Facultad de Medicina

GUA DE DIAGNSTICO MICROBIOLGICO

Confeccionada por:
Profesora adjunta: Dra. Mara Margarita Vece de Reynaga

Con la colaboracin de:

Profesor titular:

Dr. Humberto E. Musa

Profesora adjunta:

Dra. Ana Villagra de Trejo

Jefes de trabajos prcticos: Dra. Adriana Barbaglia de Orozco

Dr. Guillermo Biondi
Dr. Carlos Gusils
Dra. Mercedes Galeano
Dra. Blanca E. Pereyra
Dra. Mnica Tua de Pedroso

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DIAGNSTICO MICROBIOLGICO DE LAS

ENFERMEDADES INFECCIOSAS
Uno de los propsitos del diagnstico microbiolgico es trabajar en asociacin con la
clnica para:
Brindar un diagnstico etiolgico.
Transformar un caso sospechoso en caso confirmado
Un manejo adecuado de los casos clnicos de diferentes enfermedades infecciosas
(E.I.).
Prevenir la diseminacin de la infeccin a otros individuos y cortar la cadena
epidemiolgica.
El diagnstico de las enfermedades infecciosas se basa en:
Diagnstico clnico: que consiste en el estudio de los sntomas y signos clnicos.
Diagnstico microbiolgico: conjunto de procedimientos y tcnicas empleadas
para establecer la etiologa del agente responsable de una enfermedad.
Otros mtodos complementarios.
En general es importante:
Documentar la presencia de infeccin.
Determinar su naturaleza especfica.
Orientar la teraputica adecuada.
La buena calidad de esta labor lleva implcito un trabajo en equipo del mdico y del
laboratorio.
El mdico tiene que tener un criterio claro de seleccin de exmenes a solicitar:
Qu pedir?
Cundo pedir?
Cmo pedir?
Y debe realizar un apropiado uso de los resultados para hacer un diagnstico y
tratamiento adecuado.
Cmo interpretar?
El laboratorio puede aportar datos preliminares o definitivos de agentes etiolgicos
sobre la base de una gran variedad de mtodos microbiolgicos que se utilizan para
el diagnstico de las E.I. Estos incluyen:

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I) MTODOS DIRECTOS:
1. Examen microscpico: que puede realizarse en fresco o despus de la tincin de
la muestra.
2. Deteccin de sus metabolitos.
3. Deteccin de sus componentes antignicos.
4. Deteccin de sus cidos nucleicos.
5. Deteccin del microorganismo por cultivo (in vitro en la mayora de los casos o in
vivo).
II) MTODOS INDIRECTOS:
Demostracin de la huella que el agente ha dejado en su contacto con el sistema
inmune. Pueden dividirse en dos grupos segn se base en:
1. Deteccin de los anticuerpos especficos e inespecficos circulantes (inmunidad
humoral).
2. Deteccin de respuesta inmune de tipo celular (inmunidad celular):
intradermorreaccin.
Tanto en los mtodos directos como en los indirectos el mdico debe especificar al
laboratorio que quiere solicitar: deteccin de antgenos, cidos nucleicos o anticuerpos
y para que microorganismo. En el caso de los anticuerpos, cual de las
inmunoglobulinas (Ig): IgM o Ig.G
Ej: a) Deteccin de antgeno para Criptococcus neoformans.
b) Deteccin de cido nucleico para HIV.
c) Deteccin de Ig.M para rubola.
d) Intradermoreaccin de Mantoux.
Para realizar estos mtodos de diagnstico existen diferentes tcnicas, de las
cuales se debe tener en cuenta:
Sensibilidad (Inclusividad).
Especificidad (Exclusividad).
Sensibilidad: puede definirse de diferentes maneras:
Habilidad de un test para detectar muy pequeas cantidades de lo analizado (Ej:
anticuerpos).
Habilidad de un test para detectar casos positivos (ausencia de falsos negativos).
Capacidad de la prueba para clasificar como positivos a los individuos que
realmente sufren la enfermedad (probabilidad de obtener un resultado positivo
cuando el sujeto padece la infeccin).

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Especificidad: puede definirse de diferentes maneras:

Habilidad de un test para identificar correctamente a todos los negativos
(ausencia de falsos positivos).
Capacidad de la prueba para clasificar como negativos a los que no padecen
una enfermedad (probabilidad de obtener un resultado negativo cuando el
individuo no tiene la infeccin).
Recordar:
Un test sensible es el que origina pocos falsos negativos.
Un test especfico el que proporciona escasos falsos positivos.

Pasos para un correcto diagnstico microbiolgico

Tipo de muestra, la cual debe cumplir con los siguientes requisitos:
- Ser representativa del foco de infeccin
- Obtenerse en cantidad suficiente.
- Recolectarse en el momento adecuado.
Toma de muestra: la muestra se debe tomar en condiciones de mayor esterilidad
posible, identificarse con el nombre del paciente, lugar de procedencia, el tipo de
muestra, la fecha y hora de la toma y un resumen corto de la historia clnica con la
solicitud de examen que se desea realizar. Siempre que sea posible la muestra
debe tomarse antes de iniciar el tratamiento antimicrobiano.
Transporte y conservacin de la muestra: debe enviarse al laboratorio en
condiciones adecuadas. (Buscar informacin en cada unidad temtica).
Procesamiento de la muestra.

I.MTODOS DE DIAGNSTICO DIRECTO.

I.1) EXAMEN MICROSCPICO PARA EL DIAGNSTICO DE LABORATORIO
DE LAS ENFERMEDADES INFECCIOSAS.
El microscopio es una de las herramientas ms tiles en el diagnstico. An hoy,
con el desarrollo de mtodos rpidos, muchos de los cuales requieren instrumentos
complicados o reactivos caros, la simple visualizacin microscpica de muestras
clnicas es todava la ms rpida y especfica forma de orientar un diagnstico clnico.

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Microscopio ptico
a) Examen en fresco: es til para:
Observacin de leucocitos polimorfonucleares. La misma es una seal de
infeccin bacteriana aguda pero hay que recordar que no siempre la presencia de
leucocitos es sinnimo de infeccin y tambin hay que tener en cuenta que la no
observacin de leucocitos (paciente inmunodeprimido) no excluye la misma.
Visualizacin de la morfologa (cocos, bacilos), disposicin (en cadena o en
racimos) y movilidad de hongos, parsitos y bacterias.
\b) Tinciones o coloraciones:
Gram
Fundamento: las bacterias se clasifican como Gram positivo o Gram negativo
segn su respuesta a la tincin de Gram.
Las bacterias se tien primero con violeta de cristal (colorante primario) y una
solucin yodada (mordiente), y luego se lavan con acetona o alcohol. El paso
anterior decolorar a una bacteria Gram negativo, pero no a las bacterias Gram
positivo. Por ltimo se utiliza un colorante secundario, safranina generalmente, el cual
colorear a las bacterias Gram negativo (de rosa) pero no alterar el color violeta de
las Gram positivo.
La diferencia entre las bacterias Gram positivo y Gram negativo reside en la
composicin qumica de la pared celular. (Buscar informacin)
La coloracin de Gram es la ms utilizada en bacteriologa ya que, permite:
- Precisar la morfologa de las bacterias: cocos, bacilos.
- Su clasificacin en Gram positivo o Gram negativo en funcin de su estructura
de pared.
- Su disposicin en racimos o cadenas.
Ventajas: pocas tcnicas asocian su sencillez, rapidez y riqueza de informacin y
es por ello que a pesar del desarrollo de mtodos sofisticados para el diagnstico
rpido de enfermedades infecciosas, no se ha podido reemplazar la utilidad de la
tincin de Gram.
Importancia: orienta conductas teraputicas.
Microorganismos detectados: bacterias y levaduras.

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Comentarios: recordemos que la coloracin de Gram se utiliza para el

diagnstico bacteriolgico, pero la no observacin de grmenes en la misma no
implica que la bacteria no se halle presente ya que inculos bajos no pueden ser
observados.
Coloraciones que se utilizan para micobacterias:
ZIEHL-NEELSEN.
KINYOUN.
AURAMINA-RODAMINA.
Todas estas coloraciones aprovechan la constitucin de la pared de las micobacterias
para su deteccin.
En la prctica el trmino Bacilo Acido Alcohol Resistente (B.A.A.R.) puede
considerarse sinnimo de micobacterias, aunque existen algunas otras especies, por
ej. Nocardia, con caractersticas de cido alcohol resistencia variable.
Microscopio de campo oscuro: utiliza un condensador de campo oscuro que
permite la visualizacin de Treponemas, Campylobacter, Vibrio y Leptospiras. Se
realiza mediante el examen directo de material patolgico.
Microscopio de fluorescencia: la demostracin de antgenos se hace mediante
la utilizacin de un anticuerpo con un fluorocromo que es especfico para el antgeno
que se ha de descubrir. Algunos microorganismos producen luz, luego de haber
tomado un fluorocromo, por ejemplo bacterias cido alcohol resistente y otras producen
luz, luego de la unin del antgeno a un anticuerpo conjugado con un colorante
fluorescente. Ej: virus sincitial respiratorio.
Microscopio electrnico: utiliza electrones en lugar de luz. Se usa en el
diagnstico de agentes virales.
I.2) DETECCIN DE METABOLITOS.
En los ltimos aos, las innovaciones introducidas en las tcnicas de cultivo
han consistido fundamentalmente en la deteccin precoz de crecimiento bacteriano
a travs de la deteccin de sus metabolitos.
Su principal aplicacin han sido los hemocultivos y el estudio de las
micobacterias.
Este mtodo permite detectar el crecimiento de los microorganismos en pocas
hs. midiendo la variacin de CO2 producida por los mismos.
.

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I.3) DETECCIN DE ANTIGENOS (Ag) ESPECFICOS POR TCNICAS

INMUNOLGICAS.
Puede realizarse a partir de muestras del foco de infeccin, de suero, de
orina, lquido cefalorraqudeo u otras muestras por la que se eliminan los
antgenos. El foco de infeccin es la muestra que ofrece mejor rendimiento. La orina
es en ocasiones una alternativa dada la facilidad de su obtencin y la posibilidad de su
concentracin.

Las tcnicas ms utilizadas son:

Aglutinacin de ltex.
Coaglutinacin.
Contrainmunoelectroforesis.
Enzimoinmunoanlisis.
Inmunofluorescencia.

Las pruebas de aglutinacin de ltex para identificar agentes etiolgicos en

especmenes clnicos son limitadas en nmero. La ms importante en la actualidad es
la prueba de aglutinacin del ltex para Ag. de Cryptococcus neoformans en lquido
cefalorraqudeo, suero y orina.
Su sensibilidad supera la de la preparacin con tinta china en lquido cefalorraqudeo.
Su especificidad puede reducirse por la presencia de factor reumatoideo u otras
protenas de interferencia, sin embargo el tratamiento de la muestra con una proteasa
eliminar resultados falsos positivos secundarios a protenas de interferencia.
La aglutinacin de ltex y la coaglutinacin pueden ser tiles en el diagnstico de
meningitis bacteriana de los nios parcialmente tratados o en aquellos en que la
respuesta inflamatoria y diversos ndices bioqumicos del LCR no permiten diferenciar
con claridad entre meningitis bacteriana y viral.
En el mercado hay muchas pruebas de aglutinacin de ltex para
Streptococcus beta hemoltico del grupo A. Estas pruebas aunque muy especficas, son
poco sensibles, de modo que las pruebas Ag. negativas deben ser respaldadas por
cultivos.

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Enzimoinmunoanlisis (E.I.A): los sistemas de E.I.A. tiles para el diagnstico de

enfermedades infecciosas son los de deteccin de:

Chlamydia trachomatis.
Streptococcus pyogenes.
Toxina de Clostridium difficile.
Neisseria gonorrhoeae.
Virus sincitial respiratorio.
Virus influenza A.
Rotavirus.
Antgeno p24 de H.I.V.
Cryptococcus neoformans.

Inmunofluorescencia directa: la tcnica de inmunofluorescencia directa consiste en la

unin de un antgeno a un anticuerpo marcado con una sustancia fluorescente y la
deteccin del producto marcado mediante microscopa de fluorescencia. Las
aplicaciones prcticas son:
Chlamydia trachomatis.
Pneumocystis jirovecci (denominacin actualizada del Pneumocystis carinii)
Cryptosporidium.
Ventajas: las principales ventajas son su sencillez, rapidez y la posibilidad de efectuar
un diagnstico etiolgico en enfermos previamente tratados con antibiticos. Su
introduccin en la prctica clnica slo tiene sentido en el contexto de un laboratorio de
urgencias ya que deben ser capaces de influir las decisiones teraputicas iniciales.
I.4) DETECCIN DE CIDOS NUCLEICOS
La introduccin de la gentica molecular ha producido un espectacular avance en el
diagnstico de las enfermedades infecciosas.
Permiten la identificacin rpida de determinados microorganismos basados en la
deteccin de secuencias genmicas especficas de los mismos. Son mtodos que
probablemente modifiquen de manera sustancial la prctica de la microbiologa mdica.

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Existen tcnicas de:

Hibridacin con sondas.
Reaccin en cadena de la polimerasa (PCR).
Tcnicas de hibridacin con sondas de DNA:
La sonda gentica es una molcula de cido nucleico que, una vez en estado
monocatenario y marcada con un istopo radiactivo (por ejemplo 32P), se puede usar
para usar una secuencia complementaria a los cidos nucleicos del microorganismo,
hibridndola (unindola) con ella.
Empleando sondas especficas podemos detectar el agente etiolgico en las muestras
sin necesidad de cultivo; tambin mediante construccin de sondas para factores de
virulencia como toxinas es posible detectar los organismos que transportan estos
genes. Por ejemplo: las sondas para enterotoxinas de Escherichia coli o para la toxina
del Vibrio cholerae se pueden aplicar directamente a las heces.
El nmero de mtodos de hibridacin de cidos nucleicos est aumentando con
demasiada rapidez para que sea posible una enumeracin completa, pero entre los
ms tiles se encuentran las sondas quimioluminiscentes alguna de las cuales
detectan directamente el microorganismo en especimenes clnicos:

Chlamydia trachomatis.
Neisseria gonorroheae.
Streptococcus B hemoltico grupo A.
Histoplasma capsulatum.

Mientras que otras identifican el microorganismo:

Mycobacterium.
Coccidioides inmitis.
Histoplasma capsulatum.
Blastomyces dermatitidis.

Reaccin en cadena de la polimerasa (PCR)

Las tcnicas de ampliacin como la PCR, brindan mayor sensibilidad y el laboratorio
clnico est accediendo a su uso.
Fundamento: cuando se conoce la secuencia de nucletidos o parte de ella, del gen
bajo estudio, se pueden aadir cebadores (secuencias de nucletidos conocidos)
apropiados a la muestra, lo que permite lo que una ADN polimerasa genere gran
cantidad de copias del gen, fcilmente identificables con una electroforesis.

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Aplicaciones diagnsticas: la PCR esta reemplazando al cultivo para la deteccin

rpida del HIV y se anticipan muchas otras aplicaciones como la deteccin de
microorganismos no cultivables, de crecimiento lento o difciles de cultivar.
Se aplica en campos tan diversos como las enfermedades infecciosas, oncologa o en
medicina legal.
Ventajas:
Alta sensibilidad y especificidad.
No requiere la viabilidad de los microorganismos.
Desventajas:
Es una tcnica compleja.
Exige extremo cuidado para prevenir falsas reacciones positivas o negativas por
contaminacin.
Su costo es elevado.
Debemos tener en cuenta que todas estas tcnicas se utilizan para el diagnstico
microbiolgico rpido pero es necesario recordar que simultneamente a la deteccin
de los microorganismos por alguno de los mtodos anteriores debemos proceder a
cultivarlos, aislarlos, identificarlos y realizar la prueba de susceptibilidad
correspondiente.
I.5) CULTIVO
Solicitud de estudio para bacterias:
MATERIAL: .............
COLORACION DE GRAM.
CULTIVO.
IDENTIFICACION DEL GERMEN.
ANTIBIOGRAMA.
RECUENTO DE COLONIAS*.
* Urocultivo de segunda porcin.
* Lavado bronquioalverolar.
* Cepillo protegido.
* Catteres.

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La gran mayora de las bacterias crecen en medios artificiales que pueden ser slidos
o lquidos.
Su cultivo permite: el aislamiento y secundariamente, la identificacin de la cepa
aislada y el estudio de susceptibilidad a los antibiticos.
Por lo regular el crecimiento se reconoce con facilidad por la aparicin de colonias en
medios slidos, o turbidez en medios lquidos.
La velocidad de crecimiento est en funcin del inculo original y el grupo de
microorganismos involucrados.
La mayora de las bacterias patgenas requieren entre 18-48 hs. para generar un
crecimiento visible, mientras que las colonias de micobacterias pueden demandar entre
tres y cuatro semanas hasta que se tornen evidentes.
Es necesario que el mdico conozca cuales son los perodos razonables de informe de
diversas clases de cultivos y que el laboratorio establezca un sistema para informar
resultados preliminares.
Ventajas: el cultivo es todava el patrn de oro y permanecer como herramienta
importante del diagnstico. Permite identificar el microorganismo aislado y realizar
estudios de susceptibilidad a los antimicrobianos.
Desventajas: tiempo requerido.
Comentarios: existen bacterias que por poseer caractersticas especiales es necesario
que el mdico especifique el nombre del microorganismo que esta buscando. Ej:
Mycobacterium, Mycoplasma, Chlamydia.
Recordar: hay bacterias para las cuales todava no existen medios de cultivo. Entre
ellas encontramos a Treponema pallidum y Mycobacterium leprae.
Informes del laboratorio
A) Muestras normalmente estriles: sangre, orina, lquido cefalorraqudeo, liquido
sinovial y otros.
NEGATIVAS:
Coloracin de Gram: no se observan grmenes.
Cultivo: no se obtiene desarrollo de grmenes luego de 48 hs. de incubacin.

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POSITIVAS:
Coloracin de Gram: se informa morfologa y Gram de la bacteria. Ej: cocos Gram
positivos, bacilos Gram negativos.
Cultivo: se asla e identifica (gnero y especie de la bacteria). Ej: Staphylococcus
aureus o Escherichia coli.
Comentario: es importante recordar que en las muestras lquidas ayuda mucho la
solicitud del examen fsico-qumico-citolgico que si bien no es un estudio
microbiolgico, aporta en muy poco tiempo datos que ayudan a tomar decisiones
teraputicas al mdico.
Antibiograma: se informan tanto los antibacterianos sensibles como los resistentes.
B) Muestras que poseen flora normal.
NUNCA SE OBTIENE UN INFORME NEGATIVO NI DEL GRAM NI DEL
CULTIVO.
Coloracin de Gram: se observan (morfologa y Gram de la bacteria o las
bacterias).
Cultivo: se asla flora habitual o se asla e identifica (gnero y especie de la
bacteria o las bacterias).
Antibiograma: se informan tanto las antibacterianos sensibles como los resistentes.
Estudio de la susceptibilidad de los microorganismos a los antibiticos
Cuando la resistencia bacteriana comenz a constituir un fenmeno frecuente, al
utilizarse de forma generalizada los antimicrobianos, fue necesario y adquiri
importancia el empleo de pruebas de susceptibilidad para determinar la respuesta de
las cepas individuales dentro de las especies.
Las pruebas de susceptibilidad antimicrobiana de carcter manual, que se
utilizan para determinar la actividad inhibitoria de un antimicrobiano frente a una cepa
en particular, son de dos tipos pruebas de difusin en agar y pruebas de dilucin en
caldo.

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La prueba de difusin en agar es la ms usada en los laboratorios de rutina, ya

que este sistema permite probar la eficacia de varios antimicrobianos al mismo tiempo
realizando una siembra de una suspensin bacteriana, con un inculo normatizado
sobre la superficie de un medio slido, colocando sobre ella discos de papel
impregnados de una cantidad conocida de antibitico. Por estar el agar hmedo, los
antimicrobianos difunden y crean concentraciones decrecientes a partir del disco.
Luego de una determinada incubacin se obtienen halos de inhibicin del crecimiento
bacteriano, cuya lectura en mm. Permite en comparacin con tablas internacionales
determinar la sensibilidad o resistencia de un germen.

La prueba de dilucin en caldo es un mtodo cuantitativo para determinar la

sensibilidad y resistencia de las bacterias. Consiste en determinar el crecimiento de
una bacteria en presencia de concentraciones crecientes de un antibitico. Se puede
realizar en medio slido o medio lquido. Este mtodo permite determinar la CIM
(concentracin inhibitoria mnima) que corresponde al primer tubo donde no se observa
la turbidez producida por el crecimiento bacteriano. A partir de los tubos donde no se
observa crecimiento (turbidez) se puede determinar la CBM (concentracin bactericida
mnima), para lo cual se resiembra el contenido de estos tubos sobre medio de cultivo
slido y se observa si hay o no desarrollo de colonias; la CBM corresponde a la
dilucin donde no se tiene crecimiento alguno.
Diagnstico de micobacterias por el laboratorio
SOLICITUD DEL ESTUDIO:

EXAMEN DE ................................
Bacilos copia
Cultivo para B.A.A.R. (estudio seriado tres
muestras).

Informe:
a) No se observan B.A.A.R.
b) Se observan B.A.A.R.

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Tradicionalmente el cultivo de micobacterias se realiza en medios que son incubados

durante 4-6 semanas. Despus la identificacin se efecta mediante pruebas que
duran varias semanas al igual que las pruebas de sensibilidad.
El informe completo se obtiene en un tiempo que vara de 90 a 120 das.
Hoy en da existen sistemas ms rpidos y con procedimientos estandarizados.
El sistema radiomtrico BACTEC 460 TB o el BACTALERT detectan la presencia de
micobacterias por su metabolismo en lugar del crecimiento visible.
Fundamento: estas tcnicas miden el CO2 que se libera cuando se metaboliza el
sustrato presente en el medio.
Ventajas: al tratase de medios lquidos y detectar el metabolismo de las
micobacterias se reduce sensiblemente el tiempo de procesamiento.
Tiempo promedio de deteccin: la mediana de das para hemocultivos es de 18 para
M. tuberculosis y 9 para M. no tuberculosis.
En otros materiales vara de acuerdo con el grado de positividad de la baciloscopa:
BACILOSCOPIA

CULTIVO

+
++
+++

16 das.
12 das.
9 das.
6 das.

Pudiendo obtenerse resultados positivos en 3 das.

La identificacin y el antibiograma de M. tuberculosis se realizan en un tiempo que
varia entre 5-7 das.

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II) METODOS INDIRECTOS:

II.1) DETECCIN DE LOS ANTICUERPOS ESPECFICOS CIRCULANTES
(INMUNIDAD HUMORAL)
En la fase inicial de la respuesta inmunolgica, las Ig.M son la clase de
inmunoglobulina predominante. Su deteccin hace diagnstico de infeccin aguda.
Hay que tener cuidado con los pacientes que van a la cronicidad, en donde los niveles
de IgM pueden mantenerse. En el perodo de convalecencia o de cronicidad la
respuesta inmunolgica se realiza a expensas casi exclusivamente de IgG.
Interpretacin de los test inmunolgicos que detectan anticuerpos (Ac)
Los pacientes con respuesta humoral integra aumentan el ttulo de Ac durante la
enfermedad. Para poder interpretar los resultados de estas pruebas se requieren dos
muestras, debido a que algunas infecciones dan lugar a la persistencia de por vida de
un ttulo estable de anticuerpos.
Se debe por lo tanto, realizar dos extracciones de suero, una en el perodo agudo y
otra a los 21 das para poder detectar las modificaciones en el ttulo. El ttulo de Ac (es
decir la cantidad de anticuerpos) es la recproca de la mayor dilucin del suero del
paciente, en que los Ac son an detectables.
Puede considerarse que existe una enfermedad activa cuando el ttulo de la segunda
muestra se incrementa como mnimo cuatro veces con respecto a la primera. Esto es lo
que se denomina SEROCONVERSIN.
Ventajas con respecto al cultivo:
Pueden ser ms sensibles, permitiendo llegar a un diagnstico con cultivos
negativos.
Se realizan en un tiempo menor.
Desventajas:
Especificidad menor.
No permite el aislamiento del microorganismo y por lo tanto,
Tampoco se puede realizar la prueba de susceptibilidad.

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Comentarios: para el diagnstico indirecto se utilizan los mismos test que se han
mencionado en los mtodos directos. El fundamento de estas tcnicas es la unin de
un antgeno con un anticuerpo, y lo que vara es el artificio de la tcnica, es decir, lo
que se utiliza (enzimas, sustancias con fluorocromos, material radiactivo) para poner
en evidencia que esta unin antgeno-anticuerpo se ha producido. El mdico debe
preocuparse por solicitar al laboratorio lo que necesita estudiar (deteccin de
antgenos, deteccin de anticuerpos: IgG o IgM, cidos nucleicos) para el germen en
estudio, y el microbilogo debe ser el responsable de seleccionar e informar la tcnica
que ha utilizado.
II.2) DETECCIN DE RESPUESTA INMUNE DE TIPO CELULAR:
INTRADERMORREACCIN.
La inyeccin intradrmica de una cantidad de antgeno estandardizado detecta si el
paciente est sensibilizado, una respuesta inmune de tipo celular. La reaccin suele
iniciarse a las 24 hs y alcanza un mximo a las 72 hs que es cuando debe realizarse la
lectura. Es muy utilizada en la prctica clnica la prueba de la tuberculina (PPD). Se
informa en milmetros.
Las intradermorreacciones no hacen diagnstico, ayudan al diagnstico evidenciando
que determinado germen estuvo o est en contacto con el paciente.

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DIAGNSTICO MICOLGICO
Segn los tejidos comprometidos, las micosis se clasifican en:
Superficiales, que afectan piel y faneras.
Profundas, que comprometen tejido subcutneo, osteoarticular y visceral. Estas

ltimas pueden ser producidas por hongos patgenos o por hongos oportunistas,
que son inofensivos en el husped inmunocompetente, pero que actan como
patgenos en el inmunocomprometido.
En los ltimos aos se ha observado un aumento importante de micosis oportunistas
debido a la expansin de la poblacin de pacientes inmunocomprometidos. Adems de
las infecciones fngicas oportunista clsicas, como candidiasis, criptococosis,
aspergilosis y mucormicosis, han emergido micosis por otros hongos que hasta hace
poco tiempo se consideraban simples contaminantes, como por ejemplo Fusarium,
Trichosporon, Malassezia. Esto ha obligado a los microbilogos a familiarizarse con la
morfologa macro y microscpica de estos agentes, ya que el diagnstico micolgico es
eminentemente morfolgico, especialmente en hongos filamentosos.
Las tcnicas bsicas de bacteriologa (cultivo, identificacin) son, en general
aplicables a las levaduras de importancia mdica (gneros: Candida, Cryptococcus).
No obstante, hay diferencias que son necesarias destacar. El perodo de generacin es
ms largo, por lo tanto debe mantenerse en incubacin durante un tiempo prolongado.
Los dermatofitos, por ejemplo, pueden demorar hasta 4 semanas. Los hongos
oportunistas, en cambio, son de desarrollo ms o menos rpido, como por ejemplo
Aspergillus 48-72 horas;
El diagnstico de laboratorio de las infecciones fngicas requiere:

Presuncin diagnstica por parte de los clnicos.

Apropiada recoleccin de muestras y procedimientos especiales de laboratorio.

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El estudio micolgico consta de:

Mtodos directos:
Observacin directa al fresco con lquidos clarificantes (KOH 10-20%, lactofenol)
para pesquisa de levaduras e hifas.
Deteccin de cidos nucleicos: los ya mencionados.
Deteccin de antgenos capsulares, de pared fngica; son pruebas sensibles y una
buena alternativa frente a cultivos que requieren perodos de incubacin
prolongados.
Cultivos: en agar Sabouraud glucosado, con y sin antibiticos, con y sin
ciclohexamida, en que se consideran tiempo de desarrollo, caractersticas
macroscpicas y microscpicas (hifas y esporas), estudios de fermentacin
(zimograma) y utilizacin de carbono (auxonograma).
Solicitud de estudio para hongos
MATERIAL: .........
CULTIVO MICOLOGICO.
IDENTIFICACION DEL GERMEN.
FUNGIGRAMA.
Mtodos indirectos:
Deteccin de anticuerpos: IgG, IgM.
Intradermoreaccin (poca utilidad): candidina, tricofitina.
Estudio histolgico: biopsias con tinciones especiales, como Gomori-Grocott
(impregnacin argntica).

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DIAGNSTICO VIROLGICO.
Conocer cuando una infeccin es de etiologa viral es muy importante porque
determina un cambio en la conducta clnica y en el manejo teraputico del paciente.
Realizar un diagnstico adecuado permite conocer la epidemiologa de la infeccin
viral y determinar las connotaciones que implica a nivel de salud pblica.
Los virus se pueden diagnosticar de forma directa o indirecta:
Las pruebas directas son las que evidencian al virus o algunos de los antgenos virales
que se pueden encontrar presentes en los tejidos o fluidos humanos.
Las pruebas indirectas son las que se utilizan con ms frecuencia y demuestran un
contacto del husped con el agente viral mediante la determinacin de anticuerpos
especficos.
En muchos casos el diagnstico de infeccin viral se hace por el cuadro clnico del
paciente y la presencia de anticuerpos contra el agente viral sospechoso; sin embargo,
hay algunas tcnicas rpidas para demostrar los antgenos virales y tambin se sabe
de tcnicas para amplificar su material gentico.
Toma de las muestras
Un factor determinante para el aislamiento viral es la obtencin temprana de una
muestra adecuada, ya que la excrecin viral generalmente persiste pocos das y su
concentracin disminuye progresivamente con el tiempo. Adems, la aparicin de
anticuerpos en la fase aguda neutraliza el virus.
Para el aislamiento viral, las muestras clnicas se deben inocular rpidamente en
clulas vivas. En su defecto se guardan en heladera entre 4 C-8 C o en hielo hasta
que sea posible su inoculacin. Si el tiempo de inoculacin se prolonga ms de 4 das,
se congelan a -70 C y se utiliza un medio de transporte segn sea el tipo de muestra.

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Mtodos directos
Examen microscpico:

Microscopa de luz. Se efecta mediante tinciones especiales como Wright o

Giemsa en extendidos provenientes de lesiones vesiculares donde se visualizan
las inclusiones o los cambios celulares ocasionados por la invasin viral. Por
ejemplo: el estudio de inclusiones producidas por el citomegalovirus (CMV) en
sedimento urinario. La sensibilidad de esta tcnica depende de su preparacin,
tincin y la experiencia del observador, generalmente es menor que la de la
inmunofluorescencia y el cultivo viral.
Microscopa electrnica. Permite visualizar la partcula viral debido a la gran
resolucin del microscopio electrnico. El uso de este equipo especializado y
costoso, el elevado nivel tcnico que requiere, la baja sensibilidad cuando hay
un bajo nmero de partculas hacen que este sistema sea poco usado y slo se
emplee a nivel investigativo o acadmico.

Deteccin de cidos nucleicos: los ya mencionados.

Deteccin de antgenos.
Mediante esta tcnica se pueden descubrir antgenos virales circulantes o los que se
encuentran en los tejidos del husped. La sensibilidad de estas pruebas depende de la
cantidad de antgeno presente y su especificidad depende de la calidad de los
antisueros disponibles para este efecto. Estas pruebas permiten una demostracin
rpida y son muy prcticas para el diagnstico.
Cultivos.
Los virus son microorganismos intracelulares obligados razn por la cual no crecen en
medios artificiales y para evidenciarlos, se deben utilizar sistemas basados en lneas
celulares que permitan su desarrollo. Los cultivos virales requieren de una
infraestructura adecuada y personal entrenado y slo se pueden realizar en centros de
docencia o de investigacin.
La invasin viral se evidencia a travs de un cambio celular o efecto citoptico (EC) y
mediante pruebas complementarias.
El tipo de EC que se observa es a menudo la clave para identificar el virus infectante.
Los resultados del cultivo viral requieren por lo menos 8 das.
Todo lo anteriormente mencionado hace que el cultivo viral prcticamente no se utilice
para el diagnstico y se recurra a las tcnicas inmunolgicas, ya sea deteccin de
antgenos y/o deteccin de anticuerpos.

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Mtodos indirectos
Estas son las tcnicas inmunolgicas tradicionales para descubrir anticuerpos contra
agentes virales determinados.
Pruebas de susceptibilidad viral
El desarrollo de resistencia clnica a los agentes antivirales, se ha documentado en
varios virus de importancia clnica, que incluyen el virus de influenza, CMV, HIV. Una
de las principales causas para esto es el uso diseminado y cada vez ms frecuente y
rutinario de lo antivirales. Por tanto, los datos acerca de los perfiles de susceptibilidad
viral son importantes y tiles, tanto por razones clnicas como epidemiolgicas.
En trminos generales las pruebas para susceptibilidad viral no se encuentran
totalmente estandarizadas salvo para HIV. Los resultados pueden depender de
factores mltiples como el tipo de prueba, la lnea celular utilizada, el inculo viral y el
laboratorio donde se llevan a cabo las pruebas.

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COMPETENCIAS
Al finalizar el cursado ustedes deben ser capaces de presentar las siguientes competencias,
acordes al actual plan de estudios.
A. COGNITIVAS
1. AGENTES ETIOLGICOS: caractersticas generales; estructura antignica (evidenciada en
las reacciones antgeno-anticuerpo y en la constitucin de vacunas); factores de virulencia
(que se relacionen con la presentacin clnica como con la invasin del paciente)
2. FISIOPATOGENIA: va/s de entrada; mecanismo de accin.
3. BREVE CUADRO CLNICO.
4. DIAGNSTICO MICROBIOLGICO DIRECTO E INDIRECTO.
a) Solicitud de estudio.
b) Toma, conservacin y transporte de la muestra.
c) Interpretacin de resultados.
5. TRATAMIENTO: clasificacin y mecanismo de accin de los antimicrobianos.
6. PROFILAXIS: especfica y/o inespecfica.
7. EPIDEMIOLOGA: reservorio; contagio; incubacin; predominio.
B. HABILIDADES Y DESTREZAS
1. ELABORACIN DE SOLICITUD DE DIAGNSTICO MICROBIOLGICO: qu, cuando y como
pedir.
2. INTERPRETACIN DE RESULTADOS: de acuerdo a la especificidad, sensibilidad y valor
predictivo de las tcnicas realizadas.
3.INTERPRETACIN DE LOS ANTIBIOGRAMAS: por difusin y/o dilucin.
4.CAPACIDAD DE RESOLUCIN DE CASOS CLNICOS: de acuerdo a los conocimientos
tericos y prcticos.
C. ACTITUDINALES
1.COMPROMISO TICO y preocupacin por una asistencia de calidad; mantener la dignidad,
privacidad y confidencialidad del paciente infeccioso al cual se le solicita los estudios.
2.CAPACIDAD PARA: aceptar la responsabilidad de su propio aprendizaje; trabajar en grupo;
analizar costo/beneficio de los estudios solicitados y los antimicrobianos indicados; uso
racional de los avanzados recursos tecnolgicos del diagnstico microbiolgico.