UNIVERSIDADE DE SANTA CRUZ DO SUL UNISC

CURSO DE CINCIAS BIOLGICAS BACHARELADO

DISCIPLINA DE PRTICAS LABORATORIAIS

RELATRIO DE AULA PRTICA

RESISTNCIA GLOBULAR ERITROCITRIA

Dbora Becker
Denise Souza
Paulo Kuester
Sabine Pommerehn
Prof Alexandre Rieger

Santa Cruz do Sul, 2 de abril de 2015

REFERENCIAL TERICO
Osmose pode se definida de maneira simplificada pelo movimento de molculas
de gua atravs de uma membrana seletivamente permevel. O mecanismo de osmose
depende do potencial da gua e das concentraes dos solutos de cada lado da
membrana, isto , a gua move-se de regies de elevado potencial de gua , chamado de
meio hiperosmtico, com menor concentrao de soluto meio hipotnico, para regies
de baixo potencial de gua meio hipoosmtico e com maior concentrao de soluto
chamado meio hipertnico.
A Curva de Fragilidade Osmtica CFO tambm conhecida como: Curva de
Resistncia Globular; Prova de Resistncia Osmtica; Prova de Fragilidade Osmtica;
Curva de Hemlise; Resistncia Osmtica das Hemcias. A curva avalia a capacidade
dos glbulos vermelhos de incorporar gua em seu interior, sem que ocorra a lise da
clula. Por esse motivo se pode dizer que a resistncia est na dependncia da relao
entre volume/superfcie do glbulo. (CEACLIN, 2012).
A fragilidade osmtica das hemcias reflete a habilidade delas absorverem certa
de quantidade de gua antes de sofrerem lise, o que funo da relao entre as
medidas de volume e de superfcie das hemcias. A resistncia dos eritrcitos normais
hipotonia decorre da sua forma bicncava, que lhes permite aumentar o volume em at
70% antes da membrana atingir o limite de distenso; alcanado esse limite, h lise. Os
esfercitos apresentam menor capacidade de absorver gua at o limite de resistncia da
membrana do que hemcias normais, o que os torna suscetveis lise osmtica, portanto
o aumento da fragilidade osmtica uma caracterstica da forma esferoide. J a
diminuio da

fragilidade osmtica indica presena de eritrcitos anormalmente

achatados (leptcitos ou hemcias em alvo), no qual h uma tolerncia maior na

absoro de gua, e, portanto, maior resistncia lise osmtica (LEWIS, 2006) .
Portanto, o valor principal do teste de fragilidade osmtica detectar a presena
de hemlise em diferentes concentraes de NaCl que indicam, ou no, a presena de
anormalidades morfolgicas nos eritrcitos como, por exemplo, eliptcitos, esfercitos,
hemcias em alvo e acantcitos (MONTEIRO 2011).

RESULTADOS E DISCUSSO

Resistncia Globular Eritrocitria

Durante a realizao da prtica, realizamos clculos para a obteno de valores

referentes quantidade de gua destilada e soluo a ser introduzida nos tubos
juntamente com o sangue. Contudo, obtiveram-se os resultados do experimento, sendo
estes apresentados na tabela 1.
Tabela 1. Resultado do experimento sobre Resistncia Globular Eritrocitria. +2: sangue
opaco; +1: sangue comea a ficar menos concentrado; 0 (zero) : sangue gradualmente
translcido; -1 : sangue mais concentrado e vermelho, houve hemlise.
TUBO

mM

mOsm

3,0 mL Nacl (g
%)
0,90

Antes centrif. Depois centrif.

461,50

2538,50

+2

0,85

435,80

2564,20

+2

0,80

410,25

2589,70

+2

0,75

284,60

2615,30

+2

0,70

358,90

2641,00

+1

0,65

333,30

2666,60

+1

0,60

307,60

2692,30

+1

0,55

282,00

2717,90

+1

0,50

256,40

2743,50

+1

10

0,45

230,70

2769,20

+1

11

0,40

205,10

2794,80

12

0,35

179,40

2820,50

13

0,30

153,80

2846,10

14

0,25

128,20

2871,70

-1

Com pellet
sobrenadante
Com pellet
sobrenadante
Com pellet
sobrenadante
Com pellet
sobrenadante
Com pellet
sobrenadante
Com pellet
sobrenadante
Com pellet
sobrenadante
Com pellet
sobrenadante
Com pellet
sobrenadante
Com pellet
sobrenadante
Com pellet
sobrenadante
Com pellet
sobrenadante
Com pellet
sobrenadante
Sem pellet
sobrenadante

15

0,20

102,50

2897,40

-1

16

0,15

76,90

2923,00

-1

17

0,10

51,28

2948,70

-1

18

0,05

25,64

2974,30

-1

19

0,00

0,00

3000,00

-1

Sem pellet
sobrenadante
Sem pellet
sobrenadante
Sem pellet
sobrenadante
Sem pellet
sobrenadante
Sem pellet
sobrenadante

Fragilidade osmtica eritrocitria (FOE) pode ser definida como a resistncia

dos eritrcitos hemlise. O teste da FOE definido como sendo uma das formas de
medir a variao da resistncia dos glbulos vermelhos hemlise, quando essas clulas
eram expostas ao de solues salinas hipotnicas. A apreciao e comparao dos
resultados podem ser feitas por meio de grficos de porcentagens, pelo conceito de
incremento hemoltico ou pelos valores numricos, representando a concentrao da
soluo salina em que houve a hemlise mnima, hemlise mxima ou a fragilidade
osmtica mdia das hemcias. (SANTANA; BIRGEL; MOURO; MIRANDOLA,
2001).
Os tubos foram numerados de 1 a 19, aps foi adicionado a soluo de NaCl e
H2O destilada conforme o calculado anteriormente e aps 0,5 mm de sangue total em
EDTA separados do plasma, homogeneizou-se a soluo at se misturar por completo.
Pode-se observar aps a homogeneizao que, dentre os 19 tubos, houve uma
variao na colorao, sendo que nos tubos 1 4 a cor mostrou-se homognea e opaca.
O contedo dos tubos 5 ao 10 a cor comeava a ficar menos concentrada. No tubo 11 a
soluo tornou-se gradualmente translcida, dando a impresso que as clulas estavam
diludas no solvente, parecendo hemolisadas. Do tubo 14 em diante o sangue
apresentou-se muito concentrado, diferenciando totalmente dos demais tubos.

Figura 01. Solues antes da centrifugao, demonstrando a opacidade (tubo 1) e translucides (tubo 19)
dos dois extremos do experimento.

Aps centrifugou-se por 1 minuto a 3000 RPM, porm 3 dos 19 tubos

quebraram no processo de centrifugao, sendo eles os tubos de numerao 6, 11, 14,
mesmo assim pode-se observar a precipitao ntida do tubo 1 ao tubo 10, mostrando
que as clulas no estavam lisadas, ou seja, no houve ruptura da membrana plasmtica,
pois seu contedo no foi visualizado no sobrenadante. A partir deste ponto a soluo
com o sangue comeou a ficar mais translcido, pois as clulas submetidas s solues
hipotnicas acabam por absorver lquido ao interior da clula, sendo que a mesma incha
e acaba rompendo, causando a translucidez.
No tubo nmero 12, formou-se um certo precipitado, entretanto, o sobrenadante
ficou de cor avermelhada. A cor vermelha mostra que h hemoglobina livre no meio,
sendo que ela deveria estar dentro das hemcias.
No contedo dos tubos 13 ao 19 nenhum precipitado pde ser observado e a cor
do sobrenadante era fortemente avermelhada. Ocorreu que muita gua entrou na clula,
por meio de osmose e sua membrana no resistiu a tanto volume e as concentraes
desses tubos ultrapassaram a resistncia globular das clulas. Sendo assim, a membrana

rompeu e liberou o contedo celular no meio, deixando a soluo de cor fortemente

avermelhada.

Foto 2 e 3. Demonstra o resultado ps centrifugao dos efeitos de concentrao de NaCl sobre a

membrana eritrocitria. Foto 2 comparao entre os tubos 1 e 18 e a foto 3 compara os tubos 1 e 11.

Devido falta de tempo no foi possvel realizar a medida da absorbncia das

amostras.
CONCLUSO
Conclumos ento com este experimento que ocorre uma relao diretamente
inversa entre a gua e o Cloreto de Sdio, quando se trata de fragilidade da membrana
eritrocitria. Onde, quanto maior a concentrao de NaCl em uma soluo aquosa, as
membranas das clulas sanguneas resistiram por mais tempo, quando comparado a uma
soluo com concentrao menor de NaCl.

REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS

Ceaclin. Fragilidade Osmtica das Hemcias. Disponvel em:

<http://www.ceaclin.com.br/exames/ fragilidade_osmotica.shtm >Acesso
em: 20/03/2015.
ESTEVES, V. S. et al. Diferenas na fragilidade osmtica de eritrcitos
caninos utilizando tubos de coleta contendo fluoreto de sdio/edta
(naf/edtana2) e somente edta (edta k2). Revista da FZVA. Uruguaiana, v.14,
n.2, p. 134-139, 2007.
ELIASI. F. et al. Fragilidade osmtica eritrocitria em gatos acometidos por
hepatopatias e gatos com insuficincia renal (Cienc. Rural vol.34 no.2 Santa
Maria Mar./Apr. 2004)
LEWIS, S. M., BAIN, B. J., BATES, I. Hematologia Prtica de Dacie e Lewis. 9
ed. 45 Porto Alegre: Artmed, 2006, 147p.
MONTEIRO, MARINA C.R. ; A Hidratao Intravenosa Com soluo salina A
0,45% provoca hemlise intravascular em pacientes graves?, 2011.
SANTANA, V. A. C.; BIRGEL, E. H.; MOURO, G. B.; MIRANDOLA, R. M. S.
Fragilidade osmtica dos eritrcitos de bovinos das raas holandesa,
girolando e gir, criados no estado de So Paulo.Cincia Rural, Santa Maria,
2001.