UNIVERSIDADE

TUIUTI DO PARAN
ROTEIRO DAS AULAS TERICAS DE BIOQUMICA

1. ON HIDROGNIO

O on hidrognio (H+) o on mais importante nos sistemas biolgicos
A [H+] nas clulas e lquidos biolgicos influencia a velocidade das
reaes qumicas, a forma e funo das enzimas assim como de outras
protenas celulares e a integridade das clulas
A [H+] nas clulas e lquidos biolgicos deve estar em torno de 0,4nM
(0,4x10-7)
80mM de ons hidrognio so ingeridos ou produzidos pelo
metabolismo por dia

2. CIDOS

Conceito de Arrhenius:

cido toda substncia que em soluo aquosa libera como ction o
on hidrognio (H+).

Ex.: HCl + H2O H3O+ + Cl-

Conceito de Brnsted e Lowry:

cido um doador de prtons, uma substncia que pode transferir
um prton para outra.

3. BASES

Conceito de Arrhenius:

Base toda substncia que em soluo aquosa se dissocia liberando
nion hidroxila (OH-)

Ex.: NaOH + H2O Na+ + OH-

Conceito de Brnsted e Lowry:

Base um receptor de prtons.

Um cido pode transferir um prton para uma base

Ex.: NH3 + H2O NH4+ + OH-




Profa Daniela Maluf 1

4. CIDOS E BASES

CH3-COOH + H2O CH3-COO - + H3O+
( CIDO) (BASE)

O on acetato a base conjugada do cido actico
O cido actico o cido conjugado do on acetato
O on hidrnio o cido conjugado da gua
A gua a base conjugada do on hidrnio
cidos aumentam a [H+] de uma soluo aquosa e bases a
diminuem

H2O + H2O OH - + H3O+


A gua funciona tanto como cido quanto como base
Na gua pura a [H+] igual a [OH-] que igual a 10-7

5. POTENCIAL HIDROGENINICO (pH)

A [H+] de uma soluo quantificada em unidades de pH
O pH definido como o logartmo negativo da [H+]
pH = -log [H+]
A escala de pH varia de 1 at 14, uma vez que qualquer [H+] est
compreendida na faixa de 100 a 10-14.

Escala de pH:

Hipoclorito de Sdio

NaOCl Na+ + OCl-

Profa Daniela Maluf 2

Similar quele do Ca(OH)2 alto pH (ons hidroxila)

Interfere na integridade da membrana citoplasmtica com inibio
enzimtica irreversvel
Alteraes biosintticas no metabolismo celular e destruio
fosfolipdica
A reao de cloraminao interfere no metabolismo celular
A reao de oxidao promove inibio enzimtica irreversvel


6. pH x HOMEOSTASIA


Homeostasia a constncia do meio interno equilbrio entre a
entrada ou produo de ons hidrognio e a livre remoo desses ons do
organismo.


O organismo dispe de mecanismos para manter a [H+] e,
conseqentemente o pH sangineo, dentro da normalidade, ou seja manter
a homeostasia.

a) Alteraes no pH

b) Fontes de H+ decorrentes dos processos metablicos

Profa Daniela Maluf 3

c) pH dos Lquidos Corporais

7. MEDIDAS DE pH

Indicadores de pH

8. ASPECTOS ADICIONAIS DOS EQUILBRIOS AQUOSOS

gua: excepcional habilidade em dissolver grande variedade de
substncias
Solues aquosas encontradas na natureza: fluidos biolgicos e a gua do
mar Contm muitos solutos
Muitos equilbrios acontecem simultaneamente nessas solues

a) O EFEITO DO ON COMUM
Concentraes no equilbrio de ons em soluo contendo um cido
fraco ou uma base fraca

Profa Daniela Maluf 4

 Solues que contm no apenas um cido fraco, como o cido

actico (CH3COOH), mas tambm um sal solvel desse cido, como o
CH3COONa
O que acontece quando CH3COONa adicionado soluo de
CH3COOH?
CH3COONa um eletrlito forte
Dissocia-se completamente em soluo aquosa para formar ons Na+ e
CH3COO-

CH3COONa(aq)

CH3COO-(aq) + Na+(aq)

Em comparao, CH3COOH um eletrlito fraco

CH3COOH(aq)

CH3COO-(aq) +

H+(aq)

A adio de CH3COO- a partir de CH3COONa faz com que o equilbrio

desloque-se para a esquerda, diminuindo, portanto, a concentrao no
equilbrio de H+(aq)

CH3COO- uma base fraca O pH da soluo aumenta [H+] diminui

EFEITO DO ON COMUM


A extenso da ionizao de um eletrlito fraco diminuda pela
adio soluo de um eletrlito forte no qual h um on comum com o
eletrlito fraco
A ionizao de uma base fraca tambm diminui com a adio de um on
comum. Por exemplo, a adio de NH4+ (como a partir do eletrlito forte
NH4Cl) faz com que o equilbrio de dissociao de NH3 desloque para a
esquerda, diminuindo a concentrao de OH- no equilbrio e abaixando
o pH

Profa Daniela Maluf 5

OS SISTEMAS TAMPES


Tampo qualquer substncia que pode, reversivelmente, se ligar
aos ons hidrognio.



Solues formadas por um cido fraco e sua base conjugada ou por
um hidrxido fraco e seu cido conjugado

Tampo + H+ H+Tampo

Tampo H+ + OH- H2O + Tampo

Um tampo resiste s variaes no pH porque ele contm tanto
espcies cidas para neutralizar os ons OH- quanto espcies bsicas
para neutralizar os ons H+
As espcies cidas e bsicas que constituem o tampo no devem
consumir umas s outras pela reao de neutralizao
Exigncia preenchida por um par CIDO-BASE CONJUGADO

CH3COOH / CH3COO-
NH4+ / NH3

Preparao
Mistura de um cido fraco ou uma base fraca com um sal do cido ou
da base

ons OH- so adicionados soluo-tampo:

OH- (aq) + HX (aq)

X- (aq)

Quantidades de HX e X- no tampo so grandes comparadas com a
quantidade de OH- adicionada, por isso a razo [HX] / [X-] no varia
muito, tornando a variao no pH pequena

H2O (l)

ons H+ so adicionados soluo-tampo

H+ (aq) + X- (aq)

HX (aq)

Quantidades de HX e X- no tampo so grandes comparadas com a

quantidade de H+ adicionada, por isso a razo [HX] / [X-] no varia
muito, tornando a variao no pH pequena.
Os tampes resistem mais eficazmente variao de pH em
qualquer sentido quando as concentraes de cido fraco e base
conjugada so aproximadamente as mesmas
A partir da equao:

[H+] = Ka

[HX]
[X-]

Quando as concentraes de cido fraco e base conjugada so iguais,

[H+] = Ka
Profa Daniela Maluf 6


Geralmente tentamos selecionar um tampo cuja forma cida tem
pKa prximo do pH desejado


Mecanismos de Ao dos Tampes

Exemplos de Tampes

A saliva comporta-se como um sistema tampo que protege a
cavidade oral de duas maneiras:
1) Muitas bactrias necessitam de um pH especfico para seu
crescimento mximo; a capacidade tampo da saliva evita a
colonizao da boca por microrganismos potencialmente
patognicas, por negar-lhes a otimizao das condies ambientais
2) Os microrganismos da placa podem produzir cido a partir de
acares, os quais, no sendo rapidamente tamponado e limpos pela
saliva, podem desmineralizar o esmalte

CAPACIDADE DE TAMPO E pH

Caractersticas de um tampo:
a) CAPACIDADE
b) pH

a quantidade de cido ou base que um tampo pode neutralizar
antes que o pH comece a variar a um grau aprecivel
Depende da quantidade de cido e base da qual o tampo feito


A capacidade-tampo da saliva (CTS) a propriedade de a saliva
manter o seu pH constante a 6,9-7,0, graas aos seus tampes,
mucinato/mucina, HCO-3/H2CO3 e HPO--4/H2PO-4, que bloqueiam o excesso de
cidos e de bases conforme os mecanismos:

Excesso de cidos (H+): HCO-3 H2CO3 H2O + CO2
Excesso de bases (HO-): HO- + H2CO3 HCO-3 + H2O

Profa Daniela Maluf 7


Os tampes mucinato/mucina e monofosfato/bifosfato agem da
mesma forma

O elevado poder tamponante da saliva mantem a higidez da mucosa
bucal e dos dentes


A determinao da CTS se faz por titulometria, medindo-se o volume
de cido lctico 0,1N necessrio para baixar o pH salivar de 6,9 a 3,7 (ponto
de viragem do alaranjado de metila).

Na prtica, colocam-se 10ml de saliva num erlenmeyer, juntamente
com o alaranjado de metila, e verte-se, na saliva, gota a gotra, o cido
lctico 0,1 normal colocado numa bureta, at ser atingida a cor rsea
Fecha-se ento a bureta e l-se o volume de cido lctico 0,1N gasto.

Para exprimir a CTS usa-se multiplicar por 10 o volume de cido
lctico gasto. E assim, podemos classificar os pacientes em trs grupos:

Pacientes medianamente susceptveis crie dental: CTS= 40.
Pacientes resistentes crie dental: CTS= >40.
Pacientes muito susceptveis crie dental: CTS= <40.

Dentro de certos limites, a CTS funciona como um ndice relativo de
atividade de crie dental.

a) pH
Depende de Ka para o cido e das respectivas concentraes
relativas de cido e base que o tampo contm
Quanto maior as quantidades do par cido-base conjugado, mais
resistentes s mudanas se tornam a razo de suas concentraes e o
pH


Poder Tamponante: Poder tamponante de um sistema tampo pode ser
definido pela quantidade de cido forte que necessrio adicionar para
fazer variar o pH de uma unidade

SISTEMAS PRIMRIOS REGULADORES DO PH

Profa Daniela Maluf 8


Os principais sistemas tampes presentes no organismo, que
permitem a manuteno da homeostasia, so:
sistema bicarbonato
sistema fosfato
protenas
sistema da amnia

SANGUE COMO UMA SOLUO-TAMPO

Sistema tampo usado para controlar o pH no sangue.
SISTEMA TAMPO
CIDO CARBNICO-BICARBONATO
H2CO3 / HCO3- : so um par cido base conjugado
Equilbrios importantes no sistema tampo cido carbnico-
bicarbonato:

H+(aq) + HCO3-(aq)

H2CO3(aq)

H2O(l) + CO2(g)

CO2: um gs que fornece um mecanismo para o corpo se ajustar aos
equilbrios

A remoo de CO2 por exalao desloca o equilbrio para a direita,
consumindo ons H+.
Para que o tampo tenha pH de 7,4, a razo [base] / [cido] deve ser
igual a um valor de 20
O tampo tem alta capacidade para neutralizar cido adicional, mas
apenas uma baixa capacidade para neutralizar base adicional
Os principais rgos que regulam o pH do sistema tampo cido
carbnico-bicarbonato so pulmes e rins. Alguns dos receptores no
crebro so sensveis s concentraes de H+ e CO2 nos fludos
corpreos
Quando a concentrao de CO2 aumenta, os equilbrios deslocam-se
para a esquerda, o que leva formao de mais H+
Os receptores disparam um reflexo para respirar mais rpido e mais
profundamente, aumentando a velocidade de eliminao de CO2 dos
pulmes e deslocando o equilbrio de volta para a direita
Os rins absorvem ou liberam H+ e HCO3-; muito do excesso de cido
deixa o corpo na urina, que normalmente tem pH de 5,0 a 7,0

1. IMPORTNCIA DOS AMINOCIDOS

So os blocos (monmeros) que constituem as protenas

Protenas:
- Componente celular mais abundante
- Desempenham funes estruturais e dinmicas
Profa Daniela Maluf 9

FUNES DAS PROTENAS

1) Estruturais:

Componentes do esqueleto celular (actina, tubulina,etc) e de
sustentao (colgeno, elastina, etc)

2) Dinmicas:

Enzimas (no metabolismo), Transporte de molculas (hemoglobina),
Mecanismos de defesa (imunoglobulinas), controle do metabolismo
(alguns hormnios), processos contrteis (miosina), controle da expresso
gnica (elementos da transcrio), etc.

At pouco tempo conheciam-se 20 aminocidos.

Atualmente mais dois aminocidos foram adicionados lista:
Selenocistena e Selenometionina.

Apesar do nmero baixo de aa, existem milhares de protenas
diferentes.

Considerando-se uma protena de 20 aminocidos, um de cada tipo,
podem ser obtidas 2,4 x 108 protenas diferentes!!

2. ESTRUTURA GERAL DE UM AMINOCIDO

Ismeros pticos

D- Aminocidos

Encontrados em antibiticos produzidos por bactrias.
Ex. Valinomicina
Gramicidina

Profa Daniela Maluf 10

O estado de ionizao dos grupos Carboxila e Amino varia com o pH

Cadeias laterais (Grupo R)


As propriedades das cadeias laterais so importantes para a
conformao das protenas e, portanto, para sua funo


CLASSIFICAO DOS AA EM FUNO DA POLARIDADE DO GRUPO R:

a) Aminocidos apolares (R hidrofbico)

R = cadeias orgnicas com carter de hidrocarboneto
As cadeias no interagem com a gua
Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Met, Pro, Phe, Try

b) Aminocidos polares (R hidroflico)

R = cadeias laterais hidroflicas que interagem com a gua
R pode ter carga eltrica ou carga residual
Trs categorias:
AA bsicos = carga + a pH 7
AA cidos = carga a pH 7
AA polares sem carga lquida a pH 7

Resumo da classificao dos aminocidos com base na polaridade do grupo
R
AA apolares
AA polares:

bsicos

cidos

sem carga


3. IONIZAO DOS AMINOCIDOS

pH cido pH Neutro pH Bsico

Profa Daniela Maluf 11

pKa DOS AMINOCIDOS

Curva de titulao de um aminocido

-Incio: AA em pH cido
-Adio de Base
-pH aumenta e a ionizao do grupo carboxila se altera
-pI: ponto isoeltrico carga lqida = zero
-inicia a dissociao do grupo amino
pI = pK1 + pK2/2= 5,97

AMINOCIDOS ESSENCIAIS


O homem sintetiza 10 dos 22 AA.

Os 11 AA que ele no sintetiza so denominados AA essenciais Estes
devem ser suplementados na dieta.

Se 1 ou mais dos AA essenciais no for administrado, o homem
degrada suas protenas corporais para obter os AA que necessita.

Os 11 AA essenciais so Arg, His, Ile, Leu, Lys, Met, Phe, Thr, Try, Val,
Se-Met

Plantas e bactrias so capazes de sintetizar todos os AA


Os aminocidos ligam-se formando cadeias polipeptdicas

Os aa podem formar polmeros atravs da ligao entre o grupo
COOH de um aa e o grupo NH2 de outro aa.
Profa Daniela Maluf 12

Essa ligao denomina-se ligao peptdica (excluso de gua)

PEPTDEOS

No de aa = 2 dipeptdeo

No de aa = 3 tripeptdeo

No de aa at 30 oligopeptdeo

No de aa > 30 polipeptdeos
Ex.: Hormnios- vasopressina, oxitocina

Aminocidos Peptdeos Protenas

Protena vem do grego protos = primeiro

So macromolculas resultantes da condensao de molculas
aminocidos atravs da ligao peptdica.

As protenas so polipeptdios que resultam na condensao de
milhares de aminocidos.
So muitas as fontes, e o nmero de protenas existentes na
Natureza praticamente infinito, embora o nmero de aminocidos
que as constituem seja bastante reduzido, em torno de 25.
Isto ocorre porque o nmero de associaes dos aminocidos (aa)
se d conforme conforme exemplo:
3 aa diferentes: A, B e C, Conduzem a 6 tripeptdeos: ABC, ACB, BAC,
BCA, CAB e CBA.
(3! = 3 x 2 x 1 = 6)
4 aa diferentes: A, B, C e D, Conduzem a 24 tetrapeptdeos
Profa Daniela Maluf 13

(4! = 4 x 3 x 2 x 1 = 24)
10 aa diferentes conduzem a mais de trs milhes (3.628.800) de
decapeptdeos, sem a incluso dos possveis ismeros pticos.
(10! = 10 x 9 x 8 x 7 x 6 x ...)

Insulina Pncreas
Hemoglobina Sangue dos vertebrados
Casena Leite
Queratina Chifres, unhas e cascos de animais
Hemocianina Sangue dos invertebrados
Pepsina Suco gstrico
Albumina Ovo, leite e sangue
Clorofila Vegetais verdes

Juntamente com os glicdeos e os lipdeos, as protenas constituem a
alimentao bsica dos animais.
No entanto, podemos dizer que as protenas so ainda mais
importantes, pois so fundamentais na estrutura, funcionamento e
reproduo de todas as clulas vivas.
As protenas so substncias slidas, incolores, insolveis em
solventes orgnicos, e algumas solveis em gua.

ESTRUTURA PRIMARIA AT QUATERNRIA

a) Estrutura Primria ou Nvel Primrio


a seqncia em nmero de aminocidos (cadeia peptdica).
Direo: amina terminal carboxila terminal
ALA SER LYS LYS SER ALA

Uma variao na seqncia conduz a uma protena diferente e com
ao bioqumica diferente.

Ex: a ocitocina e a vasopressina diferem entre si na seqncia de
apenas dois aa; a ocitocina provoca as contraes uterinas e a vasopressina
provoca aumento da presso sangnea.

Profa Daniela Maluf 14

b) Estrutura secundria ou nvel secundrio (helicoidal)

o enrolamento da estrutura primria em torno de um eixo
imaginrio, originando uma hlice chamada de hlice ou uma folha
pregueada.

Ex.: Mioglobina (msculo), Lisozima (lgrima- destri a PC de
bactrias.

c) Estrutura terciria ou nvel tercirio

a sua forma tridimensional ocasionada pelo enrolamento da
espiral sobre si mesma (novelo).

d) Estrutura Quaternria ou Nvel Quaternrio

a que resulta da reunio de vrias estruturas tercirias que, em
conjunto, assumem formas espaciais bem definidas.

OBS: nem todas as protenas apresentam esta estrutura, mas de uma
maneira geral, todas as enzimas as apresentam.

Algumas protenas formam agregados de 2 ou mais subunidades
Ex. Hemoglobina: 1122

Profa Daniela Maluf 15



INTERAES

Ligaes que estabilizam esta conformao:
1. Pontes de hidrognio (ligaes fracas porm numerosas: C=O e NH2)
2. Interaes hidrofbicas (As protenas se enovelam em estruturas
globulares e excluem H2O de seu interior)
3. Ligaes eletrostticas ou inicas (entre grupos de aa cidos e
bsicos)

Profa Daniela Maluf 16

ligao
inica

ligao de
hidrognio

interaes de van der Waals entre

tomos em contacto (em preto)

A) INTERAES INICAS

Formadas entre duas cadeias laterais de aminocidos carregados:
negativos (Glu, Asp);
positivos (Lys, Arg, His).
So interaes dependentes de pH (pKa)

B) LIGAES DE HIDROGNIO

H
HO

CH2
N

HN

CH2

S,T

HO CH
R
H

C,M

H
CH2

H
H

N
H

NH

NH2

E,G,N,Q

N CH2

C
R

H
H

O
N C

N,Q

C) INTERAES HIDROFBICAS

Formam-se entre cadeias laterais de resduos no-polares:

Alifticos: Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Met
Aromticos: Phe,Trp, Tyr
O interior da protena fica distante da gua

D) LIGAES DISSULFETO

So formadas entre os resduos de cistenas:

CysSH + HS Cys CysSSCys
So catalisadas por enzimas especificas, e agente oxidantes;
Restringem a flexibilidade da
protena.

Profa Daniela Maluf 17

A QUIMIOTRIPSINA:

A estrutura 3-D de uma protena determinada por sua seqncia
de aminocidos.
A funo de uma protena depende de sua estrutura.
Cada protena tem uma estrutura nica.
Catalisa hidrlise de ligaes peptdicas.

DESNATURAO DE PROTENAS

A desnaturao de uma protena a desorganizao das estruturas
quaternrias, tercirias e secundrias
Agentes desnaturantes so os que provocam a desorganizao
So eles:
- agentes fsicos (calor, radiaes UV, alta presso e ultra som)
- agentes qumicos (cidos fortes, bases fortes, metais pesados e uria)

A protena desnaturada apresenta as seguintes alteraes:
a) Fsicas: aumento da viscosidade
b) Qumicas: maior reatividade: devido a exposio de grupos qumicos
que estavam encobertos por estruturas; diminuio da solubilidade
do PHi e, conseqente precipitao
c) Biolgicas: perda de suas propriedades enzimticas, antignicas e
hormonais; facilmente digeridas por enzimas hidrolticas

CLASSIFICAO:

A) Simples Constituida somente por aa

B) Conjugadas Contm grupos prostticos, (grupos no aa, tais como
carbohidratos, ons, pigmentos).
Grupo Heme: tomo de Fe e porfirina

A) Fibrosas:

Forma alongada
Insolveis
Funo estrutural: queratinas, colgeno
B) Globulares:
Formadas por cadeias polipeptdicas que se dobram adquirindo a
forma esfrica ou globular
Funes: enzimtica, transporte, defesa e hormonal
Profa Daniela Maluf 18


Os sistemas vivos so formados por uma enorme variedade de
reaes bioqumicas, e quase todas elas so mediadas por uma srie de
extraordinrios catalisadores biolgicos ENZIMAS

A manuteno da vida celular depende da contnua ocorrncia de
reaes qumicas

Esta reao deve:
1- Ser especfica para gerar produtos definidos
2- Ter velocidade adequada catalisadores: substncias que aumentam a
velocidade das reaes.


A atividade cataltica de enzimas tem sido utilizada pelo homem h
milhares de anos
Fermentao do suco de uva para obteno do vinho;
Fabricao de queijo;
Fabricao de po.


No entanto, estas eram apenas aplicaes prticas, uma vez que o
conhecimento do modo de ao dos catalisadores biolgicos s
recentemente foi elucidado.

HISTRICO

1833 - A primeira hidrlise enzimtica do amido

Os franceses Payen e Persoz isolaram um complexo enzimtico do
malte que catalisava a transformao do amido em glicose, denominando-o
"diastase" (do grego "separar").

O sufixo ase de diastase passou a ser usado

1835 - o qumico sueco Berzelius descreveu a hidrlise enzimtica
do amido.

Demonstrou que o amido pode ser mais eficientemente decomposto
usando-se extrato de malte preferencialmente ao c. sulfrico e cunhou o
termo catlise.
1836 - Schwann descobre a enzima digestiva Pepsina

Pasteur, defendia que a fermentao alcolica s ocorria em
presena de clulas vivas de levedura.

Lienberg defendia que os processos fermentativos eram reaes
qumicas.

1897 - A polmica foi resolvida. Os irmos Buchner demonstraram
que um extrato de levedura livre de clulas era capaz de fermentar o
acar.

O extrato continha catalisadores da fermentao alcolica.
- 1926 - Cientistas descobrem que as enzimas so protenas
- James Summers isolou e cristalizou a primeira enzima, a urease.
- A partir 1960 - A evoluo no estudo das enzimas, acompanhado por
avanos tecnolgicos, possibilitou o isolamento e a identificao de
propriedades das enzimas.
Profa Daniela Maluf 19

Caracterizao e o estudo cintico de milhares de enzimas de

diferentes fontes: animais, vegetais e de microrganismos.
- 1986 - A primeira enzima a partir de organismo geneticamente
modificado (OGM)
-
NOMENCLATURA E CLASSIFICAO DAS ENZIMAS

Sculo XIX - poucas enzimas identificadas
Adio do sufixo ASE ao nome do substrato:
gorduras (lipo - grego) LIPASE
amido (amylon - grego) AMILASE
Nomes arbitrrios:
Tripsina e pepsina proteases

Sculo XX - quantidade de enzimas descritas
Nomenclatura existente se tornou ineficaz
1955 - IUB - Unio Internacional de Bioqumica adotou um novo sistema de
nomenclatura e classificao
mais complexo
sem ambigidades
baseado no mecanismo de reao

Cada enzima cdigo com 4 dgitos que caracteriza o tipo de reao
catalisada:
(E.C.- Enzime Comission)
1 dgito classe
2 dgito subclasse
3 dgito - sub-subclasse
4 dgito - indica o substrato
Ex.: lcool desidrogenase = E.C 1.1.1.1

1. Oxido-redutases (Reaes de oxidao/Reduo)
1.1.atuando em CH-OH
1.2.atuando em C=O
1.3.atuando em C=O-
1.4.atuando em CH-NH2
1.5.atuando em CH-NH-
1.6.atuando em NADH, NADPH

2.Transferases (Transferncia de grupos)
2.1.grupos com um carbono
2.2.grupos aldedo ou cetona
2.3.grupos acil
2.4.grupos glicosil
2.7.grupos fosfatos
2.8.grupos contendo enxofre



-

Profa Daniela Maluf 20

3. Hidrolases (Reaes de Hidrlise)

3.1.steres
3.2.ligaes glicosdicas
3.4.ligaes peptdicas
3.5.outras ligaes C-N
3.6.anidridos cidos

4. Liases (Adio ou remoo de grupos)
4.1. =C=C=
4.2. =C=O
4.3. =C=N-

5. Isomerases (Transferncia de grupos dentro da mesma molcula,
formao de ismeros)
5.1.racemases

5.2. Cis-Trans isomerases
5.3. Oxirredutases Intramoleculares
5.4. Transferases Intramoleculares (Mutases)

5.5. Liases Intramoleculares

6. Ligases (catalisam a ligao de duas molculas com hidrlise da
ligao pirofosfato na molcula de ATP (ou uma semelhante, igualmente
trifosfatada)
6.1. C-O
6.2. C-S
6.3. C-N
6.4. C-C

1 Oxirredutases Reaes de oxidao/Reduo
Exemplo: Lactato desidrogenase

2. Transferases - Transferncia de grupos
Exemplo Hexoquinase

Profa Daniela Maluf 21

3. Hidrolases - Reaes de Hidrlise

Exemplo: Lactase

4. Liases Adio ou remoo de grupos (H2O, NH4+, CO2)
Ex: Fumarase

5. Isomerases Transferncia de grupos dentro da mesma molcula,
formao de ismeros
Exemplo: Triose Fosfato Isomerase

6. Ligases catalisam a ligao de duas molculas com hidrlise da ligao
pirofosfato na molcula de ATP (ou uma semelhante, igualmente
trifosfatada)
Exemplo: Piruvato carboxilase

Profa Daniela Maluf 22

OUTRAS CLASSIFICAES

PROPRIEDADES GERAIS

Diferenas entre enzimas e catalisadores qumicos
Velocidade de reao mais rpida:
106 a 1012x > que as no catalisadas,
So varias ordens de magnitude > do que as reaes catalisadas
quimicamente.

Diferenas entre enzimas e catalisadores qumicos
Maior especificidade da reao

Grau de especificidade imensamente > em relao a identidade dos
seus S e dos seus P

Reaes enzimticas raramente produzem subprodutos.

Estereoespecificidade: Agem em grupos funcionais especficos
catalisando reaes de forma estereoepecfica, formando somente um dos
enantimeros possveis

Condies reacionais mais brandas
pH
Temperatura

INTERAO ENZIMA-SUBSTRATO


Enzimas so macromolculas muito maiores que seu substrato

A ligao com o substrato d-se apenas em uma regio pequena e
bem definida- o stio ativo

Esta regio formada por resduos de aa prximos uns aos outros
pelos dobramentos das cadeias polipeptdicas que definem a estrutura
terciria das protenas
Profa Daniela Maluf 23

O stio ativo da enzima constitui uma cavidade de forma bem definida que
permite reconhecer o substrato
Uma molcula para ser aceita como substrato tem que:
ter uma forma espacial complementar ao stio ativo da enzima
ter grupos qumicos capazes de realizar ligaes/interaes com os
radicais do stio ativo da enzima



Alta especificidade das enzimas:

Enzimas proteolticas so especficas para hidrlise de protenas,
no atuando em carboidratos, lipdeos...

Pepsina hidrolisa ligaes peptdicas

Tripsina hidrolisa apenas ligaes peptdicas formadas por arginina
ou lisina

L- aminoxidases reconhecem apenas L-ismeros

MECANISMO DE AO

A reao enzimtica ocorre em duas etapas:
E + S E S P + E

Modelo Chave-fechadura
Emil Fischer em 1894
Relao estrica entre enzima e substrato

Modelo do ajuste induzido

Koshland em 1958
Prev um stio de ligao no totalmente pr-formado,
E e o S sofrem conformao para o encaixe.

Profa Daniela Maluf 24


Os stios de ligao aos substratos da maioria das enzimas so, em
grande parte, pr-formados, mas sofrem mudanas conformacionais no
momento da ligao do substrato (um fenmeno denominado ajuste
induzido).

Teoria da Coliso:


As reaes qumicas acontecem quando ligaes so quebradas ou
formadas

Para isto tomos, ons e molculas devem colidir

Todos os tomos, ons e molculas esto em constante movimento e
portanto colidindo constantemente

A energia transferida pelas partculas na coliso pode desorganizar
suas estruturas eletrnicas o suficiente para que as ligaes qumicas
sejam quebradas ou novas ligaes se formem.

Energia de ativao: Quantidade de energia requerida para romper a
configurao eletrnica estvel de qualquer molcula especfica
para que os eltrons possam ser reorganizados.

G: A diferena de energia entre produtos e reagentes
No depende da E.A.

Taxa de reao: A freqncia de colises contendo energia suficiente para
que a reao acontea
A taxa de reao depende:

1- Da temperatura:
AUMENTO de T AUMENTA a freqncia das colises e o n de
molculas que vo reagir;

2- Da concentrao
Reagentes esto + concentrados = Distncia entre as molculas menor,
maior probabilidade de coliso

3- Da energia de ativao: Enzimas so catalisadores capazes de
diminuir a Energia de ativao



Profa Daniela Maluf 25

REAES CATALISADAS POR ENZIMAS

Catalisador atua diminuindo a Energia de Ativao

Enzimas so catalisadores que:

Atuam em quantidades mnimas

Participam efetivamente das reaes sofrendo alteraes em sua
estrutura tridimensional e retornando ao final da reao ao seu estado
original

Os substratos tem sua molcula tensionada e distorcida
aproximando-se da conformao do estado de transio.

Desta forma, a reao no depende dos choques entre as molculas

Enzimas atuam de diversas formas:


Baixando a E.A., atravs da criao de um ambiente no qual o estado
de transio estabilizado (ex., distorcendo a forma da molcula do S).

Providenciando uma via alternativa (ex., reagindo com o S formando
um complexo ES, de existncia impossvel sem a presena da E).

Reduzindo a variao da entropia da reao ao orientar os S de
forma correta para facilitar a reao. Na ausncia de E, as molculas
colidem em todas as direes possveis de forma aleatria.

Ex: Decomposio do H2O2

1 molcula de Catalase decompe 5 000 000 de molculas de H2O2
pH = 6,8 em 1 min!!!

Nmero de renovao = n de molculas de substrato convertidas em
produto por uma nica molcula de enzima em uma dada unidade de
tempo.



Profa Daniela Maluf 26

FATORES QUE INFLUENCIAM A AO ENZIMTICA

pH
Temperatura
Concentrao da Enzima
Concentrao do Substrato

1- pH
A ionizao de aa pode provocar modificaes na
conformao da enzima.
O substrato pode ver-se afetado.

2- Temperatura

temperatura dois efeitos ocorrem:
A taxa de reao aumenta, como se observa na maioria das
reaes qumicas;
A estabilidade da protena decresce devido a desnaturao.
Enzima temperatura tima para que atinja sua atividade mxima

4- Concentrao da Enzima

A velocidade mxima da reao uma funo da quantidade de
enzima disponvel (existindo substrato em excesso)

Profa Daniela Maluf 27

5- Concentrao do Substrato

INIBIO ENZIMTICA


Substncias que reduzem a atividade de uma enzima de forma a
influenciar a ligao do substrato.
Grande parte do arsenal farmacutico:
Ex. tratamento da AIDS feito com drogas que inibem a atividade de certas
enzimas virais, sulfonamidas na enzima bacteriana

Constituintes normais das clulas ou substncias estranhas

Classificao:

a) Inibio Irreversvel

O inibidor liga-se to fortemente enzima que a dissociao muito

lenta
Podem destruir grupos funcionais que so essenciais para a
atividade enzimtica
A enzima no retoma a sua atividade normal
Ex.: Inseticidas organofosforados na acetilcolinesterase (enzima
importante na transmisso dos impulsos nervosos)

Ex: Inibio da enzima ciclo-oxigenase pelo AAS

COX Processo inflamatrios, ex. sensao de dor

Profa Daniela Maluf 28

b) Inibio Reversvel Competitiva

Uma substncia que compete diretamente com o substrato pelo stio

de ligao de uma enzima.
Inibidor normalmente semelhante ao substrato.
O inibidor liga-se enzima formando o complexo EI cataliticamente
inativo.

O complexo EI jamais gera produto
Ex. AZT que inibe a DNA polimerase do vrus HIV, afetando um conjunto
de reaes sequenciais, tornando o vrus incapaz de se replicar.
c) Inibio Reversvel No-Competitiva

O inibidor no-competitivo pode ser uma molcula que no se
assemelha com o substrato, mas apresenta uma grande afinidade com a
enzima
O ponto de ligao a cadeia lateral de um aminocido, p.e., o grupo
OH da serina ou o grupo SH da cistena
Esta ligao pode distorcer a enzima tornando o processo cataltico
ineficiente
Ao inespecfica: inibio de vrias enzimas
Exemplos:
Metais pesados: Hg, Pb e Ag
Ingesto causa intoxicao

CO-FATORES

Quase 1/3 das enzimas requerem um componente no proteico para
sua atividade, denominado cofator

Profa Daniela Maluf 29



A natureza essencial de tais co-fatores explica por que razo os
organismos necessitam de quantidades diminutas de certos elementos
nas suas dietas.
Isso tambm explica, os efeitos txicos de certos metais pesados (o
Cd2+ e o Hg2+) que podem substituir o Zn2+ nos stios ativos de certas
enzimas
Algumas enzimas que contm ou necessitam de elementos
inorgnicos como cofatores

Co-fatores Coenzimas


Maioria deriva de vitaminas hidrossolveis

Muitos organismos no conseguem sintetizar certas pores das
coenzimas essenciais.

Tais substncias devem estar presentes na dieta desses organismos
e so, portanto, chamadas de vitaminas.

Classificam-se em:
a) transportadoras de hidrognio

Coenzima

Abreviatura Reao
Origem
catalisada
Nicotinamida adenina NAD+
Oxi-reduo Niacina ou
dinucleotdio
Nicotinamida adenina NADP+
dinucleotdio fosfato
Flavina adenina
FAD
dinucleotdio

Vitamina B3

Oxi-reduo Niacina ou

Vitamina B3

Oxi-reduo Riboflavina ou
Vitamina B2

Profa Daniela Maluf 30

b) transportadoras de grupos qumicos

Coenzima
Coenzima A

Abrev.
Reao catalisada Origem
Pantotenato ou
CoA-SH Transferncia de

Biotina
Piridoxal fosfato

PyF

Metilcobalamina
Tetrahidrofolato

THF

Tiamina
pirofosfato

TPP

grupo acil
Transferncia de
CO2
Transferncia de
grupo amino
Transferncia de
unidades de carbono
Transferncia de
unidades de carbono
Transferncia de
grupo aldedo

Vitamina B5
Biotina ou
Vitamina H
Piridoxina ou
Vitamina B6
Cobalamina ou
Vitamina B12
cido flico
Tiamina ou
Vitamina B1

REGULAO DA ATIVIDADE ENZIMTICA


Um organismo deve poder regular as atividades catalticas de suas
enzimas para que ele possa coordernar seus processos metablicos,
responder s mudanas no meio, crescer e diferenciar-se, tudo de maneira
ordenada.

H duas maneiras pelas quais isso pode ocorrer:

1) Controle da disponibilidade da enzima


A quantidade de uma enzima em uma clula depende:
a) velocidade de sntese
b) velocidade de degradao

Cada uma dessas velocidades diretamente controlada pela clula e
est sujeita a mudanas drsticas em perodos que vo de minutos (em
bactrias) at horas (em organismos superiores)

2) Controle da atividade da enzima


A atividade pode ser regulada por meio de alteraes estruturais
que influenciem a afinidade da ligao do substrato enzima.

A afinidade de ligao do S a uma E pode variar tambm com a
ligao de pequenas molculas, chamadas efetores alostricos que podem
tanto aumentar como dimunuir a atividade

Um modelo muito comum de regulao alostrica a inibio por
"feed-back

Algumas enzimas podem ter suas atividades reguladas, atuando
assim como moduladoras do metabolismo celular. Esta modulao
essencial na coordenao dos inmeros processos metablicos pela
clula




Profa Daniela Maluf 31

MECANISMOS DE CONTROLE:

1) Induo: A presena do substrato A induz a sntese da enzima a

2) Retroinibio: O produto final E, inibe a ao das enzimas

3) Represso catablica: Caso haja um caminho mais conveniente, a sntese
de todas as enzimas reprimida

4) Ajuste Fino: Cada isoenzimas pode ser regulada independentemente

ALGUMAS ENZIMAS SO SINTETIZADAS NA FORMA INATIVA


Certas enzimas, cujo local de ao extracelular (plasma, trato
digestrio), so sintetizadas como precurssores inativos- zimognios

Para que este adquira as propriedades de enzimas, devem passar
por hidrlise das ligaes peptdicas

Ex. Pepsinognio Pepsina pepsinognio






Profa Daniela Maluf 32

Comparao das enzimas com catalisadores qumicos

Profa Daniela Maluf 33