RECUENTO DE SPORAS CLOSTRIDIUM SULFITO REDUCTOR.

OBJETIVOS.
Detectar el nmero de unidades formadoras de colonias de clostridium presentes
en el alimento.
Evaluar que la concentracin de los microorganismos se encuentran en los lmites
permitidos por la normatividad vigente.
Adquirir destreza en el recuento de esporas de Clostridium Sulfito Reductor.
MARCO TEORICO
Este anlisis es considerado como el recuento de indicador ms importante de las
bacterias anaerobias espero formadoras.
Varias especies del genero Clostridium tienen la propiedad de reducir el Ion Sulfito
a Sulfuro, que en presencia de citrato frrico y otra sal de metales pesados dan
colonias negras.
EQUIPO Y MATERIAL.
Los mencionados anteriormente para la preparacin y la dilucin de la
homogenizados de los alimentos.
Agar OPSP (Oleandomycin Pdymixin Sulphodiazine Perfringes).
Pipetas de 1cm.
Estufa de incubacin a 35c.
3 tubos de ensayo.
Solucin de Agua Peptonada 0.1%
Esptula
Erlenmeyer
Frascos Shott
Gradillas
Micro pipeta, puntas azules y amarillas
Pipetas
Pipeteador
Probetas
Tubos de Ensayo
Cajas de Petri
EQUIPOS Y UTENCILIOS UTILIZADOS

Bao de Mara
Incubadora
Balanza Analtica
Mechero de Bunsen
Trpode
Malla
Jarras de Anaerobiosis

TECNICA EN TUBO
Pipetear 1 ml de cada una de las diluciones en tubos de ensayo estriles.
Calentar los tubos con cada una de las diluciones a 80c por 10 minutos. Enfriar
rpidamente en agua corriente.
Adicionar de 10 a 12 ml del medio de cultivo OPSP.

Luego lo incubamos a 35c por 72 horas.

ANALISIS

METODO

PRESENCIA
O AUSENCIA
DE
CLOSTRIDIU
M EN EL
ALIMENTO.

SIEMBRA DE
CLOSTRIDIU
M EN TUBO
DE ENSAYO.

MEDIO
UTILIZAD
O

AGAR
OSPS

CARACTERISTIC
AS
MACROSCOPICA
S
En este caso el
enlatado se
encuentra libre de
cualquier bacteria
anaerobia o
aerobio. Ya que no
presenta colonias
negras el medio
utilizado. Dando a
entender que el
alimento fue
manipulado en
ptimas
condiciones.

IMAGEN

CONCLUSION

No se evidencia crecimiento. Lo cual permite ver que el alimento utilizado

cumple la
legislacin vigente.
El alimento tuvo una excelente manipulacin en cada uno de su mismo
proceso.

INFORME DE BACILLUS CEREUS.

Bacilo Gram positivo,

esporulado, aerobio o anaerobio facultativo,
mvil. La espora es ovoidea, central y no
deformante. Hidroliza la lecitina de la yema
del huevo y no fermenta el manitol.
Temperatura ptima 30C a 37C, su
temperatura de crecimiento 5C a 55C y
temperatura de germinacin 5C a 8C. Su
pH ptimo 4.5 a 9.3, Aw 0.95 y su concentracin de sal 7.5%. Produce dos tipos
de toxiinfecciones alimentarias: la forma diarreica y la forma emtica.
OBJETIVOS
*Desarrollar habilidades en la preparacin de reactivos, pruebas bioqumicas y
medio de cultivo para B.cereus.
*Adquirir destreza en el recuento de B.cereus en diferentes alimentos.
*Elaborar informe e interpretar los resultados de la muestra analizada.
MATERIALES
1.Agar MYP para B. cereus
2.Solucin de polimixina
3.Emulsin de yema de huevo al 10%
4.Cajas Petri
5.Erlenmeyer
6.Tubos de ensayo
7.Morteros
8.Agua peptona da
9.Puntas estriles
10.Muestra a analizar enlatado carne de diablo zenu.

METODOLOGIA
1. Se funde el medio de base y se mantiene en un bao de agua regulado entre 45
C 2Cy se
aaden los otros componentes(PolimixinaB,Emulsin de yema de huevo
estril)mezclando
bien despus de cada adicin. Sema tiene el medio completo en un bao de agua
a 45C
2. Tomar 10g de muestra y macerarla. En caso que la muestra sea liquida tome
10mL en una probeta estril.
3. Agregar la muestra crnica al Erlenmeyer que contiene 90mL de agua peptona
da,
obteniendo la dilucin 10-1
. Realice diluciones seriadas hasta 10-3
4. Sembrar 0.1mL de cada una de las diluciones en la superficie de la placa de
agar
MYP.
5. Dejar secar y seguidamente invertir la caja Petri e incubarla a 35C+/-2 durante

48 horas.
6. Contar las colonias rosadas (manitol negativo) que presenten un lalo denso
(lecitina positiva) sobre un fondo rojo violeta (colocando la caja invertida).
Nota: Debe tomar tres colonias y realizarle pruebas bioqumicas.

EXPRESION DE RESULTADOS
Se redondea el resultado calculado con dos cifras significativas. Se toma como
resultado el nmero de unidades formadoras de colonias, UFC/ml o UFC/g de
producto carnico que evaluamos, expresado como un nmero entre 1,0 y 9,9
multiplicado por 10x donde x es la potencia apropiadade 10.
Se calcula el nmero de N de colonias por mililitro o por gramo de
producto,dependiendo del caso, usando la siguiente ecuacin:

N= suma de todas las colonias

Suma de cajas reteidas x el factor de dilucion.

CONCLUCION
El analisis de Bacilos cereus en la carne de diablo de zenu muestra presencia de
la bacteria por su color blaco y esporulado , en las cajas petri de las 3 diluciones
de forma expanciva donde no podrias aplicar la formula de la suma de ufc.

BIBLIGRAFIA
*www.biologia.edu.ar/microgeneral/micro-ianez/14_micro.htm
*gua de laboratorio.
*es.wikipedia.org/wiki/Microbiologa

MARCO TEORICO
Son todas aquellas bacterias aerobias o anaerobias facultativas, mesfilas o
psicrfilas capaces de crecer en agar nutritivo. Se investigan por el mtodo de
recuento en placa con siembra en profundidad, los microorganismos mesfilos son
aquellos que se desarrollan entre 15 y 35 C y que tienen una temperatura ptima
decrecimiento y proliferacin en un ambiente o medio que tenga una temperatura
de 37C. En este grupo se encuentran los microorganismos patgenos es decir los
causantes de enfermedades. El intervalo de temperaturas en el que crecen los
microorganismos es muy amplio:
de 34 C a > 90 C. En funcin de esto se encuadra a los microorganismos en
tres grupos:
a) Los que crecen bien a 7 C o por debajo de esta temperatura cuya temperatura:
psicrfilos.
b) los que crecen entre 2030 C, con una temperatura ptima de crecimiento est
entre 3040C: mesfilos
c) los que crecen por encima de los 45 C: termfilos.
El hbitat de los organismos mesfilos incluye el suelo, el cuerpo de un animal,
etc. Su temperatura ptima de crecimiento se encuentra en los 37 C, la
temperatura normal de un cuerpo humano
Al igual que las protenas, la larga molcula de ADN en espiral emprende un

proceso de desnaturalizacin desenrollarse y rompiendo sus enlaces mientras

aumenta la temperatura. Las bacterias termfilas evitan que esto ocurra con la
ayuda de una enzima conocida como ADN girasa reversa. Este recurso adaptativo
hace que el ADN se enrolle y doble sobre s mismo hacindola ms resistente
frente a las temperaturas tan altas del medio donde viven.

OBJETIVOS

Determinacin en placa de termfilos

Determinar termfilos presentes en la muestra a analizar
Observar la influencia de la temperatura en el crecimiento de los termfilos

MATERIALES UTILIZADOS

Standar Plate Count Agar

Cajas Petri
Erlenmeyer
Tubos de ensayo
Morteros
Agua peptonada 0.1 %
Puntas estriles
Micropipetas

Equipos

autoclave
incubadoras

Procedimiento
1. Tomar 10g de muestra en este caso utilizamos para la muestra.
2. Tomar la muestra y adicionarla al Erlenmeyer que contiene 90mL de agua
peptonada.
3. Realizar las diluciones seriadas hasta 10-3.
4. Sembrar en profundidad cada una de las diluciones por duplicado en el
medio SPC.
5. Incubar a 35C +/-2 durante 72 horas.
6. Posteriormente Realizar el recuento de UFC.

CUADRO DE RESULTADOS
CARACT.
MICROSCOP
OCAS

DILUCIO
N

10

-1

CARACT.
MACROSC
PICAS
.
TERMOFILO
S
Filamentosa
plana

MEDIO

N DE
COLONI
AS

1 caja
crecimie

IMAGEN

ondulado
mate
10-2

Elptica
Plana
irregular y
extendida
Mate

10-3.
Elptica
Plana
Irregular y
extendida
Mate

nto
masivo
2 caja
crecimie
SPC(ST nto
NDAR
masivo
PLATE
3 caja
COUNT) crecimie
nto
masivo

Recomendaciones
Se recomienda tener especial cuidado con los productos enlatados ya que si no se
almacenan correctamente podra permitir el desarrollo de estos microorganismos y
esto podra acarrear problemas para la salud del consumidor del producto.
Al momento de realizar el anlisis verifique que cuente con todos los elementos de
proteccin personal esto con el fin de no contaminar de ningn modo la muestra y
que tampoco adquirir ningn tipo de contaminacin por parte de la muestra a
analizar.
Antes y despus de cada anlisis realizado en el laboratorio es muy importante
que lave y desinfecte sus manos para prevenir cualquier tipo de contaminacin.

Conclusiones
Con estos anlisis nos podemos concluir que siempre habrn riesgos presentes
en los procesos productivos que traten alimentos por eso es difcil ejercer un

control para reducir a cero los riesgos presentes en los alimentos sin embargo con
la ayuda de estos anlisis podemos conocer los factores que estn presentes y
que inciden en las intoxicaciones por alimentos para as minimizar al mximo los
posibles riesgos que se puedan presentar, tambin nos permite saber si los
procesos de limpieza y desinfeccin tanto para los manipuladores como para
superficies empaques o envases utilizados y que hacen parte de los procesos de
produccin realizados en una empresa.
FUNDAMENTO TEORICO
Escherichia coli
Bacilo corto gram negativo que forma parte de la flora normal del intestino de
animales de sangre caliente. Es aerobio facultativo, de metabolismo fermentativo,
O-Nitrofenli--D- galactopiransido positivo y su crecimiento ptimo es a 37 C.
Algunas cepas pueden producir entero toxinas y tiene otros factores de virulencia
de colonizacin e invasin por lo cual pueden causar enfermedades diarreicas, as
como infecciones urinarias y nosocomiales.

OBJETIVOS

Adquirir destreza en la determinacin de presencia o ausencia de E. Coli

en la muestra

Realizar informe de los resultados obtenidos por la muestra analizada

MATERIALES
Eosina Azul de Metileno (EMB)
Cajas petri
Frasco shot
Vidrio reloj
Balanza analitica
Morteros
Caldo lactosado
Puntas estriles
Micropipetas

METODOLOGIA

1.
Tomar 10g de muestra y macerarla. En caso que la muestra sea liquida
tome 10mL en una probeta estril.
2.
Agregar la muestra al frasco de shot ya preparado que contiene 225mL de
caldo lactosado llevar durante 24 horas en la incubadora 35c.
3.

Realice diluciones seriadas hasta 10-3.

4.

Siembre por duplicado todas las diluciones (siembra profunda).

5.

Incubar a 35C +/- 1 durante 24 horas.

RESULTADOS
Medio
cultivo

de Caracterstic
as
macroscopic
as
Escherichia (No presenta)
coli
AUSENCIA
CALDO
LACTOSAD
O
EMB-AGAR

Caracteristic Dilucion No de Image

as
colonia n
microscopica
s
s
(No presenta) Caldo
O
AUSENCIA
lactosad
o
3g
1000ml
x
225ml
x=0.675
g
EMBAGAR
37,5
1000ml
x
60

ml
x=2,25g
CONCLUSION
Teniendo en cuenta los resultados de la muestra el Jamn endiablado no hay
PRESENCIA de E-coli ya que por ser un producto enlatado cumpli con ese
anlisis dando un resultado Negativo sin presencia de la bacteria en el producto.
Cumpliendo as con la norma
DISCUSION DE RESULTADOS
Con el grupo llegamos a imaginar que el anlisis se hizo acorde a las
instrucciones de la gua y la profesora teniendo en cuenta el protocolo necesario
para realizar bien el anlisis dando un resultado satisfactorio de la no presencia de
la bacteria E-COLI en el producto
RECOMENDACIONES
Teniendo en cuenta los protocolos de realizacin del anlisis y los EPP tendremos
siempre un resultado optima en el momento de realizar un anlisis a una muestra
de un alimento.