SERVICIO NACIONAL DE APRENDIZAJE

CENTRO NACIONAL DE HOTELERIA, TURISMO Y ALIMENTOS

LABORATORIO
ESTUDIO MORFOLOGICO DE BACTERIAS
Juan Guillermo Cubillos Hinojosa
Microbilogo Agroindustrial (c) MSc.

INTRODUCCIN
El estudio de la morfologa bacteriana es fundamental para su identificacin y aplicacin en
cualquier campo de la microbiologa. La identificacin microscpica de los
microorganismos presentes en una muestra nos permite realizar su deteccin.
Las bacterias generalmente son transparentes lo que dificulta su estudio cuando se ralizan
exmenes en fresco. Por tanto, se requiere conocer su morfologa utilizando tinciones. La
tincin de Gram fue elaborada por Hans Christian Gram en 1884, es la tcnica ms
utilizada en microbiologa. Es considerada una tincin diferencial debido a que nos permite
diferencias las bacterias en cuanto a forma y tamao. La tcnica incluye tincin primaria,
decoloracin y tincin de contraste.
OBJETIVOS
-

Realizar un frotis bacteriano para su posterior tincin.

Diferenciar bacterias Gram positivas y Gram negativas.
Adquirir destreza en la tcnica de tincin de Gram.
Contribuir con la estudio morfolgico mediante el manejo del microscopio.

MATERIALES
Cristal violeta
Lugol
Alcohol acetona Etanol 95%
Fucsina o Safranina
Agua destilada
Solucin salina
Asas microbiolgicas
Laminas portaobjetos

METODOLOGIA

Colocar una gota de agua destilada en un portaobjeto limpio.

Con el asa de siembra previamente flameado transferir una pequea cantidad de
cultivo bacteriano a la gota de agua.
Mezclar y extenderla en toda la lamina.
Esperar que se evapore o utilizar un ventilador o secador para acelerar el proceso.
(No utilice el mechero para secar, puesto que las clulas pueden deformarse o
romperse).
Fijar las bacterias al portaobjeto por calor; pasar tres veces el portaobjeto por la
llama durante 2 segundos, dejando enfriar el portaobjeto entre cada pase.
Aplicar las etapas de tincin de Gram, teniendo en cuenta los tiempos de aplicacin
de los reactivos.
Observe al microscopio.

Etapas Tincin de Gram

Paso
Colorante bsico
Mordiente
Decolaracion
Contraste

Reactivo

Gram (+)
Cristal violeta
Coloracin violeta
Lugol
Permanece violeta
Alcohol acetona Permanece violeta
etanol 95%
Fucsina o safranina
Permanece violeta

Resultados
Gram (-)
Coloracin violeta
Permanece violeta
Se decolora
Se tie de rojo

FUNDAMENTO
Para realizar la tincin de Gram se requiere de cuatro soluciones:
Colorante bsico: este colorante penetra la pared celular de las bacterias colorendolas. El
ms utilizado es el cristal violeta.
Mordiente: Fija la tincin y aumenta la afinidad entre el colorante y las clulas. Los
mordientes empleados suelen ser sales metlicas, cidos o bases, como la solucin de yodo.
Decolorante: Es un disolvente organico, por ejemplo: alcohol-acetona.

Colorante contraste: Es un colorante bsico de distinto color al primer colorante.

Ejemplo: safranina.

BIBLIOGRAFIA
-

Valencia H. 2004. Manual de prcticas de microbiologa bsica. Universidad

Nacional de Colombia. pp.21-29.
Departamento de Microbiologa. 1999. Universidad de Navarra. Manual prctico de
microbiologa. 2da Edicin. Masson. Espaa. pp. 31-38.