UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR

Facultad de Ciencias Qumicas

Carrera de Qumica
Laboratorio de Electroqumica
Nombre: Carla Coba
Proyecto de Laboratorio
1. Tema: Elaboracin de un biosensor de dopamina
2. Objetivo:

Elaborar un biosensor para dopamina a partir de la cscara de pltano

3. Fundamento terico:
Biosensor
Un biosensor se puede definir como un dispositivo compuesto por dos elementos
fundamentales: un receptor biolgico preparado para detectar especficamente una
sustancia aprovechando la exquisita especificidad de las interacciones biomoleculares y
un transductor o sensor, capaz de interpretar la reaccin de reconocimiento biolgico que
produce el receptor y "traducirla" en una seal cuantificable. Los dos constituyentes del
biosensor estn integrados conjuntamente y es precisamente esta ntima unin de dos
mundos opuestos (el "vivo" y el "inerte") la que le confiere a los dispositivos biosensores
sus especiales caractersticas de sensibilidad y selectividad.
Frente a ellas los biosensores ofrecen la posibilidad de obtener medidas directas,
continuas, de forma rpida y con alta sensibilidad. Muchos biosensores ofrecen tambin
las ventajas del pequeo tamao y la portabilidad, por lo que se podran utilizar en
cualquier lugar, como el hogar o la consulta del mdico. Esto adems significa que la
cantidad de muestra para hacer el anlisis es relativamente baja (de micro a nanolitros), lo
que es muy importante si se trata de anlisis de sangre o de ADN o si la muestra es cara
o difcil de conseguir. (Instituto de Microelectrnica de Madrid)
Determinacin de dopamina
La dopamina o DA (4-(2-aminoetil) benceno-1, 2-diol) es una catecolamina biognica de
origen natural, formada por la descarboxilacin de 3, 4-dihidroxifenilalanina . Es un
precursor a la epinefrina y la norepinefrina en una ruta biosinttica, que funciona como un
neurotransmisor en los sistemas nerviosos central y perifrico . La concentracin
insuficiente debido a la prdida de clulas productoras de DA puede dar lugar a una
enfermedad llamada enfermedad de Parkinson en el que una persona pierde la capacidad
de ejecutar movimientos suaves y controlados .
DA se puede suministrar como una medicina, sin embargo su exceso de dosificacin
puede actuar sobre el sistema nervioso simptico, que causa una tasa de incremento de
enfermedades del corazn y aumento de la presin arterial.

Pocos mtodos basados en la modificacin qumica de materiales de los electrodos

tradicionales han sido reportados para la determinacin de DA (por ejemplo , la
determinacin electroqumica de DA en presencia de cido ascrbico usando micelas de
dodecil sulfato de sodio como agente de enmascaramiento , 2B poli-cromotropo
modificado electrodo de GC, Nafion (pelcula de material compuesto de hierro revestida
de carbono en un electrodo modificado con nano partculas de quitosano), electrodo
modificado con una pelcula hbrida Pt/Au, electrodo modificado con pelculas de nano
partculas de oro auto-ensambladas y pasta de carbono con pelculas de
polipirrol/ferrocianuro . Sin embargo, la mayora de estos mtodos se enfrentan a la
oxidacin de las biomolculas en el electrodo, el ensuciamiento del electrodo (debido a la
adsorcin de los productos de oxidacin), la seal analtica inestable, requiere alta sobre
potencial, lmite de deteccin alta, una respuesta lenta y sobre todo son complejos.
(Bakhsh Raoof & Kiani, 2011)

Polifenol oxidasa
La Polifenol oxidasa, PPO, es una de las enzimas mas estudiadas en la industria de los
alimentos ya que es la responsable de las reacciones de pardeamiento enzimtico en
frutas y verduras. Una de las razones por las cuales es importante su estudio es porque
comercialmente es indeseable, ya que modifica las propiedades sensoriales, nutricionales
y en general de calidad que perjudica la comercializacin de un producto. El banano que
pertenece al gnero Musa, con sus innumerables variedades, es una fruta tropical de
importancia comercial que sufre cambios en su textura, color a travs del proceso de
maduracin. Los cambios asociados a la maduracin como bioqumicas, fisiolgicos y de
composicin y el ablandamiento de los pltanos se han estudiado y reportado
ampliamente durante las distintas fases de desarrollo en las cuales la polifenol oxidasa
cumple un papel importante. (Guerrero Eraso, 2009)

El primer plano del sitio activo de la polifenol oxidasa muestra que utiliza seis aminocidos
para quelar dos iones de cobre. Estos son histidinas, que tienen un grupo R cclico polar
con tomos de nitrgeno con electrones no compartidos para proporcionar el poder
quelante. Una de ellas se caracteriza porque est conectada por un enlace sulfuro a una
cistena en otra parte de la protena. El diagrama muestra tambin el tomo de oxgeno de
una molcula de agua a los asociados con los iones de cobre en el sitio activo. Otra
caracterstica a tener en cuenta es la forma en que los iones de cobre en el sitio activo
son en un bolsillo con dos lados que tienen los quelantes de histidina a partir de dos
lugares distantes de la secuencia primaria. (Plant Physiology Information Website, 1998)
4. Metodologa experimental
Materiales y reactivos
Materiales
Puntas de micropipetas
Alambre de cobre rgido #4
Alambre de cobre delgado
Lagartos
Adaptadores
Pistola de silicona

Reactivos
Dopamina (hidroclorato) 200 mg
Cscara de pltano
Soluciones buffer de pH conocido
Agua destilada

Equipo
Multmetro marca Truper
Procedimiento
Preparacin de los microelectrodos

Cortar dos pedazos de alambre de cobre rgido #4 de aproximadamente 15 cm

Lijar los alambres y limpiarlos con un algodn empapado ligeramente de alcohol
En cada una de las puntas de micropipeta, colocar uno de los alambres hasta que
atraviese la punta de la micropipeta e inmovilizar con silicona

Para el electrodo de referencia, colocar una pequea cantidad de algodn en el

extremo ms pequeo de la punta de micropipeta y llenarla con agua destilada,
colocar uno de los alambres preparados anteriormente dentro de esta punta y
cerciorarse de que no exista fuga de lquido. Inmovilizar el electrodo con silicona y
colocarlo en un soporte.
Para el electrodo de trabajo, colocar una pequea cantidad de la parte interna de
la cscara de pltano en el extremo ms pequeo de la punta de micropipeta,
colocar uno de los alambres preparados anteriormente dentro de esta punta y
cerciorarse de que la punta del alambre y el interior de la cscara de pltano
hagan contacto. Inmovilizar el electrodo con silicona y colocarlo en un soporte.

Calibracin del electrodo de referencia

Tomar el electrodo de referencia y colocarlo junto a otro pedazo de alambre de

cobre lijado dentro de un tubo eppendorf que contenga una solucin buffer de pH 4
Repetir el proceso con las soluciones buffer de pH 7 y pH 10
Realizar una curva y determinar la correlacin del microelectrodo

Preparacin de la curva de calibracin de dopamina

Preparar estndares de concentracin conocida a partir de la dopamina de 200 mg

aforada a 25 mL
Determinar el potencial de cada solucin
Trazar la curva respectiva

Determinacin de una muestra de concentracin desconocida

Determinar el potencial de la muestra

Interpolar el dato de potencial en la curva de calibracin
Anotar los resultados obtenidos

5. Registro de datos experimentales

Calibracin del electrodo
pH
4,00
7,01
10

V
0,04
0
-0,07

C (mg)
200
100
50
25
1
0
Muestra

V (mV)
8,43
2,89
0,77
0,29
-0,1
-0,08
0,17

Curva de calibracin de dopamina

6. Clculos y resultados
Grfico de la curva de calibracin del microelectrodo de referencia

Calibracin del microelectrodo de referencia

0.05
f(x) = - 0.02x + 0.12
R = 0.98

0
3

Potencial (V)

10

-0.05
-0.1
pH
Calibracin del microelectrodo de referencia
Linear (Calibracin del microelectrodo de referencia)

11

Grfico de la determinacin de dopamina

Determinacin de dopamina
10
Potencial (mV)

f(x) = 0.04x - 0.63

R = 0.97

5
0
-5

50

100

150

200

250

Concentracin dopamina (mg)

Determinacin de dopamina
Linear (Determinacin de dopamina)
Muestra

Clculo aproximado de la concentracin de dopamina en la muestra

Potencial=0.0425C-0.6293

C=

0.17 mV +0.6293 mV
mV
0.0425
mg
C=18.81 mg

7. Observaciones

La parte blanca de la cscara, ubicada dentro del microelectrodo, se tornaba

marrn claro al cabo de dos determinaciones
Se reemplaz la cscara de pltano, una vez que esta se tornaba marrn
La punta de cobre del electrodo de referencia se torn ligeramente oscura luego
de las determinaciones

8. Conclusiones

Se elabor un biosensor de dopamina a partir de la cscara de pltano

Se determin la concentracin de una muestra de dopamina desconocida,
correspondiente a 18.81 mg

9. Discusiones

La polifenol oxidasa trabaja de manera apropiada a un pH de 7 por lo que se debe

controlar este factor si se quiere que el biosensor trabaje apropiadamente

Puede existir interferencia de iones cobre con el centro reactivo del biosensor, por
lo que se recomienda elaborar este tipo de microelectrodos con grafito (Wang &
Shang Lin, 1988)
El ndice de correlacin del biosensor no es apropiado debido a que estos equipos
deben tener una alta sensibilidad a lo largo de las determinaciones
El reemplazar la cscara de pltano a medida que se realizaron las
determinaciones ayud a que el biosensor no se saturase y las determinaciones
no se vieran afectadas
Para elaborar este tipo de biosensores se debe inhibir las enzimas de inters para
evitar su rpida degradacin y prolongar el uso del biosensor
A pesar del ndice de correlacin aceptable, este biosensor no es de gran utilidad
debido a que se debe reemplazar la cscara de pltano con demasiada frecuencia
y eso supone molestias para el analista y aumento del error

10. Bibliografa

Bakhsh Raoof, J., & Kiani, A. (28 de Febrero de 2011). Analytical & Bioanalytical
Electrochemistry. Electrochemical Determination of Dopamine Using BananaMWCNTs Modified Carbon Paste Electrode. Iran. Recuperado el 27 de Enero de
2014

Guerrero Eraso, C. A. (2009). Recuperado el 27 de Enero de 2014, de Biblioteca

Digital de repositorio Institucional: http://www.bdigital.unal.edu.co/1820/

Instituto de Microelectrnica de Madrid. (s.f.). Recuperado el 27 de Enero de 2014,

de
Bio-Sens:
http://www.imm.cnm.csic.es/RedBiosensores/tecnologia-debiosensores.html

Plant Physiology Information Website. (1998). Recuperado el 27 de Enero de

2014,
de
Enzyme
Basics:
http://plantphys.info/plant_physiology/enzymebasics.shtml

Wang, J., & Shang Lin, M. (15 de Agosto de 1988). Mixed Plant Tissue-Carbon
Paste Bioelectrode. Analytical Chemistry, 1545-1548.