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raz, que pueden ser almacenadas y encapsuladas perfectamente, dando lugar a semillas
sintticas.6 7 8
Por otro lado, presenta una serie de inconvenientes, como por ejemplo, la generacin de
anormalidades morfolgicas, fisiolgicas y genticas en los cultivos, fenmenos de
poliembriona indeseables, falta de maduracin y dormancia o germinacin prematura de los
embriones en cultivo.9 10 11
RESUMEN
Con la finalidad de inducir la formacin de callos, embriones
somticos y regeneracin de plntulas a partir de anteras de onoto,
Bixa orellana L., se tomaron botones florales mayores de 0,7 cm, con
granos de polen uninucleados de 19 genotipos del campo
experimental del Instituto de Agronoma, Universidad Central de
Venezuela. Las anteras fueron sometidas a cinco regmenes de
temperatura (8 C durante 0, 2, 4, 6 y 8 das) removidas
aspticamente. Se evalu el efecto de tres medios de cultivo:
Murashige Skoog (MS) Nitsch y Nitsch y B5, con diferentes
combinaciones de reguladores de crecimiento: cido naftalenactico
(ANA), Kinetina (Kin), 2,4-dichlorophenoxiactico (2,4-D), Picloram
(Pic), cido indolbutrico (AIB), 6-bencilaminopurina (BA) y
Thidiazuron (TDZ) solos o en combinacin, probndose condiciones
de iluminacin y oscuridad para cada tratamiento. En los casos donde
se utilizaron las sales MS suplementado con 4 mg l-1 de ANA y 2 mg l1
de BA, bajo oscuridad y a una temperatura de 30 1 C, para los
genotipos identificados como G1, 41 e I, se indujo la formacin de
embriones somticos. No se observaron diferencias en la respuesta
de los tratamientos a cinco regmenes de temperatura. Por otra parte,
la germinacin de embriones hasta el desarrollo de plntulas se logr
en el medio MS, sacarosa (20 g l-1), sin regulador de crecimiento. El
protocolo obtenido permiti la regeneracin eficiente de plntulas
Genotipo
Origen
25,37
26
G1, G6, G8, 21, 29, I
7, 8, 9, 10, 18
30, 40
35
41
44
Gurico
Mrida
Aragua
Sucre
Cojedes
Carabobo
Portuguesa
Nueva Esparta
Medios de cultivo
Para inducir la formacin de callo embriognico (medio I) se evalu el
efecto de tres medios de cultivo, a saber: MS (Murashige y Skoog,
1962), Nitsch y Nitsch (1969) y B5 (Gamborg et al., 1968),
suplementado con myo-inositol (100 mg l-1), tiamina-HCl (0,1 mg l-1),
cido nicotnico (0,5 mg l-1), piridoxina (0,5 mg l-1), casena
hidrolizada (250 mg l-1), sacarosa (20 a 160 g l-1), pH ajustado a 5,8
2 y solidificado con Phytagel (2,5 g l-1). Asimismo, diferentes
combinaciones de reguladores de crecimiento: cido naftalenactico
(ANA), Kinetina (Kin), 2,4-dichlorophenoxiactico (2,4-D), Picloram
(Pic), cido indolbutrico (AIB), 6-bencilaminopurina (BA) y
Thidiazuron (TDZ), observados en el Cuadro 2. Adicionalmente, se
probaron tres tiempos de cultivo en el medio I (21, 28 y 42 d), para
determinar el tiempo ptimo de induccin de callo embriognico.
4
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1
1
5
5
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2
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6
2
6
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0
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0,5.
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0
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1,5
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3
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0,5
0,5
0,5
0,5
1,5
1,5
1,5
1,5
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0,1
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Gamborg
et. al.
(1968)
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2
6
2
6
1,5
3
1,5
3
1,5
3
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4
2
4
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3
3
4
4
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0,5
0,5
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1
1,5
1,5
3
3
4
4
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Siembra
Con la ayuda de un bistur y agujas de diseccin se eliminaron los
filamentos del androceo sembrando las anteras, bien sea completas o
separadas (tecas), en cpsulas de Petri que contenan 30 ml de
medio. Cada cpsula contaba con 10 explantes e igual cantidad de
repeticiones. Ambos tipos de explantes fueron incubados en los
medios de cultivo (medio I), colocados en diferentes cmaras de
crecimiento bajo iluminacin (32 mol m2s-1 con un fotoperodo de 12
horas y 23 3 C) y de oscuridad a 30 1 C.
La induccin de los embriones somticos, transferencia y germinacin
(medios II, III y IV) se llev a cabo bajo condiciones de iluminacin
de 32,5 mol m-2 s-1 con un fotoperodo de 12 h, temperaturas en un
rango entre 20 y 27 C y una humedad relativa de 60 a 70%.
Fueron evaluados aspectos cualitativos y cuantitativos: dentro de las
variables cualitativas se consider la textura, color y forma de los
callos, tambin la descripcin morfolgica de los embriones y
plntulas tanto normales como anormales. Dentro de las variables
cuantitativas se evalu el nmero de anteras que produjeron callos
(porcentaje de eficiencia), el nmero de embriones en estado
globular, torpedo y cotiledonar, tambin el nmero de embriones
normales y anormales y el nmero de plntulas obtenidas a partir de
los embriones somticos.
RESULTADOS Y DISCUSIN
Bajo las condiciones de estos ensayos no hubo diferencias en la
respuesta de los tratamientos al aplicar shock trmico. Slo se obtuvo
la formacin de embriones somticos cuando las anteras se
separaron en tecas. De todos los reguladores de crecimiento
Medio I - Induccin de callo
MS, sacarosa (40 g l-1), ANA (4 mg l-1) + BA (2
mg l-1)
21 y 28 das
FIGURA 4. Anormalidades
observadas en embriones somticos
obtenidos a partir de cultivo de
anteras de onoto, (a) embrin de
forma arrepollada con numerosos
cotiledones unidos en roseta, (b)
embrin aparaguado con 3 o 4
cotiledones unidos en la base y
separados en el pice, (c - d)
formacin de embriones fusionados
en diferentes estados de desarrollo,
(e) embrin con ms de dos hojas
cotiledonares, (f) embrin torpedo
con una raz sin desarrollo del eje
caulinar.
c: embrin cotiledonar, g: embrin
globular, t: torpedo
1
2
3
40
31
-
16
16
1
16
2
4
72
49
5
20
-
37
12
57
.
28
(239
normales
54
anormales)
1
2
3
42
45
-
8
21
35
5
39
8
55
105
43
41
13
-
10
17
36
Total (t + c) = 247