Producción Bacillus Thuringiensis

PRODUCCIN DE BIOINSECTICIDA A PARTIR DE B.
THURINGIENSIS
PROYECTO
PRODUCCIN DE BIOINSECTISIDA A PARTIR DE
BACILLUS THURINGIENSIS
NDICE DE CONTENIDO
PRODUCCIN DE BIOINSECTICIDA A PARTIR DE B. THURINGIENSIS
NDICE DE CONTENIDO...........................................................................................i
NDICE DE FIGURAS...............................................................................................iv
NDICE DE CUADROS..............................................................................................v
NDICE DE DIAGRAMAS..........................................................................................v
NDICE DE TABLAS..................................................................................................v
NDICE DE GRFICAS.............................................................................................vi
1. ANTECEDENTES...............................................................................................7
2. JUSTIFICACIN...............................................................................................11
3. INTRODUCCIN..............................................................................................12
Bioinsecticida de primera generacin...............................................................17
Bioinsecticidas de segunda generacin...........................................................17
Bioinsecticidas de tercera generacin..............................................................18
Metabolismo......................................................................................................22
Cristales paraesporales proteicos (-endotoxina)...............................................25
Rango de hospederos..........................................................................................27
Mecanismos de accin.........................................................................................29
4.
1.1
Objetivo general.........................................................................................30
1.2
Objetivos particular.....................................................................................30
PLANTEAMIENTO DEL PROCESO................................................................31

Mezclado...........................................................................................................31
Esterilizacin.....................................................................................................32
Activacin de inculo........................................................................................33
Fermentacin....................................................................................................33
Cuantificacin de la fuente de carbono............................................................35

Centrifugacin...................................................................................................35
Secado..............................................................................................................36
Mezclado de formulacin..................................................................................36
Envasado..........................................................................................................37
5. DIAGRAMA DE PROCESO..............................................................................40
6. PARAMETROS DE CONTROL.........................................................................41
7. CARACTERISTICAS DE LOS EQUIPOS........................................................42
8. IDENTIFICACIN DE EQUIPOS CLAVE.........................................................55
9. PRODUCTIVIDAD DEL PROCESO.................................................................57
10.
MEMORIA DE CLCULO..............................................................................58
10.1 DIMENSIONES DEL REACTOR..................................................................58

10.1.1 Diseo del reactor semilla......................................................................58
10.2 Diseo del impulsor......................................................................................59
10.4 Diseo del impulsor......................................................................................61
10.5 Balance de materia en el fermentador principal..........................................62
10.6 Determinacin del coeficiente volumtrico de transferencia de Oxigeno....63
11.
PROCESO FERMENTATIVO........................................................................64
11.1 JUSTIFICACIN DEL MEDIO DE CULTIVO...............................................64

Formulacin..........................................................................................................66
11.2
CINETICA DE LA FERMENTACIN.......................................................68
11.1 Balance estequiometrico del bioproceso......................................................70

12.
CARACTERIZACIN DEL EQUIPO CLAVE.................................................72
12.1 CARACTERIZACIN HIDRODINMICA.....................................................72
Reactor semilla.....................................................................................................72
Reactor principal...................................................................................................73
12.2 TRANSFERENCIA DE CALOR....................................................................74
Calculo de tiempo requerido para la esterilizacin..............................................74
Clculo del calor requerido para la esterilizacin (Q)..........................................75
Calculo del flujo de vapor.....................................................................................75
Calculo del agua de enfriamiento requerida para la remocin de calor durante la
fermentacin.........................................................................................................75
Calor generado por la actividad microbiana.....................................................76
13.
REFERNCIAS................................................................................................77
NDICE DE FIGURAS
Figura 1 : Vista macroscpica de Bacillus thuringiensis despus de 24 horas de incubacin
en Agar Nutriente. Laboratorio de Diagnstico & Biopropagacin Hilsea Inv: El QuincheEcuador, 2010......................................................................................................................... 13
Figura 2: Fitograma de las identidades entre la secuencias Cry. Las lineas verticales denotan
los cuatro niveles de la nomenclatura..................................................................................20
Figura 3: Ciclo de vida de B. thuringiensis20................................................................................22
Figura 4: Vista microscpica a 100X de Bacillus thuringiensis en fase exponencial a las 9
horas en medio de cultivo a base de melaza. Laboratorio de Diagnstico &
Biopropagacin Hilsea Inv.: El Quinche Ecuador Julio 2010.............................................23
Figura 5: Fotografa de campo claro de B. thuringiensis. Se observan las caractersticas
microscpicas de B. thuringiensis C:cristales, E:esporas y CV: clulas vegetativas.
Tomada de http://bioinformatica.uab.es/biocomputacio/treballs0001/custodio/Bt_pag_ppal....................................................................................................... 24
Figura 6: Diagrama del proceso de esporulacin en B. thuringiensis y la acumulacin de
cristal. Abreviaturas: M, mesoma; CW, pared celular; PM, membrana plasmtica; AF,
filamento axial; FS, septo de la foroespora; IOF, endoespora incipiente; OI inclusin
oval; PC, cristal paraesporal; F, foroespora; IM, membrana interna; OM, membrana
externa; PW, pared celular primordial; E, exosporium; LC, capa laminar de la espora;
OC, capa externa de la espora; C, corte; IMC, citoplasma de la clula madre
incorporado; S, espora madura en esporangio intacto
2,20
.................................................25
Figura 7: Microfotografa de B. thuringiensis en microscopio electrnico de transmisin. Se

muestra el cristal proteico romboide compuesto de toxinas Cry y una espora en
proceso. Tomada de http://www.agrobeta.com/agrobetablog/2013/01/notas-sobrebacillus-thuringi...................................................................................................................... 26
Figura 8: Modo de accin de Bacillus thuringiensis 13................................................................29
NDICE DE CUADROS
Cuadro 1: Clasificacin taxonmica de Bacillus thuringiensis 1................................................14
Cuadro 2: Entomopatgeno comercializados en Mxico...........................................................15
Cuadro 3: Clasificacin de B. thuringiensis de acuerdo al antgeno H.....................................21
Cuadro 4: Asociacin entre los principales tipos de cristales de B. thuringiensis y su
espectro de actividad insecticida 20......................................................................................26
Cuadro 5: Uso de B. thuringiensis var. aizawai GC-9.................................................................28
Cuadro 6: Uso de B. thuringiensis var. aizawai GC-9.................................................................28
NDICE DE DIAGRAMAS
Diagrama 1: Proceso de elaboracin de bioinsecticida a base de Bacillus thuringiensis......38
Diagrama 2: Indicacin de puntos critico de produccin...........................................................39
Diagrama 3: Proceso de obtencin de bioinsecticida a base de B.T.........................................40
NDICE DE TABLAS
Tabla 1: Principales bacterias entomapatgenas.4......................................................................16
Tabla 2: Bioinsecticidas de primera generacin txicos para lepidpteros disponibles en el
mundo.17.................................................................................................................................. 19
Tabla 3: Caractersticas y condiciones del fermentador lote agitado de 5,616.75 L de volumen
de operacin utilizados durante el escala miento para la produccin de Bacillus
thuringiensis cepa GC-9 6....................................................................................................... 41
Tabla 4: Ficha tcnica del tanque de almacenamiento...............................................................42
Tabla 5: Ficha tcnica del tanque de mezclado...........................................................................43
Tabla 6: Ficha tcnica del agitador............................................................................................... 44
Tabla 7: Ficha tcnica del tanque fermentador semilla..............................................................45
Tabla 8: Ficha tcnica del tanque fermentador principal............................................................46
Tabla 9: Ficha tcnica de la centrifuga de discos........................................................................47

Tabla 10: Ficha tcnica del secador por aspercin.....................................................................48
Tabla 11: Ficha tcnica de la empaquetadora..............................................................................49
Tabla 12: Ficha tcnica de la caldera............................................................................................ 50
Tabla 13: Ficha tcnica de la bomba centrifuga..........................................................................51
Tabla 14: Ficha tcnica dela bomba de desplazamiento positivo..............................................52
Tabla 15: Ficha tcnica del sedimentador....................................................................................53
Tabla 16: Ficha tcnica del mezclador de pantaln (mezclador V)............................................54
Tabla 17: Parmetros de rendimiento........................................................................................... 58
Tabla 18: Medio Jerry Rowe.......................................................................................................... 65
Tabla 19: Medio de Harina de Soya............................................................................................... 66
Tabla 20: Formulacin.................................................................................................................... 67
Tabla 21: Propiedades fisicoqumicas de la formulacin de Bt.................................................67
Tabla 22: Efecto del sustrato en el crecimiento y desarrollo de esporas en Bt 4......................69
Tabla 23: Capacidad del fermentador semilla..............................................................................74
Tabla 24: Tiempo requerido en los fermentadores para la esterilizacin..................................74
Tabla 25: Calor requerido para la esterilizacin..........................................................................75
NDICE DE GRFICAS
Grafica 1: Cintica de crecimiento de Bt en una produccin de 5L 4.........................................68

Grafica 2: Velocidad mxima de crecimiento () 4.......................................................................69
Produccin de Bacillus thuringiensisVar. Aizawai como una herramienta

especfica, segura y eficaz para insectos plaga.
1. ANTECEDENTES
En 1873, Leconte recomend definitivamente el estudio de enfermedades de
insectos para determinar los medios ms efectivos de su uso contra especies
nocivas; para 1874, Pasteur sugiri el uso de microorganismos para combatir la
Phylloxera de la vid, en Francia. En 1879, Hagen se aboc al uso de hongos
fermentados para destruir insectos nocivos; siendo en este mismo ao cuando Elie
Metchnikoff public un artculo importante en el cual reporto la infeccin natural
del escarabajo del trigo Anisoplia austriaca Hbst. Propiciada por el hongo
Metarrhizium anisopliae (Metch.), cuya epizootia natural caus una reaccin,
significativa de la plaga en cuestin; mientas Alfred Giard, por su parte, iniciaba su
trabajo sobre varios hongos entomopatgenos, llegando a publicar una serie de
artculos sobre este tema entre los aos 1879 a 1896, reconociendo el potencial
de los agentes de control microbial bajo condiciones ambientales apropiadas
19
En 1880, Metchnikoff reitero sus creeencias en el uso de hongos para el control de

insectos, y se aboc a la produccin masiva de hongos entomopatgenos por
medios artificiales, para propsitos de distribucin de campo. Isaak Krassilstschik
(1884) organiz un pequeo laboratorio para producir grandes cantidades de
esporas de Metarrhizium anisopliae y desarrollo nuevos estudios de campo. En
1885, Cheshire y Cheyene describen la enfermedad conocida como incubacin
apestosa de la mariposa europea, causada por Bacillus alvei. De 1887 a1898
Forbes y Snow intentaron el control de la chinche bug, por medio del hongo
Bauveria globulifera (Speg.); durante este periodo otros aspectos fueron
estudiados
por
Forbes.
Cooke
(1892)
pblico
un
libro
sobre
hongos
entomopatgenos. Por otra parte Bolle (1894-1898) asocio los cuerpos

8
piramidales de la ictericia del gusano de seda con el agente causal de la

enfermedad, tambin observo que los cuerpos poliedrales son solubles en sales
dbiles 19.
Hasta el momento Bacillus thuringiensis sigue siendo la ms importante de las
bacterias entomapatgenas.
El inters en este microorganismo principia por el aislamiento de una bacteria de
orugas enfermas del gusano de seda (Bombix mori), efectuadas por el japons
Ishiwata (1905), denominndolo Bacillus sotto, pero esta identificacin no fue
completa y la primera descripcin microbiolgicamente vlida del bacilo fue hecha
en Alemania por Berliner (1911) y lo aisl de larvas enfermas de la polilla del
mediterrneo (Anagasta khueniella). En 1915 Berliner en Alemania identifico estos
aislados como una sub especie nueva y propone el nombre de B. thuringiensis,
ya que originalmente fue aislado en Berln en la provincia de Thuringen, donde
encontr e inicio sus estudios con este bacilo13.
Un aislamiento similar fue hecho en 1927 por otro alemn, Mattes, quien trabajo
con el mismo insecto. Ambos bacterilogos hicieron observaciones importantes
con este microorganismo, mientras clulas vegetativas crecieran y maduraban,
estas producan adems de la espora oval, un segundo cuerpo, y Berliner lo
nombr Restekorper o cuerpo desecho, tiempo despus un canadiense
(Hannay,1953), utilizando el microscopio electrnico, redescubri este cuerpo y
confirmo las observaciones anteriores, mientras examinaba la esporulacin en
bacterias, observo cristales en forma de diamante libres del esporangio, en
preparaciones de cultivos esporulados de B. thuringiensis y se refiere a ellos como
paraesporal. Hasta ese tiempo, se desconoca esto como una funcin de
patogenicidad, Hannay, por el contrario, sugiere que los cristales, al encontrarse
en el intestino medio, estn conectados con la formacin de una sustancia txica
que induce una posterior septicemia en las larvas de insectos 7.
9
Posteriormente Angus en los aos del 1953 al 1954 separ el cuerpo paraesporal
de la espora en cultivos viejos, y demostr que el cristal contena una toxina
alcalina soluble para insectos y que la toxicidad para el gusano de seda (Bombix
mori) est en funcin de este y requiere para ejercer su efecto, encontrarse en el
intestino medio anterior del insecto, sitio susceptible a la accin del cristal
paraesporal 2.
En 1958-1959 Heimpel y Angus, intentaron una clasificacin de bacterias
cristalferas, en base a la morfologa y pruebas bioqumicas. Despus Krieg ubica
otra clave en base a la clasificacin Heimpel y Angus con algunas modificaciones 2.
De Barjac y Bonefoi, en 1962, reportan un anlisis en base a sus antgenos
flagelares H y pruebas bioqumicas, y organizaron 9 serotipos con 12 variedades.
Ms adelante, en 1967, Heimpel clasifica como delta-endotoxina a la toxina
presente en el cuerpo para esporal 6.
McClintic (1985) asegura que mientras los insectos hayan desarrollado resistencia
a los insecticidas qumicos y piretroides (un intento por parte del hombre de
emular
los
efectos
insecticidas
de
las piretrinas naturales
obtenidas
del
crisantemo), los microorganismos entomopatgenos nos seguirn siendo tiles;

continua resumiendo sobre bacterias, especialmente Bacillus thuringiensis, la cual
es aplicable en docenas de cultivos y contra ms de 400 especies de insectos;
describe algunos productos comerciales elaborados con base en la cepa HD-1,
entre ellos Dipel, Thuricide, Bactospine, SOK-Bt, Stan- Gard y Bactur-W. Por otra
parte Harper (1985) ha estado trabajando con mezclas de Bacillus thuringiensis
(Dipel) con Lannate, obteniendo buenos resultados en el control de Trihoplusiani,
Plutella maculipennis y Anticarsia gemmatalis; tambin se han venido probando
combinaciones de Pydrin con Dipel en dosis que van desde un cuarto, a la mitad
de las dosis tradicional usada para cada uno de ellos. Otro xito ha sido el control
de mosquitos y mosca prieta (Aleurocantus woglumi) mediante el uso de Teknar,
Bactimos y Vectobac. Finalmente relata que Himmel trabaja arduamente para
10
desarrollar una tcnica que permita prolongar al menos por una semana ms de
vida de Bacillus thuringiensis en el campo, en lugar de uno a cuatro das como
suele suceder, para ellos se est probando el uso de polmeros en el proceso de
microencapsulacin del material a su salida por la boquilla rociadora 19.
11
2. JUSTIFICACIN
En la actualidad el hombre ha tomado conciencia de los daos que ocasiona el
uso excesivo de insecticidas qumicos, los cuales afectan no slo a las plagas
sino tambin a la flora y la fauna silvestres. Estos insecticidas permanecen en el
ambiente y lo deterioran permanentemente; por otra parte, algunos insectos han
desarrollado resistencia a estos productos y en consecuencia ha sido necesario
incrementar la dosis de los insecticidas o crear nuevos productos, la mayora de
las veces, ms txicos.
Una alternativa a los problemas generados por el abuso en la aplicacin de
insecticidas qumicos, es el Control Biolgico de Plagas. La utilizacin de este
control afecta exclusivamente a las plagas y como es un mtodo biolgico, no
deteriora el ambiente.
Entre las bacterias que ms se han usado para el Control Biolgico, es el Bacillus
thuringiensis se le han encontrado muchas ventajas, entre las cuales tenemos:
ataca a ms de 110 especies de lepidpteros, dpteros y colepteros, posee gran
selectividad, no es txico ni patgeno para el hombre.
En este proyecto se pretende producir un Bioinsecticida a base de Bacillus
thuringiensis var aizawai para el control de plagas ya que
principales
es una de las
perdidas econmicas en la agricultura en Mxico, al de ser una
alternativa de menor impacto ecolgico se pretende sustituir el uso de insecticidas

qumicos por insecticidas biolgicos.
12
3. INTRODUCCIN
El control de insectos plaga en la agricultura se ha realizado principalmente
mediante insecticidas qumicos. No obstante, estos insecticidas han generado
problemas de contaminacin ambiental y se ha demostrado su toxicidad tanto
contra insectos no blancos, como para el mismo humano. Por otra parte, adems
de desarrollar resistencias en los insectos plaga, los insecticidas qumicos son
considerados responsables de la disminucin en diversidad de plantas. Esta
problemtica ha conducido al desarrollo de mtodos alternativos como es el
control biolgico de plagas, que pretende el uso de depredadores, parsitos y
organismos patgenos.
Una de las formulaciones comerciales ms usadas actualmente est basada en la
bacteria esporulada y Gram positiva B. thuringiensis. Esta bacteria sintetiza
durante su fase de esporulacin una protena (delta-endotoxina), que muestra una
actividad insecticida nica. Al ser ingerido la delta-endotoxina por larvas
susceptibles, afecta el intestino de los insectos causndoles la muerte. Existen
endotoxinas
especficas
contra
lepidpteros
(mariposas),
colepteros
(escarabajos), dpteros (mosquitos), himenpteros (hormigas); caros y otros

invertebrados como son nematodos, gusanos planos y protozoarios 2.
Actualmente se conocen numerosos medios de cultivo para estudiar el
metabolismo de B. thuringiensis, ya que existe diversa variabilidad en la actividad
toxica de las preparaciones derivadas de los distintos medios de fermentacin
para una cepa usada.
13
Hbitat
Muchas subespecies de Bt han sido aisladas de insectos muertos o moribundos
pertenecientes a los rdenes de Colepteros, Lepidpteros y Dptera; pero
tambin del suelo, superficies foliares y otros hbitats. Las esporas de esta
bacteria pueden permanecer latentes por aos, si estas encuentran un ambiente
propicio como un medio de cultivo, la espora generar clulas vegetativas 13.
Morfologa
Bt es una bacteria Gram-positiva, aerbica, esporagnica, que mide de 3 a 5 m
de largo por 1 a 1,2 m de ancho, frecuentemente se encuentra en cadenas y
presenta flagelacin pertrica. Poseen la capacidad de fermentar glucosa, fructosa,
maltosa, ribosa, y de hidrolizar gelatina, almidn y glucgeno 2,13.
En medios de cultivo convencionales las colonias se observan en forma circular

con bordes irregulares, perfil plano, color marfil claro, con aspecto harinoso y
ceroso. El dimetro que alcanza en la placa depende de la densidad de colonias
que posee 11.
14
Figura 1 : Vista macroscpica de Bacillus thuringiensis despus de 24 horas de incubacin

en Agar Nutriente. Laboratorio de Diagnstico & Biopropagacin Hilsea Inv: El QuincheEcuador, 2010.
La principal caracterstica de la bacteria es que est constituida por protenas

denominadas delta-endotoxina tambin conocidas como protenas Cry (del inlges,
Crystal) que se forman durante el proceso de esporulacin 2, 6, 13, 15. La clasificacin
taxonmica de Bt segn Bergeys Manual of Determinative Bacteriology se
observa en la Cuadro 1.
Cuadro 1: Clasificacin taxonmica de Bacillus thuringiensis1
B. thuringiensis pertenece a la familia de Bacillaceae y se ubica dentro del grupo 1

del gnero de Bacillus; forma parte del grupo de Bacillus cereus, el que incluye a
B. anthracis, B. mycoides, as como tambin a los mas recientemente descritos B.
pseudomycoides
B.
weihenstephanesis.
Se
encuentra
estrechamente
relacionado con los dos primeros, de los que no logra distinguirse completamente
debido a que no existen suficientes direrefncias en sus caractersticas
morfolgicas y bioqumicas 17.
15
Existen plagas de lepidpteros que causan daos graves en el campo nacional y

que son susceptibles a ser controladas con B.t en el cuadro 2 se describe algunas
variaciones de Bacillus thuringiensis y a qu tipo de plaga ataca.
Cuadro 2: Entomopatgeno comercializados en Mxico.
Bacillus
thuringiensis
var.
Tipo
1
Nombre del
producto
Sugerido para control

de:
Aizawai
XenTaria
Palomilla dorso de
diamante, gusano falso
medidor, gusanos
soldados, gusano
defoliadores.
Israelensis
Skeetal,
Vectobec
Dipteros
Palomilla dorso de
diamante, gusano falso
medidor y mariposilla
blanca
Gusano de la yema del
tabaco,gusano falso
medidor, gusanos
soldados, gusanos
defoliadores
Lepidpteros
Kurstaki
BactospeineDF
Kurstaki
Biobit HP
Kurstaki
Kurstaki
Dipel
Javelin,
Thuricide
Morrisoni
Novodor
Colepteros
Tenebrioris
Trident
Colepteros
Lepidpteros
Compaa
productora
Abbott-DuPont
Abbott-DuPont
Abbott-DuPont
Abbott-DuPont
Abbott-DuPont
Ecogen
Thermo Trilogy
Columbia MD,
USA
Ecogen
El biocontrol de implica el uso de enemigos naturales de los insectos plaga, donde

sobresalen organismos entomfagos (insectos depredadores y parasitoides) y
entomopatgenos. Dentro del grupo de organismos entomopatgenos se
encuentra una amplia variedad de virus, bacterias, hongos y nematodos (Tabla 1). 8
Tabla 1: Principales bacterias entomapatgenas.4
Bacteria
Insectos blancos
16
Bacillus popillae
Bacillus lentimorbus
Bacillus sphaericus
Bacillus thuringiensis
Clostridium malacosome
Pseudomonas aeruginosa
Xenorhabdus nematopholus
Rickettsiella melontha
Colepteros.
Colepteros.
Mosquitos.
Lepidpteros, dpteros, colepteros y nemtodos.
Malacosoma sp.
Patgeno oportunista para la mayora de los
insectos.
Insectos susceptibles al Nematodo Steinernema
feltiae.
Colepteros, dpteros y ortpteros.
De los grupos bacterianos el que tiene mayor capacidad para eliminar o infectar
insectos es el grupo de las bacterias formadoras de endoespora, principalmente
los pertenecientes al gnero Bacillus. Entre los bacilos de mayor importancia se
encuentra Bacillus thuringiensis y Bacillus sphaericus. Bacillus thuringiensis (Bt) es
el microorganismo de mayor inters econmico y cientfico, ya que se produce un
cristal proteico (endotoxina) formado por una o ms protenas, las cuales son
especificas contra los estados larvales de diversos ordenes de insectos. 8
Las cepas Bt se clasificaron en 5 patotipos, cuatro de estos representan cepas
toxicas contra lepidpteros, dpteros, colepteros, y dpteros y lepidpteros. El
quinto patotipo son aquellos cristales atxicos.8
17
Los bioinsecticidas se dividen en generaciones como lo son:

Bioinsecticida de primera generacin.
Son aquellos que cuya formulacin incluye como ingrediente activo una mezcla de
cristales y esporas de B .thuringiensis. constituyen la mayor proporcin de los
productos comerciales que se utilizan en el mundo (tabla 2). Estos productos se
encuentran disponibles en diferentes tipos de formulaciones, tanto lquidas como
slidas.17
Estos productos se utilizan en el sector agrcola, principalmente para el control de
plagas lepidpteras en cultivo de maz, trigo, sorgo, soya, algodn y frutales.
Aunque su uso es limitado en comparacin con los insecticidas convencionales. 17
Bioinsecticidas de segunda generacin

Son aquellos constituidos por una mezcla de esporas y cristales provenientes de
una cepa de B. thuringiensis a la cual se le introdujo mediante algn mecanismo
de transferencia de genes, ya sea transformacin, transduccin y/o conjugacin,
genes cry presentes en otras cepas de B. thuringiensis y no en la receptora, lo que
permite ampliar su espectro de actividad hacia otros insectos plaga o aumentar su
toxicidad mediante un efecto sinrgico o aditivo. Los productos a base de B.
thuringiensis modificados genticamente pueden involucrar otras manipulaciones,
como la recombinacin especfica de sitio, curacin de plsmidos, mutagnesis in
vitro y construccin de protenas Cry hbridas.17
El uso de B. thuringiensis como husped de otros genes distintos de los que
posea la cepa original ofrece una serie de ventajas. Las cepas de B. thuringiensis
pueden mantener de manera estable y expresar eficientemente varios genes Cry;
18
esto les permite aumentar la toxicidad para un insecto plaga determinado en forma
aditiva o sinrgica. Distintos genes cry con diferentes modos de accin o
diferentes propiedades de unin al receptor pueden reducir la posibilidad de
desarrollo de resistencia.17
Bioinsecticidas de tercera generacin

Son aquellos cuya formulacin contiene bacterias recombinantes que han sido
modificadas genticamente con genes Cry o cepas de B. thuringiensis modificadas
con otros genes que codifican otros factores de virulencia distintos de las
endotoxinas. Estos productos se desarrollaron con el objetivo de resolver la
limitacin de la toxicidad residual corta que poseen los productos de primera
generacin, o simplemente de aumentar la toxicidad hacia los insectos. Una
estrategia que permiti obtener un tipo de estos productos consisti en el uso de
bacterias recombinantes muertas, con el objeto de obtener un sistema de
utilizacin de la protena Cry.17
Existen otros bioinsecticidas que no fueron registrados an, que se obtuvieron
insertando genes cry de B. thuringiensis en otros microorganismos. Estos fueron
seleccionados teniendo en cuenta su capacidad de colonizar el hbitat del insecto
blanco del tratamiento, con la idea de que los organismos transformados puedan
sintetizar de forma continua cantidades suficientes de protena Cry para evitar el
dao causado por el insecto.
19
Tabla 2: Bioinsecticidas de primera generacin txicos para lepidpteros disponibles en el

mundo.17
20
En la figura 2 se muestra en nivel de accin de cada protena Cry ay a qu tipo de

organismo ataca
Figura 2: Fitograma de las identidades entre la secuencias Cry. Las lineas verticales denotan los
cuatro niveles de la nomenclatura.
21
22
B. thuringiensis se clasifica en 84 serovares mediante serologa del antgeno

flagelar H como se muestra en el cuadro 2 17.
Cuadro 3: Clasificacin de B. thuringiensis de acuerdo al antgeno H.
23
24
Metabolismo
Es una bacteria quimiohetertrofa, oxida aerbicamente los carbohidratos
convirtindolos en cidos grasos. Esta especie bacteriana, durante su ciclo de
vida, presenta tres fases: la fase de crecimiento (vegetativo), fase de transicin y
fase de esporulacin (Figura 2)10,13,15,19.
Figura 3: Ciclo de vida de B. thuringiensis20.
Fase de crecimiento exponencial (tropofase)

En esta fase las bacterias se duplican cada 30-90 minutos dependiendo del medio
de cultivo (Figura 3); utilizan para catabolizar sus carbohidratos una ruta glucoltica
llamada Embden-Meyerhoff-Parnas (EMP), la cual representa el principal sistema
de conversin de glucosa en metabolitos intermediarios como: piruvato, acetato,
polihidroxibutirato (PHB)9.
25
Figura 4: Vista microscpica a 100X de Bacillus thuringiensis en fase exponencial a las 9

horas en medio de cultivo a base de melaza. Laboratorio de Diagnstico & Biopropagacin
Hilsea Inv.: El Quinche Ecuador Julio 2010.
Fase de transicin
Esta fase ocurre a la mitad de la fase exponencial o logartmica; cuando la mitad
de los azcares han sido consumidos. Los metabolitos intermediarios (piruvato,
acetato, PHB) producidos en la fase exponencial son catabolizados va el ciclo
tricarboxlico o ciclo de Krebs modificado para producir energa y CO 215.
Fase de esporulacin (idiofase)
Aproximadamente tres horas despus del inicio de la fase estacionaria ante el
estrs de la bacteria por la falta de nutrientes en el medio se da lugar a la fase de
esporulacin que es un programa de diferenciacin de bacteria a espora, adems
en esta fase comienza la formacin del cristal paraesporal
2,13,20
Durante la formacin de la espora y del cristal paraesporal, el metabolismo del

bacilo est basado en el uso del PBH (hidroxibutirato) y de los aminocidos que
sirven como la fuente de energa para la maduracin de la espora y el cristal, as
como para la lisis celular.
26
Figura 5: Fotografa de campo claro de B. thuringiensis. Se observan las caractersticas

microscpicas de B. thuringiensis C:cristales, E:esporas y CV: clulas vegetativas. Tomada
de http://bioinformatica.uab.es/biocomputacio/treballs00-01/custodio/Bt_pag_ppal.
El ciclo del crecimiento involucra cuatro fases que son: log o de adaptacin, log o
de crecimiento, estacionaria donde ya no hay crecimiento y de declinacin donde
ya mueren las clulas. Durante la fase estacionaria se producen simultneamente
la endoespora de resistencia y el cristal paraesporal
2,20
El proceso de formacin de la espora se puede dividir en siete fases (Figura 5):

En la fase I se inducen los genes que darn inicio a la esporulacin. Este punto del
proceso puede ser reversible si se adicionan nutrientes. Sin embargo, a partir de la
fase II, el proceso es irreversible y continuara hasta finalizar con la formacin de la
espora. En la fase II, la bacteria forma un septo de divisin asimtrico. En la fase
III, inicia la sntesis del cristal, y continuar su maduracin hasta el final de la
esporulacin. La sntesis del cristal se da a partir de dos promotores que funcionan
secuencialmente (BtI y BtII). El primero es reconocido por A durante las fases III y
IV y el segundo por K durante las fases V y VI. Durante estos pasos ocurre
conjuntamente la formacin de la espora. Finalmente en la fase VII se sintetizan
enzimas lticas que se liberan a las esporas y los cristales del compartimento
2,20
27
Figura 6: Diagrama del proceso de esporulacin en B. thuringiensis y la acumulacin de

cristal. Abreviaturas: M, mesoma; CW, pared celular; PM, membrana plasmtica; AF,
filamento axial; FS, septo de la foroespora; IOF, endoespora incipiente; OI inclusin oval;
PC, cristal paraesporal; F, foroespora; IM, membrana interna; OM, membrana externa; PW,
pared celular primordial; E, exosporium; LC, capa laminar de la espora; OC, capa externa de
la espora; C, corte; IMC, citoplasma de la clula madre incorporado; S, espora madura en
esporangio intacto 2,20.
Cristales paraesporales proteicos (-endotoxina)

Es una toxina sintetizada en forma de protoxina durante el proceso de
esporulacin y es considerada de mucha importancia en microbiologa industrial;
ya que la actividad plaguicida de Bt se basa en esta toxina. La protoxina aparece
como una inclusin cristalina dentro del esporangio a la cual se la conoce tambin
como: cuerpo paraesporal, Cristal de protena o solamente cristal Cry. Su peso
molecular oscila entre los 64 y 138kDa
2,20
28
Figura 7: Microfotografa de B. thuringiensis en microscopio electrnico de transmisin. Se

muestra el cristal proteico romboide compuesto de toxinas Cry y una espora en proceso.
Tomada de http://www.agrobeta.com/agrobetablog/2013/01/notas-sobre-bacillus-thuringi
El cristal paraesporal puede presentar varias morfologas: bipiramidal, cbicos,

cuadrados aplanados, esfricos y otras formas atpicas menos frecuentes. Existe
una correlacin bastante alta entre la forma del cristal y la actividad txica (Cuadro
3) 20.
Cuadro 4: Asociacin entre los principales tipos de cristales de B. thuringiensis y su
espectro de actividad insecticida 20.
Tambin los cristales son txicos para caros y otros invertebrados como
nematodos, gusanos y protozoarios 13.
Los cristales pueden ser degradados por accin de los microorganismos del suelo
y al igual que las esporas pueden ser inactivados por la accin de la luz
29
ultravioleta, adems son termolbiles y solubles en soluciones alcalinas a pH de

10 a 11 11.
Rango de hospederos
El xito de los bioinsecticidas a base de B. thuringiensis se debe a la accin
insecticida del cristal parasporal, el cual puede estar formado por una o varias
protenas llamadas
-endotoxina
protenas Cry como
se
mencion
anteriormente. Estas protenas pueden ser txicas a diferentes rdenes
de
insectos, principalmente a lepidpteros, dpteros y colepteros y a ciertos

nematodos y protozoarios 2,17.
Sin lugar a dudas B. thuringiensis es el agente de control de importantes plagas
agrcolas. Las variedades de B. kurstaki y B. aizawai se utilizan contra
lepidpteros plagas, tanto agrcolas como forestales (Cuadro 4 y 5).
30
Cuadro 5: Uso de B. thuringiensis var. aizawai GC-9.

Fuente http://www.biokrone.com/pdfProduct/btkrone.pdf
Cuadro 6: Uso de B. thuringiensis var. aizawai GC-9.

http://www.biokrone.com/pdfProduct/btkrone.pdf
31
Mecanismos de accin
La -endotoxina debe ser ingerida por el insecto susceptible, cuyo intestino posee
un pH alcalino superior a 9,5 lo cual es esencial para la disolucin de las
protoxinas de B. thuringiensis, su actividad se da gracias a la protelisis causada
por las enzimas digestivas del insecto 20.
La especificidad de la -endotoxina a un tipo de insecto en particular implica la
presencia de receptores celulares especficos, la toxina se inserta de forma
irreversible a la membrana plasmtica de las clulas intestinales creando poros o
lesiones que conducen a una variacin en la permeabilidad celular, alterando el
transporte de iones potasio destruyndola, causando as la disrupcin de la
integridad del intestino y la muerte del insecto en 24 a 48 horas posteriores a la
intesta (Figura 7) 13.
Figura 8: Modo de accin de Bacillus thuringiensis 13.
32
1.1 Objetivo general
Producir de un insecticida biolgico a base de Bacillus thuringiensis var.

Aizawai GC-9 de amplia accin contra larvas de Lepidpteros.
1.2 Objetivos particular
Fomentar el uso de productos biotecnolgicos que no daen el medio

ambiente como son los qumicos.
Sustitucin de insecticidas qumicos por insecticidas biolgicos.
33
4. PLANTEAMIENTO DEL PROCESO

El objetivo del proceso es la obtencin de un bioinsecticida formulado a base de
esporas y cristales de Bacillus thuringiensis var aizawai. El principio activo se
obtendr por una fermentacin en lote, sumergida y aerobia. Al trmino de la
fermentacin se proceder a la separacin y secado de las esporas y cristales.
El principio activo es el 5% del bioinsecticida formulado, el cual se empaquetara
en bolsas de 500 gr.
La adquisicin de las materias primas necesarias para la fermentacin, y para la
formulacin se realizar cada mes. Ninguna de ellas presenta un proceso de
descomposicin por lo que son almacenadas a temperatura ambiente y a
excepcin de la melaza, se mantiene en los recipientes que se adquirieron
(tambos o sacos) hasta el momento de su utilizacin.
Mezclado
La harina de soya y el cido fosfrico se pesarn y se mezclarn con agua en el
mezclador (TA-140, TA-150), por espacio de 30 min, esto con la finalidad de
hidrolizar las protenas y obtener peptonas y material proteico fcil de ser
asimilado por los microorganismos. Para una buena esporulacin y formulacin de
cristales es necesario proporcionar aminocidos libres, su ausencia provocara una
esporulacin retrasada 1.
Por otra parte el licor de maz y el carbonato de calcio se mezclarn en el
mezclador (TA-210, TA-220) durante 20 min. En ste podr apreciarse el
papel esencial que juega el CaCO3 en la neutralizacin de cidos resultantes del
34
proceso de fermentacin, pues su ausencia permitir la disminucin de pH en el

medio de cultivo y como consecuencia la disminucin de la esporulacin de B.
thuringiensis.
Los tanques mezcladores estn provistos de un sistema de agitacin con propela
marina, el mezclado se efecta a 350 r.p.m.
Posteriormente se bombear una porcin de las mezclas al fermentador semilla y
el restante al fermentador principal, la melaza se bombear del tanque de
almacenamiento a ambos reactores; El transporte de las mezclas se realizar con
un bomba centrifuga y el de la melaza por medio de una bomba de
desplazamiento positivo. Ambos fermentadores estarn construidos de acero
inoxidable con capacidad
de 143 L y 3,500 L respectivamente, cuentan con
agitador de turbina tipo Rushton.

El transporte de todos los fluidos se realizara en 30 min
Esterilizacin
Una vez que los fermentadores se han llenado con las cantidades necesarias se
proceder a la esterilizacin por medio de vapor saturado circulando a travs de la
chaqueta de los fermentadores. El tiempo de esterilizacin es de 45 minutos para
el fermentador semilla y de 75 minutos para el principal. La temperatura de
esterilizacin es de 121 C y 15 lb/in 7.
35
Activacin de inculo
Es la parte central del proceso comenzando por la preparacin de los viales de
produccin, donde se parte de la cepa de produccin conservada por liofilizacin.
El medio Jerry Rowe fue inoculado con dos discos (L-100), cargados con esporas
de Bacillus Thuringiensis (Bt),
despus de haber depositado los discos en
condiciones aspticas, el matraz (MA-110) se coloca en una incubadora a 32 oC, y

a un 70% de agitacin por un periodo de 12 horas. Con la finalidad de propiciar la
germinacin de las esporas de los discos y comenzar la propagacin de clulas
vegetativas. El siguiente paso consta de realizar un pase para inocular un matraz
conteniente de 500 mL (MI-130) del medio de harina de Soya; esta inoculacin
(I.120) se realiza con un volumen del 15% del medio Jerry Rowe, que corresponde
a un volumen de 12.5 mL, despus de haber inoculado el medio de Harina de
soya se coloca en incubacin (I-120) por un periodo de 10 horas a una
temperatura de 32 oC y un paso de agitacin del 70 %, esto con la finalidad de
obtener clulas vegetativas, posteriormente se inocularn los reactores semillas
(RS-180) y con este los reactores principales (RP-240) 4.
Fermentacin
En este paso el objetivo es la produccin de esporas y cristales paraesporales que
al ser ingeridos por larvas y adultos de lepidpteros son disueltos y procesados
por proteasas digestivas a -endotoxinas de alta especificidad.
La fermentacin que se llevara a cabo es sumergida, por lote, y aerobia.
Posteriormente a la esterilizacin se realizar la inoculacin del fermentador
semilla (RS-180), con un 5% del volumen nominal. La fermentacin se detiene
hasta que el crecimiento microbiano se encuentra en la fase final del crecimiento
36
exponencial, antes de la esporulacin, esto sucede a las 16 horas de haberse

inoculado. Al terminar la fermentacin en este tanque, el caldo de fermentacin se
bombear hasta el fermentador principal (RP-240) previamente esterilizado.
Ambas fermentaciones necesitan las mismas condiciones de operacin, que son:
temperatura de 30 C, pH 6.5-8.5 (lo ms cercano a 7), 100 r.p.m. y 1 vvm 19.
La actividad insecticida del cristal formado por la cepa de B, thuringiensis se ver
afectada por las condiciones de operacin, por lo que el control de estas debe
realizarse de forma efectiva.
El control de pH se realizar por la adicin de hidrxido de sodio, esto se regula
por un sensor de pH que est inmerso en el medio de cultivo.
La temperatura se mantendr a 30C por medio de la chaqueta de los
fermentadores, para lo cual se tiene un sensor de temperatura del medio de
fermentacin. El aumento de la temperatura es principalmente por el metabolismo
de los microorganismos, para mantener la temperatura en condiciones ptimas se
utilizara agua fra.
Se ha indicado que las velocidades de aireacin altas son esenciales para la
formacin de la espora y la toxina en B. thuringiensis 19. El suministro de oxgeno
se realizar con un soplador de lbulos, y se inyectar al fermentador de manera
continua, el aire suministrado en los dos fermentadores debe ser lo ms limpio
posible y libre de lubricantes.
La agitacin del medio se realizar con un impulsor tipo turbina Rushton de acero
inoxidable, con un motor de 1,503.11 W. El tanque cuenta adems con deflectores
para evitar la formacin de vrtice y por lo tanto problemas de transferencia.
37
Otro factor importante es la cantidad de espuma, para lo cual se tendr un

recipiente de antiespumante qumico (que no altera el proceso de fermentacin) y
su respectiva sonda de medicin 19.
El tiempo de fermentacin para el fermentador es de 42 a 46 horas, (durante este
tiempo se tomaran muestras para la cuantificacin de azcares) este tiempo
incluye la esporulacin que se realiza una vez terminada la fase exponencial de
crecimiento, cuando se han consumido la mayora de los nutrientes del medio.
Una vez que se ha obtenido el medio esporulado, se bombear a un sedimentador
esto tomara un tiempo aproximado de 30min y despus a la centrifuga y se
proceder al lavado del tanque, y se preparar para la siguiente fermentacin.
Cuantificacin de la fuente de carbono
Las muestras recuperadas durante el transcurso de la fermentacin se
centrifugarn a 300r.p.m. por 15 minutos, del sobrenadante se determinarn los
azucares reductores por el mtodo cido dinitrosaliclico 3. 5 (DNS).
Centrifugacin
La separacin de las esporas y cristales del medio de fermentacin deber
realizarse en el menor tiempo posible para que los cristales sean ms estables a
la luz solar 1.
Despus de la fermentacin se realizara una separacin solido-liquido en una
centrifuga de discos. La centrifugacin (CD-270) separa los slidos del lquido de
fermentacin, sin embargo, an quedarn residuos slidos indeseables, estos
residuos son solubles en fosfatos, por lo que al terminar la centrifugacin se
realizara un lavado de la torta con buffer de fosfatos 0.01 M a pH 7 para
38
eliminarlos y as recuperar producto lo ms puro posible. La salida de los slidos

(TBT-280) de inters tendr un contenido de humedad del 57%, lo que es
importante para bombear la torta hasta el secador 16.
Secado
El siguiente paso es el proceso de secado por aspersin (S-310), este consiste en
eliminar el agua que envuelve a los slidos y que no pudo eliminar la centrifuga.
La lechada es trasladada por una bomba de desplazamiento positivo. El secador,
constar de una unidad de calentamiento, cmara de secado y un vrtex o cicln.
La lechada es atomizada por un disco centrfugo que gira a 40,000 r.p.m. en el
interior de la cmara de secado, donde se evaporar el contenido de humedad por
medio de aire caliente a 90C 16,19.
La recoleccin del producto seco es por medio del cicln tipo vrtex, este separa a
los slidos del aire que es eliminado a la atmosfera por medio de un soplador.
Mezclado de formulacin
El polvo que sale del secador se pesa y se traslada en recipientes hacia el
mezclador (MP-350) de la formulacin, los ingredientes inertes: Kaoln, talco,
almidn (FM-340) y lignosulfonato (FP-330) siguen el mismo procedimiento. El
mezclador se llena hasta al 50% del volumen total
16
, este gira a 40 r.p.m. durante
30 minutos. Al trmino de la operacin se descargan los polvos por la parte inferior

del equipo.
39
Envasado
La mezcla de polvos es trasladada en recipientes hacia la empaquetadora (E-360),
que contiene en la parte superior una dosificadora de polvos, estos caen por
gravedad y la empaquetadora abre, corta y cierra el envase, que son bolsas de
coextruccin de polipropileno lo cual garantiza su resistencia a la accin fsica y
qumica del bioinsecticida protegindolo a su vez de los rayos UV, adems este
material no sufre cambios a las condiciones atmosfricas como presin,
temperatura y humedad y permite un fcil vertido del producto.
40

Diagrama 1: Proceso de elaboracin de bioinsecticida a base de Bacillus thuringiensis
41
Las variables a controlar en el proceso de produccin son, como el pH, aireacin,

agitacin y temperaturas. El control de estas ser de forma automatizada de modo
que lo que ser importante ah, es verificar que el quipo involucrado est
funcionando conforme a los requisitos especificados (ver diagrama 2),
Diagrama 2: Indicacin de puntos critico de produccin
42
43
5.
DIAGRAMA DE
PROCESO
Diagrama 3: Proceso de obtencin de bioinsecticida a base de B.T
44
6. PARAMETROS DE CONTROL
Tabla 3: Caractersticas y condiciones del fermentador lote agitado de 5,616.75 L de volumen
de operacin utilizados durante el escala miento para la produccin de Bacillus
thuringiensis cepa GC-9 6.
PARMETROS DE CONTROL
KLa
Motor de agitacin
Volumen
VVM
Presin de entrada al reactor
Presin del fermentador
Presin de la lnea de aire
Temperatura
Flujo de Aire
pH inicial y final
Tiempo de fermentacin
Porciento de inoculo
Agitacin (r.p.m.)
FERMENTADOR 5,616.75L
1.78023x10-4 s-1
1,503.11 W
5,616.75 L
1 vvm
29.50Kpa
14.75Kpa
2.85kg/cm2
30 0C
2.3x10-3 m3/s
7.0-7.0
30h
1.0
100
45
7. CARACTERISTICAS DE LOS EQUIPOS

Tabla 4: Ficha tcnica del tanque de almacenamiento
Equipo
Tipo de fluido
Capacidad nominal
Capacidad de trabajo
Posicin
Altura
Dimetro
Cdigo
Presin
Temperatura
Modelo
Material
Esfuerzo permisible
Tanque de almacenamiento
Glucosa, fuente de nitrgeno
1003.131 Lt
SE REALIZA AL 80%
Horizontal
2.40 m
0.80 m
ASME
101352.825 Pa (14.7 psia)
40C (104F)
Tam46
Acero inoxidable y base de acero al
carbn
120,747,756.8 Pa (17513 psia)
46
Tabla 5: Ficha tcnica del tanque de mezclado
Equipo
Capacidad
Posicin
Altura
Dimetro
Cdigo
Presin
Temperatura
Consumo de energa
Modelo
Material
Esfuerzo permisible
Tanque de mezclado
1,699.6446 Lt
Vertical
12.69 m
0.89 m
ASME
101,352.825 Pa (14.7 psia)
30C (86F)
Reactor principal 152.30 KW/h
Reactor semilla
4.47 KW/h
TAM525
carbn
120,747,756.8 KPa
47
Tabla 6: Ficha tcnica del agitador
Equipo
Temperatura
Modelo
Densidad
Viscosidad
Tipo
Velocidad
Potencia
Voltaje
Material
Altura de la flecha
Agitador
30C (86F)
PG-12
1033kg/m3
1.055 cP
Propela marina
200-250 rpm
0.7456 KW (1Hp)
220 V
Acero inoxidable
0.89 m
48
Tabla 7: Ficha tcnica del tanque fermentador semilla
Equipo
Fabricante
Modelo
Presin
Potencia elctrica, (W)
Material
Temperatura mxima
Capacidad de trabajo
Capacidad
Posicin
Altura
Dimetro
Tipo agitador
Potencia del impulsor
Cdigo
Presin
Temperatura
Esfuerzo permisible
Modelo
Material
Tipo
Fermentador semilla
Chemap
GF007
1.51987 KPa (0-15 psi)

9
Acero inoxidable y partes de vidrio

130C (266F)
50 litros
179. 049 Lt
Vertical
1.27 m
0.42 m
Turbina
3.17 KW (4 Hp)
ASME
39.415 KPa (389 psia)
30C (86F)
1,589,586 KPa(15 688 psia)
RAL357
carbn
SA-240 TP304
49
Tabla 8: Ficha tcnica del tanque fermentador principal
Equipo
Capacidad
Posicin
Altura
Dimetro
Tipo agitador
Cdigo
Presin
Temperatura
Esfuerzo permisible
Modelo
Material
Tipo
Fermentador principal
3,575.31 Lt
Vertical
3.44 m
1.14 m
Turbina
3.17 KW (4 Hp)
ASME
146,617 KPa (144 psia)
30C (86F)
1,588,472 KPa (15 677 psia)
RAM424
carbn
SA-240 TP304
50
Tabla 9: Ficha tcnica de la centrifuga de discos
Equipo
Flujo a manejar
Viscosidad
Dencidad
Tamao de partcula
Temperatura
Flujo
Presin
Velocidad
N de platos
Potencia
Consumo de energa
Eficiencia
Voltaje
Material
Centrifuga de discos
Caldo de fermentador
0.0064 kg/ms
1.026 g/cm3
0.5 500 micras
30C (86F)
1 m3/h
1.03 kg/cm2
7 500 rpm
60
22.37 KW (30 Hp)
66.1 KW/h
0.97
440 V
Acero inoxidable
51
Tabla 10: Ficha tcnica del secador por aspercin
Equipo
Temperatura de entrada
Temperatura de salida de aire
Material a secar
Flujo de aire
Flujo de material seco
Potencia
Consumo de energa
Altura
Voltaje
Material
Secador por aspersin

65.5C (150F)
26.6C (80F)
Esporas y cristales B.t
250 ft3/min
12.5 kg/h
3.72 KW (5 Hp)
26.95 KW/h
2m
Trifsico
Acero inoxidable
52
Tabla 11: Ficha tcnica de la empaquetadora
Equipo
Largo
Altura
Velocidad
Consumo de energa
Voltaje
Consumo de energa
Paquetes por hora
Modelo
Empaquetadora
2m
2m
2 400 operaciones por hora
0.3728 KW (0.5 Hp)
220 V
18 KW/h
180
Alimentador: A2.1
Limpiadora: L4.2
Llenadora de pistones: LL4.5
53
Tabla 12: Ficha tcnica de la caldera
Equipo
Evaporacin equivalente
Presin de operacin de vapor
Presin normal de alimentacin
Consumo de gas
Suministro de calor
Contenido de agua
Dureza de agua
Largo
Ancho
Peso
Caldera
1 565 Kg/h
7 19.3 Kg/h
11.2 21 Kg/h
7.456 KW (10 Hp)
843 235 Kcal
40 Lt
Menor a 30ppm
2.03 m
1.245m
1 810 Kg
54
Tabla 13: Ficha tcnica de la bomba centrifuga
Equipo
Flujo a manejar
Flujo de diseo
Flujo mnimo
Carga
Viscosidad
Presin de succin
Eff mec.
Temperatura de bombeo
Potencia hidrahulica
Potencia al freno
Consumo de energa
Eficiencia
Material
Posicin
N. pasos
Codigo
Lubricacin
Bomba centrifuga, agua, hidrolizado de

harina de soya, licor de maz y sales.
Caldo de fermentacin, inoculo
10 m3/h
0.5 m3/h
61.56 m
0.0064 Kg/ms
1 Kg/cm2
70%
30C
0.3728 KW (0.5 Hp)
0.61 KW (0.83 Hp)
0.03 KW/h
70%
Acero inoxidable
Horizontal
1
ANSI
Aceite
55
Tabla 14: Ficha tcnica dela bomba de desplazamiento positivo
Equipo
Flujo a manejar
Flujo de diseo
Flujo mnimo
Carga
Viscosidad
Eff mec.
Potencia hidrulica
Potencia al freno
Consumo de energa
Eficiencia
Material
Posicin
Accionamiento
Codigo
Bomba de desplazamiento positivo

Glucosa
1.63 m3/h
0.5 m3/h
7.09 m
6.6 Kg/ms
60%
0.5 Hp (0.37kW)
0.83
0.39 KW/h
70%
Acero inoxidable
Horizontal
120 V
ANSI
56
Tabla 15: Ficha tcnica del sedimentador.
Equipo
Flujo a manejar
Material
Temperatura
Velocidad
Radio del tanque
Profundidad
Sedimentador
Caldo fermentativo principal
Acero inoxidable
25 C
57
Tabla 16: Ficha tcnica del mezclador de pantaln (mezclador V)
Equipo
Flujo a manejar
Capacidad
Posicin
Potencia del motor
Voltaje
Tiempo de mezclado
Dimensiones
Capacidad
Dimetro del cilindro
Material
Consumo de energa
Mezclador V
B.t y formulacin
0.165 m3
Vertical
(3 Hp)
Trifsico
30 min
1.7 x 1.3 m
0.3 m3
0.5 m
Acero inoxidable
2.31 KW/h
58
8. IDENTIFICACIN DE EQUIPOS CLAVE

El biorreactor por lote y agitado es el equipo clave ya que el crecimiento
microbiano est determinado por la concentracin de nutrientes disponibles en los
medios de cultivo.
La fase de esporulacin esta normalmente inducida por la falta de elementos
nutricionales en el medio de cultivo. El ciclo de crecimiento involucra cuatro fases
que son: adaptacin, fase logartmica, fase estacionaria y fase de muerte. Durante
la fase estacionaria se produce simultneamente la endoespora de resistencia y el
cristal para espora o cristal Cry.
El tipo de reactor a disear es el reactor por lotes de clulas libres de tanque
agitado, dado a que este opera con un flujo de estado estable y la homogenizacin
del medio son uniformes en todo el volumen del recipiente, proporcionando las
condiciones de transferencia de oxgeno en el medio adecuadas y la generacin
del calor metablico es reducido gracias a su agitador.
Las condiciones de operacin del agitador proporcionan una fuerza centrfuga que
radica en el rango de 240 rpm, esto beneficia a la biomasa utilizada y al producto
obtenido, ya que no se ven afectadas sus propiedades y estructuras de las
mismas.
Los reactores utilizados podrn cubrir con la demanda de la empresa y adems se
podrn encontrar dentro de la nave industrial y as prolongar la vida de los
mismos.
Las condiciones de operacin del reactor por lotes permiten una
adecuada
homogenizacin del medio y no causan dao sobre la morfologa del producto y

biomasa presentes.
59
El empleo de melaza de caa permite obtener un mayor rendimiento.

El empleo de un agitador de 3 hlices con orificios axiales permite una mayor
difusin y homogenizacin del medio y el oxgeno.

El empleo de agua como agente refrigerante es adecuado, dado a que no se
genera costo alguno, y adems, se reutiliza el agua para la limpieza y la
esterilizacin del reactor, provocando que no se tenga que transferir ms
temperatura al agua de lavado.
El intercambiador de calor utilizado es el ms adecuado dado que no se genera

demasiado calor metablico y por consiguiente no se necesita de un
intercambiador que requiera ms rea de intercambio, por lo que el costo del
serpentn es relativamente econmico.
60
9. PRODUCTIVIDAD DEL PROCESO

Produccin:
Se recomienda 2Kg por hectrea por lo cual tenemos
4,452 ha x 2 Kg=8,904 Kg/ha
Se realizaran tres aplicaciones una diaria y tres aplicaciones anuales entonces
tenemos que: 8,904 Kg x 3das = 26,712Kg x 3 veces = 80,136Kg/ao
Tiempo total de produccin por lote
4,635 min=77 hrs y 15min= 1Lote
Se trabajan 3 turnos de 8hrs
Se laboran 306 das x 24hrs=7,344hrs/77.5 hrs = 94 Lotes/ao
80,136Kg/ao / 94 Lotes/ao = 852.5Kg/Lot
Formulacin
Bt
Portador
Coadyuvante
Protector
Fijador
5%
75%
14%
2.5%
3.5%
43 Kg
639 Kg
119 Kg
21 Kg
30 Kg
Escalamiento y rendimientos de:

Secador 98% rendimiento
43 x 100=4,300/98= 44Kg
Tanque de almacenamiento de Bt 98% rendimiento
44 x 100=4,400/98 =45Kg
Centrifuga de discos 99% rendimiento
45 x 100=4,500/99=45.5Kg
Sedimentador 90% rendimiento
45.5 x 100=4,550/90=50.5Kg
Fermentador de produccin 99.5% rendimiento
50.5 x 100=5,050/99.5= 51Kg
Capacidad del fermentador
1< 4.54 g
X= (51,000g x 1Lt)/ 4.54g= 11,233.5 Lt
X 51,000 g
X=11.2335 m3
Dado este resultado se decide utilizar 2 fermentadores de produccin de 15m 3

trabajando a una capacidad del 37.5% (5.61675 m 3
61
El fermentador semilla solo representa el 5% del reactor de produccin, por lo cual

se decide tener dos reactores de 0.5m 3, los cuales se trabajaran a un 56.2%
teniendo un total de produccin de 0.28084m 3 de inoculo por cada reactor.
Tabla 17: Parmetros de rendimiento.
ETAPAS
Mesclador
Secado
Tanque de la
crema
Centrifuga de
discos
Sedimentador
Reactor principal
10.
KG ENTRADA
44
45
KG DE SALIDA
43
44
MERMAS
1
1
45.5
45
0.5
50.5
45.5
51
51
50.5
51
0.5
0
MEMORIA DE CLCULO
10.1 DIMENSIONES DEL REACTOR

Los tanques operan al 80% de su capacidad
11.23 m3 - 80% por lo tanto el 100% - 14.03 m3
Se opta por usar un reactor con un volumen nominal de 15 m 3 por lo tanto con
11.23 m3 su volumen de operacin ser al 75%.
10.1.1 Diseo del reactor semilla
El reactor semilla es un 5% del fermentador principal en su volumen nominal.
Vn = 15 m 3
Volumen nominal del reactor semilla = 0.75 m3
Por lo tanto el volumen de operacin del reactor semilla ser el 75% del volumen
nominal.
Volumen de operacin reactor semilla = 0.563 m 3
62
Geometra recomendada por Urlich
HL=
Dt=
P=
2.05 m
0.683 m
2.145 m
10.2 Diseo del impulsor

Di= Dimetro del impulsor
Dt= Dimetro del tanque
Di/Dt = 1/3
Di = Dt/3
Di = 0.228 m
HF= Altura de la flecha = HL- Di = 1.822 m

Hb = Al tura de bafles
Hb/Di = 1
Hb = 0.228 m
Hb = Di
Wb = Ancho de baffles
Wb/Dt = 0.1
Wb = 0.0683 m
Wb = 0.1*Dt
Nb = Nmero de bafles = 4
Calculo del nmero de impulsores
h = Altura del liquido
Vop = 0.563 m3
h = 1.86 m
h/Dt = 2.72 m
63

menores a 2500 cP y h/Dt 0-2.7 el Nmero de impulsores es 3.
L1 = Distancia de la punta de la flecha al primer impulsor
L1 = Dt/3
L1 = 0.228 m
L2 = Distancia del segundo impulsor
L2 = h/3
L2 = 0.62 m
L3 = Distancia del tercer impulsor
L3 = 2*h/3
L3 = 1.24 m
Comercialmente la potencia recomendada es de hp
10.3 Diseo del reactor principal
Vn = Volumen nominal
Dt = Dimetro del reactor
Vn= 15 m 3
Vop = 11.23 m 3 al 75%
HL = Altura del reactor

P = Permetro
Geometra recomendada por Ulrich
HL=
Dt=
P=
5.56 m
1.853 m
5.8 m
10.4 Diseo del impulsor

Di= Dimetro del impulsor
Di/Dt = 1/3
Di = Dt/3
Di = 0.617 m
HF= Altura de la flecha = HL- Di = 4.943 m

64
Hb = Al tura de bafles
Hb/Di = 1
Hb = 0.617 m
Hb = Di
Wb = Ancho de baffles
Wb/Dt = 0.1
Wb = 0.1853 m
Wb = 0.1*Dt
Nb = Nmero de bafles = 4
Calculo del nmero de impulsores
h = Altura del liquido
Vop = 0.563 m3
h = 5.048 m
h/Dt = 2.724 m

menores a 2500 cP y h/Dt 0-2.7 el Nmero de impulsores es 3.
L1 = Distancia de la punta de la flecha al primer impulsor
L1 = Dt/3
L1 = 0.617 m
L2 = Distancia del segundo impulsor
L2 = h/3
L2 = 1.682 m
L3 = Distancia del tercer impulsor
L3 = 2*h/3
L3 = 3.365 m
Comercialmente la potencia recomendada es de 4 1/2 hp
65
10.5 Balance de materia en el fermentador principal

Se decide utilizar 2 fermentadores de produccin de 15m 3 trabajando a una
capacidad del 37.5% (5.61675 m3) para poder cubrir nuestro mercado potencial
despus de 5 aos.
W Medio j Rowe
W Medio de harinade soya
W agua
W Biomasainicial
W Biomasa final
W Slidos residuales
W Slidos solubles y agua
Concentracin final de biomasa en el fermentador principal

[biomasa]
4.54 g/L
Biomasa a la entrada
Volumen de inoculo
W Medio J. Rowe
W Medio Harina de soya
W Agua
W biomasa inicial
W total
0.283 m 3
114.877 kg
156.5 kg
5293.6 kg
1.28 kg
5566.257
W solidos suspendidos + Biomasa+ W solidos solubles y agua= W total

W biomasa = V medio fermentado * [biomasa]
V medio fermentado
5616.75 L
W biomasa
25.5 kg
W total W biomasa = W solidos suspendidos + W solidos solublres + agua

W total W biomasa = 5591.25 kg de slidos y agua
66
10.6 Determinacin del coeficiente volumtrico de transferencia de Oxigeno

El coeficiente global de transferencia de masa de oxgeno para aireacin.
Kla =2 x 103
P0
Vf
0.7
( )
UG 0.2
Dnde:
Po: Potencia
1503.11 W
Vf: Volumen de operacin
5616.75 L
UG: Velocidad sup. del gas en el liquido

UG= Qg/rea de seccin transversal
Qg= 0.00152 m3/s
Flujo del soplador
Area transversal= r2 = 2.696 m2

UG= 5.636 x10-4 m/s
KLa= 1.78023x10-4 s-1
67
11.
PROCESO FERMENTATIVO
11.1 JUSTIFICACIN DEL MEDIO DE CULTIVO

Se han formulado diferentes medios de cultivo prometedores; sin embargo, el
factor econmico suele ser una limitante para su mayor aprovechamiento. De los
medios de cultivos descritos, ninguno llega a ser consistentemente mejor que los
dems, en virtud de que las diferentes variedades de Bacillus thuringiensis se
adaptan en mayor o menor grado a estos medios de cultivo 19.
La composicin del medio de cultivo es muy importante para la produccin de
cristales y esporas Bt; la seleccin del medio de cultivo se bas en la revisin
bibliogrfica y se opt por usar un medio que cuente con las caractersticas del
medio descrito por Dulmage (1970) al cual se le denomin medio 1 (medio control)
compuesto de glucosa, extracto de levadura, harina de soya y sales minerales 19.
Para las fermentaciones realizadas con Bacillus Thuringiensis, se procede a la
preparacin de dos medios de propagacin, los cuales son: medio Jerry Rowe
(tabla 17) y el de Harina de Soya (tabla 18), que cuentan con las caractersticas
antes mencionadas 4.
68
Tabla 18: Medio Jerry Rowe
Componente
Glucosa
Peptona de casena
Extracto de levadura
Cloruro de calcio dihidratado
Cloruro de Potasio
Sulfato de Magnesio heptahidratado
Sulfato manganoso
Sulfato de zinc heptahidratado
Sulfato de cobre pentahidratado
Citrato frrico
Fosfato de sodio dibsico anhidro
Fosfato de sodio monobsico monohidratado
Antiespumante Mazu DF
Para 1 litro en gramos

10
3.2
3.2
0.106
0.5
0.3
0.05
0.0075
0.0045
0.075
1.856
1.153
1 ml
69

Tabla 19: Medio de Harina de Soya
Componente
Para 1 litro
en gramos
Glucosa
13.42
Harina de soya
4.52
Extracto de levadura
2.59
Slidos de cocimiento de maz 4.05
Sulfato de manganoso
0.04
Sulfato
de
magnesio 0.2
heptahidratado
Sulfato de zinc heptahidratado 0.0058
Sulfato
de
cobre 0.0075
pentahidratado
Cloruro de calcio
Cloruro
de
0.03
cobalto 3
hexahidratado
Sulfato
ferroso 0.0135
heptahidreatado
cido fosforito al 85%
Antiespumante Mazu DF
7 ml
1 ml
Formulacin
Una formulacin biolgica (tabla 19) consta de una combinacin de ingredientes
naturales que incluye un ingrediente activo y otros componentes formando un
producto estable, seguro y fcil de aplicar sobre cualquier tipo de cultivo atacado
por insectos plaga 8.
En toda formulacin independientemente al uso que se destine cabe distinguir tres
tipos principales de componentes
8,17
Materia o principio activo: Que es el responsable de la actividad toxica.
70
Disolventes o portadores: Actan como vehculo de la materia activa, estos

pueden ser solidos o lquidos que permiten usar el formulado diluyndolo
posteriormente en el otro vehculo de aplicacin que comnmente es agua.
Coadyuvantes: Ayudan a mejorar la eficacia del principio activo en el cumplimiento
de su cometido a mejorar su accin.
Tabla 20: Formulacin
Ingredientes
Bacillus thuringiensis
Kaoln
Almidn
Lignosulfonato
Talco
Cantidad (%)
5
75
14
2.5
3.5
Funcin
Principio activo
Portador
Coadyuvante
Protector UV
Portador
Tabla 21: Propiedades fisicoqumicas de la formulacin de Bt
Polvo
Color
pH
Temperatura
Textura
Solubilidad
Humectable
Blanco Ligeramente amarillento
7 (+/- .5)
10-40 C
Polvo fino
Muy soluble en agua
71
1
CINETICA DE LA FERMENTACIN
Crecimiento de Bacillus thuringiensis (lnea azul) durante la cultivacin en 10 g/L
de glucosa (lnea rosa), con produccin de biomasa de 4.54 g/L.
En la grfica 1 se puede observar un crecimiento drstico de biomasa despus de
2 a 6 h. Durante la actividad de crecimiento (0 a 6 h) se observa una drstica
reduccin de glucosa. La formacin de esporas fue iniciando lentamente a las 6 h
e incrementando rpidamente a partir de las 10 h.
Grafica 1: Cintica de crecimiento de Bt en una produccin de 5L4.
8.00E+08
12
7.00E+08
10
6.00E+08
8
5.00E+08
Bacilos / m L
4.00E+08
Promedio Bacilos
3.00E+08
Esporas
Glucosa
g/L
2.00E+08
2
1.00E+08
0.00E+00
0
0
10
15
20
25
30
Edad Horas
72

Tabla 22: Efecto del sustrato en el crecimiento y desarrollo de esporas en Bt 4.
Horas
0
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
12
14
16
18
20
22
Promedio
Bacilos
1.30E+07
1.13E+07
2.20E+07
1.40E+08
2.78E+08
3.95E+08
1.55E+09
1.35E+09
1.15E+09
1.58E+09
1.83E+09
1.93E+09
1.50E+09
1.98E+09
1.50E+09
1.13E+09
1.20E+09
Prom. esporas
1.25E+08
3.00E+08
2.75E+08
3.75E+08
4.00E+08
5.00E+08
6.00E+08
7.25E+08
4.50E+08
4.25E+08
4.00E+08
Bacilos
2.00E+09
1.50E+09
Bacilos / m L
f(x) = 4844329.35 exp( 0.95 x )

Exponential ()
R = 0.94
1.00E+09
5.00E+08
0.00E+00
1.5
2.5
3.5
4.5
5.5
6.5
Horas
Grafica 2: Velocidad mxima de crecimiento () 4.
73
12.
CARACTERIZACIN DEL EQUIPO CLAVE
12.1 CARACTERIZACIN HIDRODINMICA

Reactor semilla
Los regmenes laminar, transitorio y turbulento son importantes y deben tomarse
en cuenta para el diseo de equipo de mezclado para obtener buenos resultados.
Un nmero utilizado es el nmero de Reynolds.
El Nmero de Reynolds NRe para tanques agitados viene dado por:
NRe = NDi2 /
Dnde:
Di = dimetro del impulsor, m
= densidad del fluido, Kg/m3
= Viscosidad, kg/m*s
= velocidad del agitador, rps
N= 100 rpm
N= 1.6 rps
Di = 0.228 m
= 0.484 kg/m*s
= 1026 kg/m3
NRe = NDi2 /
NRe= 176
10 < Re < 10000: Rgimen transitorio16,18
De la grfica de NRe Vs Np 5,18
Np= 4
Nmero de Potencia = esfuerzo de frotamiento / esfuerzo de inercia
Np= P/ N3Di5
74
P= Np N3Di5
P = 199.237 W
Reactor principal
N= 100 rpm
N= 1.6 rps
Di = 0.617 m
= 0.484 kg/m*s
= 1026 kg/m3
NRe = NDi2 /
NRe= 1291
10 < Re < 10000: Rgimen transitorio5,18
De la grfica de NRe Vs Np5,18
Np= 4
Nmero de Potencia = esfuerzo de frotamiento / esfuerzo de inercia
Np= P/ N3Di5
P= Np N3Di5
P = 1503.11 W
75
13.
REFERNCIAS
1. Carreara, M. (2009). Tesis: Produccin de Bacillus thuringiensis, Berliner a
nivel de laboratorio.Extrado el 16 de Septiembre, 2013 del sitio web:

http://dspace.espoch.edu.ec/bitstream/123456789/214/1/56T00188.pdf
2. Chavez, D. (2012). Tesis: Produccin en matraz agitado de un
bioinsecticida y formacin microencapsulada. Divisin de Biotecnologa.
UTTEC. Edo. Mx., Mxico.
3. Dynora V. (2007) Laboratorio de birreactores manual de prcticas. IPN,
Mxico D.F pp. 75-78
4. Eduardo R. (2005) Estancia industrial en planta piloto de Biotecnologa del
CINVESTAV-IPN. Mxico D.F.
5. ESTUDIO TERICO EXPERIMENTAL DE LA AGITACIN. Extrado el 28
de
Octubre
de
2013
del
sitio
web:http://www.unizar.es/dctmf/jblasco/AFTAgitacion/AFT20040606.htm
6. Galn, L. 1993. Seleccin de cepas nativas y de extractos de fermentacin
de Bacillus thuringiensis contra Trichoplusia ni (Hbner) y Heliothis
virescens(Fabricius)
(Lepidptera:
Noctuidae).
Facultad
de
Ciencias
Biolgicas. UANL. Monterrey N.L., Mxico. Extrada el 12 de Septiembre,

2013 del sitio web: http://eprints.uanl.mx/1359/
7. Gmez, T.M. (1989). Tesis: La delta-endotoxina de Bacillus thuringiensis
GM-2.Extrada el 13 de Septiembre, 2013 del sitio web:
http://eprints.uanl.mx/2317/1/1020091389.PDF
8. Guillermo C. (1996) Tesis: Produccin de cepas de Bacillus thuringiensis
con actividad biolgica modificada. UANL. Extrado el 2 de octubre del 2013
del sitio web:
9. Gutirrez, G. (2003). Tesis: Seleccin y evaluacin de cepas nativas de
Bacillus thuringiensis contra Heliothis zea (Boddie) y Spodoptera exigua
(Hbner).
Extrado
el
18
de
Septiembre,
2013
http://cdigital.dgb.uanl.mx/te/1020091320.pdf
10. Lara, I. (2008).Cultivo de Bacillus thuringiensis
del
y su
sitio
web:
uso como
bioinsecticida. Mxico. Extrado el 17 de Septiembre, 2013 del sitio web:
76
http://es.scribd.com/doc/8961317/Cultivo-de-Bacillus-thuringiensis-y-su-usocomo-bioinsecticida
11. Llagostera, M. (2007). Estudio de la ecologa de Bacillus thuringiensis en la
hoja. Barcelona. Extrado 15 de Septiembre, 2013 del sitio web:
http://ddd.uab.cat/pub/tesis/2008/tdx-1114108-121631/pms1de1.pdf
12. Norma S. (2009) Fisiologa de microorganismos manual de laboratorio. Ed.
Trillas, Mxico D.F. pg.32
13. Palacios, L. (1993). Tesis: Aspectos de la Fermenacion de Bacillus
thuringiensisvar.
tesis].Extrada
Aizawaianivel
el
13
de
planta
semipiloto.
Septiembre,
2013
[Revisin
del
sitio
de
web:
http://cdigital.dgb.uanl.mx/te/1020091315.PDF
14. Pauline m. Bioprocess enginering principles, academic press, 2ed. 2013 pp
116-127
15. Ponce, E. (1995). Recuperacin de cepas HD de Bacillus thuringiensis, su
propagacin en 14 medios de produccin y la evaluacin de la actividad

toxica
contra
Trichoplusia
ni
(Hbner)
Heliothis
virescens(Fabricius).Extraido el 14 de Septiembre, 2013 del sitio web:

http://cdigital.dgb.uanl.mx/te/1080072493.pdf
16. Reynold F. R. (1990) Tesis: Sntesis de un proceso para produccin de
Bacillus thuringiensis. Trabajo predoctoral. CINVESTAV, Mx. D.F.
17. Sauka, D. (2008). Bacillus thuringiensis: generalidades. Un acercamiento a
su empleo en el biocontrol de insectos lepidpteros que son plagas
agrcolas.
Extrado
el
20
de
Septiembre,
2013
del
sitio
web:
http://www.scielo.org.ar/pdf/ram/v40n2/v40n2a13.pdf
18. Simulacin de una turbina radial mediante CFD FLUENT: caso de una
turbina Rushton. Extraido el 25 de Octubre de 2013 del sitio web:
https://upcommons.upc.edu/pfc/bitstream/2099.1/3166/1/55133-1.pdf
19. Valenzuela,
E.
(1987).
Microorganismos
entomopatgenos:
su
aprovechamiento en el control de insectos plagas. Univ. Aut. Chapingo,

Mxico.
20. Velasco, F. (2010) Tesis: Estudio de los niveles de expresin temporal gen Cry1
en aislados nativos mexicanos de Bacillus thuringiensis. Extrado el 20 de
Septiembre, 2013 del sitio web:
http://itzamna.bnct.ipn.mx/dspace/bitstream/123456789/8660/1/133.pdf
77
78

Producción Bacillus Thuringiensis

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PRODUCCIN DE BIOINSECTICIDA A PARTIR DE B.

PRODUCCIN DE BIOINSECTICIDA A PARTIR DE B. THURINGIENSIS

PLANTEAMIENTO DEL PROCESO................................................................31

PRODUCCIN DE BIOINSECTICIDA A PARTIR DE B. THURINGIENSIS

Cuantificacin de la fuente de carbono............................................................35

10.1 DIMENSIONES DEL REACTOR..................................................................58

11.1 JUSTIFICACIN DEL MEDIO DE CULTIVO...............................................64

11.1 Balance estequiometrico del bioproceso......................................................70

CARACTERIZACIN DEL EQUIPO CLAVE.................................................72

12.1 CARACTERIZACIN HIDRODINMICA.....................................................72

PRODUCCIN DE BIOINSECTICIDA A PARTIR DE B. THURINGIENSIS

PRODUCCIN DE BIOINSECTICIDA A PARTIR DE B. THURINGIENSIS

Figura 7: Microfotografa de B. thuringiensis en microscopio electrnico de transmisin. Se

PRODUCCIN DE BIOINSECTICIDA A PARTIR DE B. THURINGIENSIS

PRODUCCIN DE BIOINSECTICIDA A PARTIR DE B. THURINGIENSIS

Tabla 9: Ficha tcnica de la centrifuga de discos........................................................................47

Grafica 1: Cintica de crecimiento de Bt en una produccin de 5L 4.........................................68

PRODUCCIN DE BIOINSECTICIDA A PARTIR DE B. THURINGIENSIS

Produccin de Bacillus thuringiensisVar. Aizawai como una herramienta

En 1880, Metchnikoff reitero sus creeencias en el uso de hongos para el control de

entomopatgenos. Por otra parte Bolle (1894-1898) asocio los cuerpos

PRODUCCIN DE BIOINSECTICIDA A PARTIR DE B. THURINGIENSIS

piramidales de la ictericia del gusano de seda con el agente causal de la

PRODUCCIN DE BIOINSECTICIDA A PARTIR DE B. THURINGIENSIS

las piretrinas naturales

crisantemo), los microorganismos entomopatgenos nos seguirn siendo tiles;

PRODUCCIN DE BIOINSECTICIDA A PARTIR DE B. THURINGIENSIS

PRODUCCIN DE BIOINSECTICIDA A PARTIR DE B. THURINGIENSIS

perdidas econmicas en la agricultura en Mxico, al de ser una

alternativa de menor impacto ecolgico se pretende sustituir el uso de insecticidas

PRODUCCIN DE BIOINSECTICIDA A PARTIR DE B. THURINGIENSIS

(escarabajos), dpteros (mosquitos), himenpteros (hormigas); caros y otros

PRODUCCIN DE BIOINSECTICIDA A PARTIR DE B. THURINGIENSIS

En medios de cultivo convencionales las colonias se observan en forma circular

PRODUCCIN DE BIOINSECTICIDA A PARTIR DE B. THURINGIENSIS

Figura 1 : Vista macroscpica de Bacillus thuringiensis despus de 24 horas de incubacin

La principal caracterstica de la bacteria es que est constituida por protenas

B. thuringiensis pertenece a la familia de Bacillaceae y se ubica dentro del grupo 1

PRODUCCIN DE BIOINSECTICIDA A PARTIR DE B. THURINGIENSIS

Existen plagas de lepidpteros que causan daos graves en el campo nacional y

Sugerido para control

El biocontrol de implica el uso de enemigos naturales de los insectos plaga, donde

Tabla 1: Principales bacterias entomapatgenas.4

PRODUCCIN DE BIOINSECTICIDA A PARTIR DE B. THURINGIENSIS

PRODUCCIN DE BIOINSECTICIDA A PARTIR DE B. THURINGIENSIS

Los bioinsecticidas se dividen en generaciones como lo son:

Bioinsecticidas de segunda generacin

PRODUCCIN DE BIOINSECTICIDA A PARTIR DE B. THURINGIENSIS

Bioinsecticidas de tercera generacin

PRODUCCIN DE BIOINSECTICIDA A PARTIR DE B. THURINGIENSIS

Tabla 2: Bioinsecticidas de primera generacin txicos para lepidpteros disponibles en el

PRODUCCIN DE BIOINSECTICIDA A PARTIR DE B. THURINGIENSIS

En la figura 2 se muestra en nivel de accin de cada protena Cry ay a qu tipo de

PRODUCCIN DE BIOINSECTICIDA A PARTIR DE B. THURINGIENSIS

PRODUCCIN DE BIOINSECTICIDA A PARTIR DE B. THURINGIENSIS

B. thuringiensis se clasifica en 84 serovares mediante serologa del antgeno

Cuadro 3: Clasificacin de B. thuringiensis de acuerdo al antgeno H.

PRODUCCIN DE BIOINSECTICIDA A PARTIR DE B. THURINGIENSIS

PRODUCCIN DE BIOINSECTICIDA A PARTIR DE B. THURINGIENSIS

Figura 3: Ciclo de vida de B. thuringiensis20.

Fase de crecimiento exponencial (tropofase)

PRODUCCIN DE BIOINSECTICIDA A PARTIR DE B. THURINGIENSIS