AISLAMIENTO DE LA Pseudomona fluorescens

KALIPSO GONZALEZ PETRO

ALBA RINCON MORA
MISHEL RUBIO FABRA
DIEGO SEGURA

YENIS PASTRANA (INGENIERA DE ALIMENTOS)

UNIVERSIDAD DE CRDOBA
FACULTAD DE INGENIERAS
PROGRAMA INGENIERA DE ALIMENTOS
ASIGNATURA MICROBIOLOGA GENERAL
BERASTEGUI - CRDOBA

17 de septiembre de 2014

MARCO TEORICO
Las Pseudomona fluorescens son bacilos Gram negativos mviles rectos o ligeramente
curvados (0.5 a1 x 1.5 a 5 micrmetros) que suelen disponerse en parejas. Estos
microorganismos no son fermentadores y utilizan los hidratos de carbono a travs del
metabolismo respiratorio en el que el oxgeno acta como aceptor terminal de electrones.
Aunque se definen como aerobios estrictos, pueden crecer de forma anaerobia utilizando
nitrato o arginina como aceptor terminal de electrones. Adems de esto dichas bacterias
son incapaces de formar esporas; la temperatura ptima para su funcionamiento es de 25
a 30o C, aunque puede crecer desde los 5 hasta los 42 oC aproximadamente. No crece
bajo condiciones acidas (pH<4,5) y necesita preferentemente pH neutro y tiene
movimiento activo en liquido por sus flagelos polares (ms de uno). [1]
La pseudomona fluorescente produce un pigmento amarillo verdoso, soluble en agua,
que se difunde en el medio y da fluorescencia al iluminarlo con la luz ultravioleta. Su
sntesis esta especficamente estimulada por la privacin de hierro lo que refleja su
funcin como sideroforo, o quelador de hierro, que solubiliza el hidrxido frrico
proporcionando hierro soluble. Las pseudomonas del grupo fluorescens no requieren
factores de crecimiento y no sintetizan poli-- hidroxibutirato como material celular de
reserva. Son miembros comunes de la microbiota, del suelo y del agua y, en el aspecto
nutricional, todas presentan una gran versatilidad, siendo capaces de usar de 60 u 80
compuestos orgnicos diferentes como fuente nica de carbono y energa. Por esta
razn, han sido muy estudiadas por los bioqumicos microbianos, como material biolgico
para conocer la especial ruta metablica implicada en el catabolismo de diferentes clases
de compuestos orgnicos.
Las pseudomonas del grupo fluorescens incluyen tambin organismos patgenos para las
plantas, los cuales son autnticos parsitos, fcilmente distinguibles de las especies de
vida libre de suelos y aguas por sus propiedades fisiolgicas y bioqumicas. Son menos
verstiles nutricionalmente y la velocidad de crecimiento, tanto en medios sintticos como
complejos, es mucho menor. [2]
La pseudomona fluorecens es una bacteria que posee la capacidad de disminuir la accin
de fatos patgenos, a travs de la produccin de sideroforos y antibiticos y puede
emplear una gran variedad de sustratos en su metabolismo carbonado. Adems al
inocularlo en el suelo modifica el potencial de reduccin del mismo, su supervivencia se
encuentra favorecida por condiciones reductoras y ligeramente alcalinas. [3]
Dentro del rea alimenticia estas bacterias son muy importantes por:

Su capacidad para producir diversas sustancias que influyen desfavorablemente

en el sabor.
Su capacidad para utilizar alimentos nitrogenados sencillos.
Su capacidad para sintetizar sus propios factores de crecimiento o vitaminas.
La actividad proteoltica y lipoltica de las especies.
Su tendencia aerobia que les permite un crecimiento rpido y producir productos
de oxidacin y mucosidad en aquellas superficies de los alimentos en las que es
mas probable que exista una contaminacin masiva.
Su capacidad para crecer a temperaturas bajas (temperaturas de refrigeracin). [4]

METODOLOGA
El desarrollo de este proyecto se llevara a cabo en el laboratorio de microbiologa general
de la universidad de crdoba sede berastegui, para esto se estima un tiempo pertinente
de aproximadamente dos meses y medio, desde la entrega del proyecto hasta la posterior
sustentacin el 11 de diciembre.
Para este proyecto se tomara una de muestra de yuca para aislar el microorganismo
Pseudomona fluorencens y se realizara una dilucin a partir de un lavado de la concha y
seguidamente se harn los procedimientos oportunos en el laboratorio.
1. Mtodos
1.1.
Cultivo placa agar.
Se utilizara un mtodo de siembra por agotamiento o francs en superficie.
1.1.1. Mtodo por agotamiento o francs.
Es la ms utilizada, porque favorece el aislamiento de colonias y observacin
de las caractersticas del cultivo bacteriano.
1.2.

Cultivo en caldo nutritivo.

El crecimiento de las bacterias en medios lquidos se manifiesta por la
aparicin de: turbidez o sedimento, velo en la superficie del medio y olor
caracterstico. [5]

1.3.
1.3.1.
1.3.2.
1.3.3.

Tinciones [6]
Tincin de Gram
Coloracin de Shaeffer Fulton (esporas)
Coloracin de Hiss (capsula)

1.4.
1.4.1.
1.4.2.
1.4.3.
1.4.4.
1.4.5.
1.4.6.
1.4.7.

Pruebas bioqumicas. [7]

TSI
Citrato
Indol
Rojo de metilo
Descarboxilasa
Nitrato
Motilidad y SH2

2. PROCEDIMIENTO:
2.1.

Preparacin de la muestra

Desinfectar

Tomar

Lugar de trabajo

Muestra de yuca

1 g de la muestra tomada

Balanza

Pesar

Macerar

9 ml de agua
peptonada

2.2.

Diluir

Muestra macerada

Desinfectar

Lugar de trabajo

Enriquecimiento

Nombre del grupo y de

la cepa

Rotular

Encender

Flamear

Tomar

Asa

2.3.

Tubos de ensayo

Mechero

Asa redonda

Inoculo de la muestra diluida

Introducir

Asa con inoculo en

caldo esteril

Flamear

Boca del tubo

Incubar

Por 24 horas a
30 grados

Siembra

2.3.1. Mtodo siembra por agotamiento o francs (AGAR CETRIMIDE)

Desinfectar

Lugar de trabajo

Nombre del grupo y

de la cepa

Rotular

Encender

Caja de Petri con

el medio
CETRIMIDE
Mechero

Flamear

Asa redonda

Extraer

Inoculo del caldo con

la cepa bacteriana

Colocar

Inoculo en uno de los

extremos de la caja con
el medio

Extender

Flamear

Incubar

Hacer 4 o 5 estras
formando un ngulo recto
desde donde se hizo la
primera siembra en zigzag
sobre toda el rea de la
Asa
Por 24 horas a
30 grados

2.3.2. Agar nutritivo

Nombre del grupo y

de la cepa

Desinfectar

Lugar de trabajo

Rotular

Caja de Petri con el

medio agar nutritivo

Encender

Flamear

Extraer

Mechero

Asa redonda
Inoculo del caldo con
la cepa bacteriana

Inoculo en uno de los

extremos de la caja con
el medio

Colocar

Hacer 4 o 5 estras
formando un ngulo recto
desde donde se hizo la
primera siembra en zigzag
sobre toda el rea de la
Asa

Extender

Flamear

Por 24 horas a 37
grados

Incubar

3.

CRONOGRAMA DE ACTIVIDADES

Aislamiento de la pseudomona fruorencens

Actividades

Septiembr
e
17

Octubr
e
28

Noviembre
4

Diciembre
19

Proyecto
Entrega de materiales a utilizar
Preparacin de la muestra a
partir de yuca
Enriquecimiento de la muestra
Siembra por mtodo de
agotamiento
Observacin de los resultados
obtenidos en la siembra
Tincin de Gram
Pruebas bioqumicas
Observacin de los resultados
de las pruebas bioqumicas.
Resultado final (Determinar si es
el organismo que en un principio
se pretenda aislar)
Entrega de artculo.
Sustentacin del articulo.

4.

BIBLIOGRAFA

[1] MURRAY, Patric R, KOBAYASHI, George S, PFALLER, Michael A, ROSENTHAL,

Ken S. Microbiologia medica 2 ed. Ediciones Harcourt, S. A. Madrid Espana. p 357,
362, 363.
[2] STAINIER, Roger Y, INGRAHAM, John L, WHEELIS, Mark L, PAINTER, Page R.
MICROBIOLOGIA 2da ed. Editorial Reverte S. A. Espana 1996. p 433, 434.

[3]www.fundacionypf.org.or/educacion/04/monografe_de_ciencias_naturales2005bs
.pdf
[4] W: C: FRAZIER, D. C. WESTHOFF. Microbiologia de alimentos 4a ed. Editorial
acribia, S. A. Zaragoza (Espana) 1993. p 63.
[5] http://metodosdsiembras.blogspot.com/
[6] http://es.slideshare.net/roberchavez/medios-de-cultivo-y-pruebas-bioquimicapresentation
[7] http://www.microinmuno.qb.fcen.uba.ar/SeminarioTinciones.htm