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de la
Diseo De
Experimentos de
citotoxicidad
Dr. Xristo Zrate de plata de
nanoparticulas
Kalfpulos
forma esfrica y
prismoidal.
Universidad Autnoma
de Nuevo Len
Fa c u lt a d de C ie n c i a s
Qumicas
Q u m i co Fa r m a c u t i c o
Bilogo
Equipo # 6
Hilda Olivia Arce Gutirrez
20 de Marzo del
Matricula 1509319
Roxana Jazmn
Estrada
2 0 1 4 .Muoz
S a nMatricula
N i c o l 1513535
s de
Jos
Miguel
Gaucin
Perales
los Garza, Nuevo Len,
Matricula 1484535
Azucena
Garca
Mxico
.
Trevio
Matricula 1497244
Comparacin de la
citotoxicidad de
nanoparticulas de plata de
forma esfrica y
prismoidal.
Introduccin
La primera referencia de nanotecnologa fue dada en una conferencia impartida en
1959 por uno de los grandes fsicos del siglo pasado, el terico y divulgador
Richard Feynman, quien augur una gran cantidad de nuevos descubrimientos en
el caso de poder fabricar materiales de dimensiones atmicas o moleculares [1].
Una nanopartcula es una molcula de tamao microscpico, por lo menos una
dimensin menor que cien nanometros. Existen diferentes tipos de nanoparticulas
en las cuales podemos diferenciar la organizacin de la materia: Metlicas, no
metlicas y las compuestas por varios tomos [2].
En el caso de las nanopartculas metlicas su principal caracterstica es que
contienen un nmero determinado de electrones libres confinados en un espacio
muy pequeo. Esto les da propiedades como la resonancia plasmnica, que es la
propiedad de interactuar especficamente con la luz, la cual se puede ver
claramente en el caso del oro, donde soluciones de distintos tamaos de
nanopartculas presentan colores que van desde el prpura hasta el marrn. Este
cambio de color es resultado de la oscilacin colectiva de los electrones al
interactuar con la luz [2].
Actualmente las nanopartculas son un rea de intensa investigacin cientfica,
debido a una amplia variedad de aplicaciones potenciales en los campos de
biomdicos, pticos, y electrnicos [3].
Antecedentes
En el ao 2010 se realiz un ensayo in vivo para lo cual utilizaron ratas a las que
se les administraron nanoparticulas con diferentes metales, entre los cuales
estaba presente la plata. Se administraron de forma intravenosa, intraperitoneal e
intracerebral. Los animales que fueron expuestos con nanoparticulas de plata
sufrieron un dao en la berrera hematoencefalica ya que se present un edema
cerebral; el dao fue menor en las ratas que estuvieron expuestas a otros metales
[4].
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Justificacin
Los ensayos que realizremos tendrn un gran impacto en el futuro ya que este
ensayo abre paso a nuevas investigaciones. Consideramos que es relevante
realizar estudios enfocados a la citotoxicidad presente en las diferentes formas de
nanoparticulas de plata, ya que la informacin es escasa y es necesario registar
cules son los efectos dainos de cada una de las formas de dichas
nanoparticulas.
Hiptesis
Las nanopartculas de plata de forma de prisma presentan mayor citotoxicidad que
las de forma esfrica.
Objetivo General
Evaluar la actividad citotxica de las nanoparticulas de plata en sus diferentes
formas.
Objetivo Especfico
Metas
Presentar un cartel de nuestra investigacin en Tercer Congreso Internacional de
Qumica e Ingeniera Verde.
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Metodologa
Procedimiento para el cultivo de lneas celulares
Para la evaluacin de citotoxicidad y produccin de estrs oxidativo se utilizaran
clulas de hgado de Chang y fibroblastos los cuales se van a sembrar en frascos
de cultivo usando como nutriente medio esencial mnimo (MEM), para sembrar las
clulas de hgado de Chang se suplementara al 10% con suero fetal bovino, en el
caso de los fibroblastos se va a utilizar suero de caballo. Los frascos se incubaran
a 37 C en un ambiente de 5% CO2 y 95% aire, hasta la formacin de la
monocapa celular (2-3 das).
La evaluacin de la produccin de xido ntrico se realizara en macrfagos y para
la determinacin de manera indirecta del factor de necrosis tumoral alfa (TNF-)
se usar fibroblastos.
Cultivo de clulas en placas de 96 celdillas de clulas de hgado de Chang y
fibroblastos
La monocapa celular se expondr a 1 mL de tripsina al 0.25% durante 5-10
minutos para desprender las clulas del frasco de cultivo y separarlas entre s. Al
trmino de este tiempo se adicionaran 2 mL de medio para bloquear la accin de
la tripsina. De esta suspensin celular se van a tomar 0.1 mL y se depositaran en
un hemocitmetro (cmara de Neubauer) para determinar la concentracin celular.
La densidad celular se ajustar a 2 X104 clulas por 0.1 mL con el medio y suero
correspondiente. Posteriormente a 28 cada pozo de la placa se les adicionar 0.1
mL de la suspensin celular. Las placas se sellaran e incubaran a 37 C con una
atmsfera de 5% de CO2 y 95% de aire hasta la formacin de monocapa celular
(1-2 das).
Exposicin de las clulas a nanopartculas de plata
Se retirar el medio de cultivo de las placas de 96 celdillas y posteriormente se les
agregara 0.1 mL de MEM. Se evaluaran diferentes concentraciones de
nanoparticulas de Ag (rango de 0.002 - 0.425 g/ml). Las placas se incubaran a
37C, en un ambiente de 5% de CO2 y 95% de aire durante 24 y 48 h.
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Evaluacin microscpica
Despus de la exposicin de las clulas a las nanoparticulas de Ag, las clulas de
las placas se revisaran microscpicamente con diferentes factores de
amplificacin (100X, 40X y 20). Con el fin de observar la adhesin celular y
relacionarla con el resultado de la absorbancia obtenida por la lectura
espectrofomtrica de las placas.
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Referencias
1. Ramrez Cabrera M: Evaluacin De la cintica de distribucin y
toxicidad de nanoparticulas de plata. Tesis doctoral. Universidad
Autnoma De Nuevo Len, 2010.
2. Ciencia y desarrollo
[http://www.conacyt.gob.mx/comunicacion/revista/221/Articulos/Nanoparticul
as/Nano1.html ]
3. Nanotecnologa Aragn- Catalua
[http://www.nanoaracat.com/Laboratorios%20argenol%20AINII.pdf]
4. Hari Shanker Sharma, Saber Hussain, Jonh Schlager, Syed F. Ali, Aruna
Sharma: Influence of nanoparticles on Blood-Brain Barrier Permeability
and Brain Edema Formation in Rats. Acta Neurochir.2010.
5. Margriet V P, Arianne M N, Jolanda P V, Liset J.J. de la F, Henny W V, Jacob
J B, Henk van L, Wim H de J: The effect of particle size on the
cytotoxicity, inammation, developmental toxicity and genotoxicity of
silver nanoparticles. Biomaterials 2011, 25: 9810-9817.
6. Hackenberg S, Scherzed A, Kessler M, Hummel S, Technau A, Froelich K,
Ginzkey C, Koehler C, Hagen R, Kleinsasser N: Silver nanoparticles:
Evaluation of DNA damage, toxicity and functional impairment in
human mesenchymal stem cells. Toxicology Letters 2011, 201: 27-33.
7. Raman P S, Poduri R: Cellular uptake, intracellular trafcking and
cytotoxicity of silver nanoparticles. Toxicology Letters 2012, 213: 249259.
8. Guzmn M, Dille J, Godet S: Synthesis and antibacterial activity of silver
nanoparticles against gram-positive and gram-negative bacteria.
Nanomedicine: Nanotechnology, Biology and Medicine 2012, 8(1): 37-45.
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