Universidade Federal de Gois

Instituto de Cincias Biolgicas-ICB

DETERMINAO COLORIMTRICA PELA REAO DE BIURETO

Aryane Nakashima Silva

Priscilla Rodrigues da Silva
Priscila Castro
Denise Chaves
Isabella Saldanha

Goinia, setembro de 2014.

INTRODUO

As protenas pertencem classe dos peptdeos, pois so formadas por

aminocidos ligados entre si por ligaes peptdicas. Uma ligao peptdica a
unio do grupo amino (-NH2-) de um aminocido com o grupo carboxila (COOH-) de outro aminocido, atravs da formao de uma amida. So muito
importantes, pois possuem diversas funes no organismo. Todas as enzimas
conhecidas, por exemplo, so protenas e estas catalisam diversas reaes
metablicas. [1]
O biureto uma substncia formada pela mistura de cobre, hidrxido de
sdio e um complexo que estabiliza essa mistura. Dessa forma, quando em
soluo que contenha protenas, essas formam um complexo prpuro, em
solues salina, uma vez que o on cobre se liga ao nitrognio dos
aminocidos. Assim, podemos estimar a concentrao da soluo que
contenha protenas, quando colocamos a amostra em um espectrofotmetro,
emitindo luz monocromtica de comprimento de onda de 530 nm. [2]
A reao do Biureto utilizada para identificar a presena de protenas em
materiais biolgicos, como tambm para quantific-las, uma vez que o
complexo cobre-protena apresenta uma absoro mxima 530nm. A
intensidade da cor depende exclusivamente da concentrao de protena. Para
que a reao do Biureto seja positiva h necessidade da presena de pelo
menos duas ligaes peptdicas na molcula, portanto, aminocidos e
peptdeos no do reao do Biureto positiva. [3]
O experimento realizado em aula pratica teve como objetivo quantificarse colorimetricamente a protena presente em uma amostra de concentrao
desconhecida, usando os conhecimentos adquiridos nas aulas de
espectrofotometria.

MATERIAIS E MTODOS

Materiais:
5 tubos de ensaio pequenos;
Casena 1%;
Glicina 1%;
NaOH 1,0 mol/L;
Reativo de Biureto (sulfato de cobre 0,5%);
Espectrofotmetro;
Vrtex

Procedimento:

Identificou-se os 5 tubos de ensaio: o primeiro com o branco, o segundo

a glicina e os restantes enumerados de 1 a 3;
Adicionou-se 1 mL de gua destilada no tubo denominado de branco;
No tubo glicina adicionou-se 1 mL de soluo de glicina;
Adicionou-se 0,2 mL de casena no tubo 1, 0,6 mL no tubo 2 e 1 mL no
tubo 3;
Nos tubos 1 e 2 completou-se o volume para 1 mL com gua destilada;
Adicionou-se 3 mL de NaOH 1,0 mol/L em todos os tubos;
Adicionou-se 0,4 mL de Biureto em todos os tubos;
Esperou-se 15 minutos enquanto a reao se processava;
No espectrofotmetro, todas as solues foram lidas a 530 nm.

RESULTADOS E DISCUSSES
Reaes de colorao de protenas:
Nos tubos, pde observar-se que, aps a adio do reagente biureto ocorreu a
colorao em tom violeta caracterstico. Nas amostras de 1 a 3 medida que a
alquota de casena foi aumentada, como resultado os valores da absorbncia
tambm aumentaram. Tanto para as amostras quanto para o tubo contendo
glicina houve variaes nos tons de colorao violeta. Na tabela 1 esto
expressos os valores de absorbncia em funo de concentraes crescentes
de protenas solveis totais.
TABELA 1
Amostras
glicina
amostra 1
amostra 2
amostra 3

Absorbncia (530 nm)

0,030
0,135
0,318
0,405

Reao do Biureto:
Todos os tubos tiveram sua colorao inicial alterada aps a adio do sulfato
de cobre (CuSO4), cada um com tonalidade diferente como dito anteriormente.
Uma vez que a reao do biureto caracterizada por identificar a presena de
protenas e peptdeos com trs ou mais resduos de aminocidos, no qual uma
substncia adicionada, o sulfato de cobre, interage com as ligaes peptdicas,
concluiu-se que essa variao na colorao desde tons mais escuros para
mais claros devido quantidade de protenas ali presentes. A seguir, na
tabela 2, esto os valores determinados pela colorimetria pela reao de
biureto dos 3 grupos participantes.

Mdia e Desvio Padro:

Com base nos dados da tabela 2, pode-se observar que os valores obtidos
para os 3 grupos variaram e em algumas amostras houve grande diferena em
seus resultados. Isso ocorreu provavelmente no momento da realizao dos
devidos procedimentos. Nas leituras de absorbncias em espectrofotmetro a
530 nm pelo mtodo do reagente biureto foram encontrados um valor mnimo
em relao glicina de 0,012 e um mximo de 0,045. Ao comparar os valores
dos grupos com a mdia, conclui-se que o grupo 3 obteve grande quantidade
de valores acima da mdia. J na amostra 3 , o grupo 2 possui a maior
variao para mdia e desvio padro

TABELA 2

Resultados

Amostra

BRAN GLICIN
CO
A

Grupo 1

0,03

Grupo 2
Grupo 3

0
0

0,012
0,045

mdia
desvio
padro

0
0

TUBO
1

TUBO
2

TUBO
3

0,135

0,318

0,405

0,104
0,25
0,294
0,141
0,36
0,483
0,1266 0,3093
0,029
67
33
0,394
0,0165 0,0198 0,0555 0,0949
23
58
1
79

CONCLUSO
As reaes de colorao de protenas permitem a caracterizao dessas pela
anlise de suas propriedades qumicas e fsicas, entre elas, a presena de
ligaes peptdicas, solubilidade, fora inica e concentrao molar. A deteco
de protenas em materiais biolgicos envolve reaes especificas com
determinados reativos, os quais originam substncias coloridas que absorvem
luz na regio visvel, permitindo a sua quantificao. Apesar de alguns erros
grosseiros quanto manipulao dos aparelhos, todos os resultados atingiram
as caractersticas pr-estabelecidas pelos conceitos tericos.

REFERNCIAS BIBLIOGRAFICAS

[1]. Kehl, Anderson & Langbeck, Carmem. Caracterizao de Protenas. Centro

Federal deEducao Tecnolgica do Amazonas. Manaus, 2008.
[2]. Lehninger, A. Lester. Fundamentos de Bioqumica. 4 ed. So Paulo:
Sarvier, 2006
[3]. Stryer, Lubert .Bioqumica. 4 Ed. Rio de Janeiro: Guanabara Koogan.
1996.