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La Rplication de lADN

Comment le matriel gntique se transmet de faon aussi exacte dune gnration


une autre ?
En 1953 quand Watson et Crick ont dcrit la structure de lADN, ie une molcule
bicatnaire avec appariement des bases, il est devenu vident quune matrice rgissait le
transfert de linformation au cours des division successives
Mais cette rplication est elle conservative ? ie une fois rpliqus les brin parentaux se
rassocient ils entre eux ou avec les brins noforms ? Comment samorce cette rplication ?
Comment avance t-elle le long du chromosome ? Quelles sont les enzymes qui participent
ce phnomne ? Y a t il des erreurs ?
LADN ne peut servir de lien gntique que la squence nuclotidique est strictement
reproduite. Do lutilit des fonctions rparatrices de la cellule.
I LADN se rplique de faon semi-conservative.
Exprience de Meselson-Stahl dan E.Coli + chromosomes mitotiques marqus au 3H.
II Sens de copie de lADN.
Comment la machinerie de rplication progresse t elle le long du duplex ? Il existe
trois possibilits :
1/ Il existe deux origines de rplications et de bouts en croissance. Ce mcanisme
est celui le plus utilis par les virus ADN linaire comme les adnovirus. Dans ce cas les
extrmits des molcules dADN servent de point fixes pour lamorage et larrt de la
rplication.
2/ Il peut exist une origine et une seule fourche de rplication qui migre dans un sens
et ou les deux brins sont recopis.
3 / Il peut exist une origine mais deux fourches de rplication qui migrent dans les
deux sens de sorte que les deux brin soit copi aux niveau des deux fourches de rplication.
Cest ce mode ci qui est utilis par la majorit.

Pour les chromosomes circulaires, ie bactries, les plasmides et certain virus, une
origine de rplication suffit et les deux fourche qui en parte se confondent au cot oppos. En
ce qui concerne les longs chromosomes eucaryotes, en gnrale ils comportent un grand
nombre dorigines de rplication. Les deux fourches partent dune origine donne et
progressent jusqu' ce quelles rencontrent les fourches parties dune origine adjacente.
Chaque rgion copie par une origine de rplication sappelle un REPLICON.
Exprience avec alternance de milieu lourd 3H et lger.
III Vitesse de rplication de lADN.
Affin de dterminer la vitesse de progression des fourches de rplication des autoradiographies des fibres dADN de cellules marques pendant des laps de temps croissant.
Un cycle de rplication de E.Coli est de 42min, sachant que le chromosome unique
contient 4,4*106pb et quil est copi par deux fourches de rplication en mme temps, la
vitesse de progression dune fourche est denviron 1000pb.s-1 par fourche.
La vitesse de propagation des fourches dans les cellules humaines est de 100pb.s -1.
Comme le gnome humain fait 3*109 pb, et quil se rplique en 8 heures, il doit comporter au
moins 1000 fourches de rplication. En fait les autoradiographies montre quil y a entre 10 4 et
105 rplicons.
IV La rplication de lADN commence des sites prcis.
Origine de rplication = le tronon ncessaire et suffisant la rplication dun ADN.
Les origines de rplication sont des squences formes de petites squences rptitives
reconnues par des complexes se fixant lorigine essentielle dans lassemblage du complexe
de rplication. Cette zone est flanque de squences riche en AT, disposition propice la
dtorsion de lhlice bicatnaire.
V Rplication chez les procaryotes.
Il nexiste pas dADN polymerase qui puisse faire la synthse de 3 vers 5, toutes
les ADN polymrase font la synthse de 5 en 3, et aucune ne peut amorcer de synthse
de novo, ie sans amorce ADN ou ARN prexistantes.
Au niveau du brin 53 la synthse est continue, il sagit du brin avanc ou prcoce. Au
niveau du brin 35 la synthse se fait galement de 5 en 3 grce au fragment dokasaki
denviron 1000 nuclotides, il sagit du brin retard. Il y a une seule ADN polymrase de type
III (mais deux sous unit) qui travaille sur les deux brin au niveau dune fourche de
rplication.

Les enzymes qui interviennent sont :


Protine DnaA : qui se fixe lorigine de rplication et permet linitiation de la
rplication en aidant louverture de lADN. ATP dpendante.
2 hlicases ou Protine DnaB : (une sur chaque brin) elles sparent progressivement
les deux brins dADN par rupture des liaisons hydrognes. Elles sont ATP dpendante.
Protine DnaC : convoie DnaB au bon endroit.
Une Gyrase : qui rduit les torsades formes par la progression de la fourche.
Une Droulase ou protine SSB : elle fixe le simple brin ce qui permet la stabilisation
pour vit que lADN ne se referme.
Une Primase : cest ARN polymrase ADN dpendante qui synthtise des amorces
dune 10ne denuclotides.
LADN Polymrase de type III : longation de 5 en 3 et de la correction sur preuve
(2 sous unit une pour chaque brin).
LADN pol I : qui limine les amorces ARN du brin retard par son activit
exonuclasique 53 et comble le trou par son activit polymrase.
LADN ligase : qui lie entre eux les fragments dOkasaki.
Protine Tus au site de terminaison met fin la rplication.
VI La rplication chez les eucaryotes.
Mme principe que procaryotes avec le brin avanc et le brin retard, mais avec
quelques diffrences :

LADN est beaucoup plus long,

La vitesse de rplication est de 50 nuclotides secondes ;

Ceci compens par de multiples origines de rplication ;

LADN est intgr dans la chromatine associe aux histones, au moment de la


rplication il y a production dhistones ;

Les ADN polymrases sont : ADN pol qui participe l'longation, ADN pol
qui fait les rparations et ADN pol qui est responsable de la rplication de
lADN mitochondriale ;

Duplication de la masse des histones, les protines nosynthtises et


parentales se rpartisse de faon alatoire sur chaque brin ;

La tlomre synthase empche le brin retard de se raccourcir progressivement


lors de la rplication. Transcriptase inverse

VII Les rparations.


Il existe un grand nombre de facteurs environnementaux pouvant induire des erreurs
sur le code gntique ie des mutations. Si il ny avait pas de corrections ++ pb / cancer, perte
ou gain de fonctions. LADN est la seule macromolcule pouvant tre rpare (pas ADN
mitochondriale).

Rparation des msappariements du une erreur de lADN polymrase : chez


les procaryotes il existe un systme multi enzymatique comprenant une
endonuclases associe une exonuclase bidirectionnelle (35 et 53), une
ligase et une ADN pol III.

Rparation des dimres de thymines : ces dimre sont produit par les UV
lorsque deux thimines sont contigus sur le mme brin = photodimrisation. La
rplication sarrte au niveau du dimre car la polymrase en peut plus avancer,
une endonuclase coupe une dizaine de nuclotides autour du dimre, il y a
ressynthse par lADN pol III pour les procaryotes et lADN pol pour les
eucaryotes. Affin, une ligase referme les dernires liaisons phosphodiester. Il
existe une maladie rare (Xeroderma pigmentosum) ou il ny a pas
dendonuclase et donc pas de rparation. Les patient son extrmement
sensible la lumire et la kratose volue vers un cancer cutan.

Rparation des mutation C/U = Dsamination oxydative : comme lU est une


base trangre lADN elle est limin par un systme spcifique dexcision
par lUracyl-glycosylase qui coupe la liaison -osidique entre lUracyl et le
dsoxyribose. La lacune est comble par lADN pol I ou puis intervention
dune ligase.

VIII Les rarrangements.


LA RECOMBINAISON : Il sagit dun phnomne dynamique, il sagit dun
change gntique. Il y a rarrangement entre deux rgions dADN condition quil existe
des homologies de squence ie que les squences soit trs proche ; et quun des deux brins
soit coup. Dans ce cas il peut y avoir une recombinaison qui formera soit une structure
dHtroduplexe ie formation dun X entre les deux brins dADN adjacent. On obtient ainsi
deux types de rarrangements : dans 50% des cas on a une Htrophilie = structure en
htroduplexe ; dans 50% des cas on a une recombinaison.