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INSTITUTO POLITCNICO NACIONAL

ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLGICAS


PRCTICA: HIDRLISIS DE UNA PROTENA Y ENSAYOS PARA
PROTENAS Y AMINOCIDOS
EQUIPO No.3
INTEGRANTES:
HERNNDEZ RIVAS MAURICIO
RETANA MORA HILDA
OBJETIVOS:
1.- Efectuar la hidrlisis total de una protena.
2.- Identificar algunos aminocidos presentes en un hidrolizado de protena, por medio de
sus propiedades fsico-qumicas.
3.- Identificar por cromatografa en placa fina algunos de los aminocidos presentes en un
hidrolizado de protena.
PREPARACIN DE SOLUCIONES
Para la solucin de hidrolisis de grenetina se coloc en un matraz baln grenetina, cido
clorhdrico concentrado y agua destilada, se adapt un refrigerante en posicin de reflujo,
se calent por 35 minutos, posteriormente se le agrego carbn activado y se filtr. aminocidos, que se producen exclusivamente por hidrlisis de las protenas son slidos,
cristalinos de elevado punto de fusin. Muchos poseen olor y sabor desagradable.

Para la solucin neutralizada


de hidrolizado de grenetina
se tomaron 5 mL de la
solucin de hidrolisis de
grenetina y se neutralizo con hidrxido de sodio.
En la obtencin de la solucin de grenetina sin hidrolizar se coloc en un vaso 0.5 g de
grenetina con 20 mL de agua destilada y se agit.
Para obtener solucin de albmina se agito la clara de un huevo, se le agregaron 100 mL
de agua, se agit y filtro.
REACCIONES DE IDENTIFICACIN

1) Reaccin Xantoproteca
OBSERVACIONES
En un tubo de ensayo colocamos 2 mL de grenetina hidrolizada y en otro tubo colocamos
2 mL de solucin de albmina, a cada tubo se le agregaron 5 mL de cido ntrico y se
calent a bao mara, ambas soluciones adquirieron una coloracin amarilla, los tubos se
dejaron enfriar y a cada tubo se le agreg, gota a gota, hidrxido de sodio al 10% hasta
obtener un pH bsico, la coloracin amarilla se intensific.
DISCUSIN
La reaccin fue positiva para aminocidos aromticos, es una prueba cualitativa que
indica la presencia de protenas, los anillos aromticos en algunos miembros reaccionan
con cido ntrico concentrado, formando nitro derivados de color amarillo o anaranjado,
por lo cual esta reaccin permite reconocer la presencia de aminocidos portadores de
grupos bencnicos tirosina, fenilalanina y triptfano, se fundamenta con:

2) Reaccin de precipitacin
OBSERVACIONES
Se coloc en un tubo de ensayo 2 mL de grenetina hidrolizada, en otro 2 mL de albmina
y en otro tubo se coloc 2 mL de agua destilada, posteriormente a cada tubo se le agrego
5 mL de hidrxido de sodio al 10% y un mL de acetato de plomo al 10%, los tres tubos se
calentaron a ebullicin y, solamente en la solucin de albumina se observ una coloracin
caf obscuro.
DISCUSIN
Los aminocidos azufrados como la metionina y cistena se reconocen por la formacin
de precipitados de sulfuro de plomo de color oscuro que se forman cuando reacciona con
acetato de plomo en medio alcalino. Esta reaccin se basa en la separacin mediante un
lcali, del azufre de los aminocidos, el cual al reaccionar con una solucin de acetato de
plomo, forma el sulfuro de plomo.

3) Reaccin de Biuret

OBSERVACIONES
En tubos de ensayo diferentes se colocaron 0.5 mL de agua destilada, 0.5 mL solucin de
hidrolisis de grenetina, 0.5 mL de grenetina sin hidrolizar y 0.5 mL de albumina, a cada
tubo se agregaron 2 mL de solucin de sulfato de cobre al 2%, en el agua destilada se
torn azul cielo, la hidrolisis de grenetina tomo un color azul cielo, la solucin de grenetina
sin hidrolizar tomo un color morado y por ltimo la solucin de albumina tomo un color
grisceo.
DISCUSIN
Se basa en la reaccin coloreada del reactivo de Biuret, que produce un complejo de color
prpura al reaccionar con una solucin alcalina de sulfato de cobre, los iones cpricos
forman un complejo de coordinacin con los pares de electrones no compartidos del N,
presente en los aminocidos de las
protenas.

Los compuestos no proteicos respondern a la prueba, las protenas disuelven el


hidrxido cprico reactivo y forman compuestos coloreados violetas que dependen de la
naturaleza de las protenas.

4) Reaccin con Ninhidrina


OBSERVACIONES
En cinco tubos de ensayo se colocaron 0.5 mL de cada solucin, al agregar a cada tubo
0.5 mL de solucin de ninhidrina al 3% y calentarse a bao mara se observ que el agua
destilada no adquiri coloracin alguna, las soluciones de solucin de grenetina
hidrolizada a pH neutro, grenetina sin hidrolizar y la solucin de albmina adquirieron una
coloracin azul intenso.
DISCUSIN

El grupo alfa-amino de los aminocidos forma complejos coloreados con la ninhidrina:


violeta azuloso en la mayora de los aminocidos cuyo grupo amino es primario, amarillo
apara la prolina e hidroxiprolina y caf para la asparragina que tiene un grupo amido en la
cadena lateral, esta reaccin tambin identifica a los grupos alfa-amino libres presentes
en pptidos y protenas

5) Reaccin de cido Nitroso


OBSERVACIONES
En cuatro tubos de ensaye se coloc 3 mL de cido clorhdrico concentrado, a cada
tubo, por separado, se agregaron 2 mL de hidrolizado de grenetina, grenetina sin
hidrolizar, albmina y el cuarto tubo fue el testigo, a cada tubo se le agreg 1 mL de
solucin acuosa de nitrito al 5%, en el tubo con agua destilada se observ un color
anaranjado tenue, el tubo con hidrolizado de grenetina adquiri color amarillo al igual que
el tubo con grenetina sin hidrolizar, en el tubo con albmina se observ el
desprendimiento de N2 en forma de espuma.
DISCUSIN
Los aminocidos, a excepcin de la prolina y la hidroxiprolina, reaccionan con el cido
nitroso liberando nitrgeno gaseoso. Esta reaccin constituye la base del mtodo de Van
Slyke para determinar grupos amina libres en materiales proteicos. La reaccin
proporciona un ndice del nmero de grupos NH2 o combinados como los existentes en
ciertos aminocidos bsicos

6) Accin reguladora de aminocidos


OBSERVACIONES
En un tubo de ensayo se colocaron 2 mL de hidrolizado de grenetina a pH neutro y en otro
2 mL de agua destilada, a cada tubo se le agregaron 0.3 mL de solucin indicador rojo
Congo y cido clorhdrico hasta observar un cambio de coloracin, se efectu el mismo

ensayo empleando fenolftalena al 0.1% como indicador e hidrxido de sodio hasta


observar un cambio de coloracin:
Solucin
Indicador
Agua destilada
Rojo Congo
Grenetina
Rojo cono
hidrolizada pH
neutro

Color inicial
Rojo
Morado

Gotas HCl 0.1N

Color final
morado
azul

Agua destilada

Blanco

Rosa

Grenetina
hidrolizada
neutro

Blanco

Rosa

Gotas NaOH 0.1N


Fenolftalena
0.1%
Fenolftalena
pH 0.1%

DISCUSIN
La accin amortiguadora depende casi exclusivamente del sistema amortiguador, que se
forma por la mezcla de protena cida y protena que forma sal con una base fuerte, ya
que tienen un carcter anftero, tanto que se podra pensar que su accin depende solo
de que en medio cido se comportan como bases y en medio bsico como cidos,
equilibrando as la reaccin del medio. Al variar el pH, cambia la proporcin de las formas
inicas y es posible ver la capacidad amortiguadora de los aminocidos
7) Cromatografa en capa fina
OBSERVACIONES
En una cromatoplaca se aplic un muestra de hidrolizado de grenetina, Valine y
Phenylalanine, se introdujo en una cmara de cromatografa con una mezcla de
isopropanol-agua 7:3, se obtuvieron los siguientes resultados

Hidrolizado
grenetina neutra
Valine
Phenilalanine

de

Frente del disolvente

Frente de la mancha

4 cm

3.7 cm

Relacin
frentes Rf
0.925

4 cm
4 cm

3 cm

0.75

de

DISCUSIN
Los aminocidos utilizados en la experiencia son afines a la mezcla de disolvente
isopropanol-agua, el hidrolizado de grenetina neutra es ms afn con el disolvente, ya que
recorri una mayor distancia, comparado con phenilalanine que recorri una menor
distancia, la cromatografa de capa fina es una tcnica eficiente para la separacin de
aminocidos incoloros.

CONCLUSIONES
CUESTIONARIO

BIBLIOGRAFA
https://books.google.com.mx/books?id=PsUuSiY4YH0C&pg=PA406&dq=REACCI
%C3%93N+DE+AMINOACIDOS+CON+
%C3%81CIDO+NITROSO&hl=es419&sa=X&ei=KkXmVLzOJZH_yQSbqIKgCQ&ved=0CC
EQ6AEwAQ#v=onepage&q=REACCI%C3%93N%20DE%20AMINOACIDOS%20CON
%20%C3%81CIDO%20NITROSO&f=true [consultado19/02/2015]