EFERMEDADES RARAS

04/03/15
INTRODUCCIN Y GENERALIDADES
Enfermedad rara: enfermedad de baja frecuencia (de baja prevalencia).
Afecta a un nmero limitado (en Europa, menos de 1 de cada 2000
ciudadanos; en USA, 1 de cada 1500; Japn, 1 de cada 2500). Depende del
lugar de que se trate. Ejemplo: el bola es enfermedad rara en Espaa pero
no en frica.
Tipos de enfermedades raras: entre 6000-8000 enfermedades raras. En
Espaa alrededor de 3mll de personas las padecen. Hay muchas personas
con enfermedades raras.
Caractersticas generales:
-

Aparecen con baja frecuencia

Gran nmero y diversidad de desrdenes y sntomas que varan no
slo de enfermedad a enfermedad, tb dentro de la misma
enfermedad.
La misma condicin puede tener manifestaciones clnicas diferentes
de una persona a otra; y hay gran diversidad de subtipos de la misma
enfermedad.
La mayor parte son muy invalidantes y crnicas en muchos casos, lo
cual supone un consumo de recursos para los stas de salud
importante. Adems, pueden generar minusvalas mltiples en una
misma persona (por ejemplo, si la enfermedad est relacionada con
el DNA).

Origen:
-

El 80% son de causa gentica (monognicas y polignicas)

20% cnceres raros (todos los cnceres infantiles son enfermedades
raras), alergias, enfermedades infecciosas, intoxicaciones (aceite de
colza mezclado con aceites de combustibles, ver), auto-inmunes y
causas desconocidas.

Caractersticas:
-

Enfermedades crnicas graves la mayor parte de ellas.

Manifestacin en el nacimiento, durante infancia o edad adulta. La
mayora se diagnostica en nacimiento o durante infancia.
Muchas ER no tiene tto efectivo (se refiere a etiolgico, sobre la causa
de la enfermedad; si es de base gentica es muy difcil tratarlo
etiolgicamente; y muchas veces se desconoce la fisiopatologa de la
enfermedad). Por ello, la mayora de tto son sintomticos.
Muchas ER no disponen de unas nociones bsicas apropiadas sobre el
cuidado. Cada vez se sabe ms, gracias a las asociaciones formadas
de las respectivas ER. En muchos casos se necesitan de trabajadores
sociales, entre otros, no slo de mdicos

Muchas con peligro de muerte.

Son, en general, crnicas y degenerativas, el 65% graves e invalidantes. Se

caracterizan por:
-

Comienzo precoz en la vida. Importante diagnosticarlo pronto.

Dolores crnicos
Dficit motor, sensorial o intelectual
Casi el 50% de pronstico vital en juego.

Curiosidades: la ER ms rara es la de Refsum (en su forma infantil) y las de

mayor prevalencia es la espina bfida y sndrome de Down.
Clculo de prevalencia: ver diapositiva
Medicamento hurfano: aquellos que la industria farmacutica no va a
producir porque no es negocio. Son medicamentos que sirven para curar o
mejorar el pronstico de la enfermedad pero no se comercializa por no ser
rentables econmicamente para quien lo fabrica. En la UE hay unos 80
frmacos reconocidos de este tipo que curan enfermedades. En Espaa slo
hay 40 disponibles de estos 80. Desde la Comisin Europea y EMEA hay
algunos incentivos para favorecer la disponibilidad de estos medicamentos.
Marco sociolgico:
-

Nmero limitado de pacientes

Pacientes dispersos geogrficamente
Pacientes sin diagnstico (sin gen candidato, sin test diagnstico,...).
Hay ER que se han descrito recientemente o an no, con lo cual, si el
mdico no conoce no puede diagnosticarlo.
Escasez de conocimiento.

Principales problemas de quienes padecen una ER:

-

Falta acceso al diagnstico

Falta a la informacin y de conocimiento cientfico.
Problemas de integracin social, laboral y escolar.
Falta de apropiada calidad del cuidado de salud.
Alto coste de medicamentos, si existen; y del cuidado.

Problemas institucionales:
-

Falta de polticas sanitarias especficas para ER

Dificultades en la asistencia sanitaria (falta especializacin,
diagnstico, ttos inadecuados, prdida confianza en el sta sanitario).
Investigacin escasa y dispersa en los laboratorios de la UE.

Objetivos de la UE:
-

Mejorar reconocimiento
Etc

Estrategia de ER en el sistema nacional de salud: diapo

EL CIBERER: diapo

09/03/15
DEFICIT ALFA-1 ANTITRIPSINA
Orgenes:
Descrito en 1963 por Laurell y Erikson. Desarrollaron una tcnicapara hacer
proteinogramas en papel para aplicarlo en el diagnstico. Pusieron a punto
una tcnica y recibieron alrededor de 1500 muestras de diferentes pases.
De ellas, en 5 haba en una seccin del proteinograma una prdida de una
banda. Miraron la historia clnica de esos 5 pacientes y vieron que se
caracterizaban por el desarrollo de un enfisema temprano (en edad, 35-40
aos) y adems tenan antecedentes en miembros de su familia. Por tanto,
establecieron las ppales caractersticas clnicas de la enfermedad (ver pdf).
Alfa-1 antitripsina:

Inhibidor serin-proteasas
Se sintetiza ppalemente en hepatocitos. Inhibe la elastasa secretada
por los neutrfilos. Si la elastasa llega al pulmn, produce varios
problemas. El dficit de la alfa se produce porque se acumula en el
hepatocito dando lugar a inflamacin crnica (puede producir cirrosis
y cncer heptico) y adems al no llegar al pulmn, la elastasa no es
inhibida, dando lugar a los distintos problemas (enfisema).
Inhibidor de proteasas ms abundante
Reactante de fase aguda. Tras proceso inflamatorio, infeccioso y
tumoral, sus niveles aumentan hasta 5 veces, lo cual hace que a la
hora del diagnstico suponga un problema, porque hay retraso de
diagnstico al no ser detectado como su forma normal, se confunde
con proceso inflamatorio, tumoral o infeccioso.

Gentica y biologa:

Herencia autosmica co-dominante

Muy polimrfico: + de 100 alelos identificados
14q32.1: proteasa inhibitor locus (SERPIN)
Alelos PI: M (normal) S y Z (alelos deficientes. El Z es el de peor
pronstico (alelos ZZ)

Plegamiento y actividad:
Cuando estn las mutaciones, se van produciendo polmeros de molculas
de alfa-1 que quedan retenidos en el hepatocito e impide que salga al
exterior. Problema en el hgado por acumulacin y en pulmn por no llegar e
inhibir la elastasa.

Grfica niveles alfa y tipos Pi:

Mayores niveles de tipo MM, menor de MS y solapamiento elevado con MM.
Conforme se elevan las Z, aumenta el riesgo de enfermedad pulmonar y/o
heptica. Los ZZ, entre el 80-100% con este fenotipo acaba desarrollando la
enfermedad pulmonar/heptica. La interaccin entre medio ambiente y el
gen es elevado, pues con un fenotipo ZZ y un fumador, la enfermedad se
dispara. Los null-null son pacientes que no expresan la protena. Por debajo
de unos 100mg en serum, hay problema igualmente, independiente del
fenotipo.
Origen de la mutacin:
Parece, segn estudios poblacionales, que todo empez en la pennsula
escandinava. A partir de las difernretes migraciones de los vikingos, fueron
transmitiendo la mutacin.
Epidemiologa:

Problema del infradiagnstico, comn en las enfermedades raras.

Sin diferencia de sexo
En Espaa hay 7mll alelos S, 1mll de Z, etc. slo hay diagnosticados
un 0.10% de los casos esperados.

Diagnstico: recomendaciones, en casos de

-

EPOC
Adultos broquiectasias
Familiares cosanguneos de pacientes diagnosticados
Etc...

Modo de diagnstico: si niveles normales, muy probable que no haya dficit;

si son inferiores a valor de referencia, se pide un fenotipo (proteinograma).
Si son valores menores del 35% de normalidad y el fenotipo es ZZ, esta
claro. Si salen otros fenotipos se determina el genotipo. Si estan por arriba
del 35%, si el fenotipo corresponde a uno de los mayoritarios, pues ya esta,
si no son esos se hace el genotipo.
Tratamiento:
-

Similar a la EPOC: broncodilatadores y esteroides

Administracin de AAT exgena: intravenosa, inhalacin (hay ensayos
clnicos en la actualidad) o terapias para inhibir la elastasa
Nuevas terapias: gnica

PROYECTOS CON DAAT

TERAPIA GNICA DAAT: experimento realizado por el invitado
-

Disearon herramientas para terapia gnica: transferir genes a las

clulas (ratones) utilizando lpidos y polmeros catinicos, evitando

usas virus para no introducir genoma vrico que no se sabe dnde se

va a introducir.
A partir de un plsmido (pTG7101, el ms eficiente) se hicieron una
serie de modificaciones eliminando la mayor cantidad posible de DNA
extrao para introducirlos en las clulas.
En las distintas curvas dosis-respuesta se estableci la dosis de
plsmido ptima para el tratamiento.
En ratones funcion muy bien. Se est intentando con cerdos.
Otro sistema: introducir el plsmido libre de liposomas y polmeros, lo
que se conoce como inyeccin hidrodinmica.

Estrs oxidativo y DAAT: otro proyecto

Si la balanza es favorable para ROS, se produce estrs oxidativo y los
radiales libres se unirn a lpidos, DNA, protenas, etc., oxidndolas y dando
lugar a la base del estrs oxidativo.
No obstante, algo de estrs oxidativo es necesario en nuestras clulas, para
determinados procesos, como por ejemplo, la defensa de algunas
infecciones bacterianas.
Hay diferentes fuentes de estrs oxidativo
inflamatorios, polucin, humo de tabaco, etc.)

(mitocondria,

procesos

El estrs oxidativo est implicado en muchas enfermedades, pero en el AAT

todava no estaba descrito. Se saba que causaba problemas hepticos y
pulmonares. En su proyecto de investigacin se pidi informacin de
pacientes diagnosticados de DAAT (problemas de infradiagnstico y gran
variabilidad en la gravedad del enfisema). Contaban con evidencias (pdf).
Vieron un artculo de un grupo chileno que metan elastasa en el pulmn del
hmster y de la rata. El hmster desarrollaba un enfisema muy severo pero
la rata no. Se plantearon que si puede que est pasando lo mismo en los
pacientes, si gente desarrolla enfisema ms grave y otros menos,
independientemente del fenotipo. Podra ser por el estrs oxidativo.
Pacientes con un fenotipo tienen mayor estrs oxidativo que otros con el
mismo fenotipo? Haba diferente comportamiento en el ciclo de glutatin
entre la rata y el hsmter.
Por tanto, colaborando con diferentes servicios de pediatra en Valencia,
obtuvieron muestras de pacientes nios diagnosticados con DAAT, en ppio
sanos (criterios de inclusin) y excluyeron otros con diferentes
caractersticas que aumentan o modifican el estrs oxidativo (pdf). En la
tabla se ven las pruebas y caractersticas que confirman que son nios
clnicamente normales y que lo que se observa luego no es debido a
diferencias.
Se obtuvo el perfil de estrs oxidativo: GSSG/GSH, 8-OHdG (marcador
oxidacin del DNA), MDA, carbonilacin proteica y protenas oxidadas.

Los niveles de glutatin total y el reducido disminuan conforme

aumentaba el riesgo de la enfermedad. En el glutation oxidado no se
ven diferencias significativas; y el cociente GSSG/GSH aumenta
conforme aumenta el riesgo. Si esto es as, las protenas oxidadas
deberan estar aumentadas:
El MDA aumenta con el riesgo mayor, las proteinas oxidadas tmb y el
8-OHdG tambin.
La glutatin reductasa permanece igual, la catalasa disminuye, etc
(pdf).
Puesto que la catalasa disminuye, cabe esperar que el agua
oxigenada aumentara, y es lo que ocurri

Conclusin: la acumulacin de agua oxigenada (por disminucin/lentitud

actividad de catalasa, o superoxido dismutasa aumentada/rpida), los bajos
niveles de glutation reducido hace que se acumule marcadores de estrs
oxidativo. El agua oxigenada, adems de poder producir estrs oxidativo,
esta involucrada en dif procesos de sealizacin celular, lo cual tmb podra
estar afectando a rutas celulares.
Otro estudio: De esos nios se obtuvo tambin el aire exhalado que
mediante un sistema de condensado se puede medir determinadas
sustancias. Vieron la 8-OHdG CAE (marcador de estrs oxidativo) y vieron en
los nios que aumenta, pero en adultos no ocurre (hay ms factores de
confusin: alcohol, tabaco, etc).
Otro proyecto: el estrs oxidativo est relacionado con el acortamiento de
los telmeros.
Por tanto, es posible que pacientes con mayor riesgo de DAAT podra
producir acortamiento de los telmeros. En diferentes publicaciones sobre
EPOC y telmeros se ve esta relacin, con DAAT?
Hiptesis: a mayor riesgo (alelos Z), mayor estrs oxidativo y mayor
acortamiento de telmeros.
La expresin del mRNA de la telomerasa disminuye con el aumento de
riesgo DAAT. Tambin la actividad telomerasa disminuye conforme aumenta
el riesgo (aparicin de alelos Z). Al medir la longitud de los telmeros tmb
se observa cierta disminucin conforme aumenta el riesgo.
Otro proyecto: anlisis microRNAs circulantes en los pacientes, para ver si
sirve como marcador pronstico de la enfermedad. Estos microRNAs
provienen de la destruccin heptica y pulmonar
Hiptesis: si en los pacientes con ms riesgo y riesgo intermedio hay dao
por oxidacin, es posible que haya diferencia a nivel de microRNAs entre
stos y los pacientes control.
El anlisis de componentes ppales permite establecer una serie de grupos,
an con un grupo bajo de pacientes. En el Hillmap? Hay una serie de
microRNA (marcadores) que estn diferencialmente expresados con

respecto al resto de pacientes. Se quiere hacer el mismo estudio en adultos

(pues no se va a esperar a que los nios crezcan) con DAAT y enfermedad
heptica pulmonar y sin DAAT con enfermedad heptica y pulmonar y
comparar.
10/03/15
MODELOS INVERTEBRADOS PARA EL ESTUDIO DE ENFERMEDADES
RARAS
Qu es una ER: enfermedad de baja prevalencia, hay muchas y cada una de
ellas tiene pocos pacientes. La mayora son de origen gentico (puede ser
til usar modelos ms baratos como rata/ratn, peces, y otros ms
asequibles, como invertebrados).
Estrategia SNS en EERR: investigacin: importante el desarrollo de modelos
celulares y animales distintos al ratn.
Los 2 ppales invertebrados que hay en estudios fisiopatolgicos son C.
elegans y G. melanogaster.
C. elegans:

Tiene exactamente 959 clulas somticas.

Dentro de la simplicidad, es lo bastante complejo como para poder
estudiar fisiopatologas (tiene epidermis, ap. digestivo, etc).
Ciclo vital de 3 das, lo cual permite tener muchas generaciones en
poco tiempo (importante si se hace gentica)
Linaje celular invariante, importante para estudiar desarrollo
embrionario
Interferencia de ARN (ARNi) por plsmidos en la dieta. Se puede
poner al gusano un ARN complementario al ARN de uno de sus genes,
apagando su expresin. Estos gusanos pueden comer determinadas
bacterias que portan este ARNi y es capaz deincorporarlo y apagar su
ARN.

D. melanogaster:

Modelo de estudio en gentica, gentica depoblaciones y evolucin,

para embriologa, comportamiento, neurologa y adems, se esta
extendiendo para estudiar caractersticas patolgicas (por ejemplo,
cncer).
Ciclo vital de 10 das, lo cual favorece para hacer gentica.
Cierta complejidad biolgica y muchos procesos celulares y
moleculares son comparables a sus equivalentes vertebrados.
Aporta versatilidad experimental por la facilidad de trabajo y tcnicas.
El 70% de los genes responsables de una ER en humanos tiene un
gen equivalente (ortlogo) en Drosophila.

Repaso histrico con melanogaster:

Thomas Hunt Morgan empez a trabajar con ella en 1907. Demostr

que las leyes de Mendel eran vlidas en animales.
El primer mutante encontrado fue white (w). Vieron que segregaba
con el cromosoma X, por tanto fue el primer mutante que se pudo
asignar a un cromosoma (en este caso el X).
Sturtevant (estudiante de Hunt) elabora el primer mapa gentico,
atendiendo a la probabilidad de recombinacin segn las distancias.
As se pudo ordenar los genes en los cromosomas.
Morgan descubri el efecto mutagnico de los rayos X, lo cual
contribuy a una herramienta para crear mutantes.
Genes hometicos: una parte del cuerpo se transforma en otra
diferente. Hay una serie de mecanismos celulares y del desarrollo
temprano comunes entre los vertebrados y la mosca.
Sistema inmunitario: vertebrados e invertebrados compartimos
mecanismos de inmunidad innata.

Ventajas experimentales:
1. Herramienta 1: Cromosomas equilibradores (balancer). Tambin estn
en C. elegans. Nos permiten crear cepas estables con mutaciones
severas o letales y simplifican la gentica. Ejemplo: si tenemos una
mutacin letal, si est en homocigosis el modelo de experimentacin
(ejemplo, ratones), muere. No interesa esto porque al cabo de las
generaciones, nuestra mutacin se pierde. Con esta tcnica se puede
mantener el gen letal (se pone el gen letal en distintas zonas de los
dos alelos, ver).
Hay trucos para poder ver las mutaciones a la lupa, sin necesidad de
acudir a genotipados (mediante marcas visuales, como genes).
2. Herramienta 2: Transgnicos. El elemento P es un transposn natural
de Drosophila, que se usa como vector de transformacin. Trucos
para hacer seleccin de cepas que han incorporado el elemento P con
la mutacin de inters (parecido a la incorporacin de genes
mediante plsmidos en bacterias).
Proceso barato, rpido (pocas generaciones para seleccionar
transformantes y tener cepas estables), alta eficiencia (10-20% de los
inyectados producen progenie transformada).
Los elementos P se usan para introducir cosas de inters y como
mutgeno.
3. Tcnica 1: clones somticos por recombinacin mittica. Permite
evitar la letalidad del organismo al crear un grupo de clulas
mutantes que no afectan a la vitalidad del organismo y se pueden
visualizar mediante tcnicas de seleccin (ejemplo, GFP).
4. Tcnica 2: el sistema GAL4-UAS para expresin dirigida.
Para
expresar el gen que queramos y en el lugar que queramos. Hay
muchos genes que son especficos de un rgano y no se pueden

expresaren otroslugares. Por ejemplo, el Glass se expresa slo en el

ojo. Si queremos expresar un gen que quiera en el ojo, se le puede
poner el promotor de glass delante de nuestro gen, as se expresar
en el ojo al realizar una inyeccin transgnica. Tambin se puede
hacer en dos pasos, creando dos transgenes (ejemplo, con GAL4,
protena de levadura que es un factor de transcripcin que se une a
su promotor (UAS). Al poner la GAL delante del promotor de Glass y al
lado UAS y seguido el gen de inters, bla bla ver).
Caso prctico (elav-Gal4 UAS-ParkDN): moscas que expresan Gal4 en
todas las neuronas (SNC y perifrico) con un gen mutante dominante
de parkina. Aquellas que incorporan estos genes, no vuelan.
Caso prctico (dpr-Gal4 UAS-mitoGFP): para ver cmo se mueven las
mitocondrias. El dpr se expresa en nervios perifricos y se le ha
metido una forma de la mitocondria GFP, de manera que lo que se
observa en verde son mitocondrias y adems se puede seguir su
movimiento, pues la mosca est viva.
5. Tcnica 3: rastreos genmicos. Para identificar genes implicados en
un proceso determinado. Ejemplo:
Rastreo
de
intensificadores
o
supresores:
estudio
de
neurodegeneracin (neuronas en el ojo de la mosca). Atendiendo al
fenotipo del ojo (rugosidad), tenemos un fenotipo normal (no rugoso),
otro moderado (algo rugoso) y otro severo (muy rugoso).
La funcin neural esta muy bien conservada, no slo en Drosophila,
sino en ms invertebrados. Por ello es un buen modelo para el estudio
de enfermedades neurodegenerativas, tanto del SNC como del
perifrico.
NEUROPATA DE CHARCOT-MARIE-TOOTH
Afecta a los nervios de extremidades, con prdida de masa muscular,
deformacin en pies y manos y ms tardamente con fallos en esqueleto
debido al fallo muscular.
Hay formas de la enfermedad desmielizantes (CMT1: desmielinizante) y
luego el axn muere y otras formas mielinizadas (CMT2: axonal) pero que el
axn muere. Ello provoca la prdida del nervio. Adems, hay formas
intermedias de CMT y dentro de todas estas formas, hay varios genes
mutados que pueden causar la enfermedad.
En Drosophila hay un buen candidato equivalente al gen GDAP1 humano
(uno de los posibles genes que su mutacin afecta a la enfermedad). Han
trabajado
con
este
gen
en
la
mosca,
sobreexpresndolo
o
infraexpresndolo/bloquendolo (con RNA interferencia) y viendo su efecto
en la morfologa de axones en el ojo de la mosca. Al expresar el gen
humano en el ojo de la mosca, la funcin se reestableca, lo cual confirma
que tienen la misma funcin.
Importante: Saber por qu Drosophila es un buen modelo de estudio.

11/03/15
ENFERMEDAD DE LAFORA Carlos Rom
1. Qu tiene de raro la enfermedad de Lafora?
En 1911 Lafora se encontr con un adolescente que muri y haba sufrido
alguna serie de epilepsias. Post-mortem vio que neuronas suyas tenan
unos acmulos a los que llam cuerpos amiloides (se sabe que es
glucogeno). Se pregunt si era esto la causa de esa serie de epilepsia.
Hoy en da an hay dudas sobre si estos cuerpos son los causantes o no.
Caractersticas:
-

Se llama epilepsia mioclnica progresiva (EPM) de tipo Lafora.

Prevalencia 1/106 habitantes.
Cursa con una serie de crisis epilpticas, mioclonas (sacudidas
descontroladas), ataxia, alucinaciones visuales, demencia.
Debut en la adolescencia. Tras 10 aos de la primera crisis mueren.
Acumulacin de cuerpos de Lafora (los cuerpos amiloides que llam el
propio Lafora), vistos tras tincin especfica de los cuerpos. Si
aparecen, est claro el diagnstico (por biopsia de piel)
Neurodegeneracin progresiva y rpida.
Tambin se acumula en msculo y en piel, hgado, corazn, etc., no
solo en las neuronas. Los cuerpos se acumulan dentro de las clulas
por todo el citoplasma, de tipo filamentoso.

2. Causas
Primer sospechoso: Laforina
-

Protena familia fosfatasas de tirosina. Crtico en sealizacin

intracelular. Hay 4 tipos y dentro de ellos varios subtipos, algunos de
ellos desfosforilan no solo tirosina. Laforina entra dentro del subgrupo
llamado atpicas.
Laforina tiene un ncleo cataltico conservado pero con dominios
accesorios, entre ellos un dominio unido a carbohidratos nico.
desfosforila carbohidratos complejos (glucgeno, almidn, etc) que no
hace otra fosfatasa.
El glucgeno en estado normal tiene cierta solubilidad. Va
incorporando fosfato y Laforina le va quitando ese fosfato. Cuando no
est la Laforina, el fosfato impide la ramificacin, siendo ms
insoluble el glucgeno y formndose esos cuerpos. Pero no slo
queda ah, pues al ver si el gen de Laforina estaba mutado en esos
casos, no en todos estaban mutados.

Segundo sospechoso: malina

-

Con dominios NHL para interaccin con otras protenas

Es una E3 ubiquitina ligasa (importante para la degradacin de
protenas, al unirse a stas las molculas de Ub)

Ubiquitinacin: proceso secuencial que depende de 3 tipos de

enzimas. Es un proceso altamente selectivo, pues en cada paso
intervienen ms enzimas porlo que es cada vez ms especfico. segn
cmo se pegue la Ub a las enzimas, la funcin final ser distinta.

Laforina y malina forman un complejo funcional, interaccionan fsicamente.

Laforina recluta sustratos que son ubiquitinados por malina. A veces malina
ubiquitina a Laforina y a s misma. Laforina hace que los sustratos se
acerquen a malina para que la ubiquitine, de esta forma malina puede
ubiquitinar a ms sustratos, de forma que son llevados al proteasoma o
autofagia para ser degradados.
La glucgeno sintasa estn reguladas por otras protenas. Se vio que
Laforina y malina juntas degradaban protenas que conducen a la sntesis de
glucgeno (glucgeno sintasa, por ejemplo). Si no hay Laforina y/o malina,
el glucgeno no se degrada y ste se acumula dando lugar a esos cuerpos.
La interaccin entre laforina y malina se ve facilitada cuando hay activacin
de AMPK (quinasa). Se comprob que laforina era fosforilada en un aa
concreto (Ser25), haciendo ms estable el complejo lafora-malina, lo cual
hace que funcione mejor. Recordar que si no hay laforina, el glucgeno se
acumula.
3. Filogenia molecular como estrategia en el estudio de ER
Est conservado en la evolucin el complejo laforina-malina? Muchos
organismos quetienen glucgeno o algn carbohidrato complejo tiene
laforina en su organismo. Por ello, se est diciendo que su funcin es
ancestral. La pregunta es si esos mismos organismos tambin tiene malina,
y si pueden tener la enfermedad de Lafora. Se vio que malina solo est en
vertebrados, como complejo laforina-malina (laforina en otros organismos),
por tanto la enfermedad slo se da en vertebrados.
Malina est relacionada filogenticamente con TRIM32, que es otra E3
ubiquitina ligasa y esta mutada en otra enfermedad rara (distrofia muscular
Limb-Girdle). Por ello, intentaron averiguar si a nivel funcional tambin se
parecan, no slo en la secuencia. Lo que vieron es que hay algunas
mutaciones en malina en una regin en concreto que daba enfermedad
tambin en el caso de TRIM32. Por tanto, estas dos protenas estn
emparentadas.
Adems, se vio que malina tambin regulaba la actuacin de micro-RNAs
(silenciamiento de genes).
4. Mucho ms que glucgeno
Se empez a ver que en los cuerpos no solo haban acmulos de glucgeno,
tmb haban sustratos con ubiquitina, chaperonas, etc. Se empez a pensar
que tmb se podra acumular protenas mal plegadas. Vieron que haba

estrs de retculo endoplsmico. Si no funciona bien el RE, el plegamiento

de protenas se ve afectado.
Tambin se pens si la ruta de autofagia tambin estaba afectada, ya que
hay acmulo de sustancias. Hay varios tipos de autofagia, una de ellas
mediada por chaperonas. La ubiquitina tmb tiene mucho que ver con este
proceso.
5. Tcnicas y modelos experimentales de enfermedad de Lafora
Hay ratones que tienen o bien mutada laforina o bien la malina (ratones LD).
Hay cultivos celulares que provienen de enfermos: fibroblastos humanos LD.
Anlisis protemico en ER: electroforesis bi-dimensional (2D-DIGE). se
analiz la expresin en tejidos de ratones KO para laforina y para malina
(tres grupos: uno normal, uno sin laforina y otro sin malina).
El estrs oxidativo tambin est involucrado. Al hacer estudios se vio que
haba alterada una protena de membrana de mitocondrias. La disfuncin
mitocondrial podra tener que ver con los fallos en la autofagia, lo cual
puede afectar a la acumulacin de glucgeno y otras sustancias. Por otro
lado, la autofagia se incrementa cuando hay aumento de estrs oxidativo. Si
hay aumento de radicales libres y falla la autofagia o la ruta de proteosoma,
vamos mal apaados.
6. La enfermedad de Lafora. HOY
Se ha resuelto la estructura de laforina.
12/03/15
ESTRS OXIDATIVO EN EL SNDROME DE DOWN
Caractersticas generales:
Es de las menos raras. Lo primero que se ve es el fenotipo de la persona
que lo padece, es fcil de reconocerlos debido a las caractersticas que
poseen.
Es la ppal causa congnita de retraso mental de todas las de origen
conocido. La causa gentica es la presencia de un cromosoma extra en el
par 21 (trisoma 21).
La prevalencia es de entre 1-5 casos cada 10000 habitantes. En los ltimos
aos ha ido disminuyendo debido a la interrupcin del embarazo al
detectarse.
Tipo de herencia espordica. No es hereditaria. La edad de inicio es desde
antes de nacer.
Historia:

Primer dato que se obtiene es un craneo sajn del siglo VII con
malformaciones compatibles con un varn con este sndrome
En el XVIII, en un cuadro aparece que uno de los nios tiene unos
rasgos fsicos tpicos de esta enfermedad.
El primer documento escrito es en 1838, se describe un sndrome
como cretinismo o idiocia furfurcea. En 1866 se describe
algunos de los raasgos fsicos en otro texto. En ese mismo ao, John
Langdon Haydon Down tmb describe diferentes observaciones en un
grupo tnico de retrasados mentales. Ya es en 1932 cuando se
empieza a hablar de la etiologa cromosmica pero fue en 1959
cuando ya se confirma la aberracin cromosmica causante del
fenotipo especial. An as se segua llamando a estas personas
monglicos, por la similitud con las personas de esta raza (ya los
llamaba as John H Down).

Adelanto en investigacin: Hace menos de un siglo, la esperanza de vida era

de 9 aos. En la dcada de los 80 pasa a 40 aos. Casi en el siglo XXI pasa a
60-64 aos.
Mayor mortalidad en los primeros aos de vida (infecciones respiratorias,
por su sta inmune disminuido; mayor riesgo de leucemia o malformaciones
congnitas). Al llegar a la edad adulta, estos pacientes tienen menor
incidencia de padecer cncer que las personas sin laenfermedad.
Alteraciones genticas:

Trisoma cromosoma 21 en todas las clulas (presencia en una copia

extra o parte del cromosoma 21.

Tipos: 95% es completa, el 1% es mosaicismo; 4% traslocacin

Trisoma Libre o completa: todas las clulas con 47 cromosomas
Causas multifactoriales: entre todas, como el envejecimiento del material
gentico, la ms significativa es la edad de la madre (slo en 15% de los
casos el error se produce en el espermatozoide). Esta trisoma es
compatiblecon la vida, en la mayora de trisomas en otroscromosomas, no
sera compatible con la vida, por eso no los vemos.
Mosaicismo:
Es a partir de la segunda divisin cuando hay un error. A partir de esas
clulas, aparecern clulas con 46 cromosomas y otras con 47. El fenotipo y
las alteraciones son menos agresivas que en la trisoma completa.
Depender de la cantidad de clulas o lnea celular afectada.
Traslocacin:
El nmero de cromosomas es normal pero el cromosoma 21 o parte de l se
pega a otro cromosoma, normalmente al 14. Lo que est repetido es la
informacin gentica. Puede ocurrir que alguno de los progenitores lleve la

traslocacin pero no lo sepa. El hijo que herede latraslocacin del

cromosoma 14 y slo uno 21 ser portador sano y no lo sabr. El caso en
que el hijo tenga el 21 de la madre y el 14 con traslocacin del padre...
Causas:
-

Familias con miembros con algunos caracteres aislados del sndrome

Enfermedades infecciosas, crisis morales, psquicas durante primeros
meses de gestacin
La edad de la madre. Esta es la causa ms probable.

El cromosoma 21: se sabe que se trata de este cromosoma pero no se sabe

cmo se produce.
-

Se dice que es por el efecto de gen-dosis. A mayor expresin, mayor

nmero de protenas, se ven alteradas varias vas metablicas lo cual
induciralteraciones en desarrollo de rganos y tejidos. El rgano
quems interesa es el cerebro (SNC).
No existe anomala en ningn gen sino la presencia de copias de
genes normales (mayor cantidad).
El crom21 es pequeo (ocupa slo el 1.5% del genoma humano), por
ello de la altaviabilidad de la trisoma en este cromosoma.
Genes en el cromosoma 21: 288500 pb en el brazo corto y 33,5 mll
en el largo. En total son casi 300 genes (225). Los genes del brazo
corto, su triplicacin no afecta a la produccin de los efectos del SD.
Los del brazo largo s afecta. En el brazo largo hay genes
relacionadoscon produccin de E en mitocondrias, los que
metabolismo de las especies reactivas del O2, procesamiento de RNA,
va del proteasoma, metabolismo monocarbonado y metilacin, etc.,
muy variado. De todos lo genes codificados en el crom21, hay varios
(110-150) que se expresan en el SNC.
El crom22 codifica casi 600 genes y el 21 sobre la mitd, aunque sean
casi del mismo tamao. Por eso se dice que el crom21 tiene como un
desierto, por ello que sea ms viable este error en este cromosoma
que en otro.
Lo que nos interesa ms en esta clase es sobre los Genes del crom21
que intervienen en produccin de E en mitocondrias, los que
metabolismo de las especies reactivas del O2.

Modelos animales:
-

Zona crtica responsable del fenotipo SD en humanos: lugar donde

est el gen regulador de la calcidiurina? (DYRK1A)
Se vio que haba una zona del cromo16 del ratn con una regin
similar a la regin crtica del SD. Se invent un ratn transgnico
donde se triplica slo una parte del crom16, la que corresponde a la
parte crtica en humanos
Los ratones Ts65Dn (uno de los trasngnicos) tienen caracterrsticas
muy similares a los humanos con SD. Pero en los ratones no aparecen
cardiopatas congnitas (tpico en SD). Por tanto se intenta mejorar

un ratn transgnico. Cogieron un crom21 humano y se introduce en

el genoma del ratn. A partir deah se genera un ratn que expresa
genes humanos en el crom21. Seproducen alteraciones cognitivas,
cardacas, alteracin en las neuronas, en el desarrollo. Pero estamos
en un caso de mosaicismo (no todas las clulas han incorporado el
crom21). Es el modelo ms aproximado que sepuede usar para el
estudio de SD (ratones trasncromosmicos)
Diagnstico prenatal del SD:
-

Primera prueba es con sangre. Se miden diferentes parmetros. Pero

hay muchos falsos positivos. Y apenas falsos negativos.
Al detectar un positivo se debe confirmar (porque hay falsos
positivos). Hay una serie de pruebas, la ms comn es la
amniocentesis (menos tasa de abortos espontneas). Hay otra,
biopsia de vellosidades corinicas (se puede hacer ms pronto); y hay
otra llamada corocentesis (sangre del cordn, mayor tasa de abortos
espontneos).
Si no se diagnostica prenatalmente, se puede confirmar sacando
sangre del feto y haciendo cariotipo.
Tambin en la ecografa miden el pliegue de la piel en el cuello
(muchos falsos positivos)

Rasgos fenotpicos:
Hay ms de 100 rasgos que pueden aparecer, pero no todos los va a tener
todas las personas ni en la misma probabilidad. S que hay 3 cosas comunes
(que no se detectan en el momento del nacimiento)
-

Retraso mental
Retraso en crecimiento
Hipotona muscular (flacidez casi desde el momento del nacimiento)

Otros signos fisiolgicos:

-

Baja estatura
Cuello corto
Pliegue en el cuello
Cara plana, nariz poco prominente, narinas anchas y hacia arriba
Apertura de prpado hacia arriba y hacia fuera
Lacrimales ms estrecho (tendencia a obstruccin)
Manchas de Brushfield alrededor del iris, blanquecinas
Poco pelo y fino
Boca, maxilar y dientes pequeos
Abdomen flcido (susceptible de hernias)
Tronco recto
Testculos pequeos en nios y lvido disminuida
Labios vaginales de gran tamao, cltoris grande y mamas
desarrolladas tarde, la lvido no esta disminuida y son capaces de
concebir.
Manos y dedos pequeas. nico pliegue palmar. Tambin de los pies.

Alteraciones patolgicas:
-

Alteraciones cardiovasculares. Ms del 40% de los casos padecen

cardiopata congnita. La ms comn es la comunicacin
interventricular. Tto quirrgico, farmacolgico o ambos.
Hematolgicas: mayorriesgo de leucemias en nios. Si se diagnostica
pronto, la mayora es curable
Endocrinolgicas: enfermedad tiroideas
Respiratorias: infecciones leves que les lleva a desarrollar cuadro
grave (sta inmune dbil, etc).
Oftalmolgicas: cataratas en nios, queratocono en la pubertad
Auditiva: disminucin
Intestinal: estenosis duodenal
Dentales
Neurolgicas: convulsiones, sndrome de West, alzheimer temprano

Por todo ello, aparece envejecimiento prematuro. Se considera progeria.

Alteraciones cerebrales:
-

No por tener mayor nmero de rasgos fenotpicos tendr mayor

retraso mental. La intensidad de la alteracin cerebral no guarda
relacin con la de otros rganos.
Menor n de neuronas y de su funcionamiento
Tamao cerebelo pequeo e hipoplsico.
Importante el aprendizaje desde el principio, pues pueden hacer lo
mismo que el resto de personas, aunque ms lento.

ESTRS OXIDATIVO Y SD
Definicin de
antioxidantes.

estrs

oxidativo:

ms

radicales

libres

que

sistemas

Se pueden generar en la mitocondria. Entre el 1-2% del O2 que atraviesa la

mito acaba formando radicales libres, que luego reacciona con compuestos
con hierro formando radicales hidroxilo. Tambin en sistemas enzimticos se
pueden producir radicales libres.
Si no son neutralizados atacarn a todos los componentes celulares del
organismo (glcidos, lipidos proteinas, acidos nucleicos) alterando su
funcin. Los mecanismos que contrarrestan estos radicales libres son:
sistemas biolgicos, enzimticos y no enzimticos).
Enzimas antioxidantes:
-

Primer paso de detoxificaicn realizado por la superxido dismitasa

(una citoslica y otra mitocondrial). Darn agua oxigenada que ser
eliminada por catalasa o glutatin peroxidasa. Una molcula de
glutatin se oxidar para reducir el agua oxigenada.
Genes del crom21 relacionados con esta funcin, generan radicales
libres. Adems uno de estos genera alzheimer, patologa que por s

sola tmb genera radicales libres. Esto lleva a un aumento en el estrs

oxidativo.
Adems, sus clulas tienen mayor susceptibilidad a la apoptosis.
Glutation oxidado y actividad telomerasa aumentada.

Diseo Experimental:
Estudio in vivo
-

Sangre de 38 nios con SD (4-13 aos de edad). Los controles fueron

16.
Determinaciones de liberacin de citC (esta en la mitocondria) y
niveles de p53.
En pacientes de SD el citC en plasma era mayor que en controles
(sala de la mitocondria)
El p53 retiene el ciclo celular si hay dao en DNA. Se vio en los
leucocitos mayor expresin de p53 en SD.
Estos dos parmetros aumentan la apoptosis en pacientes de SD.

Estudio in vitro
-

Cultivo de fibroblastos.
Se quiere ver si el glutation influye en la proliferacind e fibroblastos.
Se observ la incorporacin de BrdU en el DNA para saber las clulas
que proliferan y las que no. Los fibroblastos de fetos con SD proliferan
menos que los controles.
Relacin entre acortamiento de telmeros y envejecimiento. El
telmero era ms corto enfibro de SD. Por eso estas clulas
proliferaban menos, son clulas ms envejecida, dejan de crecer
antes.
Relacin entre el acortamiento de telmeros y el estrs oxidativo.
Nivel de perxidos aumentado que loscontroles, cociente GSSG/GSH
mayor en SD pero al determinarlos por separado no hay diferencias.
Esto indica estrs oxidativo. Ello puede afectar a las protenas de las
clulas. Se determino las protenias glutationidadas. En la epoca
decrecimietno de las celulas estas protenas eran mayores que en los
fibro controles. Las proteinas oxidadas solo se observa dif a los 7 dias
de cultivo (celulas ya confluentes), estan elevadas.
Por qu se produce ese estrs oxidativo? Sistemas glutarredoxinas y
tiorreduxinas. La expresin de tio casi esta anulada en SD y la gluta
no hay casi diferencias. Si lo que determinamos es la expresin de
stas por western, se ve disminucin en la expresin de tio y una
disminucin a los 7 dias no estad signifi de gluta. Estos sistemas
antioxidantes estn daados.
Qu pasa con la SOD (superoxido dism)? Enzima primer paso de
detoxificaicn. Aumento de mRNA y de expresion proteina y la
actividad de la SOD que es codificada en el crom21 (la Cu/ZnSOD). La
catalasa no varia y la glutation peroxidasa disminuye (mRNA y
expresin proteina y actividad). Por ello, se acumula agua oxigenadaestres oxidativo.

Proteina RCAN (DSCR1) la de calciurina? Tambin es aumentada y

acta disminuyendo un factor de crecimiento endotelial vascular, lo
que explicara el menor porcentaje de tumores slidos en los de SD.

Si el estrs oxidativo se convierte en agudo por cualquier causa, se produce

un acmulo de daos dando lugar a un fenotipo severo del SD.
23/03/15
DESCUBRIENDO GENES IMPLICADOS EN ENFERMEDADES RARAS
Polimorfismos:
Tres crculos solapados (genoma de tres personas): se ven los cambios
comunes entre ellos y los cambios que son diferentes. Hay mucha similitud
entre muchos individuos.
Definicin:
-

Cambio nucleotdico que no afecta al fenotipo (en algunos casos no lo

cumplira, como el caso de fibrosis qustica por la frecuencia).
Cambio con frecuencia de ms de 1% en la poblacin general (la ms
aceptada).
Coexistencia estable de ms de un genotipo.

Tipos de polimorfismos:
-

RFLPs son los primeros descritos

VNTRs (minisatlites) y STRs (microsatlites). Los quems se usan
actualmente son los STRs (al trabajar con PCR se puede amplificar la
muestra).
SNPs (de nica base). Ampliamente distribuidos por nuestro genoma
(aprox 54 mll) y con tasa de mutacin muy baja. No obstante, son
biallicos (cambio de una nica base, no son muy informativos). Pero
la mayora estn muy bien documentados en bases de datos. De
muchos de ellos se dispone de su frecuencia en diferentes
poblaciones

Diferencias entre los STRs y los SNPs, que son los ms usados actualmente
(nucleticdos, tasas de mutacin, caractersticas). Para los STRs pueden
haber diversos alelos mientras que para los SNPs slo dos. Para afinar
(cartografiar bien) se usan los STRs porque son ms informativos.
Cartografiado y ligamiento gentico:
Cartografiado es la estrategia para identificar localizaciones en nuestro
genoma que puedan albergar genes responsables de enfermedades. Para
ello se usan marcadores (polimorfismos). Esta tcnica an se sigue haciendo
pero mucho menos. La funcin de mapa marca la relacin entre individuos
recombinantes frente al nmero total de individuos. As se establecen qu
regiones en nuestro genoma puede haber un gen implicado o candidatos a
ser responsable de una enfermedad. Ver valor LOD (Z):

Z>3 evidencia ligamiento

Z<-2 ausencia ligamiento

Actualmente, se usa ms otras metodologas, como tcnicas de

secuenciacin masiva (NGS), que permiten obtener los resultados en un
tiempo mucho menor y ms barato. El problema de las NGS es la cantidad
de datos que se obtienen (importante bioinformticos). Adems, hay que
buscar la mutacin que causa la enfermedad y muchas de las enfermedades
genticas son enfermedades raras (mala casustica, pocos individuos con la
enfermedad, con ese cambio o la misma enfermedad con cambios
diferentes). Aqu cobra importancia las bases de datos, para compartir con
otros investigadores que estn estudiando la misma enfermedad.
Para estudiar los mecanismos genticos de una enfermedad, antes se
empezaba disponiendo de una familia grande con esa enfermedad se haca
cartografiado, Sanger, etc y era costoso en tiempo y dinero. Ahora se puede
empezar el estudio por donde se quiera. Ver significado de *Interactomas
proteicos.
Estrategias para identificar un gen (Tabla):
Gen candidato (la forma ms sencilla)
Caso prctico nia con niveles altos de cido urocnico (Mutations in the
urocanase...): el gen candidato del que se sospechaba era la urocanasa
(pues si no funciona habr niveles altos del cido urocnico). Leyeron 2
publicaciones de casos similares y en una de ellas aparece un rbol
genealgico con dos hermanas enfermas y muchos casos en la familia y
fallecidos. Esto da informacin sobre que se trata de una enfermedad
gentica hereditaria. Por ello, interesa buscar mutaciones en un gen. Se
buscaron estas mutaciones y se detectaron cambios exnicos (p.R450C). La
paciente era heterocigtica para estos cambios (si no morira). Se hicieron
estudios inslicos (de prediccin): BLAST (para ver conservacin de
residuos) y estudios de prediccin de la estructura secundaria; tambin
prediccin de sustituciones aminoacdicas para ver si el cambio modifica la
funcin de la protena o la altera. En este caso se vio que la alteraba.
Se realiz un ensayo de la actividad enzimtica de la protena mutada. La
mutacin altera la funcin de forma que su actividad no es detectable.
Conclusiones: la deficiencia de urocanasa puede provocar la enfermedad
(gen UROC1).
Secuenciacin de exoma (WES)
Exoma es el conjunto de regiones codificantes del genoma. Si se secuencian
todas las regiones codificantes de un individuo se pueden encontrar
mutaciones relacionadas con una patologa. Ms del 80% de mutaciones
patolgicas que hoy en da se conocen se sitan en los exones. Poco a poco
las cifras cambian pues este porcentaje depende ms de la metodologa

usada para detectar estas mutaciones. Aun as, an se estudia el exoma

pues es muy difcil barajar tantos datos.
Caso prctico: familia con forma concreta de Fenotipo CMT Axonal
(deteccin de la mutacin causal en EGR2 asociado a CMT axonal). Se
decidi hacer una secuenciacin de exoma. Se busca el elemento comn
entre los enfermos y si el parentesco de los enfermos es ms alejado mejor
pues compartirn menos genes de fondo). En esta familia haban 4
enfermos.
Se identifica el gen posible y mediante bases de datos se van descartando
aquellos cambios ms frecuentes en la poblacin general y otros filtrados. Al
final se quedaron con 25 cambios no sinnimos, de los cuales llam la
atencin un cambio en el gen EGR2 (implicado en la enfermedad de
Charcot). Este gen esta implicado en Charcot desmielinizante (pero
enprincipio no en el tipo axonal). Se procedi a confirmar ese cambio
mediante Sanger. Se estudi este cambio en individuos sanos y no se
encontr. Se realizaron estudio in slico y ensayos de expresin del gen
(expresin menor del gen mutado con actividad alterada). Todo ello lleg a
confirmar este gen como agente causal.
Anlisis de ligamiento por cartografiado genmico y combinacin con la
secuenciacin de exoma
Al hacer un exoma hay muchos cambios y es difcil encontrar al responsable
de la enfermedad. Si adems se limita para quedarse con los cambios en
una determinada localizacin (cartografiado), se limita ms el estudio y se
descartan otros.
Caso: familia con neuropata hereditaria recurrente. Herencia dominante
(transmisin vertical con enfermos en todas las generaciones). Familia
consangunea, no tiene por qu relacionarse con una enfermedad recesiva.
Pasos del estudio:
-

Descartar los genes que se conocen o aquellos que puedan dar un

fenotipo parecido.
Para identificar el gen causal, se hace un cartografiado genmico con
0.5 mll de SNPs).
Se espera encontrar la ubicacin aproximada en el genoma del gen
que se busca. En este caso no se obtuvo ni una regin en
condiciones.
Se hizo la secuenciacin de exoma. Se encontr que los 4 pacientes
secuenciados compartan 5311 cambios no sinnimos (y queremos
slo 1).
Filtros en bases de datos y se llegaron a 33 cambios. Uno de ellos, en
el gen ABCD1 era relevante porque esta descrito que esa mutacin
causa enfermedad. Causa adrenoleucodistrofia. No tena sentido pero
se sigui investigando este cambio.
Se confirm el cambio finalmente mediante Sanger. Result en un
falso positivo, no tenan adrenoleucodistrofia.

Se sigui investigando otros cambios y uno de ellos co-segregaba

bien con la enfermedad. Los sanos no lo tenan y los enfermos s. Pero
el gen no esta relacionado con enfermedad humana hasta la fecha.
Varios ensayos.

Caso: familia neuropata hereditaria recurrente.

-

Descartar genes que producen cuadros clnicos similares

Cartografiado genmico con SNPs con 3 localizaciones. Una de ellas
con Z>3 (evidencia ligamiento). No se descartan los otros dos, hay
que seguir estudindolos.
Descartar las localizaciones que no son causales. Se mantuvo la del
cromosoma 21 (la del z>3).
Todos los enfermos coincidan en un haplotipo que no lo tenan los
sanos.
Combinando el cartografiado y anlisis de satlites se acota una
regin en el cromosoma 21.
Bsqueda de los genes de esa regin que pueden dar cuadro clnico
similar al que se est estudiando.
Se identificaron unos 70 polimorfismos ya descritos y ninguno de ellos
produca esa patologa. Podra ser una delecin o duplicacin? Tras
estudio de sondas tampoco se encontr delecin ni duplicacin.
No se encontr el gen. Qu se puede hacer? Secuencias toda la
regin candidata (de un SNPs al otro).

En la mayora de enfermedades genticas hay mucha variabilidad clnica,

pseudodominancia, etc. Esto es por captores genticos que modulan el
fenotipo (modificador gentico). Esto llega a complicar mucho ms el
estudio de la enfermedad (personas con la misma enfermedad y con perfiles
clnicos diferentes, unos ms graves que otros, con fenotipos diferentes,
etc).
24/03/15
PROGERIAS
Envejecimiento acelerado del organismo.
Tipos:
1. Progeria en el nacimiento o al nacimiento, cuyo exponente
fundamental es el Sndrome de Hutchinson-Gilford.
2. Progerias del adulto (o segmentales). Son en principio menos graves,
no tienen por qu ser mortales. Se produce un envejecimiento
acelerado de algunos rganos, tejidos o sistemas del cuerpo. Ejemplo:
sndrome de Werner, de Bloom, etc.
3. Otros con componentes progeroides, como el Sndrome de Down,
Disqueratosis congnita, etc. podran formar parte de las progerias
segmentales pero son ms leves, el proceso de envejecimiento no es
lo ms llamativo en este tipo de enfermedades.

Fisiopatologa del sndrome de Hutchinson-Gilford

Envejecimiento de todo el organismo. Empieza a manifestar signos clnicos a
los meses del nacimiento.
El proceso patolgico se debe a una alteracin en una ruta metablica (va
de maduracin de la protena lamina A). Esta protena forma parte de la
membrana nuclear interna. El proceso de maduracin se realiza mediante
una serie de enzimas que cursa con farnesilacin, corte de secuencias de aa
hasta la prdida de 18 aa del extremo carboxilo terminal hasta formar la
protena madura.
En estos pacientes hay mltiples mutaciones en estas enzimas
(metaloproteasa sobre todo), quedando la prelamina A que no puede ser
modificada ni cortada (se queda la forma farnelisada), quedando la forma
inmadura. Lo que ocurre es que la membrana nuclear adquiere una forma
abultada. Esto provoca que no se produzca la divisin celular (no hay
renovacin celular o su tasa es muy baja).
El tto con estatinas y aminobifosfatos (eliminacin de radicales farnesilo)
mejora sensiblemente la renovacin celular en estos pacientes (Carlos Otn).
Modelos de envejecimiento (in vivo e in vitro)
In vivo (Proyecto EUROS)
Sndrome de Werner
Progeria segmental. Enfermedad autosmica recesiva producida por una
mutacin en el gen WRN (involucrado en muchas patologas relacionadas
con la inestabilidad genmica: grupo de enfermedades con alteraciones en
mecanismo de reparacin del DNA, es decir, muchos procesos neoplsicos).
Situado en el cromosoma 8 de seres humanos. Enfermedad causada porque
este gen codifica para una helicasa, cuya funcin importante en el proceso
de duplicacin del DNA, abren la doble hebra. Tambin relacionada con la
disminucin de la longitud del telmero (protege de las aberraciones
cromosmicas, lo ms importante de sus funciones, para que no se
produzcan uniones intercromosmicas). Cada vez que se divide el DNA se
acortan sus hebras. Muchas de las enfermedades progerias se deben al
acortamiento telomrico.
Gran parte del proceso patolgico en este sndrome es debido no slo a la
baja actividad helicasa (mala divisin celular) sino tambin al acortamiento
de los telmeros.
El telmero tiene una estructura complicada. Hay gran cantidad de
protenas (entre las que estn la WRN y las Ku) y forman una estructura
llamada telosoma o complejo Shelterin (ADN + protenas). Cuando WRN
esta mutado no se forma bien este complejo Shelterin (y no funciona como

helicasa normal) y la telomerasa no puede entrar a dicho complejo, por

tanto la posibilidad de alargar el telmero disminuye.
Caso: 3 pacientes consanguneos adultos (25, 35 y 47 aos) con fenotipo
caracterstico de este sndrome.
Se realiz un estudio de estrs oxidativo (desequilibrio entre oxidantes y
antioxidantes a favor de los oxidantes).
-

Uno de los parmetros es la 8-OHdG (oxidacin de DNA y tmb mide el

proceso de reparacin de DNA al medirlo en orina). Se sac sangre
perifrica de los pacientes y se calcul la 8-OH del ncleo de
leucocitos (WBC). Hay un aumento muy significativo de 8-OH de estos
pacientes al compararlos con los padres y con controles.
Otro parmetro medido es el de Glx y MGlx (metabolismo de
glcidos), siendo altos sus niveles.
Glutation (antioxidante fisiolgico ms importante en clulas de
mamfero, esta dentro de clulas y en elplasma de la sangre). La
forma reducida es GSH y la oxidada es GSSG. Medir estas formas
puede ser un ndice sistmico de todo el organismo de estrs
oxidativo (ms de GSSG que de GSH). Cuanto ms alto el cociente
GSSG:GSH, ms estrs oxidativo. Esto ocurra en estos pacientes.

Se puede decir que hay un estrs oxidativo en estos pacientes. *Con la edad
este cociente tambin aumenta en todas las personas, porque cada vez hay
ms estrs oxidativo.
Sndrome de Bloom
Alteracin de helicasas (gen BLM). Se producen roturas del DNA y de su
reordenamiento.
Ver caractersticas clnicas: importante el aumento de la susceptibilidad al
cncer, por lo cual suelen morir.
Caso: 4 pacientes. Bajo peso al nacer, retraso crecimiento, eritrema facial,
desarrollo psicomotor retrasado y tres de ellos consanguneos.
Marcadores de estrs oxidativo:
-

No haba alteraciones en el perfil de estrs oxidativo (GSSG y GSH).

Similares e incluso por debajo de los controles
Sin embargo, los niveles de 8-OH en leucocitos y en orina si eran
superiores a los controles, sobretodo en los leucocitos. Esto se debe a
que la alteracin generada a nivel nuclear (de DNA) no llega a ser
sistmico (en el sistmico saldra estrs oxidativo del cociente
GSSG:GSH).

Sndrome de Down

Este sndrome tiene un componente de estrs oxidativo, debido a la

formacin de radicales libres del oxgeno (ROS). Ver esquema: el radical
superxido tiene la capacidad de unirse a estructuras qumicas y oxidarlas.
Hay una series de enzimas antioxidantes como es la superxido dismutasa
(SOD). La SOD convierte el radical superxido en agua oxigenada (no es un
radical libre), que es un dador de hidroxilos (menos abundante pero mucho
ms oxidante que el superxido). La catalasa (CAT) y la glutation peroxidasa
(GPx) catabolizan el agua oxigenada generando agua molecular,
desactivando finalmente el agente oxidante. La GPx usa como cofactor al
glutation reducido (GSH), reducindolo y generando agua molecular por otro
lado. Ante una baja actividad de estas dos ltimas enzimas, se produce ms
dao oxidativo con dao celular, al producirse la reaccin en direccin hacia
la produccin de hidroxilos.
Caso: el aumento de 8-OH y TBARS, etc. haba un estrs oxidativo.
Tienen un componente progeroide porque tienen aterosclerosis con mayor
frecuencia, disminucin expectativa de vida, diabetes, hipertensin,
alopecia, prdida de piezas dentarias y, salvo algunos tipos de cnceres
hematolgicos, en general tienen una disminucin de la incidencia de
tumores seos (por disminucin de proliferacin celular).
Marcadores proliferacin celular: Por ello, midieron la BrdU (referente de la
formacin de nuevo ADN). Se vio que la capacidad de proliferacin celular
en SD est disminuida ya en un fibroblasto fetal. La expresin de proteinas
relacionadas con laproliferacin celular tmb esta disminuida. Lalongitud del
telmero tmb estaba disminuida.
Parmetros de estrs oxidativo; aumentados (GSSG:GSH y otros). LA SOD de
ZN/Cu aumentada y la de manganeso disminuida (posible mecanismo
compensatorio); GPx y CAT disminuidas; tioredoxina (antioxidante en ncleo
celular) disminuida mucho.
Los fibroblastos fetales tienen una disminucin de la longitud del telmero,
de la proliferacin celular y mayor estrs oxidativo.
Disqueratosis congenita
Mutacin en la disquerina, enzima involucrado en la regulacin dela
actividad telomerasa. Por eso, en esta enfermedad se produce un
acortamiento de los telmeros, y tiene lugar en la piel.
Caractersticas clnicas: hiperpigmentacin de piel, pelo gris, distrofia
unglar, leucoplaquia. Lo ms grave es el fallo en la mdula sea, que es lo
que da lugar a la muerte (no formacin en clulas sanguneas).
Telomerasa: posible funcin antioxidante? Cuando hay un estrs (entre ellos
oxidativo) la telomerasa migra a la mitocondria y la protege de la formacin
de especies reactivas. Cuando hay menos estrs vuelve al ncleo.

Correlacin entre actividad telomerasa y Glutation peroxidasa (a mayor de

una mayor de otra?) (ver).
Por otro lado, durante el envejecimiento la conformacin de la cromatina se
ve alterada.
En la disqueratosis se producan las mismas alteraciones en la conformacin
de la cromatina que tienen lugar durante el envejecimiento normal. Tambin
disminuye la actividad telomerasa y otros parmetros se ven alterados
(diapos).
25/03/15
ALTERACIONES HEREDITARIAS
ENCEFALOPATIA HEPATICA

EN

EL

CICLO

DE

LA

UREA

La encefalopata heptica mnima es una enfermedad de alta prevalencia

(no es una enfermedad rara) pero hay efectos de esta enfermedad que se
consideran raros (hiperamonemia). Es una patologa caracterizada por
alteraciones cerebrales derivadas de un fallo heptico (alcohol o hepatitis)
que cursa con una cirrosis. Del 33-50% delos cirrticos puede llegar a sufrir
encefalopata heptica. Esta enfermedad esta infradiagnosticada.
El fallo heptico es la relacin entre la EH y las ER. Concretamente, lo raro
se refiere a las alteraciones hereditarias en el ciclo de la urea (fallo en
alguna de las enzimas del ciclo de la urea).
Las funciones del ciclo de laurea es la eliminacin de txicos en el cual las
protenas se degradan en aa y luego en amonio. Si hay fallo en alguna de
las enzimas se produce hiperamonemia.
Las
alteraciones hereditarias en este ciclo la forma un conjunto de
deficiencias, clasificadas segn la enzima deficiente. Todas son autosmicas
recesivas excepto la OTC (ligada al cromosoma X).
Sintomatologa: da igual de qu deficiencia se trate: confusin, disminucin
ingesta de alimento, degradacin de alimentos protenicos (ms aa,
amonio), aumento somnolencia, nuseas y vmitos
Complicaciones: trastornos aprendizaje, hiperamonemia, coma, muerte,
edema cerebral, etc.
Tratamiento: no hay. Seguir dieta hipoproteica
Detoxificacin en caso de acumularse: laxantes y diurticos, lavados,
dilisis, etc. para eliminar el amonio.
Hiperamonemia: Aumento amonio en sangre. El amonio atraviesa la barrera
hematoenceflica produciendo en el cerebro inflamacin, trastornos en
algunas vas que afectan al final al aprendizaje y el resto de alteraciones
cerebrales.

ENCEFALOPATIA HEPATICA
Cirrosis heptica: estadio final de un proceso de fibrosis progresiva
secundario a un dao heptico crnico. Esto conduce a hiperamonemia, a
una inflamacin local (mediadores de la inflamacin) y sistmica (SIRS), a
estrs oxidativo/nitrosativo y a la encefalopata heptica (clnica: ya se
manifiesta; o mnima).

La EH es un sndrome neuropsiquitrico complejo que cursa con

alteracin funcional del SNC despus de un fallo heptico.
Prevalencia: 2mll en EEUU y otros tantos en UE.
Manifestaciones clnicas desde alteraciones sutiles en las funciones
mentales pudiendo llegar hasta coma y muerte.
Alteracin parcialmente reversible pero con mal pronstico
Factor predictivo de muerte.

Hay diferentes grados de gravedad (EHMnima hasta grado 4) con diferentes

alteraciones. En la EHM es crtico su diagnstico.
EHM: primera etapa asociada a empeoramiento en la calidad de vida del
paciente. No hay sntomas clnicos evidentes pero s un leve deterior
cognitivo/enlentecimiento psicomotor, aumento de accidentes domsticos,
laborales, de trfico, aumenta el n de cadas, fracturas y hospitalizaciones.
Todo ello da lugar a un problema mdico social y econmico importante que
podra evitarse con un diagnstico precoz de esta enfermedad.
Para el diagnstico de la EHM hay una batera de test psicomtricos (PHES)
que miden atencin y coordinacin motora. Se realiza sobre personas
cirrticas que presentaban algunas alteraciones con posibilidad de EHM. Se
obtiene una puntuacin, se corrige por edad y nivel educativo, y
dependiendo de la puntuacin se separa en positivos o negativos. Puesto
que requiere tiempo y personal no es muy utilizado en la prctica clnica.
Principales factores contribuyentes a EH y EHM
-

Aumento de amonio: hiperamonemia. BHE (neurotxico y Glu-NOGMPc.

Inflamacin perifrica: aumento interleucinas (Il-6, Il-18)
Estrs oxidativo/nitrosativo: aumento de la 3-nitrotirosina (3-NT). Es
un marcador de estrs nitrosativo proveniente de un aumento en el
xido ntrico. Gran valor predictivo de EHM de pacientes cirrticos.

Estrs oxidativo/nitrosativo
Fuentes endgenas de ROS/RNS: cadena transporte electrnico
mitocondrial, el sta hipoxantina/xantina oxidasa, reaccin de Fenton-HarberWeiss y de la NOS.
Dao oxidativo producido por desequilibrio entre los oxidantes y los
mecanismos antioxidantes del organismo. Las especies reactivas del

nitrgeno se produce por la combinacin del superxido con NO, que

terminar por producir la 3-NT.
Test psicomtricos
Medicin de la atencin:
-

Test Stroop de palabras y colores: evaluar la capacidad de seleccionar

informacin relevante inhibiendo la irrelevante. Los pacientes con
EHM tenan disminuida la velocidad de procesamiento mental
diferencindose de los pacientes cirrticos que no tenan EHM
(clasificados as anteriormente por el test PHES) y de los controles.
Test oral de claves: evala la velocidad de procesamiento mental.
Smbolos y nmeros. Se vio que los que tenan EHM fallaban ms que
los que no la tenan y que los controles. Los de sin EHM tmb tenan
disminuida la velocidad de procesamiento mental, pues fallaban ms
que los controles. Esto no fue detectado con el PHES (es
suficientemente sensible?)
Test d2: evala la atencin selectiva/sostenida y la concentracin
mental. Se evalan muchos parmetros que miden diferentes
caractersticas. Los pacientes con EHM lo hacen peor que los
cirrticos sin EHM y que los controles. Pareca ser un test ms
sensible que el PHES.
Otros: Test Oral de Dgitos y Test Oral de Letras y Nmeros. Los EHM
lo hacan peor (disminuida la memoria de trabajo). De nuevo, haban
pacientes sin EHM catalogados as con el PHES que s tenan
alteraciones.

Medicin Psicomotora:
-

Test de coordinacin bimanual y Test de coordinacin visuomotora.

Los EHM lo hacan peor y tardaban ms y de nuevo, los sin EHM
tambin fallaban ms que los controles.

La batera de PHES no parece lo suficientemente sensible para detectar

finamente algunas alteraciones cognitivas y motoras de pacientes EHM,
pudiendo ser infradiagnosticados. Hay otros test que detectan algunas
alteraciones en funciones cognitivas y motoras con mayor sensibilidad y
especificidad que la PHES.
Parmetros bioqumicos analizados:
Amonio en sangre, nitratos/nitritos en plasma, GMPc en plasma, IL-6 y IL-18.
Hiperamonemia y aumento de nitratos en pacientes con y sin EHM no
mostraban diferencias pero el resto de parmetros s.
Si los niveles de hiperamonemia e inflamacin es suficientemente elevados,
en pacientes con enfermedades hepticas el deterioro cognitivo puede
aparecer antes de la progresin a cirrosis.
Mecanismos antioxidantes:

Se midieron diferentes niveles de enzimas antioxidantes en general y

estaban elevadas (cmo?). Se produce como mecanismo adaptativo
compensatorio pero es insuficiente para combatir el estrs oxidativo (el
dao oxidativo). Haban diferencias significativas en EHM frente a no EHM
en la GPx, GR y GSH.
Correlacin de las alteraciones neurolgicas con los biomarcadores de
inflamacin, hiperamonemia y estrs oxidativo, para evaluar su posible
papel en el deterioro neurolgico en EHM.
Aumento inflamacin, hiperamonemia, actividad GPx y GR en eritrocitos, y
de la actividad de GPx en clulas mononucleares, de la 3-NT, MDA,
disminucin de GSH, etc.
CONCLUSIONES (ver pdf).
26/03/15
INESTABILIDAD
GENETICA
Y
EPIGENETICAS DE ALGUNAS ER

CANCER

HEREDITARIO.

BASES

Transmisin de la informacin gentica: replicacin, transcripcin y

traduccin. A parte existen silenciamiento de genes en determinados
momentos, etc (epigentica).
Qu es la epigentica?
Conexin entre regulacin gentica a corto y largo plazo con el ambiente.
No somos todo lo que est escrito en nuestros genes.
Son los cambios/caractersticas heredables en la funcin gnica que no son
codificados por el genoma.
-

Metilacin del DNA

Modificacin de histonas
MicroRNA: silenciamiento de genes
Otros: organizacin de la cromatina y cdigo de barras de histonas

Organizacin de la cromatina:
-

Eucromatina: abierta y transcribible

Heterocromatina: cerrada y no transcribible.

Composicin de la cromatina: Conjunto de histonas (octmero) con DNA.

Regulacin de la conformacin de la cromatina: tres mecanismos bsicos
-

Metilacin del ADN: introduccin grupo metilo en posicin 5.

Hipermetilacin (compactacin de la cromatina), hipometilacin
(transcripcin). Importante su regulacin porque podra aumentar la
susceptibilidad alcncer si hay determinados genes que no se
transcriben o si se transcriben los que no deben cuando no deben y
donde no deben.

Ver DNA metiltransferasas (metilan el DNA). S-adenosin metionina.

Enfermedades con el patrn de metilacin alterado: tabla (ataxia
friedreich, sndrome ICF, sndrome Rett.
-

Modificaciones de las histonas: sobretodo las H3, 4, 2A y 2B (histonas

cannicas).
Metilacin (SILENCIA genes) y acetilacin (ACTIVA genes) de histonas.
En principio.

MicroRNAs (RNAs no codificantes): regulan trascripcin gnica

bloqueando la transcripcin de un gen concreto.
Otros: estructura tridimensional de la cromatina y cdigos de barras
de histonas. Ver hiptesis del cdigo de barras. Cmo sabe la clula
qu partes de la cromatina transferir a las hijas? Cmo reconoce si es
heterocromatina o eucromatina? Existen unas cistenas en una regin
concreta de las histonas H3 que podran tener implicacin en la
formacin de eucromatina y heterocromatina, as como en la
arquitectura nuclear (memoria epigentica).

Hay una serie de mecanismos que dan lugar tanto a la activacin como al
silenciamiento de un gen, no es un paso nico.
EPIGENETICA DEL ENVEJECIMIENTO
La estructura de la cromatina cambia con la edad. El estrs, el ambiente, el
dao al DNA alteran la cromatina (epigentica) y forman los SAHF, los
cuales provocan silenciamiento de genes que estaban activos y al revs. En
la progeria de Hutchinson-Gilford esta estructura nuclear se pierde (Hay una
desregulacin gnica acelerada).
Epigentica de los telmeros: Elongacin del telmero para asegurar la
estabbilidad gnica. Los telmeros son estructuras de heterocromatina,
lgico pues necesitamos una regin slida y estable donde no acte
ninguna maquinaria celular. Hay genes no necesario enregiones subtelomricas que si ocurre el acortamiento del telmero pueden ser activados
y producir diversas alteraciones (enfermedad de Werner).
ENFERMEDADES RARAS RELACIONADAS CON LA REGULACION DE LA
CROMATINA
Sndrome de ICF metilacin DNA
Mutaciones en el gen DNMT3 (dna metil transferasa importante en
reparacin de la replicacin del DNA y en el desarrollo embrionario).
Sndrome de inmunodeficiencia, inestabilidad de la regin centromrica y
anomalas faciales. DNMT3 A y B metilan citosinas que se ha dejado por
metilar DNMT1.

Son recurrentes las infecciones y deficitarios en Igs. Cuando hay un fallo en

la heterocromatizacin ikaros (importante en proceso de produccin de Igs)
no puede actuar.

Sndrome de Rett metilacin de DNA

Mutacin en gen MeCP2, que codifica una protena de unin metil-CpG.
MeCP2 reconoce dominios metilados y reclutan a otra maquinaria de
reclutamiento, entre ellas histonas desacetilasas(o acetilasas?), para
silenciar la transcripcin gnica, o a otras para activar la transcripcin.
Cuando falla lo que ocurre es que se silencian genes necesarios o se activan
genes no necesarios.
Sndrome de Rubinstein-Taybi modificacin de Histonas
Autosmica dominante. Deleciones en el gen CBP (o en el p300) que
codifica para una HAT (histona acetil transferasa).
Sndrome de Coffin-Lowry Modificacin de Histonas
Mutaciones en el gen RPS6KA3.
Ataxia de Friedreich
Dficit en la proteina mitocondrial frataxina. Es una expansin del triplete
GAA (TTC). Problema en la heterocromatina del promotor.
Terapia epigentica: cambio en la cromatina del promotor hacindola
abierta.
FALTA 30/03
31/03/15
ENFERMEDADES DE DEPSITO LISOSOMAL
Introduccin general. Qu son?
Autosmicas recesivas excepto la enfermedad de Hunter y la de Fabry
(ligada al X). Enfermedades metablicas muy heterogneas.
Sntomas aparecen en la niez o adolescencia (con alguna forma adulta,
menos habitual). Disminuye las capacidades del paciente y muerte
prematura. Por ello, son un roblema sanitario y se est recomendando
introducir cribados neonatales para el diagnstico temprano.

Heterogeneidad gentica pero todas las mutaciones producen una

incapacidad para degradar macromolculas que se acumulan en el lisosoma
y en el interior de las clulas, dando lugar a una disfuncin de los rganos
afectados.
Los stas de degradacin intracelular de proteinas (DIP) (lisosomas) tienen
unas funciones muy importantes para la supervivencia. Regulan procesos
como:
-

Ciclo celular
Muerte celular (apop y necro)
Presentan Ag al sta inmune
Provienen a la clula de aa y otras molculas
Eliminacin de protenas

La DIP la llevan a cabo proteasas: lisosomas y proteasomas en el citosol, y

otras (calpainas, etc).
Sistema ubicuitina-proteasomas: degradan proteinas no funcionales y
factores de transcripcin, es decir, productos intracelulares. El marcaje de
ub da lugar a un paso de degradacin (proteasoma) donde la proteina
desplegada entra al hueco, lugar donde es cortada a aa.
Lisosomas: ph cido en su interior y hay de 40-60 hidrolasas cidas
descritas. El ph se mantiene por unabomba de protones en la membrana
lisosomal. En la cara interna de la membrana hay un halo azucarado que
protege al lisosoma de su interior. Tienen proteinas transportadoras que
permiten entrada y salida de proteinas. Degrada material extracelular
(endocitosis) e intracelular (autofagia). (Varios tipos de autofagia). La ms
importante de las autofagias es la macroautofagia.
Macroautofagia: formacin de las vacuolas autofgicas: importante el
complejo formado por PI3K III y Beclin 1 (son atg). Permitir que otras atgs
(LC3I, II y III) se unan a la membrana preautofagosomal y la elonguen para
formar el autofagosoma (en su interior solo quedarn las LC3II). LC3II es la
proteina ms reconocida como marcador de autofagia (esta unida
prcticamente a todas las estructuras.
ENFERMEDADES DE ALMACENAMIENTO LISOSOMAL
Divididas en 8 grupos: los 4 primeros por mutaciones en genes que
codifican para enzimas lisosomales. Las otras 4 por mutaciones en genes de
proteinas transportadoras, o complejos que ayudan a maduracin de
enzimas lisosomales, de su activacin etc. esto da una idea de la
heterogeneidad gentica que se comenta en el principio.
Esfingo-lipidosis
Hasta el momento hay descritos 10 sndromes diferentes.

La enfermedad de Gaucher es una de las ms prevalentes de

lipidosis.
Enf de Niemann-Pick, Tay-Sachs, Wolman y Krabb son de las ms
devastadoras cuando los sntomas aparecen muy pronto.
Faber: fallo en enzima lisosomal (ceramidasa) que cursa con acmulo
en articulaciones.

Mucopolisacaridosis
Acumulacin de proteoglucanos. En general los sntomas clnicos pueden
ayudar al pediatra a dar un diagnstico inicial.
-

Sanfilippo A: mutacin de heparan N sulfatasa.

Sndrome de Morquio: fallo en la galactosa 6-sulfatasa

Sacaridosis
Alteraciones neurolgicas y del esqueleto.
Clucogenosis
Slo descrita la enfermedad de Pompe. Acmulo de glucgeno que afectar
al corazn, SNC y todos los rganos donde el glucgeno es importante.
Otros
-

Niemann-Pick (variantes C y D). material acumulado en loslisosomas

que dan lugar a vacuolas gigantes en el interior de la clula, dejando
infuncional a sta.
Lipofuscinosis ceroideas neuronales

SIGNOS Y SINTOMAS
Depender de qu mutacin sea y de la distribucin fisiolgica del acmulo.
Los sntomas aparecen de forma muy variable, unas aparecen antes que
otras, etc. esta variabilidad depender de la mutacin de que se trate y el
lugar donde se produzca la acumulacin, as de lo pronto o tarde en que
aparezcan los sntomas (fenotipos dependiendo de la edad de aparicin).
Siempre habr un componente degenerativo cuando la enfermedad afecta
al SNC.
DIAGNOSTICO
La mayora aparecen en la niez, por lo que a la mnima sospecha se realiza
un diagnstico inicial que suele ser una enfermedad de acmulo lisosomal.
Se suele hacer un estudio anatomo-patolgico y otro bioqumico (a parir de
suero, leucocitos, fibroblastos del paciente). Los ensayos bioqumicos no son
muy interesantes para pacientes portadores. Adems, no todas estas
enfermedades se deben a un fallo de un enzima. Por ello se recurre a un
estudio gentico (secuenciaciones de genes sospechosos). Los estudios
qumicos estudian la composicin del material acumulado.

Importante el cribado neonatal. A partir de sangre del taln, se intenta

detectar las sustancias que se acumulan , pues la mayora de estas
enfermedades el acmulo ya se produce durante el desarrollo.
TRATAMIENTO y PREVENCION
Terapia enzimtica sustitutiva: en enf de Pompe y de Gaucher. El SNC no
mejora
Trasplantes de mdula sea: problema: los lisosomas son importantes para
el sta inmune. Si estan afectados, su sta inmune tambin estar algo
afectado. Adems, este tto no revierte el fenotipo completamente.
Terapia gnica (Sanfilippo): introducir un dna exgeno en clulas para
sintetizar la enzima deficitaria. Ventajas (atraviesa barrera hemato,
especifidad de tejido, etc) y desventajas (tamao del gen, seguridad y no se
sabe el nivel de enzima producido por los vectores, si son seguros) de los
adenovirus.
Prevencin: consejo gentico para saber el tipo de herencia, riesgo de
recurrencia, el desarrollo clnico ms probable, etc. mejorar la calidad de
vida de los pacientes.
LIPOFUSCINOSIS CEROIDEAS NEURONALES (trabajo experimental)
Son las enfer neurodegenerativas ms frecuentes de la infancia. Grupo de
las epilepsias mioclnicas pregresivas (por sintomatologa). Herencia auto
recesivas.
Hay unos 10 genes implicados, conocidos como CLN (lisosomal, endosomal
y retculo endoplsmico).
Trabajan con las variantes CLN2 y 3 porque son las ms prevalentes.
Estudio con macroautofagia
CLN2 mutado da lugar a deficiencia en protena TPP1 (forma infantil tarda).
Corta tripptidos de proteinas pequeas del extremo amino terminal.
CLN3 mutada produce la forma juvenil (batenina). Codifica para una
proteina cuya licalizacin y funcin an no esta clara. Lo ms tpico es una
delecin que da lugar a una proteina truncada sin funcin.
Mutaciones en ambos genes a la vez da lugar a la acumulacin del mismo
compuesto.
Se ha querido estudiar las similitudes y diferencias que hay entre diferentes
alteraciones (pdf).
Grfica actividad TPPI: *Alta protelisis: ayuno. En pacientes CLN2 la
actividad de TPPI era significativamente inferior.

Estudio gentico para CLN3 (pues se desconoce localizacin). La CLN3

estaba mutada y en microscopa se vean los lisosomas aumentados.
Confirmaron el modelo de estudio.
Realizaron experimentos de pulso y caza. Solo con las proteinas de vida
media larga habia una disminucin de la funcionalidad de CLN2 y 3 para
condiciones de alta protelisis.
Haba una menor formacin de vacuolas autofgicas y su masa tambin era
menor de lo normal.
Los CNL3 tenian el pH de los lisosomas aumentados. Adems, en pacientes
CNL3 la actividad de la TPPI tambin estaba disminuida. De ah que la
alteracin sea comn en pacientes CNL3 y CNL2.??
Actividad de proteasomas: no estaban alterados, solo esta alterada la
macroautofagia.
Estudio de kinasas: mTOR regula negativamente la autofagia. En estos
pacientes mTOR esta muy fosforilada (activada), por tanto la
macroautofagia estaba disminuida.
Estudio del Trafico vesicular
Endocitosis: se estudian las diferentes vas de endocitosis en sus modelos.
-

Macropinocitosis: disminucin en pacientes CLN2 y 3 con el tiempo.

Endocitosis mediada por receptor de EGF (clatrina): no hay
diferencias en la internalizacin. Pero en la degradacin y el reciclaje
s se vio alteraciones. Esto se estudia usando diferentes
concentraciones del receptor (a bajas se estudia el reciclaje y a altas
la degradacin). Mayor reciclaje de CLN3.
Endo mediada por caveolas: no diferencias significativas

Fallo en autofagia por motivos diferentes: trfico y alteracin gen CLN2 y 3.

Y en el ciclo celular?
Las clulas CLN2 y 3 crecan ms lento. Vieron que en GNL2 la fase G0
estaba aumentada.
Radicales libres? Las mitocondrias estaban intactas. Se estudiaron los
peroxisomas: disminuida actividad catalasa en CLN2.
Las enzimas lisosomales se sintetizan en la cara trans de golgi, son
tranportadar hasta el endosoma tardo y luego devueltas a la cara trans de
golgi. Tras varios experimentos de degradacin se observ que CLN3 no se
estaba degradando. Todo esto posiblemente sea or el aumento del pH que
impide su fusin correcta, maduracin de autofagosomas ms lento, etc.
Las diferencias entre CLN2 y 3 nos puede explicar por qu en pacientes con
CLN2mutada la enfermedad se produce antes.