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IDENTIFICACION DE

ESTREPTOCOCOS
Janet Salazar L
Bacteriloga IUCM
de A.

Generalidades
Catalasa Oxidasa negativo
Bacterias Gram positivas
Crece en pares o en cadenas
Anaerobios facultativos
Homofermentadores* el nico producto de
fermentacin de la glucosa es el acido lctico
sin produccin de gas

1. Tincin de Gram
2. Medios de cultivo
Contenga sangre de carnero al 5% *
concentracin es adecuadas de sangre para
reconocer la HEMOLISIS
Estreptocococos de los grupos A, B,C,F,G hemolticos
Enterococcus , estreptocococos grupo D hemolticos o no hemol

Los estreptococos en A-sangre


pueden producir 3 tipos de hemolisis:
-hemolisis: lisis parcial de los
eritrocitos que rodea a una colonia,
cambio de color gris verdoso o pardo
en el medio
-hemolisis: lisis completa de los
eritrocitos, produce una eliminacin de
la sangre del medio debajo de las
colonias y alrededor -transparente
-hemolisis: sin hemolisis, sin cambio

3. Sensibilidad a la bacitracina
Separa el Streptococcus pyogenes de
los
dems estreptococos beta hemolticos
Streptococcus pyogenes -grupo A ( S)
es sensible a concentraciones bajas de
Bacitracina 0.04 U * realiza sobre agar
sangre

4. Sensibilidad a trimetropin-sulfametoxazol

Distingue los estreptococos de los grupos


A y B de los otros estreptococos Bhemolticos
Realizar sobre agar sangre
Cualquier zona de inhibicin indica
sensibilidad a SXT
(S) sensibles: estreptococos de los grupos
D, no enterococos, C,F,G, estreptococos
viridans y neumococos

5. Prueba de CAMP
Separar S.agalactiae de los
dems
estreptococos -hemolticos
Se basa en que los
estreptococos del grupo B
producen un factor llamado
CAMP (factor de monofosfato
de adenina cclica) que
aumenta la zona de hemlisis
producida por un estafilococo
productor de lisina.

Se realiza estriando un cultivo


de
estreptococo -hemoltico en
forma perpendicular a una
estra de un estafilococo
productor de -lisina en ASangre
Se incuba 18-24 horas a 37C.
Interpretacin de los
resultados: La prueba
positiva se
evidencia por la presencia de
una zona de potenciacin
de la hemlisis en forma de
puntas de flecha en el lugar
donde se contactan las dos
estras.

Reaccin de CAMP positiva

Reaccin de CAMP negativa

Se basa en la capacidad de
6. Prueba de bilis esculina
los estreptococos del grupo
D de crecer en un medio de
Separar los estreptococos
cultivo que contiene un 40%
del grupo D de los dems
de bilis y de hidrolizar la
grupos de estreptococos
esculina a esculetina, la
cual se combina con el
citrato
Interpretacin de
resultados: Prueba
positiva: (+)
ennegrecimiento del medio.

ferroso que posee el medio


dando un complejo de color
negro.

Prueba de bilis-esculina. Los


estreptococos del grupo D son
positivos para esta prueba

7. Prueba de tolerancia a la sal ( caldo de NaCL


al 6.5 %)
Se basa en la capacidad
Separar los enterococos de los enterococos de
capaces de crecer en
crecer en una
caldo salado, de los dems
concentracin de 6,5%
estreptococos del grupo D
deNaCl
Interpretacin de
resultados: considera la es un medio de cultivo
prueba
lquido que contiene
Prueba(+) aparece turbidez
con o sin acidificacin del adems de NaCl, glucosa
medio, que se observa
y un indicador de pH:
como un viraje de color del

prpura de bromocresol.

Crecimiento positivo en
cloruro de sodio 6,5%)

8. Prueba de la Pirrolidonil arilamidasa PYR


til para la identificacin de
Streptococcus pyogenes y
Enterococcus spp
Es altamente sensible y
reemplaza a la bacitracina y
a la prueba de tolerancia a la
sal (crecimiento en NaCl al
6.5%).

Enzima detectada: PYR


Inculcacin el caldo,
incubar por 4
horas*hidroliza PYR,
luego se detecta Bnaftilamida libre
mediante el agregado
del acoplador de
colorante diazo o
reactivo revelador: N-N
dimetilamino
cinamaldehdo 1 gota

Positivo: observacin de
color rosa-rojo en el
disco.
Negativo: la suspensin
y/o el disco permanecen
incoloros o de color
amarillo.

9. Sensibilidad a la optoquina
Diferenciar S.pneumoniae
de otros estreptococos hemolticos
Interpretacin de
resultados: Halos de
inhibicin
> de 15mm son
caractersticos de S.
pneumoniae

Se basa en la sensibilidad
de
S.pneumoniae a una
concentracin menor o igual
a 5g/ml de hidroxicuprina
(optoquina).
Procedimiento: Estriar un
cuadrante de una placa de
agar sangre en varias
direcciones con una
suspensin McFarland 0,5.
Colocar luego un disco de
optoquina en el
centro del rea estriada.

10. Prueba de solubilidad en bilis


.
algunos microorganismos se lisan en
presencia de bilis
Se inocula un caldo nutritivo sin glucosa
y con pH alrededor de 7 con el
microorganismo durante 24 h y se le
aade la solucin de bilis al 10%
(generalmente desoxicolato de sodio)

Se incuba a 35-37C y si antes de


3 h se produce un aclaramiento
en el contenido del tubo se
identifica Streptococcus
pneumoniae

Las colonias de Streptococcus


pneumoniae se disuelven o lisan dentro
de los 30 minutos en presencia de una
solucin de desoxicolato de sodio al
10%
suspender las colonias sospechosas en
1 ml de NaCL 0.85% (turbiedad 1.0
escala de Mac Farland) bien densa.
Dividir en mitades y a una de ellas
agregarle 3 a 4 gotas de la solucin de
desoxicolato de sodio al10% y al otro
tubo solucin fisiolgica. Incubar 2 h a
35C y examinar luego para ver
aclaramiento de la turbiedad por lisis.

Alfa hemlisis y produccin de crecimiento tipo


"Swarming" por la presencia de cpsula del S.
pneumoniae