Prctica 13.

Cintica enzimtica 3: efecto del pH y temperatura.

Ana Judith Rojas Muiz 139328
M.C. Priscilla E. Morales Cervantes
La temperatura es uno de los factores ms importantes a considerar en el estudio y
control de las reacciones catalizadas por enzimas. La mayora de las reacciones
qumicas aumentan su velocidad a medida que aumentamos la temperatura, ya que hay
un importe mayor de energa cintica a las molculas reactantes, lo que conduce en un
mayor
ndice
de
colisiones
productivas
por
unidad
de
tiempo.
Las reacciones enzimticas se rigen bajo este concepto, pero tambin es necesario
considerar la naturaleza proteica de las enzimas, la cual le otorga caractersticas
especficas
a
la
reaccin.
La energa de activacin es la cantidad de energa necesaria para que una reaccin
qumica o un proceso puedan iniciarse. Mientras que, el estado de transicin es el
estado rico en energa de las molculas que interaccionan en la cima de la barrera de
activacin. La velocidad de una reaccin qumica es proporcional a la concentracin del
complejo en el estado de transicin.
Palabras clave: Isomerasa, pH, Enzima, km, grupos funcionales.

Objetivo:
El alumno analizar el efecto del pH y
de la temperatura sobre la actividad
enzimtica en una reaccin. Basado
en:
a. Discutir el efecto sobre el
comportamiento cataltico de una
enzima al variar el pH de la mezcla de
reaccin.
b. Discutir los cambios que se
presentan en la cintica enzimtica al
variar la temperatura de reaccin.
c. Determinar las condiciones ptimas
de reaccin en funcin de estos dos
factores (pH, temperatura).
Es lgico pensar que el pH de
una solucin influye sobre la velocidad
de una reaccin catalizada por
enzimas. El sitio activo y el sitio de
enlace de una enzima generalmente

estn
compuestos
por
grupos
ionizables que deben presentarse con
una forma inica apropiada o
especfica, de tal manera, que se
pueda mantener la conformacin
adecuada de estos sitios en la enzima
y pueda llevarse a cabo la unin del
sustrato y su transformacin hacia
productos.
Igualmente puede existir un sustrato
con grupos ionizables y debe contener
una forma inica especfica para que
pueda unirse a la enzima y
posteriormente se realice la catlisis.
Los efectos de pH sobre la estabilidad
de una enzima se deben tomar en
cuenta en cualquier estudio de efecto
de pH sobre la catlisis de sustrato.
Materiales:
1.- 14 tubos de ensaye
2.- 1 gradilla

3.- Celdas de fotocolormetro

4.- Fotocolormetro
5.- Baos de agua de temperatura
controlada
6.- 3 Pipetas de 1.0 ml
7.- 2 pipetas de 5.0 ml

Mezclar y calentar en bao de agua a

ebullicin durante 5 min.
Enfriar y leer a 540 nm ajustando a
cero con el tubo No. 7

Resultados:

Mtodos:

Resultados obtenidos de velocidad vs pH.

1.4
1.2
1
0.8
0.6

Mezclar e incubar a 37 C durante 2

min.
Agregar 0.5 mL de Enzima (Invertasa)
a todos los tubos.

0.4
0.2
0
2.5

Mezclar e incubar a 25C durante 20

min.
Agregar 1 mL de Dinitrosalicilato a
todos los tubos.
Mezclar y calentar en bao de agua a
ebullicin durante 5 min.
Enfriar y leer a 540 nm ajustando a
cero con el tubo No. 8

3.25

4.5

5.5

6.5

7.5

Tubo 1

Tubo 2

Tubo 3

Tubo 4

Tubo 5

Tubo 6

Resultados obtenidos de velocidad vs Temperatura.

0.8
0.7
0.6
0.5
0.4
0.3
0.2
0.1
0
4

Mezclar e incubar
temperatura indicada.

min

la

Agregar 1 mL de Dinitrosalicilato a
todos los tubos.

Discusin:

26

37

45

60

Tubo 1

Tubo 2

Tubo 3

Tubo 4

Tubo 5

Tubo 6

100

Se pudiera pensar que el objetivo que

se traz para la realizacin de esta
prctica se logr satisfactoriamente. Ya
que se observaron los cambios que se
llevan a cabo con el cambio de la
temperatura.
La teora nos indica que a temperaturas
bajas la enzima pudiera llegar a perder
la
actividad,
esto
sera
momentneamente;
entonces
a
temperaturas altas, la enzima se
desnaturalizara,
pero,
a
una
temperatura media (entre unos 30C y
40C) la enzima funciona casi
perfecta.4
Al variar este factor en una reaccin
podemos darnos cuenta del parmetro
de temperatura donde ocurre mejor
esta reaccin qumica, pues cada
enzima
tendr
una
temperatura
caracterstica a la cual trabaje con
mayor rendimiento.
Conclusin:

1.
Con la realizacin de esa prctica
pudimos notar los cambios que afectan
la cintica enzimtica a causa de la
temperatura.
Concluimos que la temperatura ptima
2.
para que se lleve a cabo la cintica
enzimtica es de 45 C pues a esta
temperatura se not una velocidad
mayor que a las otras.
Existe una cantidad de energa
especfica para que cada reaccin
enzimtica ocurra, a la que llamamos
energa de activacin.
Bibliografa:
1. http://ufq.unq.edu.ar/Docencia3.
Virtual/BioquimicaI/Teorias/T10Efecto-pH-temperatura.pdf

2. https://www.academia.edu/8572
959/UNIVERSIDAD_AUT
%C3%93NOMA_DE_CIUDAD_J
U
%C3%81REZ_INSTITUTO_DE_
CIENCIAS_BIOM
%C3%89DICAS_DEPARTAMEN
TO_DE_CIENCIAS_QU
%C3%8DMICO-BIOL
%C3%93GICAS_ACADEMIA_D
E_BIOQU
%C3%8DMICA_MANUAL_DE_
PRACTICAS_DE_BIOQU
%C3%8DMICA_GENERAL_NU
TRICI
%C3%93N_Y_MEDICINA_PLA
N_VIEJO
3. http://www.uaq.mx/investigacion/
difusion/veranos/memorias2010/12%20Verano%20Ciencia
%20Region%20Centro/UAQ
%20Cedillo%20Jimenez.pdf
Cuestionario:
La pepsina presenta su mxima
actividad a un pH
La pepsina es ms activa con un pH de
entre
2
y
3.
Se
desactiva
permanentemente con un pH superior
a 5.
Mencione cules podran ser los
grupos funcionales presentes en el sitio
activo y sobre cuales residuos de
aminocidos
rompe
los
enlaces
peptdicos.
Acta principalmente sobre enlaces
peptdicos de naturaleza hidrfoba,
preferentemente
aromticos.1
Interacta con las uniones Phe-Phe y
Phe-Tyr.
Si la concentracin de sustrato en una
reaccin enzimtica es igual a un 1/3
de Km. Cul ser la velocidad inicial de
la reaccin.

4. De acuerdo a la clasificacin de las

enzimas a que clase pertenece una
enzima que participa en la conversin
de un azcar de tipo aldosa a un
azcar de tipo cetosa.
Isomerasa
5. En esta prctica se ha observado cmo
influye el pH en la actividad de
invertasa, a una concentracin de
sacarosa dada. La estaquiosa es un
tetrasacrido y es un sustrato para esta
enzima y se ha observado que es
hidrolizado a una velocidad igual al 5%
de la sacarosa, bajo las mismas
condiciones de concentracin y pH.
Cmo explicara esta velocidad mxima
tan baja en relacin al pH de la
reaccin. ( aGal-a-Gal-a-Glu--Fru ).
6. Cuando las soluciones enzimticas son
calentadas, hay una prdida progresiva
de la actividad cataltica con el tiempo.
As, una solucin de hexocinasa
incubada a 45C durante 12 minutos
pierde el 50% de su actividad; pero
cuando la hexocinasa se incuba a
45C,
en
presencia
de
altas
concentraciones de glucosa durante el

mismo tiempo, solamente se pierde un

3% de su actividad. Explique el por qu
de la variacin desnaturalizante de la
hexocinasa
por
efecto
de
la
temperatura en ausencia y presencia
del sustrato.
La temperatura ptima para que una
enzima realice su reaccin cataltica es
45, pero, sin presencia de un sustrato,
en este caso, la glucosa, la enzima no
realizara su reaccin y empezara a
desnaturalizarse. Los disacridos como
la sacarosa, al no tener un carbono
anomrico libre, carecen de poder
reductor; sin embargo, si se hidroliza la
sacarosa con cido clorhdrico y calor,
se separa la glucosa de la fructosa;
estos monosacridos s tienen poder
reductor.
Bibliografa:
1. http://es.wikipedia.org/wiki/Pepsi
na
2. http://www.buenastareas.com/en
sayos/Efecto-De-LaTemperatura-SobreLa/24782159.html
3. http://ufq.unq.edu.ar/DocenciaVirtual/BioquimicaI/Teorias/T10Efecto-pH-temperatura.pdf