Inmunologia 23/11/05

VACUNAS

Se usan para proteger a la poblacin contra enfermedades infecciosas, es una estrategia

para estimular la respuesta inmune antes de la exposicin al agente infeccioso.
Vacuna era originalmente un producto normalmente derivado de un agente infeccioso,
puede ser un agente infeccioso completo vivo a muerto o fracciones purificadas del agente
infeccioso. Sin embargo hoy en da el concepto de vacuna es distinto, vacuna: todo
producto que se inyecta en un indv con el objetivo de inducir una respuesta inmune
determinada o codificar la r.i del indv, hablamos de una r.i protectora porque protege contra
la infeccin. El objetivo de la r.i del indv es destruir al agente infeccioso.
Podemos vacunar a individuos alrgicos que hacen una resp Anmala de hipersensibilidad
contra un alergeno, lo vacunamos contra su propia alergia, se le inocula el alergeno en
pequeas dosis de manera d modificar la r.i , de manera q el objetivo de una vacuna es
inducir o modificar una r.i determinada y para lograr eso voy a inyectar un producto q
pueden ser molculas, clulas, pueden ser citoquinas etc.
Cuando se trata de agentes infecciosos que producen enfermedades o infecciones serias se
usan distintas estrategias
- El objetivo de los farmaclogos es conocer el metabolismo de ese agente inf
particular que de alguna manera se a adaptado para introducirse en el organismo del
hospedero y ubicarse en un tejido particular del cual va a obtener todo lo necesario
para sobrevivir y multiplicarse. Los farmaclogos deben de encontrar a travs de
esas distintas vas metablicas algn plan teraputico que le permita con alguna
droga especfica impedir esa va metablica, lo cual va a conducir a la alteracin y
eventual muerte del agente evitando daar las clulas del paciente (difcil, porque
por ejemplo los antibiticos tienen efectos secundarios contra nuestras propias
clulas).
- Estrategia sanitaria: Educar a la poblacin para que sigua ciertas normas de
conducta sanitarias que eviten las infecciones, campaas.
- Desde el punto de vista medico tb es importante saber si el agente infecciosos que
afecta es exclusivo y si solo afecta a una especie determinada y si no existen
reservorios naturales en otras especies. Muy importante para desarrollar campaas y
estrategias de eventual control o erradicacin. Ejemplo virus hanta el ratn es
portador sano del virus, sea a el no lo afecta pero si puede daar la salud del ser
humano.
1

Tb es importante saber si hay algun hospedero intermediario del agente infeccioso

que de alguna manera acta como vector del agente infeccioso. Ej: tripanosoma
crusi que es un protozoo que utiliza como hospedero intermediario o vector a la
vinchuca
Los agentes inf por definicin mutan y por definicin pueden cambiar el tropismo
del tejido en el cual se instalan o pueden infectar o tener como reservorio natural a
nuevas especies que originalmente no tenia.
Tb no hay que olvidar que los agentes inf que coexisten en un individuo pueden
intercambiar material gentico y surgir un nuevo agente infeccioso resultante de la
recombinacin de dos.

(La trazabilidad hoy en da es fundamental para poder garantizar dado la

globalizacin la inocuidad de nuestros productos)
Estrategia inmunolgica: Controlar y erradicar las infecciones en la medida que
seamos capaces de identificar productos derivados del agente infeccioso que se
utiliza como Ag para estimular una respuesta inmune que proteja contra la
infeccin. Ej: ahora los nios estn siendo vacunados contra el sarampin y la
rubola porque hay riego de brote de estas enfermedades. En una mujer embarazada
que se infecta con rubola dada la infeccin tiene el riesgo de producir dao en el
feto, por eso es muy importante que estn inmunizada contra la rubola de manera
que la R.I las va a proteger.
En el caso como la influenza aviar donde de repente se empezaron a morir los
animales y rpidamente para controlar tuvieron que eliminarlos a todas las aves
contagiadas o que estuvieron en posible contacto etc porque haba ah un cuadro
infeccioso, adems se tuvo que conocer cual era el agente infeccioso que estaba
causando la enfermedad para esto:
-se obtuvo muestras de animales que estaban infectados, que estaban enfermos o
que se murieron. A partir de esas muestras de tejidos hay que tratar de aislar el
agente inf al cual asociamos la eventual infeccin o enfermedad
- luego hay que aislar e identificarlo. Si es que es un virus, una bacteria, un
parsito. Una vez identificado, es muy importante saber si cuando se produce la
infeccin de los individuos que se infecto pudo sobrevivir. Esto indicara que habra
algn individuo capaz de desarrollar una r.i que los protegi de la infeccin, eso
indica que el agente infeccioso es capaz de estimular una r.i que protege al
individuo. Ahora nos preguntamos Qu es lo que tiene ese individuo que la
infeccin no lo afecta? Que tiene su sist. Inmune que lo protege? El estudio de
algunos de esos individuo a llegado a demostrar que lo que tienen es una mutacin
en los coreceptores de manera que lo protege y el virus no puede entrar con
facilidad a la clula.
-Ahora para preparar una vacuna hay que tener una gran cantidad del agente inf por
eso una vez aislado y multiplicado hay que ver si se puede multiplicar, si se puede
cultivar en el laboratorio etcsi esto es as, tenemos una fuente enorme de material
biolgico, a partir del cual se va a aislar el agente inf para preparar una vacuna.
-luego de multiplicar al agente inf hay dos alternativas: la primera seria tomar al
agente inf y matarlo, irradiarlo o tratarlo con alguna sustancia qumica de manera
que el agente inf se muera y ese producto que es derivado del agente inf, agente inf
entero pero muerto es lo que se ocupa para la vacuna. Entonces lo que se le inyecta
al ind es el agente inf causante de la enfermedad o de la infeccin como Ag para
estimular la respuesta inmune, ese agente inf como esta muerta no va a producir
enfermedad pero va a estimular la respuesta inmune. Un agente inf muerto es
2

inmunogenico pero producto de la destruccin a perdido la capac para multiplicarse

y a perdido su patogenicidad (a menos que sea una toxina que si es infecciosa). A
ese tipo de vacunas se les llama naturales o clsicas.
Vacunas naturales o clsicas: 1-utiliza el agente inf completo vivo o muerto. 2-Tb
puede utilizar fracciones o fragmentos purificados de Ag o molculas derivadas del
agente inf (protenas, polisacridos, lpidos). La fuente de este tipo de vacunas es
el agente inf. 3- toxinas purificadas y luego modificadas (toxoide) eso sig que el
dao producido por el agente inf obedece a la presencia del agente inf de una
molcula particular responsable del dao, esa molcula se le llama toxina. Entonces
se purifica la toxina a partir de los cultivos del agente inf y la modificamos de
manera que pierde la capac de producir dao esa modificacin convierte a la toxina
en un toxoide que no produce dao.
Toxoide: toxina modificada que ha perdido la capac de producir dao.
El que esta muerto tiene inmunogenicidad porque estimula la resp inmune, no es
patognico, y no se replica. A veces nos encontramos con que este agente muerto no
estimula una buena r.i , no protege, algo le falta, algo pierde este agente inf en el
proceso que conduce a su muerte y por lo tanto es necesario mantenerlo vivo pero
atenuado (con sust qcas).
El que este vivo o atenuado significa que conserva la capacidad de multiplicacin,
conserva la capac de replicarse, es inmunogenico pero disminuye la patogenicidad
la capac para producir dao porque el proceso de atenuacin lo ha modificado. Hay
que tomar en cuenta (el riesgo) que el agente inf vivo atenuado tb puede mutar y
recuperar la capac original e incluso ser mas patgeno que antes.
Vacunas recombinantes
Aqu destruimos al agente inf y nos quedamos con su genoma ya sea DNA o RNA.
A partir de ese genoma vamos a tratar de identificar protenas codificadas por ese
genoma que vamos a utilizar como fuente d vacuna:
En el dibujo vemos a un agente inf, a partir de el vamos a aislar y purificar el DNA.
Ej: comprar un plasmido
bpr32, que es un pequeo
DNA circular derivado de
bacterias, este DNA con
enzimas que compro lo puedo
cortar, abrir e insertar ah un
gen.
Meto los trozitos de DNA
purificados en el vector que
se llama de clonamiento, ese
vector puede ser un plasmido
o un virus que compro.
Ahora esto lo meto dentro de
una clula que puede ser una
bacteria
o
una
clula
eucarionte y esa clula va a
multiplicar el plasmido o el virus y lo que va a hacer a medida que lo multiplica es que el
gen que inserte ah va a utilizarse como molde para la sntesis de RNA, sintetiza la protena
y el vector de expresin lo que hace es producir toneladas de la protena particular que dada
la estrategia que utilice que llamaremos protena recombinante.

Uno puede separar protenas a partir de un cultivo, si uno tienen la protena recombinante
quiere decir que se logro identificar el gen. (El hecho que aparezcan varias bandas lo que
significa que hay varias protenas distintas y eso puede ser producto de degradacin, tb que
durante el proceso de purificacin hubo contaminantes, entonces como resultado se obtuvo
para porqueria , un tubo con basura porque no se sabe cual de esas bandas va a inducir una
r.i determinada.)
A partir del agente inf uno aisla el DNA y lo que tenemos ah es todo el genoma del agente
inf. Ah hay genes que codifican protena, no se cuales, entonces purifico el DNA y esto se
trata con enzimas de restriccin, esto significa que el DNA va a ser cortado en miles de
trozitos, El plasmido o el virus que compramos para usarlo como vector de clonamiento lo
tratamos con la misma enz que utilizamos para cortar el DNA del agente inf, con eso
conseguimos que el vector se abra y entonces vamos a cortar el vector de clonamiento que
cortamos y que abrimos con este DNA y lo que va a ocurrir es que los trozitos de DNA se
van a incorporar al azar en el vector de clonamiento. Cuando tenemos el genoma total del
agente inf convertido en trozitos que incorpore en un vector de clonamiento, este conjunto
de plasmido o de virus donde estoy haciendo esto constituye una biblioteca genomica
porque en el conjunto del vector del clonamiento tengo todo el genoma del agente inf.
Enseguida tomo el vector d clonamiento y lo agrego a un cultivo donde va a estar el vector
de expresin, entonces ese plasmido o ese virus que contiene trozitos del DNA del agente
inf se va a incorporar al vector de expresin. Ahora a partir de ese cultivo del vector de
expresin, hay que aislar a las bacterias de a una y cultivarlas cada una por separado para
ver en ese vector de expresin, que vector de clonamiento esta en su interior. Mi vector de
expresin sintetiza protenas del agente inf porque en el vector de clonamiento tengo
insertado una porcin del genoma el agente inf. Finalmente logramos tener colonias o
cultivos del vector de clonamiento y ahora quiero determinar que protena del agente inf
esta sintetizando esto, que protena sintetiza este otro, sea identifico en cada una de mis
colonias que protena del agente inf esta sintetizando, luego esa protena se va a utilizar
para inmunizar y determinar cual de ellas induce una r.i
Este es el ind que se infecto con el agente inf y que se recupero que no se muri, porque
algo tiene en su r.i que lo protege. Tomo una nuestra de sangre de este ratn y purifico los
Ac y esos Ac los pongo sobre el cultivo porque cuando esos Ac se peguen a ese cultivo de
vector de expresin quiere decir que ese vector de expresin esta sintetizando una protena
que es reconocido por un Ac del ind que esta protegido contra el Ag.ese es una
estrategia, aislar el DNA del agente inf.
Como estrategia distinta ocupamos solo una parte del genoma que se expresa, eso sig que
de todo el DNA que tiene el agente inf solo una pequea porcin de ese DNA va a ser
transcrito en una molcula de RNA. Ese RNA va a ser utilizado como molde para la
sntesis de protenas, entonces aqu lo que se purifica es el RNA mensajero, lo particular de
este RNA es que tiene un extremo 3' una cola de poli-A (adenina, adenina, adenina)
para purificarlo tenemos una resina a la cual le agregamos timina, timina, timina y pasamos
a travs de un tubo que contiene la resina con poli timina. Entonces lo que tenemos en un
tubo es todo el RNAm producido por el agente inf, ese RNAm codifica todas las protenas
que ese agente inf esta sintetizando. Ahora a partir de ese RNAm que purifique voy a tener
en un tubo DNA, porque utilizando la transcriptasa inversa ms nucletidos marcados que
compre, voy a sintetizar DNA, ese DNA es complementario a ese RNAm y eso es lo que se
llama la biblioteca de cDNA .
Ahora ese cDNA que sintetizo en el laboratorio es el que se incorpora a un vector de
clonamiento, luego aun vector de expresin y all busco las protenas. (En el caso
anterior se ocupaba todo el genoma en este caso solo una parte de este).y eso se llama
protena recombinante y se llama as porque cuando yo introduzco el gen de la biblioteca
genomita o del cDNA, ese gen se incorpora al genoma del vector de expresin pero en un
4

gen del vector de expresin, interrumpo un gen propio del vector de expresin en otras
palabras se le llama protena recombinante porque tiene secuencias aminoacidicas propias
del agente infeccioso y secuencias que son propias de una protena del vector de
clonamiento.
Vacuna antiidiotipica: no utilizo al Ag original pero utilizo una molcula que se parece al
Ag.
Imaginemos que la molcula
responsable de inducir una r.i
es un polisacrido, en este
caso no me sirve la estrategia
de purificar el DNA o el RNA
para tener esa molcula
purificada
porque cuando
purifico el genoma lo que
tengo es un gen y un gen codifica una protena y en este caso el Ag es un polisacrido por
lo tanto no esta codificado en el genoma, lo que esta codificado en el genoma son las
enzimas que llevan a la sntesis de ese polisacrido. Entonces para preparar una vacuna
tomo el polisacrido y lo inyecto, ese polisacrido va a inducir una r.i de Ac. Vemos el
polisacrido en el dibujo, lo vamos a usar para sintetizar Ac anti polisacridos, tb vemos un
Ac especifico que reconoce al polisacrido que es le Ag. Ahora vamos a utilizar ese Ac para
sintetizar un Ac contra el primero, esto significa que ese Ac que vamos a utilizar para
inocular es un idiotipo que lo estoy utilizando como Ag. Entonces el ratn va a sintetizar
Ac contra el Ac. Se puede ver que es la imagen interna del Ag original, no es el Ag pero se
parece mucho al Ag. Entonces lo que tenemos purificado no es el Ag sino un Ac anti
idiotipico que es muy parecido al Ag y lo que fabrico son Ac monoclonales que se parecen
al Ag que voy a utilizar como vacuna y esa es una vacuna antiidiotipica.
Vacuna sintticas
.conociendo la secuencia del gen determino la secuencia de Aa de la protena y
determinando esta secuencia voy a elegir que regiones a travs de programa
computacionales son epitopo, de esta manera digo esta regin de la protena es la que tiene
el epitopo y ahora voy al laboratorio y por medio de un mquina (un sintetizador de Aa de
pptidos) y lo que hace esta maquina es poner Aa por ambos extremos y salen pptidos
pequeitos y e ah una nueva vacuna con pptidos sintticos libre de toda contaminacin y
peligro biolgico.
Puedo construir una biblioteca peptidica, le pido a la maquinita que me fabrique pptidos al
azar, miles de pptidos distintos con secuencias distintas. Entonces si tenemos un
animalito con distemper, tomo una muestra de sangre y de ah aisl a los Ac y veo si
algunos de esos Ac reconocen a alguno de esos pptidos que sintetice al azar, si hay alguno
de los pptidos que tengo all es reconocido (si es reconocido va a inducir una r.i) y esa va a
ser mi vacuna.
Mimotopo: imita
Hoy en da lo que se hace es construir bibliotecas peptdicas generadas al azar, en las cuales
al azar se busca que pptidos son reconocidos por Ac derivados de un ind que tuvo una
infeccin.
Vacunas de DNA
Se asla del agente inf el DNA, y ese DNA que se puede poner en un vector es el que
usamos como inoculo, lo que inyectamos la ind es DNA o un trozo de DNA del agente inf,
esperando que ese DNA que se3 incorpora a la clula pueda ser transcrito y traducido por la
clula y mis propias clulas son las que sintetizan protenas derivadas del agente inf, el
5

riesgo es q todo DNA se puede incorporar al genoma en un lugar que no quiero, en medio
de un gen, entonces ese gen va a ser interrumpido y por lo tanto va a dejar de funcionar.
Eso puede traer consecuencias fatales para el ind, puede ser un protohoncogen que se activa
o un gen que protege contra los tumores que se inactiva, entonces el utilizar vacunas de
DNA tiene el riesgo de que se incorpore al genoma de la clula.
Vacuna de clulas dendrticas
Puedo de un ind incapaz de responder frente a un Ag, tomar de el una muestra de sangre,
aislar de all una muestra de sangre y esas clulas dendrticas cultivarlas en el laboratorio,
estimularla con citoquinas para que maduren, ponerlas en contacto con el Ag y
devolvrsela al ind y el ind ser capaz de desarrollar una r.i que antes era incapaz de
desarrollar.
Vacuna de linfocitos
Puedo aislar los linf de un ind, cultivarlos, amplificarlos, agregarles citoquinas ponerlos en
contacto con clulas dendrticas, y hacerlos madurar y activarlos y eso se lo pongo de
vuelta al ind que era incapaz d responder y ahora con esta vacuna responde.
(La terapia es particular, es individual).
Van a haber factores que van a favorecer o desfavorecer la produccin de una vacuna:
- la variabilidad de un agente inf. Si el agente es muy variable, la probabilidad de una
vacuna disminuye drsticamente, porque cuando prepara una vacuna contra el
agente, este ya muto, cambio. (Por eso es un buen negocio) ej: influencia
(posibilidad de control y erradicacin es casi cero)
- que hallan otros tipos de reservorio natural. EJ: un virus que ataque a los equinos
pero que tienen como reservorio natural a los roedores.
- Es mas fcil hacer un diagnostico cuando el agente inf induce un cuadro clnico
caracterstico, en cambio si el cuadro infeccioso produce fiebre, o adenopatia,
inflamacin etces mas difcil diagnosticar porque todos los agentes infecciosos lo
hacen.
- Cuando un agente es tremendamente peligroso, hay montones de restricciones para
trabajar con el, cosa que dificulta el trabajo. (ser ms fcil si es menos infeccioso,
ser ms difcil si es ms peligroso).
Para que un producto sea utilizado como vacuna, debe cumplir 3 etapas anteriores.
- tiene que ser inocuo: que no es toxico, no produce dao en el ind que va a ser
inoculado (fase de seguridad).
- Se requiere disponer de un tratamiento para los ind que se van a exponer a este
producto.
- Usar la vacuna en una regin en donde en condiciones naturales existe la inf y la
enfermedad

INMUNOLOGIA 30/11/05
Falta el comienzo..
Ac monoclonales
Son Ac con especificidad nica, que derivan de un clon linfocitario nico que a su vez
derivan de un linf particular. Estos Ac monoclonales con funciones particulares.
Los linf purificados de un ind no se multiplican in vitro, se mueren, por lo tanto ah haba
un problema serio como obtener linf purificados, para hacer seleccin de los clones
linfocitarios si los linf se mueren. Sin embargo sabemos que cualquier clula se puede
convertir en una clula tumoral, incluyendo los linf.
Se saba que los LB se podan transformar en clulas tumorales, de manera que un LB con
un receptor particular se puede convertir en una clula tumoral a la cual se le llama
mieloma.
Las clulas mielomatosas son clulas tumorales derivadas
de linf que espontneamente se transforman. La cualidad
de las clulas tumorales es su capac para multiplicarse.
Podemos tomar una clula tumoral y multiplicarla en el
laboratorio. Como esta clula tumoral deriva de un linf y un linf sintetiza una Ig y la pone
en su membr, entonces la clula tumoral tb sintetiza Ig con especificidad nica.
Fusin de clulas tumorales con linfocitos.
Al fusionar un linf con una clula tumoral, se obtiene una clula hbrida llamada hibridoma
Esta clula que es un hibridoma o un hbrido,
como fusin de dos clulas, esta va a tener el
doble de cromosomas de las clulas originales.
Las clulas tienen 40 cromosomas por lo tanto
cuando se toman clulas mielomatosas para
fusionarlas con linf, se va a obtener un hibridoma
que tiene 80 cromosomas, esta nueva clula
conserva del linf la capac de sintetizar una Ig con
especificidad nica y conserva de la otra clula
la capac de multiplicar, proliferar. La clula
mielomatosa tb tiene la capac de sintetizar Ig y nosotros no queremos que el hibridoma nos
sintetice dos Ig distintas
Tomamos todos aquellos linf del ratn que fue
inoculado con el Ag, lo vamos a purificar a partir del
bazo y de los ganglios. Entonces tenemos al ratn que
fue inoculado, lo vamos a segmentar, le vamos a sacar
el bazo y los ganglios y todo eso lo vamos a romper a
disgregar, hay una especie de colador para la
separacin.
Rompemos el bazo, all hay una mezcla de clulas, tb
hay glbulos rojos y eso se trata con un buffer que
destruye los glbulos rojos y nos quedamos con una
segunda muestra donde hay linf y podemos calcular
6
cuantas clulas se obtienen (10 linf).
Entonces mezclamos en un tubo los linf con las clulas mielomatosas (tumorales)
especiales que compramos que no sintetizan Ig. Y le vamos a agregar drogas
(polietileglicil) que permiten que las clulas se fusionen y lo vamos a dejar all por media
hora.
Hay que tener presente que cuando se fusionan clulas se va a obtener tipos diferentes de
clulas fusionadas que pueden ser una fusin entre dos clulas mielomatosas, entre dos linf
que responden al Ag, entre un linf que responde contra el Ag con un linf que no responde
7

contra el Ag, entre dos linf que no responden entre si, etc, etc, y fusin entre las clulas que
realmente queremos que se fusionen para obtener un hibridoma.
Una clula antes de dividirse debe duplicar su DNA, por lo tanto si hablamos de clulas
que yo voy a fusionar y se van a multiplicar, en ellas va a ocurrir necesariamente antes de
dividirse duplicacin del DNA. Para realizar esto puede seguir dos caminos distintos.
- la clula va a sintetizar DNA con nucletidos ya sintetizados. En otras palabras a una
clula que tengo en un tubo y que yo se que se va a multiplicar yo le voy a agregar al medio
los nucletidos que ella necesita (adenina, guanina, timina, citosina) para que realice la
sntesis de DNA
Esta reaccin esta
catalizada por dos enz
distintas, una se llama
timinina kinasa (TK).
Cuando a una clula
que esta en cultivo le
agrego timidita al
medio, la clula va a
utilizar la timidita
para sintetizar buffer
piridimicos
como
citosina,
Timina,
uracilo. sea que a
partir de la timidita
que le agrego en el medio la clula va a sintetizar a otros nucletidos para sintetizar DNA,
pero esa sntesis es catalizada por TK. Para sintetizar DNA una clula no solamente
requiere de citosina y timina, tb requiere adenina y guanina y por lo tanto le proporciono en
el medio un nucletido a partir del cual la clula sintetice adenina y guanina, ese nucletido
es hipoxantina y a partir de hipoxantina en una reaccin que es catalizada por una enz que
se llama hipoxantina guanina fosforibosil transferasas va a sintetizar bases puricas (adenina
y guanina). Todas las clulas estn provistas de esas dos enz. Y por lo tanto toda clulas
capaz de sintetizar bases puricas a partir de hipoxantina y bases pirimidicas a partir de
timidita.
Las clulas tb pueden hacer sntesis de novo que seria un camino alternativo en el caso que
no tuviera los otros nucletidos. En este camino alternativo es capaz de sintetizar a partir
de elementos muy simples los nucletidos. Esa va metablica se llama sntesis de novo.
Entonces la clula tiene dos formas para sintetizar DNA
-mediante nucletidos exgenos
-sntesis de novo de nucletidos y a partir de esos nucletidos sintetizar DNA
En el dibujo vemos la fusin de un linf
con una clula mielomatosa. Ambas
clulas tienen las dos cualidades, pero al
momento de comprar las clulas
mielomatosas debemos pedir que no
sinteticen Ig, deficiente en o mutante en
TK y/o HGPRT con el fin que la clula
no pueda utilizar esas vas y se vea
obligada a utilizar la sntesis de novo de
DNA. Pero al cultivo le voy a agregar
una droga que inhibe la sntesis de novo,
entonces lo que va a pasar con esa
8

clula tumoral, si en el medio de cultivo donde pongo esa clula tumoral capaz de hacer
sntesis de novo de DNA y agrego una droga que inhibe la sntesis de novo, esa va la
bloqueo con la droga llamada aminopterina, y as la clula no puede dividirse y se muere.
Cuando se fusionan las clulas se produce una combinacin muy variada, por ese motivo a
ese cultivo le voy a agregar un medio que me permite hacer la seleccin.
Medio de cultivo que contiene (medio HAT) hipoxantina, aminopterina, y cont timidina, lo
que va a ocurrir es que la clula tumoral es deficiente en una de las enz por lo que no puede
hacer sntesis de DNA utilizando hipoxantina y timidina, lo tiene que hacer de novo, pero
como el medio tiene aminopterina la clula tumoral se va a morir porque es incapaz de
sintetizar de novo DNA por efecto de la aminopterina que esta en el medio y tb porque es
incapaz de hacer sntesis por las otras vas.
Los linf son incapaces de multiplicarse in Vitro y se mueren. Entonces la nica clula que
va a sobrevivir luego de la fusin es el hibridoma, porque esta clula que es in capaz de
adquiere la capac de cuando yo lo fusiono con un linf. Por que el linf es capaz de hacer
sntesis de novo que yo bloqueo, porque le queda la capac de sintetizar purina y pirimidina
a partir de timidina y de ? Porque el linf no es mutante, entonces cuando hago la fusin
toda clula que no sea un hibridoma se muere y ese es un mtodo de seleccin.
Ahora cual de esos hibridoma estn sintetizando Ac que reconocen al Ag que inocule en el
ratoncito.
Hay plaquitas que tienen 96 pocillitos, en cada pocillito pongo 100 microlitros donde
esperamos que en cada uno halla una clula (puede que no halla ninguno o lo contrario que
halla varias).
Lo que va a
ocurrir en
ese pocillito
, donde puse
una nica
clula y esa
clula es un
linf,
la
clula
se
muere, pero
si en ese nico pocillito puse una clula y esa clula es un hibridoma, la clula se va a
multiplica y empieza a crecer de a poquito hasta que llega a parecer una verdadera mora,
lo que quiere decir que tememos un clon de linf realmente es un hibridoma. En el caso que
en el pocillito no hubiera nada, no veramos nada, en el caso que hubiera ms de una clula,
veramos como se multiplican en forma de mora por separados, y a medida que la clula se
multiplique va a ir sintetizando Ac y vamos a encontrar Ac en el sobrenadante del pocillito,
entonces una muestra del sobrenadante y lo pruebo si reconoce o no reconoce al Ag, si lo
reconoce tenemos ah un clon de linf con una especificidad nica que reconoce al Ag. Ese
clon de linf de clulas hibridoma sintetiza Ac que reconocen linf..
(Ac monoclonales).
Entonces la seleccin, uno que una vez a obtenido la fusin se hace por un medio de
cultivo HAT que le va a poner limitaciones a la multiplicacin de la clula, donde
sobreviven solo los hibridomas.
Puedo hacer diagnostico en un ind si esta infectado o no utilizando distintas estrategias
-porque sintetiza Ac contra el agente inf
-detectar Ag contra el agente inf y para hacer esta deteccin necesito Ac y los Ac
normalmente son Ac monoclonales
-detectando agente inf
9

-tomando muestra de clulas y en la clula identificando? DNA con ? Y hacer un

diagnostico con biologa molecular PCR?
La gracia de los Ac monoclonales es que se pueden utilizar como vacuna antiidiotipica
Me falto como cinco minutos de materia

10