ONCOGENES

Dra. O. Graciela Scharovsky

Instituto de Gentica Experimental
Facultad de Ciencias Mdicas, U.N.R.
2006

1er. Impacto
Clula
Normal
Apoptosis

La
transformacin
maligna surge
de la
acumulacin de
mltiples daos
en el genoma

Dao en
el ADN

Reparacin

2do. Impacto

3er. Impacto

Displasia
leve

Displasia
severa

Tumor
invasivo

Patognesis del cncer

Factores ambientales:
Sustancias qumicas,
radiaciones y virus.

Cambios en el genoma
de clulas somticas

Factores
genticos

Inactivacin de genes
supresores de tumores

Activacin de oncogenes
promotores del crecimiento

Expresin de productos de genes alterados

y prdida de productos gnicos regulatorios
Expansin clonal
Mutaciones adicionales
Heterogeneidad

CNCER

ONCOGENES
Definicin
Genes capaces de inducir cncer

Cualquier gen que produce un fenotipo maligno

cuando se introduce en una clula normal

Un gen ntimamente asociado con una enfermedad

maligna particular. Por ejemplo, un gen quimrico
formado por una translocacin cromosmica.

ONCOGENES
Descubrimiento
Tumores producidos
por extractos acelulares
del sarcoma de Rous
(principios del siglo XX)

Peyton Rous
descubri
el virus que
causa el
cncer en los
pollos

Retrovirus transformante RSV (Rous Sarcoma Virus)

Genes: gag, pol, env y src
Bishop y Varmus (1977)
Secuencias homlogas en clulas eucariotas
normales libres de virus
Proto-oncogenes

c-onc

Oncogenes virales

v-onc

Origen celular de los oncogenes

retrovirales
Nmero y tamao de los exones e intrones
Los c-onc estn ligados a los mismos genes
en distintas especies
Inoculacin de virus carentes de v-onc en
clulas eucariotas
Todos los v-onc tienen homlogo celular, pero
no todos los c-onc tienen contraparte viral

Estructura de un retrovirus
Retrovirus simple

LTR-gag-pol-env-LTR

Transduccin retroviral de un oncogn

v-ONC

ADN del
hospedador

c-ONC

clula

Oncogenes adenovirales
Oncogenes de virus a ADN (SV40, virus del papiloma)
no tienen homologa con los c-onc
Forman parte del genoma viral necesario para
la replicacin del virus
La mayora de las clulas infectadas con virus a
ADN muere, pero algunas sobreviven y son
transformadas
Las protenas codificadas por los oncogenes de estos
virus interactan con protenas del ciclo celular o
inactivan producto de genes supresores de tumores

Los virus a ADN apuntan a los

genes supresores de tumores
Virus
Adenovirus

Producto gnico
E1A
E1B

Blanco celular
Rb
p53

Virus Polioma

Antgeno T grande

Rb, p53

SV40

Antgeno T mediano

Src, PI3K

Virus Papiloma

E7
E6
E5

Rb
p53
receptor PDGF

Mecanismos de activacin de los proto-oncogenes

CRECIMIENTO
NORMAL

ADN

Proto-oncogn

Protena
normal

Translocacin: el gen
se mueve a otro locus
bajo nuevos controles

Protena normal
estimulante del
crecimiento,
en exceso

Nuevo promotor

Amplificacin gnica: mltiples copias del gen

Mutacin puntual dentro del gen

Oncogn

Protena hiperactiva
o resistente a la
degradacin

N
C
E
R

Translocacin cromosmica

Leucemia mieloide crnica

Cromosomas
normales
9 22
bcr

Linfoma de Burkitt

LMC
9

Cromosomas
normales
8 14

22

Linfoma de
Burkitt
8 14

bcr
abl

Ig

abl
myc

Ig
myc

Poder transformante
sobre NIH.3T3

Procedencia de H-ras

+
-

ADN de cncer de vejiga EJ

ADN de placenta humana
ADNs recombinantes:

Mutacin
puntual

+
-

5
6
Secuenciacin de la regin
de ADN involucrada
en la transformacin
VAL
GTG
EJ
9
Codn Nro.:
GTG
Placenta
VAL

GLI ALA
GGC GCC
10
11
GGC GCC
GLI ALA

VAL GLI
GTC GGT
12
13
GGC GGT
GLI GLI

Secuencia Secuencia
nucleotdica aminoacdica

Amplificacin gnica

c-myc en neuroblastomas (300)

c-erbB-2/HER-2 en cncer de mama (30)

Mutagnesis insercional
.

El proceso activa el gen Wnt-1 y produce cncer de mama en el

ratn infectado con el MMTV.
Sitios de integracin de MMTV observados en 19 tumores
diferentes (flechas).
Las inserciones pueden activar la transcripcin de Wnt-1
desde distancias de ms de 10.000 pares de nucletidos de
cada lado del gen.
Este efecto se atribuye a una secuencia de ADN exacerbadora
potente que est presente en las repeticiones terminales del
genoma de MMTV.

Conversin oncognica
En cada clula existen dos copias o alelos de cada
gen, que en condiciones normales se denomina
proto-oncogn
La mutacin de un alelo convierte al proto-oncogn
normal en un oncogn activado que contribuye al
proceso carcinognico
El oncogn es dominante sobre el proto-oncogn y
resulta en un producto desrregulado o activado
constitutivamente
La conversin oncognica es una mutacin de
ganancia de funcin

Identificacin de oncogenes
Virus tumorales
Virus a ARN
Virus a ADN
Reordenamientos genmicos
Translocaciones
Inversiones
Amplificaciones/Doble diminutos
Ensayos funcionales
Transfecciones de ADN tumoral
Transfecciones de bibliotecas de ADNc

Activacin de la proliferacin por virus a ADN

HPV (human papilloma virus)

PROLIFERACIN CELULAR
BLOQUEADA

PROLIFERACIN CELULAR
ACTIVADA POR VIRUS DE ADN

Las protenas E6 y E7 codificadas por el virus del papiloma, secuestran

tanto Rb como p53; otros virus a ADN relacionados, como SV40, usan una
protena viral llamada antgeno grande T, que cumple ambos propsitos

Papiloma E5 imita al ligando de PDGF

dominio de unin
del ligando

dominio de
quinasa

Papiloma E5 imita al ligando de PDGFR

dominio de unin
del ligando

dominio de
quinasa

dimerizacin de PDGFR
mediada por PDGF

Dimerizacin ligandoindependiente mediada por

BPV E5

Activacin de la proliferacin por virus a ARN

La proliferacin puede ser estimulada por:

virus portador de un v-onc
virus sin v-onc, pero se integra cerca de un proto-oncogn
virus que se inserta en un gen supresor tumoral y lo inactiva

Deteccin de
oncogenes
en tumores
humanos
Transfeccin
de ADN

Clonado de genes transformantes

Mecanismos que conducen a

la proliferacin celular
Unin de un factor de crecimiento (primer mensajero)
a su receptor especfico de membrana
Activacin de molculas transductoras de seales
intracelulares asociadas a los receptores celulares
Transmisin de la seal desde el citosol al ncleo a
travs de segundos mensajeros
Transcripcin del ADN y divisin celular

Productos de los oncogenes y sus funciones

REGIN EXTRACELULAR

Clase 1
FACTORES DE CRECIMIENTO

I. FACTORES DE
CRECIMIENTO
II. RECEPTORES DE FACTORES
DE CRECIMIENTO
MEMBRANA CELULAR

Clase 2
RECEPTORES DE FACTORES
DE CRECIMIENTO
Clase 3
TRANSDUCTORES DE SEALES
Clase 4

TIROSINAS
QUINASAS
ASOCIADAS A
MEMBRANA

PROTENAS
G

TREONINAS/SERINAS
QUINASAS

TIROSINAS
QUINASAS NO
ASOCIADAS A
MEMBRANA

III. TRANSDUCTORES
DE SEALES

IV. PROTENAS
CITOPLASMA
REGULADORAS DE
LA TRANSCRIPCIN
NUCLEAR

PROTENAS REGULADORAS DE
LA TRANSCRIPCIN NUCLEAR
NCLEO

Clase 1. FACTORES DE CRECIMIENTO

fgf-5
Factor de crecimiento relacionado a FGF (factor de crecimiento fibroblstico)

hst
Factor de crecimiento relacionado a bFGF

int-1
Factor de crecimiento embrionario

int-2
Factor de crecimiento relacionado a bFGF

sis
Factor de crecimiento derivado de plaquetas (PDGF)

Clase 1. FACTORES DE CRECIMIENTO

Son protenas extracelulares de bajo PM que actan a
travs de sus receptores especficos
El oncogn v-sis de SSV (virus del sarcoma de simios)
codifica para una protena homloga a la cadena B del
PDGF
v-sis transforma in vitro clulas que expresan PDGFR,
lo que sugiri la teora autocrina del cncer
La activacin de los oncogenes int-2, hst y ks-3 lleva
a la sntesis aumentada de protenas que funcionan
como bFGF

Clase 2. RECEPTORES DE FACTORES DE CRECIMIENTO

erbB
Receptor de EGF (EGFR) truncado con actividad tirosina quinasa

kit
Receptor de clulas troncales (stem cells) con actividad tirosina quinasa

mas
Receptor de angiotensina

met
Receptor afn a EGFR truncado con actividad tirosina quinasa

neu
Protena afn a EGFR con actividad tirosina quinasa (ligando desconocido)

c- erbB2/HER- 2/neu
El producto del oncogn c-erbB2/HER-2/neu es un receptor
de membrana de 185 kDa con ligando desconocido.
Su amplificacin gnica resulta en la sobreexpresin de la
protena, que correlaciona con una supervivencia libre de
enfermedad menor y una supervivencia acortada en pacientes
con ganglio axilar (+)

La heterodimerizacin con otros

receptores activa a HER-2
EGFr HER-2/neu
EGF/EGFr

HER-2

EGF/EGFr
asociacin y
dimerizacin
con HER-2

Unin de
EGF a EGFr
Fosforilacin

HER-2

La activacin del receptor HER-2 transmite

seales hacia el ncleo, controlando el
crecimiento celular

Clula
cancerosa

Trastuzumab (Herceptin)
Primer anticuerpo monoclonal aprobado por la FDA
para el tratamiento del cncer de mama
Anticuerpo monoclonal humanizado derivado de ADN
recombinante que reconoce con alta afinidad el dominio
extracelular de HER-2
Mejora el resultado del tratamiento de pacientes con
cncer de mama avanzado HER-2+ (1/3 de pacientes)
Se proponen tres mecanismos de accin: potenciacin
de la citotoxicidad por quimioterapia, inhibicin de la
proliferacin tumoral por induccin de inhibidores
endgenos del ciclo celular (p27kip), facilitacin de la
funcin inmune

Clase 3. TRANSDUCTORES DE SEALES

abl
Tirosina quinasa citoplasmtica o nuclear

fes
Tirosina quinasa citoplasmtica

Mos
Treonina/serina quinasa citoplasmtica

raf
Treonina/serina quinasa citoplasmtica

ras
Protena G asociada a membrana con actividad GTPasa

src
Tirosina quinasa asociada a membrana

yes
Tirosina quinasa asociada a membrana

Clase 3. TRANSDUCTORES DE SEALES

Protenas G: ras
Quinasas citoplasmticas
a) actividad de tirosina-quinasa asociada a membrana
src
b) actividad de tirosina-quinasa no asociada a membrana
abl: su producto se localiza en citoplasma y ncleo y se activa por
translocacin o insercin de retrovirus

c) actividad de serina/treonina-quinasa
raf: mutaciones en la zona amino terminal producen activacin
constitutiva de la quinasa

mos: su poder transformante estara dado por aumento de la

produccin de la protena

Clase 3. TRANSDUCTORES DE SEALES

Protenas G: ras
Quinasas citoplasmticas
a) actividad de tirosina-quinasa asociada a membrana
src
b) actividad de tirosina-quinasa no asociada a membrana
abl: su producto se localiza en citoplasma y ncleo y se activa por
translocacin o insercin de retrovirus

c) actividad de serina/treonina-quinasa
raf: mutaciones en la zona amino terminal producen activacin
constitutiva de la quinasa

mos: su poder transformante estara dado por aumento de la

produccin de la protena

ras
Ras inactivo
GDP

p21ras
GEF
P
GDP

Hidrlisis de GTP
bloqueada cuando
ras est mutado
GAP
GAP
p21ras

p21ras

GTP

GTP

Ras activado

Va de activacin de ras
R
T
K

R
T
K
Ras
GDP
MEK
ERK

Va de activacin de ras
R R
T T
K K
Grb

SOS

Ras
GDP
MEK

ERK

Va de activacin de ras
R R
T T
K K
Grb

SOS

Ras
GTP
MEK

ERK

Cyclin D

Raf

Substituciones de aminocidos en la familia de protenas Ras

gen Ras
c-ras (H, K, N)
H-ras
K-ras

N-ras

posicin del amino cido

12
59
61
Gly
Gly
Val
Cys
Arg
Val
Gly
Gly

Ala
Ala
Ala
Ala
Ala
Ala
Ala
Ala

Gln
Leu
Gln
Gln
Gln
Gln
Lys
Arg

Tumor
clulas normales
carcinoma de pulmn
carcinoma de vejiga
carcinoma de pulmn
carcinoma de pulmn
carcinoma de colon
neuroblastoma
carcinoma de pulmn

Virus del sarcoma murino

H-ras
K-ras

Arg
Ser

Thr
Thr

Gln
Gln

cepa Harvey
cepa Kirsten

Efectores de Ras

Inhibicin teraputica de ras

Inhibicin de sntesis de grupos farnesilo
con estatinas (lovastatin, pravastatin, etc.)
Inhibicin de la farnesiltransferasa:
SAM 486A (inhibidor de la sntesis de poliaminas)
MMI270B (inhibidor de metaloproteasas de matriz)
CAAX peptidomimetics
SCH 66336

Clase 3. TRANSDUCTORES DE SEALES

Protenas G: ras
Quinasas citoplasmticas
a) actividad de tirosina-quinasa asociada a membrana
src
b) actividad de tirosina-quinasa no asociada a membrana
abl: su producto se localiza en citoplasma y ncleo y se activa
translocacin o insercin de retrovirus

c) actividad de serina/treonina-quinasa
raf: mutaciones en la zona amino terminal producen activacin
constitutiva de la quinasa

mos: su poder transformante estara dado por aumento de la

produccin de la protena

src

Dominio
cataltico

tir 527

SH3

tir 416

SH2

pp60 c-src inactiva

Dominio
cataltico
tir 527

tir 416
P

SH3

SH2

pp60 c-src activa

La delecin del extremo C-terminal

conduce a la activacin de v-Src

Lodish et al. Fig. 24-17

src
La tirosina quinasa de pp60c-src tiene accin sobre:
Motilidad celular
Invasin: rompe unin cadherina E
Crecimiento
Supervivencia celular
Blancos moleculares poco conocidos FH1ST, PLD
La protena pp60c-src se asocia a la cara citoslica de
la membrana, para lo cual depende de la unin de
cido mirstico al extremo amino terminal

membrana celular

catenina

P
Cadherina E
citoesqueleto

src
P
P
P
P

Clase 3. TRANSDUCTORES DE SEALES

Protenas G: ras
Quinasa citoplasmticas
a) actividad de tirosina-quinasa asociada a membrana
src
b) actividad de tirosina-quinasa no asociada a membrana
abl: su producto se localiza en citoplasma y ncleo y se activa
translocacin o insercin de retrovirus

c) actividad de serina/treonina-quinasa
raf: mutaciones en la zona amino terminal producen activacin
constitutiva de la quinasa

mos: su poder transformante estara dado por aumento de la

produccin de la protena

abl

9+

22

Ph

bcr
bcr-abl
abl

Tratamiento para inhibir la quinasa Bcr-Abl

BCR-ABL activa
protena sustrato

seal para
proliferacin
y sobrevida

LEUCEMIA

BCR-ABL BLOQUEADO CON GLEEVEC (STI-571)

protena sustrato
sin seal

NO LEUCEMIA

Clase 3. TRANSDUCTORES DE SEALES

Protenas G: ras
Quinasa citoplasmticas
a) actividad de tirosina-quinasa asociada a membrana
src
b) actividad de tirosina-quinasa no asociada a membrana
abl: su producto se localiza en citoplasma y ncleo y se activa
translocacin o insercin de retrovirus

c) actividad de serina/treonina-quinasa
raf: mutaciones en la zona amino terminal producen activacin
constitutiva de la quinasa

mos: su poder transformante estara dado por aumento de la

produccin de la protena (accin sobre tubulina de microtbulos)

Clase 4. PROTENAS REGULADORAS DE LA

TRANSCRIPCIN NUCLEAR
erbA
Receptor nuclear de la hormona tiroidea

ets-1
Protena de asociacin a secuencias especficas del ADN

fos/jun
Conjuntamente forman el factor de transcripcin AP-1

myb
Protena de asociacin a secuencias especficas del ADN

myc
Protena de asociacin a secuencias especficas del ADN

rel
Protena relacionada con NF-B

myc
Protena Myc
A

Regin de activacin
de la transcripcin
NH2

Dominio
hlice-bucle-hlice
Cierre de
leucinas
COOH

Regin bsica
de unin al ADN

Max-Myc

Max-Max

Quiescencia
Proliferacin

c-myc es translocado al locus IgG, lo

que resulta en su expresin activada

c-myc

exacerbador IgG

IgG

c-myc es activado por el

exacerbador
IgG en los linfocitos

c-myc puede estar amplificado

bcr-abl fusion
protein is produced,Tipo de tumor
Oncogene
Amplificacin
which results in a constitutively active abl kinase
c-myc

~20 veces

leucemia y ca. de pulmn

bcr
N-myc

5-1,000 veces

L-myc

10-20 veces

abl

neuroblastoma
retinoblastoma

bcr-abl

SCLC

c- myc
Myc

myc: inducible
por FC
max: expresin
constitutiva

mRNA
Max

1h

tiempo

Factores de crecimiento
Factores de crecimiento
Myc +

Myc
Myc

Factores de crecimiento

Proliferacin
Detencin en G1
Apoptosis

Myc: esencial para el desarrollo embrionario normal;

su ausencia es letal

Blancos gnicos de myc

Protimosina

Funcin desconocida

ODC

Biosntesis de poliaminas

Cdc25A

Ciclo celular

Ciclina D1

Ciclo celular

eIF-2

Sntesis de protenas

eIF4E

Sntesis de protenas

ARF o p19

Apoptosis/Checkpoint

Cdc2

Ciclo celular

Ciclina A

Ciclo celular

Ciclina E

Ciclo celular

Efecto
acumulativo
Modelo de
cncer
colorectal
de
Bert
Vogelstein

Progresin tumoral

Complementacin entre oncogenes

myc y ras
myc

ras

myc + ras

REF
rat embryo
fibroblast

Transformada

Tumorignica
XX

Immortalizada

Complementacin entre oncogenes

Complementacin entre oncogenes

Transformacin
(citoplasma)

Inmortalizacin
(ncleo)
myc

ras
src

myb

abl

p53

CNCER

Complementacin entre oncogenes

E1A y E1B
Oncogenes de Adenovirus
E1A

E1B

Immortalizada

Normal

E1A + E1B

REF

XX

Transformada

Importancia Clnica de los Oncogenes

Diagnstico:

a) LMC (Ph-) donde hay rearreglos bcr/abl (5-10% casos) (PCR, Sb o Nb)
b) Linfoma no-Hodgkin: t(14;18) en <1% de las clulas que involucra
bcl-2 (PCR y Sb)
Pronstico:
a) Neuroblastomas: 38% myc amplificado hasta 300 veces mal
pronstico (Sb, Hibrid. in situ, citogentica HSR o DMS)
b) Cncer de mama axila (-): Her2/neu amplificado (hasta 30 veces)
probable mal pronstico (IHQ)

Importancia Clnica de los Oncogenes

a) Terapia contra factores de crecimiento y sus receptores:
trastuzumab: anti HER-2/NEU
erlotinib y gefitinib: inhiben la TK de EGFR
bevasizumab: anti VEGFR
b) Inhibidores de farnesilacin:
estatinas: inhiben farnesilacin p21ras
inhibidores de la farnesiltransferasa
c) Inhibidores de kinasas citoplasmticas:
Imatinib: inhibe la TK de la protena BCR-ABL
d) Terapia contra factores de transcripcin:
Molculas antisentido para MYC
Pptidos y molculas pequeas inhibidoras de MYC