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ISSN 2007-4247
Publicacin trimestral.
Ao 5, Nmero 1
Enero - Marzo 2015
Editor:
Dr. Sergio Francisco Camacho Gutirrez
Urlogo Pediatra
Tincin de Gram.
Dr. Sergio Francisco Camacho Gutirrez
Urlogo Pediatra
Introduccin:
Iniciamos este 5 ao de edicin del boletn, la
Editores Asociados:
Dra. Mara Luca Prez Ricrdez
Infectloga Pediatra
Dr. Froyln Hernndez Lara Gonzlez
Nefrlogo Pediatra
Tincin de Gram.
Importancia
Fundamento
Tcnica
Aplicaciones en
Microbiologa
Prctica clnica
Espacio Biotico
PEDIATRIKA
Telfono: (222) 2 42 28 14
Pgina: www.pediatrika.com
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Blog: www.pediatrika2010.blogspot.com
correo: sefrac2000@yahoo.com
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profesor a partir de 1891 hasta 1900, en 1892 es
nombrado Jefe de Medicina Interna en el
Hospital Kongelige Frederiks, puesto que
mantuvo hasta su jubilacin en 1923 GRAM fue
un gran clnico que muri en Copenhague el 14
de noviembre de 1938.
Bibliografa
1.
www.bookrags.com/biography/hans-christian-joachingram-wob.
2.
www.iqb.es/historiamedicina/personas/gram.htm.
explicarnos
el
Peptidoglucano
Pared Celular
Grampositiva
Pared Celular
Membrana
Plasmtica
a) Grampositivo
Protena
Lipopolisacrido
Pared Celular
Gramnegativa
Peptidoglucano
Protena
Membrana
Externa
Pared Celular
Gel
Periplsmico
Membrana Plasmtica
b) Gramnegativo
Figura 3. Diferencias estructurales entre bacterias Gram positivas y Gram
negativas. Bacterias teidas con la tincin de Gram: bacilos Gram
positivos (morados) y bacilos Gram negativos (rojos).
3
La tincin de Gram es una tincin diferencial,
ya que utiliza dos colorantes y clasifica a las
bacterias en dos grandes grupos: bacterias
Gram negativas y bacterias Gram positivas. El
principio de la tincin de Gram est basado en
las caractersticas de la pared celular de las
bacterias, la cual le confiere propiedades
determinantes a cada microorganismo. La
pared celular de las bacterias Gram negativas
est constituida por una capa fina de
pptidoglicano y una membrana celular
externa, mientras que las bacterias Gram
positivas poseen una pared celular gruesa
constituida por pptidoglicano, pero no
cuentan con membrana celular externa; as
pues, la composicin qumica y el contenido de
pptidoglicano en la pared celular de las
bacterias Gram negativas y Gram positivas
explica y determina las caractersticas
tintoriales (Figura 3). La pared de las bacterias
Gram positivas es gruesa y consiste en varias
capas interconectadas de pptidoglicano as
como de cidos teicoicos; generalmente, 80%90% de la pared de la clula Gram positiva es
pptidoglicano. La pared de las bacterias Gram
negativas, por otro lado, contiene una capa
mucho ms delgada de pptidoglicano, un
espacio periplsmico y una membrana externa
compuesta de fosfolpidos, lipopolisacridos y
lipoprotenas. Slo del 10%-20% de la pared de
la clula Gram-negativa es pptidoglicano.
La tincin de Gram consiste en colocar como
colorante primario al cristal violeta, que tiene
afinidad por el pptidoglicano de la pared
bacteriana. Posteriormente, se coloca lugol,
que sirve como mordiente e impide la salida del
cristal violeta por la formacin de un complejo
cristal violeta-yodo que satura los espacios del
pptidoglicano de la pared bacteriana. En
seguida, se coloca una mezcla de alcoholacetona, que deshidrata la pared bacteriana y
cierra los poros de la misma y tambin
destruye la membrana externa de las bacterias
Gram negativas debido a que sta es soluble en
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TCNICA
1) Realice un frotis fino a partir de la
muestra biolgica en estudio, o bien de
un cultivo puro colocando en un portaobjetos, una colonia en una gota de
solucin salina isotnica estril y djelo
secar al aire. Fije el material al
portaobjetos pasndolo tres o cuatro
veces a travs de la flama de un mechero
de Bunsen, cuidando que el material no
se queme.
2) Coloque el frotis en un soporte para
tincin y cubra la superficie con el
colorante cristal violeta en solucin,
colorante primario, durante un minuto.
Posteriormente lave con agua corriente
de la llave.
3) Cubra el frotis con lugol durante un
minuto
y
posteriormente
lave
nuevamente con agua corriente de la
llave.
4) Sujete el frotis entre el pulgar y el dedo
ndice e impregne la superficie con unas
gotas de alcohol-acetona (decolorante),
hasta que el lavado deje de tener color
violeta, (aproximadamente 10 segundos
o menos).
5) Lave con agua corriente de la llave y
coloque el frotis nuevamente en el
soporte para tincin. Cubra la superficie
con el colorante secundario safranina
durante 30 segundos. Lave con agua
corriente de la llave. Coloque el frotis en
posicin vertical, dejar secar al aire.
Observe la preparacin teida bajo el
objetivo 100 x con aceite de inmersin
de un microscopio ptico. Las bacterias
Gram positivas se tien de azul obscuro;
las Gram negativas de color rojo (figura
6) Coloque el frotis en posicin vertical,
dejar secar al aire. Observe la
preparacin teida bajo el objetivo 100 x
con aceite de inmersin de un
microscopio ptico. Las bacterias Gram
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observan CGP en cadenas sospechamos de
Streptococcus pyogenes, si los CGP se
observan en racimos, ttradas o en pares
entonces nos sugiere la presencia
de
Staphylococcus aureus. Si el paciente presenta
una mionecrosis y observamos en la tincin
de Gram BGP grandes generalmente sin
esporas, nos hace pensar en Clostridium
perfringens. Cuando la muestra clnica es
lquido cefalorraqudeo (LCR) y el paciente
presenta meningitis y observamos en la
tincin de Gram CGP en cadenas sospechamos
A
aureus (Cocos Gran Positivos agrupados). B. Cepa pura de Streptococcus spp. (Cocos
Gram Positivos en cadena). C. Streptococcus pneumoniae (Diplococos Gram Positivos
Lanceolados). D. Clostridium perfringens (Bacilos Gram Positivos grandes). E.
Corynebacterium amycolatum (Bacilos Gram Positivos en forma de letras chinas. F.
Campylobacter jejuni (Bacilos Gram Negativos en forma de alas de gaviota). G.
Escherichia coli (Bacilos Gram Negativos).
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1.- Documenta ampliamente la calidad de la
muestra tomada por la ausencia o presencia
de: micro-organismos, clulas propias de los
tejidos subyacentes y clulas del sistema
inmune.
2.- Alerta al Microbilogo de la presencia de
micro-organismos habituales o de los que
requieren cultivos especiales para su
crecimiento.
3.- Orienta al Microbilogo durante el proceso
de recuperacin por cultivo de los diferentes
organismos: bacterias y levaduras.
4.- Orienta al mdico sobre el agente etiolgico
para establecer tratamiento emprico adecuado
y oportuno.
Basados en la 4 funcin, consideramos que la
identificacin de una bacteria (solo morfologa
y color) en algn espcimen del paciente,
determina el antimicrobiano para el inicio de la
teraputica sin tener que esperar de 48-96
horas para el resultado del cultivo.
Aunque la tincin de Gram es un
procedimiento rpido y aparentemente sencillo
es muy importante que se realice por expertos
ya que la interpretacin exacta, como ya lo
mencionamos, nos dar informacin no solo de
los organismos ah plasmados sino la
celularidad y caractersticas de la muestra
recolectada.
Es factible someter a tincin prcticamente
toda muestra de lquidos corporales y tejidos.
La tcnica de Gram en el laboratorio clnico
requiere de 5-10 minutos para la coloracin de
la muestra y aproximadamente 20-30 minutos
para la observacin microscpica y emitir un
resultado probablemente 1 hora despus de
haber recuperado el espcimen a estudiar. La
rapidez de la respuesta etiolgica es la que da
el valor mdico a esta prueba. Tal vez las
muestras ms comnmente estudiadas por esta
prctica sean el lquido cefalorraqudeo (LCR)
y liquido obtenido de algn absceso, coleccin
o cavidad corporal, sin embargo, es factible
realizar esta tincin a muestra de orina y heces
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Las bondades de la tincin de Gram van ms
all de identificar morfolgicamente alguna
bacteria o levadura, tambin nos permite
apreciar si existe clulas de diferente estirpe y
la cantidad, por ejemplo la presencia de clulas
escamosas en una muestra de expectoracin
nos habla de contaminacin con saliva y clulas
de cavidad oral, la muestra de expectoracin es
muy til en el diagnstico etiolgico de
neumona adquirida en la comunidad, en caso
de que la muestra est contaminada pierde su
utilidad.
Otro tipo de clulas que observamos en la
tincin de Gram es la presencia de polimorfonucleares o neutrfilos, monocitos-macrfagos
y linfocitos, todos ellos relacionados a la
inflamacin que genera la infeccin. Las
muestras con gran cantidad de bacterias pero
sin clulas inflamatorias se traducen como
contaminacin del espcimen. La presencia de
bacterias en el citoplasma de macrfagos y
neutrfilos
confirma
la
presencia
de
enfermedad.
Bibliografa
1.
2.
3.
ESPACIO BIOTICO.
Por Dra. Cruz Netza. Cardoso
deseo
que
en
investigadores
manos
pueda
de
otros
resultar
de
existen
seguramente
das
de
conocimiento
este
ms
investigacin
nuevo
conocimiento.
Comentarios? sefrac2000@yahoo.com