PRACTICA 1.

AISLAMIENTO DE ORGANISMOS
INTRODUCCIN.
LOS MICROORGANISMOS EN EL AMBIENTE
En la naturaleza, las clulas microbianas viven
asociadas a otras en conjuntos llamados
poblaciones.El medio en el que se desarrolla
una poblacin microbiana se denomina
hbitat. En los hbitats microbianos, las
poblaciones
celulares
raramente
viven
aisladas, por lo general se relacionan con otras
poblaciones
llamadas
comunidades
microbianas. En una comunidad microbiana, la
diversidad y abundancia de microorganismos
est controlada por los recursos (alimentos) y
por
las
condiciones (temperatura,
H,
concentracin de oxgeno, etc.) que existen en
el medio. El estudio de los microorganismos en
sus ambientes naturales constituye la ecologa
microbiana.
Las poblaciones microbianas interaccionan y
cooperan de varios modos, y estas relaciones
pueden ser beneficiosas o perjudiciales. Por
ejemplo, los productos de desecho de las
actividades
metablicas
de
algunos
microorganismos pueden servir de nutrientes
para otros.
Los microorganismos tambin
interaccionan con su ambiente fsico y qumico.
Las caractersticas de los hbitats son
notablemente diferentes: un factor que
favorece el crecimiento de un microorganismo
concreto puede ser daino para otro. En
conjunto, denominamos ecosistema a todos
los organismos vivos y a las condiciones
fsicas y qumicas de su entorno. Existen
importantes ecosistemas en los medios
acuticos
(ocanos,
estanques,
lagos,
corrientes, hielo, fuentes termales) y en los
medios terrestres (suelo, profundidades bajo la
superficie), as como en otros organismos
(plantas y animales)
SIGNIFICADO DE LOS
MICROORGANISMOS EN EL SUELO
El papel de los microorganismos en el
ambiente es doble: (1) suministran los
compuestos inorgnicos con una valencia
adecuada para que las plantas superiores
puedan utilizarlos (ciclos del nitrgeno y del
azufre) y (2) contribuyen a la continua

descomposicin y mineralizacin de la materia

orgnica en putrefaccin.
La actividad de los microorganismos
descomponedores es fundamental para
permitir el reciclaje de materia orgnica fijada
en las plantas superiores: los herbvoros
consumen una parte muy limitada de esta
materia orgnica porque la relacin C:N de
esta materia orgnica (alrededor de 200:1) es
mucho mayor que la conveniente para los
animales (en torno a 20:1).
Otra ventaja adicional de los microorganismos
es que ellos mismos se incorporan a los
detritus mejorando as la relacin C:N (para los
microorganismos oscila entre 6:1 y 12:1).
Por otra parte, los microorganismos son
indispensables para la descomposicin de
materia orgnica en ausencia de aire y para la
fijacin de CO2 en condiciones de
metanognesis, lo que determina cambios
globales importantes en los niveles de
oxidacin del material orgnico en ambientes
anxicos..
MICROORGANISMOS DEL SUELO.
Las bacterias son el grupo ms importante de
organismos del suelo, en el cual, en
condiciones favorables, alcanzan nmeros
extraordinariamente
elevados.
Existen
bacterias aerbias estrictas, anaerobias
estrictas y facultativas.
Las aerobias estrictas, obtienen su oxgeno del
aire y solo prosperan por tanto en suelos bien
aireados.
Las segundas no necesitan de
oxgeno gaseoso, o son an perjudicadas por
este, por lo que se encuentran en suelos
compactos y(o con drenaje deficiente. Su
actividad es mucho menor que la de las
primeras
Las denominadas facultativas,
constituyen el grupo ms importante y actan
tanto en un caso como en el otro.
Las
bacterias
desempean
un papel
importante en la descomposicin de residuos
orgnicos y en la formacin de humus, e
incluyen organismos fijadores de nitrgeno
amoniacal, en azoto ntrico (nitrificacin).

De las bacterias fijadoras de nitrgeno, viven

en simbiosis con leguminosas, fijando el
nitrgeno en ndulos de las races de estas.
Otras no-simbiticas, obtienen la energa de la
descomposicin de residuos vegetales
Las bacterias son, en general, bastante
exigentes en calcio y prosperan especialmente
en suelos de reaccin levemente cida a
levemente alcalina.
Los hongos pueden alcanzar en el suelo una
masa total superior a la de las bacterias. Son
probablemente todos hetertrofos y en ciertas
condiciones parecen ser de los organismos del
suelo ms aptos para descomponer el
sustrato. Algunas especies son depredadoras
de protozoarios y de nemtodos. Son en
general menos exigentes en calcio y ms
tolerantes de la acidez que las bacterias.
Ciertos hongos viven en simbiosis con las
races de plantas superiores, cuyo desarrollo
parecen beneficiar. Las asociaciones de
hongos y races son conocidas como
micorrizas
Las
algas
incluyen
especies
que
probablemente realizan fotosntesis y algunas
fijan el nitrgeno del aire. Se desarrollan
principalmente en la capa superficial de suelos
anegados. Parecen desempear un papel
importante en la aireacin de suelos
pantanosos. En cuanto a las exigencias de
calcio se aproximan ms de las bacterias que
de los hongos.
MATERIALES.
Plantas con sistemas completos obtenidas no
mayores a 48 horas
Tubos con 9 ml de solucin salina estril
Cajas de petri estriles
Pipetas de 1 ml estriles
Pipetas de 10 ml estriles
Cloruro de Sodio
Cloruro de Calcio
Sulfato de Magnesio
Nitrato de Amonio
Glucosa
Manitol
Extracto de levadura
Hidrogeno fosfato de potasio
Agar PDA
Agar OGY
Agar-agar

Alcohol
Hipoclorito
Balanza analtica
Incubadoras 25C - 37C
PROCEDIMIENTO.
Obtencin de la planta. Inicialmente se debe
recolectar la informacin del sitio de donde se
va a obtener la muestra, la informacin
correspondiente a humedad, rango de
temperatura, caractersticas de la planta en
situ con el fin de establecer parmetros
iniciales de estudio. En el momento de la
obtencin de la planta esta debe realizarse con
sumo cuidado para no afectar el sistema
radicular ni areo, le sistema radicular se debe
proteger envolvindolo en una bolsa limpia y
cuidando su transporte, la planta debe tener un
periodo de obtencin no mayor a 48 horas, ya
que mayor tiempo puede influenciar en el
comportamiento de los microorganismos
presentes puede ser mantenido a 5C.
Aislamientos de Microorganismos Para los
aislamientos de microorganismos se siguieron
los protocolos especficos de acuerdo al grupo
funcional al que pertenece cada uno:
Solubilizadores de roca (MSR), fijadores
biolgicos de nitrgeno (FBN) y formadores de
micorrizas (HFM)
Microorganismos
solubilizadores
de
roca.Se us el medio desarrollado por Kim et
al,(1997) y modificado por Osorio & Habte,
(2001) compuesto as: 1.0 g de NaCl, 0.2 g de
CaCl2.2H2O, 0.4 g de MgSO4.7H2O, 1.0 g de
NH4NO3, 10 g de glucosa, 7.0 g de agar-agar
y 3.5 g de solucion de fosforo.
Para aislar los MSR de la rizosfera se
prepararan diluciones seriales de suelo desde
10-2 hasta 10-8 con agua desionizada y estril.
De cada dilucin se transfieren aspticamente
alcuotas de 1.0 mL a cajas de petri con 15 mL
del medio de cultivo mencionado.
En el caso de los microorganismos
provenientes de las races, estas se lavaran
con agua desionizada y estril, luego se
transfieren a cajas de petri con 15 mL del
medio de cultivo mencionado. Para lograr una
adecuada homogeneizacin en cada uno de
los medios de cultivo inoculados con las

diluciones de suelos o con los fragmentos de

las races, estos se agitaran en un vrtex
durante 20 s y se verti cada cajas de petri se
incubara a 25C/48 72 hrs
Para
la
seleccin
inicial
de
los
microorganismos se consideraran las colonias
que muestren mayor abundancia y rpido
crecimiento, adems, se tuvo en cuenta que
presentaran zonas de clara dominancia a su
alrededor. De cada una de las colonias
individuales
seleccionadas
se
realizara
aislamientos para obtener colonias puras que
sern empleadas para la siguiente prctica.
Bacterias
simbiticas
fijadoras
de
nitrgeno (N2): Se utilizar el medio BYMA
(Caldo Levadura Manitol Agar) compuesto por:
0.1 g de NaCl, 0.2 g de MgSO4.7H2O, 0.5 g de
KH2PO4, 0.5 g de levadura, 10 g de manitol,
indicador de rojo congo y 20 g de agar-agar
por litro.
Los aislamientos se realizaran a partir de de
ndulos activos de los sistemas radiculares de
las plantas estudiadas, las cuales debern
haber sido previamente esterilizadas mediante
imbibicin por 30 segundos en hipoclorito de
sodio al 5%, imbibicin en alcohol al 70% v/v
por un lapso de tiempo de un (1) minuto y por
ltimo lavados con abundante agua destilada y
estril.
Luego los ndulos deben ser macerados y
esparcidos con un asa metlica estril en la
superficie del medio de cultivo utilizando
inicialmente rojo congo como indicador, las
cajas de petri se incubaran a 25C/48 72 hrs
Microorganismos infectantes del tallo: Se
utilizar el medio BYMA; el medio nutritivo
(Agar nutritivo), amidon 2 g/lt, 0.1 g de NaCl,
0.2, 0.5 g de levadura, 10 g de glucosa. Agar
PDA y OGY.
Los aislamientos se realizaran a partir de de
regiones del tallo de plantas estudiadas, las
cuales debern haber sido previamente
esterilizadas mediante imbibicin por 30
segundos en hipoclorito de sodio al 5%,
imbibicin en alcohol al 70% v/v por un lapso
de tiempo de un (1) minuto y por ltimo
lavados con abundante agua destilada y
estril.
Luego los segmentos de corte del tallo se
pesaran (1 gr) y se mezclaran con 9 ml de

agua desionizada esteril, esta mezcla deben

ser macerada y esparcidos mediante la tcnica
de siembra por profundidad en cada medio de
cultivo, las cajas de petri se incubaran a
25C/48 72.
Hongos formadores y no formadores de
micorriza se aislaron mediante la extraccin
de esporas a partir del suelo rizosfrico, se
prepararan diluciones seriales de suelo desde
10-2 hasta 10-8 con agua des ionizada y
estril. De cada dilucin se transfieren
aspticamente alcuotas de 1.0 mL a cajas de
petri con 15 mL del medio de PDA y OGY y se
lleva a incubacin a 25C/48 72 hrs.
Posteriormente se debe determinar el nmero
de esporas por gramo de suelo y separar los
crecimientos por morfotipos con el fin de ser
empleados para la siguiente practica.
RESULTADOS.
Los estudiantes deben realizar la tabla de
informacin in situ, el conteo y la
caracterizacin de microorganismos de
acuerdo
a
diferencias
macroscpicas
detectables.
BIBLIOGRAFIA
Daza Paulo. Aislamiento de microorganismos
de la rizosfera de Leucaena leucocephala y
evaluacin de su uso potencial en la
rehabilitacin
de
suelos
degradados.
Universidad Nacional de Colombia. 2010

W.D. Grant y P.E. Long. Ecologia, microbiana.

Microbiologa ambiental. Captulo 1. Ed.
ACRIBIA, Universidad de Navarra. Fecha
consulta
Abril
2012.
Disponible
en
http://www.unavarra.es/genmic/curso%20micro
biologia%20general/51habitats%20de%20los%
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ANONIMO; Microbiologa de los organismos.
Cap
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Microorganismos
ambientales
naturales. Pearseon Education. Fecha consulta
Abril
2012.
Disponible
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http://www.mailxmail.com/curso-microbiologiaorganismos-1-2/microorganismos-ambientesnaturales.