INTRODUCCIN LABORATORIO

TEST ANTIGLOBULINA HUMANA

(TEST DE COOMBS)

INMUNOHEMATOLOGA
Universidad de Talca- 2014
Prof. Mnica Maldonado R.
Prof. Mnica Maldonado R.

 1908 Carlo Moreschi

1945 Robin Coombs describi el

HISTORIA
uso de este test en deteccin de Ac
Rh.

85 aos- 2006

Fuente: Historical Review: British Journal of Haematology, 2001, 112, 888899

Importancia del suero de Coombs

Ig M
Dimetro 300 A

Ig G
120 A

PZ en mV

Fenmeno aglutinacin

- 23

No ocurre aglutinacin

-18 a -23

PZ crtico para Ig M

-15

PZ de una suspensin de
GR en salino

-8 a -10

PZ crtico para Ig G

-7

Autoaglutinacin

Previo al uso del suero antiglobulina (SAGH, suero de Coombs), no era

posible detectar anticuerpos de tipo
Ig G, mediante pruebas de
aglutinacin dado el tamao de la inmunoglobulina.
La introduccin de este reactivo permiti esta deteccin y con ello
descubrir y caracterizar a muchos nuevos grupos sanguneos.

REACTIVO SAGH o COOMBS

PRINCIPIO
El Suero Antiglobulina Humana (SAGH) o suero de Coombs, reconoce a
las Ig G humanas o factores del C (C3b C3d, C4b) unido a los GR, previa
sensibilizacin in vivo o in vitro.

ACTIVACIN
CASCADA DEL COMPLEMENTO

(va clsica)

Fuente: http://www.vi.cl/foro/topic/5698-capitulos-de-inmunologia/page__st__100

REACTIVO SAGH:
POLICLONAL

PRODUCCIN
MONOCLONAL

Fuente: www.bio-world.com
Fuente: Dpto. Microbiologa Universidad de Salamanca

Contiene una mezcla de

diferentes inmunoglobulina
anti Ig G; cada una de ellas
reconoce un epitope
diferente de su antgeno
(Ig G humana)

Contiene un solo tipo de

inmunoglobulina anti Ig G;
dirigido contra un nico
eptope de la
inmunoglobulina G humana

REACTIVO SAGH: CARACTERISTICAS

Reactivo

Origen

Poliespecfico

Policlonal
Monoclonal

Monoespecfico
Anti Ig G

Policlonal
Monoclonal

Monoespecfico
AntiComplemento

Policlonal
Monoclonal

Especificidad
Contiene Anti Ig G y Anti
C3b, C3d, C4b, C5b

Slo Anti Ig G
Slo Anti fracciones de
complemento C3b, C3d,
C4b, C5b

Importancia de la fraccin anticomplemento

en el reactivo Antiglobulina
SOLAMENTE ANTI Ig G

ANTI Ig G ms ANTICOMPLEMENTO

Anti Ig G

Y Y

No se produce aglutinacin
por insuficiente formacin de
puentes

Y
Anti c3b
Aglutinacin

Ejm. Anticuerpos de sistema sanguneo KIDD requiere C.

TIPOS DE TEST ANTIGLOBULINA

I. Test Antiglobulina Directo

TAD (o TCD)
Detecta sensibilizacin de Glbulos rojos por
anticuerpos Ig G o C , "in vivo"
Aplicacin del TAD

EHRN : Enfermedad Hemoltica en el Recin Nacido. Los GR del feto

y/o RN son recubiertos con Acs Ig G maternos.
HTR : Reaccin Transfusional Hemoltica.( GR transfundidos son
recubiertos de Acs presentes en el Receptor ; Acs
presentes en hemocomponente transfundido recubren GR
del receptor)
AHA : GR recubiertos de Anticuerpos y/o C

Principio TAD: detectar sensibilizacin de GR por

anticuerpos Ig G o fracciones del Complemento ocurrida
"in vivo"

TIPOS DE TEST ANTIGLOBULINA

I. Test Antiglobulina Indirecto

TAI (o TCI)
Detecta sensibilizacin de Glbulos rojos por anticuerpos
Ig G o C , ocurrida "in vitro"
Aplicacin del TAI

Deteccin de Aloanticuerpos Ig G.
Identificacin de Anticuerpos usando panel de GR de antigenicidad
conocida
Determinar fenotipos de GR usando Anticuerpos conocidos
Pruebas de Compatibilidad, titulacin de Acs, etc.

Principio TAI: detectar sensibilizacin de G rojos por

anticuerpos Ig G o fracciones del Complemento,
previa sensibilizacin "in vitro"

1 Etapa
Sensibilizacin

2 Etapa
Visualizar
Aglutinacin

Protocolo trabajo TAI o TCI

Deteccin de Aloanticuerpos Ig G
Suero o plasma

1.- Muestra:

Caractersticas:
a) Grupo O
b) Presenten los antgenos de sistemas
sanguneos de importancia clnica
c) Los antgenos para los sistemas que
presentan efecto dosis deben estar
en forma homocigota (ideal)
d) TAD negativo

2.- Reactivos:
GR testigos
(cl screnning)

2 o 3 vial por separado

NUNCA preparar pool de GR
Antigrama Clulas O I Oll : 36659
Cell Rh
Rhesus

I
II

R1R1
R2R2

Kell

e Cw

+
0

+
+

0
+

0
+

+
0

0
+

+
+

0
0

Duffy

Kidd

MNSs

Kpa Fya Fyb Jka Jkb M N S

0
0

+
+

0
+

0
+

+
0

Lewis Lu Co
Co
s P1 Lea Leb Lua b

+ 0 + 0 +w 0
+ + 0 + +S +

+
0

0
0

0
+

Continuacin.Protocolo trabajo TAI

Reactivos

SAGH
Poli especfico

GR sensibilizados
con Ig G (control)

PBS

Tcnica: Manual de laboratorio Inmunohematologa y Banco de Sangre 2014 (Pg. 25-28)

OI
C(-)

OII

2 g suero X
1 g Gr OI

2 g suero X
1g GR OII

C(+)

2 g suero Anti D 1/4

1g GR OI/OII

C(-)

2 g suero ABi
1g GR OI/OII

T + T incubacin = 30-60 a 37C

Leer
Centrifugar

Lavar 4
veces

SAGH

Leer

Registrar

LECTURA

(2+)

Resultados

Test positivo
(-)

Validar Test

Validacin Test Antiglobulina Negativo

CM(mf)

(-)

Se confirma
Negatividad
(Test validado)

X X

Test invalidado

Repetir test

Adicionar una gota de GR sensibilizados con Ig G a todos los tubos negativos

Las clulas deben aglutinarse (CM o mf) si no es as, el test queda invalidado

CONCLUSIN TAI
Protocolo de Resultados:
Nombre
Lilian Gaete Labra

GR OI
S 37 SAGH
0 0 +++

GR O II
S 37 SAGH
0
0 +++

Paulina Cifuentes Pea 0

+++

Rubn Jerez Rojas

Uso de potenciadores:
Enzimas
LISS
Albmina
Relacin Suero/Clula

Conclusin

Protocolo trabajo TAD o TCD

1.- Muestra:
G Rojos al 2- 4%
2.- Reactivos

SAGH
Poli especfico

PBS

GR control

3.- Tcnica: Manual de laboratorio Inmunohematologa y Banco de Sangre 2014 (Pg. 26-28)

Lavar 4
veces

SAGH

Leer

Registrar

1 g GR X al 4%

Resultados (-) Validar

Protocolo de Resultados:
Nombre

Conclusin
SAGH

Hijo de Susana Durn Herrera

+++

RN Ramirez Peredo

Luisa Mardones Vera (AHAI)

++

TAD DIFERENCIAL
(Diagnstico AHAI)

SAGH
Anti Ig G

SAGH
Poli especfico

SAGH
Anti C

(2+)

TAI (Fenotipificacin de Antgenos con anticuerpos Ig G)

Determinar fenotipos de GR usando Anticuerpos conocidos
Muestra:

G R al 2-4%
Reactivos

Ac monoespecficos

SAGH

GR control

Controles del Test

A: Validacin Resultados Negativos: Propsito es asegurar que el
SAGH est activo y que no ha sido neutralizado por alguna protena
residual presente en el tubo.
Preparacin de glbulos rojos sensibilizados
Tcnica: Manual de laboratorio Inmunohematologa y Banco de Sangre 2014 (Pg. 27)

Usar un anticuerpo isotipo Ig G (habitualmente anti D policlonal)

Usar GR que presenten el antgeno para la especificidad del anticuerpo usado
B: Control de Reactivos
C(+): Permite confirmar que el SAGH se encuentra en buenas condiciones y que el tiempo y
la temperatura de incubacin han sido el adecuados.

C(-): Chequea que las clulas testigos (OI y OII) no se encuentren previamente
sensibilizadas y que el SAGH no tenga unidos heteroanticuerpos o anticuerpos inespecficos.

FALSOS NEGATIVOS
Lavado insuficiente de glbulos rojos
Omisin de adicin del SAGH
Suero de Coombs previamente inactivado
Tiempo de incubacin y temperatura inadecuada
pH del PBS muy cido
Exceso de antgenos
Problemas de centrifugacin
Incontinuidad en el procedimiento

FALSOS POSITIVOS
Problemas con la limpieza del material
Presencia de cogulo de fibrina.
Contaminacin o mala calidad del SAGH
Contaminacin cruzada de un tubo a otro
No deteccin de aglutinacin antes de los lavados

TRABAJO AUTNOMO:
https://www.youtube.com/watch?v=JWXC8yXe9dE
https://www.youtube.com/watch?v=vbWYz9XDtLw