La Tincin De Gram

Voy a iniciar, hablandoles un poco de la

importancia y origen de la tincin de Gram......
La tincin de Gram es uno de los mtodos de
tincin ms importantes en el laboratorio
bacteriolgico y con el que el estudiante debe
estar perfectamente familiarizado. Su utilidad
prctica es indiscutible y en el trabajo
microscpico de rutina del Laboratorio de
Microbiologa las referencias a la morfologa
celular bacteriana, se basan justamente en la
tincin de GRAM.
Esta tincin se denominada as por el
bacterilogo dans Christian Gram, quien la
desarroll en 1844. Sobre la base de su reaccin a
la tincin de Gram, las bacterias pueden dividirse
en dos grupos, Gram positivas y Gram negativas
(en este caso, los trminos positivo y negativo no
tiene nada que ver con carga elctrica, sino
simplemente designan dos grupos morfolgicos
distintos de bacterias).
Las bacterias Gram-positivas y Gramnegativas se tien de forma distinta debido a las
diferencias constitutivas en la estructura de sus

paredes. La pared de la clula bacteriana sirve

para dar su tamao y forma al organismo as como
para prevenir la lisis osmtica. El material de la
pared celular bacteriana que confiere rigidez es el
peptidoglicano.
La pared de la clula Gram-positiva es gruesa
y consiste en varias capas interconectadas de
peptidoglicano as como algo de cido teicoico.
Generalmente, 80%-90% de la pared de la clula
Gram -positiva es peptidoglicano. La pared de la
clula Gram-negativa, por otro lado, contiene una
capa mucho ms delgada, nicamente de
peptidoglicano y est rodeada por una membrana
exterior
compuesta
de
fosfolpidos,
lipopolisacridos, y lipoprotenas. Slo 10% - 20%
de la pared de la clula Gram-negativa es
peptidoglicano.
A continuacin se describir en detalle la
tincin de Gram:

FIJAR MUESTRA Y TEIR CON VIOLETA

Las clulas del frotis, fijadas al calor sobre un
portaobjeto se tien, primero con una solucin de
cristal violeta durante un minuto (otros colorantes
bsicos no son tan efectivos) y son lavadas
despus para quitar el exceso de colorante con
agua destilada. En este estado, todas las clulas,
tanto las Gram positivas como las Gram negativas,
estn teidas de azul.
COLOCAR EL LUGOL
El portaobjetos se cubre entonces con una
solucin de yodo-yoduro potsico durante un
minuto y luego de lava. El ingrediente activo es el
I2; el KI simplemente hace soluble el I2 en agua. El
I2 entra en las clulas y forma un complejo
insoluble en agua con el cristal violeta. De nuevo
tanto las clulas Gram positivas como las Gram
negativas se encuentran en la misma situacin.
DECOLORAR CON ALCOHOL ACETONA
Se lleva a cabo despus la decoloracin,
usando una mezcla de alcohol-acetona, sustancias
en las que es soluble el complejo I2-cristal violeta.
Algunos organismos (Grampositivos) no se

decoloran, mientras que otros (Gramnegativos) lo

hacen. La diferencia esencial entre esos dos tipos
de clulas est por tanto en su resistencia a la
decoloracin.
Esta resistencia se debe probablemente al
hecho de que en el caso de bacterias Gramnegativas, la mezcla de alcohol/acetona es un
solvente lipdico y disuelve la membrana exterior
de la pared de la clula permitiendo la salida de la
tincin violeta por esos poros (y tambin puede
daar la membrana citoplsmica a la que se une
peptidoglicano).
La
delgada
capa
de
peptidoglicano es incapaz de retener el de
complejo cristal violeta-yodo y la clula se
decolora.

Las clulas Gram positivas, a causa de sus

paredes celulares ms espesas (tienen ms
peptidoglicano y menos lpido), no son permeables
al disolvente ya que ste deshidrata la pared
celular y cierra los poros, disminuyendo as el
espacio entre las molculas y provocando que el
de complejo cristal violeta-yodo quede atrapado
dentro de la pared celular.
Despus de la decoloracin las clulas Gram
positivas son todava azules, pero las Gram
negativas son incoloras.
Aadiendo la Safranina
Para poner de manifiesto las clulas Gram
negativas se utiliza una coloracin de contraste.
Habitualmente es un colorante de color rojo, como
la safranina o la fucsina bsica. Despus de la
coloracin de contraste las clulas Gram negativas
son rojas, mientras que las Gram positivas
permanecen azules.
Debido a que la Fundamentacin

de

la coloracion de Gram se debe a la

estructura de la pared bacteriana es vital que
tengan en claro esa diferencia . Es por ello que

para reforzar ese conocimiento les coloco

esta presentacin donde se explica en detalle
los componentes y diferencia de la pared de
bacterias Gram positiva y Gram negativa

......Ahora debes realizar como actividad un dibujo

esquemtico que permita destacar las diferencias
entre las bacterias Gram-positivas y Gramnegativas, sealando los componentes en cada
caso y publicarlo en el blog.
Es importante resaltar algunos aspectos cruciales
de la tincin de Gram:
1) El tratamiento con cristal violeta debe preceder
al tratamiento con yodo. El yodo por s solo tiene
poca afinidad con las clulas.
2) La decoloracin debe realizarse con poca agua
para evitar que pierdan la tincin las clulas Gram
positivas. EI proceso de decoloracin debe ser
corto y es esencial un clculo preciso del tiempo
para obtener resultados satisfactorios.
3) Cultivos ms viejo de 24 horas pueden perder su
habilidad de retener el complejo cristal violeta yodo.

El carcter de Gram positivo no es siempre un

fenmeno del todo o nada. Algunos organismos
son ms Gram positivos que otros y algunos son
Gram-variables, es decir, unas veces Gram
positivos y otras Gram negativos