UNIVERSIDAD NACIONAL SAN LUISGONZAGA

DE ICA
FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUMICA

Gua Prctica:
NALISIS
INSTRUMENTAL II
Autores:
Dr. Felipe Artemio Surco Laos
Mg. Manuel Alfredo Valle Campos
Mg. Luz Yarasca Arcos
ICA - PER
2014
2 EDICIN

PRESENTACIN
Esta segunda edicin de gua de prcticas resulta francamente
til a los alumnos que llevan el curso de anlisis instrumental en el VI
ciclo de Farmacia y Bioqumica

interesados en las tcnicas

instrumentales, ya que permitir abundar en el conocimiento de los

principios de los mtodos elctricos y de separacin instrumental
(cromatografa) utilizados actualmente.
En una primera parte durante el desarrollo del curso se realizara
una serie de experiencias orientadas en el manejo del instrumental
electroqumico as como adquirir destreza y habilidades necesarias
para llevar a cabo de manera exitosa un anlisis qumico de analitos
por tcnicas electroqumicas.
En la segunda parte est orientada a la aplicacin de las
tcnicas de separacin cromatogrfica, en la cual se realizara una
serie de prcticas orientadas a capacitar al estudiante en el manejo del
instrumental cromatogrfico.
En las pginas de esta gua se puede observar la adaptacin de
algunas tcnicas analticas orientadas al anlisis de soluciones de uso
comn en el laboratorio as como una orientacin hacia el control de
calidad de alimentos y medicamentos como campo de accin del
futuro

profesional

qumico

farmacutico,

adecundolas

las

limitaciones propias de un laboratorio de enseanza universitario

teniendo en cuenta que el tiempo de duracin de una prctica es una
de las principales condicionantes.

Los estudiantes debern venir a las practicas habiendo ledo las

experiencia a realizarse ese da, despus de realizada debern
entregar un informe de la prctica realizada en la fecha indicada por el
profesor, este informe debe incluir un resumen tipo artculo cientfico,
datos

experimentales,

anlisis,

conclusiones

referencias

consultadas.
Agradecemos a todos aquellos que de una u otra manera han
hecho posible que la presente gua est disponible para utilizacin y
orientacin del alumnado.
Los autores

EXPERIENCIA N
CRITERIOS ANALITICOS

INTRODUCCIN
El anlisis instrumental no es ms que la qumica analtica moderna, la se ocupa
de los mtodos de cuali-cuantitativos para determinar la composicin de la materia
mediante el uso de un instrumento o equipo analtico. Un mtodo cualitativo
informa sobre la identidad de las especies atmicas o moleculares de la muestra,
y un mtodo cuantitativo aporta informacin de la cantidad relativa de uno o varios
componentes de la muestra.
Antes de empezar una determinacin el analista debe poder definir con claridad la
naturaleza del problema analtico que va enfrentar; as como los recursos que
necesita para cumplir el objetivo planteado.
OBJETIVO.
Conocer y desarrollar el criterio analtico del alumno frente a diferentes problemas
analticos.
PROCEDIMIENTO.
1.- Se desea analizar cobre en una solucin de una muestra, la cual se
determinara por espectrofotometra a una de 625 nm. Se debe determinar una
curva de calibracin de 5 estndares a partir de100 mL soluciones Cu(NO 3)2 (5,
10, 15, 20. 25 ppm) ms un blanco, la muestra se analizara por duplicado. La
tcnica analtica indica que a 25 mL de la muestra o estndar se deber adicionar
5mL H2SO4 0.028M como acomplejante y luego enrasar a 25 con H 2O destilada,
homogeneizar y leer.
2.- En una planta de jugos y conserva, se encuentran en produccin de varios
lotes de mermelada y desea medir la cantidad de acidez y azucares disueltos de
estos productos.

 Considere que la determinacin de acidez se realiza tomando 10 g del

producto el cual se debe llevar a 100mL con agua destilada, agitar por 10
minutos y luego tomar una alcuota de 20 mL y titular con NaOH 0.1N
La determinacin de azucares disueltos, se efecta por refractometra
directamente en un sacarmetro digital de un rango de lectura entre 45 a 93
grados Brix.
Teniendo en cuenta su criterio analtico y las indicaciones realizadas en clases
para determinacin responder las preguntas del informe:
INFORME
1. Qu de reactivos y cantidad (en grado reactivo) necesita para cada una de
las tcnicas utilizadas considerando el nmeros de muestra indicado por el
profesor?
2. Qu y cuantos materiales y equipos de laboratorios requerir para realizar
los ensayos indicados?
3. Clasifique los tres mtodos utilizados de acuerdo a lo estudiado en anlisis
instrumental I
CONTROL DE ASISETNCIA: FECHA
Nombre del alumno

Firma de alumno

Visado del Profesor

REFERENCIAS
1.- Duoglas A. Skoog. 2000 Principios de anlisis Instrumental 5 a Ed. McGrawHill
Madrid.
2.- M. Willard 2000 Anlisis Instrumental. Ed. Continental Mxico.

EXPERIENCIA N

PRESENTACION DE UN POTENCIOMETRO
INTRODUCCION.
El potencimetro es un equipo que puede medir tanto el pH como el potencial
elctrico generado por una solucin, este ltimo se expresa en milivoltios.
En cambio un pHmetro es un equipo que solo se utiliza para medir el pH. Este
equipo bsicamente esta conformado por un par de electrodos (de referencia y
indicador) los cuales pueden estar separados o unidos en una misma unidad
(combinado).
OBJETIVO.
Conocer las partes y el funcionamiento de un potencimetro de laboratorio.
MATERIALES.

- Potencimetro portatil Modelo HANNA

- Solucin Buffer de pH 4,0 ; 7,0; 10,0
- Vaso de precipitado x 50 ml y 150 ml
- Pizeta
- Agua destilada
- Papel absorbente
- Soluciones cidas: HCl 0.1N y CH3COOH 0.1N
- Soluciones alcalinas: KOH 0.1N NH4OH 0.1N
PARTES DEL EQUIPO:
1 Electrodo combinado de vidrio- calomel
2 Teclado sensible
3 Sensor de Temperatura

MANEJO DEL EQUIPO:

1. Conectar adecuadamente el electrodo en la parte posterior del panel de
teclado en la zona sealada como INPUT.
2. Conectar la fuente de poder (transformador) en la parte posterior del panel
de teclado (Power Off)
3. Conectar el sensor de temperatura en la parte posterior C
4. Presionar el botn de encendido POWER y dejar encendido por lo menos
de 15 a 20 segundos con la finalidad que todos los sistemas internos se
estabilicen; luego de pasado este tiempo realizar
5. La seleccin del parmetro en el cual se va ha trabajar utilizando el selector
de parmetros (RANGE) en la parte central del display digital o pantalla de
lectura aparecer pH si se va a leer pH o mv si se va a medir voltajes,
posteriormente:
6. Realizar la calibracin para esto se presiona el botn de calibracin CAL en
la parte superior de la pantalla aparecer en forma oscilante las palabras
CAL NOT READY
7. Luego se debe seleccionar el patrn con el cual se va ha realizar la
calibracin de este equipo utilizando los botones

V C

dependiendo del tipo de muestra que se va ha trabajar este equipo posee

patrones cidos, neutros y alcalinos que aparecen en la parte inferior
derecha de la pantalla de lectura.
8. Una vez seleccionado el patrn introducir el electrodo en la solucin que
contiene el valor de pH que se ha seleccionado y esperar que aparezca en
la parte superior derecha de la pantalla las letras CFM. En caso de sumergir
el electrodo en una solucin patrn que tiene un pH distinto al que se ha
seleccionado aparecer la palabra WRONG (Error) y un pequeo electrodo
en este caso se debe iniciar nuevamente el procedimiento desde el paso 6.
9. Presionar nuevamente el botn CAL y el equipo queda automticamente
calibrado a todo este proceso se le llama calibracin de un punto.

Si se desea realizar una calibracin de dos puntos es decir utilizando dos

soluciones patrones o buffers luego del paso 8 se presentar nuevamente las
palabras CAL NOT READY en forma oscilante en este caso se debern realizar
nuevamente los pasos 7 y 8 en esta ocasin luego de realizado el paso 8 el
equipo queda automticamente calibrado.
Es necesario recordar que cada vez que el electrodo es retirado de una solucin
sea un buffer o una muestra se debe lavar con abundante agua destilada y secar
con papel absorbente y al terminar el trabajo se debe colocar en el protector
respectivo o en su defecto en un vaso de precipitado que contenga agua destilada
con la finalidad de evitar problemas que se producen con l.
Leer el pH de

soluciones 1 y 2 acida, 3 y 4 alcalinas proporcionadas por el

profesor, despus de las calibraciones respectivas.

INFORME.

Dibujar el equipo y sealar sus partes

Indique el pH de los diferentes buffers con los que puede calibrar el

equipo?

Qu parmetros que puede medir con este equipo?

Cules son los cuidados que debera tener con el electrodo?

Porque difiere el pH de entre soluciones cidas de la misma concentracin,

y entre las alcalinas de las misma concentraciones analizadas.

CONTROL DE ASISETNCIA: FECHA

Nombre del alumno

Firma de alumno

Visado del Profesor

REFERENCIAS

- Douglas A. Sookg. 2000 Principios de anlisis Instrumental 5 a Ed.

McGrawHill Madrid.

- Danil C, Harris. 1992 Anlisis qumico Cuantitativo Ed. Iberoamericana

Mxico.

- Hanna. Manual de pHmetro PH211

EXPERIENCIA N

PRESENTACION DE UN POTENCIOMETRO PORTATIL

INTRODUCCION.
Muchas veces al realizar un trabajo se debe realizar fuera de las instalaciones del
laboratorio o donde no hay una fuente de energa alterna y el anlisis de realizase
en el momento que se toma la muestra, en estos casos se hace uso de equipos
porttiles los cuales emplean como fuente de poder una fuente de energa
continua como son las bateras o pilas.
Un pHmetro es un equipo que solo se utiliza para medir el pH. Este equipo que se
utilizara bsicamente est conformado por un electrodo combinado, en el cual se
encuentra integrado el electrodo de referencia e indicador.
OBJETIVO.
Conocer las partes y el funcionamiento de un potencimetro de campo.
MATERIALES:

Potencimetro porttil Modelo HANNA

Solucin Buffer de pH 4,0 ; 7,0; 10,0

Vaso de precipitado x 50 ml y 150 ml

Pizeta

Agua destilada

Papel absorbente

Vinagre

Bebida carbonada

Solucin de detergente al 1%

Solucin de champ.

PARTES DEL EQUIPO:

1 Electrodo combinado de vidrio- calomel
2 Teclado sensible

3 Sensor de Temperatura
MANEJO DEL EQUIPO:
1. Conectar adecuadamente el electrodo en la parte posterior del panel de
teclado en la zona sealada como INPUT.
2. Conectar el sensor de temperatura en la parte posterior C
3. Presionar el botn de encendido POWER y dejar encendido por lo menos
de 1 a 2 minutos con la finalidad que todos los sistemas internos se
estabilicen; luego de pasado este tiempo realizar
4. La seleccin del parmetro en el cual se va ha trabajar utilizando el selector
de parmetros (RANGE) en la parte central del display digital o pantalla de
lectura aparecer pH si se va a leer pH o mv si se va a medir voltajes,
posteriormente:
5. Realizar la calibracin para esto se presiona el botn de calibracin CAL en
la parte central de la pantalla aparecer en forma oscilante la letra E 4
6. Una vez seleccionado el patrn que necesariamente tendr que ser de pH 7
(neutro) introducir el electrodo en la solucin observar que tanto el valor
del pH 7 y las letras pH que aparece en la parte superior derecha de la
pantalla se encuentran oscilando esperar a que las letras pH se estabilicen.
En caso de sumergir el electrodo en una solucin patrn que tiene un pH
distinto al que se ha seleccionado aparecer la letra E 4 en este caso se
debe iniciar nuevamente el procedimiento desde el punto 5.
7. Presionar el botn CFM

y en la pantalla de lectura aparece en forma

oscilante la letra E5 lo que indica que debe colocarse el siguiente patrn.

8. En la pantalla aparecer el valor del pH del patrn seleccionado (4 10) y
en la parte superior derecha las letras pH ambas en forma oscilante esperar
a que las letras pH se estabilicen presionar el botn CFM y el equipo
queda automticamente calibrado a todo este proceso se le llama
calibracin de dos puntos.

Es necesario recordar que cada vez que el electrodo es retirado de una solucin
sea un buffer o una muestra se debe lavar con abundante agua destilada y secar
con papel absorbente y al terminar el trabajo se debe colocar en el protector
respectivo o en su defecto en un vaso de precipitado que contenga agua destilada
con la finalidad de evitar problemas que se producen con l.
Determine el pH de la soluciones de pruebas, luego de realizada la calibracin.
INFORME.

Dibujar el equipo y sealar sus partes

Qu mensajes puede indicar el equipo y cules son sus significados?

Puede realizar la calibracin a un punto, porque?

Cmo cree Ud, que la temperatura afecte la medida del pH?

Explique el valor de pH obtenido en las soluciones de prueba

.

CONTROL DE ASISETNCIA: FECHA

Nombre del alumno

Firma de alumno

Visado del Profesor

REFERENCIAS

- Douglas A. Sookg. 2000 Principios de anlisis Instrumental 5 a Ed.

McGrawHill Madrid.

- Danil C, Harris. 1992 Anlisis qumico Cuantitativo Ed. Iberoamericana

Mxico.

- Hanna. Manual de pHmetro HI8424

- M. Willard 2000 Anlisis Instrumental. Ed. Continental Mxico.

EXPERIENCIA N
VALORACIN CIDO-BASE: DETERMINACIN DEL CONTENIDO DE CIDO
ACETILSALICLICO EN UNA ASPIRINA
INTRODUCCION.
En este caso se realizara un anlisis cuantitativo volumtrico basado en
valoracin cido-base. El cido acetilsaliclico es un cido dbil, y por lo tanto en
soluciones acuosas, liberara protones que pueden neutralizarse mediantes los
iones hidroxilos presente en las soluciones de hidrxido de sodio.
C8H7O2-COOH + NaOH C8H7O2-COONa

+ H2O

El cido acetilsaliclico es un acido dbil, por lo tanto, su punto de equivalencia

estar ligeramente desviado hacia la zona de pH bsico. En el punto de
equivalencia se tendr, que cumplir que:
nde moles de cido acetilsaliclico = nde moles hidrxido de sodio
Por tanto a partir de la cantidad de disolucin de NaOH gastada se puede
determinar la cantidad de cido acetilsaliclico presente en la aspirina.
OBJETIVO.
Aprendizaje y aplicacin de una tcnica anlisis cuantitativa volumtrica
(valoracin cido-base) y verificacin de los cambios de pH.
Materiales y Reactivos

- Balanza analtica
- Agitador magntico
- Soporte universal y pinzas
- Bureta
- Vaso de precipitado
- Luna de reloj
- Fiola de 100 mL (matraz aforado)

- Matraz de 250 mL
- embudo
- Esptula
- pHmetro
- Aspirina
- Hidrxido de sodio
- Fenolftalena
- Pizeta
- Mortero
PROCEDIMIENTO.
Prepara 100 ml de solucin de NaOH 0.3 N y estandarizarlo utilizando biftalato de
potasio. (Pesar 0.050 g y disolver en 20 ml de agua destilada). Estando la bureta
limpia enjuagar con una pequea cantidad de la base preparar y luego colocar la
solucin en la bureta enrasndola a cero.
Pesar una tableta de aspirina en la balanza y pulverizarla en un mortero transferir
a un vaso de precipitado, adicionar aproximadamente 80 mL de agua destilada y
agitar hasta que se disuelva, transferir a una fiola de 100 mL,

enrasar y

homogeneizar, transferir a un matraz y medir el pH.

Adicionar 2 -3 gts de fenolftalena en el matraz colocar en el agitador a agitacin
moderada y realizar la titulacin con la solucin de NaOH desde bureta gota a
gota, la hasta la aparicin de una coloracin rosa plido permanente. Esto indica
el final de la valoracin, medir el pH.
Anotar el volumen de NaOH gastado y calcular el nmero de moles en la
disolucin gastada, conviene realizar la valoracin por duplicado.
INFORME:

Clculo matemtico para preparar la solucin utilizada?

Calcular la masa de cido acetilsaliclico contenido en la aspirina?

Determinar la pureza en porcentaje de cido acetilsaliclico que contiene la

aspirina con respecto a lo declarado.

Podra realizar la valoracin sin la utilizacin de un indicador.

CONTROL DE ASISETNCIA: FECHA

Nombre del alumno

Firma de alumno

Visado del Profesor

REFERENCIA

- Douglas A. Sookg. 2000 Principios de anlisis Instrumental 5 a Ed.

McGrawHill Madrid.

- Danil C, Harris. 1992 Anlisis qumico Cuantitativo Ed. Iberoamericana

Mxico.

- USP 35. Washington .EUA. 2011

- IES Antonio Clavin. Valoracin cido-base

EXPERIENCIA N
DETERMINACIN DE ACIDEZ TOTAL EN VINO
(MTODO POTENCIOMETRICO)
INTRODUCCION.
La acidez total (titulable) de un vino es la cantidad disponible de iones hidrgeno
en solucin.
Los cidos presentes en los mostos y vinos (tartrico, mlico, lctico, actico, etc)
son cidos orgnicos relativamente dbiles; de esta manera, cuanto son
completamente titulados con una base fuerte el verdadero punto final ser mayor
que un pH 7. La organizacin internacional de vino aconseja titular hasta un pH de
8.1-8.2.
OBJETIVO.
Determinar la acidez del vino y realizar una valoracin potenciomtrica.
Materiales
Vasos de ppdo x 100 ml
Baguetas
Probetas
Fiola x 200 ml
Bureta x 25 ml
Porta Bureta
Esptula
Pipeta x 10 ml
Vasos de ppdo x 50 ml

Buffer pH 7
Buffer pH 4
Magneto N 3
Soporte Universal
Reactivos
NaOH
Biftalato de Potasio
Agua destilada

Papel tissue
Fenolftalena
Equipos
Balanza Analtica
Agitador Magntico
pHmetro
Molino analtico

PROCEDIMIENTO
- Desgasificar 100 mL de vino en un matraz Kitasato de 250 mL con vaco y
agitacin por 3 minutos.
- Calibrar el pHmetro y ajustar la temperatura de la muestra y los estndares.

- Ambientar una bureta con NaOH 0.1N y enrasarla.

- Tomar 20 mL de la muestra y colocar en un vaso pp. de 100 mL. Agitar
continuamente con el agitador magntico e introducir el electrodo, con el bulbo
totalmente sumergido. Leer una vez estabilizado el pH.
- Comenzar a titular la muestra con agitacin constante hasta llegar a pH = 8.2.
EXPRESIN DE RESULTADOS
La acidez del vino, expresada como los gramos de cido sulfrico o tartrico
por L de producto, es igual a:
g/L =

V x NNaOH x P.eg. de cido

Vm

Donde
V = Es el volumen, en mililitros, de la solucin de hidrxido de sodio usada en
la titulacin
NNaOH = normalidad exacta del NaOH usado
Vm = volumen de la muestra.
P eq. = peso equivalente del cido en que se va expresar.

INFORME

Qu es el vino?

Porque es necesario realizar el tratamiento previo de la muestra?

Cules son los rangos permitidos de acidez que debe cumplir un vino?

En tipos de acidez se pueden medir en los vinos?

Cmo se clasifica los vinos de acuerdo a su contenido de azucares?

CONTROL DE ASISTENCIA: FECHA

Nombre del alumno

Firma de alumno

Visado del Profesor

REFERENCIAS

- AOAC 2012.- Asociation Official Analitys Chemistry

- Douglas A. Sookg. 2000 Principios de anlisis Instrumental 5 a Ed.
McGrawHill Madrid.

- Daniel C, Harris. 1992 Anlisis qumico Cuantitativo Ed. Iberoamericana

Mxico.

- Boudeu Edmundo, 1998. Anlisis qumico del vino Editorial Universidad

Catlica de Chile 1a Edicin, Santiago.

- M. Willard 2000 Anlisis Instrumental. Ed. Continental Mxico.

EXPERIENCIA N
DETERMINACIN DEL pH DEL SUELO

INTRODUCCIN.
La acidez del suelo se presenta en dos formas fundamentales:
1. Activa: En la cual los H+ actan directamente sobre el sistema radicular y en la
dinmica de los elementos nutritivos en los suelos.
2. Potencial: La cual depende del porcentaje de saturacin de Bases del suelo y
se mide con soluciones extractoras como el KCl 1N.
La acidez activa pH es la concentracin de H + (libres) que contienen el extracto
del

suelo. En la prctica se utilizan varias relaciones suelo-agua para la

determinacin del pH bien sea en peso en volumen. En muchos laboratorios se

suele utilizar una relacin suelo agua 1: 2 peso/volumen sin embargo esta relacin
no es muy apropiada ya que dista mucho de la realidad que vive el sistema
radicular de las plantas.
OBJETIVO.
Determinacin del pH en suspensiones de Suelo Agua 1:2 V/V
MATERIALES Y RECTIVOS
- Agua destilada
- Solucin tampn pH 7
- Solucin tampn pH 4
- Potencimetro
- Vasos de precipitado de 100 mL
- Varillas de vidrio o plstico.

PROCEDIMIENTO

Se toman 30 ml de suelos en pasta saturada, se le agregan 60 mL de agua

destilada se agita durante una hora y se hace lectura directamente sobre la
suspensin. Clculos: El equipo d la lectura directa del pH.
Este mtodo tiene el inconveniente de que no refleja muy bien la realidad del
campo. Primero la relacin agua/suelo es muy elevada. Las races normalmente
no estn en dicha relacin. Segundo, en agua destilada el resultado difiere del que
ocurre realmente en el suelo con el agua de riego de las fincas.
INFORME

Indicar las caractersticas de la muestra de suelo analizada.

Cul fue el pH obtenido?

De acuerdo al pH obtenido de su muestra averiguar que tipos de cultivos

serian los ms apropiados para ese terreno.

CONTROL DE ASISTENCIA: FECHA

Nombre del alumno

Firma de alumno

Visado del Profesor

REFERENCIAS
-

AOAC 2012.- Asociation Official Analitys Chemistry

Douglas A. Sookg. 2000 Principios de anlisis Instrumental 5 a Ed.

McGrawHill Madrid.

Daniel C, Harris. 1992 Anlisis qumico Cuantitativo Ed. Iberoamericana

Mxico.

F. Caldern y M. Pavlova. 1999 Metodologas para Anlisis Qumico de

Suelos.

EXPERIENCIA N
PRESENTACION Y MANEJO DE UN CONDUCTIMETRO

INTRODUCCIN.
Un conductmetro es instrumento capaz de medir la capacidad de una solucin de
conducir la corriente elctrica, la conductancia se define como el recproco de la
resistencia y se expresa en unidades de sienmes.
Algunos equipos pueden realizar lectura de conductividad elctrica, as como
slidos totales disueltos.
OBJETIVO.
Conocer las partes y manejo del conductmetro porttil usado en el laboratorio.
MATERIALES
-

Conductmetro porttil marca HANNA

Solucin salina

Vaso de precipitado x 50 mL y 150 mL

Pizeta

Agua destilada

Papel absorbente

PARTES DEL EQUIPO:

1 Fuente de poder
2 Conector de celda (o electrodo)
3 Pantalla
4 Botn de ON/OFF para encender y apagar el equipo
5 Botn ALT para la funciones del equipo
6 Botn RANGE/FIXED para seleccionar el rango de medicin o congelar el
rango actual.
7 Botn CAL/CALT, para ingresar al modo de calibracin
8 Botn CFM, para mover abajo o confirmar valores de calibracin
9 Botn ATC/TC para seleccionar modo de compensacin de temperatura
10 Botn FNC, para mover arriba o entrar a modo lectura
11 Celda o electrodo

PROCEDIMIENTO
Calibracin.-

La calibracin se realiza a un punto, seleccionar el punto de

calibracin entre 0,0 uS/cm, 1413 uS/cm, 5.00 mS/cm, 12.88 uS/cm; 80.0 uS/cm.
-

Seleccionar el rango EC y presione el botn CAL.

Enjuagar la celda con alguna de las soluciones anteriores o con agua

destilada.

Sumergir la celda dentro de la solucin. Los agujeros de la manga deben

quedar completamente cubiertos, dar algunos golpecitos repetidamente a la
celda para remover alguna burbuja de aire que estuviera atrapada en la
manga.

En la pantalla seleccionar el valor deseado, cuando en smbolo ~ para de

parpadear indica que la lectura es estable y solicita confirmar CON,
confirmar presionando ALT + CFM simultneamente.

Medicin
-

Sumergir la celda en la solucin a ser ensayada. Los agujeros de la manga

deben quedar totalmente sumergidos

Dar unos golpecitos repetidamente a la celda, para remover alguna burbuja

de aire atrapada en los lados de la manga.

Si es necesario, presione el botn RANGE repetidamente hasta llegar a que

el rango deseado (EC, TDS, NaCl) sea seleccionado en la pantalla.

Permita que la lectura se estabilice. En la parte superior de la pantalla se

muestra la medida en el rango seleccionado y la parte inferior la
temperatura.

Notas
-

Si la pantalla muestra ----- lectura fuera de rango

Si la lectura es inestable, el indicador de estabilidad ~ parpadea

La indicacin gm en la pantalla significa g/L

Asegurar que el equipo este calibrado antes de tomar las mediciones

INFORME:

Esquematice el equipo mostrado

Cmo afecta la temperatura a la conductividad?

El tipo de ion presente en la solucin y la viscosidad de sta influirn en la

conductividad Cmo?

Qu representa TDS?

CONTROL DE ASISTENCIA: FECHA

Nombre del alumno

Firma de alumno

Visado del Profesor

REFERENCIAS

- Douglas A. Sookg. 2000 Principios de Anlisis Instrumental 5 a Ed.

McGrawHill Madrid.

- Daniel C, Harris. 1992 Anlisis qumico Cuantitativo Ed. Iberoamericana

Mxico.

- M. Willard 2000 Anlisis Instrumental. Ed. Continental Mxico.

- Manual de conductimetro Hanna HI 9835 + TDS
- www.uprm.edu/biology

EXPERIENCIA N
MEDIDAS DE CONDUCTIVIDAD Y SLIDOS DISUELTOS

INTRODUCCIN.
Se define la conductividad elctrica como la capacidad de que una sustancia
pueda conducir la corriente elctrica, y por tanto es lo contrario de la resistencia
elctrica. La unidad de medicin utilizada comnmente es el Siemens/cm (S/cm),
en millonsimas (10-6) de unidades, es decir microSiemens/cm (S/cm), o en
milsimas (10-3), es decir miliSiemens/cm (mS/cm). Generalmente, para realizar
mediciones comparativas, la temperatura estndar es de 20 C 25C.
En soluciones acuosas la conductividad es directamente proporcional a la
concentracin de slidos disueltos, por lo tanto cuanto mayor sea dicha
concentracin, mayor ser la conductividad. La relacin entre conductividad y
slidos disueltos se expresa, dependiendo de las aplicaciones, con una buena
aproximacin por la siguiente igualdad:
1,4 S/cm = 1 ppm (mg/l NaCl) o 2 S/cm = 1 ppm (mg/l de CaCO3)
OBJETIVO.
Conocer la conductividad

de algunas sustancias que se utilizan en la vida

cotidiana.
MATERIALES
Vaso pp de 50 mL
Fiola de 100 mL
Probeta de 50 mL
Pizeta

REACTIVOS
Agua de grifo
Agua destilada
Carbonato de calcio
Cloruro de sodio

EQUIPOS
Balanza
Conductimetro
Agitador magntico

PROCEDIMIENTO.
-

Preparar 100 mL de solucin 70 ppm de carbonato de calcio (agua muy

blanda)

Preparar 100 mL de solucin 180 ppm de carbonato de calcio (agua

ligeramente dura)

Preparar 100 mL de solucin 400 ppm de carbonato de calcio (agua dura)

Preparar 100 mL de solucin 180 ppm cloruro de sodio

Calibrar el conductmetro con la solucin patrn correspondiente de acuerdo a

las indicaciones del profesor. Y luego proceder como sigue:
-

Verter 50 mL de agua destilada en un vaso de precipitado introducir el

electrodo y medir la conductancia en S, cambiar el rango del equipo a TDS
y anotar los resultados.

Realizar el mismo procedimiento para el agua del cao y cada una de las
soluciones preparadas anteriormente.

INFORME:

Indicar los S y TDS hallados para cada muestra.

Cul es el valor de conductividad mximo permitido para el agua potable?

Por que existen diferencias de la conductividad entre el agua potable y el

agua destilada?

En que otra unidad se puede expresar la conductividad?

La dureza del agua en que unidades se expresa, se puede correlacionar

con la conductividad.

CONTROL DE ASISTENCIA: FECHA

Nombre del alumno

Firma de alumno

Visado del Profesor

REFERENCIAS

- Douglas A. Sookg. 2000 Principios de Anlisis Instrumental 5 a Ed.

McGrawHill Madrid.

- Daniel C, Harris. 1992 Anlisis qumico Cuantitativo Ed. Iberoamericana

Mxico.

- M. Willard 2000 Anlisis Instrumental. Ed. Continental Mxico.

- Manual de conductimetro Hanna HI 9835 + TDS .

EXPERIENCIA N
SEPARACION DE AMINOCIDOS POR CROMATOGRAFA EN PAPEL

INTRODUCCIN.La cromatografa en papel se utiliza para compuestos muy polares o

polifuncionales. El uso ms comn es para azcares, aminocidos y pigmentos
naturales. En esta cromatografa se utiliza el fenmeno de particin en donde la
fase estacionaria se halla sobre un soporte activo (el papel) que en realidad forma
parte de la fase estacionaria que es el agua. Las fases mvil y estacionaria
estarn en contacto en una gran interfase, lo que permite una rpida obtencin de
una distribucin de equilibrio del soluto entre ellas. Si la muestra problema est
formada por ms de un soluto, stos se separan por sus diferentes coeficientes de
particin.
OBJETIVO.- Observar la separacin de las mezclas de sustancias con
propiedades fsicas muy similares.
Materiales
Lpiz
Papel whatman N 1
Tijera
Regla
Capilares
Tubos de Ensayo
Pipeta x 10 ml
Matraz aforado x 250 ml

Reactivos
Alcohol de 96
Butanol
Ac. actico
Agua destilada
Ninhidrina
amoniaco
cloroformo
Mezclas de aminoacidos

Equipos
Balanza analtica
Secador de pelo
Cuba cromatografica

PROCEDIMIENTO.Muestra: Mezclas de aminoacidos

Pesar en un vaso de precipitado 0.01 g de cada aminocido y disolver con agua y
enrasar a fiola de 10 mL .
Patrones: disolver individualmente cada uno de los aminocidos de la misma
forma.
A 1.5 cm de un extremo de la tira de papel de filtro previamente cortado trazar una
tenue lnea recta con lpiz la que se denominar lnea de partida (Punto de
siembra). No utilizar tinta.

Doble la tira longitudinalmente de tal forma que quede dividida en 2 campos

o mitades; en cada mitad y sobre la lnea de partida seale el punto medio
o lugar de siembra.

Con la ayuda de un capilar muy fino, en uno de los puntos sealados para
la siembra, deposite unas gotitas (2 3) de la mezcla a analizar (mezcla de
aminocidos). En el otro punto a sembrar, de igual manera coloque uno de
los estndares de aminocidos disueltos individualmente. Espere que cada
gota seque antes de sembrar la siguiente.

Deje unos minutos para que se evapore el solvente de siembra (puede

ayudarse con corriente de aire) y luego introduzca la tira en un tubo de
ensayo de 2 x 15 cm en cuyo interior se ha colocado el solvente de
desarrollo formado por:
Etanol al 96%/ agua (7:3)
N butanol/cido actico/agua (8:2:2)
Etanol al 96%/ amoniaco al 34% (7:3)
Cloroformo/metanol/amoniaco al 17% /2:2.1)

Tenga cuidado que la zona de siembra no debe estar en contacto con la

Fase Mvil (solventes preparados).

Cuando la fase mvil halla ascendido 8 10 cm retire el papel, marque con

lpiz el frente del solvente y djelo secar y luego pulverizarlo con el revelador
ninhidrina, se calienta durante 10 minutos a 110 C (color violeta para los
aminocidos.
Marcar las manchas, calcular Rf y comparar con estndares

INFORME:

Compare las 2 muestras sembradas y calcule el Rf de las sustancias.

Identifique el aminocido presente.

En este experimento que factor determina el movimiento de la fase

mvil.

Ordene en orden decreciente a su polaridad los solventes utilizados

como fase mvil

Que otro revelador se puede utilizar para aminocidos.

CONTROL DE ASISTENCIA: FECHA

Nombre del alumno

Firma de alumno

Visado del Profesor

REFERENCIAS

- Douglas A. Sookg. 2000 Principios de Anlisis Instrumental 5 a Ed.

McGrawHill Madrid.

- Daniel C, Harris. 1992 Anlisis qumico Cuantitativo Ed. Iberoamericana

Mxico.

- M. Willard 2000 Anlisis Instrumental. Ed. Continental Mxico.

- www.fcn.unp.edu.ar.

EXPERIENCIA
SEPARACIN E IDENTIFICACIN DE CLOROFILA POR CCF

INTRODUCCIN

La cromatografa de capa fina se conoce normalmente por sus siglas en ingls

(TLC, thin layer chromatography). Es una tcnica muy utilizada para la
identificacin y determinacin de pureza de compuestos. Tambin puede
utilizarse como tcnica de separacin (cromatografa de capa fina TLC
preparativa)

muy

pequea

escala.

En

esta

tcnica

la

fase

estacionaria es una capa fina de gel de slice u otro soporte con

p r o p i e d a d e s adsorbentes (en nuestro caso de 25 mm de espesor)
dispuesta sobre un soporte de aluminio que denominaremos placa.
El eluyente o fase mvil ser la mezcla de disolventes adecuada.
OBJETIVO
Determinar la presencia de diferentes pigmentos en un extracto vegetal por
cromatografa en capa fina.
MATERIAL
Materiales
Lpiz
Placa de silicagel
Mortero
Regla
Capilares
Tubos de Ensayo
Pipeta Pasteur
Matraz aforado x 50 ml

Reactivos
Alcohol de 96
Eter de petroleo
Acetona
Agua destilada
cloroformo
Sulfato sdico anhidro
Papel aluminio

Equipos
Lmpara UV

PROCEDIMIENTO
a. Preparacin de la muestra
En un mortero, machacar una hoja de espinaca con una mezcla de 4 ml de
hexano y 2 ml de etanol. Con una pipeta Pasteur transferir el extracto a un tubo de
ensayo y agitar con mucha suavidad con una cantidad igual de agua, evitando la
formacin de emulsiones. Eliminar la fase acuosa con ayuda de una pipeta

Pasteur, y el lavar sucesivamente dos veces con 2 ml de agua para eliminar el

etanol. Transferir la fase orgnica a un tubo de ensayo y aadir con una esptula
sulfato sdico anhidro para eliminar el agua.
b.- Preparacin de la placa de cromatografa.
Marcar la placa, con ayuda de un lpiz los puntos en donde se va depositar la
muestra (tres puntos). Con un capilar, tomar un poco de la disolucin orgnica
conteniendo los pigmentos y pinchar la placa de cromatografa en los tres puntos
con concentraciones diferentes. Para evitar que la mezcla difunda por la placa,
vaciar el contenido del capilar poco a poco sobre el punto, y soplar suavemente
cada vez, para secar el disolvente.
c.- Desarrollo de las placas
Preparar varias mezclas de disolventes, para desarrollar las placas. Preparar unos
10 ml de eluyente cada vez, empezando por una mezcla de eter/acetona 7:3
Disolventes Mezclas: ter/ etanol 8:2; cloroformo/etanol 7:3; cloroformo /etanol 7: 3
Una buena separacin revela la presencia de al menos cinco puntos coloreados
Pigmento

Color

Carotenos

Naranja

Clorofila a

Verde azulado

Xantofilas

Amarillo

Clorofila b

Verde

INFORME
1. Dibujar en cada caso la placa con los resultados obtenidos
2. Calcular el Rf de cada uno de los puntos obtenidos
3. Indicar cul sera la mezcla de disolventes ms adecuada de los utlizados,
para realizar la separacin.
CONTROL DE ASISTENCIA: FECHA

Nombre del alumno

Firma de alumno

Visado del Profesor

REFERENCIAS

- Douglas A. Sookg. 2000 Principios de Anlisis Instrumental 5 a Ed.

McGrawHill Madrid.

- Daniel C, Harris. 1992 Anlisis qumico Cuantitativo Ed. Iberoamericana

Mxico.

- M. Willard 2000 Anlisis Instrumental. Ed. Continental Mxico.

- www.ugr.es/ ~quiored/doc/p23.pdf

EXPERIENCIA
PRESENTACION DE UN EQUIPO DE CROMATOGRAFIA LIQUIDA DE ALTA
RESOLUCION

INTRODUCCION.El HPLC (cromatografo lquido de alta resolucin) es un equipo de cromatografa

instrumental en donde la fase mvil lquida,

con el que se puede lograr

separaciones de mezclas de sustancias muy complejas debido a las interacciones

entre la fase mvil y la fase estacionaria que se encuentre en una columna

cerrada, con dimetros de partculas muy reducidas por lo que se hace necesario
que la fase mvil sea impulsa con bombas de alta presin.
El equipo consta con una serie de componentes que lo hacen bastante complejo.
OBJETIVO.- Conocer las partes y el funcionamiento de un HPLC.
MATERIALES:
-

HPLC Agilent 1100

Agua ultra pura

Solucin de una muestra estndar

Pizeta

Papel absorbente

PARTES DEL EQUIPO

1. Computador.- Con un software de control chemstation, que controla todo el
sistema operativo, en el se visualiza esquematizadas todas las partes del
equipo, as como las condiciones cromatogrfica del mtodo. Se puede
observar el funcionamiento de dos modos:
A) On line.- cuando el equipo est ejecutando el desarrollo mtodo
cromatografico
B) Off line.- donde se puede conservar la dato almacenada en los archivos
respectivos.
2. Bandeja para solventes.- Donde se colocan las botellas conteniendo los
solventes que constituyen la fase mvil
3. Sistema de degasificacin.- microdesgaficacin de vacio para 4 canales
incluyendo 4 membranas de microestructura y una bomba de vaco. Es
necesario desgasificar si: a) El detector es usado con mxima sensibilidad
en la longitud de onda Uv; b) si se requiere precisin en las inyecciones de
muestra: c) si requiere alta reproducibilidad en los tiempos de retencin d)
si la muestra es sensible a oxigeno disuelto en la fase mvil.

4. Sistema de Bombeo.- Constituido por una bomba peristltica cuaternaria,

que posee una cmara de mezclado para los solventes que permite tanto
una elucin isocrtica en la cual la proporcin de los solventes permanece
constante durante el proceso, como en gradiente cuando durante el
proceso va variando las proporciones de los solventes que constituyen la
fase mvil.
5. Automuestrador.- constituido por una rejilla para los viales, una neumtico
para tomar la muestra y ser depositada en la cmara de inyeccin
constituida por un sistema de vlvula de 6 puntos.
6. Horno para Columna.- constituido por placas de calentamiento que
permiten

mantener la columna cromatogrfica a una temperatura

programada, normalmente no exceden de 70 C. Presenta dos partes

derecha e izquierda de calentamiento independientes.
7. Detector Uv.- Detector de longitud de onda variable lo que permite registrar
la muestra a 5 longitudes de onda simultaneas, en el rango ultravioletavisible, y constituido por una microcelda de flujo de alta presin.
8. Columna cromatogrfica.- es un accesorio independiente del equipo pero
indispensable, es el corazn de cromatografo en donde se van a producir
las separaciones y su caracterstica depender del tipo de muestras a
trabajar. De acuerdo a la constitucin de su fase mvil se desarrollaran los
diferentes tipos cromatografa como pueden ser: absorcin, particin,
intercambio inico, exclusin.

INFORME.

Represente esquemticamente un equipo de HPLC

Qu caracterstica debe tener un detector para ser usado en HPLC?

Cul es el parmetro que permite la identificacin y cul (es) su

cuantificacin de compuesto en HPLC?

Defina que es un cromatograma.

CONTROL DE ASISTENCIA: FECHA

Nombre del alumno

Firma de alumno

Visado del Profesor

REFERENCIAS

- Douglas A. Sookg. 2000 Principios de Anlisis Instrumental 5 a Ed.

McGrawHill Madrid.

- Daniel C, Harris. 1992 Anlisis qumico Cuantitativo Ed. Iberoamericana

Mxico.

- M. Willard 2000 Anlisis Instrumental. Ed. Continental Mxico.

- www.chemguide.co.uk/analysis
- www.cromatografialiquida.com

EXPERIENCIA N
DETERMINACIN CAFEINA EN BEBIDAS POR HPLC
INTRODUCCIN
El HPLC, cromatografa lquida de alta precisin, es en definitiva una
cromatografa en fase lquida, en la cual la alta presin aplica permite el paso de
la fase mvil y la muestra a travs de

una columna rellena de pequeas y

compactas partculas de fase estacionaria acelerando el proceso de separacin.

La cafena es un alcaloide slido de color blanco que acta como una droga
psicoactiva y estimulante la cual se encuentra en muchas bebidas que
consumimos comnmente.
OBJETIVO.
Realizar un anlisis cuantitativo de la cafena mediante cromatografa de fase
reversa.
MATERIALES
-

HPLC Agilent 1100 con una columna C-18

Balanza

Agua ultra pura

Cafena

Pizeta

Fiola de 10, 25 mL

Luna de reloj

Vaso de precipitado.

micropipetas

Filtros jeringas

Papel absorbente

Bebidas gaseosas.

PROCEDIMIENTO.
Se prepar una solucin madre de cafena de 1mg/mL , de la cual se toma 1 mL y
se lleva a10mL con agua ultra pura (100 ug/mL), a partir de esta se preparo una
solucin de trabajo conteniendo una concentracin 30 ug/mL.
Se toma 1 mL de la bebida y se diluye en fiola 25 mL con agua ultra la cual luego
se filtra a travs de un filtro jeringa de 0.45 um.

Se inyecta 20 uL de estndar de trabajo as como la muestra en el HPLC en su

sistema de elucin isocrtica bajo las siguientes condiciones:
Fase mvil: una mezcla formada por 45% de metanol y 55% de buffer fosfato
(acuoso) 0,025M de pH=3
Flujo: 0.8 mL/min.
Columna: C18 150 x 4.6 mm
Detector Uv: 275 m
Calcular la concentracin de cafena en la bebida, a partir del rea bajo la curva
obtenida de las inyecciones para el estndar y para la muestra problema.
INFORME

Determinar la concentracin en la muestra analizada

Cules son los mecanismo de separacin en una cromatografa de fase

reversa

Explique que es una elucin en gradiente

CONTROL DE ASISTENCIA: FECHA

Nombre del alumno

Firma de alumno

Visado del Profesor

REFERENCIAS

- Douglas A. Sookg. 2000 Principios de Anlisis Instrumental 5 a Ed.

McGrawHill Madrid.

- Daniel C, Harris. 1992 Anlisis qumico Cuantitativo Ed. Iberoamericana

Mxico.

- M. Willard 2000 Anlisis Instrumental. Ed. Continental Mxico.

- www.chemguide.co.uk/analysis

- www.cromatografialiquida.com

EXPERIENCIA
PRESENTACION DE UN CROMATOGRAFO DE GASES
INTRODUCCION.- El cromatgrafo de gases es un equipo de cromatografa
instrumental en donde la fase mvil est constituida por un gas, como puede ser
nitrgeno, helio, argn; con el que se puede lograr separaciones de mezclas de
sustancias que puede vaporizarse sin descomponerse o formar derivados que

puedes ser en fase gaseosa. Por lo general la fase mvil suele ser una fina
pelcula de un lquido muy trmicamente estable adherido a las paredes de un
delgado tubo capilar.
OBJETIVO.- Conocer las partes y el funcionamiento de un GC.
-

MATERIALES:

CG Agilent 6890

Agua ultra pura

Solucin de una muestra estndar

Pizeta

Papel absorbente

PARTES DEL EQUIPO

1. Computador.- al igual que en el HPLC un software de control chemstation,
que controla todo el sistema operativo, en el se visualiza esquematizadas
todas las partes del

equipo, as como las condiciones cromatogrfica del

mtodo. Se puede observar el funcionamiento de dos modos:

A) On line.- cuando el equipo est ejecutando el desarrollo mtodo
cromatografico
B) Off line.- donde se puede conservar los

datos almacenados las

diferentes anlisis realizados, as como las condiciones de operacin de

cada mtodo en los archivos respectivos.
2. Balones de Gases.- que constituyen la fase mvil, comnmente constituido
por gases que no reacciona con la muestra, el ms utilizado como gas carrier
es el helio, tambin se emplean otros gases como el nitrgeno y el aire
sinttico que en nuestro caso sirve como combustible para el detector de
ionizacin de flama (FIT).
3. Automuestreador.- constituido por columna o torreta en donde esta coloca
una microjeringa con una capacidad mxima de un 1mL encargada de tomar
la muestra desde los viales que van colocados en una ruleta giratoria.

4. Cmara de inyeccin.- Se encuentra en la parte interna del equipo y es

donde va ha ser depositada la muestra para su vaporizacin por lo general se
encuentra a unos 200 C.
4. Horno.- Parte mayoritaria del cromatografo donde se van colocar la
columna, este tiene la capacidad de mantener y varia altas temperaturas para
mantener los componentes de la muestra en estado gaseoso a su paso por la
columna.
5. Detector.- Parte final del cromatografo a donde llegan los componentes de
la

muestra separados para poder ser identificados de acuerdo a las

caractersticas del tipo de detector en particular convirtiendo las diferentes

tipos de energa en seales elctricas (en nuestro caso energa inica) que
son representadas como picos cromatogrficos.
En el nuestro caso presenta un panel frontal de mando manual desde donde
se pueden monitorear todos los parmetros establecidos en la PC para el
funcionamiento de un mtodo dado.
INFORME.

Qu condiciones debe tener una muestra para ser analizada por CG?

Qu tipos de columnas cromatogrficas se utilizan en cromatografa

gaseosa?

Cul es el detector que tiene el equipo observado y cul es el principio de

su funcionamiento?

El anlisis cromatogrfico en el equipo observado sera un mtodo

destructivo. Por qu?

CONTROL DE ASISTENCIA: FECHA

Nombre del alumno

Firma de alumno

Visado del Profesor

REFERENCIAS

- Douglas A. Sookg. 2000 Principios de Anlisis Instrumental 5 a Ed.

McGrawHill Madrid.

- Daniel C, Harris. 1992 Anlisis qumico Cuantitativo Ed. Iberoamericana

Mxico.

- M. Willard 2000 Anlisis Instrumental. Ed. Continental Mxico.

- www.chemguide.co.uk/analysis
- www.cromatografialiquida.com