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UNIVERSIDAD VERACRUZANA

FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS

PROGRAMA EDUCATIVO
QUMICA INDUSTRIAL

TRABAJO RECEPCIONAL MODALIDAD TESIS

ACTIVIDAD ANTIFUNGICA in vitro DE EXTRACTOS


VEGETALES INHIBIDORES DE Fusarium oxysporum f. sp.
Gladioli y Curvularia f. sp. Gladioli

PRESENTA
KARENI RAMREZ GUERRERO

DIRECTOR INTERNO
DRA. ROSALBA ORTEGA JIMNEZ

DIRECTOR EXTERNO
DRA. VERONICA G. DOMINGUEZ MARTNEZ

ORIZABA, VER.

FEBRERO, 2009

DEDICATORIAS

A DIOS QUE SIEMPRE HA ESTADO PRESENTE


EN MI VIDA

A LOS QUE YA NO ESTAN


ACOMPAAN

A MIS PADRES

A MI HERMANA

A TODA MI FAMILIA

SIEMPRE ME

AGRADECIMIENTOS
A DIOS
Gracias por darme la dicha de vivir, por que cada da estas a mi lado cuidndome
y guindome, gracias infinitamente por permitirme concluir mis estudios y sentir tu
apoyo incondicionalmente.Todo lo puedo en Cristo que me fortalece (Filipenses
4:13).
A MI PADRE
Papito querido gracias por tu amor y todo tu apoyo que me has dado para
formarme como profesionista y al fin podemos verlo culminado. Este triunfo es gracias
a ti Te Amo.
A MI MADRE
Mamita querida gracias por los consejos que me has dado, por tu infinito amor
y cuidado, por ser mi mejor amiga y mi ejemplo a seguir. Este triunfo es tuyo ya que
sin tu apoyo no lo hubiera logrado, Te Amo.
A MI HERMANA
Gracias por ser mi confidente, amiga, compaera y una excelente hermana.
Gracias por tu amor, consejos y apoyo que me brindaste para continuar y no darme por
vencida; tu eres parte de este xito y ahora puedo compartir contigo la dicha de ver
realidad uno de mis sueos. Te quiero mucho
A MI ABUELITA
Judith
Gracias por tu amor incondicional que me has brindado y por consentirme,
gracias por existir, te amo y te llevo en mi corazn, eres maravillosa.

A MIS ABUELOS
Eusebio, Faustina, Sara y Melquades.
Aunque no estn conmigo en estos momentos por que Dios as lo decidi se que
hubieran estado contentos y orgullosos de verme concluir mi carrera, ustedes han sido
mi fuente de inspiracin. Gracias por todo su amor que me brindaron, por sus
enseanzas que me dejaron, por los momentos maravillosos que viv con ustedes; sus
recuerdos nunca los olvidare por que para mi siempre vivirn en mi mente y corazn.
Los extrao mucho. Los Amo.

A MI S TIOS
Roselia y l.ucio, gracias por estar conmigo en los buenos y malos momentos de
mi existencia, por ser como mis padres y mostrarme su amor. Quiero compartir este
triunfo con ustedes los quiero mucho.
Isabel, Zenaida, Emilia, Natanael, Lesly, Delfina, Juana
Gracias por ser parte de mi familia, por sus consejos y amor que me han brindado. Los
quiero mucho ustedes son parte de este logro.

A MIS PRIMOS
Edreily a ti mi bebita hermosa por estar con nosotros un ao de vida y darme la
dicha y la felicidad de tenerte entre mis brazos y sentir tu gran amor, ternura e
inocencia; nos has dejado una gran leccin de vida. Te extraamos mucho mi negrita
hermosa. Tus recuerdos los llevo en mi corazn y siempre existirs en mi mente.
Ediel, Yahir y Obed ms que mis primos son como mis hermanos, los quiero
mucho y gracias por compartir conmigo momentos de alegra y de tristeza, son lo mximo
y este triunfo es de ustedes tambin.

Asbel, Adai, Libni, Heber, Daniel, Dabereth, Asdieli, Sabdiel, Natali,


Naomi, Karina, Ricardo, Rodrigo, Yeilen.
Gracias por sus consejos, por existir y compartir momentos inolvidables. Este triunfo
que he logrado quiero compartirlo con ustedes. Los quiero mucho.

A MAGALY
Gracias por brindarme tu amistad, por compartir conmigo momentos
inolvidables, por tu apoyo incondicional, por tus consejos, por rer y llorar juntas, por
demostrarme el verdadero significado de la palabra amistad. Gracias amiga por ser tan
sincera y buena persona, eres una gran amiga. Te quiero mucho

A LA UNIVERSIDAD VERACRUZANA
Por abrirme las puertas y brindarme la oportunidad de formarme como
profesionista en especial a la Facultad de Ciencias Qumicas que me cobijo durante el
transcurso de la carrera.

A LA DRA. ROSALBA
Gracias por confiar en m para la realizacin de este trabajo, por su ayuda,
disposicin, paciencia y por el apoyo que me brind a lo largo de mi carrera.
A LA DRA. VERONICA
Gracias por su apoyo, tiempo y disposicin que me brind para realizar este
trabajo.
A LA M.C. LETY
Gracias por abrirme las puertas de su laboratorio y compartir conmigo sus
conocimientos, por su apoyo y ayuda en la realizacin de este trabajo.

A MIS SINODALES
Q. I. Magdalena Luna Barrera
Gracias por sus comentarios y sugerencias, por todos sus conocimientos que
comparti conmigo, por ser una excelente maestra y por brindarme su amistad.
Dra. Marina Guevara Valencia
Gracias por sus consejos, apoyo, y tiempo disponible que me brind, por su
amistad y por ser parte de mis profesores que me formaron como profesionista, aprend
mucho de usted.
M.C. Miriam Pastelin Solano
Gracias por sus correcciones y sugerencias, me sirvieron de mucho para
aprender ms.

AL DR. CARLOS DIAZ


Por su ayuda que me brind para realizar la parte estadstica de este trabajo.

A TODOS MIS MAESTROS


Gracias por compartir sus conocimientos conmigo y formarme como
profesionista. Infinitamente muchas Gracias.

A MIS AMIGOS
Gracias por la amistad que me han brindado, los momentos que hemos pasado
juntos no los voy a olvidar.

El presente trabajo titulado ACTIVIDAD ANTIFUNGICA in

vitro DE

EXTRACTOS VEGETALES INHIBIDORES DE Fusarium oxysporum f.


sp. Gladioli y Curvularia f. sp. Gladioli se llev a cabo en el
laboratorio 123 de la Facultad de Ciencias Qumicas de la Universidad
Veracruzana, bajo la direccin interna de la Dra. Rosalba Ortega Jimnez y
la direccin externa de la Dra. Vernica G. Martnez Domnguez (Fac. de
Biologa Campus Xalapa).

NDICE GENERAL
INDICE DE FIGURAS
INDICE DE CUADROS

INTRODUCCION
1

PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA


Justificacin

Objetivo general

Objetivos especficos

Hiptesis

MARCO TEORICO

2.1

La agricultura en el desarrollo econmico

2.2

Defensa de las plantas

10

2.3

Resistencia de las plantas a plagas y enfermedades

18

2.4

Problemas de los plaguicidas

19

2.5

Extractos vegetales

22

2.5.1

Extractos vegetales utilizados contra patgenos

23

2.6

Hongos fitopatgenos de gladiola

27

2.6.1

Fusarium oxysporum f. sp. Gladioli

28

2.6.2

Curvularia f. sp. Gladioli

31

METODOLOGA

3.1

Material biolgico

35

3.2

Obtencin de los extractos vegetales

35

3.3

Anlisis y determinaciones

36

3.4

Anlisis estadstico

37

RESULTADOS Y DISCUSIN

5.1

Prueba in vitro

39

5.1.1

Evaluacin de la bioactividad de los extractos aplicados a

39

Fusarium oxysporum f. sp. Gladioli


5.1.2

Evaluacin de la bioactividad de los extractos aplicados a

44

Curvularia f. sp. Gladioli


5.2

Anlisis de varianza

49

CONCLUSIONES

51

REFERENCIAS BIBLIOGRAFCAS

53

NDICE DE FIGURAS
FIGURA
1

Pgina
Formacin de una capa de corcho (CL) entre las zona sanas (H)

12

e infectadas (I) de la hoja.


2

Desarrollo de tilosis en los vasos xilmicos.

13

Fusarium oxysporum f. sp. Gladioli

29

Curvularia f. sp. Gladioli

32

Diagrama de plan de trabajo

34

Porcentaje de inhibicin de los extractos vegetales evaluados

40

para Fusarium oxysporum f. sp. Gladioli


7

Porcentaje de crecimiento de Fusarium oxysporum f. sp. Gladioli

42

en los extractos vegetales evaluados.


8

Tercera evaluacin del crecimiento de Fusarium oxysporum f.

43

sp. Gladioli en extractos vegetales etanlicos aplicados.


9

Porcentaje de inhibicin de los extractos vegetales evaluados

44

para Curvularia f. sp. Gladioli


10

Porcentaje de crecimiento de Curvularia f. sp. Gladioli en los

46

extractos vegetales evaluados.


11

Tercera evaluacin del crecimiento de Curvularia f. sp. Gladioli


en extractos vegetales etanlicos aplicados.

48

NDICE DE CUADROS
CUADROS

Pgina

Fungicidas empleados en el cultivo de gladiola

21

Porcentaje de crecimiento y porcentaje de inhibicin de los

39

extractos vegetales en Fusarium oxysporum f. sp. Gladioli


3

Porcentaje de Crecimiento y porcentaje de inhibicin de los

44

extractos vegetales en Curvularia f. sp. Gladioli


4

Resultados del anlisis de varianza del crecimiento micelial de


los patgenos en los extractos vegetales etanlicos.

49

INTRODUCCION

La agricultura ecolgica, orgnica o biolgica enmarca todos los sistemas agrcolas que
promueven la produccin sana y segura de fibras y alimentos, desde el punto de vista
ambiental, social y econmico y esta basada en un sistema de produccin sostenible, en
el cual no se hace uso de fertilizantes, herbicidas o pesticidas qumicos, u otras
sustancias txicas que pueden llegar a causar algn dao a la salud humana, animal y al
medio ambiente con un fin muy claro, el crecimiento econmico y del mejoramiento de
calidad de vida y tambin una mejora en la ganancia del productor (Lizcano 2007).
En la actualidad se han ido desarrollando diferentes estrategias de contribuir a la
conservacin del medio ambiente en el rea agrcola con productos biolgicos, estos
productos evitan o excluyen insumos externos de sntesis qumicas que empobrecen el
suelo contrarrestando la accin de las poblaciones de organismos benficos,
disminuyendo los nutrientes para las plantas y contaminando fuentes de agua (Lizcano
2007).
El Manejo Integrado de Plagas (MIP) es un mtodo para combatir poblaciones no
deseadas responsables con el medio ambiente. Existen productos biolgicos que pueden
llegar a ser muy efectivos para el control de plagas que son sustancias extradas de
plantas que tiene un efecto antifngico contra la poblacin daina y sin contaminacin del
recurso suelo y agua (Lizcano 2007).
Las plantas durante su evolucin

han logrado desarrollar diversos mecanismos de

defensa contra los patgenos, uno de ellos es el desarrollo de metabolitos secundarios


con propiedades antimicrobianas (Shaffer et al 1950-1951; Sekhawa y Prasad 1971).
Diversos autores han estudiado las posibilidades de aplicacin de estos compuestos en
forma de extractos para el control de microorganismos fitopatgenos. En Mxico es poco
lo que se ha trabajado al respecto (Escobar y Coronado 1988; Guevara y Velsquez
1984) existiendo una amplia potencialidad de uso de estos extractos dada la tradicin
cultural del pueblo mexicano en el uso medicinal de las plantas y el escaso o nulo uso de
fungicidas comerciales por un numeroso sector campesino de escasos recursos
econmicos (Montes et al 1990).

1. PLANTEAMIENTO
DEL PROBLEMA

La diversidad de microclimas que existen en Mxico permite el desarrollo de la


Floricultura en la mayora de los Estados de la Repblica, destacando los ms prximos
a los grandes centros de consumo (Jaimes 1977).
Entre los principales centros abastecedores destacan por la superficie cultivada el Estado
de Mxico, el Distrito Federal, el Estado de Puebla y Veracruz entre otros (FIRA 1981).
El Municipio de Rafael Delgado, Ver., se caracteriza por la produccin de plantas
ornamentales entre las que destacan nardo, azucena y gladiola.
Los productores se enfrentan con varios problemas fitosanitarios en el cultivo de gladiola;
en la presiembra, cosecha y almacenamiento de los cormos debido a que las prcticas
agrcolas que se realizan son de manera emprica.
Entre los hongos fitopatgenos que causan problemas en el cultivo de gladiola se
encuentran Fusarium oxysporum f. sp. , Curvularia f. sp. y Uromyces transversalis. Las
enfermedades producidas por estos hongos fitopatgenos ocasionan daos a los cormos
que van del 40-60%, durante su almacenamiento y en el campo hasta 90-100% (Jaimes
1977) esta problemtica preocupa a los productores ya que baja la calidad del producto
as como su comercializacin y les ocasiona perdidas econmicas importantes. Por lo que
se ven obligados a usar fungicidas para el control de la enfermedad que les ocasionan
dichos hongos; aunque no se han percatado de la contaminacin que estos provocan al
medio ambiente, ya que presentan resistencia qumica a la degradacin en suelos,
plantas, animales y en el mismo hombre. Debido a todos los inconvenientes que presenta
el manejo de compuestos sintticos, se han desarrollado alternativas naturales, entre las
cuales se encuentran el uso de extractos vegetales, con lo que se han obtenido
resultados prometedores; los extractos vegetales tienen la ventaja de ser biodegradables
y manifestar un mnimo impacto negativo sobre la salud humana y el medio ambiente
(Bravo et al 2000; Montes 1996; Vzquez et al 1996).

JUSTIFICACION
En agricultura, los daos ocasionados por los insectos y plagas ocupan el primer lugar,
induciendo el alto uso de insecticidas sintticos. Esto ha ocasionado efectos adversos en
la salud humana y en el medio ambiente, por lo cual la bsqueda de alternativas naturales
para el combate de fitopatgenos.
La utilizacin de extractos vegetales para el control de enfermedades representa una
alternativa para el manejo integrado de los cultivos, debido a su bajo costo y al menor
impacto sobre el ambiente.
La problemtica generada en cultivos de Gladiola por hongos fitopatgenos como
Fusarium oxysporum f. sp. Gladioli y Curvularia f. sp. Gladioli en la zona de produccin;
conduce a la bsqueda de extractos vegetales para combatir las enfermedades causadas
por dichos patgenos y que sean viables para los productores con un menor costo y una
mejor produccin.

OBJETIVO GENERAL
Evaluar la actividad antifngica de algunos extractos vegetales sobre los hongos
fitopatgenos Fusarium oxysporum f. sp. Gladioli y Curvularia f. sp. Gladioli causantes
de enfermedades en cultivos de Gladiola.

OBJETIVOS ESPECIFICOS
Obtener extractos vegetales etanlicos de ajo, cebolla, clavo, semilla de guanbana,
huele de noche y hoja de caa.
Determinar las propiedades antifngicas de los extractos vegetales sobre Fusarium
oxysporum f. sp. Gladioli y Curvularia f. sp. Gladioli.

HIPOTESIS
Los extractos vegetales de ajo, cebolla, clavo, semilla de guanbana, huele de noche,
hoja de caa, crisantemo y chilcuague tendrn actividad antifngica sobre cepas de
Fusarium oxysporum f. sp. Gladioli y Curvularia f. sp. Gladioli.

2. MARCO TEORICO

2.1 La agricultura en el desarrollo econmico


La literatura, cada vez ms abundante, sobre historia, teora y polticas del desarrollo
econmico, ha reconocido el lugar prominente que tiene la agricultura en los pases
subdesarrollados, y generalmente ha concluido que el desarrollo econmico requiere la
transferencia de grandes masas de poblacin rural fuera de la agricultura (Carl y
Lawrence 1968).
El papel de la agricultura en el desarrollo econmico depende fundamentalmente de la
etapa de la historia econmica en que un determinado pas se halla y, especialmente en
la poca en que el progreso econmico se vuelve una gran aspiracin social, dicho papel
esta por encima de la relacin tierra agrcola-poblacin. Por consiguiente, el nfasis
relativo que el estado da a la agricultura, y las formas particulares que tome la poltica
agrcola, deben variar correlativamente (Carl y Lawrence 1968).
En un sentido fundamental, el progreso agrcola es normalmente un prerrequisito para el
desarrollo industrial. Esto se puede ver claramente en el caso de una economa cerrada,
en donde una de las ms importantes condiciones previas para la expansin industrial es
el logro de una tasa de incremento en la produccin agrcola que exceda la de la
demanda. El aumento de la produccin agrcola apoya y sostiene el crecimiento industrial
de varias maneras. Primero, permite a la agricultura transferir parte de su fuerza de
trabajo a empleos industriales y, a la vez, satisfacer la creciente necesidad del sector no
agrcola. Segundo, aumenta el ingreso agrcola y, por lo tanto, se crea poder de compra
en el sector agrcola, el cul es necesario para adquirir los nuevos bienes industriales, y
permite ahorros que pueden ser movilizados, por medios directos o indirectos, para
financiar el desarrollo industrial (Carl y Lawrence 1968).
En una economa abierta, con acceso al comercio internacional, la contribucin de una
productividad agrcola creciente al desarrollo industrial puede ser menor. En este caso,
una nacin determinada puede encontrar que le es ms econmico importar, debido a
que su ventaja competitiva descansa en la produccin, parte de la cul puede exportar
para comprar (Carl y Lawrence 1968).

El incremento en la productividad agrcola hace importantes contribuciones al desarrollo


econmico general y que, al menos dentro de amplios lmites, es una de las condiciones
previas para hacer posible un despegue hacia el crecimiento econmico sostenido. Sin
embargo, es igualmente claro que el desarrollo industrial urbano crea condiciones mucho
ms favorables para aumentar la productividad agrcola (Carl y Lawrence 1968).
A medida que una economa experimenta el desarrollo urbano-industrial, se acelera la
tasa de progreso agrcola de varias maneras. La industrializacin aumenta la demanda de
bienes de consumo y crea mercados ms favorables para la produccin agrcola. Se
estimula la produccin de cultivos sobre una base ms especializada y eficiente, as como
el desarrollo de las industrias agrcolas, y la integracin de la economa rural con la
urbana. La industrializacin, asimismo, pone a la disposicin de los trabajadores agrcolas
una mayor variedad de bienes de consumo, eleva sus necesidades y les alienta a un
mayor esfuerzo productivo; aparecen as nuevos y mejores productos agrcolas, lo cual
directamente eleva la produccin agrcola por hectrea o por hombre (Carl y Lawrence
1968).
2.2 Defensa de las Plantas
Cada una de las especies vegetales se ve afectada por alrededor de un centenar de
diferentes tipos de hongos, bacterias, micoplasmas, virus, nematodos, etc. Con frecuencia
una sola planta es atacada por cientos o miles de patgenos y, en el caso de las manchas
foliares de rboles grandes, probablemente por cientos de miles de individuos de una
misma clase de patgenos. Sin embargo, aun cuando las plantas puedan sufrir daos
considerables o de poca importancia, muchas de ellas sobreviven a los ataques y con
frecuencia continan su desarrollo normal y llegan a producir buenos rendimientos (Agrios
1985).
Los factores de resistencia morfolgica interfieren fsicamente con el mecanismo
locomotor y ms especficamente con los mecanismos de seleccin, alimentacin
ingestin, digestin y apareamiento. Las sustancias que dan resistencia a las plantas
contra estos organismos incluyen compuestos inorgnicos como selenio, agua, cloruro de
sodio, anhdrido carbnico, metabolitos primarios e intermediarios de ellos como cistena y

otros aminocidos aromticos; y metabolitos secundarios como los isoprenoides,


alcaloides, acetogeninas, glicsidos, fitoalexinas, etc. (Smith 1989).
2.2.1 Defensa estructural
La primera lnea de defensa de las plantas ante el ataque de los patgenos es su
superficie, la cual deben penetrar para causar infeccin. Algunas defensas estructurales
se encuentran ya en las plantas incluso antes de que el patgeno entre en contacto con
ellas. Esas estructuras incluyen la calidad y cantidad de la cera y la cutcula que cubren a
las clulas epidrmicas, la estructura de las paredes celulares de estas ltimas, el
tamao, localizacin y forma de los estomas y lenticelas y, por ltimo, la presencia en la
planta de tejidos protegidos por paredes celulares gruesas que obstaculizan el avance del
patgeno (Agrios 1985).
Aunque algunos patgenos se ven imposibilitados de entrar e invadir a las plantas debido
a que stas presentan estructuras de defensa internas o superficiales preformadas, la
mayora de ellos logran penetrar en sus hospederos y producir diversos grados de
infeccin. Sin embargo, incluso despus de que el patgeno ha penetrado las estructuras
de defensa preformadas, las plantas muestran varios grados de resistencia que consisten
en la formacin de uno o ms tipos de estructuras que tienen ms o menos una cierta
efectividad para contrarrestar las invasiones posteriores de los patgenos sobre ellas
(Agrios 1985).
Estructuras histolgicas
a) Formacin de capas de corcho
La infeccin que ocasionan los hongos, bacterias e incluso algunos virus y nematodos en
las plantas con frecuencia induce la formacin de varias capas de clulas de corcho ms
all de la zona donde se ha producido la infeccin (figura 1), aparentemente como
resultado de la estimulacin que ejercen las sustancias que secreta el patgeno sobre las
clulas del hospedero. Las capas de corcho no slo inhiben las invasiones que pueda
intentar el patgeno sobre otras clulas, sino tambin bloquean la difusin de cualquier
sustancia que el patgeno pueda secretar. Adems, estas capas detienen el flujo de agua

y nutrientes desde las zonas sanas hasta la zona infectada y suprimen la nutricin del
patgeno. De esta forma, los tejidos muertos e incluso el patgeno quedan delimitados
por las clulas de corcho y permanecen en ese sitio formando una lesin necrtica
(mancha), o bien son expulsados hacia el exterior por los tejidos sanos subyacentes hasta
formar costras que posteriormente se desprenden, librando as al hospedero de la
presencia del patgeno (Agrios 1985).

Figura 1: Formacin de una capa de corcho (CL) entre las zona sanas (H) e infectadas (I)
de la hoja.
b) Formacin de capas de abcisin
La capa de abcisin consta de una abertura que se forma entre dos capas circulares de
clulas foliares en torno al foco de infeccin. Despus de que sta se ha producido, la
lmina media localizada entre esas dos capas de clulas se disuelve a lo largo del grosor
de la hoja, separando por completo la zona central del resto de la hoja. Gradualmente,
esta zona se seca, muere y se desprende, llevndose consigo al patgeno. De esta
forma, la planta al deshacerse de esa zona infectada junto con unas cuantas clulas
todava sanas, impide que el resto de los tejidos de la hoja sean invadidos por el patgeno
o que sean afectados por sus secreciones txicas (Agrios 1985).
c) Formacin de tilosis
Las tilosis se forman en los vasos xilemticos de la mayora de las plantas; la figura 2
muestra el desarrollo de tilosis, vista de un corte longitudinal (A) y tansversal (B) de los
vasos sanos (izquierda) y de los vasos con tilosis. Los vasos de la derecha estn

completamente llenos de tilosis. PP= placa de perforacin; V=vaso xilmico; CP= clulas
parenquimatosa del xilema; T= tilosis (Agrios 1985).
Las tilosis son crecimientos excesivos del protoplasto de las clulas parenquimatosas
adyacentes, las cuales se proyectan hacia los vasos xilemticos a travs de
puntuaciones. Las tilosis presentan paredes celulsicas y pueden, debido a su tamao y
abundancia obstruir completamente a los vasos (Agrios 1985).

Figura 2: Desarrollo de tilosis en los vasos xilmicos.


d) Depsito de sustancias gomosas
Muchas plantas despus de haber sufrido daos o de haber sido infectadas por algn
patgeno, producen varios tipos de gomas alrededor de las lesiones. La funcin defensiva
que desempean las gomas se debe al hecho de que se depositan con gran rapidez en
los espacios intercelulares y dentro de las clulas que rodean al sitio de la infeccin,
formando as una barrera impenetrable que encierra por completo al patgeno. De esta
forma el patgeno queda aislado, carece de nutrientes y muere (Agrios 1985).
Estructuras celulares
Las estructuras celulares de defensa abarcan los cambios morfolgicos en la pared
celular, de las clulas que son invadidas por un patgeno. Sin embargo, la efectividad de
estas estructuras como mecanismos de defensa parece ser muy limitada. Se han
observado dos tipos principales de estas estructuras en las enfermedades

ocasionadas por hongos: a) el hinchamiento de la pared celular de las clulas epidrmicas


y subepidrmicas durante la penetracin directa, el cual puede inhibir la penetracin del
hospedero y el asentamiento de la infeccin y b) el recubrimiento de las hifas que
penetran la pared celular al ser envueltas en una vaina que se forma por la extensin
hacia adentro de la pared celular, de tal forma que la rodea e impide su invasin (Agrios
1985).
Reaccin de defensa citoplsmica
En algunos casos de hongos poco patgenos y de crecimiento lento que inducen
enfermedades crnicas o condiciones casi simbiticas, el citoplasma de las clulas
envuelve a los grupos de hifas y el ncleo se extiende hasta el punto donde se divide en
dos partes. En algunas clulas invadidas, la reaccin citoplsmica es anulada y su
protoplasto desaparece en tanto aumente el desarrollo del hongo. Sin embargo, en
algunas de las clulas invadidas el citoplasma y el ncleo se agrandan. En estos casos, el
citoplasma se hace granular y denso, y varias partculas o estructuras aparecen en l. Por
ltimo, el micelio del patgeno se desintegra y cesa su propagacin (Agrios 1985).
Reaccin de defensa necrtica: defensa mediante hipersensibilidad
En las relaciones que se establecen entre el hospedero y el patgeno, este ltimo puede
llegar a penetrar la pared celular, pero tan pronto como entra en contacto con el
protoplasto de la clula, el ncleo se desplaza hacia l y en poco tiempo se desintegra y
aparecen en el citoplasma grnulos pardos y en forma de resina, primero en torno al
patgeno y despus por todo el citoplasma. Mientras avanza la decoloracin del
citoplasma de la clula vegetal y se produce la muerte, las hifas del hongo empiezan a
degenerar (Agrios 1985).
El tipo de defensa necrtico o hipersensitivo es bastante comn, particularmente en las
enfermedades

que ocasionan los virus, nematodos y hongos parsitos obligados. Al

parecer, los tejidos necrticos aislan al parsito obligado de las sustancias vivas lo cual
conduce a su inanicin y muerte (Agrios 1985).

2.2.2 Defensa bioqumica


Aun cuando las caractersticas estructurales proporcionen a las plantas varios grados de
defensa contra el ataque de los patgenos, cada vez se hace ms evidente que la
resistencia de una planta al ataque de un patgeno no estriba tanto en las barreras
estructurales sino en las sustancias que producen sus clulas antes o despus de haber
producido la infeccin. Los mecanismos de defensa son de naturaleza qumica ms que
estructural, y que a ellos se debe la resistencia a la infeccin causada por ciertos
patgenos que muestran algunas plantas (Agrios 1985).
Defensa bioqumica preexistente
a) Inhibidores liberados por las plantas en su medio ambiente
Las plantas exudan una gran variedad de sustancias a travs de la superficie de sus
races y de sus dems rganos. Sin embargo, algunos de los compuestos que liberan
ciertos tipos de plantas, tienen una funcin inhibitoria ante el ataque de cierto patgeno.
Los exudados fungitxicos de las hojas de algunas plantas se encuentran en una
concentracin suficiente para inhibir la germinacin de las esporas del hongo que se
encuentran en el roco o en las gotas de lluvia depositadas sobre esas hojas (Agrios
1985).
b) Defensa debida a la deficiencia de algunos nutrientes esenciales al patgeno
Las variedades y especies de plantas que por alguna razn no producen alguna de las
sustancias esenciales para la supervivencia de un parsito son, en consecuencia
resistentes a ellos (Agrios 1985)
c) Defensa debida a la ausencia de antgenos comunes
Las plantas no producen anticuerpos que contrarresten la infeccin de patgenos tales
como hongos, bacterias o virus, pero es probable que posean algn tipo de respuesta
inmunolgica. Cuando se comparan los antgenos de un

cierto nmero de razas de

patgenos con los propios del mismo nmero de variedades de plantas (cada una de las

cuales est infectada por una o ms de esas razas de patgenos), puede demostrarse
que un antgeno especfico de cada una de las razas habitualmente lo presentan tambin
slo aquellas variedades de planta que son susceptibles a una raza en particular. Cuando
cierta variedad carece de un antgeno que posee una raza particular del patgeno, esa
variedad vegetal es resistente a esta raza, lo cual sugiere que su susceptibilidad
resistencia se debe a la presencia o carencia de

antgenos especficos para ese

patgeno (Agrios 1985).


Defensa bioqumica inducida por el ataque de los patgenos
a) Inhibidores bioqumicos que producen las plantas en respuesta a los daos
ocasionados por el patgeno
Las clulas y tejidos vegetales responden a los daos ocasionados ya sea por los
patgenos o por agentes mecnicos o qumicos mediante una serie de reacciones
bioqumicas que tienden a aislar el agente causal y a sanar la zona afectada. Algunos de
los agentes qumicos producidos de esa forma se hallan en concentraciones lo bastante
altas como para inhibir el desarrollo de la mayora de los hongos y bacterias, que, por lo
tanto, son incapaces de infectar a la planta. Dichos agentes incluyen a la mayora de los
compuestos fenlicos tales como los cidos clorognico y cafico, a los compuestos de la
oxidacin de los compuestos fenlicos y a las fitoalexinas (Agrios 1985).
Funcin de los compuestos fenlicos. Algunos de los fenoles relacionados con la
resistencia a las enfermedades se encuentran profusamente en las plantas ya sea sanas
o enfermas, pero su sntesis o acumulacin al parecer aumenta despus de haberse
producido la infeccin, a estos compuestos se les puede denominar compuestos fenlicos
comunes; algunos son txicos para los patgenos y se producen y acumulan a un ritmo
mucho mayor despus de haberse producido una infeccin en una variedad resistente
que en una susceptible, ejemplos de estos son el cido clorognico, la escopoletina, etc.
Sin embargo, algunos otros fenoles no los producen las plantas sanas, excepto cuando
son estimuladas por algn patgeno o por el dao ocasionado por un agente qumico o
mecnico, a estos compuestos se les conoce como fitoalexinas; son sustancias
fungitxicas que las plantas producen y que inhiben el desarrollo de los microorganismos
patgenos de las plantas (Agrios 1985).

Funcin de las enzimas que oxidan al fenol en la resistencia a las enfermedades. La


actividad de la mayora de las enzimas que oxidan al fenol casi siempre es mayor en los
tejidos infectados de las variedades resistentes que en los de las plantas susceptibles que
han sido infectadas o en las plantas sanas. La importancia de la actividad de la
polifenoloxidasa en la

resistencia a las enfermedades probablemente se debe a su

propiedad de oxidar los compuestos fenlicos hasta quinonas, las cuales con frecuencia
son mucho ms txicas a los microorganismos que los fenoles originales (Agrios 1985).
Defensa debida a la sntesis inducida de protenas y enzimas. Los patgenos que atacan
a las plantas al parecer inducen alteraciones en la sntesis protenica en la planta que
pueden dar lugar al desarrollo de una resistencia local o de una capa inmune en torno a
las zonas infectadas. La resistencia o inmunidad de las plantas ante un patgeno
depende de la velocidad y el grado de la sntesis protenica que inducen los patgenos u
organismos similares no patgenos sobre la planta (Agrios 1985).
Defensa debida a la formacin de substratos resistentes a las enzimas del patgeno. La
resistencia de las plantas frente a algunos patgenos, al parecer se debe a la presencia o
formacin de compuestos que no son fcilmente degradados por las enzimas de los
patgenos que intentan invadirlas. Por lo comn, esos compuestos son complejos como
las pectinas, protenas y cationes polivalentes como el calcio o el magnesio. La
disponibilidad o acumulacin de cualquiera de esos cationes cerca de la zona de infeccin
da como resultado la formacin de sales u otros complejos resistentes a la degradacin
que ocasionan las enzimas producidas por el patgeno (Agrios 1985).
Defensa debida a la inactivacin de las enzimas del patgeno. Varios compuestos
fenlicos o los productos de su oxidacin, inducen resistencia a la enfermedad debido al
efecto inhibitorio que ejercen sobre las enzimas del patgeno ms que sobre el patgeno
mismo. En algunas enfermedades, cuanto ms resistentes son las variedades de la
planta, mayor es su contenido de polifenoles y, aun cuando esos fenoles no inhiban el
desarrollo del patgeno, inhiben la actividad de sus enzimas pectinolticas y con ello
contribuyen a la resistencia de la planta (Agrios 1985).

Defensa debido a la destoxificacin de las toxinas del patgeno. Por lo menos en alguna
de las enfermedades en las que el patgeno produce toxinas, la resistencia a la
enfermedad es la misma que la resistencia a las toxinas. Se sabe que la destoxificacin
de algunas toxinas, como en el caso del cido fusrico, la piricularina, etc., es un
fenmeno bastante comn en las plantas y que tiene una importante funcin en la
resistencia a la enfermedad (Agrios 1985).
Defensa debida a la alteracin de las vas biosintticas. El dao o infeccin de las plantas
activa una condicin fisiolgica de tensin, durante la cual con frecuencia la respiracin
aumenta y se activan varias enzimas. Bajo algunas de esas condiciones se producen
nuevas enzimas y se sintetizan con gran rapidez varios compuestos relacionados con esa
condicin fisiolgica, los cuales se acumulan en concentraciones que resultan txicas
para muchos microorganismos (Agrios 1985).
2.3 Resistencia de las plantas a plagas y enfermedades
Al igual que los seres humanos y los animales, las plantas tienen sus propios mecanismos
de defensa para protegerse del ataque de los patgenos y plagas. Estos abarcan desde
elementos fsicos de disuasin, como las espinas, hasta sustancias bioqumicas que o
bien actan como seales qumicas en el ecosistema, enviando seales por va de los
sentidos como el gusto y el olfato para disuadir la actividad de los herbvoros (inhibidores
de la alimentacin), o bien son directamente txicas y hasta pueden causar esterilidad o
impedir que se alcance la madurez sexual. En algunos casos tambin puede estimular a
los depredadores y a los patgenos de las plagas (Lampkin 2001).
Se conoce una amplia gama de sustancias que influyen en la actividad de las plagas y
que incluyen aminocidos, azcares, inhibidores de la germinacin y del crecimiento
como las enzimas, fenoles, alcaloides y saponinas. Generalmente actan como complejo
de sustancias, sin que haya un compuesto individual que por s solo sea responsable de
un efecto particular. La ventaja de ello es que a una plaga o patgeno le ser mucho ms
difcil superar la resistencia de la planta (Lampkin 2001).

Los patgenos causantes de enfermedades pueden mantenerse bajo control mediante


una gama similar de mecanismos. Un factor importante en la resistencia al desarrollo de
los hongos, es la solidez de la capa cuticular cerosa y la morfologa de las estomas. Es
posible que los diversos tipos de tricomas que cubren la superficie de la planta acten
como una barrera fsica o sean una fuente de compuestos defensivos como taninos y
fitoalexinas,

un

trmino

que

engloba

diversos

compuestos

con

propiedades

antimicrobianas (Lampkin 2001).


Las fitoalexinas inhiben el desarrollo de los hongos patgenos en tejidos hipersensitivos, y
se forman o activan solamente en condiciones de estrs, cuando las clulas husped
entran en contacto con el patgeno. La reaccin defensiva solamente se produce en
clulas vivas y la fitoalexina no es especfica en su toxicidad contra los hongos, aunque
los hongos pueden presentar diferentes sensibilidades frente a ella. El estado de
resistencia no es hereditario, a diferencia del sistema inmunolgico de los animales. Las
fitoalexinas necesitan producirse en suficiente cantidad y se cree que la sensibilidad a una
enfermedad puede deberse a la incapacidad que tiene el hongo causante de la infeccin
para estimular la formacin de la fitoalexinas o a su capacidad para poder tolerar el nivel
de fitoalexinas producida (Lampkin 2001).
Adems de las sustancias producidas por la propia planta, ciertas bacterias del suelo
producen sus propios plaguicidas naturales cuando son estimuladas por una planta que
corre el riesgo de ser atacada. Los patgenos oportunistas, sobre todo hongos,
aprovechan las heridas ya existentes para invadir la planta. Las bacterias responden a
estas seales qumicas nadando hacia el lugar de la herida, donde producirn toxinas
venenosas para los hongos (Lampkin 2001).
2.4 Problemas de los plaguicidas
Los plaguicidas son productos agroqumicos diseados para combatir las diversas plagas
que atacan los cultivos agrcolas y las hortalizas. Se clasifican en tres grupos principales:
insecticidas, funguicidas y herbicidas, nematicidas, molusquicidas y acaricidas (Cremlyn
1990).

El uso creciente de diversos tipos de plaguicidas en el mundo moderno ha conducido a un


mayor nfasis en la posibilidad de una severa contaminacin ambiental surgida de su uso.
Donde se aplique un plaguicida, ya sea en el follaje, en la semilla del cultivo, o en el suelo,
existe la posibilidad de que algo del material persista y pueda conducir a una severa
contaminacin del ecosistema (Cremlyn 1990).
La produccin agrcola ha crecido sustancialmente en los grandes pases en desarrollo
como Brasil, Mxico, China e India, debido a la gran demanda de productos agrcolas y a
la industrializacin de la agricultura. Se considera que ms del 60% de la poblacin
econmicamente activa en los pases en desarrollo depende de la agricultura. Entre los
daos ambientales a largo plazo ocasionados por el uso indiscriminado de los plaguicidas
est la contaminacin irreversible de los suelos, de los mantos friticos, de aguas
manantiales y costeras, y su inclusin en la cadena alimenticia (Cebrin 1998). En los
ltimos 20 aos se triplic la produccin y aplicacin de dichas sustancias hasta suman
hoy ms de 4 millones de toneladas siendo esto verdaderamente preocupante ya que la
mayora de los plaguicidas son una amenaza para la salud del hombre y para el medio
ambiente (Restrepo 1992).
Algunos de los problemas asociados al empleo de plaguicidas son los siguientes:

Los plaguicidas suelen ser productos qumicos ajenos al medio y que poseen el
potencial de poder alterar una amplia gama de ecosistemas, comenzando con el
suelo y sus microorganismos y llegando hasta los animales superiores. Este
trastorno puede ser provocado por toxicidad directa, pero a menudo los efectos
son ms: ruptura de las cadenas alimentarias, debilitamiento de los sistemas
inmunolgicos o confusin de las seales qumicas por las que se comunican
muchos organismos.

Los residuos de plaguicidas se acumulan en los alimentos para la nutricin


humana, un factor asociado cada vez ms a las alergias y otras enfermedades;
estos problemas son ahora motivo de preocupacin de ms alto nivel.

Los plaguicidas han sido relacionados con cnceres, leucemia en nios y defectos
de nacimiento.

Muchos plaguicidas son directamente txicos para los seres humanos: los
envenenamientos por plaguicidas son comunes y afectan tanto a los trabajadores
que los aplican como a las personas que ingieren alimentos contaminados.

El proceso de fabricacin de plaguicidas tambin contamina el medio ambiente,


sea por accidente o por emisiones rutinarias (Lampkin 2001).

Los gobiernos gradualmente comienzan a tomar medidas para reducir el problema de los
plaguicidas introduciendo normas ambientales ms rigurosas y, en algunos casos,
especialmente en pases en desarrollo, la prohibicin de un nmero considerable de los
plaguicidas existentes (Lampkin 2001). En el cuadro 1 se muestran los fungicidas
empleados en el cultivo de gladiola, se describen sus caractersticas principales y se
menciona el principio activo as como a la familia qumica a la que pertenecen.
Cuadro 1: Fungicidas empleados en el cultivo de gladiola
Funguicida
Folicur

Principio

Familia

activo

qumica

Tebuconazole

Triazoles

Caractersticas
Tiene un nivel de efectividad muy
alto, tiene efecto preventivo, curativo
y en algunos casos erradicativo.
Inhibe la biosntesis del ergosterol; su
falta perturba las funciones de las
clulas, afectando el crecimiento de
los hongos, hasta su muerte [1].

Manzate

Mancozeb

Ditiocarbamato Forma una barrera protectora frente a


los hongos, acta por contacto y
tambin en forma preventiva. Altera
la respiracin celular [2].

Captan

Captan

Ptalamidas

Interfiere

el

mecanismo

de

respiracin de los hongos por lo que


inhibe la germinacin de las esporas
y dificulta el crecimiento y desarrollo
miceliar. [3]

2.5 Extractos vegetales


Las plagas (insectos y patgenos) constituyen la principal limitante de la produccin
agrcola. Su control se ha basado, tradicionalmente, en el uso de productos qumicos
sintticos, muchos de los cuales han producido, como efecto secundario, problemas de
desequilibrio ambiental, de salud humana y el surgimiento de poblaciones de plagas ms
agresivas y resistentes a ellos (FAO 2002).
En su intento para reducir el dao que los hongos ocasionan a las cosechas, el hombre
ha provocado desequilibrio, desde el punto de vista ecolgico, debido a que en su lucha
por controlarlos, tambin le causa daos a la fauna benfica reguladora y, desde el punto
de vista ambiental, genera contaminacin del agua, suelo y de los productos que son
consumidos por la poblacin (Cruz 2000; Luchini 2000; Tomomassa 1997). Por estos
motivos, los agricultores ecolgicos rechazan el empleo de plaguicidas y en su lugar
favorecen una aproximacin global al control de plagas que incluyen; la diversificacin de
los cultivos por medio de las rotaciones y los cultivos mixtos; el abonado orgnico para
estimular la actividad biolgica del suelo; y la utilizacin cuidadosa de tcnicas
seleccionadas de control biolgico, de extractos naturales de plantas y de minerales
(Lampkin 2001).
En los ltimos aos, la sociedad mundial ha priorizado los aspectos ambientales,
conduciendo muchas investigaciones hacia el descubrimiento de nuevas materias
bioactivas que puedan ser empleadas en el Manejo Integrado de Plagas (MIP), con
menos efectos negativos al ambiente por tratarse de productos naturales (Bianchi et al
1997; Bowers y Locke 2000).
En la naturaleza existen de 250 000 a 500 000 especies vegetales, de las cuales se
estima que al menos el 10% han sido estudiados en sus aspectos qumicos y propiedades
biolgicas. Esta temtica no es nueva, se haba dejado en el olvido por un largo periodo
de tiempo y recientemente, el inters ha sido renovado valorando la diversidad de
estructuras qumicas en la bsqueda de nuevos compuestos bioactivos (Piol 2001).

Los productos de origen vegetal han sido, en las ltimas dos dcadas, mayormente
estudiados en su parte qumica, con nfasis en los metabolitos secundarios, los cuales
estn implicados en el control biolgico contra patgenos o plagas, y en ciertos casos
activando procesos de defensa en la planta, brindando una proteccin preventiva (Kagale
et al 2004).
2.5.1 Extractos vegetales utilizados contra patgenos
La extraccin y el empleo de algunas de las sustancias implicadas en los mecanismos de
defensa de las plantas pueden ayudar a incrementar la resistencia de los cultivos, sobre
todo en los casos ms intratables de problemas de plagas y enfermedades. Los
horticultores ecolgicos han adoptado desde hace tiempo el empleo de extractos de
plantas. Los preparados de cola de caballo, cebolla, ajo y rbano rusticano se emplean
contra las enfermedades criptogmicas, el ltimo contra la Monilia en los rboles frutales.
Los extractos de ortiga, helecho, ajenjo y manzanilla se han utilizado contra los pulgones
(Lampkin 2001).
Se cree que gran parte del efecto de los extractos de plantas sobre las enfermedades,
ms que deberse a algn tipo de toxicidad directa, se produce por el fortalecimiento
estructural de la planta, incrementando su resistencia a la penetracin de los micelios de
los hongos y a las picaduras de insectos, o bien estimulando un desarrollo vigoroso para
superar un ataque. Con los insectos los extractos pueden ser repelentes o pueden ser
directamente txicos (Lampkin 2001).
Matthes y Schearer descubrieron que los extractos de tanaceto inhiban la alimentacin
de los escarabajos de patata adultos, pero estos resultados no se confirmaban en
experimentos al aire libre. Los extractos de cebolla muestran ser efectivos contra el mildiu
de la patata, pero nicamente en el laboratorio (Lampkin 2001).
Extractos de ciertas plantas han mostrado ser efectivos de forma segura, incluso cuando
son preparados por el agricultor sin disponer de equipamientos o conocimientos
sofisticados. Un ejemplo lo constituyen las acederas (Rumex s.p.), cuyo difcil control
como malas hierbas se debe en gran parte a su resistencia a todo tipo de patgenos y

plagas de insectos, lo que parece indicar que tiene un mecanismo

de defensa

particularmente bien desarrollado (Lampkin 2001).


Otro extracto vegetal que ha demostrado claramente su eficacia procede de las semillas
del nim, un rbol ampliamente extendido por las regiones secas de los trpicos y
subtrpicos. Sus hojas, frutos y semillas contienen diversas sustancias activas, la ms
importante es la azadiractina. La importancia de los extractos de nim en comparacin con
otros potentes plaguicidas vegetales reside en que slo hay un ligero efecto por contacto;
su efecto sobre los insectos beneficiosos es limitado por que la sustancia ha de ser
ingerida (Lampkin 2001).
Desde tiempos remotos se han usado aceites esenciales de plantas de especias por sus
cualidades preservativas y se sabe que los antiguos egipcios utilizaban aceites de canela
(Cinnamomum zeylanicum Blum.), clavo (Syzygium aromaticum Merr.) y casia (Cassia
spp.) para el proceso de momificacin de sus muertos (Bullerman et al 1977). A mediados
del siglo XX (Maruzzella y Balter 1959) mostraron la posibilidad de usar estos productos
para combatir hongos fitopatgenos, particularmente en los casos de Fusarium
oxysporum f. sp. lycopersici Snyd. & Hand., F. oxysporum f. sp. conglutinans Snyd. &
Hand.; tambin haba una drstica reduccin del desarrollo micelial con los aceites de
pasto limn (Cymbopogom citratos Shied.), mejorana (Origanum majorana L..), cebolla
(Allium cepa L.), organo (Origanum vulgsre L.), pimienta (Pimienta dioca L.), tomillo
(Thymus vulgarius L.) y clavo (S. aromaticum). Tambin se han estudiado las propiedades
antifngicas de algunos de los componentes de estos productos como el aldehdo
cinmico de la canela, el mentol de la hierbabuena (Mentha piperita L.), el eugenol del
clavo y la pimienta gorda (Bullerman et al 1977). Los aceites esenciales combinados de
Ocimum canum, Chenopodium ambrosioides y Lippia alba fueron txicos contra un amplio
rango de hospederos, entre los que estaban R. solani, Alternaria solani, A. alternata, F.
moniliforme y F. oxysporum f. sp. vasinfectum (Dubey y Kishore 1987).

C. nocturnum

(Bravo et al 2000) reportan que C. nocturnum sobresali entre las 97 especies botnicas
por su efecto funguicida sobre Fusarium moniliforme Sheldon. Tambin (Hernndez et al
2007) mencionan la actividad funguicida de extractos crudos de C. nocturnum contra

Colletotrichum gloeosporides (Penz.) Penz y Sacc. Igualmente han encontrado que polvos
y extractos metablicos de C. nocturnum inhiben el crecimiento micelial y esporulacin de
Fusarium sp. aislado de ciruela mexicana (Spondias purpurea L) (Bullerman et al 1977).

Pithecellobium dulce

Polvos de hojas de Pithecellobium dulce inhibieron en un 80% el crecimiento micelial de


R. stolonifer aislado de Fresa (Fragaria x ananassa Duch.) y los extractos acuosos de
esta especie vegetal inhibieron en un 44% la infeccin de los frutos de fresa (Bautista et al
2003).

P. punctatum Elliot

Sus extractos registran antecedentes de actividad antimicrobiana sobre Bacillus subtilis,


Micrococcus luteus, Staphylococcus aureus, Mucor sp. y Aspergillus niger, y tambin
sobre Enterococcus faecalis y Mycobacterium phlei, as como actividad antifngica sobre
algunos dermatofitos y actividad antiviral . Del extracto clorofrmico de P. punctatum se
aisl poligodial, un sesquiterpeno dialdehdico con actividad contra Cladosporium
sphaerospermum y tambin se han identificado sesquiterpenoides y flavonoides (Vivot et
al 2007).

Acanthospermum australe (Loefl.)

Present actividad antifngica contra Candida cladosporioides, Fusarium oxysporum y


algunos dermatofitos. Asimismo, existen estudios fitoqumicos que indican presencia de
alcaloides, flavonoides y terpenos (Vivot et al 2007).

Allium Sativum

El ajo es considerado por algunos la ms extraordinaria de todas las plantas medicinales.


Ejerce una excelente accin depuradora, microbicida, desinfectante, revulsiva (que
provoca inflamacin superficial para sustituir otra ms profunda), tonificante, vermfuga,
antirreumtica, alta presin, etc. (Sosa 1997).

Allium cepa

La cebolla tiene gran prestigio como planta til en la curacin de numerosas


enfermedades. Es estimulante, antiinfecciosa, diurtica, vermfuga y antirreumtica.

Regenera el organismo, alivia las enfermedades pulmonares y bronquiales, estimula las


funciones digestivas (Sosa 1997). El extracto de cebolla demostr inhibicin de
crecimiento de la bacteria Xanthomonas campestres pv. Campestres. La cebolla es uno
de los plaguicidas naturales ms conocidos y utilizados a nivel mundial para el control de
insectos (Stauffer et al 2000).

Chilcuague

Las races de chilcuague (Heliopsis longipes) se usan como anestsico local,


desparasitante y condimento de alimentos; adems tiene actividad insecticida y fungicida.
Experimentos in vitro han mostrado que el extracto crudo de la raz de esta planta tiene
actividad fungicida contra C. lindemuthianum, ya que inhibe su crecimiento micelial y la
germinacin de sus esporas (Salgado 2008).
Existen reportes de diversas plantas usadas por su poder fungicida para combatir
diversos hongos entre ellos Fusarium y Curvularia; entre los cuales destacan (Grainge y
Ahmed 1988):
Fusarium Oxysporum f. sp

Allium cepa

Allium sativum

Cestrum diurnum

Heliopsis longipes

Laurus nobilis

Betula lenta

Thymus vulgaris

Avena sativa

Curcuma amada

Lycopersicon lycopersicum

Piper nigrum

Curvularia f. sp

Acacia loculata

Allium cepa

Origanum majorana

Allium sativum

Capsicum annuum

Thymus vulgaris

Heliopsis longipes

2.6 Hongos fitopatgenos de gladiola


En Mxico se cultivan 2 594.25 hectreas de gladiola, de las cuales el estado de Puebla
(San Martn Texmelucan y Atlixco) se siembra el 54% (SAGARPA, 2001), y el resto en el
estado de Mxico, Michoacn, Morelos, y Veracruz (Leszczyska y Borys 1994). De las
enfermedades del cultivo, se ha asumido que Fusarium oxysporum f. sp. Gladioli

Curvularia son las causantes de la pudricin del cormo en el campo y a Penicillium en


almacn (Larson, 1992; Leyva, 1992).
En Mxico, se cultiva el gladiolo con rotaciones peridicas en las diferentes reas, por el
problema de diseminacin de enfermedades fungosas de gran persistencia en el suelo,
causadas por los patgenos Fusarium y Curvularia. De manera que si un cormo se
encuentra enfermo o sano y se cultiva en un suelo infestado, es suficiente para asegurar
que las plantas se contaminen con la enfermedad (Gardezi et al 2001). Actualmente, en
las condiciones de produccin comercial del gladiolo, slo es posible sembrar una vez en
el mismo terreno y esperar de seis a ocho aos para volver a cultivarlas en el mismo lugar
para no tener problemas fitopatolgicos (Leszczyska y Borys 1994).
Muchos de los hongos que ocasionan infecciones en las plantas son parsitos facultativos
que viven en el suelo y algunas de las enfermedades ms destructivas son causadas por
ellos. Las races de las plantas son las ms atacadas, sobre todo en suelos muy
hmedos, pudiendo ser tambin afectadas hojas, tallos, frutos, semillas, las cortezas y
madera central de rboles (Agrios 1985). Los hongos constituyen el grupo ms importante

entre los agentes causales de tipo infectivo que provocan enfermedades de las plantas. El
nmero exacto de hongos fitopatgenos se desconoce, pero se estiman en un nmero
superior a las diez mil especies, pertenecientes a diversas categoras taxonmicas
(Asocolflores 1995).
2.6.1 Fusarium oxysporum f. sp. Gladioli
Distribucin
(Massey 1926) indica que la pudricin por Fusarium oxysporum f sp. Gladioli, observada
al inicio de 1912, constituye una de las enfermedades ms importantes de los cormos en
los Estados Unidos, en donde afecta cerca del 75% de los lotes cultivados; los daos
aumentan an ms durante el almacenamiento de los cormos cuando hay incrementos de
temperatura y humedad.
(Garca y Alfaro 1985) manifiestan que de 121 aislamientos de Fusarium en cormos de
gladiolo, 100 fueron de F. oxysporum, 11 de F. roseum, 10 de F. solani. Al probar la
capacidad patognica (Cp) de estas especies, encontraron que la mayora de las cepas
de F. oxysporum

fueron altamente patognicas y slo una cepa de F. roseum present

estas caractersticas, mientras que las cepas de F. solani mostraron no ser patgenas.
En Mxico, al dao por Fusarium oxysporum se le conoce como pudricin caf, marchitez
o fusariosis del gladiolo y este patgeno ocasiona daos que van desde un 40-60%
durante el almacenamiento, y en condiciones favorables puede llegar hasta 100% (Jaimes
1977).
Caractersticas del hongo
La colonia de Fusarium de 1 a 3 das presenta un color blanco, posteriormente toma
tonalidades naranja o violeta-lila, su micelio es seco y velloso (Bonifaz).
En medio de cultivo este hongo produce abundantes microconidios generalmente
unicelulares; los macroconidios son muy variados en cuanto al tamao y nmero de

septas, predominando los de

tres con un tamao 25 a 41 x 3.5 a 4.8.; estos son

gradualmente atenuados hacia ambas terminaciones, cilindros en la parte central, algunas


veces pedicelados y usualmente curvados en toda su longitud como se observan en la
figura 3. Las clamidiosporas son globosas de paredes lisas o rugosas, intercalares o
terminales y usualmente presentes en conidios. Los esporodoquios con 2mm de dimetro
formndose de los 7 a 14 das, siendo generalmente de color salmn (Massey1926).

Figura 3: Fusarium oxysporum f. sp. Gladioli


(Booth 1971) ubica a Fusarium oxysporum dentro de la seccin elegans reportando que
en medio de cultivo esta especie tiene una tasa de crecimiento mayor de 2.5cm de
dimetro despus de cuatro das, dando una coloracin plido, salmn, rosa o violeta,
siendo su micelio estriado, suave algodonoso y a veces rugoso, sobre todo en cultivos
viejos; los microconidios son abundantes uni o bicelulares de forma oval, elipsoidal o
alantoides, cuyo tamao vara de 5 a 12 x 2.2 a 3.5; estos nacen sobre filides laterales
simples derivadas de la hifa o bien sobre filides derivadas de conidiforos laterales
cortos. Los macroconidios son curvados, falcados, de paredes delgadas, de 3 a 7 septas,
siendo ms comunes las de 3 cuyas medidas son 27 a 46 x 3 a 5, son fusoidessubulados y ocasionalmente fusoides-falcados; las clamidiosporas son abundantes,
terminales o intercalares y ocasionalmente en pares o bien en cadenas, sus paredes
pueden ser lisas o rugosas.

Sntomas y daos
(Massey 1926) al describir los daos por Fusarium oxysporum f. sp. Gladioli indica que
las lesiones en los cormos al momento de la cosecha, aparecen como pequeas
pudriciones hmedas, irregulares, circulares y alargadas, generalmente sobre los lados de
la parte media basal. Estas en un principio son rojizas y pequeas, se torna caf
negruzcas cuando daan al cormo completamente. Los daos ms caractersticos de esta
enfermedad es la presencia de cordoncillos concntricos en las lesiones las cuales son
hundidas debido al rpido secado y contraccin de los tejidos.
(Garca y Alfaro 1985) mencionan que los sntomas en follaje son un amarillamiento de la
hoja que comienza por los extremos hasta acabar desecndose; otro tipo de sntoma
muy comn en este rgano es el asta de toro, sobre todo en los primeros estadios de su
desarrollo curvndose la hoja tomando el aspecto de cuerno. Estos mismos autores
reportan los sntomas en cormos de cuatro formas:
a) Decoloracin y obscurecimiento de los haces vasculares donde exteriormente
aparecen pequeas manchas de color marrn bien delimitadas.
b) Podredumbre marrn. Este sntoma se nota en cualquier lugar del cormo, pero
principalmente cerca de la base en la zona central. No se presenta la decoloracin
vascular del apartado anterior.
c) Podredumbre basal seca. Se da slo en la base del cormo, alrededor de la zona de las
races y el tejido afectado es muy delgado, tomando una coloracin marrn claro, poco
visible al principio pero despus toma un color marrn oscuro o negro, quedando el rea
afectada deprimida.
d) Cormos momificados. Esto es frecuente en el almacn, donde los cormos se recubren
de micelio blanco y su textura es esponjosa y dura.

2.6.2 Curvularia f. sp. Gladioli


Distribucin
(Young 1954) reporta a Curvularia Lunata en el estado de Oregn el cual fue introducido
a travs de cormos daados, y menciona que este hongo ha prevalecido durante varios
aos en los Estados del Sureste de la Unin Americana.
(Bald y Brian 1954) coinciden con Young mencionando que Curvularia Lunata es la
enfermedad

ms importante en Florida, Alabama, California y San Diego cuando se

presentan condiciones de alta temperatura y de humedad.


En Mxico a Curvularia f. sp. Gladioli se le conoce como mancha foliar y pudricin de
tallo, segn Leyva este hongo daa a plantas del campo y a cormos en almacn
causando prdidas hasta de un 75%; pero sin embargo es menos importante que
Fusarium y que Stromatinia (Leyva 1992).
Caractersticas del hongo
(Parmelee 1956) logr determinar en base a la biologa y morfologa del hongo as como
al tamao de los conidios y a la presencia del hilum que es Curvularia f. sp. Gladioli y no
a Curvularia Lunata como la especie que ataca al gladiolo; en la primera el tamao de
los conidios va desde 21 a 38.6 x 9 a 17.2, mientras que en la segunda el tamao de
los conidios va desde 17 a 35 x 8 a 16 .4. Los Conidiforos son simples o ramificados y
son dobladas en los puntos donde se originan los conidios. La parte central del
conidiforo suele ser ms oscura y ms amplia que la del final donde se forman los
conidios, la hinchazn de la clula central del conodiforo por lo general da un aspecto
curvo como se observa en la figura 4.

Figura 4: Curvularia f. sp. Gladioli


Sntomas y daos
(Parmelee 1956) reporta por primera vez a Curvularia sp., en Canad, atacando cormos
que manifiestan pequeas

lesiones ligeramente hundidas de color oscuro, con ms

intensidad en los bordes que en el centro.


(Garca y Alfaro 1985) sealan que sobre las escamas del cormo se ve manchas y
rayas alargadas cuyo color va del marrn claro a oscuro; estas manchas corresponden a
lesiones de forma irregular y de color negruzco sobre la superficie de dicho rgano. Las
yemas, sobre todo las de la parte baja del cormo, suelen aparecer bordeadas por una
mancha de color oscuro.
Los sntomas de Curvularia f. sp. Gladioli, aparecen como manchas necrosadas en la
punta de los cormos, las hojas algunas veces muestran necrosis. Para el control
recomiendan aspersiones con captan u otro fungicidas aplicados contra Botrytis y el
tratamiento con agua caliente a 56C para los cormos (Kelling y Niebisch 1986).

3. METODOLOGIA

Bsqueda de informacin
bibliogrfica

Seleccin de plantas con


accin inhibitoria reportada

Obtencin de los extractos


vegetales

Preparacin de medio de
cultivo Agar Papa Dextrosa
(APD)

Prueba in vitro

Evaluacin de la inhibicin del

Evaluacin del crecimiento

crecimiento radial

radial

Resultados

Anlisis estadstico

Figura 5: Diagrama de plan de trabajo

El presente trabajo se realiz en colaboracin con la M.C. Leticia Bravo Luna. El


aislamiento de los patgenos se llev a cabo en el Laboratorio de Fitopatologa del Centro
de Desarrollo de Productos Biticos del Instituto Politcnico Nacional en Yautepec,
Morelos. La evaluacin de los extractos vegetales se llevaron a cabo en el Laboratorio
120 de la Facultad de Ciencias Qumicas, en el periodo comprendido de AgostoDiciembre 2009.
3.1 Material biolgico
Las cepas de los hongos de Fusarium oxysporum f. sp. Gladioli y Curvularia f. sp. Gladioli
se aislaron de cormos de Gladiola que presentaron sntomas de enfermedad los cuales
fueron proporcionados por los productores del municipio de Rafael Delgado, Ver.
3.2 Obtencin de los extractos vegetales
El material vegetal utilizado para la preparacin de extractos fueron: ajo, cebolla, clavo,
fruto de guanbana maduros, hojas de huele de noche y hojas de caa. El ajo, la cebolla
y clavo fueron comprados en el mercado Melchor Ocampo de la ciudad de Orizaba, Ver.
De la hoja de caa se obtuvieron tres extractos ya que se estudiaron 3 generaciones
(HC1, HC2 y HC3).
La cebolla, hoja de caa y huele de noche se desinfectaron con solucin de hipoclorito de
sodio al 1% y se cortaron en trozos pequeos; a los ajos se les quit la cscara y se
picaron. A la especie de clavo se le retir todo material extrao como piedra, basura, etc.
De los frutos de guanbana se les retir la pulpa conservando las semillas las cuales se
lavaron con agua destilada y posteriormente se trituraron.
Los extractos vegetales de cebolla, ajo, huele de noche, hoja de caa, clavo y semilla de
guanbana fueron preparados de acuerdo a la metodologa de Ahmad y Prasad (1995):
se pesaron 100g de cada muestra y se colocaron en matraces separados adicionndoles
1000mL del disolvente, se dejaron reposar durante 48 horas a temperatura ambiente.
Luego se filtraron en papel Whatman No.10 y se concentraron en un rotavapor marca

Bchi, a excepcin de los extractos alcohlicos E1 (extracto alta temperatura de


chilcuague), E2 (extracto macerado de chilcuague) y extracto de crisantemo que fueron
proporcionados por el equipo de trabajo del Laboratorio de Fitobioqumica, Departamento
de Biotecnologa y Bioqumica, del CINVESTAV campus Irapuato.
3.3 Anlisis y determinaciones
Evaluacin de la inhibicin del Crecimiento Radial
La evaluacin de la bioactividad se realiz in vitro con cepas de los hongos de Fusarium
oxysporum f. sp. Gladioli y Curvularia f. sp. Gladioli midiendo el halo de crecimiento del
hongo respecto al testigo.
Se prepar medio de cultivo Agar Papa Dextrosa (APD): 39g en 1000 ml de agua
destilada. Este se pesa en papel aluminio usando la balanza analtica, se transfiere a un
matraz Erlenmeyer y se agrega el agua destilada, se esteriliza en autoclave a 15 libras
durante 15 minutos, y luego se dispone en cajas Petri estriles.
La actividad antimicrobiana de los extractos etanlicos se evalo mediante el mtodo de
difusin en medio slido por impregnacin de discos de patgeno. Se agregaron 0.1mL de
los extractos etanlicos vegetales de: ajo, cebolla, clavo, E1, E2, semilla de guanbana,
huele de noche, HC1, HC2, HC3, crisantemo al medio APD contenido en cajas Petri y se
plaquearon con una varilla de vidrio de 9 x 7cm en ngulo de 90.
Las cepas de los patgenos en estudio se conservaron en medio de cultivo APD; con un
sacabocado se perforaron las cepas para obtener discos los cuales se colocaron en el
centro de la caja Petri con medio de cultivo y extracto etanlico vegetal. Las cajas se
sellaron, se etiquetaron y se incubaron a temperatura ambiente.
En este trabajo se realizaron 3 evaluaciones del dimetro del hongo que se indican como:
1: al segundo da, 2: al quinto da y 3: sptimo da. Con esta medida se calcul el
porcentaje de crecimiento y el porcentaje de inhibicin.

La evaluacin de las cajas Petri se realiz durante siete das; midiendo el dimetro del
crecimiento del hongo en 4 direcciones al segundo, quinto y sptimo da, tomando como
valor final, el promedio de dichas mediciones para calcular el % de crecimiento y el % de
inhibicin de cada extracto.
Se realizaron 5 repeticiones de cada extracto

para obtener datos representativos

estadsticamente y se hizo un testigo.

Los resultados obtenidos se evaluaron considerndose activo los extractos que


presentaron un porcentaje de crecimiento menor o igual al 80% y un porcentaje de
inhibicin mayor o igual al 20% (Mrquez et al 2007).
3.4 Anlisis estadstico
El diseo experimental del estudio consider como variables estadsticas 2 especies de
hongos y 6 extractos etanlicos con la misma concentracin. Se realizaron 3 mediciones
del dimetro de la colonia de cada hongo en funcin del tiempo al segundo, quinto y
sptimo da. Con los valores obtenidos, se realiz el anlisis de varianza con el programa
estadstico Minitab 15.

4. RESULTADOS Y
DISCUSION

5.1 PRUEBA in vitro


5.1.1 Evaluacin de la bioactividad de los extractos aplicados a Fusarium
oxysporum f. sp. Gladioli
El cuadro 2 presenta el porcentaje de crecimiento y de inhibicin de los extractos
empleados para Fusarium oxysporum f. sp. Gladioli, cada extracto mostr una respuesta
diferente para inhibir el crecimiento del patgeno.
Cuadro 2: Porcentaje de crecimiento y porcentaje de inhibicin de los extractos vegetales
en Fusarium oxysporum f. sp. Gladioli
1
Extractos
Clavo
E1
E2
Semilla
de
guanbana
Cebolla
Ajo

Crecimiento Inhibicin Crecimiento Inhibicin Crecimiento Inhibicin


0
100
0
100
0
100
71.03
28.97
40
60
37.94
62.06
73.34
26.66
61.38
38.17
60.63
39.37
0
74.61
0

100
20.39
100

0
76.15
61.92

100
23.85
38.08

0
74.18
81.0

100
25.82
19

Los extractos vegetales utilizados presentaron capacidad para inhibir los patgenos que
atacan a la gladiola, aunque no todos mostraron el mismo potencial biolgico; estudios
hechos por (Rai y Mares 2003) demuestran que las plantas a travs de su proceso
evolutivo han mostrado mecanismos de defensa que involucra entre otros la sntesis de
metabolitos con propiedades antifngicas que pueden ser usados contra hongos que
atacan humanos, animales y cosechas.

INHIBICION DE EXTRACTOS

100
80
%

60

40

20
0

CLAVO

E1

E2

SEMILLA DE CEBOLLA
GUANABANA

AJO

EXTRACTOS

Figura 6: Porcentaje de inhibicin de los extractos vegetales evaluados para Fusarium


oxysporum f. sp. Gladioli
En la figura 6 se observa

que el extracto de clavo y el de semilla de guanbana

presentaron 100% de inhibicin en las evaluaciones en la que se realiz la medicin,


ambos extractos se consideraron como los mejores comparados con los otros ensayados.
(Maruzzella y Balter 1959) encontraron en pruebas in vitro accin inhibitoria de los aceites
esenciales de organo (Origanum vulgare), clavo (Thymus vulgaris) y cebolla (Allium
cepa) contra Fusarium oxysporum f. sp. conglutinans, F. oxysporum f. sp. lycopersici y
Verticillium alboatrum; respectivamente. Estas propiedades que han reportado de los
aceites esenciales mencionados ayudan a demostrar que el clavo tiene gran capacidad de
inhibicin, no tan solo su aceite esencial si no tambin su extracto etanlico ya que inhibi
por completo a Fusarium oxysporum f. sp. Gladioli.
El eugenol principio activo del clavo es uno de los ms fuertes inhibidores de enzimas
procesado y esta relacionado con compuestos como metil-or acetileugenol que puede
cambiar esta propiedad (Pepeljnjak et al 2004). Por lo que considero que si se usa aceite
esencial, extractos acuosos, extractos con solventes o polvos de clavo van a presentar
grado de inhibicin para los patgenos, solo restara determinar si todos tendran el
mismo grado de inhibicin o influira su preparacin.

Los extractos de semilla de guanbana presentaron 100% de inhibicin para Fusarium, al


respecto (Bories et al 1991; Rupprecht et al 1990) han reportado que la familia de las
Annonaceaes presentan actividad antibacterial, txica, antitumoral y pesticida.
Los extractos de E1 (extracto alta temperatura de chilcuague), E2 (extracto macerado de
chilcuague) y cebolla aumentaron su inhibicin al transcurrir los das del tratamiento;
aunque no tuvieron un porcentaje de inhibicin igual a 100% se consideran activos ya que
tuvieron inhibicin mayor del 20%; probablemente debido a que cada planta produce
diferentes metabolitos secundarios con propiedades y caractersticas que las hacen
diferentes entre ellas.
La afinina es la alcamida mayoritaria en las races de Heliopsis longipes y es la principal
responsable de los efectos biolgicos especficos observados, entre los que se pueden
considerar la accin de anestsico local, el estmulo organolptico, as como la actividad
insecticida y bactericida (Garca 2004); En dicho trabajo determinaron la presencia de
alcamidas y sus propiedades, pero no probaron su actividad biolgica por lo que en el
presente trabajo se demostr su actividad inhibitoria contra Fusarium.
El extracto de ajo fue el nico que mostr un comportamiento diferente, se esperaba que
el porcentaje de inhibicin aumentara con el paso de los das, sin embargo fue
disminuyendo, aunque tuvo un porcentaje de inhibicin mayor de 20% y se considera
activo, probablemente su respuesta se deba a la concentracin del extracto; ya que esta
fue alta y no inhibi como se esperaba.
El porcentaje de inhibicin de la primera evaluacin fue bajo en comparacin con las
otras evaluaciones, esto probablemente se deba a que el hongo aun no se adaptaba al
medio para desarrollarse o bien se consumi el principio activo. En la segunda y tercera
evaluacin se observ un porciento de inhibicin constante, para todos los extractos
excepto el extracto de ajo el cual tuvo una respuesta variable ya que con el paso de los
das despus de su inoculacin, su accin biolgica fue disminuyendo

Los extractos de clavo, E1, E2, semilla de guanbana, cebolla y ajo evaluados para
Fusarium oxysporum f. sp Gladioli se consideran activos ya que presentaron un
porcentaje de inhibicin mayor o igual al 20%. Aunque el extracto de semilla de
guanbana y clavo fueron los que causaron mayor inhibicin, los extractos E1, E2 y
cebolla tuvieron un porcentaje de inhibicin menor al de guanbana y clavo.

CRECIMIENTO DEL PATGENO

100
80
%

60

40

20
0

CLAVO

E1

E2

SEMILLA DE
GUANABANA

CEBOLLA

AJO

EXTRACTOS

Figura 7: Porcentaje de crecimiento de Fusarium oxysporum f. sp. Gladioli


en los extractos vegetales evaluados.
Los extractos de clavo y semilla de guanbana (figura 7) no permitieron el crecimiento de
los hongos demostrando as su alta capacidad para inhibir el crecimiento de Fusarium
oxysporum f. sp. Gladioli. Mientras que el extracto de cebolla y ajo fueron los que
permitieron un mejor crecimiento del patgeno.