UNIVERSIDAD NACIONAL DE COLOMBIA

FACULTAD DE MEDICINA
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIA

PRACTICAS DE LABORATORIO
BACILOS GRAM POSITIVOS
Maye Bernal Rivera

Introduccin
La mayora de bacilos gram positivos se encuentran ampliamente distribuidos en la
naturaleza y pueden formar parte de la microbiota normal tanto en el hombre como en
animales. Frecuentemente no son patgenos primarios para el hombre, aunque hay
algunas especies virulentas e importantes en patologa humana.
Listeria
Cocobacilos, Gram positivos, que se presentan aislados o agrupados en cadenas
cortas; mviles a 22C mostrando un aspecto de sombrilla, pero inmviles a 37C.
Crecen bien sobre placas de agar sangre, produciendo colonias pequeas,
translcidas, beta hemolticas, similares a Streptococcus sp, pero el halo de hemlisis
es pequeo en comparacin con el tamao de su colonia y a veces es necesario
remover la colonia para visualizar la hemlisis. Se desarrollan a 30-37C pero crece
a bajas temperaturas (4C), caracterstica que le permite desarrollarse en alimentos
refrigerados y producir infeccin por su consumo, convirtindose en el agente ms
importante por contaminacin alimentaria. Son catalasa positiva y utilizan hidratos
de carbono, como la glucosa, manosa y ramnosa, pero no el manitol. Hidrolizan la
esculina. Son aerobios facultativos y crecen mejor con una atmsfera de CO 2.
Erysipelothrix rusiopathiae
Bacilos gram positivos, microareflicos y exigentes. Carecen de la enzima catalasa
negativos y producen H2S. Son inmviles y no sintetizan cpsula ni esporos. Esta
especie se encuentra ampliamente distribuida en la naturaleza; En humanos produce
una celulitis erisipeloide caracterizada por una lesin eritematosa prpura, dolorosa,
no supurada y bastante pruriginosa. En general el proceso es autolimitado y rara vez
causa enfermedad sistmica la enfermedad humana es poco frecuente y se limita a
trabajadores de la pesca, de mataderos, carniceros, etc., configurando una
enfermedad laboral. Presenta hialuronidasa y neuraminidasa como mecanismos de
patogenicidad.
Corynebacterium
Bacilos Gram positivos pleomrficos, la mayora de las veces en forma de mazo y
agrupados en empalizada o formando letras en V, Y, L o caracteres chinos; por su
morfologa tpica se conocen como difteroides. Son facultativos pero hay algunas
especies aerobias estrictas. Se encuentran ampliamente distribuidos en la naturaleza

(suelo, agua, superficie de plantas) y forman parte de la microbiota normal de

humanos y algunos animales.
Bacillus
Bacilos Gram positivos esporulados, largos, gruesos y delgados con bordes
recortados y pueden agruparse en cadena; aerobios estrictos, con excepcin de
algunas especies facultativas. Se encuentran distribuidos en suelo, aguas y
vegetales y que por sus esporas logran mantenerse muchos aos, an en
condiciones adversas.

PRACTICA DE LABORATORIO
Objetivo
Proporcionar al estudiante el conocimiento cientfico y las habilidades prcticas de los
mtodos y tcnicas utilizados en Microbiologa Mdica para el aislamiento e
identificacin de las principales especies de bacilos Gram positivos que afectan al
hombre

PARTE I. SIEMBRA
Objetivos especficos
-

Establecer la diferencia entre gneros de bacilos gram positivos aerobios

Estudiar las caractersticas macroscpicas, microscpicas y cambios producidos
en el medio de diferentes especies de bacilos gram positivos
Conocer algunas de las pruebas bioqumicas de laboratorio utilizadas para la
identificacin de especies de bacilos gram positivos
Identificar especies de los gneros Listeria, Erysipelothrix, Corynebacterium y
Bacillus.
Estudiar el caso clnico y aislar e identificar el agente etiolgico, a partir de la
muestra biolgica del paciente asignado.

Materiales
-

Asa curva
Mechero
Casos clnicos
Muestras biolgicas
Caldo BHI
Agar Sangre
Campana con vela (CO2 ) e incubadora a 37C y a 22C.

Procedimiento
1. Marcar adecuadamente cada uno de los medios.
2. Sembrar la muestra en caldo BHI y agar sangre (por agotamiento)
3. Incubar a 37C por 24 horas en aerobiosis con atmsfera de CO2

4. Realizar pruebas para la identificacin del agente, segn instruccin del

profesor. (Motilidad, Glucosa, Manitol, etc)
Actividad
1. Escriba qu pruebas se debe realizar para diferenciar Listeria sp de
Erysipelothrix sp.
2. Cules son las especies de cada uno de estos gneros ms importantes en
patologa humana?

PARTE II.
LECTURA E INTERPRETACION PARA LA DIFERENCIACION E IDENTIFICACIN
DEL AGENTE ETIOLGICO.
Listeria. Diagnstico de Laboratorio
Las colonias de listeria son medianas, cremosas, traslcidas, ligeramente convexas,
de bordes regulares, rodeadas de una halo pequeo de beta hemlisis. Para iniciar la
identificacin adems de las caractersticas macro y microscpicas de la colonia, se
utiliza la prueba de la catalasa que permite diferenciarlos del gnero estreptococo.
Pruebas Bioqumicas

CATALASA
Principio
La catalasa es una enzima que descompone el perxido de hidrgeno (H 2O2) en
agua y oxgeno segn la siguiente reaccin:
2H2O2 2H2O + O2 (burbujas de gas)
Materiales
- Colonia aislada (Medio de cultivo sembrado e incubado)
- Perxido de hidrgeno al 3%
Procedimiento
1. Con un palillo de madera, transferir parte del centro de una colonia a la
superficie de un portaobjetos.
2. Agregar una gota de perxido de hidrgeno al 3% y observar la formacin de
efervescencia o burbujas.
Resultados
- Positiva: Una prueba positiva esta dada por la aparicin rpida y sostenida de
burbujas o efervescencia.
- Negativa: Unas pocas burbujas pequeas despus de 20 a 30 segundos se
considera un resultado negativo.
- Falsas Positivas: Los eritrocitos poseen catalasa, por lo cual debe tenerse
cuidado de no tomar eritrocitos del agar sangre junto con el material de la
colonia.

Prueba de Motilidad
Principio
Determinar si la bacteria es mvil o inmvil. Ayuda a diferenciar entre cepas de
Listeria monocytogenes y cepas de Corynebacterium
Materiales
- Colonia aislada
- Agar motilidad
Procedimiento
- Inocular en el medio de motilidad, haciendo una picadura central, hasta la
mitad del medio
- Incubar a 22C por 48 horas
Resultados
- Positiva: Motilidad en sombrilla .
- Negativa: Inmvil, el medio permanece lmpido (crecimiento nicamente en la
lnea de inculo.

UTILIZACION DE HIDRATOS DE CARBONO

Principio
Determinar la capacidad del microorganismo de utilizar (fermentar o degradar) un
carbohidrato especfico incorporado en un medio de cultivo bsico, con la produccin
de cido, el cual provoca la disminucin del pH en el medio y este se detecta
mediante el viraje del indicador rojo de fenol a amarillo.
Materiales
- Cepa en estudio
- Caldo con un hidrato de carbono incorporado (Glucosa, Manosa, Sacarosa,
Ramnosa, Manitol, etc.)
Procedimiento
- Sembrar la colonia en el caldo
- Incubar a 35C por 24 horas
Resultados
- Positivo: cuando el indicador del medio vira a amarillo
- Negativo: cuando conserva su color rojo

Desarrollo
1.
2.
3.
4.
5.

Describir las caractersticas macroscpicas de la colonia

Clasificar el tipo de hemlisis
Observar las caractersticas microscpicas mediante la coloracin de Gram
Leer e interpretar las diferentes pruebas bioqumicas
Identificar el agente etiolgico (Gnero y especie) del caso clnico asignado

Actividad
1. Dibuje las diferentes caractersticas microscpicas de los hallazgos.
2. Defina los diferentes tipos de hemlisis.
3. Realice un flujograma para la identificacin del agente etiolgico de la muestra
asignada.
4. Escriba 3 enfermedades infecciosas que produzca cada uno de los agentes
etiolgicos aislados en el grupo y otras especies de microorganismos Gram
positivos importantes en patologa humana.
5. Haga un cuadro con las entidades ms importantes producidas por las
especies de estos gneros y el examen microbiolgico de Laboratorio, til para
su diagnstico.