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TESTE DE

SUSCEPTIBILIDADE AOS
ANTIMICROBIANOS (TSA) OU
ANTIBIOGRAMA
Prof. Jesiel Lima

EXAMES DIRETOS - MICROSCOPIA


A Fresco

Esfregao Corado
Gram, Zielh Neelsen, Fontana Tribondeau...

CULTURA SEMEADURA PRIMRIA


Diversos materiais: urina, fezes, secrees em geral,

lavado brnquico, liquor, esperma, sangue, escarro,


fragmentos de tecidos, lquidos orgnicos, etc.
Pontos importantes no processamento inicial:
Seleo correta do meio de cultura;

Adio de outro meio de cultura, quando necessrio;


Metodologia de semeadura adequada;
Temperatura, atmosfera e tempo de incubao.

CULTURA SEMEADURA PRIMRIA

Fonte: Oprustil, Zoccoli, Tobouti e Sinto. 2010.

CULTURA SEMEADURA PRIMRIA

CULTURA SEMEADURA PRIMRIA

CARACTERSTICAS COLONIAIS

IDENTIFICAO BACTERIANA
Testes Bioqumicos (produo de urease,

utilizao de citrato, produo de gs, etc).


Sistemas miniaturizados (API, Crystal)
Sistemas automatizados (MicroScan, Vitek)

Testes de Tolerncia (crescimento na presena de

NaCl a 6,5%, crescimento na presena de bile, em


temperaturas diversas, etc).

IDENTIFICAO BACTERIANA

Sistema API

Testes
Bioqumicos

Sistema Automatizado: Vitek II

Conceito: Teste para verificar o comportamento dos


microrganismos (sensibilidade ou resistncia) in vitro,
frente a diversos antimicrobianos, para a escolha do
antimicrobiano ideal.
Indicaes:
Para microrganismos isolados e identificados como
agentes causadores de infeco;
Quando o microrganismo causador da infeco
apresenta, estatisticamente, grande variabilidade no
espectro de resistncia ou tendncia mesma.
Ex: Staphylococcus aureus, Pseudomonas sp.

Dispensado: Para microrganismos cuja sensibilidade no


apresenta variao ao longo do tempo.
Ex: Neisseria meningitidis, Streptococcus pyogenes
(sensveis penicilina G)

Os resultados servem de base para:


1. Nortear a escolha do agente antimicrobiano
mais adequado;
2. Predizer a chance de sucesso de um
esquema teraputico.

O diagnstico laboratorial das doenas infecciosas comea com a


indicao clnica adequada do exame microbiolgico, o que requer
conhecimento da epidemiologia e da fisiopatologia do processo
infeccioso

Cultura + Antibiograma

Tipos de Teste:
1. Qualitativo: mtodo de difuso de discos em gar

2. Quantitativo: determinao da concentrao inibitria


mnima (CIM).
A. Diluio: em tubo ou em placa;
B. Teste E (Teste epsilomtrico).

1. Qualitativo: mtodo de difuso de discos em gar (KirbyBauer)

16 a 24h, 35 C
Suspenso bacteriana
(0,5 McFarland)

Disposi o dos discos


impregnados com
antimicrobianos
gar Mueller -Hinton

Princpio: medida do halo de inibio (mm)

1. Qualitativo: mtodo de difuso de discos em gar (KirbyBauer)

2. Quantitativo: determinao da concentrao inibitria


mnima (CIM).
CIM

A. Diluio: em tubo;
1

4 5

9 10 11 12

Inoculo
padronizado da
amostra teste
Aerobiose
~24 H - 37C

Caldo + droga em concentraes crescentes


0,0625g/mL -1024,0 g/mL

Caldo
Controle

gar

2. Quantitativo: determinao da concentrao inibitria


mnima (CIM).
A. Diluio: em placa;

Controle

Concentrao
Inibitria Mnima

Aerobiose
24h - 35C

Suspenso
bacteriana (0,5
McFarland)

Replicador de Steers

gar + Droga

0,0 g/mL

0,0625 g/mL

0,125g/mL

?
0,25g/mL

0,5g/mL

2,0g/mL

4,0g/mL

1,0g/mL

8,0g/mL

2. Quantitativo: determinao da concentrao inibitria


mnima (CIM).
B. Teste E (Teste epsilomtrico).

2. Quantitativo: determinao da concentrao inibitria


mnima (CIM).
B. Teste E (Teste epsilomtrico).
Vrios estudos demonstram que a CIM determinada pelo Etest apresenta
concordncia com os mtodos de diluio em gar ou tubo, para dierentes
antimicrobianos, em geral, com uma variao permitida de +/- 1 diluio.

2. Quantitativo: determinao da concentrao inibitria


mnima (CIM).
B. Teste E (Teste epsilomtrico).

DEMONSTRAO
E
INTERPRETAO

2. Qualitativo: mtodo de difuso de discos em gar (KirbyBauer)

Halo de
leitura
em mm

Leitura

Ausncia de halo: resistncia


Presena de halo: sensibilidade ou resistncia

2. Qualitativo: mtodo de difuso de discos em gar (KirbyBauer)

Medir os halos de cada


placa distribuda

Anotar os resultados
Consultar o CLSI

Resultado
Sensvel
Resistente
Resistncia Intermediria

Correlao entre tamanho do halo e CIM


Quando os halos de inibio so correlacionados aos valores
logartmicos da CIM, pela anlise de regresso linear, encontra-se
uma relao linear consistente demonstrando que o halo de inibio
inversamente proporcional CIM daquele antimicrobiano

Do ponto de vista clnico, o que significa dizer que uma


bactria sensvel, resistente, ou apresenta resistncia
intermediria?
Resistente: significa que a bactria no inibida pelas
concentraes de antimicrobiano alcanadas pelas doses
habituais e h grande chance de falha teraputica; a bactria
cresce na concentrao srica mxima do antimcrobiano no
paciente;
Resistncia intermediria: isolados cujas CIMs so prximas
concentrao srica mxima obtida por aquele
antimicrobiano;

Sensvel: a categoria sensvel implica que a infeco causada


pela bactria isolada pode ser adequadamente tratada com a
dosagem recomendada para aquele tipo de infeco e para
aquela espcie bacteriana, portanto o antimicrobiano pode ser
utilizado para o tratamento;

Os resultados dos TSA devem ser muito bem


interpretados pela equipe do laboratrio de microbiologia,
antes que o relatrio final seja emitido ao mdico.

Fatores que influenciam o resultado do TSA:


1. Composio qumica do meio de cultura: gar Muller-Hinton, com 4 a 6
mm de espessura ;
2. Densidade do inculo: 108 clulas/mL;
3. Temperatura: 35C a 37C;
4. Concentrao dos antimicrobianos nos discos;
5. Validade e conservao dos discos;
6. Ao e estabilidade da droga:
6.1 . Algumas drogas podem sofrer hidrlise nas primeiras horas de incubao
6.2 . Velocidade de crescimento maior que velocidade de difuso da droga

7. Tempo de incubao : 18 a 24h

Antimicrobianos
de espectro estreito
x
Antimicrobianos
de amplo espectro
Antimicrobianos de escolha
x
Antimicrobianos de reserva

Triste Realidade

Obrigado