Procedimiento para la creacin y puesta en marcha de un anlisis de pesticidas por

cromatografa HPLC

Se creara un mtodo de anlisis

nuevo

Se editaran las condiciones un

mtodo de anlisis nuevo

Procedimiento para la creacin y puesta en marcha de un anlisis de pesticidas por

cromatografa HPLC

Condiciones iniciales para la

creacin de un mtodo de
anlisis nuevo

Se coloca todo lo relacionado a las condiciones de

trabajo del mtodo de Anlisis como son: quien lo
crea, flujo, temp, fase mvil, columna entre otras

Procedimiento para la creacin y puesta en marcha de un anlisis de pesticidas por

cromatografa HPLC
Se coloca el flujo del
mtodo

Si el mtodo lleva gradiente se inserta en

esta parte y se van programando de acuerdo
a lo establecido en el mtodo de anlisis

Se coloca la
temp de la
columna

Procedimiento para la creacin y puesta en marcha de un anlisis de pesticidas por

cromatografa HPLC

Se coloca la longitud de
onda del mtodo

Procedimiento para la creacin y puesta en marcha de un anlisis de pesticidas por

cromatografa HPLC

Se selecciona la longitud de onda

del mtodo

Se selecciona ok para aceptar las condiciones

de integracin establecidas por DEF_LC o si
tenemos unas ya determinadas las colocamos

Procedimiento para la creacin y puesta en marcha de un anlisis de pesticidas por

cromatografa HPLC

Se selecciona las condiciones del reporte

dependiendo la necesidad que se tenga en el
momento o las establecidas en el mtodo

Se debe seleccionar save GLPDATA que

es guardar datos Como Buenas prcticas
De Lab y
save Mtodo in Data para que guarde
los cambios en el mtodo de Trabajo

Se le da ok para aceptar
las condiciones de trabajo
de cada uno de los
mdulos

Procedimiento para la creacin y puesta en marcha de un anlisis de pesticidas por

cromatografa HPLC

Se salva el mtodo de anlisis y se le

coloca el nombre predeterminado del
mtodo

Procedimiento para la creacin y puesta en marcha de un anlisis de pesticidas por

cromatografa HPLC

Escritorio del PC desde donde se

activara el modulo de cromatografa

Mtodo guardado y listo para ser usado

Procedimiento para la creacin y puesta en marcha de un anlisis de pesticidas por

cromatografa HPLC

Creacin de una
secuencia de anlisis (se
crea una por cada
TURNO

Se establecen las condiciones de

parmetros pedidas por el equipo
como son nombres de los analistas
secuencia de analistas, turno, fecha
entre otras

Se busca el mtodo a
utilizar

Se busca el mtodo a
utilizar

Procedimiento para la creacin y puesta en marcha de un anlisis de pesticidas por

cromatografa HPLC
Creacin de una nueva secuencia se
colocan los datos dia fecha analista y
mtodo

Se guarda la secuencia iniciada con los datos

expresados anterior mente

Se programa
creara la tabla
la muestra
de anlisis
que deseamos
correr como tambin la seleccin del
de anlisis
con el por
cual se
Procedimiento para la creacin y puesta en marcha demtodo
un anlisis
de pesticidas
cromatografa HPLC analizara la muestra el nmero de
corridas que tendr la muestra entre
otras condiciones otras

Se programa la muestra que deseamos

correr como tambin la seleccin del
mtodo
de anlisis
anlisis de
conpesticidas
el cual sepor
Procedimiento para la creacin y puesta en marcha
de un
analizara la muestra el nmero de
cromatografa HPLC
corridas que tendr la muestra entre
otras condiciones otras

La seleccin del mtodo

de anlisis por el cual se
analizara la muestra

Se programa la corrida de una curva de

calibracin la cual se ver expresada en
una linealidad de picos vs a reas de
pico de la forma en la que se
programara esta curva ser como
aparece ilustrada en la imagen

Se guarda
Se coloca
la secuencia
en la tabla
con
loselpesos
nombre
de
del analista
cada unolade
fecha
los estndares
y el mtodo de
anlisis,
preparados
todos
los
para
cambios
realizar
realizados
la
Procedimiento para la creacin y puesta en marcha de un anlisis de pesticidas por
linealidad programadas para esta
cromatografa HPLC y condiciones
secuencia de anlisis

En esta etapa ya tenemos

Ejemplo
el mtodo
de cmo
la debe guardarse la
tabla con las condiciones
secuencia
de trabajo
de anlisis
y la
secuencia
de
anlisis
Procedimiento para la creacin y puesta en marcha de un anlisis de pesticidas por
cromatografa HPLC

Se activad la secuencia para que

inicie las corridas programadas
Procedimiento para la creacin y puesta en marcha de un anlisis de pesticidas por
cromatografa HPLC

Este es el reporte del

anlisis programado

Procedimiento para la creacin y puesta en marcha de un anlisis de pesticidas por

cromatografa HPLC

Se realizara la integracin de los picos de

inters utilizando las variables establecidas
por el software d l equipo

Ya realizamos la integracin y
tenemos los picos que nos interesan

Creacin de una tabla de calibracin

nueva
Procedimiento para la creacin y puesta en marcha de un anlisis de pesticidas por
cromatografa HPLC

Adicin del 1ernivel o estndar de la

curva (linealidad)

Procedimiento para la creacin y puesta en marcha de un anlisis de pesticidas por

cromatografa HPLC

Adicin del 1er nivel o estndar de la curva

(linealidad) y se le coloca la concentracin
del estndar

Procedimiento para la creacin y puesta en marcha de un anlisis de pesticidas por

cromatografa HPLC

Adicin del 2 do nivel o

Adicin
2 do nivel o
estndar
de del
la curva
estndar
de
la coloca
curva la
(linealidad) y se le
(linealidad)del
y se
le coloca la
concentracin
estndar
concentracin del estndar

Ya vamos a realizar la adicin del 3 er

nivel

Procedimiento para la creacin y puesta en marcha de un anlisis de pesticidas por

cromatografa HPLC

Ya vemos reflejada la adicin del nivel

anterior sea el nivel 2

Ya aqu vemos reflejado los tres niveles de la

curva como tambin vemos la linealidad
establecida en esta

Procedimiento para la creacin y puesta en marcha de un anlisis de pesticidas por

cromatografa HPLC

Ya aqu vemos reflejado los tres niveles de la

curva como tambin vemos la linealidad
establecida en la relacin picos vs rea

Ejemplo del equipo

en el que se
Desarroll la
investigacin

AGILLENT 1200

Procedimiento para la creacin y puesta en marcha de un anlisis de pesticidas por

cromatografa HPLC

Ejemplo de un

sistema de HPLC

Procedimiento para la creacin y puesta en marcha de un anlisis de pesticidas por

cromatografa HPLC

Qu es Cromatografa Lquida de Alta Eficiencia?

Procedimiento para la creacin y puesta en marcha de un anlisis de pesticidas por

cromatografa HPLC

La cromatografa es un mtodo fsico de separacin basado en la distribucin de los

componentes de una mezcla entre dos fases inmiscibles, una fija o estacionaria y
otra mvil. En la cromatografa lquida, la fase mvil es un lquido que fluye a travs
de una columna que contiene a la fase fija.
La cromatografa lquida clsica se lleva a cabo en una columna generalmente de
vidrio, la cual est rellena con la fase fija. Luego de sembrar la muestra en la parte
superior, se hace fluir la fase mvil a travs de la columna por efecto de la
gravedad.
Con el objeto de aumentar la eficiencia en las separaciones, el tamao de las
partculas de fase fija se fue disminuyendo hasta el tamao de los micrones, lo cual
gener la necesidad de utilizar altas presiones para lograr que fluya la fase mvil.
De esta manera, naci la tcnica de cromatografa lquida de alta resolucin (HPLC),
que requiere de instrumental especial que permita trabajar con las altas presiones
requeridas
HPLC = (High Performance Liquid Chromatography) = Cromatografa de Lquida
de Alta Eficiencia
PASOS A SEGUIR PARA LA VALIDACION DE UN METODO DE Y PUESTA EN MARCHA
DE UN ANALISIS DE CROMATOGRAFIA HPLC
VALIDACIN DEL MTODO ANALTICO

Matriz particular se debe disponer como mnimo:

Blanco de reactivos (ausencia de interferencias).

Blanco de productos o anlisis histricos (ausencia de interferencias).

Recuperacin del analito agregado a una muestra libre de residuo (nivel

Cercano a la tolerancia).

Fijar el lmite de deteccin / cuantificacin.

Calibracin de cromatgrafos: Los parmetros a tener en cuenta son:

Tiempo de retencin.

Procedimiento para la creacin y puesta en marcha de un anlisis de pesticidas por

cromatografa HPLC

Eficiencia forma de pico.

Reproducibilidad.
Linealidad.

PROCEDIMIENTO PARA LA PREPARACIN DE LA MUESTRA A ANALIZAR

Las muestras deben recogerse en recipientes de vidrio debe ser refrigerada de

acuerdo con los requisitos del procedimiento de preservacin de muestra. El Equipo
de muestreo automtico debe ser en lo ms posible de plstico y que no haiga
otros tipos de contaminantes.
Las muestras deben ser refrigeradas a 4 C desde el momento de la recoleccin
hasta
de extraccin.
Todas las muestras deben ser extrados dentro de 7 das y analizado por completo
dentro de 40 das de extraccin.
Aadir 60 ml de cloruro de metileno a la botella de muestra, cubrir y agitar 30
segundos y enjuague las paredes interiores.
Transferir el disolvente al embudo de separacin y el extracto de la muestra
agitando el embudo de 2 minutos con ventilacin peridica para liberar el exceso de
presin. Permitir que la capa orgnica a separarse de la fase de agua por un
mnimo de 10 minutos, al producto obtenido de esto se le realizara lo establecido
en el procedimiento de cromatografa

Procedimiento para la creacin y puesta en marcha de un anlisis de pesticidas por

cromatografa HPLC

CONDICIONES Y PUESTA EN MARCHA DE UN MTODO HPLC PARA

DETERMINACIN DE PESTICIDAS

Condiciones de Trabajo:
Columna: C18*250*4mm
Flujo: 0.3 mL/min
Fase mvil Agua /Metanol
Longitud de onda: 230nm
Fase mvil Reversa
Vol de inyeccin: 10uL
Reporte del anlisis de pesticidas en frutas y verduras

Procedimiento para la creacin y puesta en marcha de un anlisis de pesticidas por

cromatografa HPLC

Conclusin
Despus de haber aprendido a realizar la creacin de un mtodo de anlisis,
una secuencia, una tabla de anlisis, y una curva de calibracin (la cual
usara el equipo para realizar la cuantificacin de los compuestos de inters)
Podemos decir que esta forma se pondr en marcha el anlisis de
pesticidas que deseamos investigar en nuestra marcha analtica

los

El mtodo HPLC que presentamos aqu se utiliz de forma directa para el

anlisis de carbamatos en frutas y vegetales las cuales fueron extradas en
pH neutro con aguaY solventes orgnicos antes de su anlisis por la
cromatografa de HPLC.

Procedimiento para la creacin y puesta en marcha de un anlisis de pesticidas por

cromatografa HPLC