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Clculos de orbitales moleculares:

Los mtodos empleados cubren situaciones estticas y dinmicas. En todos los casos, el tiempo
de clculo aumenta rpidamente a medida que el tamao del sistema estudiado crece. este
sistema puede ser una simple molcula, un grupo de stas o un cuerpo slido. Estos mtodos,
por lo tanto, se basan en teoras que van desde la alta precisin, pero apropiados para
pequeos sistemas, a las buenas aproximaciones, pero apropiadas para grandes sistemas. Los
mtodos ms precisos son llamados mtodos ab initio, los cuales estn basados totalmente en
la teora de los primeros principios. Los menos precisos son llamados empricos o semiempricos, debido a que son obtenidos de resultados experimentales, a menudo de tomos o
molculas relacionadas, se usan en conjunto a la teora.
Mtodos
Una frmula molecular dada puede representar un nmero de molculas ismeras. Cada
ismero es un mnimo local de energa sobre la superficie (llamado energa potencial de
superficie) creada de la energa total (energa de los electrones ms la energa de repulsin de
los ncleos) como una funcin de coordenadas de todos los ncleos. Un punto estacionario es
una geometra tal que la derivada de la energa con respecto a todos los desplazamientos de los
ncleos es cero. Un mnimo local (de energa) es un punto estacionario donde todos esos
desplazamientos conducen a un aumento de energa. El ms bajo mnimo local es llamado
mnimo global y corresponde al ismero ms estable. Si hay un cambio en una coordenada en
particular que lleve a una disminucin de la energa total en ambas direcciones el punto
estacionario es un estado de transicin y la coodenada es la coordenada de reaccin. Este
proceso de determinar los puntos estacionarios es llamado optimizacin geomtrica.

Resea historica
Sobre la base de los descubrimientos y la teora en la historia de la mecnica cuntica, los
primeros clculos tericos en qumica fueron los de Walter Heitler y Fritz London en 1927. Los
libros que influenciaron los inicios de la qumica cuntica computacional incluyen: Introduction
to Quantum Mechanics with Applications to Chemistry de Linus Pauling y E. Bright Wilson,
1935; Quantum Chemistry de Henry Eyring, John Walter y George Kimball, 1944; Elementary
Wave Mechanics with Applications to Quantum Chemistry de Walter Heitler, 1945 y ms tarde
el libro Valence de Charles Coulson, los cuales sirvieron de referencia primaria para los qumicos
en dcadas posteriores.
Con el desarrollo de eficiente tecnologa computacional, en los 40' las soluciones de elaboradas
ecuaciones de onda para complejos sistemas atmicos comienzan a ser un objetivo realizable. A
comienzos de los 50' fueron llevados a cabo los primeros clculos orbitales atmicos semiempricos. Qumicos tericos se convirtieron en una gran cantidad de usuarios de los primeros
computadores digitales. El primer clculo ab initio fue el mtodo de Hartree-Fock sobre
molculas diatmicas, el cual se llev a cabo en 1956 en el MIT usando un conjunto de funciones
de base del tipo orbitales de Slater. Para molculas diatmicas, un estudio sistemtico utilizando
un conjunto base mnimo y los primeros clculos de las ms grandes conjuntos bases fueron
publicados por Ransil y Nesbet respectivamente en 1960. El primer clculo poliatmico usando
funciones Gaussianas fueron llevados a cabo a finales de los 50'. Los primero clculos de
interaccin de configuraciones fueron realizadas en Cambridge en el computador EDSAC en los
50' por S. Francis Boys y sus compaeros de trabajo, usando funciones Gaussianas. En 1971,
cuando una bibliografa de clculos ab initio fue publicada, las molculas ms grandes incluidas
fueron la naftalina y el azuleno.

En 1964, clculos del mtodo Hckel, que son un simple mtodo CLOA para la determinacin de
la energa de electrones de rbitas moleculares de electrones en sistemas conjugados de
hidrocarburos, que van desde sistemas sencillos tales como el butadieno o el benceno hasta el
ovaleno con 10 anillos fusionados de a 6, fueron generados en computadores en Berkeley y
Oxford. Estos mtodos empricos fueron reemplazados en los 60' por mtodos semi-empricos
tales como CNDO.
A comienzos de los 70', eficientes programas computacionales ab initio tales como ATMOL,
Gaussian, IBMOL y POLYAYTOM comienzan a ser utilizados para acelerar los clculos ab initio de
rbitas moleculares. De estos programas slo Gaussian, masivamente expandido, est an en
uso, siendo uno de los tantos utilizados hoy en da. Al mismo tiempo, los mtodos de mecnica
molecular, tales como MM2, fueron desarrollados principalmente por Norman Allinger.

Una de las primeras veces que el trmino "qumica computacional" fue mencionado puede ser
encontrado en el libro Computers and Their Role in the Physical Sciences de 1970, escrito por
Sidney Fernbach y Abraham Haskell Taub, donde dicen: "Parece, por lo tanto, que la 'qumica
computacional' puede finalmente ser ms y ms una realidad". Durante los 70', diferentes
mtodos comienzan a ser vistos como parte de una nueva disciplina emergente de qumica
computacional. La primera publicacin del jornal de qumica computacional fue publicado en
1980.

La determinacin de la estructura molecular va optimizacin geomtrica se convirti en una


rutina slo cuando mtodos eficientes para el clculo de la primera derivada de la energa con
respecto a todas las coordenadas atmicas estuvieron disponibles. La evaluacin de las
segundas derivadas permite la prediccin de las frecuencias vibratorias suponiendo
movimientos armnicos. Las frecuencias estn relacionadas con los valores propios de la matriz
de segundas derivadas.Si los valores propios son todos positivos, entonces las frecuencias son
todas reales y el punto estacionario es un mnimo local. Si un valor propio es negativo (una
frecuencia imaginaria), el punto estacionario es un estado de transicin. Si ms de un valor
propio es negativo el punto estacionario es ms complejo an, y usualmente de poco inters.
Cuando se encuentra, es necesario mover la bsqueda fuera de l, si se est buscando un
mnimo local y una estado de transicin.
La energa total est determinada por una solucin aproximada de la ecuacin de Schrdinger
dependiente del tiempo, usualmente incluyendo trminos no relativistas, y haciendo uso de la
aproximacin de Born-Oppenheimer, la cual, basada en las ms altas velocidades de los
electrones en comparacin con los ncleos, permitiendo la separacin de movimientos
electrnicos y nucleares, simplificando la ecuacin de Schrdinger. Esto conduce a la evaluacin
de la energa total como una suma de energa electrnica en las posiciones fijas del ncleo ms
la energa de repulsin del mismo. Una notable excepcin la constituyen los enfoques llamados
qumica cuntica directa, los cuales tratan a los electrones y los ncleos por igual. Mtodos del
funcional de densidad y mtodos semi-empricos son variantes del tema principal. Para cada
sistema grande, la energa total relativa puede ser comparada utilizando mecnica molecular.

Mtodos ab initio
Los programas utilizados en qumica computacional estn basados en diferentes mtodos de la
qumica cuntica que resuelven la ecuacin de Schrdinger asociada al Hamiltoniano molecular.
Mtodos que no incluyen ningn parmetro emprico o semi-emprico en sus ecuaciones
(siendo derivadas directamente de principios tericos, sin la inclusin de datos experimentales),
son llamados mtodos ab initio. Esto no implica que la solucin sea exactamente una; son todos
clculos aproximados de mecnica cuntica. Esto significa que una aproximacin est
rigurosamente definida en base a los primeros principios (teora cuntica) y su resolucin es con
un margen de error que es cualitativamente conocido de antemano. Si mtodos numricos
iterativos han sido empleados, la meta es iterar hasta obtener la mxima precisin que la
mquina pueda dar (lo mejor que es posible con un tamao de palabra del computador finito y
con las aproximaciones matemticas y/o fsicas realizadas).
El tipo ms simple de clculo de estructura electrnica ab initio es el mtodo de Hartree-Fock
(HF), una extensin de la teora de orbitales moleculares, en la cual la correlacionada repulsin
electrn-electrn no es especficamente tomada en cuenta; slo su efecto promedio es incluido
en los clculos. Como el tamao de las bases de conjunto es incrementado, la energa y la
funcin de onda tienden a un lmite llamado el lmite Hartree-Fock. Muchos tipos de clculos,
conocidos como mtodos pos Hartree-Fock, comienzan con un clculo Hartree-Fock para
corregir posteriormente la repulsin electrn-electrn, conocida tambin como correlacin
electrnica. Ya que estos mtodos son llevados al lmite, la solucin entregada se aproxima a la
solucin exacta de la ecuacin no relativista de Schrdinger. Con el fin de obtener un total
acuerdo con los experimentos, se hace necesario incluir trminos relativistas y la interaccin
rbita-espn, ambos solamente importantes para tomos pesados. En todos estos enfoques,
adems de la eleccin del mtodo, es necesario elegir un conjunto base.

ste es un conjunto de bases, usualmente centrado en alrededor de los diferentes tomos de la


molcula, los cuales son usados para expandir las rbitas moleculares con el CLOA. Los mtodos
ab initio necesitan definir un nivel de teora (el mtodo) y un conjunto base.
Dentro del modelo monoelectrnico, la funcin de onda Hartree-Fock viene descrita por una
nica configuracin electrnica o determinante de Slater. Dicha descripcin es adecuada para
representar la naturaleza del estado fundamental de las molculas, en general cerca de las
estructuras de equilibrio de los sistemas. A partir de dicha referencia nica los mtodos
qumico-cunticos ab initio aaden los efectos de correlacin electrnica a travs de
procedimientos de interaccin de configuraciones, perturbativos u otros. Existen muchos casos
en los que la descripcin uniconfiguracional HF es inadecuada para representar la estructura
electrnica del sistema, o para estudiar la evolucin del sistema qumico en diferentes regiones
de las superficies de energa potencial. Situaciones tpicas son el estudio de la disociacin del
enlace qumico, el clculo del estado electrnico excitado, la descripcin de situaciones
degeneradas entre estados, casos birradicalarios, estados de transicin complejos, estructura
electrnica en metales de transicin, lantnidos o actnidos, con muchas capas electrnicas
cercanas en energa, etc.
En esas situaciones es necesario describir los estados electrnicos con ms de una sola
configuracin electrnica a travs de los mtodos multiconfiguracionales, el ms conocido de
los cuales es el mtodo CASSCF. En ellos tanto los coeficientes de las configuraciones como los
coeficientes de los orbitales moleculares se optimizan simultneamente. Una vez ms, ser
necesario incluir el resto de la correlacin electrnica a partir de dicha funcin de onda
multiconfiguracional. El empleo de mtodos uniconfiguracionales en situaciones que requieren
descripciones multiconfiguracionales da lugar, en general, a graves defectos en los resultados.

La energa molecular total puede ser evaluada como una funcin de la geometra molecular, en
otras palabras, la energa potencial de superficie. Esta superficie puede ser usada para una
reaccin dinmica. Los puntos estacionarios de la superficie nos llevan a la prediccin de
diferentes ismeros y la estructuras de transicin para la conversin entre ismeros, pero estos
pueden ser determinados sin un conocimiento acabado de la superficie completa.
Un objetivo especialmente importante, llamada termoqumica computacional, es para calcular
cantidades termoqumicas tales como la entalpa de formacin para la precisin de qumicos. La
precisin de qumicos es la precisin requerida para hacer predicciones qumicas realistas y se
considera generalmente que es 1 kcal/mol 4 Kj/mol. Para alcanzar tal precisin de manera
econmica es necesario utilizar una serie de mtodos pos Hartree-Fock y combinar los
resultados. Estos mtodos son llamados mtodos compuestos de qumica cuntica.

Mtodos del funcional de densidad


Los mtodos de la teora del funcional de la densidad (DFT, del ingls Density Functional Theory)
son a menudo considerados por lo mtodos ab initio para determinar la estructura electrnica
molecular, incluso aunque muchos de los ms comunes funcionales usen parmtros derivados
de data emprica, o de los clculos ms complejos. Esto significa que deberan tambin ser
llamados mtodos semi-empricos. Es mejor tratarlos como una clase por s slos. En DFT, la
energa total es expresada en trminos de la densidad total en lugar de la funcin de onda. En
este tipo de clculos, hay un Hamiltoniano aproximado y una expresin aproximada para la
densidad electrnica total. Los mtodos DFT pueden ser muy precisos bajo un pequeos costo
computacional. El inconveniente es que a diferencia de los mtodos ab initio, no hay una
manera sistemtica de mejorar los mtodos mejorando la forma del funcional. Algunos mtodos
combinan el intercambio de densidad del funcional con el intercambio de trminos Hartree-Fock
y son conocidos como mtodos de funcional hbrido.
Mtodos semi-empricos y empricos
Los mtodos semi-empricos de qumica cuntica estn basados en el formalismo de HartreeFock, pero hacen muchas aproximaciones y obtienen algunos parmetros de datos empricos.
Son muy importantes en qumica computacional por tratar grandes molculas donde el mtodo
completo de Hartree-Fock sin aproximaciones es muy caro. El uso de parmetros empricos
aparece para permitir la inclusin de algunos efectos de correlacin en los mtodos.
Los mtodos semi-empricos se basan a menudo en los mtodos llamados empricos donde la
parte de dos electrones del Hamiltoniano no es explcitamente incluida. Para sistemas electrn, el mtodo utilizado es el de Hckel, propuesto por Erich Hckel, y para todos los
sistemas de electrones de valencia, el mtodo extendido Hckel, propuesto por Roald
Hoffmann.

Aplicaciones de la espectrofotometra UV-Vis


Es la regin del espectro electromagntico de mayor utilidad
Gran numero de aplicaciones, es el tipo mas comn de anlisis (muchas molculas absorben)
Alta sensibilidad (limites de deteccin de 10-6 M)

1) Anlisis cualitativo: Limitado por el poco numero de bandas y adems traslapadas.


Confirmacin de la presencia de un compuesto
Tablas de correlacin
Clculos de orbitales moleculares
Generalmente, los espectros UV-visible muestran algunas bandas anchas. Comparada con
tcnicas como infrarrojo, que produce muchas bandas estrechas, la espectroscopa UV-visible
proporciona informacin cualitativa limitada. La mayor parte de la absorcin de los compuestos
orgnicos resulta de la presencia de enlaces (es decir, insaturados). Un cromforo es un grupo
molecular que, normalmente, contiene un enlace . Cuando se inserta en un hidrocarburo
saturado (que no exhibe un espectro de absorbancia UV-visible), se forma un compuesto con
una absorcin entre 185 y 1000 nm.

Aunque los espectros UV-visible no permiten una identificacin absoluta, se usan


frecuentemente para confirmar la identidad de una sustancia mediante la comparacin del
espectro medido con uno de referencia.
Cuando los espectros son muy similares, pueden utilizarse espectros derivados. EL nmero de
bandas aumenta con el orden de derivada. Este aumento de complejidad de los espectros
derivados puede ser til en el anlisis cualitativo, para caracterizar materiales o para
identificacin.

Las derivadas de los espectros pueden utilizarse para resaltar las diferencias entre espectros,
resolver bandas solapadas para el anlisis cualitativo (confirmacin de la identidad) y, ms
importante, reducir los efectos de interferencias debidas a dispersin, matriz u otros
compuestos absorbentes para el anlisis cuantitativo.
Por ejemplo, el espectro del esteroide testosterona muestra una nica banda ancha, sin
estructura, centrada alrededor de 330 nm, mientras que la segunda derivada muestra seis picos
distintos.
El efecto de mejora de resolucin puede utilizarse tambin en la identificacin. Cuando dos
bandas gaussianas con una anchura de banda espectral natural (NBW) de 40 nm, separadas por
30 nm, se suman en el modo de absorbancia, resulta una banda con un mximo entre los dos
componentes, es decir, no estn resueltos. En la cuarta derivada, estas dos bandas son
claramente visibles, con mximos centrados cerca de la max de las bandas de los componentes.

Temperatura de fusin de las protenas y los cidos nuclicos


Los espectros de absorbancia de las protenas resultan principalmente de la presencia de los
aminocidos aromticos triptfano, tirosina y fenilalanina. Una protena a temperatura ambiente
tiene una estructura o conformacin terciaria especfica que crea un entorno electrnico determinado
para los aminocidos aromticos. Si se calienta la protena, a una cierta temperatura, se desdobla o
funde y pierde su estructura. En este proceso, el entorno electrnico de los aminocidos aromticos
cambia, lo que resulta en cambios o variaciones espectrales. Puede utilizarse anlisis
multicomponente para determinar la cantidad de cada aminocido aromtico que est presente en
una protena intacta. El cido desoxirribonuclico (DNA) en su estado nativo, consta de dos cadenas
de molculas de desoxirribosa enlazadas helicoidalmente. Las cadenas estn unidas por enlaces de
hidrgeno entre las bases purina y pirimidina.Estas bases son las principales responsables de la
absorbancia UV del DNA, con un mximo a 260 nm. Comoen un sistema multicomponente, la
absorcin observada de una molcula de DNA debe ser igual a la suma de las absorbancias
individuales: ADNA = Aadenina + Aguanina + Acitosina + Atimina.
Sin embargo, la absorbancia observada es siempre significativamente menor que la esperada debido a
que el enlace de hidrgeno entre las bases cambia su entorno electrnico. Cuando se calienta una
molcula, el enlace de hidrgeno se rompe, la doble hlice se desenrosca y la
absorbancia aumenta, de manera que se acerca a la esperada de la suma de todas las bases. Este
proceso de desnaturalizacin tambin se conoce como fusin. En un experimento de fusin de DNA,
se aumenta paso a paso la temperatura de una disolucin de DNA y se mide la
absorbancia a 260 nm a cada temperatura, representndose como una curva de fusin. El punto
medio del rango de temperatura sobre el que ocurre la fusin, es el valor Tm. El Tm de una muestra de
DNA depende principalmente del porcentaje de parejas GC de la muestra, cada una de las
cualescontiene tres enlaces de hidrgeno (en contraste, cada pareja AT contiene dos enlaces de
hidrgeno). Cuanto mayor es el porcentaje de parejas G-C en la muestra, mayor es el Tm observado.

Actividad enzimtica.
La actividad de una enzima es una medida de su eficacia como catalizador. La concentracin de
enzima en una preparacin impura puede expresarse en trminos de unidades por mililitro y la
actividad especfica de la preparacin, puede expresarse en unidades por miligramo de
protena. Al purificarse la enzima, la actividad especfica aumenta hasta un lmite (el de la
enzima pura). Como la velocidad de reaccin vara con factores tales como concentracin del
sustrato, pH, fuerza inica y temperatura, las condiciones bajo las que se determina la actividad
deben estar definidas con precisin. Estas condiciones son, normalmente, las ptimas de ensayo
a una temperatura fija (25, 30 o 37 C), con todos los sustratos presentes en condiciones de
saturacin. Para determinar la actividad, se prepara un sistema con concentraciones conocidas
de sustrato y, si es necesario, coenzima. Se aade un peso conocido de la enzima y se determina
la velocidad de reaccin. Las medidas de actividad se realizan principalmente en el campo de la
investigacin donde se aslan y purifican enzimas, as como para la fabricacin de kits de
ensayos enzimticos, en los que la actividad de la enzima debe ser igual en todos los lotes.
Influencia del entorno sobre el espectro de absorcin de los cromforos protecos. El espectro
de muchos cromforos es sensible al solvente. Esto puede manifestarse como cambios en
intensidad, forma de la bando o longitud de onda. Normalmente el medio es agua o las cadenas
laterales de la protena.En el caso de protenas el aumento en la polaridad del entorno suele
traducirse en un desplazamiento de sus espectros hacia el azul (menor longitud de onda,
hipsocromismo) y una disminucin de la constante dielctrica desplaza hacia el rojo (mayor,
batocromismo). Tambin puede haber aumento de la intensidad de la seal o disminucin.

2) Anlisis cuantitativo: mtodos de mayor uso en anlisis instrumental

Buena precisin: 1-5% de error en las determinaciones


Relativamente simple y econmico
Etapas de un anlisis cuantitativo:
Eleccin de las condiciones del anlisis: solvente, pH, temperatura, fuerza inica,
derivatizacion etc.
Seleccin de la lm
Identificacin de interferentes
Seleccionar las condiciones instrumentales: l, ancho de la rendija, cubetas
Preparacin de la curva de calibracin con estndares de concentracin conocida
Mtodo de adicin de estndares
Medicin de la absorbancia de la muestra a analizar
Aplicacin de la ley de Bourger-Lambert-Beer

Anlisis cuantitativo:
El coeficiente de extincin () es caracterstico de una sustancia en condiciones definidas de
longitud de onda, disolvente y temperatura. En la prctica, el coeficiente de extincin medido
tambin depende de las caractersticas del instrumento utilizado. Por esta razn, normalmente
no se utilizan valores predeterminados del coeficiente de extincin para anlisis cuantitativo.
En su lugar, se construye una curva de calibracin o curva de trabajo para la sustancia a analizar,
utilizando una o dos disoluciones patrn con concentraciones conocidas del analito.
Para transiciones electrnicas, la diferencia de energa entre los estados fundamental y
excitados, es relativamente grande. Por tanto, a temperatura ambiente, es muy probable que
todas las molculas estn en estado electrnico fundamental. La absorcin y vuelta al estado
fundamental, son procesos rpidos y el equilibrio se alcanza muy rpidamente. Por
consiguiente, la absorcin de luz UV-visible es cuantitativamente muy exacta. La simple
relacin lineal entre la absorbancia y la concentracin y la relativa facilidad de medida de la luz
UV-visible, ha hecho de la espectroscopa UV-visible la base de miles de mtodos analticos
cuantitativos.
Suponiendo que el espectro de orden cero obedece la ley de Beer, existe una relacin lineal
similar entre la concentracin y la amplitud, para todos los rdenes de espectros derivados:
Orden cero: A = bc
Primera derivada: dA/d = (dd)bc
n derivada: dnA/d = (dn/d)bc
Para cuantificar un solo componente, la seleccin de longitudes de onda es ms difcil con
espectros derivados que con espectros de absorbancia, ya que hay presentes picos positivos y
negativos.

Las derivadas de orden par tienen un mximo o un mnimo a la misma max que el espectro de
absorbancia, pero en las derivadas de orden impar esta longitud de onda es un punto de corte
con el cero. Tomando la diferencia entre el mximo ms alto y el mnimo ms bajo se obtiene la
mejor S/N pero puede resultar en una mayor sensibilidad para las interferencias de otros
componentes.
Requisitos de la muestra: Para resultados exactos, la muestra a analizar debe contener slo el
componente absorbente para el que se ha realizado la calibracin. Si la muestra es una
disolucin, debe utilizarse como blanco el disolvente puro. Puede que sea posible corregir una
interferencia con una segunda longitud de onda.
Anlisis multicomponente: Se han realizado casi tantos anlisis multicomponente con espectros
UV-visible como de un solo componente, pero debido a que las tcnicas usadas en anlisis
multicomponente a menudo producan resultados incorrectos no eran muy aplicados. Sin
embargo, los instrumentos modernos producen datos ms precisos y las modernas tcnicas de
ajuste de curvas dan lugar a resultados ms exactos y, quizs ms importante, indican cuando
los resultados son incorrectos. Por estas razones, los anlisis multicomponente UV-visible se han
hecho ms populares.
Mtodo de ecuaciones simultneas simples El mtodo simple de anlisis multicomponente se
basa en medidas a un nmero de longitudes de onda igual al nmero de componentes de la
mezcla. Las longitudes de onda elegidas normalmente son aquellas del mximo de absorbancia
de cada componente. Para la calibracin, se mide la absorbancia de patrones puros de
concentracin conocida, para determinar el coeficiente de extincin de cada componente a
cada longitud de onda seleccionada. La absorbancia de la mezcla a cada longitud de onda es la
suma de la absorbancia de cada componente a esa longitud de onda, que al fin y al cabo
depende del coeficiente de extincin y de la concentracin de cada componente.

Curva de calibracin normal: soluciones estndar del analito (no tiene en cuenta el efecto de
matriz en una muestra real).

Mtodo de adicin de estndares: corregir el efecto de la matriz.

C0

S1

S2

S3

S4

C
C0

S1

S2

S3

S4

Vx=Alicuota de la solucin problema con concentracin Cx


Vt=volumen del matraz
Vs=Volumen de la solucin estndar adicionada
A=ebVxCx/Vt +

b=ebVxCx/Vt

ebVsCs/Vt
y

A= b + mVs

m=ebCs/Vt
Cx=bCs/mVx

(relacin lineal entre A y Vs o mols)

b/m=(ebVxCx/Vt)/(ebCs/Vt)=VxCx/Cs

Anlisis de multicomponentes:

Para 2 componentes se requiere mediciones a


2 l:
l1: AT(l 1)=A1(l1) + A2(l1) = e1, l1bC1 + e2l1C2
l2: AT(l 2)=A1(l2) + A2(l2) = e1, l2bC1 + e2l2C2
Para calcular C1 y C2 se requiere 2 ecuaciones y
4 constantes e (cuatro curvas de calibracin).
En general: Para n compuestos se requieren n2 curvas
de calibracin.

Anlisis de multicomponentes:

Para una mezcla de x e y donde cx = cy = 1


Con poco solapamiento espectral
Con solapamiento espectral
A(x + y) = 1.1 + 0.0 = 1.1
A(x + y) = 0.6 + 0.5 = 1.1
A(x + y) = 0.0 + 0.9 = 0.9
A(x + y) = 0.4 + 0.5 = 0.9

Si ocurre un error del 10 % en la medida de A(x + y) y A(x + y), es decir, A(x + y) = 0.99 (- 10 %)
y A(x + y) = 0.99 (+ 10 %), el clculo cuantitativo da lugar a resultados errneos.
.

Componente
x
y

Poco solapamiento
Conc. nominal Conc. calculada % error
1
0.9
- 10 %
1
1.1
+ 10 %

Mucho solapamiento
.
Conc. calculada
% error
0
-100 %
1.98
+ 98 %

Puede reducirse el efecto del ruido aleatorio mediante el uso de informacin espectral
adicional, es decir puede utilizarse una serie de datos para cuantificacin, en lugar de slo dos.
En este llamado sistema sobredeterminado, un ajuste por mnimos cuadrados de los espectros
patrn al espectro de la muestra medida, da lugar a resultados cuantitativos.
Con 21 puntos (intervalos de 2 nm sobre 200240 nm), los resultados cuantitativos del mtodo
de mnimos cuadrados tienen un error < 1 % comparados con un error de aproximadamente el
10 %, usual en las medidas a dos longitudes de onda.
Comparacin de los resultados de anlisis multicomponente de los mtodos de ecuaciones
simultneas simples y mnimos cuadrados

Componente
x
y

Usando slo 210 y 230 nm


Conc. nominal Conc. calculada % error
1
0.0
- 10 %
1
1.98
+ 10 %

Usando 200240 nm
Conc. calculada % error
1.003
+ 0.3 %
0.995
- 0.5 %

Este mtodo permite el anlisis de las mezclas ms complejas y de mezclas simples de


componentes con espectros similares. El residual del clculo de mnimos cuadrados es un buen
indicador de lo bien que los espectros patrn ajustan en los espectros de muestra y, por lo
tanto, es un buen indicador de la probable exactitud de los resultados.

Cuantificacin Indirecta por Derivatizacin qumica: Debido a que muchos compuestos exhiben
dbil o ninguna absorbancia en las regiones UV o visible, se han desarrollado varios mtodos con
derivatizacin qumica. Tales mtodos, normalmente implican el aadir un reactivo orgnico,
que forma un complejo con fuerte absortividad. La etapa final de medida es prcticamente igual
que la de los mtodos directos. Con esta tcnica, la eleccin apropiada del reactivo puede
mejorar significativamente tanto la sensibilidad como la selectividad.
Ensayos cinticos Enzimticos : El anlisis UV-visible directo de un componente en matrices
biolgicas, por ejemplo sangre o alimentos, es difcil. Las interferencias de otros componentes a
menudo imposibilitan la medida directa de una propiedad especfica, como la absorbancia. La
separacin del compuesto de inters puede ser costosa y pesada y por tanto, impracticable en el
anlisis de rutina. Pueden utilizarse ensayos enzimticos en el anlisis indirecto de un
compuesto o un grupo de compuestos en una matriz compleja. Si se selecciona la enzima
cuidadosamente, cualquier cambio en la muestra posterior a la adicin de la enzima, ser el
resultado slo de la reaccin del compuesto o compuestos especficos. Esta selectividad es la
base de los ensayos enzimticos.
Los ensayos enzimticos pueden dividirse en dos tipos: ensayos de velocidad y ensayos de punto
final. La velocidad de una enzima depende de muchos factores, que incluyen temperatura, pH,
actividad enzimtica, concentracin de la enzima y concentracin del sustrato. Sin embargo, si
todos los parmetros estn controlados a un nivel constante, la velocidad de reaccin es
directamente proporcional a la concentracin del sustrato. Con los ensayos de punto final, se
seleccionan las condiciones de manera que la conversin del sustrato a producto se complete
dentro de un periodo razonable de tiempo (520 min). La diferencia entre la absorbancia inicial
y final es directamente proporcional a la cantidad de sustrato.

TITULACIONES ESPECTROFOTOMTRICAS

La absorcin de una solucin, a determinada l, puede ser monitoreada


durante una titulacin

La forma de la curva de titulacin depende de la reaccin involucrada

23

TITULACIONES ESPECTROFOTOMTRICAS
Medicin de la absorbancia durante el proceso de titulacin.
Depende los coeficientes de extincin molar del analito, el valor ante y los productos

A + T
A

Analito no absorbe
Titulante absorbe

V titulante

eA = 0
eT > 0
eP = 0
P. eq.

Analito absorbe
Titulante no absorbe

eA>0
eT=0
eP =0

Analito no absorbe
Producto absorbe
Titulante no absorbe
V titulante

eA = 0
eT = 0
eP > 0

V titulante
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COMPONENTES PARA INSTRUMENTOS EN ESPECTROSCOPA UV-Vis


Esquema general de un espectrofotmetro Uv-Vis:

ESPECTROFOTMETRO UV-VISIBLE
2100C UNICOM OPTICS - 200-1000 nm
longitud de onda y 4 nm ancho de banda

Labolan Modelo: 2000UV Ancho de


banda:
5
nm
Red de difraccin 1200 lneas/mm.
Longitud
de
onda:
200-1000nm
Precisin longitud de onda: 1 nm

Shimadzu UV 2000
resolution of 1 nm

Thermo Evolution 600 UV-Vis


Spectrophotometer

COMPONENTES PARA INSTRUMENTOS EN


ESPECTROSCOPA OPTICA
EMISIN

ABSORCIN
UV/VISIBLE

ABSORCIN
INFRARROJA

FLUORESCENCIA

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FUENTES DE RADIACIN
La fuente ideal de luz sera aquella que generara una intensidad constante a todas las
longitudes de onda, con bajo ruido y gran estabilidad. Sin embargo, estas fuentes no existen.
Lmpara de arco de deuterio, produce un buen continuo de intensidad en la regin UV y ofrece
una intensidad til en la regin visible . Aunque las modernas lmparas de arco de deuterio
tienen bajo ruido, ste, a menudo, es un factor limitante en el ruido general del instrumento.
Con el tiempo, la intensidad de luz de una lmpara de arco de deuterio disminuye de modo
homogneo. Estas lmparas tienen una vida media (el tiempo requerido para que la intensidad
caiga a la mitad de su valor inicial) de, aproximadamente, 1000 horas.
Lmpara halgena de wolframio, ofrece buena intensidad en parte del espectro UV y sobre el
rango visible completo. Este tipo de lmpara tiene muy bajo ruido y poca deriva y tiene,
tpicamente, una vida til de 10000 h.
La mayora de los espectrofotmetros
utilizados para medir el rango UVvisible contienen ambos tipos de
lmparas. En estos instrumentos, se
utiliza un selector de fuente para
cambiar
de
lmpara
segn
corresponda, o se mezcla la luz
procedente de las dos fuentes para dar
lugar a una sola banda ancha.

FUENTES DE RADIACIN
Continuas
Lmpara de deuterio (ultravioleta)

Lmparas de arco de Xe, Ar o Hg

Lmpara de wolframio
(visible e IR)

Slidos calentados elctricamente (IR)

Una fuente alternativa de luz es la lmpara de xenon que


produce un buen continuo en las regiones completas UV
y visible. Sin embargo, debido a que el ruido de las
lmparas actuales de xenon es significativamente peor
que el de las lmparas de deuterio o wolframio, las
lmparas de xenon se utilizan slo para aplicaciones
comomedidas de reflectancia difusa, en las que el factor
principal en una intensidad elevada.

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FUENTES DE RADIACIN

De lneas
Lser
Produce lneas espectrales especficas

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Tipos de lser
En grandes rasgos, los lser pueden clasificarse en dos categoras de emisin:
- Onda continua: Emiten de modo continuo con una potencia constante
- Pulsados: La emisin es en picos breves de mxima energa. Los lseres Q-swiched producen
pulsos muy cortos de muy elevada energa.
LSER DE CO2
-Longitud de onda: 10600 nm (infrarrojo).
-Cromforo: agua intracelular y extracelular.
-Puede ser usado en:
- Onda continua: Usado de forma focalizada, como un instrumento de corte quirrgico, o
desfocalizado, con efecto vaporizador para tratar mltiples lesiones tumorales cutneas
benignas y malignas y tatuajes, permitiendo intervenciones con poca hemorragia. En un 1-4 %
puede producir cicatrices hipertrficas.
- Pulsado: Uso cosmtico por su efecto ablativo para rejuvenecimiento cutneo.
-Sus efectos secundarios implican un tiempo de reepitelizacin de 6-8 semanas, con edema,
eritema y trastornos de la pigmentacin transitorios.
LSER ERBIO:YAG
-Siglas de YAG: Itrio-Aluminio-Garnet.
-Longitud de onda: 2940 nm (infrarrojo).
-Cromforo: agua intracelular y extracelular.
-Presenta las mismas indicaciones que el lser de CO2, aunque profundiza 10 veces menos en la
piel y por tanto implica un tratamiento menos agresivo, con un menor tiempo de recuperacin.
Actualmente pueden combinarse ambos lser (de CO2 y erbio:Yag).

LSER ND:YAG
-Siglas: Neodinio: Itrio-Aluminio-Garnet.
-Longitud de onda: 1060 nm (infrarrojo) y 1320 nm.
-Cromforo: agua intracelular y extracelular.
-Diferentes modos:
- Onda continua: Produce menor dao en dermis que el lser de CO2, por lo que se usa en
cosmtica para el rejuvenecimiento cutneo.
- Pulso largo (vasculight): Uso sobre todo para lesiones vasculares. Al tener una longitud de onda
ms larga que los de colorante pulsado, tiene mayor poder de penetracin y por tanto alcanza
vasos de mayor calibre y ms profundos.
- Q-Switched: Usado para eliminar pigmentos profundos y tatuajes as como en depilacin,
donde necesita un material exgeno que se deposite en el folculo y que sea el que absorba la
energa del lser, puesto que la absorcin de la melanina se aleja de su longitud de onda.
-No produce apenas trastornos de la pigmentacin, pero s puede inducir un oscurecimiento
irreversible del pigmento en algunos tatuajes.
LSER DE ARGN
-Longitud de onda: Dos picos de emisin en onda continua de 488 y 514 nm.
-Cromforo: hemoglobina.
-Primer lser usado para el tratamiento de lesiones vasculares. Ya no se usa, salvo casos muy
concretos, por el alto porcentaje de formacin de cicatrices hipertrficas, atrofia y trastornos de
la pigmentacin.

DYE LSER O DE COLORANTE PULSADO


-Longitud de onda variable segn el colorante usado. Las ms frecuentes oscilan entre los 577
(hoy en desuso) y 585 nm en emisin de onda continua.
-Cromforo: hemoglobina. Son los ms usados para el tratamiento de las lesiones vasculares.
-El lser de colorante pulsado de 510 nm es til para el tratamiento de las lesiones pigmentadas
epidrmicas y para el pigmento rojo y amarillo de los tatuajes.
-Efectos secundarios: formacin de prpura (presencia de sangre extravasada en la piel, a modo
de pequeos puntos violceos que no desaparecen al ejercer presin sobre la piel), edema
(hinchazn) y conversin del pigmento rojo a negro por oxidacin del metal utilizado en los
tatuajes.
LSER KTP-PULSADO
-Lser de fosfato de titanio y potasio.
-Longitud de onda: 532 nm.
-Cromforo: hemoglobina.
LSER DE DIODO
-Longitud de onda: 800 nm.
-Cromforo: hemoglobina.
-Uso en depilacin, con gran profundidad de
penetracin.

LSER DE ALEJANDRITA
La alejandrita es el nombre comn del cromo dopado con crisoberilio.
-Longitud de onda: 755 nm (situada en el intervalo de luz visible cercano al infrarrojo).
-Cromforo: melanina.
-Diferentes modos de emisin:
- Pulso largo: Uso para depilacin. La absorcin de su longitud de onda por la melanina es
menor que la del rub, pero penetra ms profundamente y se absorbe menos por la melanina
epidrmica, por lo que las posibles complicaciones derivadas del dao superficial epidrmico
son menores.
- Q- Switched: indicado para el tratamiento de lesiones pigmentadas benignas y de tatuajes
(todos los colores excepto el rojo).
-Efecto secundario principal: hipopigmentacin transitoria que aparece en casi el 50% de los
casos.
LSER DE RUB
-Longitud de onda: 694 nm (emisin como luz roja).
-Cromforo: hemoglobina.
-Diferentes modos de emisin:
- Pulso largo: Uso en depilacin por el dao selectivo sobre la melanina del folculo pilosebceo.
- Q-Switched: Uso para lesiones pigmentadas y tatuajes.
-Efecto secundario principal: alteraciones de la pigmentacin, tanto por hipopigmentacin (45
%) como por hiperpigmentacin (5 %).

FUENTES DE RADIACIN

De lneas
Lmparas de ctodo hueco (para absorcin atmica)

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Lmparas de descarga sin electrodos (para absorcin atmica)

Una lmpara EDL consiste de un bulbo de cuarzo bajo una atmsfera de gas inerte,
conteniendo el elemento o sal del elemento para el cual la lmpara va a ser usado. Cuando se
aplica un campo de RF al bulbo, el gas inerte es ionizado y la energa acoplada excita los
tomos vaporizados del analito dentro del bulbo, ocasionando que emitan su espectro
caracterstico. El espectro de emisin producido es tpicamente muchos ms intenso que el
producido por una lmpara de ctodo hueco, frecuentemente 10 veces mayor o ms.
Un sistema 2 de lmparas EDL tienen excepcionalmente mayor tiempo de vida cuando se
compara con la de ctodo hueco, proporcionando mejor costo-efectividad para su operacin.
Mientras que las lmparas de ctodo hueco son una fuente ideal para determinar muchos
elementos por absorcin atmica, para elementos voltiles, se recomienda el uso de
lmparas de descarga sin electrodos (EDL). Las lmparas EDL proporcionan mayor salida de
luz y mayor tiempo de vida que las correspondientes lmparas de ctodo hueco. Para ciertos
elementos (As, Se y P), las lmparas EDL proporcionan mejor sensibilidad y ms bajos limites
de deteccin. Las lmparas EDL sistema 2 de PerkinElmer estn disponibles para 15
elementos.

CELDAS PARA MUESTRAS

Se necesitan cubetas para contener las muestras

Deben ser transparentes en el rango de l de trabajo

La espectroscopa UV-visible se utiliza principalmente, para medir lquidos o disoluciones. Esto


es ms simple y permite un anlisis cuantitativo ms exacto que realizar medidas de reflectancia
en slidos. En esta tcnica, una cubeta debe contener el lquido o disolucin en el rea de
muestra.
Idealmente, las cubetas deberan ser completamente transparentes a todas las longitudes de
onda, ya que la absorbancia de la propia cubeta reduce el rango dinmico lineal efectivo para la
muestra.
Las cubetas ms baratas son de plstico, normalmente acrlico. Estas cubetas no son resistentes
a todos los disolventes y absorben fuertemente por debajo de 300 nm, hacindolas inadecuadas
para medir en esta regin.
La consistencia (absorbancia y paso ptico) puede variar entre cubetas, dependiendo del
fabricante. Las cubetas de vidrio son ligeramente ms caras que las de plstico pero son ms
duraderas y, con el cuidado apropiado, pueden durar aos. El vidrio absorbe por debajo de
320 nm y por tanto, no es adecuado para medir en este rea.
Las cubetas de cuarzo fundido son razonablemente transparentes por debajo de 210 nm. Las
mejores cubetas son de slice fundida sinttica de alta pureza, siendo razonablemente
transparentes por debajo de 190 nm.
36

CELDAS PARA MUESTRAS

SELECTORES DE LONGITUD DE ONDA

Dispositivo encargado de escoger una longitud de onda (la de absorcin, emisin o


fluorescencia) para obtener alta sensibilidad en las mediciones

Ningn selector de l puede aislar slo una longitud de onda; en su lugar, lo que
se obtiene es una banda centrada en una l nominal

% de radiacin
incidente que es
transmitida por
el selector de l

Anchura de
banda efectiva

l
Anchura de
banda efectiva

1
Calidad del
dispositivo

38

SELECTORES DE LONGITUD DE ONDA


Filtros

De interferencia

Es el tipo de selector ms simple


De absorcin
Filtros de absorcin:

Poseen anchuras de banda efectiva entre 30 y 250 nm


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SELECTORES DE LONGITUD DE ONDA


Filtros de interferencia:

Se basan en las interferencias pticas para producir bandas estrechas de


radiacin (entre 10 y 20 nm)

Cada filtro asla una sola porcin de l

Es imposible realizar un barrido de l`s


40

SELECTORES DE LONGITUD DE ONDA


Dispositivos de dispersin
Estos dispositivos causan que diferentes longitudes de onda de luz sean dispersadas con ngulos
distintos. Cuando se combinan con una rendija adecuada de salida, pueden utilizarse para
seleccionar una longitud de onda (o, ms exactamente, una estrecha banda de onda) de luz de
una fuente continua. Comnmente, se utilizan dos dispositivos de dispersin, prismas y redes
hologrficas de difraccin, en los espectrofotmetros UV-visible.
Dispositivos con los cuales se puede variar, de forma continua y en un amplio intervalo, la
longitud de onda de la radiacin (barrido de un espectro).
Prismas:

Tipo Cornu

Tipo Littow

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Monocromadores de prisma
Un monocromador consta de una rendija de entrada, un dispositivo de dispersin y una rendija
de salida. Idealmente, lo que sale es luz monocromtica. En la prctica, sin embargo, es una
banda, ptimamente, simtrica. La anchura de la banda a la mitad de su altura, es la anchura de
banda instrumental

Los prismas son simples y baratos, pero la dispersin resultante es angularmente no lineal.
Adems, el ngulo de dispersin depende de la temperatura.

Las diversas l, se refractan a diferentes ngulos

SELECTORES DE LONGITUD DE ONDA


Monocromadores de red:

La red es una rejilla pulida y pticamente plana con un gran nmero de surcos paralelos y
muy prximos entre s.

La mayora de los espectrofotmetros modernos contienen redes hologrficas en lugar de


prismas. Estos dispositivos son de cristal, en los que se realizan hendiduras muy estrechas.
Tradicionalmente esto se realizaba mecnicamente, pero actualmente se utiliza un proceso
ptico hologrfico. Las dimensiones de las hendiduras son del mismo orden que las longitudes
de onda de la luz que se va dispersar. Finalmente, se aplica un recubrimiento de aluminio para
crear una superficie reflectante. La luz que incide sobre la red se refleja con diferentes ngulos,
dependiendo de . Las redes hologrficas producen una dispersin angular lineal con la longitud
de onda y son insensibles a la temperatura. Sin embargo, reflejan luz de diferentes rdenes, que
se solapan. Como resultado, deben utilizarse filtros para asegurar que slo la luz del orden
deseado alcanza el detector. Una red cncava dispersa y enfoca la luz, simultneamente.

Surcos/mm

UV-visible, 300 a 2000


IR, 10 a 200

SELECTORES DE LONGITUD DE ONDA


Monocromadores de red:

Monocromador simple

Monocromador doble

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SELECTORES DE LONGITUD DE ONDA


Dispersin en monocromadores de red:
La dispersin de un monocromador de red determina su capacidad para separar
diferentes longitudes de onda.

Dispersin angular:

Dispersin lineal:

Dispersin reciproca lineal:

dr
n
=
dl d cos r

D=

dy Fdr
=
dl dl

D =
1

ngulo de reflexin
o refraccin
Longitud de
un surco
Distancia en el
plano focal (F)

dl d cos r
=
dy
nF
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SELECTORES DE LONGITUD DE ONDA


Resolucin en monocromadores, (R):
Es un indicativo del lmite de la capacidad del monocromador para separar
imgenes adyacentes que tienen longitudes de onda ligeramente diferentes

l
R=
l

Longitud de onda promedio de dos


imgenes
Diferencia de las dos longitud de onda

Resolucin de una red:


Orden de difraccin

l
R=
= nN
l

Nmero de surcos de la red iluminados por la


radiacin que procede de la rendija de entrada
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Policromadores:
Dispositivos utilizados para la determinacin simultnea de una multitud de elementos

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Rendijas del monocromador

l = wD
ef

W anchura de la rendija

l anchura de banda efectiva


ef

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DETECTORES DE RADIACIN
Dispositivos que convierten una seal de energa radiante en una seal elctrica. Idealmente,
debe ofrecer una respuesta lineal en un amplio rango, con bajo ruido y alta sensibilidad.
Normalmente, los espectrofotmetros contienen un tubo fotomultiplicador o un tubo
fotodiodo, como detector.

Detector ideal:

Elevada sensibilidad

Alta relacin seal / ruido

Respuesta constante en un intervalo considerable de l

Tiempo de respuesta rpido

Seal de salida igual a cero en ausencia de iluminacin

La seal elctrica producida por el detector debera ser directamente


proporcional a la potencia radiante, S=k.P

Tipos de detectores

Detectores de fotones (cunticos)


Detectores trmicos
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Detectores de fotones
Clulas fotovoltacas: dispositivo electrnico que permite transformar la energa luminosa
(fotones) en energa elctrica (electrones) mediante el efecto fotovoltaico.

Fototubos de vaco: Se basan en el efecto fotoelctrico.

La corriente es proporcional a la
intensidad de la radiacin.

Haz de
fotones

i=kI
Presenta corrientes oscuras
debido a efectos trmicos.
50

Detectores de fotones
Tubos fotomultiplicadores: versin sofisticada de un fototubo, pero mucho ms sensible.

Adems del ctodo fotoemisor el tubo contiene una serie de electrodos recubiertos llamados
dnodos cada uno sometido a un potencial (50-100 volts) ms positivo que el precedente. El
ctodo est recubierto con una superficie fotoemisora como la utilizada en los fototubos. Los
dnodos estn recubiertos con compuestos como BeO, CsSb que desprenden varios electrones
cuando son bombardeados con electrones de alta energa. Cada dnodo est configurado para
enfocar los electrones emitidos hacia el dnodo siguiente.
Los tubos fotomultiplicadores contienen 9 o 10 dnodos, los cuales originan hasta 100000
electrones por cada fotoelectrn generado en el ctodo. Esta alta amplificacin interna significa
que pueden ser detectadas potencias radiantes muy bajas sin necesidad de una amplia
amplificacin externa.

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Detectores de diodo de silico:


Un fotodiodo es un semiconductor construido con una unin pn, sensible a la incidencia de la
luz visible o infrarroja. Cuando una luz de suficiente energa llega al diodo, excita un electrn
dndole movimiento y crea un hueco con carga positiva. Si la absorcin ocurre en la zona de
agotamiento de la unin, o a una distancia de difusin de l, estos portadores son retirados de la
unin por el campo de la zona de agotamiento, produciendo una fotocorriente. Para que su
funcionamiento sea correcto se polariza inversamente, con lo que se producir una cierta
circulacin de corriente cuando sea excitado por la luz.
Cada vez ms, los fotodiodos se utilizan como detectores en espectrofotmetros. Tienen un
rango dinmico ms ancho y son ms robustos que los fotomultiplicadores. En un fotodiodo, la
luz que incide sobre el material semiconductor permite que los electrones fluyan a su travs,
reduciendo la carga en un condensador conectado a l. La carga necesaria para recargar el
condensador, a intervalos regulares, es proporcional a la intensidad de la luz. Los primeros
fotodiodos tenan baja sensibilidad en el rango UV, pero este problema se ha corregido en los
detectores modernos. Los lmites de deteccin son, aproximadamente, 1701100 nm para
detectores de silicio.
h.

Se genera una corriente


elctrica

Detectores de fotones multicanal

Dispositivos con los cuales se puede medir simultneamente todas las longitudes de onda
en determinado rango, el espectro completo se puede medir en menos de un segundo

Algunos espectrofotmetros modernos contienen una matriz de fotodiodos. Esta consiste en


una serie de fotodiodos colocados a los lados de un cristal de silicio. Cada diodo tiene un
condensador dedicado y est conectado, por un interruptor, a una lnea comn de salida. Los
interruptores se controlan por un registro de cambio. Inicialmente, los condensadores estn
cargados. Cuando los fotones penetran el silicio, se generan portadores de carga elctrica libres
que descargan los condensadores. Estos se recargan a intervalos regulares, que representan el
periodo de medida para cada ciclo de barrido. La cantidad de carga necesaria para recargar los
condensadores es proporcional al nmero de fotones detectados por cada diodo, lo que al final
es proporcional a la intensidad de luz. El espectro de intensidad se obtiene midiendo la variacin
de intensidad de luz sobre el rango completo de longitud de onda. La matriz, tpicamente,
comprende entre 200 y 1000 elementos, dependiendo del instrumento y de la aplicacin. Por
ejemplo, la matriz de diodos del espectrofotmetro Agilent 8453 consta de 1024 elementos y el
rea fotosensible mide, aproximadamente 25 0.5 mm. El ciclo de lectura, que corresponde al
tiempo de iluminacin, es 100 ms.

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La Figura 24 muestra un diagrama esquemtico de un espectrofotmetro de diodos. La luz


policromtica de una fuente atraviesa el rea de muestra y es enfocada en la rendija de entrada
del policromador. Este dispersa la luz sobre una matriz de diodos, en la que cada diodo mide
una banda estrecha del espectro. La anchura de banda de la luz detectada por un diodo est
relacionada con el tamao de la rendija de entrada del policromador y con el tamao del diodo.
Cada diodo, en efecto, realiza la misma funcin que la rendija de salida de un monocromador.
El policromador (rendija de entrada ms dispositivo de dispersin) y la matriz de diodos estn
contenidos en una unidad conocida como espectrgrafo. Como las posiciones relativas de la
muestra y el elemento dispersivo estn invertidas respecto a un instrumento convencional, esta
configuracin, a menudo, se denomina ptica inversa. Para minimizar posibles reacciones
fotoqumicas, se utiliza un obturador para bloquear la luz de la fuente hasta que
pueda realizarse una medida. Cuando la medida se inicia, el obturador se abre automticamente
y la luz pasa a travs de la muestra hasta la matriz de diodos. Se mide la diferencia entre las
intensidades de luz que alcanzan el detector con y sin muestra, segn se describe en El
espectrofotmetro convencional en la pgina 38. Un espectrofotmetro de diodos es,
inherentemente, muy rpido debido a su capacidad de adquisicin paralela de datos y de
barrido

Detectores de fotodiodos en serie: