridor, Edwin
Southern. Otras tcnicas que fueron nombradas siguiendo este criterio son el Northern
blot (en el que se separa e identifica RNA), el Eastern blot, el Southwestern blot.

Antecedentes
Antes de la aparicin del Western blot, ya existan diversas tcnicas capaces de detectar
un antgeno determinado en una muestra, como la inmunoelectroforesis, la
inmunodifusin doble de Ouchterlony, la inmunoprecipitacin...
La aparicin del Western no fue posible hasta la aparicin de las membranas. En 1975,
Edwin Southern demostr que la nitrocelulosa era capaz de capturar cidos nucleicos
separados previamente por electroforesis. De esta forma, se permita el anlisis de una
mezcla compleja de molculas de ADN, como un genoma tratado con enzimas de
restriccin.[6] Se desarroll as el Southern blot, usando el nombre del descubridor como
epnimo; es por ello que tanto esta tcnica como sus derivadas (Western blot, Northern
blot...) se escriben con mayscula.
Ms tarde, Towbin (1979) y Burnette (1981) demostraron que tambin era capaz de
unirse a protenas. Ya en 1986, Millipore desarroll la primera membrana de PVDF
diseada para la transferencia de protenas, la membrana de transferencia ImmobilonTM

PVDF. Porteriormente fue llamada membrana de transferencia Immobilon-PTM para

diferenciarse de otras membranas.
Pasos del Western blot
Preparacin de la muestra
Las muestras pueden ser tomadas de un tejido entero o de un cultivo celular:

Una pequea cantidad del tejido se introduce en un buffer de extraccin.

Despus se procede a homogeneizarlos, sea con una licuadora (para
grandes volmenes de muestra), con un homogenizador (para muestras
pequeas) o por sonicacin. Por ltimo se centrifuga para obtener las
protenas en el sobrenadante, la fraccin no precipitada.[7]

Las clulas pueden lisarse por uno de esos mtodos mecnicos. Tambin
pueden usarse detergentes, sales o tampones que favorezcan la lisis y
solubilicen las protenas. A veces se aaden inhibidores de proteasas y
fosfatasas que evitan la digestin por las enzimas celulares de las
protenas y de las fosfoprotenas, respectivamente.[8]

Los materiales deben estar a bajas temperaturas (~4 C) para evitar la desnaturalizacin
proteica. Para separar protenas de compartimentos y orgnulos celulares es preciso
combinar tcnicas mecnicas - como filtraciones y centrifugaciones - y bioqumicas.

Electroforesis en gel
Artculo principal: Electroforesis en gel
Las protenas de la muestra sern separadas mediante una electroforesis en gel en
funcin de uno o varios (en las electroforesis bidimensionales) de estos criterios: punto
isoelctrico, peso molecular y carga elctrica. La naturaleza de la separacin depende
del tratamiento de la muestra y de la naturaleza del gel.
La electroforesis en gel ms frecuente, conocida como SDS-PAGE, hace uso de gel de
poliacrilamida y de tampn con dodecilsulfato (SDS). En esta tcnica las protenas
sufren un tratamiento por agentes reductores que provocan la prdida de las estructuras
secundaria y terciaria (por ejemplo, reduciendo los puentes disulfuro (S-S) a grupos tiol

(SH + SH)) y mantiene los polipptidos en este estado desnaturalizado. De este modo,
la estructura tridimensional de las protenas no influye en la electroforesis, y pueden
separarse nicamente en funcin del tamao.

[editar] Transferencia
Para que las protenas sean accesibles a la deteccin por anticuerpos, se las transfiere
desde el gel de poliacrilamida a una membrana de nitrocelulosa o de PVDF. Esta
transferencia puede realizarse por difusin, por vaco o por accin de un campo
elctrico (electrotransferencia).
Las membranas que se emplean en el Western blot se caracterizan por su capacidad de
unir protenas de forma inespecfica (es decir, se adhieren a todas las protenas con
idntica afinidad):

las membranas de nitrocelulosa, aunque no se conoce exactamente la naturaleza

de las interacciones membrana - protena, se sabe con cierta seguridad que se
trata de interacciones no covalentes de naturaleza hidrfba.

en las membranas de PVDF, la unin est basada en interacciones hidrofbicas y

de dipolos entre la membrana y las protenas. Como particularidad, deben ser
humedecidas con metanol o etanol antes de exponerlas a tampones acuosos,
debido a su alta hidrofobicidad y a la ausencia de surfactantes.

Las membranas de nitrocelulosa son ms baratas que las de PVDF, aunque son tambin
ms frgiles, tienden a tornarse quebradizas cuando se secan y no pueden ser sometidas
a varias pruebas consecutivas.[9]
Tambin pueden usarse otros soportes, como las membranas de nylon o el papel
activado. Sin embargo, no son tan usados como los anteriores.
Difusin simple
En la transferencia por difusin simple se ponen en contacto las superficies del gel
electrofortico y de la membrana y, sobre sta, se dispone un taco de papeles de filtro.
Con el fin de facilitar el proceso, puede ponerse encima una placa de vidrio y un objeto

pesado. Este montaje se coloca sobre un tampn, que ascender por capilaridad hacia el
papel de filtro arrastrando consigo las protenas. Al llegar a la membrana, quedarn
retenidas en ella.
Este protocolo no est muy extendido actualmente, puesto que la cantidad de protena
transferida a la membrana es muy baja, mucho menor que con la electrotransferencia.
Sin embargo, ha ganado cierta popularidad por una modificacin que permite obtener
mltiples transferencias de un mismo gel, permitiendo de esta forma realizar varias
pruebas sobre geles virtualmente idnticos. Esta modificacin es viable cuando no es
necesaria una transferencia cuantitativa de protena.[10] [11]
Transferencia al vaco
En esta tcnica, se aade el poder de succin de una bomba conectada a un sistema de
secado de planchas de gel, el cual lleva las protenas desde el gel hasta la superficie de
la membrana de nitrocelulosa.[12] Este mtodo es vlido tanto para protenas de alto
como de bajo peso molecular.[11]
Electrotransferencia
Este mtodo se basa en una corriente elctrica y un tampn de transferencia para llevar
las protenas desde el gel hacia la membrana. Para ello, se apilan en el orden descrito los
siguientes elementos (del polo negativo o ctodo al positivo o nodo): esponja, varios
papeles de filtro empapados en buffer de transferencia, gel, membrana, ms papeles de
filtro empapados y otra esponja. Este montaje, llamado coloquialmente sandwich, se
dispone en el sistema de transferencia y se aplica una corriente elctrica, de magnitud
acorde a los materiales empleados, al tiempo disponible,... Las protenas del gel se
desplazan hacia el polo positivo y quedan atrapadas por la membrana.[1]

Tras la transferencia, se suele proceder a la tincin del gel con Coomassie Brilliant Blue
(un colorante de protenas) para comprobar que en efecto una parte importante del
material proteico ha pasado a la membrana.

La electrotransferencia es hoy en da la tcnica de transferencia ms usada gracias a la

velocidad del proceso y al elevado porcentaje de protena que se transfiere
(especialmente en comparacin con las otras tcnicas).
Bloqueo
Puesto que la membrana escogida necesita poder unirse protenas de forma inespecfica,
es preciso bloquear los lugares de unin que han quedado libres tras la transferencia. En
caso contrario, el anticuerpo (de naturaleza proteica) empleado en la deteccin puede
unirse a ellos, dificultando la distincin del complejo antgeno-antgeno que se forma
con la protena que se busca.
En el bloqueo se incuba la membrana con una solucin de protenas, tpicamente de
albmina de suero bovino o ASB (ms conocida por sus siglas en ingls, BSA), leche en
polvo o casena, con una diminuta fraccin de detergente, como Tween 20 o Tritn X100. Las protenas en solucin se unirn a todos aquellos lugares de unin de la
membrana que no estn ya ocupados por las transferidas desde el gel. De este modo, el
anticuerpo slo podr unirse a su antgeno especfico, reduciendo as el ruido de fondo y
los falsos positivos.
Deteccin
En la deteccin se comprueba la presencia en la membrana de una determinada protena.
Para ello se emplea un anticuerpo especfico contra ella unido a enzima que, en
presencia de su sustrato, catalice una reaccin colorimtrica (produce color). De esta
forma, se hace patente la unin con el antgeno, la protena, as como su localizacin.
El proceso tradicionalmente se ha realizado en dos pasos, aunque ahora es posible la
deteccin en un nico paso, lo cual es til en ciertos campos.
Mtodo en dos pasos
Los dos pasos de los que consta este mtodo de deteccin son la unin del anticuerpo
primario y la del anticuerpo secundario.

Anticuerpo primario

El primer paso es permitir la unin de un anticuerpo primario contra la protena

buscada. ste se consigue inoculando dicha protena o uno de sus eptopos (regiones
capaces de desencadenar la respuesta inmune) a un animal (como un conejo o una
cabra) o a un cultivo celular. Adems, como la protena se ha desnaturalizado durante la
electroforesis en gel, es preciso que el anticuerpo reconozca especficamente la protena
desnaturalizada. La presencia del elemento extrao debera desencadenar una respuesta
inmune cuyo resultado incluya la produccin del anticuerpo, primario en este caso, ya
que reconoce la protena.
As pues, tras el bloqueo se incuba en agitacin moderada la membrana con una
disolucin de anticuerpo primario (0,5 - 5 g/ml). La disolucin consiste en un tampn
salino, con cloruro de sodio por lo general, con un pH cercano a la neutralidad, una
pequea fraccin de detergente y, en ocasiones, protenas disueltas, como ASB o leche
en polvo. La membrana junto con la disolucin pueden ser introducidas en una pequea
bolsa de plstico. Esta incubacin puede durar desde 30 minutos a una noche entera. La
temperatura a la que puede tener lugar es igualmente variada; en general, las elevadas
temperaturas favorecen las uniones ms especficas.
Anticuerpo secundario
Tras lavar la membrana para eliminar el anticuerpo primario que no se ha unido, se
expone al anticuerpo secundario. ste reconoce de forma especfica una regin concreta
del anticuerpo primario. Suelen estar marcados para ser detectables (unin a biotina, a
una enzima reporter como laa fosfatasa alcalina o la peroxidasa del rbano (HRP), etc.).
Varios de estos anticuerpos se unirn a cada anticuerpo primario, amplificando la seal.
Los anticuerpos secundarios proceden de animales o de cultivos de hibridomas de
origen animal. Por ejemplo, un anticuerpo secundario "anti-ratn" es aquel capaz de
reconoces casi todos los anticuerpos primarios obtenidos de ratones. Igualmente hay
anticuerpos "anti-cabra", "anti-conejo"... Su uso presenta ciertas ventajas: econmicas,
por permitir a un laboratorio compartir una nica fuente de anticuerpos secundarios; y
dan resultados mucho ms consistentes.
Tambin pueden emplearse protenas no anticuerpos, como las protenas A y G.
Radiactividad

Unin del anticuerpo primario a la protena de inters. A este se une la protena A o la

protena G para ser detectada.
Es una alternativa al uso de anticuerpos secundarios que consiste en protenas de unin
a anticuerpos marcadas radiactivamente. Esta protena puede ser, por ejemplo, la
protena A de Staphylococcus aureus[13] o la protena G[14] marcadas con 125I (un istopo
radiactivo de yodo). Las protenas mencionadas tienen la capacidad de unirse a
anticuerpos de forma inespecfica, por lo que se unirn al primario.
Este mtodo apenas se usa actualmente, por ser significativamente ms caro, peligroso y
lento que los otros. Sin embargo, presenta ventajas: es muy sensible, da bandas que
permiten una precisa cuantificacin; y la imagen autoradiogrfica puede ser reproducida
fcilmente y con gran precisin para su publicacin.
Anticuerpo unido a una enzima

Anticuerpo secundario unido a la peroxidasa de rbano, de modo que puede catalizar la

reaccin quimioluminiscente.
Un mecanismo de deteccin simple y rpido consiste en unir al anticuerpo secundario
enzimas que catalicen la transformacin de un sustrato soluble en un producto insoluble.
De esta forma, en el posterior anlisis quedar una mancha all donde est la protena de
inters. Enzimas como la peroxidasa de rbano (HRP) o una fosfatasa alcalina son
vlidas para este mecanismo.[11] Por ejemplo, la peroxidasa puede catalizar la oxidacin
del 4-cloronaftol en presencia de un 1% de perxido de hidrgeno. El resultado es que
el primero forma una mancha de precipitado oscura.[15] Otras tcnicas, como ELISA o
ELISPOT, tambin emplean este mtodo de deteccin.
Otro mtodo ms sofisticado consiste en la unin de una enzima que catalice una
reaccin quimioluminiscente. Las anteriormente citadas enzimas tambin son vlidas en
este caso, aunque cada una usa un agente quimioluminiscente diferente. En el caso de la
peroxidasa, cataliza la oxidacin del luminol en presencia de perxido de hidrgeno. La
fosfatasa alcalina cataliza la defosforilacin del adamantil-1-2-dioxetano fosfato,
reaccin que genera luz. Si se coloca una pelcula fotogrfica sobre la membrana, la

exposicin a la luz que se desprende en la reaccin permite detectar la actividad

enzimtica.
Marcaje fluorescente
Otro mtodo basado en el mismo principio emplea anticuerpos unidos a fluorocromos
del infrarrojo cercano, como el 2 - metoxi - 2,4 - difenil - 3 (2H) - furanona (MDPF) o
el rojo Nilo. Estos compuestos emiten una cantidad de luz constante (estado esttico)
cuando se excitan de manera constante, permitiendo una deteccin muy precisa y una
cuantificacin del antgeno ms exacta que la de la quimioluminiscencia, que se realiza
durante un estado dinmico.
El rojo Nilo no es puede usarse para teir bandas en membranas de PVDF; sin embargo
es posible realizar la tincin en el gel SDS - PAGE y luego transferirlo a la membrana
de PVDF. Esto ltimo presenta una ventaja, y es que no es necesario realizar una tincin
del gel para comprobar la transferencia proteica.[16]
Sistema avidina/estreptavidina
Otra opcin es emplear un anticuerpo primario unido covelentemente a molculas de
biotina. Despus la deteccin se llevar a cabo con una protena de unin a la misma,
como la estreptavidina o la avidina.
Deteccin con oro
Otra tcnica, conocida como Golden blot, consiste en la deteccin de los anticuerpos
primarios con protena A unida a partculas de oro. El resultado es una membrana con
manchas rojas, causadas por el oro, all donde est la protena.[17] La sensibilidad del
mtodo puede incrementarse con una tincin fotoqumica de plata: el oro cataliza la
reduccin de los iones plata a plata metlica en presencia de otro agente reductor, como
la hidroquinona; la plata forma de este modo unas manchas visibles bajo microscopio
ptico. Se consigue as una sensibilidad comparable a la de las tcnicas radiactivas.[11]
[18]

Mtodo en un paso
Histricamente la deteccin se ha realizado en dos pasos por la relativa facilidad que
supone producir anticuerpos primarios y secundarios en procesos separados. Esto ofrece
a investigadores y empresas enormes ventajas en lo que a flexibilidad se refiere, y aade
un efecto amplificador al proceso. Sin embargo, debido a la llegada de los anlisis de
protenas de alto rendimiento y los menores lmites de deteccin ha crecido el inters
por desarrollar sistemas de deteccin en un solo paso que aumentaran la rapidez del
proceso al tiempo que reducen los consumibles. Esto requiere un anticuerpo que
reconozca al mismo tiempo la protena de inters y una "etiqueta" detectable. Se incuba
de manera similar al anticuerpo primario del proceso en dos pasos, y, tras una serie de
lavados, ya se puede detectar directamente.

Anlisis
Tras el lavado de las sondas marcadas no unidas, se procede a la deteccin de aquellas
que s se han unido a la protena de inters.
Deteccin colorimtrica
La deteccin colorimtrica depende de la incubacin del Western blot con un sustrato
que reacciona gracias a la enzima reporter (una peroxidasa, por ejemplo) unida al
anticuerpo secundario. Pasa as de ser un compuesto soluble a una forma insoluble de
otro color que precipita cerca de la enzima tiendo as la membrana. Se procede despus
a un lavado en el que se elimina el tinte soluble. La cuantificacin proteica se evala por
densitometra (cuan intensa es la mancha) o por espectrometra.
Deteccin quimioluminiscente
La deteccin quimioluminiscente requieren la incubacin de la membrana con un
sustrato, que emitir luminiscencia al ser expuesto al reporter que trae unido el
anticuerpo secundario. La luz emitida es captada por una pelcula fotogrfica o, ms
recientemente, por cmaras CCD, que toman una imagen digital del Western blot. Se
analiza la imagen por densitometra para evaluar la cantidad relativa de mancha y
cuantifica el resultado en trminos de densidad ptica. Actualmente hay programas que
permiten realizar anlisis ms profundos si se aplican ciertos estndares, como la
obtencin del peso molecular.

] Deteccin radiactiva
Los marcadores radiactivos no requieren sustratos enzimticos; en su lugar se coloca
una pelcula fotogrfica contra el Western blot y la actividad radiactiva del marcador
provoca la aparicin en ella de regiones oscuras. stas se correspondern con las bandas
de las protenas de inters. Su alto precio y su riesgo para la salud y la seguridad han
provocado su desuso en los ltimos tiempos.
Deteccin fluorescente
En la deteccin con marcadores fluorescentes se procede a la excitacin lumnica de
stos que les provoca una excitacin. sta es detectable por un fotosensor, como una
cmara CCD equipado con los filtros de emisin apropiados. Se consigue as una
imagen digital del Western blot que puede ser analizado para obtener el peso molecular

o la cuantificacin proteica. La fluorescencia es considerada uno de los mtodos de

anlisis ms sensibles.
Exploraciones secundarias
Una caracterstica de las membranas de PVDF, de la que carecen las de nitrocelulosa, es
su capacidad de quitar los anticuerpos y volver a explorar la membrana con otros
anticuerpos. Aunque hay protocolos que permiten hacer lo mismo en membranas de
nitrocelulosa, la robustez de las de PVDF facilita la eliminacin de los anticuerpos,
permitiendo ms reusos antes de que el ruido de fondo es tan grande que impide
continuar con los experimentos. Otra diferencia es que, a diferencia de la nitrocelulosa,
el PVDF debe ser empapado en etanol, isopropanol o metanol al 95% antes de ser
usado. Adems, las membranas de PVDF tienden a ser ms delgadas y ms resistentes a
los daos durante su uso.
[Aplicaciones
Investigacin
Actualmente, el Western blot es una de las tcnicas ms usadas en el estudio de la
biologa molecular.[19]
Diagnstico

Prueba de VIH: Aunque el VIH suele detectarse mediante la tcnica ELISA, el

Western Blot se usa como prueba confirmatoria cuando el ELISA da un
resultado positivo en un grupo que no es de riesgo o en una poblacin donde la
prevalencia del virus es muy baja. Mediante el Western blot se buscan los
anticuerpos anti-VIH en una muestra de suero humano. Se transfieren a una
membrana las protenas de clulas que, se sabe, estn infectadas por el VIH.
Entonces, se incuba el suero que hay que probar con esta membrana. Este paso
es equivalente a la incubacin con el anticuerpo primario; si hay anticuerpos
anti-VIH en el suero, sern estos los que realizen el papel de anticuerpo
primario. Se lava, para eliminar los anticuerpos no unidos, y la membrana se
vuelve a incubar con un anticuerpo secundario anti-humano unido a una enzimaseal. La aparicin de bandas indica la presencia de protenas contra las cuales el
suero del paciente contiene anticuerpos, es decir, el paciente es seropositivo.

Se emplea como prueba definitiva de la encefalopata espongiforme bovina,

comnmente llamada "enfermedad de las vacas locas".

Algunas clases de la prueba para la enfermedad de Lyme usan el Western blot.

En veterinaria, ocasionalmente se emplea el Western blot para confirmar la

presencia del FIV en gatos.

[
Enlaces externos

Mtodos de transferencia de protenas a filtros - Universidad de Barcelona

Referencias
1.

a b Towbin H, Staehelin T, Gordon J. (1979). Electrophoretic transfer

of proteins from polyacrylamide gels to nitrocellulose sheets: procedure and
some applications.. Proc Natl Acad Sci U S A. 76 (9): pp. 43504354.
doi:10.1073/pnas.76.9.4350. PMID 388439.

2.

a b Renart J, Reiser J, Stark GR (1979). Transfer of proteins from gels

to diazobenzyloxymethyl-paper and detection with antisera: a method for
studying antibody specificity and antigen structure.. Proc Natl Acad Sci U S A.
76 (7): pp. 31163120. doi:10.1073/pnas.76.7.3116. PMID 91164.

3.

Antibody Central. . Consultado el 18 de agosto de 2010. Total number

of antibodies in database: 231279.

4.

Western blot antibody. exactantigen.com. Consultado el

20/8/2010. Labome lists 449244 antibody products against 41374 genes,
including 15695 human, 11355 mouse, and 9387 rat genes..

5.

W. Neal Burnette (Abril 1981). 'Western blotting': electrophoretic

transfer of proteins from sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gels to
unmodified nitrocellulose and radiographic detection with antibody and
radioiodinated protein A. Analytical Biochemistry (United States: Academic
Press) 112 (2): pp. 195203. doi:10.1016/0003-2697(81)90281-5. ISSN 00032697. PMID 6266278. http://www.sciencedirect.com/science?
_ob=ArticleURL&_udi=B6W9V-4DYTNJ81FB&_user=10&_rdoc=1&_fmt=&_orig=search&_sort=d&view=c&_acct=C00
0050221&_version=1&_urlVersion=0&_userid=10&md5=f45e0364aabbcacb8f
4f75540e622fd0.

6.

Southern, Edwin Mellor (5 de noviembre de 1975). Detection of

specific sequences among DNA fragments separated by gel electrophoresis.
Journal of Molecular Biology 98 (3): pp. 503517. doi:10.1016/S00222836(75)80083-0. ISSN 0022-2836. PMID 1195397.

7.

Hongbao Ma, Kuan-Jiunn Shieh (2006). Western Blotting Method

(pdf). The Journal of American Science (Department of Medicine, Michigan
State University) 4: pp. 23-27. ISSN 1545-0740.
http://www.sciencepub.org/american/0202/am0202.pdf#page=27. Consultado el
18 de agosto de 2010.

8.

[1]

9.

Chapter 3 - Introduction to Protein Blotting (en Ingls). Introduction

to Protein Blotting. Methods in Molecular Biology. Humana Press. 2009. pp. 922. doi:10.1007/978-1-59745-542-8_3. ISBN 978-1-59745-542-8.
http://dx.doi.org/10.1007/978-1-59745-542-8_3. Consultado el 20 de septiembre
de 2010.

10.

I. Olsen y H. G. Wiker (1998). Diffusion blotting for rapid production

of multiple identical imprints from sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel
electrophoresis on a solid support. Journal of Immunological Methods 220 (12): pp. 77-84. doi:10.1016/S0022-1759(98)00147-1. ISSN 0022-1759.
http://www.sciencedirect.com/science/article/B6T2Y-3V5J5PN8/2/f0a0d320285361f354be8d0922a04f34.

11.

a b c d e Kurien, B.T. y Scofield, R.H. (2006). Western blotting.

Methods 38 (4): pp. 283-293.
http://linkinghub.elsevier.com/retrieve/pii/S1046202306000065.

12.

M. Peferoen, R. Huybrechts, A. De Loof. Vacuum-blotting: a new

simple and efficient transfer of proteins from sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gels to nitrocellulose. FEBS Letters (Elvesier) 145 (2):
pp. 369-372. ISSN 0014-5793.
http://www.sciencedirect.com/science/article/B6T36-44BG2D1FY/2/647febc03fbee8f25a17451db74f84ef. Consultado el 14 de septiembre de
2010.

13.

W. Neal Burnette (1981). Western Blotting: Electrophoretic transfer

of proteins from sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gels to unmodified
nitrocellulose and radiographic detection with antibody and radioiodinated
protein A. Analytical Biochemistry 112 (2): pp. 195-203. doi:10.1016/00032697(81)90281-5. ISSN 0003-2697.
http://www.sciencedirect.com/science/article/B6W9V-4DYTNJ81FB/2/ab09bccc8a908a5de7a9b9779b56ded9.

14.

B. Akerstrom, T. Brodin, K. Reis y L. Bjorck (1985). Protein G: a

powerful tool for binding and detection of monoclonal and polyclonal
antibodies. The Journal of immunology (American Association of
Immunologists) 135 (4): pp. 2589-2592.
http://www.jimmunol.org/cgi/content/abstract/135/4/2589. Consultado el 23 de
septiembre de 2010.

15.

Manuel Reina (15/09/2003). Mtodos de transferencia a filtros (en

espaol). Consultado el 19 de septiembre de 2010.

16.

Joan-Ramon Daban (2001).

[http://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1002/15222683%28%2922:5%3C874::AID-ELPS874%3E3.0.CO;2-U/abstract Fluorescent
labeling of proteins with Nile red and 2-methoxy-2,4-diphenyl-3(2H)-furanone:
Physicochemical basis and application to the rapid staining of sodium dodecyl
sulfate polyacrylamide gels and Western blots]. ELECTROPHORESIS 5 (22):
pp. 874880. doi:10.1002/1522-2683()22:5<874::AID-ELPS874>3.0.CO;2-U.

http://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1002/15222683%28%2922:5%3C874::AID-ELPS874%3E3.0.CO;2-U/abstract.
Consultado el 30 de septiembre de 2010.
17.

Daniela Brada y Jurgen Roth (1984). 'Golden blot'--Detection of

polyclonal and monoclonal antibodies bound to antigens on nitrocellulose by
protein A-gold complexes. Analytical Biochemistry (Elsevier) 142 (1): pp. 7983. doi:10.1016/0003-2697(84)90518-9. ISSN 0003-2697.
http://www.sciencedirect.com/science/article/B6W9V-4DYN47YD/2/a16fa920fb95f1629d063451277b29a1. Consultado el 20 de septiembre de
2010.

18.

Manuel Reina (15/09/2003). . Consultado el 22 de septiembre de 2010.

19.

Eugene Garfield (2005). The Agony and the Ecstasy The History
and Meaning of the Journal Impact Factor. International Congress on Peer
Review And Biomedical Publication (Chicago).
http://www.garfield.library.upenn.edu/papers/jifchicago2005.pdf. Consultado el
19 de septiembre de 2010. El artculo Electrophoretic transfer of proteins from
polyacrylamide gels to nitrocellulose sheets - Procedure and some applications
es el sexto artculo ms citado de la historia.

Obtenido de http://es.wikipedia.org/w/index.php?
title=Western_blot&oldid=50210562