Академический Документы
Профессиональный Документы
Культура Документы
Resumo
A extrao em fase slida (EFS), atualmente, uma das tcnicas mais utilizadas para extrao e/ou
concentrao de amostras complexas, permitindo que analitos em concentraes muito baixas sejam
detectados por mtodos como cromatografia lquida de alta eficincia (CLAE), cromatografia gasosa (CG)
e eletroforese capilar (EC). Este artigo tem o objetivo de discutir os fundamentos da EFS e apresentar novas
estratgias de preparo de fases slidas, desenvolvidas no
Palavras-chave
Laboratrio de Pesquisas em Cromatografia Lquida (LabCrom)
do Instituto de Qumica da Unicamp, e suas aplicaes. A fase
Extrao em fase slida, fase
slida preparada pela deposio de um polmero sobre suporte
slida ou sorvente, preparao de
de slica seguida de imobilizao usando radiao gama ou microamostra, cartuchos de extrao
ondas ou tratamento trmico. O mtodo desenvolvido uma
em fase slida preparados no
aplicao da qumica verde, uma vez que no h resduos txicos
laboratrio
aps o preparo.
Abstract
Solid phase extraction (SPE) is nowadays a much used technique for extraction and/or concentration
of complex samples, so that the analytes present in low concentration become detectable by methods such
as high-performance liquid chromatography (HPLC), gas chromatography (GC) and capillary electrophoresis (CE). This article aims to discuss the fundamental aspects of SPE and presents new strategies for preparation and application of the solid phases developed by the Laboratory for Research in Lquid
Chromatography (LabCrom) of the Institute of Chemistry of UniKeywords
camp. The solid phases are prepared by depositing a polymer on
the silica support followed by immobilization using gamma irraSolid phase extraction, solid
diation, microwave radiation or thermal treatment. The method is
phase or sorbent, sample preparaan application of green chemistry, since there are no toxic resition, lab-made solid-phase exdues after the preparation.
traction cartridges
*e-mail: icsfj@iqm.unicamp.br
13
1 Introduo
Na maioria das anlises qumicas, sobretudo nas anlises de resduos, nas quais os analitos
se encontram em nvel de traos, g kg-1 a
ng kg-1,1 devido s concentraes serem muito
baixas, os analitos apresentarem propriedades qumicas distintas e a matriz ser complexa, faz-se
necessria a realizao de uma etapa prvia de
preparo de amostra. Os principais objetivos do
preparo de amostra so promover a extrao e,
muitas vezes, a concentrao dos analitos de interesse e a remoo, tanto quanto possvel, dos interferentes. Essa a etapa mais onerosa e demorada envolvida no processo analtico, consumindo
cerca de 80% do tempo total de anlise, e pode
introduzir erros, principalmente devido perda do
analito e contaminao da amostra.2-4
Se os interferentes no forem eliminados,
o resultado poder ser falso. Em se tratando de
determinaes realizadas por meio do emprego de
tcnicas cromatogrficas, como a cromatografia
gasosa (CG), cromatografia lquida de alta eficincia (CLAE) ou eletroforese capilar (CE), o preparo de amostra, alm de evitar que interferentes da
matriz coeluam com os compostos de interesse,
importante na remoo de interferentes para garantir a longevidade das colunas analticas ou dos
capilares e evitar limpezas constantes no sistema
de injeo.5
A escolha adequada de uma tcnica de
preparo de amostra um fator chave na obteno
de resultados confiveis e exatos, portanto as selees da tcnica e das condies experimentais
devem ser conduzidas cuidadosamente. Tal escolha depende da natureza da amostra, da matriz,
das caractersticas do analito e da tcnica analtica
que ser empregada na determinao, requerendo
praticamente um desenvolvimento caso a caso.6
Considerando a matriz, devem ser analisados o
seu estado fsico (slido, lquido ou gasoso), o
tamanho da amostra pH, os contedos de matria
orgnica, gordura, pigmentos, protenas, etc. e o
pH. Quanto ao analito, devem-se analisar as suas
propriedades fsicas, suas propriedades qumicas
(massa molar, carga, polaridade, volatilidade,
pKa), propriedades que permitam a sua deteco
(absoro UV-Vis, fluorescncia, eletroatividade)
e sua concentrao.
A escolha e a otimizao de um mtodo
adequado de preparo de amostra no so fceis,
principalmente com matrizes altamente complexas
como os fluidos biolgicos (plasma, soro, sangue
14
total, liquor, urina, etc.) ou outras matrizes naturais como alimentos, extratos de plantas e amostras provenientes do meio ambiente. Idealmente, o
mtodo de preparo de amostra deve ser to simples quanto possvel, no somente porque reduz o
tempo de anlise, mas tambm porque um nmero
grande de etapas aumenta a possibilidade de introduo de erros; seletivo, ou seja, conter o menor
nmero possvel de interferentes, proporcionando
maior detectabilidade; rpido; empregar instrumentao de baixo custo; permitir a automao;
incluir, quando necessrio, uma etapa de concentrao do analito a fim de obter uma concentrao
adequada para atingir o nvel de deteco do instrumento utilizado e consumir quantidades mnimas de reagentes e solventes, atendendo a Qumica Verde. Esse termo foi usado a primeira vez em
1991 por Anastas7 em um programa especial lanado pela Agncia de Proteo Ambiental dos
Estados Unidos (US Environmental Protection
Agency - EPA). Qumica Verde uma abordagem
s snteses, aos processamentos e aos usos de produtos qumicos que reduzem os riscos impostos
populao e ao meio ambiente como um todo.8
Isabel Jardim
Isabel Jardim
Tabela 1 - Guia geral para seleo de fase slida e eluente, empregando amostras orgnicas contendo analitos com
massas molares inferiores a aproximadamente 2000 daltons.16
Mecanismo
Sorvente
Tipo de Analito
Tipo de Matriz
grupos funcionais
apolares como
alquilas e aromticos
solues polares
(tampo aquoso)
solventes apolares,
leos
solventes apolares
como hexano e diclorometano
troca catinica
troca aninica
polar
(fase normal) partio
e
adsoro
Eluente do Analito
solventes polares
como metanol, acetonitrila e gua com
pH ajustado
17
de uma fase slida apropriada para analitos orgnicos com massas molares inferiores a aproximadamente 2000 daltons. 16
Para facilitar essa seleo, na Figura 216
encontra-se um esquema geral da seleo das fases slidas e solventes para eluio de amostras
contendo analitos com massas molares inferiores a
2000 daltons, para evitar efeitos de excluso que
possam bloquear os poros das fases slidas. Os
solventes recomendados para eluio devem ser
considerados como uma primeira aproximao. A
aplicabilidade de outros solventes ou misturas de
solventes determinada pela polaridade requerida
para a separao. Inicialmente, as amostras so
divididas em dois grandes grupos: as solveis em
gua e as solveis em solvente orgnico. As
amostras solveis em gua so primeiramente divididas em inicas e no inicas. As amostras no
inicas solveis em gua so classificadas de
acordo com a sua polaridade: apolar, moderadamente polar e polar. No caso de analitos apolares
a escolha inicial de uma fase slida recai nas fases
reversas como C18, C8, C4, C2, cicloexil, fenil,
cianopropil, e o solvente de eluio do analito deve apresentar caractersticas mais polares que a
fase slida, como acetonitrila, lcoois, diclorometano, etc.. Para analitos moderadamente polares, a
fase slida inicialmente escolhida deve ser polar,
como a slica, e o solvente de eluio do analito
deve ser menos polar, clorofrmio, diclorometano,
acetato de etila, lcoois e gua. Em se tratando de
analitos polares, a fase slida selecionada ser do
tipo fase normal, em que a FS mais polar que o
solvente de eluio, como cianopropil, diol, aminopropil, diaminopropil e o solvente de eluio do
analito menos polar, como clorofrmio, diclorometano, etc..5 As amostras inicas solveis em
gua so classificadas em catinicas e aninicas.
Os analitos carregados positivamente so extrados em FS trocadores catinicos fortes (cido sulfnico) ou fracos (cido carboxlico). Os analitos
carregados negativamente so extrados em FS
trocadores aninicos fortes (tetra alquilamnio) ou
fracos (amino). Os solventes de eluio para troca
inica so, geralmente, solues cidas, alcalinas
ou tampo.
Os analitos solveis em solvente orgnico
tambm so classificados de acordo com a sua
polaridade e seguem os mesmos critrios usados
na seleo da FS para amostras solveis em solventes aquosos.5
18
Isabel Jardim
Figura 2 Guia para seleo de fases slidas e solventes de eluio de analitos com massas molares inferiores a 2000
daltons.16
19
6 Consideraes Finais
A EFS continua sendo o mtodo mais
popular empregado em anlises de rotina para extrair e concentrar vrios analitos presentes em
amostras complexas.
O procedimento de deposio de um polmero sobre suporte de slica seguido de imobilizao por radiao gama, tratamento trmico ou
radiao micro-ondas consiste em uma estratgia
promissora para preparao de novos sorventes
para EFS em substituio aos materiais quimicamente ligados, uma vez que simples, demanda
poucas etapas, utiliza reagentes menos txicos e
disponveis comercialmente, reprodutvel, seu
custo final significativamente menor que os
cartuchos adquiridos comercialmente e, em comum com outros procedimentos de EFS, reduzem
os resduos txicos gerados.
FS/polmero Imobilizao
C18/
PMODS
20
Porcentagem de Procedimento
Carbono da FS(%)
de EFS
12
Recuperaco
Aplicao
CV (%)
Referncia
< 16
Queiroz et
al.20
(%)
Cond.: 10 mL
de MeOH + 3 determinao
mL de H2O por CLAE dos
agrotxicos
Milli-Q
benomil, tebutiurom, simazina, atrazina,
diurom e
ametrina em
Eluio: 1
mL de MeOH gua Milli-Q
fortificada
73 - 103
www. s c i en ti a ch ro ma to g r ap h i c a. co m
Isabel Jardim
Tabela 2 (continuao)
FS/polmero Imobilizao
Porcentagem de Procedimento
Carbono da FS(%)
de EFS
Cond.: 10 mL
de MeOH + 5
mL de H2O
Milli-Q
C18/
PMODS
tratamento
trmico-TT
(120 oC por 4
h)
15
Lavagem: 5
mL de H2O
Aplicao
Recuperaco
CV (%)
Referncia
< 1,8
Pozzebon et
al.21
< 1,2
Maltez et
al. 22
(%)
determinao
por CLAE dos
agrotxicos
diurom e linurom em urina
85 - 103
Eluio: 3
mL de
CH2Cl2
C18/
PMODS
tratamento
trmico (120
o
C por 4 h)
NH2 /PMS
aminopropil
C18/PMODS
15
NH2 - 12
tratamento
trmico (120
o
C por 4 h)
C18 - 15
98,7 (amostra
de gua de
lago)
concentrao de
Pb em gua de
lago e em
amostras biolgicas usando
colunas de enEluio: etariquecimento
nol F= 1,0
em sistema de
mL/min
97,9
injeo em
(amostras
fluxo e determibiolgicas)
nao por
espectroscopia
de absoro
atmica
NH2
NH2
NH2
Cond.: 2 mL
de CH2Cl2
(55 - 143)
(1,4 - 19)
C18
C18
(8,0 - 103)
(0 - 27)
Eluio: 2 x 3
mL
determinao
CH2CI2:MeOH por CLAE dos
95:5,v/v
agrotxicos
benomil, tebuC18
tiurom, simazina, atrazina,
Cond.: 5 mL diurom e amede MeOH + 5 trina em uva
mL de H2O
Milli-Q
Melo et al.
23
Eluio: 10
mL de
CH2Cl2
21
Porcentagem de Procedimento
Carbono da FS(%)
de EFS
NH2 PMS
aminopropil
Idem ref.23
14 (TT)
tratamento
trmico (120 C
C8/PMOS por 4 h) ou radiao gama (60
e 80 kGy)
18 (60 kGy)
17 ( 80
kGy)
tratamento
C8/PMOS trmico (120 C
por 8 h)
14
CV (%)
Referncia
(%)
NH2
22
Recuperaco
Aplicao
Cond.: 2 mL determinao
de CH2Cl2 por CLAE dos
agrotxicos
Eluio: 2 x 3 benomil, tebumL
tiurom, simaziCH2CI2:MeOH na, atrazina,
99:1,v/v
diurom e ametrina em tomaC18 (Idem
tes
ref.23)
NH2
NH2
(45 - 99)
(7,6 - 36)
Melo et al. 25
C18
C18
(6,0 - 70)
(7,3 - 52)
Cond.: 10 mL
88-120 (TT)
de MeOH + 3
82-115 (60 5-13 (TT)
mL de H2O
determinao
kGy)
Milli-Q
por CLAE dos
agrotxicos
Eluio: 2 x benomil, tebu85- 114 (80 0-16 (60
0,5 mL de tiurom, simaziQueiroz et
kGy)
kGy)
MeOH
na, atrazina,
al.26
diurom e ametrina em gua
0-13 (80
Milli-Q fortifikGy)
cada
Cond.: 3 mL
de acetato de
etila + 3 mL
de H2O MilliQ + 3 mL de
H2O Milli-Q
pH 2,5
determinao
por CLAE dos
agrotxicos
imazetapir, nicosulfurom,
diurom, linurom, clorimurom-etil em
Eluio: 5
mL ACN + 2 gua Milli-Q
mL acetato de fortificada
etila
72 - 111
< 15
Vigna et
al.27
www. s c i en ti a ch ro ma to g r ap h i c a. co m
Isabel Jardim
Tabela 2 (continuao)
FS/polmero Imobilizao
C14/
PMTDS
Fenil/
PDMFS
tratamento
trmico (110 C
Porcentagem de Procedimento
Carbono da FS(%)
de EFS
8,3
por 13 h)
tratamento
trmico (150 C
por 4,5 h)
tratamento
trmico (220
C por 12 h) ou
Fluorado/
radiao micro
PMTFS
-ondas (1000
W, 150 C por
30 min)
7,7
Aplicao
Cond.: 3 mL
de acetato de
etila + 3 mL determinao
de H2O deio- por CLAE dos
agrotxicos
nizada + 3
mL de H2O imazetapir, imazaquim, metsulpH 3,0
furom-metil,
bentazona,
Famostra > 5
clorimurommL/min
etil, tebuconazol em gua
Eluio: 5 x 1 superficiais
mL acetato de
etila
Cond.: 2 x 6
mL de hexano + 6 mL de
MeOH + 6
mL H2O deionizada
determinao
por CLAE dos
Famostra > 10 hidrocarbonetos
policclicos
mL/min
aromticos
(HPA), antraceno,fenantreno,
fluoranteno,
Eluio: 2 x 3 pireno em gua
mL acetato de Milli-Q fortifietila + 3 mL
cada
de hexano + 2
x 3 mL acetato de etila
Recuperaco
CV (%)
Referncia
74 - 99
< 10
Faria et al.28
59 - 75
1,4 - 16,9
Marques et
al.29
(%)
Cond.: 5 mL
de CH2CI2 +
5 mL de H2O
deionizada Determinao
por CLAE dos
agrotxicos
simazina, fluFamostra = 8
mL/min dioxonil, fenari- 96,2 - 100,5
mol e diflubenzurom em gua
Eluio: 5 x 1 Milli-Q fortificada
mL CH2CI2 +
5 x 1 mL
MeOH
Bodemeier
et al.30
23
7 Agradecimentos
Referncias Bibliogrficas
1. H.F. DeBrabander, H. Noppe, K. Verheyden, J.V.
Bussche, K. Wille, L. Okerman, L. Vanhaecke, W.
Reybroeck, S. Ooghe, S. Croubels. J. Chromatogr.
A, 1216, 7964 (2009).
2. A. Hercegov, M. Dmtrov, E. Matisov. J.
Chromatogr. A, 1153, 54 (2007).
3. Y. Chen, Z. Guo, X. Wang, C. Qiu. J. Chromatogr.
A, 1184, 191 (2008).
4. O.D. Prestes, C.A. Friggi, M.B. Adaime, R. Zanella. Quim. Nova, 32, no 6, 1620 (2009).
5. F.M. Lanas. Extrao em Fase Slida (SPE). Rima, So Carlos (2004).
www. s c i en ti a ch ro ma to g r ap h i c a. co m
Isabel Jardim
(2009).
30. A.P. Bodemeier, L. Maldaner, I.C.S.F. Jardim, Influncia da carga do polmero fluorado no preparo de
cartuchos para extrao em fase slida. Trabalho
apresentado no 15o Encontro Nacional de Qumica
Analtica e 3o Congresso Iberoamericano de Qumica
Analtica, (2009).
31. Comission of the European Communities
(SANCO), 2003, Document n SANCO/2007/3131.
Method Validation and Quality Control Procedures for
Pesticide Residues Analysis in Food and Feed, Bruxelas, Blgica, 2007, http://ec.europa.eu/food/plant/
protection/resources/qualcontrol_en.pdf, acessado em
jan/2010.
25