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Ed i t o r i a l
H
H. influenzae possde une rsistance naturelle aux glycopeptides et aux lincosamides, commune tous les germes
Gram ngatif.
Cest une bactrie naturellement peu sensible aux macrolides et apparents, et la majorit des H. influenzae se trouvent pour ces antibiotiques dans une zone de CMI intermdiaire (CMI environ 4 g/ml). La dtermination de la CMI dans
ce cas est dailleurs relativement imprcise, puisquelle est
techniquement influence par la variation du milieu de culture
et les conditions dincubation : pour un groupe homogne dH.
influenzae, on peut obtenir des rsultats de CMI sensible, intermdiaire ou rsistant. Cest cause de ce phnomne que
le Comit de lAntibiogramme de la SFM a cr le terme de
modrment sensible . Il existe des macrolides bien actifs
avec des taux sriques bas (azithromycine) et dautres moins
actifs avec des taux sriques plus levs (roxithromycine),
mais au total, il ny a pas de macrolide rellement actif sur
H. influenzae dans les infections pulmonaires ou les otites.
Vis--vis des pnicillines, il existe des phnomnes de rsistance acquise, qui sont en majorit le fait des H. influenzae
producteurs de -lactamases, dont nous avons isol la premire
souche franaise en 1975. Ces -lactamases sont heureusement sensibles aux inhibiteurs de -lactamases, lacide clavulanique, le sulbactam et le tazobactam, qui restaurent lactivit
des pnicillines sur les souches productrices. Par ailleurs, un
petit pourcentage de souches non productrices rsistent lampicilline en raison dune modification daffinit de lantibiotique
pour les PLP, ou de problmes de pntration de lantibiotique.
Cependant, la CMI de ces souches dites BLNAR (beta-lactamase negative ampicillin resistant) demeure aux alentours de
4 g/ml pour lampicilline, alors quelle atteint 64 g/ml pour
les cphalosporines de premire gnration.
Dr Fred W. GOLDSTEIN
Laboratoire de microbiologie mdicale
Hpital Saint-Joseph, Paris
AU VERSO
Gros Plan : Les mcanismes de la rsistance (II) :
Production denzymes dtruisant lantibiotique
Pour en savoir plus
Les mots de la bactrio
Rubrique
parraine par
n3
Haemophilus influenzae :
une bactrie aux deux visages
Entretien avec le Pr Henri Dabernat
Laboratoire de Microbiologie CHU Purpan(Toulouse)
B ACTRIOLOGIE
E N P R AT I Q U E Q U O T I D I E N N E
n3
Nous avons voqu les deux premiers mcanismes de rsistance des bactries aux antibiotiques (dfaut daffinit
entre cible bactrienne et antibiotique ; dfaut de pntration de lantibiotique dans la bactrie) dans notre numro prcdent. Nous traitons ici des deux autres.
Inactivation de lantibiotique par des enzymes produites par la bactrie. Cest le mcanisme tudi ci-contre,
travers lexemple dHaemophilus influenzae, des btalactamines et des btalactamases. Dautres enzymes peuvent
inactiver dautres antibiotiques (aminosides notamment)
par un mcanisme similaire.
Pnicilline
Haemophilus
influenzae
Pnicilline
1a
La pnicilline peut
se fixer aux PLP.
1b
Lantibiotique agit et
Haemophilus influenzae
se lyse.
2a
2b
H. influenzae non
producteur de
bta-lactamases
PLP
Pnicilline
Excrtion (efflux) de lantibiotique par des systmes enzymatiques de la paroi bactrienne.
Cest un des mcanismes de rsistance
de certaines souches
dEscherichia coli,
Staphylococcus aureus et Pseudomonas aeruginosa, notamment vis--vis
des cyclines et des
fluoroquinolones.
Antibiotique
Porines
Membrane
externe
Antibiotique
rejet
Extrieur
H. influenzae
producteur de
bta-lactamases
Bta-lactamases
Peptidoglycane
PLP (protines
de liaison la
pnicilline)
Membrane
bactrienne
Espace
priplasmique
Intrieur
Canal
Pompe efflux
3a
Membrane interne
Prochain article :
Inhibiteur
des bta-lactamases
mots de la bactrio
H. influenzae
Les
La production de bta-lactamases est lun des principaux mcanisme de rsistance aux btalactamines. Laffinit
entre le cycle bta-lactame de lantibiotique et la bta-lactamase est plus grande quentre lantibiotique et sa cible, reprsente par les PLP (rappelons que les PLP, protines de
liaison la pnicilline, sont des enzymes assurant la synthse
de la paroi bactrienne). La bta-lactamase coupe le cycle
bta-lactame par hydrolyse, inactivant lantibiotique.
Les bta-lactamases sont des molcules trs efficaces. Par
exemple, la bta-lactamase de type TEM-2 hydrolyse environ 2 000 molcules de pnicilline G en une seconde.
Les inhibiteurs des bta-lactamases (acide clavulanique,
sulbactam et tazobactam) sont des molcules apparentes
aux bta-lactamines, mais dont laffinit pour les bta-lactamases est plus grande que pour les PLP. Mme faible
concentration, il en rsulte un fort effet inhibiteur sur les btalactamases, laissant lantibiotique agir sur les PLP.
Les bactries Gram positif produisent des bta-lactamases en grande quantit et les scrtent dans leur environnement. Ces molcules sont codes sur des plasmides
transmissibles dautres bactries par lintermdiaire de
phages. Chez les Gram positif, la synthse des bta-lactamases est dpendante du substrat, cest dire que lenzyme
nest produite que si son substrat (la bta-lactamine) est prsent dans lenvironnement.
Les bactries Gram ngatif produisent de nombreuses
bta-lactamases, mais celles-ci restent localises dans lespace priplasmique. Ces enzymes sont codes soit par le
chromosome bactrien, soit par un plasmide. A linverse
des bactries Gram positif, la synthse des btalactamases est indpendante de la prsence de leur substrat (les
btalactamines).
Pnicilline
+ Inhibiteur de
bta-lactamases
Lassociation dun
inhibiteur des btalactamases protge
la pnicilline.
Bta-lactamases
H. influenzae
producteur de
bta-lactamases
Violet de gentiane
Les -lactamases sont les plus connues mais non les seules enzymes anti-antibiotiques .
Les aminosides sont ainsi la cible de plusieurs sortes de transfrases fabriques par diverses
bactries. Ces enzymes seraient localises lextrieur de la membrane cytoplasmique (ou
membrane interne) des bactries Gram ngatif (entrobactries, P. aeruginosa).
3b
Iode
(Lugol)
Lavage lalcool
Fuchsine
GRAM
Coloration
des bactries
en violet
Distinction
Bactries
Les nouveaux
spectres
antibiotiques
GRAM +
Bactries non
dcolores par
lalcool, gardant
la coloration
violette
Coloration de Gram
Mthode de coloration permettant de diviser les bactries en deux groupes dits Gram
positif et Gram ngatif (du nom de linventeur de la mthode, le Danois Hans Gram,
1853-1938). Cette coloration permet aussi
de distinguer les cocci des bacilles et renseigne sur leur morphologie grgaire. Ces
informations fournissent rapidement une
orientation sur le type de la bactrie en cause.
Bactries
dcolores par
lalcool et
colores en
rose par la
fuchsine
Lors de la coloration, un colorant, le violet de gentiane, est absorb par la paroi des
bactries.
Chez la bactrie Gram positif, les dcolorants sont incapables dliminer le colorant de la paroi. La bactrie garde sa couleur violette.
Chez les bactries Gram ngatif, le complexe colorant-iode est dissout et la bactrie
est dcolore par lalcool, puis reprend la coloration rose de la fuchsine rajoute ensuite.
La diffrence de comportement des bactries vis--vis de la coloration de Gram
traduit une diffrence de structure de leur
paroi. En fait, les bactries Gram ngatif possdent deux membranes, interne et
externe, alors que les bactries Gram positif nont quune membrane.
Capsule
bactrienne
Une capsule est une enveloppe supplmentaire, en gnral compose de polysaccharides relativement
cohrents, lextrieur de la
paroi cellulaire.
Une capsule confre divers
avantages la bactrie. Elle
lui permet de rsister la dessication et la phagocytose,
ce qui accrot sa virulence :
ainsi, les H. influenzae responsables de mningites sont
en gnral des souches capsules. De plus, la capsule repousse les virus bactriens et
les dtergents.