Universidade Federal do Tocantins

Engenharia de Bioprocessos e Biotecnologia

Paola Maciel, Thayanne Fuentes, Diego Drews, Ismael Rocha, Luiz

Alexandre.

AULA PRTICA 2: EQUIPAMENTOS E MATERIALDO

LABORATRIO DE MICROBIOLOGIA

Gurupi
2015

Universidade Federal do Tocantins

Engenharia de Bioprocessos e Biotecnologia

Paola Maciel, Thayanne Fuentes, Diego Drews, Ismael Rocha, Luiz

Alexandre.

AULA PRTICA 2: EQUIPAMENTOS E MATERIALDO

LABORATRIO DE MICROBIOLOGIA

Relatrio de aula prtica de microbiologia, ocorrida na

Universidade Federal do Tocantins, para obteno experincia
em prticas laboratoriais na Engenharia de Bioprocessos e
Biotecnologia, sob orientao professor Dr. Alex Fernando de
Almeida.

Gurupi

2015
SUMRIO
1

INTRODUO...........................................................................................3

2
2.1
2.2

OBJETIVOS................................................................................................3
Objetivo geral..............................................................................................3
Objetivo especfico......................................................................................3

3
METODOLOGIA........................................................................................3
3.1 Reconhecimento de material e equipamentos.............................................3
3.1.1..Vidraria e Utenslios...................................................................................3
3.1.2..Equipamentos..............................................................................................4
3.1.3..Reagentes e Meios de Cultura....................................................................4
3.2 Preparo de vidraria para esterilizao.........................................................5
3.2.1..Tubos, bales e outros frascos....................................................................5
3.2.2..Placas de Petri............................................................................................5
3.2.3..Pipetas.........................................................................................................5
3.2.4..Esterilizao da Vidraria............................................................................5
3.3 Procedimento...............................................................................................6
3.3.1..Material Utilizado.......................................................................................6
4
4.1

RESULTADOS E DISCURSES...............................................................6
Discurso.....................................................................................................7

CONCLUSO...........................................................................................13

REFRENCIAS BIBLIOGRFICAS......................................................14

INTRODUO

de suma importncia o conhecimento de todos os equipamentos e vidrarias

que sero manuseados em um ambiente laboratorial, para que haja um
aproveitamento total, e minimize qualquer chance de ocorrer acidentes,
prevenindo acidentes de trabalho e diminuindo o risco de contrair alguma doena
ou infeco decorrente de microrganismos.

OBJETIVOS

2.1

Objetivo geral
Reconhecer materiais e equipamentos utilizados no laboratrio de microbiologia.

Preparar a vidraria para esterilizao.

2.2

Objetivo especfico
Averiguar a presena de micro-organismos no ambiente.

METODOLOGIA

3.1

Reconhecimento de material e equipamentos

3.1.1 Vidraria e Utenslios

Ala de Drigalski e platina
Bico de Bunsen
Pipeta Automtica
Pipeta de Vidro Graduada

Placa de Petri
Tubo de Cultura
Tubo de Ensaio
Lmina
Lamnula
Balo Volumtrico
Basto de Vidro

3.1.2 Equipamentos
Agitador
Autoclave
Cmara de segurana biolgica
Centrfuga
Espectrofotmetro
Incubadora ou BOD
Microscpio
Liofilizador

3.1.3 Reagentes e Meios de Cultura

gar nutriente
gar extrato de malte
Peptona
Extrato de levedura

Glicose

3.2

Preparo de vidraria para esterilizao

3.2.1 Tubos, bales e outros frascos.

Devem ser emborrachados em algodo hidrofbico. A rolha de algodo precisa ser
suficientemente, mas no demasiadamente, apertada, e quando bem feita no se desfaz ao ser
retirado do tubo.
Recomenda-se colocar sobre os tampes de algodo pequenos cartuchos de papel para
esterilizao. Podem-se usar cpsulas de alumnio, em vez de algodo, pois so de
manipulao mais fcil e, sobretudo til para cultura em tubos de ensaio.

3.2.2 Placas de Petri

As tampas devem ser munidas de um disco de papel-filtro. Deve-se traar com a
tampa da placa um circulo sobre o papel-filtro, cort-lo, contra a face interna da tampa e
ajust-lo bem. As placas devero ser envolvidas em papel ou colocadas em recipientes
apropriados para esterilizao.

3.2.3 Pipetas
Deve-se prov-las de algodo na extremidade destinada aspirao e deix-las
envoltas em papel, colocada em recipientes adequados, como cilindros metlicos.

3.2.4 Esterilizao da Vidraria

A vidraria seca ser esterilizada em estufa de secagem e esterilizao a uma
temperatura entre 170 e 180C, durante duas horas. A esterilizao se d por calor-seco.

3.3

Procedimento

3.3.1 Material Utilizado

gar Nutrientes
Extrato de Levedura 2,00 g
Extrato de carne 1,00 g
Peptona 5,00 g
Cloreto de Sdio 5,00 g
Agar 15,00 g
gua destilada 1,0 L
Expondo-se as placas de Petri com uma condio de inoculao. Em uma tossiu-se, e
em outra placa de Petri passou-se levemente o celular, identificando-as respectivamente com
numeraes 1 e 2, e para concluir, deixou-as em crescimento e observao durante uma
semana.

RESULTADOS E DISCURSES
Aps a espera de uma semana para avaliar seu crescimento, observou-se a formao

de algumas colnias. Na placa 1, a placa na qual recebeu fludo bucal (tossiu), notou-se a
presena de fungos e bactrias. Observaram-se as culturas formadas notaram se fungos
filamentosos com hfas, micelo e com sua regio central j esporulada. Essa caracterstica
esporulada proveniente do amadurecimento desses fungos. De acordo com o tempo e o
tamanho da populao esse amadurecimento foi considerado precoce, ento acredita-se que
essa causa seja proveniente do meio de cultura no conter nutrientes favorveis ao
crescimento daquela espcie.

Observou-se a 2 placa, de nmero 2, na qual teve contato com o celular, cresceu

apenas bactrias, caracterizadas pelo brilho, com nivelaes e uma distribuio quase geral
sobre o meio de cultura.

4.1

Discurso

1) Descreva a funo e o funcionamento dos seguintes materiais de uso no laboratrio de

microbiologia:
Ala de Drigalsky - Estas alas de Drigalski em ao inox so bastante utilizadas em
manipulaes bacteriolgicas. So usadas para aplicar e espalhar de maneira uniforme
microrganismos uni- ou multicelulares sobre placas de gar.
Tubos de Durham Tubos pequenos, cilndricos, medindo 5X20mm mais ou menos,
que so colocados invertidos no meio lquido contido num tubo de cultura; durante a
esterilizao, o tubo de Durham fica cheio do lquido; aps a inoculao e fermentao o
lquido deslocado, total ou parcialmente, pelo gs formado em uma fermentao.
Autoclave - Seu funcionamento baseia-se no vapor dgua sob presso, e utilizada
para esterilizao de materiais usados em microbiologia, principalmente meios de cultura.

Cmara de Segurana Biologica - As Cabines de Segurana Biolgica (CBS) tem

por objetivo proteger o operador, o meio ambiente e as amostras manipuladas. H vrios
nveis de CBS que dependem do grau de segurana necessrio e nvel de periculosidade dos
agentes biolgicos envolvidos nas atividades. A seguir conheceremos quais so os tipos
existentes de Cabines de Segurana Biolgica.
CBS Classe I
O ar sugado para a cabine atravs da abertura frontal, circula pelo seu interior e
depois eliminado por um condutor que fica na parte de trs da cabine, passando antes por
um filtro especial filtro HEPA. Quando manipulamos meios lquidos e amostras podemos
gerar aerossis que consiste no desprendimento de partculas microscpicas contendo os
agentes infecciosos vrus, bactrias, etc. O sistema das cabines de segurana faz o ar no
interior da cabine circular, evitando dessa forma que estes aerossis e que os agentes
infectantes permaneam na cabine.
CBS Classe II
As cmaras da Classe II diferem das anteriores por proteger tambm o interior da
cabine de contaminaes externas. O ar que entra na cabine passa antes por um filtro do tipo
HEPA e assim tanto operador quanto amostras so protegidas de contaminaes. Neste
sistema 70% do ar recirculado dentro da cabine e 30% expelido, depois de passar por
outro filtro HEPA. As CBS Classe II so adequadas para a manipulao de agentes dos grupos
de rico 2 e 3.
Existem quatro tipos de CBS da Classe II : A1, A2, B1 e B2. A diferena entre eles
est na quantidade de ar recirculado e a velocidade de captao externa do ar. Sendo que as
CBS Classe II dos tipos B possuem no mximo 30% de recirculao do ar.

CBS Classe III

Esse tipo de cabine oferece a maior proteo para o operador e o tipo indicado para
uso com agentes biolgicos do grupo de risco 4. O ar expelido da cabine passa por um sistema
de filtrao com 2 filtros HEPA e atua com presso negativa, ou seja, nenhum ar sai da cabine
a no ser pelo sistema de filtragem. A manipulao na CBS Classe III costuma ser realizada

com luvas grossas de borracha presas a mangas na parte frontal da cabine, sendo essa
totalmente vedada.
Trabalhando com cabines de segurana biolgica
Independente da Classe de segurana alguns cuidados so necessrios antes, durante e
aps a operao na Cabine de Segurana Biolgica, para a garantia da qualidade do trabalho e
segurana do meio ambiente e operador.
Fermentmetros ou Tubos de Smith - fermentmetro (acessrio de vidro para
acompanhamento de desprendimento de CO2).
2) Qual a utilidade do bico de Bunsen no laboratrio de microbiologia?
R:
Em um laboratrio de microbiologia sua principal funo de esterilizador,
proporcionando condies estreis para a manipulao de organismos.
3) Cite uma razo pelo qual o algodo apropriado s preparaes e montagens de vidraria
devem ser hidrofbicos ?
R:
Algodo hidrfobo (no absorve gua), ou seja, torna-se impossvel uma umidificao, que
como efeito pode tornar-se um local ideal para crescimento de microrganismo, que por sua vez podem
contaminar o meio de cultura. Esse algodo serve de tampo de frascos e tubos contendo meio de
cultura ou solues esterilizadas, pois funciona como um filtro para microrganismos.

4) Por que todo ar deve ser removido da autoclave antes de ser fechada a torneira?
R:
Assim, um processo de esterilizao em uma autoclave pode ser ineficiente se dentro desta
permanecerem bolsas ou reas com ar, e nessas bolsas de ar se torna regies de calor seco, que por fim
necessita de temperaturas maiores para a esterilizao dos organismo. Na esterilizao com autoclave,
um passo importantssimo a remoo de todo o ar da cmara de esterilizao.

5) Citar trs solues que devem ser esterilizadas por filtrao

R:

10

Utilizada para esterilizar materiais sensveis ao calor como: enzimas, antibiticos e

vacinas.

6) Com relao aos mtodos de esterilizao pelo calor seco e mido, citar: equipamentos
usados, os agentes esterilizantes e o binmio tempo-temperatura.
R:
Calor seco:
Flambagem: aquece-se o material, principalmente fios de platina e pinas, na chama
do bico de gs, aquecendo-os at ao rubro. Este mtodo elimina apenas as formas vegetativas
dos microrganismos, no sendo, portanto considerado um mtodo de esterilizao. Sua zona
oxidante de 1540 C.
Incinerao: a queima do material em uma chama, ou seja, um mtodo destrutivo
para os materiais, eficiente na destruio de matria orgnica e lixo hospitalar.
Estufa de ar quente: constitui-se no uso de estufas eltricas, o equipamento utilizado
neste mtodo, que a estufa ou forno de Pasteur. o mtodo mais utilizado dentre os de
esterilizao por calor seco. Este processo causa a destruio dos microrganismos
fundamentalmente por um processo de oxidao, ocorrendo uma desidratao progressiva do
ncleo das clulas. A temperatura 170 oC, por 2 horas.

Calor hmido:
Mata os micro-organismos pela desnaturao de protenas perda da estrutura
tridimensional
gua Fervente Pasteurizao - No mata todos os micro-organismos. Temperatura
100 C.
Pasteurizao de Alta Temperatura e Curto Tempo (HTST High-Temperature, Short
-Time) que mata patgenos e diminui a contagem de bactrias totais, no caso do leite
aquecido a 72 Tratamento de Temperatura

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Ultraelevada (UHT) ocorre a esterilizao do leite e sucos, possui sistema delgado em

uma cmara de vapor 140 C em menos de 1 segundo. O produto mantido por 3 segundos e
resfriado (74 C) em uma cmara de vcuo por 15 segundos.
Autoclave - Esterilizao confivel com temperaturas acima da gua fervente. Quanto
maior sua presso maior a temperatura.

7) Diferencie colnias de bactrias, fungos filamentosos e leveduras das placas utilizadas no

experimento. D as principais caractersticas da morfologia das colnias.
R:
Colnias bacterianas Possuem um aspecto liso e reluzente. Em casos de meios de
cultura diversos colnias de microrganismo diferentes, podendo separa-las ou conta-las por
meios da observao, sendo possvel distingui-las atravs de suas diferentes cores e nmeros

12

de

camadas

em

colnias

que

esto

uma

por

cima

da

outra.

Fungos filamentosos Possuem cores desbotadas e escuras. Podem ser identificados

atravs de algumas caractersticas fsicas como: Possuem hifas, que so filamentos de clulas
que formam uma rede, chamada de miclio.

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Leveduras de placas Possuem aspectos cremosos, com cores laranjadas, vermelhas,

amarelas e entre outras.

8) O que ocorreu com os controles? Justifique e tire suas concluses.

R:
As duas placas que expostas houve crescimento de cultura, formando diversas
colnias. Isso ocorreu devido a exposio a materiais que continham microrganismo vivo. No
entanto a placa que no foi exposta manteve-se intacta, sem nenhum crescimento de cultura.
Isso porque o meio de cultura no foi contato nenhuma com superfcie, ou at mesmo com o
ar, sendo assim no ocorreu nenhuma contaminao por microrganismo, mantendo total
esterilidade do meio contido na placa de petri.

14

CONCLUSO

As tcnicas de assepsia so uma srie de aes tomadas para que os meios de culturas
puros ou estreis no sejam contaminados por tipos de microrganismo importunos. Desde o
principio todos os materiais a serem usados devem estar limpos de qualquer organismo, e
durantes a manuseio preciso mant-los toda segurana para que no haja nenhuma
contaminao, sendo assim tem como companhia o bico de bunsen, flambando sempre a ala,
aps cada uso.
Na concluso dos trabalhos, feita uma nova assepsia dos instrumentos usados, toda
vidraria deve ser colocada na autoclave onde passa por presso e calor para que em todos os
utenslios acarretem uma eliminao completa de qualquer organismo, deixando-os prontos
para um prximo uso.
de extrema importncia ter conhecimento das caractersticas fisiolgicas de muitas
espcies, tornando mais fcil a identificao de cada cultura, e suas respectivas populaes,
para que quando desejar isolar um tipo saiba reconhecer com total segurana aquela que
desejada.

REFRENCIAS BIBLIOGRFICAS

LACAZ-RUIZ,R. Manual Prtico de Microbiologia Bsica. Editora USP, So Paulo/SP,2000.

NEDER,R.N. Microbiologia: Manual de laboratrio. Livraria Nobel S.A., So Paulo/SP,1992
BROCK, L. Microbiologia de Brock. 13 Edio. Artmed Editora S.A., Porto Alegre/RS,2010