Академический Документы
Профессиональный Документы
Культура Документы
TEMA:
OBTENCIN DE CLULAS MADRE HEMATOPOYTICAS UTILIZANDO
FILGRASTIM A 3 DIFERENTES DOSIS 5, 10 Y 15 MICROGRAMOS EN
CUYES (CAVIA PORCELLUS)
POSTULANTE.
Edison Gustavo Snchez Cepeda
DIRECTOR DE TESIS:
Dr. Miguel Gutirrez
Latacunga Ecuador
2015
1. TITULO
2.3.
OBJETIVOS
2.3.1. OBJETIVO GENERAL
Obtener clulas madre hematopoyticas en cuyes utilizando filgrastim a
tres diferentes dosis.
2.3.2. OBJETIVOS ESPECFICOS
Determinar y analizar los cambios producidos en los componentes
3. FUNDAMENTACIN TERICA
3.1. Clulas Madre
Las clulas madre son clulas que se encuentran en todos los organismos multicelulares
y que tienen la capacidad de dividirse (a travs de la mitosis) y diferenciarse en diversos
tipos de clulas especializadas, adems de autorenovarse para producir ms clulas
madre. (Hans R, 2007).
3.1.1. Clasificacin
3.1.1.1. Potencial de diferenciacin
Clulas madre totipotentes, pueden crecer y formar un organismo completo,
tanto los componentes embrionarios (como por ejemplo, las tres capas
embrionarias, el linaje germinal y los tejidos que darn lugar al saco vitelino),
como los extra embrionarios (como la placenta). Es decir, pueden formar todos los
tipos celulares (Mitalipov S, Wolf D. 2009).
Clulas madre pluripotentes, no pueden formar un organismo completo, pero s
cualquier otro tipo de clula correspondiente a los tres linajes embrionarios
(endodermo, ectodermo, mesodermo), as como el germinal y el saco vitelino
(Caulfield,T. Rachul, C.2012).
Clulas madre multipotentes, son aquellas que slo pueden generar clulas de su
misma capa o linaje de origen embrionario por ejemplo: una clula madre
mesenquimal de mdula sea, al tener naturaleza mesodrmica, dar origen a
clulas de esa capa como miocitos, adipocitos u osteocitos, entre otras (Hsu YC,
Fuchs E. 2012).
Clulas madre unipotentes, pueden formar nicamente un tipo de clula en
particular (Hsu YC, Fuchs E. 2012).
como
clulas
jvenes
(inmaduras)
llamadas
clulas
madre
Fuente: http://medicinamiguellopez.blogspot.com/2013
3.2. Filgrastim
Es un frmaco que se utiliza para estimular la produccin de clulas granulocticas
(clulas del linaje leucocitario) en pacientes que reciben terapias que causan un
descenso en los recuentos de glbulos blancos, tambin se usa para evitar infecciones y
fiebres neutropnicas provocadas por el uso de agentes quimioteraputicos. (g)
Fue
nte: http://www.neupogen.com/pi.html/2013
3.2.2. Absorcin y eliminacin: la tasa de eliminacin depende de la concentracin del
frmaco en sangre y la vida media de eliminacin en individuos normales y pacientes
con cncer fue de aproximadamente 3.5 horas. La tasa de eliminacin fue de 0.5 a 0.7
mL/minuto/kg. (5)
3.2.3. Dosis y Administracin: El esquema de administracin del medicamento en
humanos vara dependiendo de la enfermedad que se est tratando, y el rango de dosis
que se maneja es de 4 - 69 Ug/kg/da por va intravenosa subcutnea, siendo de la
aplicacin subcutnea la menor dosis. (5)
3.2.4. Efectos del Tratamiento: Reduce significativamente el tiempo de recuperacin
de pacientes tratados para diferentes enfermedades reduciendo la duracin de la fiebre,
el uso de antibiticos, y el tiempo de hospitalizacin. (4)
Entre los efectos del G-CSFrh sobre los neutrfilos estn la estimulacin de
proliferacin de precursores mieloides y la reduccin del tiempo de trnsito de los
neutrfilos inmaduros por mdula para ser liberados ms rpidamente a circulacin
sangunea. Tambin moviliza vesculas secretoras e induce a liberacin del contenido de
los grnulos, activando la funcin fagoctica y el estallido respiratorio. (6)
3.2.5. Movilizacin de HSCs por accin del G-CSF: Entender el efecto clnico de la
movilizacin de las HSCs desde mdula sea (BM) a sangre perifrica (PB) pos
tratamiento con el G-CSFrh, es an motivo de investigacin. Se han postulado
diferentes teoras que explican el fenmeno, que no son mutuamente excluyentes y son
resultado de diferentes estudios. (3)
Lograr en pacientes una movilizacin exitosa con G-CSF, es decir; alcanzar el nmero
deseado de HSCs puede depender de diversos factores como la edad, la patologa, el
grado de compromiso, la carga de quimioterapia y/o radioterapia recibida, adems de la
intensidad del tratamiento. Por otra parte, tambin depende de las caractersticas del
producto utilizado. (2)
3.3.
El Cuy
3.3.1. Generalidades
Es una especie de roedor histricomorfo de la familia Caviidae originaria de la regin
andina de Amrica del Sur. Alcanza un peso de hasta 1 kg. Vive en reas abiertas y
utiliza hoyos y madrigueras para ocultarse y protegerse. La especie fue descrita por
primera vez por el naturalista suizo Conrad von Gesner en 1554. Su nombre cientfico
se debe a la descripcin de Erxleben en 1777, y es una mezcla de la designacin del
gnero de Pallas (1766) y el nombre especfico dado por Linneo (1758). (c)
3.3.2. Origen
Aliaga, L. (1978), indica que el cuy desciende de una especie peruana, conocida en su
estado salvaje con el nombre de cavia cutleri, que fue domesticada primeramente por los
antecesores de los Incas y pueblos afines de la regin andina, en tiempos muy remotos.
Al respecto cadena, S. (2000), manifiesta que el cuy es un roedor oriundo de Amrica
del Sur, en la zona interandina; fue domesticado por los aborgenes en tiempos
preincsicos, mucho antes de los europeos, y que las variedades modernas son
posiblemente descendientes de un precursor desconocido, ya extinto, que se cree
habitaba en la costa oriental de Brasil.
3.3.3. Nombre
El nombre cuy que recibe este roedor en los pases interandinos, proviene seguramente
de la imitacin del sonido natural producido por el animal; aunque en diferentes lugares
se pronuncia de distinto modo: cuy, cuye, cu, coy, curi, coic, cuize (cadena, S. 200).
8
Tambin es conocido con los nombres de cobayo, curi, conejillo de indias y en pases de
habla inglesa como guinea pig. (Gmez, J. 2007).
3.3.4. Descripcin taxonmica
Aliaga, L. (1978), indica que en la escala zoolgica ubica al cuy en la siguiente
clasificacin:
Phylum: Vertebrata
Clase: Mammalia
Orden: Rodentra
Familia: Caviidae
Gnero: Cavia
Especies:Cavia aperea aperea, Erxleben
Cavia aperea azarea, Lichtenstein
Cavia porcellus, Linnaeus
3.3.5. Clasificacin
Los cuyes presentan tipos y variedades de acuerdo a su conformacin, forma y longitud
de pelo y tonos del pelaje (Palomino, R. 2002).
a. Segn su conformacin
Tipo A: Corresponde a cuyes mejorados, con gran dsarrollo muscular, tiene
buena conversin alimenticia y de temperamento tranquilo por lo que es
considerado un clsico productor de carne. ( Gomez, J. 2007)
Tipo B: Corresponde a los cuyes de forma angulosa, escaso desarrollo muscular
y muy nerviosos. Son de temperamento alterado por lo que se hace difcil su
manejo. (Gmez, J. 2007).
b. Segn el pelaje
Tipo 1: Es de pelo corto, lacio y pegado a lo largo del cuerpo; el cual se le
considera el mejor productor de carne
Tipo 2: Es de pelo corto, lacio y pegado a lo largo del cuerpo y que por tal
motivo muestran un pelaje irregular.
Tipo 3: Es de pelo largo y lacio. Es poco difundido como productor de carne
pero muy solicitado por la belleza que muestra su pelaje y es usado como
mascota.
4-8aos
850-1200g
700-900g
10ml/100g
No
2 ( I 1/1 C 0/0 PM 1/1 M 3/3), todos los
dientes son de crecimiento continuo, no
35-45%
5x1012/L
14.3g/dl
10
Recuento de leucocitos
11.2x109/L
Neutrfilos
37%
Linfocitos
56%
Eosinfilos
5%
Monocitos
8%
Basfilos
2%
Glucosa srica
60-120mg/dl
Bilirrubina total
0.24-0.3mg/dl
Potasio
6.5-8.2meq/L
Sodio
120-155meq/L
BUN
8-20mg/dl
Fosfatasa alcalina
23 UI/L
Fuente:http://www.vetjg.com/shared/php/page.php?
page=artic_peq_medicina_cobaya/2014
3.4. Biometra Hemtica
La biometra hemtica tambin denominada citometra, citologa hemtica o
hemograma es la medicin y reporte de los componentes celulares de la sangre. En la
actualidad la biometra hemtica la integra la determinacin de 15 parmetros y es el
primer examen al que se enfrenta el clnico en la valoracin diagnstica de un paciente.
(7)
El examen valora el estudio de tres lneas celulares, cada una con funciones diferentes
entre s, pero tienen en comn que las produce la mdula sea (eritrocitos, leucocitos,
plaquetas) y consta de dos bloques principales:
1. Formula Roja: Determina los parmetros relacionados con el eritrocito y se
-
11
3.4.1.
Soluciones
anticoagulantes:
Las
diversas
soluciones anticoagulantes
preservativas permiten conservar la sangre durante perodos de 21 das a 42 das a 16C. (j)
-
HEPARINA:
Vida media 30 horas; proporcin aproximada 400UI/ 60 ml de sangre (j
3.5. Gelofusine
Gelatina Succinilada: Libre de Calcio y de Potasio. Solucin para infusin intravenosa
al 4%.
3.5.1. Composicin: Cada 100 ml contiene: Gelatina Succinilada (Gelatina Fluida
modificada) (peso molecular promedio 30.000) 4.000 g; Cloruro de Sodio 0.701 g;
Hidrxido de Sodio 0.136 g; Agua para Inyectables c.s.p. 100.000 ml. Electrolitos
mmol/l; Na+ 154; Cl- 120; pH 7.1-7.7; Osmolaridad 274 mOsm/l. (f)
3.5.2. Farmacologa: Los efectos intravasculares inmediatos de los sustitutos
plasmticos dependen de su actividad onctica, de su concentracin y de su peso
molecular. El volumen sanguneo medido algunas horas despus de la inyeccin
depende slo de la diferencia entre el volumen administrado para la restitucin
endgena y la eliminacin del sustituto plasmtico del espacio intravascular.(e)
La gelatina fluida modificada tiene un efecto de reposicin de volumen inmediato y al
mismo tiempo suave, sin riesgo de sobrecarga circulatoria o deshidratacin intersticial
debido a su actividad isoonctica. (e)
3.5.3. Farmacocintica: La vida media de Gelofusine es de 4 horas, y su efecto
plasmtico dura entre 4 y 6 horas. Transcurridas 24 horas, queda un 10% de
Gelofusine en plasma y un 25% en el compartimiento extravascular. La fraccin que
no se excreta se metaboliza totalmente en el organismo. Su eliminacin se efecta en
dos tiempos: una fase renal y otra de degradacin enzimtica de la gelatina a nivel
heptico. (e)
12
Hipervolemia
Hiperhidratacin
13
14
masa (alcuota slida) iniciales para ser usada en una prueba de laboratorio.
Coloidal: Es una sustancia cuyas partculas pueden encontrarse en suspensin
en un lquido, merced al equilibrio coloidal; dichas partculas no pueden
nucleares de la sangre).
Hipernatremia: es un trastorno hidroelectroltico que consiste en un elevado
nivel del ion sodio en la sangre (lo contrario de la hiponatremia, que significa
4. DISEO DE LA INVESTIGACIN
15
4.1.
HIPOTESIS
4.1.1. HIPOTESIS NULA
Mediante la aplicacin de tres diferentes dosis de filgrastim no se
obtiene clulas madre hematopoyticas de sangre perifrica
4.1.2. HIPOTESIS ALTERNATIVA
Mediante la aplicacin de tres diferentes dosis de filgrastim se
obtiene clulas madre hematopoyticas de sangre perifrica.
4.2.
VARIABLE
VARIABLES
INDEPENDIENTE
DEPENDIENTES
Filgrastim
(5 Ug., 10 Ug., 15Ug.)
4.3.
INDICADORES
Leucocitos-
Neutrfilos, %
Basfilos,
Eosinfilos-
(Neutrfilos
Cayados- %
Neutrfilos Segmentados)
Eritrocitos
Plaquetas
DISEO METODOLGICO
16
Las variables a utilizar pueden ser variables dependientes (las que queremos
medir o el objeto de estudio del investigador) y las variables independientes (las
que el investigador manipula para ver la relacin con la dependiente).
diferencias
estadsticas
se
aplicarn
pruebas
de
significacin.
G. L.
TOTAL
15
TRATAMIENT
OS
ERROR EXP.
CV%=
CMEE
x
Tratamientos de la Investigacin
N de
Tratamientos Cobayo
R1
R2
R3
R4
s
T0
T1
5 Ug.
5 Ug.
5 Ug.
5 Ug.
Filgrasti
Filgrasti
Filgrasti
Filgrasti
17
T2
T3
10 Ug.
10 Ug.
10 Ug.
10 Ug.
Filgrasti
Filgrasti
Filgrasti
Filgrasti
m
15 Ug.
m
15 Ug.
m
15 Ug.
m
15 Ug.
Filgrasti
Filgrasti
Filgrasti
Filgrasti
Seleccin y Registro
Se seleccionar y registrar los animales en el CEASA para colocarlos
en las pozas designadas para cada tratamiento y el grupo testigo. Para la
seleccin de los animales se considerar los siguientes parmetros: la
lnea, edad (adultos 3 meses en adelante), sexo (macho), peso (600 a
800 gr. en adelante), estado reproductivo (sin contacto con hembras),
estado sanitario (sano).
4.3.4.2.
cada tratamiento.
Se aplicar del primero al cuarto da del ensayo en los tres tratamientos
T1, T2, T3 con las dosis en estudio (5 Ug, 10 Ug, 15 Ug) a excepcin
del grupo control (T0). Cada aplicacin ser realizada a la misma hora
4.3.4.3.
4.3.4.4.
4.3.4.5.
5 a 10 minutos.
El sedimento que se obtiene se recoger con micropipetas para realizar
tinciones vitales e identificar por medio de microscopa celular con la
cmara de Neubauer.
La identificacin de las clulas madre hematopoyticas se la realizar
mediante biometra hemtica con la concentracin de la frmula
sangunea (% leucocitos, glbulos rojos, plaquetas) y tincin Giemsa
(Morfologa) y tincin azul Tripn (Viabilidad).
4.3.5.
UBICACIN GEOGRFICA
-
Provincia: Cotopaxi
Cantn: Latacunga
19
Sector: Salache
Lugar del ensayo: UA-CAREN (Unidad Acadmica de Ciencias
Agropecuarias y Recurso Naturales) / CEASA (Centro Experimental
Acadmico Salache)
Temperatura mxima: 20,9 C.
Temperatura mnimo: 8,7 C.
Temperatura promedio: 14,8 C.
Humedad relativa: 78%
Altitud 2725 msnm
Latitud: 00 59 57
Longitud: 78 3714
Fuente: Estacin Meteorolgica UTCCEYPSA-COTOPAXI/Diciembre2014
5.
CAPITULO 1
Marco Terico
1.1. Clulas Madre
1.1.1 Definicin
1.1.2 Tipos de clulas madre
1.1.3 Clulas madre hematopoyticas
1.2. Filgrastim
1.2.1. Definicin
1.2.2. Uso en medicina
1.3. El Cuy
1.3.1. Generalidades
1.2.4.1. Origen
1.2.4.2. Hbitat
20
CAPITULO 2
CAPTULO 3.
21
6.
MARCO ADMINISTRATIVO
A. Recursos Necesario
RECURSOS
Transporte
Alimentacin
UNIDAD
CANT. $ UNIT.
REQUERIMIENTOS
$TOTAL
Unidad
40
Raciones
60
2,5
150
Subtotal
190
Hojas
MATERIALES
Unidad
600
CD
Unidad
Impresiones
0,01
Unidad
600
0,1
60
Horas de Internet
Horas
50
0,75
37,50
Anillado
Unidad
1,5
7,5
Unidad Caja/50
Unidad
80
10
800
Guantes de Ltex
Biometra hemtica
Subtotal
930,50
QUIMICOS
Alcohol
Frasco
15
Filgrastim
Ampollas
25
100
Gelofusine
Frasco
27
27
22
Tincin Giemsa
Unidad/100 ml
5,80
5,80
Tincin Tripn
Unidad
10
10
Subtotal
157,80
INSUMOS
Cobayos
Jeringas de insulina
(1ml)
Unidad
Unidad/Caja
100
Unidad
1caja/100
20
100
11,30
4,5
4,50
Unidad
20
60
Unidad
80
0,30
24
Unidad
27
27
Paquete (100gr)
Cubre objetos
Caja
2,80
2,80
Porta objetos
Caja
Caja (10
microlitros)
3,50
3,50
10
10
Agujas
Bolsas de extraccin
de sangre
Tubos tapa lila con
EDTA
Cooler
Algodn
Micropipeta
Subtotal
245,10
EQUIPOS
Balanza
Cmara de
fotografas
Unidad
15
15.00
Unidad
300
300.00
Subtotal
315,00
1838.40
183,84
Imprevistos (10%)
TOTAL
2022,24
23
B. Cronograma de Actividades
ACTIVIDADES
Febrero
2015
Semanas
1
Marzo
2015
Semanas
4
24
Abri
2015
Seman
4
7. REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS
7.1.
3. Jos J., David G. (2008). Clula madre hematopoytica y hematopoyesis. Vol. 1, (1)
4. Kondo M, Wagers AJ, Manz MG, Prohaska SS, Scherer DC, Beilhack GF, Shizuru
JA, Weissman IL. (2003). Biology of hematopoietic stem cells and progenitors:
implications for clinical application. Annu Rev Immunol, U.S.A, (759-806)
25
7.2.
Citas virtuales
f)
Gelofusine,
http://www.farmaciasahumada.cl/fasaonline/fasa/MFT/PRODUCTO/P4066.HTM
g) Filgrastim, http://chemocare.com/es/chemotherapy/druginfo/filgrastim.aspx#.UzR50_Un4QY
h) Hematopyesis, http://es.wikipedia.org/wiki/Hematopoyesis
i) Biometra hemtica, http://www.buenastareas.com/ensayos/BiometriaHematica/476606.html
j) Bolsa de transfusin sangunea, http://www.vet.unicen.edu.ar/html/Areas/Cirugia
%20general/Documentos/16-Transfuciones.pdf
k) Clulas madre de sangre umbilical,
http://www.himfg.edu.mx/descargas/documentos/planeacion/guiasclinicasHIM/Tras
pCeProgenHematopoyxticas.pdf
l) http://jineteycaballo.blogspot.com/2013/06/ahora-podemos-salvar-caballos-conlas.html
m) http://www.discapacidadonline.com/terapia-celulas-madre-acv-desarrollanalemania.html
n) http://www.dgcs.unam.mx/gacetaweb/2013/130722/gaceta.pdf
o) http://www.fluvium.org/textos/vidahumana/vid115.htm
p) http://www.baires-salud.com.ar/celulas-madre-43/crean-celulas-madrepluripotenciales-a-partir-de-caballos-3767.html
q) http://www.veterinariargentina.com/revista/2012/07/anexos-fetales-una-fuentealternativa-de-celulas-madre-mesenquimales-para-la-medicina-veterinaria-equina/
r) http://argos.portalveterinaria.com/noticia.asp?ref=8744&cadena=C
%E9lulas_Madre_&como=1
s) http://argos.portalveterinaria.com/noticia.asp?ref=8842&cadena=C
%E9lulas_Madre_&como=1
27
t) http://argos.portalveterinaria.com/noticia.asp?ref=8655&cadena=C
%E9lulas_Madre_&como=1
8. ANEXOS Y GRFICOS
1.1.
Registro 1
28
1.2.
Registro 2
1.3.
Tabla 1
29
DIA 2
DIA 3
DIA 4
T0
0 ug.
0 ug.
0 ug.
0 ug.
T1
5 ug.
5 ug.
5 ug.
5 ug.
T2
10 ug.
10 ug.
10 ug.
10 ug.
T3
15 ug.
15 ug.
15 ug.
1.4.
15 g.
Tabla 2
TRATAMIENTO
LEUCOCITOS
ERITROCITOS
PLAQUETAS
HEMATOCRITO
Biometra hemtica
Biometra hemtica
Biometra hemtica
Biometra hemtica
Miles y millones/ml de
Miles y millones/ml
de sangre
Miles y millones/ml
de sangre
sangre
Miles y millones/ml
de sangre
T0
T1
T2
T3
Total
30
Total