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UNIVERSIDAD DE LOS ANDES

FACULTAD DE CIENCIAS
GUA LABORATORIO BIOLOGA DE ORGANISMOS
PRCTICA 3
REINOS EUBACTERIA y ARCHAEBACTERIA

Actualmente, los bilogos clasifican a la mayora de los seres vivos agrupndolos en


tres dominios de organismos: Bacteria, Archaea (Arquea) y Eukarya. El dominio
Bacteria comprende el reino Eubacteria (bacterias verdaderas); las arqueas el reino
Achaebacteria (bacterias antiguas) y el dominio Eukarya incluye todos los dems
reinos. Por mencionar algunos, en el dominio Eukarya se encuentra el grupo
parafiltico Protista (compuesto por los protozoos y algas unicelulares fotosintticas),
los Hongos, las Plantas y animales, entre otros (Figura 1).
Antiguamente los seres vivos eran clasificados slo en dos grupos dependiendo de la
presencia/ausencia de un ncleo definido y de organelos envueltos en membranas. De
tal manera, se clasificaban como Procariotas y Eucariotas. Los primeros incluyen todos
los organismos unicelulares que no poseen una membrana rodeando el material
gentico y los organelos. Por su parte, los Eucariotas incluyen todos los seres vivos
que tienen un ncleo definido y organelos rodeados por membranas celulares.
Actualmente se sabe que los procariotas y eucariotas presentan otras diferencias a
nivel bioqumico (ej. produccin de metano como desecho metablico), estructural (ej.
la composicin qumica de sus paredes celulares), gentico (tanto en organizacin
como en iniciadores de replicacin) entre otros.

Dominio
Bacteria

Dominio
Arquea

Dominio
Eukarya

Figura 1. rbol de la vida por Dominios. De acuerdo a la evidencia actual, el dominio


Eukarya y Arquea comparten un ancestro comn y por ende estn ms cercanamente
emparentados que Arquea y Bacteria.

DOMINIOS BACTERIA Y ARCHAEA


Con base en la comparacin de la informacin gentica (secuencias de ADN y ARN)
entre linajes de procariotas y eucariotas, en las diferencias que muestran en las
molculas que componen sus membranas celulares y otras disimilitudes; se teoriza
que los procariotas divergieron temprano en la historia evolutiva en dos linajes
diferentes, el domino Bacteria y el dominio Arquea.
El
reino
Archaebacteria
est
dividido
en
dos
fila
principales:
Crenarchaeota y Euryarchaeota. El
primero
incluye
organismos
termfilos
(organismos que viven en ambientes con temperaturas mayores a 45C) y psicrfilos
(seres vivos que se desempean ptimamente en ambientes menores a 5C), mientras
que el segundo est integrado por organismos halfilos extremos (que viven en
ambientes con alta concentracin salina), acidfilos (viven en ambientes de pH menor
a 2), metangenos (utilizan H2 para reducir CO2 a metano) y Thermoplasma. Hay
contrastes morfolgicos entre dichos organismos (pueden ser redondos, espiralados,
lobulados o irregulares) y pueden encontrase de forma agregada o solitaria.
Las arqueas, a pesar de ser procariotas, muestran diferencias muy marcadas con las
bacterias en varios niveles biolgicos. Por ejemplo, la composicin estructural de las
membranas celulares junto a otras caractersticas, sugiere que el dominio Arquea est
ms estrechamente emparentado con el dominio Eukarya que con Bacteria.
El dominio Bacteria est compuesto por 12 fila, entre los que se encuentran las
bacterias Gram-positivas, Gram-negativas y las bacterias fotosintticas, que incluyen
Rickettsia, Desulfovibrionales, bacterias prpura no sulfhdricas, bacterias prpura
sulfhdricas, espiroquetas, micoplasmas, entre otros.
Una caracterstica peculiar de las bacterias es que son organismos ubicuos. No slo
han colonizado una gran cantidad de entornos del planeta, sino que tambin han
podido sobrevivir al interior de otros organismos. En esta instancia, es preciso
resaltar que, a pesar de la creencia popular, la mayora de estas bacterias no son
patgenas y que incluso ayudan a controlar otras poblaciones bacterianas que s
pueden ser deletreas para el hospedero a travs de competencia.
Existen otras bacterias que juegan un papel importante en el medio ambiente y la
economa, al ser uno de los principales eslabones ambientales en la descomposicin
de la materia orgnica. Un caso prctico es la utilizacin de bacterias en el tratamiento
de aguas residuales con la finalidad de promover la fragmentacin de desechos
slidos. Cabe destacar que muchos de los alimentos que consumimos son productos
derivados del metabolismo de las bacterias.

ALGUNAS CARACTERSTICAS GENERALES DE LAS BACTERIAS


La clasificacin de las bacterias se basa en sus caractersticas bioqumicas y
fisiolgicas, tales como la composicin de la pared bacteriana, las secuencias de ADN y
ARN, la sensibilidad a antibiticos, el metabolismo y la forma de reproduccin.
La pared celular y los ribosomas representan dos de los puntos ms importantes de
accin de los agentes antibacteriales. Un ejemplo de este tipo de antibiticos es la
penicilina.
La mayora de las bacterias pueden ser clasificadas dentro de tres grupos
morfolgicos principales: Rodillos (bacilos), esferas (cocos) y espirales (espirilos).
PROCEDIMIENTO EN LABORATORIO
Use un microscopio para observar los morfotipos bsicos de bacterias (expuestos a
continuacin), y dibuje las formas observadas en la lmina bacteria types, en los
espacios designados mostrados a continuacin.

Demostrativa A

Demostrativa B

Demostrativa C

Organizacin:
Tipo:

Organizacin:
Tipo:

Organizacin:
Tipo:

a. Nombre cuatro diferencias entre los dominios Arquea y Bacteria (recuerde


diferencias a nivel de membrana celular, pared celular, metabolismo, etc.).
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b. Qu evidencia apoya la cercana filogentica entre Arquea y Eukarya?
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c. Explique a qu hace referencia el trmino extremfilo. Nombre 3 grupos de
bacterias como ejemplo.
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d. Qu utilidad industrial puede tener un organismo extremfilo? De un ejemplo y
justifique.
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e. Consulte qu tipo de organismo es Thermoplasma y mencione las caractersticas
que lo hacen nico.
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TINCIN GRAM: COLOREAR LA PARED


La tincin de Gram es una tincin especfica empleada para diferenciar bacterias en
funcin de algunas caractersticas de su pared celular. Se dice que una bacteria es
GRAM (+) si al realizar la tincin de Gram, sta mantiene el colorante azul violeta,
dando como resultado una coloracin morada; mientras que se denomina GRAM (-)
cuando la muestra bacteriana no conserva el azul violeta en sus membranas y al final
de la tincin se ve rosada.

En las bacterias GRAM (+), la afinidad hacia el colorante azul violeta est dada por la
presencia de una capa gruesa de peptidoglicano en la pared celular bacteriana; en
contraste, la ausencia de tincin de las bacterias GRAM (-) con el azul violeta, es
causada por la presencia de una capa de peptidoglicano ms delgada en la pared
celular bacteriana (que no es capaz de retener el colorante despus de los lavados).
Para determinar con precisin si las bacterias que se estn estudiando son GRAM (-)
se utiliza una coloracin secundaria aplicando fucsina para generar un contraste y as
poder verlas de color rojo-rosado.
A continuacin ustedes deducirn a partir de tincin de Gram, si las cepas bacterianas
1 y 2 son Gram (+) y/o Gram (-). En seguida se muestran los pasos que deben seguir
para realizar la tincin de Gram:
Procedimiento en Laboratorio Tincin de GRAM
1. Limpie la zona de trabajo para evitar contaminar los medios con agentes
biolgicos externos.
2. Encienda el mechero (IMPORTANTE: primero abra la llave del gas y luego gire
en contra de las manecillas del reloj la llave de paso del gas que est en la base
del mechero. PRECAUCIN: ABRIR PARCIALENTE).
3. Abra la caja de petri cerca del mechero.
4. Exponga la punta de un asa redonda a la llama del mechero. Antes de tomar la
muestra, debe enterrar la punta del asa en el medio de cultivo cerca a las
paredes de la caja para enfriarla. Luego tome una muestra de UNA COLONIA
del cultivo suministrado con el asa.
5. En la superficie de una lmina ponga una gota de agua. Frote esta seccin de la
lmina con la punta del asa para distribuir la muestra de clulas bacterianas en
la parte central.
6. Exponga por un breve periodo de tiempo la lmina al fuego del mechero, varias
veces hasta que la muestra se seque. Utilice unas pinzas de madera para
sostener la lmina.
7. Deje enfriar el preparado por 1 minuto y a continuacin agregue azul violeta.
8. Un minuto despus lave con agua la lmina y adicione lugol a la muestra por 2
minutos.
9. Lave con alcohol-acetona la muestra por 30 segundos.
10. Agregue fucsina y deje actuar durante 15 segundos.

11. Observe al microscopio con una magnificacin de 1000X su preparado. NO


OLVIDE poner una laminilla para evitar contaminar el preparado con el aceite
de inmersin.
12. Realice este procedimiento para las dos cepas suministradas.
A partir de sus resultados de tincin de Gram responda:
a. De qu color son las bacterias de la cepa 1 y 2? Son Gram (+) o Gram (-)?
(Complete la tabla que se muestra a continuacin).
COLOR

GRAM +

GRAM -

Cepa
1
Cepa
2
b. Dibuje lo observado y comntelo. Adems dibuje un esquema de la membrana y
pared en cada caso:

Muestra

Muestra

Esquema

Esquema

GRAM NEGATIVA

GRAM POSITIVA

c. Consulte qu tipos de bacterias NO pueden ser teidas utilizando el mtodo de


Gram. Cite dos ejemplos.
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d. A qu se refiere el trmino Gram variable? Cite dos ejemplos de bacterias que
muestren esta propiedad.
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e. Bajo qu circunstancias un mdico podra prescribir un antibitico de corto
espectro?
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f. Y uno de amplio espectro?
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QU HAY EN SUS MANOS?
En esta prctica ustedes tendrn la oportunidad de observar la diferencia que hay en
la microbiota bacteriana presente en la piel, antes y despus de lavarse las manos.
Tenga en cuenta las siguientes indicaciones:
Procedimiento en Laboratorio Microbiota en las manos
1. Limpie la zona de trabajo con la finalidad de evitar contaminar los medios de
cultivo.
2. En primer lugar, utilice una caja de Petri con medio agar Mller-Hinton y
presione los cinco dedos de su mano contra el agar. Asegrese de realizar todo
el procedimiento cerca del mechero.
3. Lave su mano con abundante agua y jabn. En una nueva caja de Petri con agar
Mller-Hinton realicen la impresin de los cinco dedos con la mano limpia
sobre el agar.

4. RECUERDE marcar sus cajas de cultivo con la clase, su seccin de laboratorio,


su grupo y el tipo de tratamiento hecho en la caja.
5. Llevar a incubacin (a 36C).
A partir del procedimiento experimental planteado respondan:
a. Qu diferencias esperara encontrar entre las cajas sembradas antes y despus
del lavado de manos?
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b. Qu es la microbiota simbionte? Por qu es importante para la vida humana
(ejemplo)?
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c. Cite 4 ejemplos de rganos o partes del cuerpo humano donde haya microbiota
simbionte.
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ANTIBIOGRAMAS
Un antibiograma es una prueba microbiolgica que se utiliza para estudiar la
capacidad que tiene una sustancia para inhibir el crecimiento de bacterias sembradas
en un medio conocido. Esta tcnica es informativa, ya que a partir de la presencia o
ausencia de anillos de inhibicin y las diferencias de longitud del radio entre los
controles y el compuesto evaluado, permite la cuantificacin del efecto inhibitorio que
posiblemente tendr la sustancia cuando se la agreguemos a la bacteria.
En esta parte, ustedes probarn la capacidad de inhibicin de cuatro sustancias (agua,
alcohol antisptico, hipoclorito y solucin jabn-agua) sobre dos cepas bacterianas,
utilizando como medio de cultivo agar Mller-Hinton. A continuacin se detallan los
pasos
que
deben
seguir
para
realizar
esta
actividad:

Procedimiento en Laboratorio - Antibiograma


1. Limpie el rea de trabajo. Es recomendable utilizar guantes para evitar
contaminar el medio.
2. Tome un asa redonda y exponga la punta de alambre a la llama del mechero.
NO OLVIDE enfriar el asa antes de tomar la muestra, perforando el medio de
cultivo con la punta. Recoja una colonia del cultivo bacteriano suministrado.
3. Realice con el asa un extendido masivo (como se muestra a continuacin) en
una caja de Petri con agar Mller-Hinton. El medio es bastante suave as que,
para evitar daarlo, realice el procedimiento aplicando muy poca presin.

4. Impregne discos de papel (sensidiscos) con cada una de los compuestos a


evaluar y dispngalos en el agar Mller-Hinton utilizando pinzas. Segn se lo
indique su instructor.
5. En el respaldo de la caja de Petri indique el tipo de sustancia a la que
corresponde cada sensidisco. No olvide adems marcarla con su seccin de
laboratorio y grupo al que pertenece.
6. Lleve a incubacin a 36C.
7. Realice el procedimiento con las 2 cepas suministradas
Tomando como referencia la metodologa experimental planteada, formule una
hiptesis biolgica que evalu la efectividad de los antispticos o desinfectantes frente
a las cepas 1 y 2. Utilicen como dato experimental la presencia/ausencia de anillos de
inhibicin y/o el radio del anillo de inhibicin por cada sensidisco. Es
RECOMENDABLE que indaguen la diferencia entre antibitico, antisptico y
desinfectante.
Hiptesis alterna:
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Hiptesis nula:
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Variable independiente:
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Variable dependiente:
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BACTERIAS FIJADORAS DE NITRGENO


Observe y dibuje las bacterias del gnero Rhizobium expuestas en la lmina
demostrativa (Legume nodule).
Consulte cul es la funcin ecolgica de las
bacterias fijadoras de nitrgeno en el medio
terrestre. En qu ambientes creera que es
ms frecuente encontrar una asociacin
entre plantas y bacterias fijadoras de
nitrgeno?
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Lamina Legume nodule

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Anabaena

Mixed Blue-green Algae

Segn los preparados observados. Cules son las formas celulares bsicas de las
cianobacterias?
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Consulte sobre la teora simbitica propuesta por Lynn Margulis. Con base en dicha
teora, Cul sera el origen de las mitocondrias? Cul sera el origen de los
cloroplastos?
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