BANCO DE SANGRE

Introduccin
La sangre ha sido transfundida con xito durante unos 60 aos. En este periodo de tiempo la prctica transfusional ha
cambiado radicalmente debido a mejoras en los mtodos de extraccin y conservacin de la sangre. Los objetivos
principales de los procedimientos de extraccin, preparacin, conservacin y transporte de la sangre y sus componentes
son:
1. mantener la viabilidad y la funcin de los componentes ms importantes.
2. evitar los cambios fsicos perjudiciales para los componentes.
3. minimizar la proliferacin bacteriana.
La solucin anticoagulante-conservante evita la coagulacin y proporciona los nutrientes adecuados para un metabolismo
continuado de las clulas durante el almacenamiento. Durante el almacenamiento la integridad de las clulas sanguneas
depende de un delicado equilibrio bioqumico de muchos materiales, especialmente la glucosa, los iones hidrgeno (pH), y
el trifosfato de adenosina (ATP). Este equilibrio se mantiene mejor en los hemates cuando se almacenan a una temperatura
entre 1 y 6 C, en tanto que las plaquetas y leucocitos mantienen mejor su funcin almacenados a temperatura ambiente.
Los factores de coagulacin plasmticos lbiles se mantienen mejor a una temperatura de -18 C o inferior. Adems, la
refrigeracin o congelacin minimizan la proliferacin de bacterias que podran haberse introducido en la unidad durante
la venipuntura o procesamiento.
De la sangre total pueden separarse varios componentes en el mismo banco de sangre. Los hemates y las plaquetas se
aslan de la sangre total mediante centrifugacin suave, siendo posteriormente procesados para obtener varios preparados
distintos.
El plasma residual puede utilizarse directamente o bien ser fraccionado nuevamente para obtener otros componentes.
Normalmente se obtienen ms de 20 productos.
Entendemos por COMPONENTE SANGUNEO al producto separado de una unidad de sangre total, mientras que la
denominacin DERIVADO DEL PLASMA hace referencia a un producto separado de un gran volumen de mezclas de
plasma mediante un proceso llamado FRACCIONAMIENTO.

Sangre y componentes hemoderivados:

SANGRE TOTAL
Definicin:
Unidad de sangre extrada con un anticoagulante y bolsa autorizados y no fraccionada.
Contenido: Una unidad de sangre total (ST) contiene 450 mL de sangre ms aproximadamente 63 mL de solucin
anticoagulante-conservadora, con lo que su volumen final est en torno a los 500 mL.

Conservacin:
La sangre total puede ser almacenada refrigerada entre 21 y 35 das dependiendo de la solucin conservante
anticoagulante-utilizada. Durante la conservacin a 4 C las plaquetas y leucocitos dejan de ser funcionantes al cabo de
pocas horas despus de la extraccin, y se produce una reduccin gradual de la viabilidad de los hemates. Los hemates
conservados durante 5 semanas en CPD-A presentan una recuperacin media del 70%, la recuperacin mnima aceptable.
Los niveles de factores V y VIII tambin descienden. La tasa de Factor VIII experimenta una disminucin del 50% a las 24
horas de la extraccin y el factor V queda reducido al 50% a lo 10-14 das.
Por tanto la transfusin de sangre total supone el aporte de hemates y plasma deficitario en factores lbiles de la
coagulacin, no aportando tampoco plaquetas ni granulocitos.

Indicaciones:
Aunque es necesario disponer de un pequeo almacn de sangre total raras veces se utiliza. En realidad se considera un
despilfarro emplear sangre total, pues ello impide la preparacin de componentes especficos. Aunque su uso se considera
ya como un vestigio del pasado, si se dispone de ella en el banco de sangre son muy pocas sus indicaciones, estando slo
reservada para:
1. Hemorragia aguda masiva (espontnea, traumtica o quirrgica) asociada a shock hipovolmico, el cual nunca se
produce con prdidas inferiores al 25% del volumen sanguneo. La prdida aguda de hasta el 10-15% del volumen
sanguneo (hasta 750 mL en un adulto de unos 70 Kg de peso) suele ser bien tolerada. Si las prdidas superan el 20%,
existe riesgo de shock hipovolmico y debe iniciarse la reposicin de volumen. En las prdidas superiores al 40% de la
volemia debe recordarse que lo que determina la gravedad del cuadro clnico en la hemorragia aguda es la hipovolemia y
no la deficiencia de hemates, de forma que si se mantiene un volumen sanguneo normal, y por tanto la perfusin tisular,
la tolerancia de la anemia grave es buena. Por ello, debe iniciarse de forma rpida el tratamiento con soluciones
cristaloides y/o coloides. Cuando se haya completado el estudio pretransfusional del enfermo se perfundirn los
hemocomponentes adecuados o si la prdida de sangre supera el 80% del volumen sanguneo, sangre total si se dispone de
ella.
2. Exaguinotransfusiones: en este caso la sangre total deber no exceder de los 5 das.

CONCENTRADO DE HEMATIES
Definicin:
Componente obtenido tras la extraccin de aproximadamente 200 mL de plasma de una unidad de sangre total despus por
centrifugacin. Son el componente sanguneo ms frecuentemente usado para incrementar la masa de clulas rojas.

Contenido:
Contiene los hemates correspondientes a una unidad de sangre total, ms unos 100 mL de plasma residual.

Conservacin:
Cuando la sangre se recoge en bolsa que contienen CPD-A, estos concentrados pueden conservarse durante 35 das a 4 C.

Indicaciones:
Los concentrados de hemates estn bsicamente indicados en enfermos normovolmicos, con anemia crnica sintomtica,
refractaria al tratamiento etiolgico, aunque su uso asociado a otros componentes celulares y plasma o sustitutos
plasmticos es hoy habitual en el tratamiento de la anemia aguda hemorrgica.
El objetivo del tratamiento transfusional en el enfermo con anemia refractaria de comienzo lento es mejorar la capacidad
de transporte de oxgeno y evitar su sintomatologa.
Debe transfundirse slo al enfermo con sntomas estables, de severidad moderada, causados directamente por la anemia. es
importante tener siempre en cuenta que la transfusin mejorar slo transitoriamente la anemia, puesto que el trastorno
subyacente persiste. No debe olvidarse que la vida media de una donacin normal son aproximadamente 50 das, y que la
transfusin se asocia adems, a la supresin de la eritropoyesis residual de la mdula sea del enfermo, por lo que la
hemoglobina volver a niveles pretransfusionales en pocas semanas.
De un modo general puede establecerse que si la concentracin de Hb es 10 g/dL, la transfusin casi nunca est indicada.
Si la Hb es de 5-8 g/dL, es fundamental el juicio clnico para tomar la decisin de transfundir o no. Si la Hb es inferior a 5
g/dL, la mayora de enfermos requieren transfusin repetida.
En la anemia aguda hemorrgica hay que tener en cuenta que la sintomatologa anmica depender tanto de la intensidad
de la anemia como de la velocidad de instauracin. As, la transfusin de concentrados de hemates puede estar tambin
indicada cuando la disminucin en la cifrade Hb es superior a 2 gr/24 horas.

CANTIDAD A TRANSFUNDIR
El volumen a transfundir depender del volumen sanguneo del enfermo, de la
severidad de la anemia y del nivel de Hb que se desea conseguir. La siguiente frmula simplificada es til para calcular el
efecto previsible sobre la concentracin de Hb de la transfusin:

Como gua aproximada podemos estimar que, en un adulto de unos 60 Kg de peso, una unidad de 250 mL de CH
aumentar la Hb en 1.2 g/dL y el hematocrito en 3 %.

Usos inapropiados:
- como expansor de volumen plasmtico.
- como sustituto de terapeticas especficas para anemia.
- para mejorar la cicatrizacin de heridas.
- para mejorar el tono vital del paciente.
- con Hb superior a 10 gr/dL.
Debido a su elevado valor hematocrito los CH son viscosos y por ello su velocidad de infusin es lenta. La velocidad
puede incrementarse mediante la adicin de suero salino para disminuir la viscosidad. Las soluciones que contienen calcio,
como el ringer-lactato, no deben aadirse a ningn producto sanguneo, ya que pueden inducir la coagulacin. las
soluciones de glucosa deben evitarse ya que forman grumos de hematies . EN GENERAL NO DEBEN AADIRSE A

LOS PRODUCTOS SANGUINEOS OTRAS SUSTANCIAS QUE NO SEAN SUEROS SALINOS.

SANGRE DESLEUCOCITADA
Los pacientes que experimentan fuertes y/o reiteradas reacciones no hemolticas febriles a causa de las transfusiones
suelen mejorar cuando se les transfunde hematies pobres en leucocitos.

Definicin:
La denominacin "hematies pobres en leucocitos" se aplica a aquellos concentrados preparados segn un mtodo que
reduce el contenido de leucocitos en el componente final a una cifra inferior a 5 x 108, reteniendo como mnimo el 80 %
de los hematies originales. El nombre correcto para este componente es " hematies libres de leucocitos separados por
(mtodo utilizado)". Entre los mtodos para eliminar leucocitos se encuentra la filtracin, la centrifugacin, y el lavado.
La mayora de las reacciones provocadas por anticuerpos anti leucocitos dependen de la cifra de stos, por lo tanto, en
muchos casos una reduccin del 50 % del nmero de leucocitos en una unidad de hematies evitar la reaccin. No obstante
en algunos pacientes la eliminacin de ms del 95 % de los leucocitos puede no anular la respuesta febril.

HEMATIES LAVADOS
Definicin:
Componente obtenido a partir de una unidad de sangre total a la que se le ha retirado el plasma mediante lavados con
solucin isotnica.
El lavado de los hematies no es el mtodo ms eficaz para eliminar los leucocitos, aunque si se consigue eliminar el
plasma. El proceso de lavado elimina la mayor parte de las proteinas plasmticas y microagregados. Los pacientes IgA
deficientes y con anticuerpos antiIgA pueden experimentar reacciones anafilcticas despus de la tramsfusin de sangre o
componentes sanguneos que contenga IgA. La transfusin de hematies lavados reduce la incidencia de reacciones febriles,
urticarias, y probablemente tambin reacciones anafilcticas. Lo ideal, sin embargo, en estos pacientes es utilizar sangre de
donantes IgA deficientes.

Indicaciones:

- anemia con anticuerpos antileucocitarios

- anemia con anticuerpos antiproteinas plasmticas
- prevencin de isoinmunizacin HLA
- anemia hemoltica autoinmune
- hemoglobinuria paroxstica nocturna

NEOCITOS
Los neocitos son hematies relativamente jvenes, que se consideran especialmente aptos para realizar transfusiones a
pacientes afectos de talasemia mayor y otras enfermedades que requieran transfusiones peridicas que pueden inducir el
desarrollo de una hemocromatosis. En el proceso de envejecimiento los hematies depositan hierro en los depsitos tisulares
a razn de 1,08 mg de hierro por mL de hematies. Los hematies transfundidos tienen en teora un promedio de vida de 60
das, pero en la prctica sobreviven generalmente durante menos tiempo. El aislamiento y posterior transfusin de
hematies con un promedio de vida de 30 das y unas probabilidaddes de supervivencia de 90 das, podra reducir a la mitad
la frecuencia de las transfusiones peridicas que reciben un paciente y la cantidad de hierro depositado en los tejidos

HEMATIES CONGELADOS
Definicin:
Hemates congelados preferentemente antes de los 7 das postextraccin, utilizando crioprotector y conservados a
temperatura inferior a - 80 C.

Indicaciones:
Los hemates pueden ser congelados utilizando tcnicas especiales de criopreservacin.
Dichas tcnicas permiten periodos de conservacin de hasta 10 aos. Se trata de procedimientos caros; por tanto el uso de
hemates congelados se recomienda en circunstancias especiales, entre las cuales destacan:
- autotransfusin
- individuos pertenecientes a grupos sanguneos raros
- individuos con anticuerpos mltiples

PRODUCTOS PLAQUETARIOS
Durante los ltimos aos los hospitales han experimentado un significativo aumento en el uso de concentrados de
plaquetas, especialmente debido al soporte de tratamientos oncolgicos y al aumento que han experimentado los
trasplantes de rganos.
Podemos disponer de 2 productos:

1. PLASMA RICO EN PLAQUETAS (poco usado): se obtiene despus de una centrifugacin suave de la sangre
total.

2. CONCENTRADOS DE PLAQUETAS: un concentrado de plaquetas corresponde a las plaquetas obtenidas de

una
unidad de sangre total por doble centrifugacin, o bien a partir de donantes por medio de procesos de afresis
(plaquetofresis), procedimineto por el cual el donante slo dona plaquetas.
Contenido:
Los concentrados de plaquetas contienen aproximadamente 6 x 109 plaquetas, lo que representa el 60-80 % de las
contenidas en una unidad de sangre total, en un volumen reducido de plasma (50-70 mL).

Conservacin:
Segn la bolsa de plstico utilizada las plaquetas son viables durante 5 das o ms si se mantienen a 22 C sometidas a una
agitacin horizontal constante.

Dosis:
El clculo de la dosis de CP se debe realizar calculando 1 unidad de CP por cada 10 Kg de peso.
Cuando en un paciente se observa un bajo recuento de plaquetas, debe confirmarse que se trata de una trombocitopenia
real y por tanto se debe excluir un recuento falseado o PSEUDOTROMBOCITOPENIAS presentes en el 1% de los

pacientes, generalmente causadas por la presencia del anticoagulante o por una tcnica deficiente. Se debe tener en cuenta
tambin que el riesgo de hemorragia espontnea est principalmente determinado por el grado de trombocitopenia, pero
que ste no es el nico motivo hemorrgico (hay pacientes que alcanzan cifras de 5000/mL sin sangrado). Por todo ello no
es posible definir con certeza la cifra de plaquetas a partir de la cual se requiere la administracin profilctica de CP.

Indicaciones:
1. Presencia de hemorragia en paciente trombocitopnico.
2. Trastornos cualitativos plaquetares con presencia o con datos sugestivos de hemorragia inminente de riesgo vital, o
cuando estos pacientes vayan a someterse a cirugia.
3. En las trombocitopenias secundarias a quimioterapia es clsico el umbral de 20.000 plaquetas/mL como cifra por debajo
de la cual se incrementa el riesgo hemorrgico y por tanto debe iniciarse la trasnfusin de CP. Sin embargo la poltica
actual es ms restrictiva y bascula entre 2 tendencias:

a. USO PROFILCTICO: Gmr et al. aconsejan mantener a los enfermos por encima de:
5.000/mL si no hay factores adicionales
10.000/mL si hay fiebre o manifestaciones hemorrgicas menores
20.000/mL si existen lesiones anatmicas, otra coagulopata o administracin simultnea de heparina.

b. TRANSFUSIN TERAPETICA: Patten et al. en Texas siguen un programa de transfusin slo terapetica cuando
aparecen hemorragias importantes y el enfermo tiene una cifra de plaquetas inferior a 20.000/mL, sin observar incrementos
de la mortalidad.

4. En enfermos que van a ser sometidos a procesos invasivos: para realizarlas en condiciones de seguridad se pantea a
menudo el problema del nivel mnimo aconsejable. En general se recomienda:
- una cifra plaquetaria mnima de 40-50.000/mL para acometer estos procedimientos, sobretodo cuando se trata de
acceder a zonas no visualizables, inflamadas, muy vascularizadas o con presiones altas. Bishop et al aconseja llegar al acto
operatorio con una cifra trombocitaria superior a 50.000(mL y en los 3 das siguientes mantener un recuento de plaquetas
superior a 30 40 x 109/mL
- por el contrario, cuando se trate de incidir en lugares de observacin directa o con posibilidad de hemostasia mecnica
el nivel de plaquetas puede ser algo menor.

DERIVADOS DEL PLASMA

Junto con el agua y los electrolitos, el plasma contiene proteinas (albmina, globulinas y factores de la coagulacin),
siendo adecuado para la reposicin de estos factores. La mayora de los factores de la coagulacin son estables a
temperatura de refrigeracin, excepto el VIII y, en menor grado, el V. Para mantener niveles adecuados de los factores V y
VIII debe conservarse el plasma congelado. Generalmente el plasma se obtiene a partir de sangre total durante la
preparacin de otros componentes como CH y plaquetas.

PLASMA FRESCO CONGELADO

Definicin:
Se define como PFC el plasma separado de la sangre de un donante y congelado a una temperatura inferior a -18 C en las
8 horas siguientes a la extraccin.
Si se almacena a -30 C (mejor que a -18 C) el PFC tiene un periodo de caducidad de 12 meses. Pasado este tiempo, el
nivel de Factor VIII puede haber disminuido en algunas unidades de tal manera que el plasma ya no sea ptimo para el
tratamiento de pacientes con esta deficiencia. Si el PFC no se utiliza en el plazo de un ao, debe considerarse a partir de
entonces y etiquetarse como PLASMA. El plasma con esta nueva denominacin tiene 4 aos ms de vida til si se
conserva a -18 C o menos.

Indicaciones:
La Conferencia Consenso sobre el Plasma ha delimitado claramente las indicaciones del PFC, clasificndolas en diversos
grupos segn la fortaleza de la indicacin.

A. INDICACIONES EN LAS QUE SU USO ESTA ESTABLECIDO Y DEMOSTRADA SU EFICACIA:

existen pocas situaciones clnicas en las que el PFC tiene utilidad teraputica demostrada.
1. Prpura trombtica trombocitopnica

2. Prpura fulminante del recin nacido, secundaria a dficit congnito de protena C o protena S, cuando no se disponga
de concentrados especficos de dichos factores.
3. Exanguinotransfusin en neonatos, para reconstituir el concentrado de hemates cuando no se dispone de sangre total.

B. INDICACIONES EN LAS QUE SU USO ESTA CONDICIONADO A LA EXISTENCIA DE

HEMORRAGIA GRAVE Y ALTERACIONES SIGNIFICATIVAS DE LAS PRUEBAS DE LA
COAGULACIN:
1. Pacientes que reciben una transfusin masiva (reposicin de un volumen igual o superior a su volemia en menos de 24
horas)
2. Trasplante heptico.
3. Reposicin de los factores de la coagulacin en las deficiencias congnitas, cuando no existen concentrados especficos.
4. Situaciones clnicas con dficit de vitamina K que no permiten esperar la respuesta a la administracin de vitamina K IV
o no responden adecuadamente a sta (malabsorcin, enfermedad hemorrgica del RN,...)
5. Neutralizacin inmediata del efecto de los anticoagulantes orales.
6. Secundarias a tratamiento tromboltico, cuando el sangrado persista tras suspender la perfusin del frmaco tromboltico
y despus de administrar un inhibidor especfico de la fibrinolisis.
7. CID aguda, una vez instaurado el tratamiento adecuado.
8. Ciruga cardiaca con circulacin extracorprea siempre que se hayan descartado otro motivos de hemorragia
(trombocitopenia...)
9. Insuficiencia hepatocelular grave y hemorragia microvascular difusa o hemorragia localizada con riesgo vital.
10. Reposicin de factores plasmticos de la coagulacin depleccionados durante el recambio plasmtico, cuando se haya
utilizado la albmina como solucin de recambio.

C. INDICACIONES EN LAS QUE SU USO ESTA CONDICIONADO A OTROS FACTORES: en ausencia de

clnica hemorrgica ser suficiente la alteracin de las pruebas de la coagulacin para indicar la administracin de
PFC en:
1. pacientes con dficit congnitos de la coagulacin, cuando no existan concentrados de factores especficos, ante la
eventualidad de una actuacin agresiva (ciruga, extracciones dentarias, biopsias...)
2. En pacientes sometidos a anticoagulacin oral que precisen ciruga inminente.

D. SITUACIONES EN LAS QUE EXISTE CONTROVERSIA SOBRE SU EFECTIVIDAD:

1. Prevencin de la hemorragia microvascular difusa en enfermos que tras haber sido transfundidos masivamente tengan
alteraciones significativas de las pruebas de la coagulacin, aunque no presente manifestaciones hemorrgicas.
2. Como profilaxis de la hemorragia en pacientes con hepatopatas y trastornos importantes de la coagulacin, que deben
ser sometidos a una intervencin quirrgica o proceso invasivo.
3. En los pacientes crticos por quemaduras, en la fase de reanimacin no puede recomendarse su utilizacin sistemtica.

E. SITUACIONES EN LAS QUE SU USO NO ESTA INDICADO:

1. todas aquellas que puedan resolverse con terapias alternativas o coadyuvantes.
2. en la reposicin de la volemia.
3. Prevencin de hemorragia intraventricular del RN prematuro.
4. Como parte integrante de esquemas de reposin predeterminados.
5. Como aporte de Inmunoglobulinas.
6. Uso profilctico en pacientes diagnosticados de hepatopata crnica con alteraciones de las pruebas de la coagulacin,
que van a ser sometidos a procesos invasivos menores.
7. Pacientes con hepatopata crnica e insuficiencia hepatocelular avanzada e fase terminal.
8. El PFC no debe utilizarse como aporte:
- nutricional o para al correccin de la hipoproteinemia
- alimentacin parenteral
- de factores de la coagulacin en el recambio plasmtico (exceptuando los puntos A1 y B10).
9. Correccin del efecto anticoagulante de la heparina
10. Reposicin de volumen en las sangras de RN con policitemias
11. Ajuste del hematocrito de los concentrados de hematies que van a ser transfundidos a los RN.

Efectos adversos y riesgos:

- transmisin de agentes infecciosos, fundamentalmente VHC, VHB, VIH, y otros virus a pesar de las medidas de
deteccin previas a la transfusin.
- hemlisis por incompatibilidad ABO
- sobrecarga de volemia
- Reacciones alrgicas, urticariformes y anafilcticas.
- Toxicidad por el citrato (hipocalcemia grave)
- edema pulmonar no cardiognico.
- aloinmunizacin eritrocitaria.

CRIOPRECIPITADO
Definicin:
Es la parte insoluble en frio del plasma que resulta de la descongelacin entre 1 y 6 C del PFC .

Contenido:
Contiene un 50% del Factor VIII, un 20-40% del fibringeno y un 30% del factor XIII que estaban presente originalmente
en el PFC.
Contiene tanto factor VIII:C como Factor de Von Willebrand. Los standars establecen que al menos el 75% de las bolsas de
crioprecipitado deben contener un mnimo de 80 UI de factor VIII. Cada unidad contiene una cantidad variable de
fibringeno, normalmente 100-350 mg.

Duracin:
Congelado a -40 C tiene una duracin de 1 ao, pero una vez descongelado debe usarse antes de las 4 horas.

Indicaciones:
Su efecto es restaurar el Factor VIII y/o el fibringeno (factor I), siendo por tanto sus principales indicaciones la
Enfermedad de Von Willebran y la hipofibrinogenemia. Aunque en estas enfermedades puede utilizarse el PFC como
tratamiento de reposicin temporal, es ms apropiado el crioprecipitado debido a su menor volumen (25-30 mL).
Tambin pueden ser usados en la hemofilia A (dficit congnito factor VIII) y en el deficit congnito de fator XIII aunque
en estas entidades son ms eficaces los concentrados de factores especficos .

Dosis:
La dosis a administrar depender del volumen sanguneo del receptor y de su situacin clnica. De forma orientativa puede
indicarse 1 bolsa de crioprecipitado por cada 6-7 Kg de peso.

CONCENTRACION DE LOS FACTORES PLASMATICOS DE LA COAGULACION

Actualmente es posible obtener concentrados de la mayora de los factores plasmticos de la coagulacin a partir del PFC,
aunque cada vez son ms los productos de origen genticos. Estos ltimos parecen conseguir igual actividad biolgica y
efectividad teraputica junto a un menor riesgo de transmisin de enfermedades infecciosas (VIH, VHB,...), sin embargo
su costo es extremadamente alto y por ello no son todava claras sus indicaciones. Paralelamente los concentrados
obtenidos a partir del PFC son sometidos a distintos procesos de inactivacin viral (pasteurizacin, solvente-detergente,
calor seco,...) que los hacen igualmente seguros.
Los concentrados ms utilizados son:

Concentrados de factor VIII:

* Preparados de origen plasmtico de pureza intermedia (< 10 UI/mg de protena): Kryobulin TIM 3, Hemate-P.
Aunque su uso es clnicamente aceptable, la mayor alteracin inmunolgica que producen hacen aconsejable su sustitucin
por otros tipos de preparados.
* Preparados de origen plasmtico de alta pureza (<10 UI/mg de proteina): Beriate-P, Fanhdi, Hemofil M, Monoclate-P.
De eleccin en el tratamiento de la hemofilia A, si bien en los hemoflicos VIH negativos la tendencia actual es la
administracin de preparados recombinantes.
* Preparados recombinantes: Bioclate, Helixate, Kogenate, Recombinate.
* Preparados de Factor VIII porcino: Hyate C.
La administracin de FVIII a los pacientes hemoflicos puede seguirse de la aparicin de anticuerpos contra el FVIII
humano, de tal forma que posteriores administraciones resultan ineficaces en la prevencin y tratamiento de procesos
hemorrgicos. En estos casos una posibilidad es la administracin de FVIII porcino, ya que los inhibidores del FVIII
tienen algn grado de especificidad de especie.
El tratamiento se debe iniciar con una dosis de 50-100 UI/Kg, con dosis subsecuentes dependiendo de la respuesta.

Concentrados de factor VIII y factor Von Willebrand:

* Producto: Haemate P
* Contenido: 1.000 UI de FVIII 2.200 UI de FvW
* Indicaciones: aunque puede ser utilizado en la hemofilia A su principal indicacin es la enfermedad de von Willebrand, a
dosis de 20-40 UI FVIII/Kg cada 12 horas.

Concentrados de factor IX:

Pueden usarse preparados plasmticos que junto al FIX contienen otros factores del complejo protrombnico (FII, FVII,
FX), o concentrados de FIX de alta pureza obtenidos por procedimientos cromatogrficos.
El uso de estos preparados en pacientes portadores de Hemofilia B se ha asociado a la aparicin de fenmenos
trombticos, a menudo fatales. Se ha recomendado, por ello, la administracin de 5-10 UI de Heparina por ml de
concentrado, previamente al uso de estos preparados, sobre todo es casos de terapia sustitutiva por ciruga ortopdica, o
bien la utilizacin conjunta de concentrados de antitrombina III. sin embargo estas medidas no han eliminado
completamente las complicaciones trombticas.
Tanto los CCP como los de FIX ejercen un efecto hemosttico satisfactorio, si bien estos ltimos tienen menor capacidad
de generar un estado tromboflico. Aunque la posible aparicin de trombosis relacionada con la administracin de de CCP
no es una complicacin frecuente que contraindique stos de manera general, se recomienda el uso de Concentrados de
FIX en las siguientes situaciones:
- necesidad de mantener niveles elevados de FIX
- en sujetos hemoflicos sometidos a ciruga de riesgo o con hepatopatas crnicas o bien con antecedentes de
enfermedad tromboemblica.
- en situaciones que generan un estado de hipercoagulabilidad (diabetes, procesos spticos, ...) y en el Recin Nacido
prematuro.
- Hemoflcos B sometidos a tratamiento erradicador de un inhibidos por inmunotolerancia.

Concentrados del complejo protrombnico activado (CCPA):

Durante las dos ltimas dcadas los CCPA han sido el sostn principal del tratamiento de episodios hemorrgicos en
hemoflicos con inhibidores de los factores VIII o IX. Su mecanismo de accin se basa en la llamada "actividad Bypass del
inhibidor", es decir, la coagulacin se induce en el punto en el que el FVIII no es necesario (el factor VIIa contenido en el
preparado activara al FX sin requerir al FVIII).
Dosis:
+ Hemorragia leve: 50-100 UI/Kg en una sola dosis.
+ Hemorragia severa-mediana: 100 UI/Kg/6 horas (2 dosis), continuar con 50 UI/Kg/12 horas valorando la respuesta a las
24 horas.
+ Hemorragia muy grave: 100-200 UI/Kg cada 6-8 horas.

TECNICAS
GRUPO AB0
OBJETO
Determinar el grupo ABO (hemtico/srico) y el factor Rh (D) en tarjeta.
DESARROLLO
1.

Identificar la tarjeta con el nombre y apellidos del receptor.

2.

Preparar en un tubo debidamente identificado una dilucin con 10 l de sangre total del paciente y 0.5 ml de Id-Diluent .

3.

Depositar 50 l de la dilucin de hemates en los pocillos con anti-A anti-B, anti-AB, anti-D, anti-CDE y control.

4.

Depositar 50 l de dilucin de hemates comerciales A1 y B en los otros dos pocillos.

5.

Aadir 50 l de suero o plasma del paciente en los pocillos de hemates comerciales.

6.

Centrifugar en la centrfuga.

7.

Proceder a la lectura.

INTERPRETACIN:

Si el botn de hemates queda en la parte superior del pocillo indica aglutinacin y la lectura es positiva. La
gradacin de la positividad se realizar segn figura 1.

La presencia de hemlisis indica igualmente positividad.

Si el botn de hemates se deposita en el fondo del pocillo la lectura es negativa.

Si existe discrepancia entre grupo srico y hemtico habr que resolverla antes de informar el resultado.

Fenotipo Rh-Kell.
OBJETO
Determinar los antgenos del sistema Rh y Kell (D, C, c, Cw, E, e y Kell).

DESARROLLO
1. Identificar una tarjeta DiaClon Rh-subgroups+K con el nombre y apellidos del paciente.
2. Preparar en un tubo debidamente identificado una dilucin con 10 l de sangre total del paciente y 0.5 ml de IdDiluent 1.
3. Depositar 10 l de la dilucin de hemates en los pocillos con anti-C, anti-c, anti-E, anti-e, anti-K y Control
4. Centrifugar en la centrfuga Diamed.
5. Proceder a la lectura.

INTERPRETACIN

Si el botn de hemates queda en la parte superior del pocillo indica aglutinacin y la lectura es positiva.
La presencia de hemlisis indica igualmente positividad.

Si el botn de hemates baja la lectura es negativa.

Confirmacin de antgeno D
OBJETO
Determinar el antgeno D

DESARROLLO
1. Identificar un tarjeta Diamed anti-D con el nombre y apellidos del paciente.
2. Preparar en un tubo debidamente identificado una dilucin con 10 l de sangre total del paciente y 0.5 ml de IdDiluent 1.
3. Depositar 10 l de la dilucin de hemates en los pocillos con anti-D y Control
4. Centrifugar en la centrfuga Diamed.
5. Proceder a la lectura.

INTERPRETACIN

Si el botn de hemates queda en la parte superior del pocillo indica aglutinacin y la lectura es positiva.
La presencia de hemlisis indica igualmente positividad.

Si el botn de hemates baja la lectura es negativa.

Grupo hemtico en tubo

OBJETO
Determinar el grupo ABO en tubo.
DESARROLLO
1.

Depositar una gota de anti-A, anti-B, y anti-AB, en tres tubos limpios y convenientemente rotulados.

2.

Aadir una gota de hemates problema diluidos en suero salino al 2-5% a cada tubo.

3.

Mezclar suavemente agitando el contenido de los tubos y centrifugar durante 20 segundos 3000 rpm

4.

Retirar de la centrfuga y resuspender suavemente el sedimento de los hemates.

5.

Examinar la presencia o ausencia de aglutinacin y anotar los resultados.

INTERPRETACIN

La presencia de aglutinacin o hemlisis indicar que la reaccin es positiva, mientras que una suspensin
uniforme de hemates se considerar como resultado negativo.

Las discrepancias entre los resultados del grupo ABO hemtico y srico deben resolverse antes de clasificar el grupo ABO del
paciente.

Grupo serico en tubo

OBJETO
Determinar la presencia o ausencia de anti-A y anti-B en el plasma o suero del paciente .

DESARROLLO
Utilizaremos hemates reactivo A1 y B de origen comercial.
Opcionalmente podemos realizar el grupo srico utilizando adems hemates A2 y O.
1. Colocar una gota de hemates reactivo en cada uno de los tubos limpios y rotulados. (A1, A2, B y O).
2. Aadir dos gotas de suero problema a cada tubo.
3. Agitar suavemente y centrifugar durante 20 segundos a 3000 rpm (900-1000 x g).
4. Examinar los tubos en busca de hemlisis. Resuspender suavemente el sedimento de hemates y observar la presencia
o ausencia de aglutinacin. Anotar resultados.

INTERPRETACIN

La presencia de aglutinacin o hemlisis indicar que la reaccin es positiva, mientras que una suspensin
uniforme de hemates se considerar como resultado negativo.

Las discrepancias entre los resultados del grupo ABO hemtico y srico deben resolverse antes de clasificar el grupo ABO del
paciente.

Determinacin de antgeno D en tubo.

OBJETO
Determinar la presencia o ausencia del antgeno D.

DESARROLLO
1.

Colocar una gota de reactivo anti-D en un tubo limpio y rotulado.

2.

Colocar una gota de reactivo control en un segundo tubo. O bien una gota de suero fisiolgico.

3.

Aadir una gota de hemates suspendidos al 2-5% en salino.

4.

Mezclar suavemente por agitacin y centrifugar durante 20 segundos a 3000 rpm o 2 minutos a 1000 rpm.

5.

Resuspender suavemente el sedimento de hemates y observar la presencia o ausencia de aglutinacin.

INTERPRETACIN

La aglutinacin en el tubo de anti-D junto con un resultado negativo en el tubo control, indica un resultado positivo de
la prueba. Si hay aglutinacin en el tubo control no debe interpretarse la prueba con anti-D como positiva sin nuevos
anlisis.

La ausencia de aglutinacin tanto en el tubo de anti-D como en el tubo control indica un resultado negativo de la prueba

Determinacin del grupo ABO en placa.

OBJETO
Realizar el tipaje AB0 en placa o porta.

DESARROLLO
1.

Identificar el porta o la placa con el nombre y apellidos del paciente (o nmero de la unidad a tipar)

2.

Colocar una gota de Seraclone Anti-A, Anti-B, y Anti-AB.

3.
4.

Aadir una gota de sangre junto a cada gota de los reactivo y mezclarlo en un rea aproximada de 2 cm de dimetro
(puede utilizarse para ello palillos higinicos).
Se recomienda hacer la lectura de la posible aglutinacin despus de 30 a 60 segundos.

INTERPRETACIN
La presencia de aglutinacin indica la especificidad AB0.

Determinacin del antgeno D en placa.

OBJETO
Determinar la presencia del antgeno D (Rh).

DESARROLLO
1. Colocar una gota de antisuero Anti-D en un porta o placa limpio y rotulado, junto a una gota de sangre del paciente.
2. Colocar una gota de reactivo control (o en su defecto suero fisiolgico) junto a otra gota de sangre del paciente, en un
segundo porta o en la placa.
3. Mezclar con un palillo limpio formando un circulo de 2-3 cm de dimetro.

4. Colocar los portaobjetos sobre el visor y bascular suave y constantemente para observar la presencia de aglutinacin.
El mximo de observacin es de dos minutos, superado ese tiempo se puede producir un fenmeno de rouleaux, que
puede interpretarse errneamente como aglutinacin.

Resolucin de discrepancias AB0.

OBJETO
Determinar el grupo ABO cuando no concuerdan el grupo hemtico con el grupo srico.

DESARROLLO
Se produce una discrepancia cuando los resultados del grupo hemtico y srico no concuerdan. La interpretacin del
grupo ABO debe retrasarse hasta que se resuelva la discrepancia.
Los primeros pasos a seguir son:
1. Repetir el grupo hemtico y srico en tubo con los hemates lavados.
2. Analizar los hemates frente a anti-A, B, A1.
3. Analizar el suero frente a hemates A1, A2, B.
4. Aumentar la relacin suero/hemates e incubar 30 minutos a temperatura ambiente. Centrifugar y leer.
Investigacin de Anticuerpos Irregulares

OBJETO
Los nicos anticuerpos de grupo que se suelen poseer son los anti-A y anti-B. Los dems anticuerpos de grupo no
relacionados con el sistema AB0, se les conoce como anticuerpos irregulares. Para detectar estos anticuerpos se enfrenta el
suero a estudiar a una serie de hemates de grupo 0 que poseen la mayora de antgenos frente a los cuales estos
anticuerpos son especficos. Clsicamente cuando esta prueba se utiliza como parte de los test pretransfusionales se
denomina investigacin de anticuerpos irregulares, y cuando se utiliza como parte del protocolo de isoinmunizacin
materno fetal se denomina Test de Coombs Indirecto.

DESARROLLO
1. Identificar la tarjeta Diamed Liss/Coombs con el nombre y apellidos del receptor y rotular cuatro pocillos en cada
tarjeta con los nmeros 1, 2 y 3.
2. Aadir a cada pocillo 25 mL del suero problema.
3. Depositar 50 ml de la dilucin de hemates comerciales Id Diacell I, II y III en los pocillos rotulados de la tarjeta.
4. Incubar durante 10 minutos a 37C la tarjeta en la incubadora Diamed.
5. Centrifugar la tarjeta en la centrfuga Diamed.

Proceder a la lectura.

Identificacin de Anticuerpos Irregulares

OBJETO
Identificar la especificidad (por probabilidades) del anticuerpo que descubrimos con la investigacin o escrutinio de
anticuerpos irregulares.
Esta tcnica, bsicamente es similar a la deteccin de anticuerpos irregulares, con la diferencia de que en este caso
enfrentamos el suero a una batera de 11 clulas de grupo 0 ampliamente fenotipadas, y cuya reactividad nos indicar la
probable especificidad del anticuerpo en estudio.

DESARROLLO
1. Sacar del frigorfico las cajas con los paneles comerciales de hemates papainizados y no papainizados.
Comprobar la fecha de caducidad. Dar suavemente varias vueltas a la caja entera con el fin de resuspender los
hemates de cada frasco.
2. Preparar una suspensin de 10 L de sangre total del paciente con 0.5 ml de Id-Diluent 1 y otra suspensin
de 10 L de sangre total del paciente con 0.5 ml de Id-Diluent 2.
3. Rotular : 12 pocillos de tarjeta Diamed ClNa 1 al 12, 12 pocillos de tarjeta Diamed LISS/Coombs del 1 al 12,
12 pocillos de tarjeta Diamed ClNa del 1P al 12P y 12 pocillos de tarjeta Diamed LISS/Coombs del 1P al 12P.
4.

Aadir a cada pocillo 25 L del suero problema.

5. Aadir : 50 L de los hemates no papainizados del vial 1 a los pocillos rotulado 1 de las tarjetas Neutra y
Coombs, y as haremos con todos los viales hasta el rotulado como 11. Al pocillo nmero 12 de ambas tarjetas
aadiremos 50 L de la solucin de hemates del paciente preparada con Id-Diluent 2.
6. Aadir : 50 L de los hemates papainizados del vial 1 a los pocillos rotulado 1P de las tarjetas Neutra y
Coombs, y as haremos con todos los viales hasta el rotulado como 11. Al pocillo nmero 12 de ambas tarjetas
aadiremos 50 L de la solucin de hemates del paciente preparada con Id-Diluent 1.

Titulacin de Anticuerpos. Mtodo en tarjeta.

OBJETO
El ttulo de un anticuerpo, es la dilucin mxima en la que su presencia puede ser demostrada por aglutinacin, y es una
forma grosera de valorar la cantidad del anticuerpo .

DESARROLLO
1. Rotular los tubos con la dilucin del suero (1, 2, 4, 8, 16, 32, 64) y aadir 0,1 ml de Id solucin 2 a todos los tubos
excepto al primero.
2. Aadir un volumen igual de suero a los dos primeros tubos.
3. Mezclar con una pipeta limpia varias veces el contenido del segundo tubo y transferir 0,1 ml al siguiente tubo. Repetir
el procedimiento con todas las diluciones, utilizando una punta de pipeta nueva con cada tubo. El volumen del ltimo
tubo se guarda en un tubo limpio por si se requiriesen nuevas diluciones.
4. Rotular una tarjeta LISS/Coombs con el nmero de identificacin del paciente y en cada pocillo con las diluciones de
los tubos empezando por el segundo tubo (2, 4, 8, 16, 32, 64).
5. Dispensar en cada pocillo 50 L de hemates en suspensin al 0.8% (los hemates deben poseer el antgeno frente al
que se dirige el anticuerpo a titular y ser compatibles ABO con el suero problema).
6. Aadir a cada pocillo 25 L de la dilucin correspondiente.
7. Incubar durante 10 minutos la tarjeta en la incubadora Diamed.
8. Centrifugar la tarjeta en la centrfuga Diamed.
Proceder a la lectura.

Pruebas Cruzadas
OBJETO

Control final de la compatibilidad ABO entre el donante y el receptor. Demuestra la ausencia de anticuerpos irregulares
que pudiera tener el receptor frente a los hemates del donante.
DESARROLLO

1.

Identificar las tarjetas (Diamed LISS/Coombs y Diamed ClNa) con el nombre y apellidos del receptor y rotular
cada pocillo con el nmero de la unidad a cruzar.

2.

Preparar una dilucin con 50 l de la unidad de concentrado de hemates y 0.5 ml de Id-Diluent 2, en un tubo
rotulado con el n de la unidad de concentrado de hemates.

3.

Depositar 50 l de la dilucin de hemates en los pocillos de la tarjeta Diamed LISS/Coombs y en la tarjeta

Diamed ClNa.

4.
5.

Depositar 25 l de suero del receptor en cada pocillo de las dos tarjetas.

Incubar durante 15 minutos, la tarjeta Diamed LISS/Coombs, en la incubadora Diamed. Dejar ese mismo tiempo
la tarjeta Diamed ClNa a temperatura ambiente.

6.

Centrifugar la tarjeta en la centrfuga Diamed.

7.

Proceder a la lectura.

Coombs Directo
OBJETO

Esta tcnica detecta si los hemates estn recubiertos de anticuerpos o complemento.

DESARROLLO

1. Identificar una tarjeta Diamed LISS/Coombs con el nombre y apellidos del paciente y/o el nmero de identificacin
de la muestra.
2. Preparar una dilucin con 50 l de sangre total en 0.5 ml de Id-Diluent 2, en un tubo debidamente identificado.
3. Depositar 10 l de la dilucin de hemates en uno de los pocillos de la tarjeta.
4. Centrifugar en la centrfuga Diamed.
5. Proceder a la lectura.
INTERPRETACIN

Si el botn de hemates queda en la parte superior del pocillo indica aglutinacin y la lectura es positiva.

Si el botn de hemates baja la lectura es negativa.

Coombs Directo monoespecfico

OBJETO
Esta tcnica identifica la clase de inmunoglobulina o fraccin del complemento causantes de la positividad de un test de
Coombs.
DESARROLLO
1. Identificar una tarjeta DC Screning I con el nombre y apellidos del paciente y/o el nmero de identificacin de la
muestra.
2. Preparar una dilucin con 30 l de hemates de la muestra en 1000 l de Id Solucin 2, en un tubo debidamente
identificado.
3. Depositar 25 l de la dilucin de hemates en cada uno de los pocillos de la tarjeta.
4. Centrifugar 8 minutos en la centrfuga Diamed.
5. Proceder a la lectura.

INTERPRETACIN

Si el botn de hemates queda en la parte superior del pocillo indica aglutinacin y la lectura es positiva.

Si el botn de hemates baja la lectura es negativa.

OBJETO
Valorar las reacciones de aglutinacin de forma estndar .

DESARROLLO
Anotacin

Grado de
aglutinacin

Descripcin de la aglutinacin

10

++++

Botn slido de eritrocitos, ningn eritrocito libre; fondo

claro.

10

+++

Varios aglutinados grandes; fondo claro.

++

Muchos aglutinados de regular tamao; fondo claro.

Aglutinados pequeos; fondo turbio.

+/-

Aglutinados muy pequeos; fondo turbio.

PH

No aglutinacin ni hemlisis todos los eritrocitos libres.

Hemlisis parcial.

Hemlisis completa; no quedan hemates.

Siempre debe buscarse la presencia de hemlisis, su presencia indicar un resultado positivo .

DETERMINACION DEL GRUPO LEWIS

OBJETO

Determinar el fenotipo del grupo Lewis, en este caso para los antgenos Lea y Leb
DESARROLLO

1. Rotular 3 pocillos de una tarjeta Diamed ClNa correctamente identificada por cada antgeno a identificar como P, C+ y
C- y aadir por orden; 50 L de hemates del paciente diluido al 0.8% en el primer pocillo, 50 L de hemates
comprobados positivos para el antgeno en el segundo pocillo y 50 L de hemates comprobados negativos para el
antgeno en el tercer pocillo.
2. Aadir a cada pocillo 25 L del antisuero correspondiente al antgeno a identificar.
3. Incubar la tarjeta durante 10 minutos a 22C.
4. Centrifugar la tarjeta en la centrfuga Diamed.
5. Proceder a la lectura.
INTERPRETACIN

Si el botn de hemates queda en la parte superior del pocillo indica aglutinacin y la lectura es positiva.

Si el botn de hemates baja la lectura es negativa.

Una positividad en el control negativo o negatividad en el control positivo invalida la prueba.

DETERMINACION DEL GRUPO MN

OBJETO
Determinar el fenotipo del sistema MN, en este caso para los antgenos M y N.
DESARROLLO

1. Rotular 3 pocillos de una tarjeta Diamed ClNa correctamente identificada por cada antgeno a identificar como P, C+ y
C- y aadir por orden; 50 L de hemates del paciente diluido al 0.8% en el primer pocillo, 50 L de hemates
comprobados positivos para el antgeno en el segundo pocillo y 50 L de hemates comprobados negativos para el
antgeno en el tercer pocillo.
2. Aadir a cada pocillo 25 L del antisuero correspondiente al antgeno a identificar.
3. Incubar la tarjeta durante 10 minutos a 22C.
4. Centrifugar la tarjeta en la centrfuga Diamed.
5. Proceder a la lectura.
INTERPRETACIN

Si el botn de hemates queda en la parte superior del pocillo indica aglutinacin y la lectura es positiva.

Si el botn de hemates baja la lectura es negativa.

Una positividad en el control negativo o negatividad en el control positivo invalida la prueba.

DETERMINACION DEL GRUPO P

OBJETO
Determinar el fenotipo del sistema P, en este caso para el antgeno P 1.
DESARROLLO

1. Rotular 3 pocillos de una tarjeta Diamed ClNa correctamente identificada por cada antgeno a identificar como P, C+ y
C- y aadir por orden; 50 L de hemates del paciente diluido al 0.8% en el primer pocillo, 50 L de hemates
comprobados positivos para el antgeno en el segundo pocillo y 50 L de hemates comprobados negativos para el
antgeno en el tercer pocillo.
2. Aadir a cada pocillo 25 L del antisuero correspondiente al antgeno a identificar.
3. Incubar la tarjeta durante 10 minutos a 22C.
4. Centrifugar la tarjeta en la centrfuga Diamed.
5. Proceder a la lectura.
INTERPRETACIN

Si el botn de hemates queda en la parte superior del pocillo indica aglutinacin y la lectura es positiva.

Si el botn de hemates baja la lectura es negativa.

Una positividad en el control negativo o negatividad en el control positivo invalida la prueba

DETERMINACION DEL GRUPO Ss, Kk, Kpa Kpb, Jka jkb,Lua Lub
OBJETO
Determinar el fenotipo de los hemates para los sistemas de grupo mencionados .

DESARROLLO
1. Rotular 3 pocillos de una tarjeta Diamed LISS/Coombs correctamente identificada por cada antgeno a identificar
como P, C+ y C- y aadir por orden; 50 L de hemates del paciente diluido al 0.8% en el primer pocillo, 50 L de
hemates comprobados positivos para el antgeno en el segundo pocillo y 50 L de hemates comprobados negativos
para el antgeno en el tercer pocillo.
2. Aadir a cada pocillo 25 L del antisuero correspondiente al antgeno a identificar.
3. Incubar la tarjeta durante 10 minutos a 37C en la incubadora Diamed.
4. Centrifugar la tarjeta en la centrfuga Diamed.
5. Proceder a la lectura.

INTERPRETACIN

Si el botn de hemates queda en la parte superior del pocillo indica aglutinacin y la lectura es positiva.

Si el botn de hemates baja la lectura es negativa.

Una positividad en el control negativo o negatividad en el control positivo invalida la prueba.

Elucin mediante R-E-S

OBJETO
Con la elucin pretendemos separar los anticuerpos unidos a los hemates para poder estudiar dichos anticuerpos.
DESARROLLO
1.

Solucin de Lavado. Se prepara suficiente solucin para lavar cuatro veces los hemates. Es una dilucin 1/10 con
disolvente y agua destilada (ej. 2ml de disolvente y 18ml de H2O destilada).

2.

Lavar 1 ml (20 gotas) de hemates concentrados 1 vez con salino, y 4 veces con solucin de lavado.

3.

Retirar el mximo de sobrenadante del ltimo lavado y utilizarlo como control (en un tubo etiquetado).

4.

Colocar 1 ml de clulas lavadas en un tubo y aadir 1 ml de SOLUCION I (20 gotas y 20 gotas).

5.

Mezclar suavemente por inversin 4-5 veces.

6.

Centrifugar inmediatamente en 3400 durante 1 minuto.

7.

Transferir el sobrenadante (ELUIDO) a un tubo limpio y etiquetado.

8.
9.

Aadir 20 gotas de SOLUCION II (Azul), mezclar bien. Si el color es an amarillo, aadir gota a gota hasta que
alcance un color azul plido.
Centrifugar nuevamente para eliminar cualquier precipitado y transferir a un tubo limpio.

Investigar la presencia de anticuerpos en el eludo, utilizar el sobrenadante del ltimo lavado como control negativo.

Elucin con Gamma EGA

OBJETO

El procedimiento descrito es til para eliminar los autoanticuerpos que recubren a los hemates, para de esta forma poder
fenotiparlos. Es igualmente til para clulas no recubiertas con IgG, cuando el fin es destruir los antgenos del sistema Kell
para ayudar en la identificacin de anticuerpos.
DESARROLLO
1.

Lavar los hemates tres veces con salino fisiolgico, y resuspenderlos al 3-5%.

2.

Aadir 30 gotas de esta suspensin en un tubo limpio

3.

Centrifugar 1 minuto a 3.400 rpm y eliminar el sobrenadante con cuidado de no tocar los hemates.

4.

En otro tubo, preparar la solucin cida de EDTA-glicina aadiendo 4 gotas de EGA solucin 1 y 16 gotas de
EGA solucin 2.

5.

Aadir inmediatamente la solucin EDTA-glicina recin preparada al paquete de hemates lavados y mezclar
suavemente.

6.

Mantener a temperatura ambiente (233C) no ms de 2 minutos (con el cronmetro en mano). Si las clulas
estn fuertemente agrupadas o teido, debe acortarse el tiempo de incubacin en perodos de 15 segundos.

7.
8.

Aadir inmediatamente 7 gotas de solucin EGA 3, mezclar bien y centrifugar 30 segundos a 3.400rpm.
Eliminar el sobrenadante, y resuspender las clulas en salino. Si en este momento del tratamiento las clulas no
estn fuertemente agrupadas o teidas (ver paso 6), lavar las clulas al menos tres veces con
salino.

Precaucin el tratamiento con EGA hace que las clulas se puedan hemolizar con facilidad. En caso que se produzca un

retraso entre el lavado y el tipaje, se requerirn mas lavados

INTERPRETACIN

Realizar la prueba de antiglobulina directa (Coombs Directo) de las clulas tratadas. Si es negativo, se procede al tipaje
de los hemates.

Adsorcin Autloga de Autoanticuerpos calientes

OBJETO

Los auto-anticuerpos (Ac) calientes pueden enmascarar la presencia de alo-Ac en el suero. La adsorcin del suero con
hemates autlogos puede eliminar los auto-Ac y desenmascarar los posibles alo-Ac.
DESARROLLO

1. Preparar dos alcuotas de 1 ml de hemates del paciente tratados segn la Tcnica de Elucin con GammaEGA (T-22).
2. Aadir 2 ml de suero del paciente a una de las alcuotas, mezclar e incubar a 37C durante 30 minutos.
3. Centrifugar a 3400 rpm durante 2 minutos y transferir el suero a la segunda alcuota de hemates. Mezclar e incubar a
37C durante 30 minutos.
4. Centrifugar a 3400 rpm 2 minutos. Transferir el SUERO ADSORBIDO, a un tubo limpio y etiquetado.
5. Realizar una investigacin de anticuerpos irregulares, y una identificacin si procede. En caso de positividad puede
utilizarse este suero para la realizacin de pruebas cruzadas.
NOTA: No debe realizarse la autoadsorcin con hemates de un paciente recientemente transfundido, ya
que los hemates transfundidos circulantes pueden adsorber los alo-Ac que se estn buscando.

HPN (hemoglobinuria paroxstica nocturna)

OBJETO

El Test de HPN (hemoglobinuria paroxstica nocturna) sirve para detectar la ausencia o dficit de protenas implicadas en
la mayor sensibilidad de las clulas de serie roja al complemento en estos pacientes. Valora el DAF (factor acelerador del
decaimiento CD55) y el MIRL (inhibidor de membrana de la lisis reactiva).

DESARROLLO
1.

Recoger un tubo de sangre citratada (protrombina) del enfermo. En este caso tambin sirve tubo con EDTA,
heparina o CPD-A. Es importante que sea sangre fresca recin extrada.

2.

Preparar una solucin 0,8 % con diluyente 2 de DiaMed (10 mcl de sangre y 1 ml de diluyente) para usar
inmediatamente.

3.

Aadir 50 mcl de suspensin de hemates a los pocillos DAF, MIRL y ctl de la tarjeta DiaMed.

4.

Aadir 50 mcl de cada solucin (MIEL, DAF y ctl) al pocillo correspondiente

5.

Repetir la operacin con sangre de un paciente sin HPN, que servir como control negativo en la misma tarjeta.

6.

Incubar 15 minutos a 37 C.

7.

Centrifugar en la centrfuga Dia Med (ID centrifuga 24 S) durante 10 minutos.

Autoaglutininas Fras de Alto Ttulo.

OBJETO

Precisar a que concentracin se detentan anticuerpos fros. Los autoanticuerpos fros, si estn presentes a ttulos elevados
tienen significacin clnica y pueden causar hemlisis manifiesta, sntomas sistmicos e indicar una neoplasia subyacente.
DESARROLLO

1. Obtener suero (mantenido a 37C desde el momento de la extraccin) separado a 37C de una muestra de sangre
que se deja coagular a 37C o plasma, separado de una muestra anticoagulada despus de inversiones peridicas a
37C durante 15 minutos.
2. Preparar una suspensin al 1% en salino de eritrocitos de los siguientes fenotipos:

OI (pueden prepararse a partir de un segmento tomado de una unidad de sangre extrada dentro de los 7
das precedentes o de una muestra extrada con EDTA dentro de los tres das precedentes).

Oi (Cordn)

Autlogos.

3. Diluir el suero o plasma al 1/5 en salina.

4. Preparar tres hileras de doce tubos con diluciones seriadas al doble de suero o plasma diluido al 1/5
(1/10,....1/20.480). Utilizar volmenes de 0,5 ml cuando se hacen las diluciones.
5. Agregar a cada tubo 0,5 ml de los hemates correspondientes.
6. Mezclar e incubar toda la noche a 4C.
7. No centrifugar. Examinar los eritrocitos sedimentados macroscpicamente en busca de aglutinacin. Anotar los
resultados.
INTERPRETACIN

El ttulo es la reciproca de la dilucin ms alta del suero en la que se observa aglutinacin. Los ttulos por encima de 1/40 se
consideran elevados, pero la anemia hemoltica por autoaglutininas reactivas en fro rara vez ocurre a menos que el ttulo sea
superior a 1/640.

Especificidad de Crioaglutininas

OBJETO
Determinar la especificidad de las autoaglutininas que reaccionan en fro. Para ello se estudia el suero frente a eritrocitos
que presenta antgenos ante los cuales reaccionan las aglutininas fras.

DESARROLLO
1. Suero (mantenido a 37C desde el momento de la extraccin) separado a 37 C de una muestra de sangre que se
deja coagular a 37C o plasma, separado de una muestra anticoagulada despus de inversiones peridicas a 37C
durante 15 minutos.

2. Suspensin al 5% en salino de eritrocitos de los siguientes fenotipos.

a. Dos muestras de clulas OI (puede utilizarse hemates del panel de investigacin de anticuerpos).
b. Una muestras de hemates del paciente
c. Una muestra de hemates A o B si el paciente no es grupo 0
d. Una muestra OI tratada con enzimas (bromelina)
e. Una muestra de hemates Oi (cordn umbilical)
3. Preparar cinco hileras de doce tubos con diluciones seriadas al doble de suero o plasma (1/2,....1/4096)
4. Mezclar tres gotas de cada dilucin con una gota de hemates al 5% de cada muestra de eritrocitos.
5. Incubar a temperatura ambiente durante 15 minutos. Centrifugar (1000 x g 30 segundos)y examinar (golpear
suavemente) macroscpicamente en busca de aglutinacin. Anotar los resultados.
6. Colocar los tubos a 4C e incubar a esta temperatura durante 1 hora. Centrifugar y examinar macroscpicamente
en busca de aglutinacin. Anotar los resultados.

INTERPRETACIN
Se resume en la tabla adjunta.
Eritrocitos

Anti-I

Anti-i

Anti-H

Anti-IH

Anti-Pr

OI

NR/

Oi

NR/

<

AI

OI enzimas

NR/

Autlogo

Algunos autoanticuerpos fros pueden no mostrar especificidad aparente a temperatura de 4C, en estas circunstancias las
pruebas pueden ser incubadas a 30-37C. La reactividad diferencial puede hacerse ms aparente si se prolonga el tiempo de
incubacin y la aglutinacin se evala despus de la sedimentacin sin centrifugacin.

Tcnica de Donath-Landsteiner
OBJETO
Esta tcnica se emplea para detectar la hemolisina bifsica responsable de la anemia hemoltica autoinmune paroxstica
fra.

DESARROLLO
1.

Obtener suero separado de una muestra de sangre recogida y mantenida a 37 C y suero fresco (como fuente de
complemento).

2.

Preparar eritrocitos del grupo O lavados y resuspendidos al 50%.

3.

Rotular tres filas de tubos como sigue:

A1 A2 A3

B1 B2 B3

C1 C2 C3

4.

A los tubos 1-2 de cada fila aadir 10 volmenes de suero del paciente.

5.

A los tubos 2-3 de cada fila aadir 10 volmenes de suero fresco.

6.

A todos los tubos aadir un volumen de la suspensin de eritrocitos. Mezclar.

7.

Colocar los tres tubos de la hilera A en hielo fundido durante 30 minutos y luego pasarlos a 37 C durante 1 hora.

8.

Colocar los tres tubos de la hilera B en hielo fundido durante 90 minutos.

9.

Centrifugar todos los tubos e investigar hemlisis en el liquido sobrenadante.

INTERPRETACIN
La prueba se considera positiva cuando el suero del paciente, con complemento o sin el,
produce hemlisis en los tubos que se han colocado primero en hielo y luego a 37 C
(tubos A1 A2) y no hay hemlisis en los mantenidos a 37 C o en hielo. Los tubos A 3 B3 C3
sirven como control del complemento y deben ser negativos.