UNIVERSIDAD CENTRAL DELECUADOR

FACULTAD DE CIENCIAS QUIMICAS

ESCUELA DE BIOQUIMICA Y FARMACIA
QUIMICA DE ALIMENTOS

MICROBIOLOGIAINDUSTRIAL

TEMA:

AISLAMIENTO, SELECCIÓN Y PRESERVACIÓN DE CEPAS

LEVADURIFORMES Y FÚNGICAS DEGRADADORAS DEL
BAGAZO DE CAÑA DE AZÚCAR

Integrantes:

Arboleda Marcelo
Cóndor Belén
Cueva Nathaly
Góngora Estefanía

Curso:
9º ALIMENTOS
 INDICE

1 TEMA: .......................................................................................................................................... 4

2 PROBLEMA .................................................................................................................................. 4

3 ANTECEDENTES ........................................................................................................................... 4

4 JUSTIFICACION............................................................................................................................. 5

5 HIPOTESIS .................................................................................................................................... 5

6 OBJETIVOS ................................................................................................................................... 5

6.1 OBJETIVO GENERAL............................................................................................................. 5

6.2 OBJETIVOS ESPECIFICOS...................................................................................................... 5

7 MARCO TEORICO......................................................................................................................... 6

7.1 Bagazo de caña de azúcar ................................................................................................... 6

7.1.1 Propiedades físicas y químicas del bagazo .................................................................. 6

7.1.2 Componentes principales de la materia prima .............................................................. 7

7.2 Empleo de substrato orgánico por los microorganismos ................................................... 9

7.3 Organismos degradadores de lignina y mecanismo de biodegradación .......................... 10

7.3.1 Levaduras degradadoras de lignina ............................................................................ 11

8 MARCO METODOLOGICO.......................................................................................................... 12

8.1 METODOS GENERALES DE ANALISIS ................................................................................. 12

8.1.1 Muestreo ...................................................................................................................... 12

8.1.2 Preparación de la muestra .......................................................................................... 12

8.2 METODOS ESPECIFICOS DE ANALISIS ................................................................................ 12

8.2.1 Diseño del medio de cultivo......................................................................................... 12

8.2.2 AISLAMIENTO DE LEVADURAS Y HONGOS DEGRADADORES DE LIGNINA ...... 13

8.2.3 PURIFICACION ........................................................................................................... 13

8.2.4 IDENTIFICACION........................................................................................................ 13

8.2.5 SELECCIÓN DE LOS MICROORGANISMOS LEVADURIFORMES ......................... 13

8.2.5.1 Curva de crecimiento y evaluación de la capacidad degradadora de lignina .... 14

2
 8.2.6 PRESERVACIÓN ........................................................................................................ 15

9 FACTIBILIDAD ............................................................................................................................ 15

10 CRONOGRAMA...................................................................................................................... 15

11 BIBLIOGRAFÍA ........................................................................................................................ 16

12 ANEXOS ................................................................................................................................. 18

12.1 Composición de medios de cultivo ................................................................................... 18

3
1 TEMA:

AISLAMIENTO, SELECCIÓN Y PRESERVACIÓN DE CEPAS

LEVADURIFORMES DEGRADADORES DEL BAGAZO DE CAÑA DE
AZÚCAR

2 PROBLEMA

El bagazo de caña de azúcar es un material lignocelulósico constituido principalmente por

celulosa, hemicelulosa ligadas fuertemente a la lignina. Tradicionalmente en los centrales
azucareros este desecho se quema como una forma de limitar la disposición final de este
desecho, desperdiciando un elemento de tan valiosa importancia para diversas industrias
como la fabricación de papel, producción de alimentos balanceados para animales y
elaboración de aglomerados para la construcción, industrias donde se usa actualmente el
bagazo de caña, pero no en todo su potencial.

3 ANTECEDENTES

El bagazo de caña se obtiene como subproducto o residuo en los centrales azucareros

después de la extracción del jugo de caña de azúcar y representa aproximadamente entre
el 25 y 40 % del total de la materia procesada, dependiendo del contenido de fibra de la
caña y la eficiencia en la extracción del jugo. En el Ecuador existen cultivadas 79.913
Has. de caña de azúcar, y una producción bruta de 5 618 045 TM, con un rendimiento
promedio de 70,30 TM/ha. El bagazo uno de los residuos agrícolas más abundantes con
una producción anual estimada de 158 000 toneladas, obtenidas de los 6 ingenios
azucareros existentes en el Ecuador y de otros productores pequeños.

El bagazo de caña tiene en su composición 20% de lignina, y 80% entre celulosa y

hemicelulosa, por lo que varias investigaciones han propuesto el uso de diversos
microorganismos, cepas fúngicas degradadoras de lignina, un ejemplo de estos hongos
es Phanerochaete chrysosporium, que crece en cultivo liquido y se ha demostrado que
secreta enzimas ligninoliticas extracelulares que tienen la habilidad de degradar
numerosos compuestos aromáticos policiclicos; la Ceriporiopsis subvermispora es otro
hongo filamentoso capaz de realizar la biodegradación de la lignina. Un ejemplo más es
Panus tigrinus, microorganismo que ha sido estudiado debido a su capacidad de producir
lacasas y peroxidasas que atacan a la lignina, Pleurotus ostreatus, Trametes versicolor,
Trametes subectypus, Cariolopsis gallica y heterobasidion annosum, son algunos de los
microorganismos estudiados debidos a su capacidad ligninocelulitica.

4
4 JUSTIFICACION

En el Ecuador el bagazo de caña es un residuo obtenido en la industria azucarera,

aproximadamente se obtiene 15 800 ton de este producto y actualmente este es usado en
varios campos, como: elaboración de balanceados para animales, pulpa de papel, etc., el
ocupar este residuo en toda su capacidad es una opción ante la sobreproducción de este
y contra la importación de 150 millones de dólares de celulosa y hemicelulosa a nuestro
país.

Por lo que este proyecto va orientado al aprovechamiento de los residuos de la extracción

del jugo de la caña de azúcar, al degradar la lignina en celulosa y hemicelulosa mediante
organismos levaduriformes y fúngicos degradadores de este compuesto.

5 HIPOTESIS

Se aisló levaduras degradadoras del bagazo de caña que se podrían usar para la
obtención de celulosa y hemicelulosa.

6 OBJETIVOS

6.1 OBJETIVO GENERAL

Aislar, seleccionar, adaptar y preservar levaduras y hongos que tengan capacidad para
degradar lignina del bagazo de caña.

6.2 OBJETIVOS ESPECIFICOS

 Aislar levaduras y hongos con capacidad de degradar lignina a partir del bagazo
de caña de azúcar.

 Seleccionar las mejores cepas, de acuerdo a las condiciones de pH, temperatura y

otras en las que ellas van a degradar el bagazo de caña.

 Identificar macro y microscópicamente las levaduras seleccionadas, y adaptarlas a

un medio estable.

 Evaluar la capacidad de degradación de lignina de las levaduras aisladas del

bagazo de caña.

 Preservar las levaduras seleccionadas mediante críocongelación.

5
7 MARCO TEORICO

7.1 Bagazo de caña de azúcar

La caña de azúcar crece en climas tropicales y subtropicales. El bagazo es el residuo

fibroso que queda de la caña después de ser exprimida y de pasar por el proceso de
extracción. Por lo general el bagazo se utiliza en los ingenios azucareros como
combustible, sin embargo para la industria papelera representa una de las materias
primas más importantes.
El bagazo, subproducto de la industria azucarera, conserva una posición única entre las
fibras no leñosas consiste en que el costo de su recolección, la extracción de jugo y su
limpieza, son cargo del ingenio azucarero.

La temporada de procesamiento de la caña dura usualmente de cuatro a seis meses, pero

se extiende hasta nueve meses en Hawai, Perú, México. Puede reunirse y almacenarse
una cantidad adecuada de bagazo durante la temporada, con el fin de lograr una
operación continua en la fábrica de pulpa en tanto llega la caña.

7.1.1 Propiedades físicas y químicas del bagazo

El bagazo completo esta integrado por tres componentes principales:

- El recubrimiento, en el que se incluye la epidermis, la corteza y el periciclo.

- Los mazos de fibra vascular, entre los que figuran las células conductoras de
pared delgada asociadas con fibras de pared relativamente con estrecho lumen.
- El tejido básico (parénquima) o medula, con mazos de fibra distribuidos
irregularmente.

La composición química de las diferentes fracciones de bagazo, incluyendo el bagazo

entero, la fibra separada y la medula se indican en la Tabla 1.

Tabla 1. Propiedades químicas de las fracciones del bagazo (2)

Entero Fibra Medula

Solubilidad en éter (%) 0.25 0.12 2.5
Solubilidad en alcohol-benceno 4.1 1.8 2.8
(%)
Solubilidad en agua caliente (%) 2.5 0.9 1.9
Lignina (%) 20.2 20.8 20.2
Pentosas (%) 26.7 27.9 28.4
Hemicelulosa (%) 76.6 77.8 77.7
Alfa celulosa (%) 38.1 42.4 34.8
Ceniza (%) 1.67 0.7 2.29

6
7.1.2 Componentes principales de la materia prima

Un material de interés en las paredes celulares de la planta de la madera, es el material

ligninocelulósico, el cual esta formado por celulosas y hemicelulosas enlazadas mediante
lignina, un polímero aromático altamente oxigenado, con un esqueleto de fenilpropano
que se repite. Sobre esta matriz se deposita una mezcla de compuestos de bajo peso
molecular llamados extractivos.

a) Celulosa

Es el componente más simple encontrado en el material ligninocelulósico de las plantas,

es el más abundante en la biosfera. Esta compuesto por un polímero de residuos de D-
glucosa unidos por enlaces   1,4 , (Figura-1). Cada resto presenta una rotación de 180º
respecto a los restos contiguos, estabilizada por puentes de hidrogeno intramoleculares.
Debido a su estructura, las cadenas de celulosa se unen por puentes de hidrogeno
intermoleculares formando agregados (microfibrillas). La celulosa y el almidón pueden ser
hidrolizados para formar glucosa, pero sus estructuras son muy diferentes. La celulosa es
una molécula que da estructura y soporte a la planta. Las cadenas de glucosa están
arregladas de una manera que permite que se empaquen juntas formando un cristal que
es impermeable al agua. Consecuentemente el polímero celulosa es insoluble y resistente
a la hidrólisis.

Fig.1 Estructura química de la celulosa

b) Hemicelulosa

Las hemicelulosas forman cadenas cortas y son polímeros heterogéneos que contienen
tanto hexosas (azúcares de 6 carbonos como glucosa, manosa y galactosa) como
pentosas (azúcares de 5 carbonos como xilosa y arabinosa). Dependiendo de la especies
de la planta, estos azucares se asocian con ácidos urónicos formando estructuras

7
poliméricas diversas, qué pueden est6ar relacionados cercanamente tanto con celulosa
como lignina. Los tres polímeros principales son los xilanos, los mananos y los
arabinogalactanos.

c) Lignina

La lignina es un polímero complejo, tridimensional, globular, irregular, insoluble y de alto

peso molecular (>10,000), formado por unidades de fenilpropano cuyos enlaces son
relativamente fáciles de hidrolizar por vía química o enzimática. Ésta molécula tiene
diferentes tipos de uniones entre unidades aromáticas de fenilpropano (Figura 2).

Fig.2 Estructura de la lignina

En las plantas, la lignina se encuentra químicamente unida a la hemicelulosa y rodeado a

las fibras compuestas por celulosa. Es responsable de la rigidez de las plantas y des sus
mecanismos de resistencia al estrés y a ataques microbianos. Es especialmente
abundante (20-30% del peso de la pared) en células conductoras (vasos xilemáticos) y
estructuras (fibras) con engrosamiento secundario.
En cuanto a su biosíntesis, se sabe que los precursores de la lignina se forman por
conducto de la ruta correspondiente al acido shiquimico. Éste acido, formado por unión

8
del acido fosfoenolpirúvico y eritrosa-4-fosfato, se convierte en el principal escalón de la
biosíntesis de los aminoácidos L-tirosina y L-fenilalanina, que están formados por
aminación reductiva. Las enzimas desaminantes convierten a continuación los dos
aminoácidos en sus respectivas contrapartes del acido shinamico.
La hidroxilación en etapas por hidroxilasa, y en su momento la metilación por o-
metiltransferasas, transforma los ácidos shinámicos en los tres ácidos para hidroxi-
shinámicos conocidos como precursores de la lignina.
Por el productor de pulpa y de papel, la lignina es un componente de la madera que
ocasiona de los problemas que surgen durante la producción de la pulpa. De no ser por la
lignina no resultaría necesario aplicar reactivos fuertes alcalinos o ácidos para la
deslignificación química de la madera a fin de obtener pulpa y productos de papel. La
deslignificación es la meta más importante en la producción de papel.

d) Extractivos

Los extractivos son aquellas sustancias que se encuentran presentes en las diferentes
fibras vegetales, pero que no son carbohidratos, tales como ácidos grasos, terpenos,
fenoles y resinas. Muchos de estos compuestos son solubles en agua o disolventes
orgánicos polares como el metanol, etanol o acetona, por lo que se eliminan rápidamente
en los procesos extracción de celulosa.

7.2 Empleo de substrato orgánico por los microorganismos

Todas las formas de vida, desde los microorganismos hasta los seres humanos toman del
ambiente las sustancias que requieren para sintetizar su material celular, generar energía
y efectuar un funcionamiento adecuado. Estas sustancias se denominan nutrientes o
substratos y el consumo o degradación de los mismos, depende de los siguientes
factores:

Composición elemental, la estructura de las unidades básicas de repetición, los enlaces

entre unidades de repetición, los nutrientes presentes en el ambiente, la comunidad
microbiana presente y las condiciones abióticas como pH, potencial de oxido-reducción,
O 2 , condiciones osmóticas. Los principales substratos complejos que utilizan los
microorganismos se resumen en la Tabla-2

La lignina es un caso especial en el que la biodegradabilidad depende la disponibilidad de

oxigeno. A menudo no existe una degradación sustancial porque la mayoría de los
hongos filamentosos que degradan lignina, pueden actuar solo en presencia de oxigeno.

Tabla 2. Características de los substratos orgánicos complejos que influyen en la

descomposición y la degradabilidad.

9
 Elementos Degradación
presentes en
gran cantidad

Substrato Subunidad Enlaces C H O N P Con Sin

básica O2 O2

Almidón Glucosa  (1  4) (1  6) + + + - - + +

Celulosa Glucosa  (1  4) + + + - - + +

Hemicelulosa Monosacáridos  (1  4) + + + - - + +
C5 y C6  (1  3)
 (1  4)

Lignina Fenilpropano Enlaces C-C, + + + - - + -

C-O

Quitina N-  (1  4) + + + + - + +
acetilglucosamina

Proteínas Aminoácidos Enlaces + + + + - + +

peptídicos

Hidrocarburo Alifático, cíclico, + + - - - + +/-+

s aromático

+Lípidos Glicerol, ácidos Esteres + + + + + + +

grasos

7.3 Organismos degradadores de lignina y mecanismo de biodegradación

Como se menciono anteriormente, la pared celular de los tejidos vegetales esta

constituida por lignina, una substancia difícil de degradar y que los hongos descomponen
debido a que poseen enzimas que rompen dicha molécula y dependiendo de cómo los
hongos lo ataquen, se clasifican en hongos de pudrición blanca y hongos de pudrición
parda (o de color café), Los hongos de pudrición blanca han sido ampliamente
investigados como posibles organismos utilizados en la biorremediación de suelos
contaminados con hidrocarburos aromáticos policíclicos (HAP) y en la degradación del
polímero lignina
Estos hongos no pueden utilizar directamente lignina como su fuente de carbono y
energía, por ello dependen de azúcares mas digeribles como los monómeros precursores
de fenilpropano. La función primaria de la ligninólisis es exponer estos monómeros al

10
ataque del hongo con ayuda diferentes tipos de enzimas. En la mayoría de los hongos se
ha visto que la ligninólisis ocurre durante el metabolismo secundario, es decir bajo
limitación de nutrientes, lo que permite que el hongo solo sintetice y secrete agentes
ligninoliticos que comiencen a fragmentar el polímero.

Por otra parte se sabe que dos de las mas conocidas peroxidasas (enzimas que atacan a
la lignina) son secretadas por diversos hongos entre ellos Pleurotus eryngii. Una de ellas
es la enzima es la enzima de manganeso peroxidasa y la otra es la enzima lignina
peroxidada. Este hongo ha sido muy estudiado debido a su capacidad de degradar lignina
selectivamente cuando crece en substratos naturales y por lo tanto es un organismo
considerado como modelo para estudios de biodegradación de lignina y con aplicaciones
biotecnológicas.

En términos generales la degradación de lignina es catalizada por un complejo enzimático

extracelular que poseen algunos hongos. Los mayores componentes de este sistema
incluye a la enzima peroxidada (LiP), manganeso peroxidasa (MnP) y al enzima
generadora de peroxido glioxal oxidasa (GLOX). Bajo condiciones de limitación de
nutrientes en el medio de cultivo, diversos hongos son capaces de secretarlas.

7.3.1 Levaduras degradadoras de lignina

Tabla 3. Propiedades de los microorganismos de interés biotecnológico

CARACTERISTICAS

Descripción
Características típicas de levaduras y hongos
Fenotípica

Hábitat Bagazo de caña de azúcar.

Grupo
Quimiorganotrófico
trófico

Fuente de
Carbono y Lignina (Heterótrofo)
energía

Grupo
aceptor de Oxígeno
electrones

Fórmula
maestra del Lignina  O2 
 Biomasa  Célulosa  Hemicelulosa  CO2  H 2 O
bioproceso

Como se menciono anteriormente, la descomposición de lignina la realizan principalmente

basidiomicetos de pudrición blanca. Dichos hongos no tienen substrato específico y
pueden oxidar a una gran variedad de componentes incluyendo contaminantes

11
ambientales. Sin embargo existen otros microorganismos aislados del suelo que pueden
tener una actividad similar. La habilidad de algunas especies de levaduras para
biodegradar lignina ha recibido poca atención, en comparación con los hongos
basidiomicetos.
Recientemente, se ha descrito que algunas especies de levaduras como Candida
ingeniosa, Rhodotorula graminis y Rhodotorula mucilaginosa son organismos que
degradan productos derivados de lignina.

8 MARCO METODOLOGICO

8.1 METODOS GENERALES DE ANALISIS

8.1.1 Muestreo

Las muestras se tomaran del residuo de la elaboración de jugo de caña de azúcar, del
sector de Tambillo, esta será representativa y recogida a diferentes tiempos, durante un
día de producción.

8.1.2 Preparación de la muestra

Se molera perfectamente la muestra y se pesara 10 g de la misma, posteriormente se

colocaran en un matraz con 90 ml de agua destilada estéril, se agitará y se hará
diluciones que van desde 10-2 hasta 10-7.

8.2 METODOS ESPECIFICOS DE ANALISIS

8.2.1 Diseño del medio de cultivo

Medio minimal + Agar

Compuesto Cantidad
K2HPO4 1,73 g
KH2PO4 0,68 g
(NH4)2SO4 0,83 g
MgSO4. 7H2O 0,10 g
Solución de elementos 1 ml
traza
Lignina* 0,2 %
Agar 15 g
Gentamicinaª 1 ml
Agua destilada 1000 ml

Medio minimal líquido

Compuesto Cantidad

12
 K2HPO4 1,73 g
KH2PO4 0,68 g
(NH4)2SO4 0,83 g
MgSO4. 7H2O 0,10 g
Solución de elementos 1 ml
traza
Lignina* 0,2 %
Agua destilada 1000 ml
pH=5

*Se utiliza como fuente de carbono presentes en el bagazo de caña de azúcar.

8.2.2 AISLAMIENTO DE LEVADURAS Y HONGOS DEGRADADORES DE LIGNINA

Las muestras obtenidas se sembrarán por el método de extensión (asa de digrasky) en el

medio minimal, tres cajas petri por dilución, y se dejarán a temperatura ambiente durante
cinco días en aerobiosis.

El pH del medio minimal mas agar debe ser de 5 debido a que las levaduras que se van a
aislar crecen mejor a ese pH y los otros microorganismos que no son de nuestro interés
no.

De las cepas levaduriformes que se reproducirán en el medio al cabo de cinco días, las
enriquecemos nuevamente en un medio de cultivo líquido (medio base), las llevamos al
shaker durante 24 horas a 37º C y 150 rpm.

8.2.3 PURIFICACION

Para evitar el crecimiento de bacterias y hongos filamentosos se sembrarán las diluciones

enriquecidas en medios Saburoud (anexo 1) y otras en medio papa dextrosa (anexo1)
adicionadas con tetraciclina para inhibir el crecimiento de los organismos mencionados
anteriormente.

8.2.4 IDENTIFICACION

Análisis de la morfología micro y macroscópica

A cada una de las cepas aisladas se les realizará tinción Gram para observarlas al
microscopio. Y se observará como crecen en el medio de cultivo.

8.2.5 SELECCIÓN DE LOS MICROORGANISMOS LEVADURIFORMES

13
Parámetros de selección:

Parámetros de
selección
pH 4,5 a 6,5
Temperatura 24 y
48ºC.

Se utilizará un pH de 5 y una temperatura de 37ºC, para las levaduras de nuestro interés

Concentración de nutrientes

La lignina es el principal compuesto para el crecimiento de este tipo de levaduras, el

bagazo de caña de azúcar tiene alrededor del 20%.

Para la selección de las cepas con mayor poder degradador elaboraremos medios con las
siguientes concentraciones de lignina 0.2, 0.4, 0.6 y 0.8% respectivamente. Por lo tanto la
selección se efectuará en el medio de cultivo con estas concentraciones.

Los microorganismos seleccionados serán puestos nuevamente en un medio minimal

líquido y sólido, con la diferencia de que esta vez el medio base contendrá como fuente
de carbono el bagazo de caña de azúcar que van a ser degradados. Después de sembrar
los microorganismos seleccionados estos deberán permanecer por lo menos cuatro o
cinco días a temperatura ambiente para su crecimiento

8.2.5.1 Curva de crecimiento y evaluación de la capacidad degradadora de lignina

Para verificar tanto el crecimiento de los organismos aislados como su capacidad de

degradar lignina se emplea en medio minimal adicionado con lignina al 0,2% en forma de
medio liquido en matraces de 250 ml, se sembraran las diferentes levaduras bajo las
siguientes condiciones de crecimiento: pH = 5 , temperatura ambiente y agitación a 150
rpm.

Curva de crecimiento

Para evaluar el crecimiento de las cepas se tomaran diariamente 1ml de medio de cultivo
de cada uno de los matraces donde se sembraron las levaduras, se colocaran en tubos
de ensayo que contengan 9 ml de agua estéril, se mezclaran y a partir de estos, se
realizaran diluciones hasta 10-7. Posteriormente cada dilución se sembrara en caja petri
con medio solido YEPD (anexo 1). Cada caja se incubara a 37°C y una vez obtenido el
crecimiento se contaran las levaduras.

Degradación de lignina

14
Para analizar la degradación se observaran diariamente los matraces con el fin de
verificar el cambio de coloración del medio de cultivo.

8.2.6 PRESERVACIÓN

Para la preservación de las cepas puras que son de utilidad biotecnológica se usara la
técnica de criocongelación (crioviales con glicerol al 20%).

9 FACTIBILIDAD

RECURSOS FACTIBILIDAD
Económicos Se gastará en material desechable como cajas petri,
algodón, alcohol, entre otros: estos se encuentran a
disposición de parte de todos los integrantes

Reactivos y medios El laboratorio de microbiología proporcionará los medios

requeridos, los reactivos que no disponga este se nos
facilitará en laboratorios de la misma facultad

Luz y agua potable Se estimarán los cortes de luz previamente y se

manejará de acuerdo a estos horarios, el agua potable
se encuentra a nuestro alcance

Tiempo El proyecto durará alrededor de 30 días.

Personal Los integrantes del grupo están a disposición y con la
capacitación necesaria.

10 CRONOGRAMA

15
 Fecha
16 de Diciembre de 2009
17 de Diciembre de 2009
18 de Diciembre de 2009
22 de Diciembre de 2009
23 de Diciembre de 2009
28 de Diciembre de 2009
04-08 de Enero de 2010
04-21 de Enero de 2010
22 de Enero de 2010
Actividad
Muestreo (Zona Tambillo)
Preparación del material y de medios
Preparación de la muestra y siembra en
medio minimal mas agar
Observación del crecimiento de las cepas
elección y resiembra en medio minimal
base líquido
Observación del crecimiento de las cepas y
resiembra en medios comerciales (cepas
puras)
Obtención de las cepas puras e
identificación
Muestreo diario para evaluar la curva de
crecimiento
Evaluación de la capacidad degradadora
de lignina
Entrega de resultados y publicación del
proyecto en la red

11 BIBLIOGRAFÍA

1. www.unsa.edu.ar/matbib/hongos/09htextolevaduras.pdf
2. home.aigonline.com/AIGEnvironmental/ind_profile/read_p0rofile/1,1990,MTYtL0FJ
R0Vudmlvb25tZW50YWwvSW5kdXN0c...-50k.
3. http://www.umbbd.ahc.umn.edu:8015/umbbd/servlet/pageservlet?ptype=pypathwa
y_abbr=van-5k
4. http://www.fao.org/docrep/n5525S/n5525s01.htm.
5. http://www.fao.org/docrep/n5525S/lignin.htm.
6. http://www.bioxamara.tuportal.com.
7. http://www.industry/.lignin.com.
8. http://www.nrel.gov/biotech_symposium/docs/abst1b-48.doc
9. http://www.bioplanet.net/magazine/bio_julago_2001_julago_industria.htm.
10. http://www.unsa.edu.ar/matbib/micagrip3.pdf

16
ANEXOS

17
 12 ANEXOS

12.1 Composición de medios de cultivo

Solución de elementos traza Medio glucosado Sabouraud

Compuesto Cantidad Compuesto Cantidad

CaCl2.H2O 1g Glucosa 20 g

MnSO4.H2O 0.3 g Peptona 10 g

FeSO4.7H2O 0.5 g Agar 20 g

EDTA.7H2O 0.2 g Agua destilada 1000 ml

Agua destilada 100 ml pH = 5

Medio de agar papa-dextrosa (PDA) Medio líquido YEPD

Compuesto Cantidad
Compuesto Cantidad
Papa 250 g
Extracto de 5g
Glucosa anhidra 1% levadura

Peptona de carne 1% Peptona 5g

Agar 15 g Glucosa 10 g

Agua destilada 1000 ml Agua destilada 500 ml

pH = 5 pH = 5