Universidade do Estado do Rio de Janeiro

Centro Biomdico
Faculdade de Cincias Mdicas
Programa de Ps-Graduao em Fisiopatologia Clnica e Experimental

Mabel Carneiro Fraga Marques

Alteraes neuro-comportamentais em ratos machos adultos em modelos de

programao pela hiperleptinemia na lactao

Rio de Janeiro
2009

Mabel Carneiro Fraga Marques

Alteraes neuro-comportamentais em ratos machos adultos em modelos de

programao pela hiperleptinemia na lactao

Tese apresentada como requisito para obteno do ttulo

de

Doutor

ao

Programa

de

Ps-Graduao

em

Fisiopatologia Clnica e Experimental da Universidade do

Estado do Rio de Janeiro.

Orientador: Prof. Dr. Alex Christian Manhes

Co-orientador: Prof. Dr. Egberto Gaspar de Moura

Rio de Janeiro
2009

Mabel Carneiro Fraga Marques

Alteraes neuro-comportamentais em ratos machos adultos em modelos de

programao pela hiperleptinemia na lactao

Tese apresentada, como requisito para obteno do ttulo

de

Doutor

ao

Programa

de

Ps-Graduao

em

Fisiopatologia Clnica e Experimental da Universidade do

Estado do Rio de Janeiro.

Banca Examinadora:
_________________________________________________
Prof Dr. Alex Christian Manhes (Orientador)
Instituto de Biologia Roberto Alcantara Gomes da UERJ
_________________________________________________
Prof. Dr. Cludio Carneiro Filgueiras
Instituto de Biologia Roberto Alcantara Gomes da UERJ
_________________________________________________
Prof. Dr. Jesus Landeira Fernandez
Departamento de Psicologia da PUC
_________________________________________________
Profa. Dra. Patricia Cristina. Lisboa
Instituto de Biologia Roberto Alcantara Gomes da UERJ
_________________________________________________
Prof a. Dra. Regina Clia Cussa Kubrusly
Instituto Biomdico da UFF

Rio de Janeiro
2009

CATALOGAO NA FONTE
UERJ/REDE SIRIUS/BIBLIOTECA CB-A

M357

Marques, Mabel Carneiro Fraga.

Alteraes neuro-comportamentais em ratos machos adultos
em modelos de programao pela hiperleptinemia na lactao /
Alessandro Rodrigues do Nascimento - 2009.
xvii, 75f. : il.
Orientador : Alex C. Manhes.
Co-orientador : Egberto Gaspar de Moura.
Tese (Doutorado) Universidade do Estado do Rio de
Janeiro, Faculdade de Cincias Mdicas.Ps-Graduao em
Fisiopatologia Clnica e Experimental.
Bibliografia: f. 66-90.
1. Cognio nos animais - Teses. 2. Leptina -Teses. 3.
Lactao - Teses. 4. Memria - Teses. 5. Aprendizagem - Teses.
6. Ansiedade - Teses.7. Manifestaes neurocomportamentais Teses. 8. Hiperfagia - Teses.I. Manhes, Alex C. II. Moura, Egberto
Gaspar de. III. Universidade do Estado do Rio de
Janeiro.Faculdade de Cincias Mdicas. IV. Ttulo.

CDU 591.5

Autorizo apenas para fins acadmicos e cientficos, a reproduo total ou parcial desta tese.

_____________________________________________
Assinatura

_____________________
Data

O presente trabalho foi realizado no Laboratrio de Neurofisiologia (LN) e no

Laboratrio de Fisiologia Endcrina (LFE) do Depto. de Cincias Fisiolgicas do Instituto de
Biologia Roberto Alcantara Gomes, sob a orientao dos professores Alex Christian Manhes
e Egberto Gaspar de Moura, na vigncia dos auxlios concedidos pelo Conselho Nacional de
Desenvolvimento Cientfico e Tecnolgico (CNPq), pela Coordenao de Aperfeioamento
de Pessoal de Nvel Superior (CAPES) e pela Fundao Carlos Chagas de Amparo Pesquisa
do Estado do Rio de Janeiro (FAPERJ).

DEDICATRIA

minha famlia, em especial a minha me, pelo exemplo

de vida, amor, dedicao e incentivo sempre.

AGRADECIMENTOS
Ao Professor Alex Christian Manhes agradeo por ter me aceitado como orientanda
e confiado no meu trabalho, mesmo antes de conhec-lo. Agradeo a orientao, reflexes
crticas e conhecimentos transmitidos durante o desenvolvimento deste trabalho. Muito
obrigada pela confiana e pela fora!
Ao professor Egberto Gaspar de Moura pelo incentivo e apoio sempre concedido,
antes mesmo de ser sua aluna de doutorado, e pelo exemplo de dedicao pesquisa.
Professora Patrcia Lisboa pela constante participao na elaborao de resumos,
artigos, tese, projetos, mesmo no sendo oficialmente minha co-orientadora, e tambm pela
reviso da tese.
Aos professores Yael de Abreu Villaa e Cludio Carneiro Filgueiras pelo exemplo
de amor pesquisa, e a todos os alunos do laboratrio de Neurofisiologia: Fernanda, Andria,
Ulisses, Carla, Monique, Danielle, Anderson, Andr, Ana Heloisa, Ana do flor e Ana da
Carla e Juliana da F, pelo apoio e amizade, em especial aos meus GRANDES AMIGOS
E COLABORADORES: Juliana da Mabel e Sylvio.
professora Magna Cottini da Fonseca Passos, a Elaine Oliveira, e a todos os alunos
e ex-alunos do laboratrio de Fisiologia Endcrina: Isis, Mariana, Juliana, Isabela, Luciane,
Nathlia, Ellen, Cntia, Paula, Ana Paula, Aline Rios, Aline Troina e Stepham pela
colaborao e amizade.
Coordenao de Ps-Graduao em Fisiopatologia Clnica e Experimental pelo
auxlio financeiro, imprescindvel na participao em eventos cientficos que muito
contriburam para minha formao.
secretria da Ps-Graduao Amlia Gomes por sua eficincia e tambm pela
amizade ao longo destes anos.

 minha famlia querida, Mami, Painho, Deborah, Gilcene e Jnior que mesmo
geograficamente distante so as pessoas mais presentes em minha vida, e a todos os meus
queridos e amigos: Fred, Eloza, Roberta Leo, Denise, Xnia, Louise e Jlia que sempre me
incentivaram a seguir em frente e me deram fora e amor.
quele em quem me apoio e que me d sonhos e meios para realiz-los DEUS.
Porque Dele e por Ele so todas as coisas.

 melhor tentar e falhar, que preocupar-se e ver a

vida passar. melhor tentar, ainda que em vo que sentarse, fazendo nada at o final. Eu prefiro na chuva caminhar,
que em dias frios em casa me esconder. Prefiro ser feliz
embora louco, que em conformidade viver

Martin Luther King

RESUMO
FRAGA-MARQUES, Mabel Carneiro. Alteraes neuro-comportamentais em ratos machos
adultos em modelos de programao pela hiperleptinemia na lactao. Brasil. 2009. 92 f.
Tese (Doutorado em Fisiopatologia Clnica e Experimental) - Faculdade de Cincias Mdicas,
Universidade do Estado do Rio de Janeiro, RJ, 2009.
Existe uma grande associao entre alteraes em parmetros nutricionais, hormonais
ou ambientais durante estgios iniciais da vida, particularmente durante os perodos
gestacional e de lactao, e o surgimento de doenas crnicas na vida adulta tais como
obesidade, diabetes, doenas cardiovasculares, ansiedade e depresso. Neste trabalho, foram
avaliados os efeitos cognitivo-comportamentais, em ratos Wistar adultos, da administrao de
leptina (8g/100g, dia, sc) durante os primeiros 10 dias de lactao: 1) diretamente nos
filhotes; 2) nas progenitoras. A memria e o aprendizado, os nveis de comportamento
associados ansiedade e busca pela novidade foram avaliados em animais adultos atravs,
respectivamente, dos seguintes testes comportamentais: labirinto aqutico radial de 8 braos,
labirinto em cruz elevado e campo vazado. No primeiro modelo (injeo nos filhotes), foram
observados altos nveis de ansiedade e de busca por novos estmulos, enquanto que a memria
e aprendizagem e atividade locomotora no foram afetados. No segundo modelo (injeo nas
progenitoras), foram detectados reduo dos nveis de ansiedade e melhora no desempenho
associado memria e ao aprendizado. Porm, no houve diferena nos nveis de busca por
novos estmulos e no nvel de atividade locomotora. Tambm so observadas diferenas em
parmetros somticos, endcrinos e metablicos entre modelos. O primeiro modelo resulta em
hiperfagia, maior peso corporal por aumento de massa magra, hiperleptinemia,
hipertireoidismo, hipertrigliceridemia, hiperinsulinemia e hipoadiponectinemia, hipertenso,
aumento de catecolamina e de corticosterona, alm de resistncia hipotalmica leptina. O
segundo modelo induz hiperfagia e maior peso corporal por acmulo de gordura,
hiperleptinemia, hiperglicemia, eutireoidismo, normoinsulinemia e resistncia central
leptina. As seguintes possibilidades podem explicar as diferenas cognitivos-comportamentais
observadas entre os modelos estudados: 1) diferentes perfis somticos, endcrinos e
metablicos; 2) modificaes na relao me-prole, j que a leptina injetada na me pode
reduzir seu nvel de ansiedade; 3) diferenas entre as vias de administrao da leptina, j que
sua transferncia pelo leite pode causar alteraes secundrias.
Palavras-chave: Hiperleptinemia,
ansiedade, busca pela novidade.

lactao,

programao,

memria,

aprendizagem,

ABSTRACT
A considerable association exists between variations in nutritional, hormonal and
environmental parameters during early life, particularly in the gestational and lactation
periods, and the appearance of chronic diseases in adult life, such as obesity, diabetes,
cardiovascular diseases, anxiety and depression. In the present study, the cognitive and
behavioral effects of leptin injection (8g/100g/day, sc) during the first 10 days of lactation
were evaluated in adult male Wistar rats. In the first part of the study, leptin was injected
directly in the offspring. In the second part of the study, leptin was injected in the lactation
dams. Memory and learning, levels of anxiety-like behavior and levels of novelty-seeking
behavior were evaluated by testing animals in, respectively, the radial-arm water maze, the
elevated plus maze and the hole board arena. In the first model (offspring injection), high
levels of anxiety and of novelty-seeking behavior were observed. Memory/learning and
locomotor activity were unaffected. In the second model (dam injection), reduced levels of
anxiety and better memory/learning performance were observed. Conversely, novelty-seeking
and locomotor behavior were unaffected. Differences between models regarding somatic,
endocrine and metabolic parameters are also observed. The first model presents hyperphagia,
higher lean body mass, hyperleptinemia, hyperthyroidism, hipertrigliceridemia,
hiperinsulinemia and hypoadiponectinemia, hypertension, increased levels of catecholamines
and corticosterone, and hypothalamic leptin resistance. The second model induces
hyperphagia, higher body mass, thou by accumulation of fat, hyperleptinemia, hyperglycemia,
euthyroidism, normoinsulinemia and central mechanism of leptin resistance. The following
possibilities may explain the cognitive-behavioral differences observed between models in the
present study: 1) differences in somatic, endocrine and metabolic parameters; 2)
modifications of the relationship between dams and their offspring, since leptin injection in
the dams may reduce their anxiety levels; 3) different routes of leptin injection, since leptin
transfer via milk may cause secondary alterations.
Keywords: Hyperleptinaemia, lactation, programming, memory, learning, anxiety, noveltyseeking.

LISTA DE ILUSTRAES

FIGURA 1:

Via de sinalizao da leptina no hipotlamo

22

FIGURA 2:

Neurnios hipotalmicos responsivos leptina, NPY e -MSH

24

FIGURA 3:

Vista superior do labirinto aqutico radial de 8 braos

91

FIGURA 4:

Vista superior do labirinto em cruz elevado

92

FIGURA 5:

Vista superior do campo vazado

92

LISTA DE TABELAS

TABELA 1:

Via de sinalizao da leptina no hipotlamo

19

LISTA DE SIGLAS E ABREVIATURAS

A

Peptdeo beta-amilide

ACTH

Hormnio adrenocorticotrfico

AgRP

Protena agouti

-MSH

Hormnio estimulador de alfa-melancito

AMPA

cido a-amino-3-hidroxi-5-metil-4-isoxazolpropinico

ARC

Ncleo arqueado do hipotlamo

BA

Brao aberto

Ca2+

Clcio

CA1

Neurnios hipocampais

CaMKII

Miosina-V e Ca2+/calmodulina quinase

CART

Fator de transcrio celular regulado por cocana e anfetamina

CCK

Colecistoquinina

CRH

Hormnio liberador de corticotropina

CV

Campo vazado

db/db

Camundongos com deleo do gene lepr

DNA

cido desoxirribonuclico

DMN

Ncleo dorsomedial do hipotlamo

GHS-R

Receptor do secretagogo de hormnio de crescimento

GLP

Peptdeo semelhante ao glucagon

HD

Head dipping

HLA

Hipotlamo lateral

HHA

Eixo hipotlamo-hipfise-adrenal

HHT

Eixo hipotlamo-hipfise-tireide

HTs

Hormnios tireoideanos

i.c.v

Intracerebroventricular

IBGE

Instituto Brasileiro de Geografia e Estatstica

IMC

ndice de massa corporal

IP3

Fosfatidilinositol trifosfato

JAK

Janus-kinase

LAROB

Labirinto aqutico de 8 braos

LCE

Labirinto em cruz elevado

Lepr

Gene do receptor de leptina

LTD

Depresso de longa durao

LTP

Potenciao de longa durao

MCH

Hormnio concentrador de melanina

MSH

Hormnio estimulador de alfa-melancito

mRNA

cido ribonuclico mensageiro

NMDA

N-metil-D-aspartato

NPY

Neuropeptdeo Y

NR

Subunidade dos receptores de NMDA

Ob

Gene da obesidade (leptina)

ob/ob

Camundongos com deleo do gene ob

ObR

Receptor de leptina

ORX

Orexinas

NMDA

N-metil-D-aspartato

PI3K

Fosfatidilinositol 3-kinase

POMC

Pr-piomelanocortina

PVN

Ncleo paraventricular do hipotlamo

PYY

Peptdeo YY

RNAi

cido ribonucleico de interferncia

RNAm

cido ribonucleico mensageiro

SM

Sndrome metablica

SN

Sistema nervoso

SNC

Sistema nervoso central

SNS

Sistema nervoso simptico

SOCS

Supressores de sinalizao de citocinas

SAP

Stretched attend posture

STAT

Protena do sinal de transduo e transcrio

TDAH

Transtorno do dficit de ateno e hiperatividade

TRH

Hormnio liberador de tireotrofina

TSH

Tireotrofina

VTA

rea tegumentar ventral

VMH

Hipotlamo ventromedial

SUMRIO

1.

INTRODUO........................................................................................................ 18

1.1

Leptina.......................................................................................................................18

1.1.1 Leptina e sistemas neuroendcrinos...........................................................................19

1.1.2 Receptores de leptina................................................................................................. 20
1.1.3 Sinalizao intracelular da leptina..............................................................................22
1.1.4 Efeitos da leptina no hipotlamo................................................................................ 23
1.1.5 Efeitos da leptina em outras estruturas.......................................................................24
1.1.6 Resistncia leptina................................................................................................... 25
1.2

Efeitos cognitivos e comportamentais da leptina.................................................. 26

1.2.1 Leptina, memria e aprendizado................................................................................ 27

1.2.2 Leptina e ansiedade.................................................................................................... 29
1.2.3 Leptina e atividade exploratria................................................................................. 31
1.3

Programao metablica......................................................................................... 32

1.3.1 Programao metablica pela leptina.........................................................................34

1.4

Modelos experimentais em animais........................................................................ 34

1.4.1 Modelo de aprendizagem e memria......................................................................... 34

1.4.2 Modelo de ansiedade.................................................................................................. 35
1.4.3 Modelo de busca pela novidade................................................................................. 36
2.

OBJETIVOS............................................................................................................. 37

3.

ARTIGOS................................................................................................................. 38

3.1

Artigo 1...................................................................................................................... 38
Mabel C. Fraga-Marques, Egberto G. Moura, Sylvio Claudio-Neto,
Isis H. Trevenzoli, Fabiane P. Toste, Magna C.F. Passos, Patrcia C.
Lisboa, Alex C. Manhes. Neonatal hyperleptinaemia programmes
anxiety-like and novelty seeking behaviours but not memory/learning
in adult rats. Hormones and Behavior 55 (2009) 272279.

3.2

Artigo 2...................................................................................................................... 47
Mabel C. Fraga-Marques, Egberto G. Moura, Juliana Oliveira-Silva;
Sylvio Claudio-Neto, Fernanda Pereira-Toste, Magna C F Passos,
Patricia C Lisboa, Alex C. Manhes. Effects of maternal
hyperleptinaemia during lactation on memory/learning, anxiety-like

and novelty-seeking behavioral traits of adult male rats. Behavioural

Brain Research, submetido, 2009.
4.

DISCUSSO............................................................................................................. 58

5.

CONCLUSES........................................................................................................ 65

6.

REFERNCIAS....................................................................................................... 66

7.

ANEXO..................................................................................................................... 91

18

1. INTRODUO
A obesidade um dos maiores problemas de sade pblica na sociedade moderna e
seus efeitos deletrios tm se tornado mais frequentes e intensos tendo em vista o constante
aumento no nmero de indivduos que apresentam esta caracterstica (Kopelman, 2000;
Friedman, 2009). Segundo pesquisa realizada pelo IBGE, sobre a anlise da disponibilidade
domiciliar de alimentos e do estado nutricional no Brasil de 2002 a 2003, cerca de 40% dos
adultos brasileiros de ambos os sexos apresentam sobrepeso (IMC igual ou maior que 25
kg/m2). Sabe-se que a obesidade pode ser condicionada por fatores genticos, diminuio da
prtica de atividade fsica, como tambm por alteraes nutricionais ou ambientais durante a
fase de desenvolvimento do indivduo, particularmente nos perodos fetal e perinatal (Rogers,
2003; Gluckman e Hanson, 2004; Cripps et al., 2005).
Entre os aspectos da fisiologia humana que so afetados na obesidade, mesmo quando
esta considerada como um dos componentes de um conjunto de fatores (tal como na
sndrome metablica), podemos citar os cognitivos, os emocionais e os comportamentais
(Van der Merwe, 2007; Brook et al., 2009). A associao entre obesidade e alteraes do
funcionamento do sistema nervoso (SN) levou ao estudo sistemtico das bases biolgicas
desta relao (Sena et al., 1995; Bereiter e Jeanrenaud, 1979, 1980; Steppan e Swick, 1999;
Jagust et al., 2005). Tendo em vista a grande diversidade de fatores que levam obesidade,
esperado que mltiplos mecanismos possam explicar a existncia desta relao (Rogers, 2003;
Gluckman e Hanson, 2004; Cripps et al., 2005; Zheng e Berthoud, 2008). O presente estudo
procura abordar um dos aspectos da fisiologia que est alterada no obeso e que cada vez mais
frequentemente tem sido associado s alteraes na funo do SN: os nveis sricos de leptina
(Banks, 2003; Figlewicz, 2003; Blher e Mantzoros, 2009; Leinninger, 2009).

1.1. Leptina
A leptina, produto do gene ob, um hormnio peptdico de 16kDa secretado
principalmente por adipcitos maduros. Este hormnio tambm foi detectado, em menor
concentrao, nas seguintes estruturas: estmago, intestino, placenta, msculo esqueltico,
glndula mamria e crebro (Ahima, 2005). A descoberta da leptina, por Zhang e
colaboradores em 1994, representou um marco para os avanos no entendimento de processos
moleculares envolvidos com o controle da ingesto e do peso corporal.

19

A produo de leptina pelo adipcito regulada pelo tamanho dos estoques de gordura
corporal e por hormnios envolvidos na homeostase energtica, como insulina,
glicocorticides e hormnios contra-reguladores. No indivduo saciado (alimentado), h
aumento na produo de insulina. Ao contrrio, no jejum prolongado, quando h uma reduo
nos estoques de gordura, ocorre aumento na secreo de glucagon e de catecolaminas e
diminuio na secreo de leptina pelos adipcitos (MacDougald et al., 1995; Rentsch e
Chiesi, 1996; Slieker et al., 1996).
A concentrao srica de leptina reflete o estado das reservas energticas do
organismo e o balano energtico entre a ingesto e o gasto calrico. Est diretamente
relacionada com o ndice de massa corporal (IMC) e o contedo corporal total de gordura de
um indivduo (Lustig, 2001). A tabela 1 rene os principais fatores envolvidos no controle da
secreo de leptina.
Tabela 1. Fatores envolvidos na regulao da leptina
Aumento de leptina

Reduo de leptina

Tecido adiposo
Superalimentao
Obesidade
Insulina
Glicocorticides
Infeco aguda
Citocinas pr-inflamatrias (TNF-, IL-1)

Tecido adiposo
Jejum
Exposio ao frio
Agonistas -adrenrgicos
Testosterona

Placenta
Insulina
Glicocorticides
Hipxia/eclampsia

Estmago
Alimentao
Grelina
Colestocinina

Msculo esqueltico
Glicose
Glicosamina
Lipdeos

1.1.1. Leptina e sistemas neuroendcrinos

Diversos estudos em animais e intervenes farmacolgicas em seres humanos tm
proposto uma ao inibitria do sistema nervoso simptico (SNS) sobre a secreo de leptina
e esta, por sua vez, altera a resposta do eixo hipotlamo-hipfise-adrenal (HHA) ao estresse.
A exposio ao frio aumenta a noradrenalina plasmtica e reduz a concentrao de leptina em
humanos (Ricci et al., 2000) e a expresso do mRNA para a leptina em camundongos
(Trayhurn et al., 1995). A exposio ao frio tambm reduziu as concentraes sricas de

20

leptina e aumentou os seus receptores no hipotlamo (Dutra et al., 2007). Indivduos expostos
baixas temperaturas tm aumento da atividade simptica, principalmente no tecido adiposo
marrom. Isso sugere que o mecanismo pelo qual a leptinemia cai no frio seja a inibio da
secreo do hormnio via aumento da atividade simptica em geral. Inversamente, foi
relatado que a leptina tem efeito estimulatrio sobre o sistema simpatoadrenal (TangChristensen et al., 1999), demonstrando que existe uma interao entre tecido adiposo e o
crebro pela qual a leptina estimula as vias simpticas que por sua vez inibem a sua secreo.
Algumas evidncias sugerem uma relao entre o eixo HHA e a secreo de leptina,
mas a interao entre esses sistemas ainda no bem compreendida e os achados
experimentais frequentemente so divergentes. Em seres humanos, o cortisol srico no
perodo ps-cirrgico aumenta e a leptinemia reduzida quase metade (Kain et al., 1999),
mostrando uma relao inversa entre esses hormnios. Pacientes com Sndrome de Cushing
(hipercortisolismo) apresentam hiperleptinemia em concentraes similares as que ocorrem na
obesidade (Masuzaki et al., 1997). Alm disso, a administrao de dexametasona em
indivduos saudveis e em cultura de adipcitos humanos aumenta a expresso do mRNA e a
secreo de leptina (Masuzaki et al., 1997), evidenciando um efeito direto dos
glicocorticides sobre a sntese e secreo deste hormnio. Portanto, embora a relao entre
glicocorticides e leptina ainda no seja bem definida, existem fortes evidncias de uma
correlao positiva entre eles, quando o hipercortisolismo est associado a aumento na
adiposidade, pelo menos central. Alguns trabalhos mostram uma relao inversa entre leptina
e glicocorticides (Stephens et al., 1995; Huang et al., 1998; Ahima e Flier, 2000). A leptina
regula o eixo HHA, inibindo a secreo do hormnio adrenocorticotrfico (ACTH) via
inibio do hormnio liberador da corticotrofina (CRH) (Heiman et al., 1997; Oates et al.,
2000). Ainda, parece que a leptina suprime diretamente a produo e secreo de
glicocorticides no crtex de adrenais de porcos (Malendowicz et al., 2007).
1.1.2. Receptores de leptina
O receptor de leptina (ObR) foi descrito pela primeira vez em camundongos e
caracterizado como um membro da famlia das citocinas da classe 1 (Tartaglia et al., 1995).
Pelo menos seis isoformas j foram identificadas em roedores: ObRa, ObRb, ObRc, ObRd,
ObRe e ObRf (Tartaglia et al., 1995; Lee et al., 1996; Wang et al., 1996).

21

As isoformas ObRa-ObRd e ObRf contm um domnio transmembrana e podem ser

subdivididas em duas classes: formas curta e longa. A forma longa do receptor (ObRb)
altamente conservada entre as espcies e muito expressa em mamferos, possuindo o maior
domnio intracelular desta famlia de receptores, com 300 resduos de aminocidos. As outras
isoformas so consideradas curtas devido ao pequeno domnio intracelular e somente o ObRa
conservado entre as espcies de mamferos, com uma cadeia intracelular formada por 32-40
resduos em roedores. O ObRe contm somente um domnio extracelular e definido como a
forma livre ou secretada do receptor de leptina. Em geral, a isoforma longa do receptor a
considerada crtica para a ao da leptina em diversos tecidos, por possuir maior domnio
intracelular e desencadear mecanismos de sinalizao que vo resultar efetivamente nas aes
hormonais (Chua et al., 1997; Tartaglia, 1997).
A maior densidade de ObR encontrada em regies do hipotlamo, incluindo ncleos
arqueado, ventromedial, paraventricular, dorsomedial e hipotlamo lateral, que so
reconhecidos centros de regulao da ingesto alimentar e homeostase energtica (Sahu,
2004). No entanto, recentemente foram descritos receptores para o hormnio em tecidos
perifricos tais como glndula tireide (Nowak et al., 2002; Vicente et al., 2004), glndula
mamria, glndula supra-renal, hipfise, fgado, tecido adiposo e msculo esqueltico,
evidenciando que a leptina, alm de suas funes centrais, tambm regula perifericamente o
metabolismo (Bjorbaek e Kahn, 2004).
O surgimento de animais obesos mutantes espontneos, que atravs de experincias
com parabiose propiciaram a hiptese da existncia de um hormnio liposttico, denominado
de leptina, o qual anos depois foi associado com os genes ob e lepr atravs de tcnicas de
mutagnese in situ, representou um grande avano nos estudos a respeito da regulao
hormonal do apetite (Halaas et al., 1995; Maffei et al., 1995). A perda da sinalizao da
leptina em camundongos ob/ob (deleo do gene ob) e em camundongos db/db (deleo do
gene lepr) resulta em obesidade secundria a hiperfagia e reduo do gasto energtico
(Clement et al., 1998; Friedman e Halaas, 1998). Alm disso, esses animais apresentam outras
disfunes

tais

como

hipotireoidismo,

retardo

de

crescimento,

infertilidade

imunodeficincia. A reposio de leptina na restrio alimentar restaura cada uma dessas

funes e diminui o apetite (Ahima et al., 1996). Todavia, somente uma pequena porcentagem
dos seres humanos obesos so hipoleptinmicos por apresentarem algum tipo de deficincia
gentica, sendo mais frequente a obesidade associada resistncia leptina, o principal fator
envolvido no desenvolvimento da doena (Considine et al., 1996).

22

1.1.3. Sinalizao intracelular da leptina

A leptina entra no crebro por um mecanismo de transporte saturvel (Banks et al.,
1996), possivelmente atravs da barreira hematoenceflica por um transporte mediado por
receptor (ObRa, ObRc) ou pelo lquido cefalospinal (Schwartz et al., 1996). A leptina se liga
ao ObRb no hipotlamo e ativa sistemas de sinalizao intracelular dependentes
principalmente da ativao da via JAK-STAT, que est ilustrada na figura 1 (Myers, 2004).
As protenas JAK pertencem famlia janus-kinase e so encontradas associadas
constitutivamente ao domnio intracelular do ObRb. A ligao leptina-ObRb resulta em
autofosforilao de JAK2 em resduos de tirosina presentes no domnio intracelular do
receptor, com consequente ativao de STAT3 (transdutor do sinal e ativador da transcrio3). A protena STAT3 ativada sofre dimerizao e se transloca para o ncleo, onde regula a
transcrio de diversos genes, entre eles, o da protena SOCS3 (supressor da sinalizao de
citocinas tipo 3), um inibidor da via de sinalizao que atua por retroalimentao negativa
(Ahima, 2005). O aumento na expresso de SOCS3 inibe a fosforilao em tirosina de JAK2
(Bjorbaek et al., 1999; Emilsson et al., 1999). Os altos nveis de SOCS3 vm sendo
correlacionados com resistncia ao do hormnio tanto no hipotlamo quanto em tecidos
extra-hipotalmicos (Bjorbaek et al., 1998; Steinberg et al., 2004; Velloso et al., 2008).

Figura 1. Via de sinalizao da leptina no hipotlamo (adaptado de Sahu, 2003).

23

1.1.4. Efeitos da leptina no hipotlamo

A leptina regula direta ou indiretamente grupos de neurnios especficos no
hipotlamo e em outras regies do crebro (Tartaglia et al., 1995; Fruhbeck, 2001). Algumas
dessas regies so ricas em ObRs, mostrando o efeito direto do hormnio na regulao
neuronal e, em outras, o receptor pouco expresso, mesmo que nestes casos a resposta
leptina seja acentuada, evidenciando uma regulao indireta. ObRs so altamente expressos
nos ncleos arqueado e ventromedial do hipotlamo, reas envolvidas com o controle da
termognese, regulao hormonal e comportamento alimentar (Hakansson e Meister, 1998;
Elmquist et al., 1999). Por outro lado, neurnios presentes no ncleo paraventricular do
hipotlamo (PVN) e no hipotlamo lateral (LHA) so praticamente desprovidos de receptores
para a leptina (Elmquist et al., 1998) sendo, no entanto, importantes reguladores das funes
neuroendcrinas mediadas pelo hormnio. Essa regulao realizada de forma indireta,
atravs de projees de neurnios sensveis leptina presentes no ncleo arqueado, ncleo
dorsomedial (DMN) e tronco cerebral (Elmquist et al., 1999; Ahima et al., 2000).
Diversos neuropeptdeos hipotalmicos esto envolvidos na sinalizao mediada pela
leptina. Essas molculas sinalizadoras podem ser classificadas em dois grandes grupos:
peptdeos orexgenos, que estimulam o apetite, e peptdeos anorexgenos, que reduzem a
ingesto alimentar (Sahu, 2004). A leptina inibe a atividade de centros hipotalmicos
contendo neurnios que expressam neuropeptdeos orexgenos NPY (neuropeptdeo Y),
AGRP (peptdeo relacionado protena agouti), MCH (hormnio concentrador de melanina) e
ORX (orexinas) e estimula aqueles responsveis pela produo de neuropeptdeos
anorexgenos -MSH (hormnio estimulador de alfa-melancito), CART (transcrito
regulado por cocana e anfetamina) e CRH (hormnio liberador da corticotrofina) (figura 2).
Portanto, a leptina age como um fator de saciedade no SNC (Sahu, 2002; Ahima e Osei,
2004).
A leptina estimula a biossntese de TRH (hormnio liberador de tireotrofina) por
mecanismos diretos sobre os neurnios do PVN que expressam TRH, pois j foi demonstrado
que a injeo de leptina em ratos em jejum reverte a supresso do RNAm para pr-TRH
(Legradi et al., 1997). Reforando essa idia, em ratos com leses no PVN, onde o ObR
altamente expresso, nem o jejum nem a administrao de leptina no jejum alteraram os nveis
plasmticos de HTs (hormnios tireoideanos) e TSH (tireotrofina) ou a expresso do pr-TRH
(Legradi et al., 1998).

24

Figura 2: Neurnios hipotalmicos responsivos leptina, NPY e -MSH. Leptina regula diretamente
neurnios NPY/AGRP e POMC/CART presentes no ncleo arqueado. NPY estimula a fome via receptores Y1 e
Y5. O receptor Y2 age pr-sinapticamente regulando a liberao de NPY nos neurnios POMC (-MSH). O efeito
do NPY modulado pela grelina circulante ou produzida localmente no hipotlamo. AGRP antagoniza a ao do
-MSH em receptores MC4/3, estimulando o apetite, reduzindo o gasto energtico e ganho de peso. GHS-R:
growth hormone secretagogue receptor ou receptor de grelina (Adaptado de Ahima e Osei, 2004).

1.1.5. Efeitos da leptina em outras estruturas

Foi demonstrado que a leptina, alm da sua ao central sobre o metabolismo
energtico, controle de peso corporal e ingesto, tambm possui ao direta sobre tecidos
perifricos. Em hepatcitos isolados de ratos Wistar, a leptina estimula a incorporao de
glicose e a deposio do glicognio, aumentando os estoques intracelulares de maneira dosedependente e aditiva ao efeito da insulina (Berti et al., 1997; Kellerer et al., 1997; Ceddia et
al., 1998). A deposio de glicognio reflete as taxas de sntese e degradao do polmero.
Alm disso, a leptina inibe a atividade da fosforilase , enzima limitante para a produo
heptica de glicose a partir da degradao do glicognio (Aiston e Agius, 1999).
Camundongos ob/ob apresentam diminuio na incorporao de glicose ao glicognio em
msculo sleo, demonstrando o efeito da leptina tambm sobre os estoques de glicognio
muscular (Liu et al., 1997). Alm dos efeitos sobre o metabolismo de carboidratos, a leptina
tambm aumenta agudamente a oxidao de cidos graxos e reduz a sntese de triacilglicerol
em msculo esqueltico (Steinberg et al., 2002).
Receptores de leptina esto presentes na hipfise (Vicente et al., 2004) e na tireide de
ratos (Nowak et al., 2002; Dutra et al., 2007; Rodrigues et al., 2009), sugerindo uma
regulao direta deste hormnio sobre o eixo hipotlamo-hipfise-tireide (HHT).

25

A presena de ObRs em clulas cromafins na medula adrenal foi determinada em

diversas espcies, como porcos, ratos, bois e seres humanos (Cao et al., 1997; Glasow et al.,
1998; Takekoshi et al., 1999; Yanagihara et al., 2000). Contudo, os dados sobre qual ou quais
isoformas destes receptores encontram-se neste tipo celular ainda so conflitantes na literatura
e parecem ser dependentes da espcie estudada. Porm, o efeito estimulatrio da leptina sobre
a funo adrenomedular parece ser conservado entre as espcies (Takekoshi et al., 1999,
2001a, 2001b; Utsunomiya et al., 2001). Estudos demonstraram a presena de mRNA para
ObRb em medulas adrenais de porcos, roedores e seres humanos (Hoggard et al., 1997;
Glasow et al., 1998; Takekoshi et al., 1999). Outros estudos mostraram que o mRNA para
ObRa altamente expresso em medulas adrenais e a isoforma predominante no tecido,
embora traos de ObRb tenham sido identificados (Cao et al., 1997; Yanagihara et al., 2000).
Essas divergncias podem ocorrer simplesmente por um carter espcie-especfico ou pelo
fato dos receptores de leptina serem pouco expressos em tecidos perifricos, dificultando a
deteco. Recentemente, em nosso laboratrio (dados ainda no publicados), detectamos o
contedo de OB-R em medula adrenal por Western Blotting em ratos adultos que receberam
injeo de leptina nos primeiros 10 dias de vida.
1.1.6. Resistncia leptina
O potencial da leptina em inibir a fome, reduzir o peso corporal e a massa de
adipcitos tem contribudo para que este hormnio seja visto como um fator anti-obesidade
(Sahu, 2002; Zhang et al., 2004). Ratos e seres humanos com deficincia ou anormalidades no
receptor de leptina apresentam hiperfagia e obesidade mrbida (Jquier, 2002). A
hiperleptinemia associada hiperfagia e obesidade indica resistncia leptina, fato que pode
ter papel na patognese da obesidade (Maffei et al., 1995; Considine et al., 1996; Ahima e
Hileman, 2000; Ahima e Osei, 2004). Os provveis mecanismos responsveis por esta
resistncia podem ser: prejuzo no transporte de leptina pela barreira hemato-enceflica,
anormalidades nos receptores de leptina e/ou na sinalizao ps-receptor (Jquier, 2002;
Munzberg e Myers, 2005). Halaas et al. (1997) demonstraram que camundongos obesos so
resistentes administrao perifrica de leptina, mas respondem injeo via i.c.v., o que
sugere que a resistncia leptina pode ser mediada pelo seu transporte prejudicado pela
barreira hemato-enceflica. Outros tipos de resistncia leptina ocorrem como resultado da
mutao do receptor de leptina. H vrios tipos de mutao em receptores de leptina que

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podem resultar em obesidade nos ratos (Flier e Elmquist, 1997) e em seres humanos (Clement
et al., 1998). Outro exemplo a resistncia que pode ocorrer de maneira farmacocintica,
como por problema na distribuio, liberao, no metabolismo e/ou eliminao (Halaas et al.,
1997). Dietas com alto teor de lipdeos tambm podem levar a resistncia leptina atravs de
vrios mecanismos, dentre eles a presena de um antagonista circulante ou uma protena
acoplada, aumento na depurao de leptina, alterao no transporte no crebro, reduo do
receptor de leptina, inibio da via JAK-STAT ou ativao da SOCS-3 (Friedman e Halaas,
1998).

1.2. Efeitos cognitivos e comportamentais da leptina

Embora o hipotlamo seja o mais bem conhecido stio de ao central da leptina,
trabalhos recentes tm atribudo leptina um papel importante na cognio, memria,
motivao, emoo, humor e respostas ao estresse (Fruhbeck, 2001; Funahashi et al., 2003;
Sandoval e Davis, 2003; Harvey et al., 2005, 2007; Lu et al., 2006; Morrison, 2009).
Evidncias mostram que as concentraes de leptina podem estar associadas funo
cognitiva, principalmente com os componentes associados memria, ao aprendizado e ao
raciocnio visuo-espacial, em seres humanos (Ble et al., 2005; Huang et al., 2007; Gunstad et
al., 2008; Paz- Filho et al., 2008). Foi demonstrado que os receptores de leptina so
amplamente expressos em numerosas regies extra-hipotalmicas que atuam sobre respostas
comportamentais (Elmquist et al., 1998; Hakansson et al., 1998; Shanley et al., 2002;
Morrison, 2009), como por exemplo, neocrtex, hipocampo e amgdala (Hkansson et al.,
1998; Shanley et al., 2002; Funahashi et al., 2003; Harvey et al., 2005, 2007; Lu et al., 2006).
Diversos trabalhos identificaram alta expresso do receptor ObRb em regies corticais e
hipocampo (Huang et al., 1996; Couce et al., 1997; Shioda et al., 1998; Burguera et al., 2000;
Ur et al., 2002). Alm disso, o RNAm, a protena e a imunorreatividade da leptina so
altamente expressos em outras regies cerebrais (Morash et al., 1999; Ur et al., 2002),
sugerindo que a leptina pode ser utilizada, por sua liberao local, para modular a atividade de
circuitos neuronais especficos.
Diversas evidncias mostram que a leptina est relacionada com a funo cognitiva.
Isso pode ser justificado, primeiramente, por trabalhos os quais demonstram que a
hipoleptinemia est associada a prejuzos cognitivos (Ble et al., 2005; Huang et al., 2007;
Gunstad et al., 2008; Paz-Filho et al., 2008; Holden et al., 2009), enquanto que indivduos

27

idosos que apresentam altos nveis de leptina obtiveram melhor desempenho cognitivo
(Gunstad et al., 2008). Mudanas na leptinemia encontradas em doenas relacionadas idade
so consideradas fatores importantes para a origem dos dficits cognitivos. Indivduos com
Mal de Alzheimer e demncia vascular associada anorexia tambm apresentam
hipoleptinemia (Power et al., 2001). Alm disso, tem sido observado que a leptina diminui a
quantidade de protena beta-amilide (A) em ratos transgnicos com elevados nveis de A
(Fewlass et al., 2004). Portanto, estes resultados sugerem que a reduo de leptina, talvez
ocasionada por disfunes neuroendcrinas, pode estar associada nveis elevados de A e
demncia, j que esta protena considerada o maior contribuinte para a demncia do Mal de
Alzheimer (Farr et al., 2006). A segunda justificativa para explicar a relao da leptina com a
cognio em seres humanos pode ser observada em modelos genticos que relacionam leptina
com dficit cognitivo (Li et al., 2002; Ohta et al., 2003; Winocur et al., 2005). Alm disto, o
tratamento com leptina melhora o desempenho cognitivo em indivduos (Paz-Filho et al.,
2008). Por ltimo, h evidncia direta que o tratamento com leptina em animais aumenta o
desempenho cognitivo (Oomura et al., 2006). Tendo em vista que o presente estudo procura
abordar os efeitos, em animais adultos, da hiperleptinemia neonatal sobre a memria e o
aprendizado, sobre os nveis de ansiedade e, finalmente, sobre a busca por novos estmulos,
passamos, a seguir, a uma descrio dos efeitos conhecidos da leptina sobre estes
componentes cognitivos e comportamentais, bem como sobre as estruturas associadas.
1.2.1. Leptina, memria e aprendizado
Em reas extra-hipotalmicas, a leptina atua, em parte, por uma regulao direta da
funo neural, incluindo efeitos locais na sinapse (Harvey, 2007). Foi observado em animais
ob/ob ou db/db que os neurnios hipocampais (CA1) apresentam atraso na potenciao de
longa durao (LTP) e depresso de longa durao (LTD), associada a menor atividade de
miosina-V e Ca2+/calmodulina quinase II (CaMKII) (Li et al., 2002; Wayner et al., 2004).
Estes animais apresentaram dficit na memria espacial, quando submetidos ao labirinto
aqutico de Morris (Li et al., 2002), e de memria emocional quando submetidos ao labirinto
em T elevado (Farr et al., 2008). Estudos mostraram que a administrao de leptina em
neurnios hipocampais promoveu a LTP e, consequentemente, o processo de aprendizagem
(Wayner et al., 2004; Farr et al., 2006; Oomura et al., 2006) atravs da estimulao da
fosforilao da CaMKII (Oomura et al., 2006). A LTP hipocampal considerada um sinal

28

especfico da plasticidade sinptica e um correlato neurofisiolgico da aprendizagem e

memria (Malenka e Bear, 2004). As mudanas no LTP e LTD so dependentes da ao da
leptina sobre os receptores N-metil-D-aspartato (NMDA) (Shanley et al., 2001; Durakoglugil
et al., 2005). Alm disso, os animais ob/ob apresentaram retardo no processo de mielinizao
(Sena et al., 1995), corpo neuronal reduzido (Bereiter e Jeanrenaud, 1979) e orientao
dendrtica alterada (Bereiter e Jeanrenaud, 1980), corroborando os achados de que a leptina
importante no desenvolvimento de SNC.
Estudos mostram que a exposio de neurnios hipocampais leptina facilita a
plasticidade sinptica via aumento seletivo de receptores de NMDA (Shanley et al., 2001;
Durakoglugil et al., 2005; Harvey et al., 2005), o qual promove a entrada de Ca2+ em culturas
de clulas hipocampais (Harvey et al., 2005). A aplicao de leptina causa uma discreta
reduo da transmisso sinptica mediada pelo receptor cido a-amino-3-hidroxi-5-metil-4isoxazolpropinico (AMPA) que pode ser rapidamente revertida. Foi observado que ratos
tratados com leptina no perodo neonatal sofreram alteraes na expresso de NR1, NR2B
(subunidade dos receptores de NMDA), sinapsina 2A, que uma protena pr-sinptica, e
sinaptofisina, que uma protena importante na biognese da vescula sinptica (Walker et al.,
2007). Diversas pesquisas tm demonstrado que a ativao da sinalizao PI3K depende da
leptina. A PI3K est relacionada com a regulao de LTP e LTD e receptores NMDA
(Shanley et al., 2001, 2002; Durakoglugil et al., 2005; O'Malley et al., 2007).
A leptina melhora a aprendizagem e a memria (Farr et al., 2006; Oomura et al., 2006)
no s por seus efeitos diretos sobre a funo neuronal/sinptica, mas tambm por sua
capacidade de influenciar a estrutura neuronal e sua plasticidade em roedores (Oomura et al.,
2006; OMalley et al., 2007). Estes estudos surgiram a partir da observao de que roedores
com deficincia de leptina apresentavam crebros com menor volume e peso cortical (Steppan
e Swick, 1999), e que o tratamento destes animais com leptina resultava no somente no
crescimento do crnio como tambm no aumento da quantidade de protena e de DNA
(Ahima et al., 1999; Steppan e Swick, 1999; Udagawa et al., 2006a, 2006b). Foi demonstrado
que os nveis normais de leptina em seres humanos normais tm relao com o volume da
substncia cinzenta em vrias reas cerebrais (Pannacciulli et al., 2007) e que a reposio com
leptina em seres humanos deficientes resulta em grandes mudanas na estrutura cerebral
(Matochik et al., 2005). Todavia, foi observado que a hiperleptinemia est associada a
menores volumes das estruturas cerebrais (Pannacciulli et al., 2007). Outros trabalhos tambm
observaram que altos nveis de leptina associados obesidade, tanto em adultos jovens quanto

29

em idosos, frequentemente resulta em um pobre desempenho cognitivo (Considine, 2005;

Gunstad et al., 2006a,b, 2007; Whitmer et al., 2007; Wolf et al., 2007).
A deficincia de leptina parece reduzir a densidade de projees axonais de neurnios
sensveis a leptina e que esta alterao estrutural pode ser revertida pelo tratamento com
leptina na lactao (Bouret et al., 2004). Alm disso, Oldreive et al (2008) observaram que a
leptina leva a expanso da arborizao dendrtica no hipocampo, crtex e cerebelo. Ainda, foi
demonstrado um aumento na mobilidade e densidade da filopodia dendrtica de clulas
hipocampais (O'Malley et al., 2007) e estimulao da formao e o crescimento do cone
axonal de neurnios corticais (Valerio et al., 2006).
Outros dois aspectos interessantes em que a leptina parece atuar so a neuroproteo e
a neuroproliferao, fato que pode ser particularmente relevante quando se considera que o
hipocampo uma das poucas estruturas do encfalo em que ocorre neurognese no animal
adulto (Imayoshi et al., 2009; Li et al., 2009). Diversos fatores de crescimento agem sobre os
neurnios para proteg-los da neurodegenerao e da morte celular (Signore et al., 2008). A
leptina, por exemplo, tem sido considerada como um sinal de neuroproteo (Tang, 2008;
Morrison, 2009). Alm da observao de que a leptina inibe a apoptose de diversas clulas
no neuronais (Shimabukuro et al., 1998; Howard et al., 1999; Fujita et al., 2002; Somasundar
et al., 2003; Hoda et al., 2007), j se verificou que, em neurnios in vitro, a leptina promove
neuroproteo em modelos de isquemia cerebral (Zhang et al., 2007; Zhang e Chen, 2008),
protege da excitotoxidade glutamatrgica (Dicou et al., 2001; Russo et al., 2004; Zhang et al.,
2007; Guo et al., 2008; Zhang e Chen, 2008), e do estresse oxidativo (Guo et al., 2008), e
promove a proliferao de clulas progenitoras hipocampais (Garza et al., 2008).
Experimentos in vitro e in vivo mostraram que a leptina reduziu a perda de neurnios
dopaminrgicos em modelo de Parkinson quimicamente induzido (Weng et al., 2007).
1.2.2. Leptina e ansiedade
Alm dos seus efeitos sobre memria e aprendizagem, estudos recentes tm observado
que a leptina age sobre as respostas ao estresse (Fruhbeck, 2001; Sandoval e Davis, 2003;
Harvey, 2007) e que tem ao antidepressiva (Harvey, 2007). De uma maneira geral, os
peptdeos inibidores da ingesto alimentar facilitam respostas a situaes aversivas (Kask et
al., 2002). De fato, baixos nveis de leptina so observados quando roedores so expostos ao
estresse crnico e a uma derrota social crnica (comportamento de submisso), os quais

30

induzem respostas comportamentais semelhantes s observadas em humanos depressivos. A

administrao sistmica de leptina reverteu a anedonia (perda de motivao, geralmente
associada depresso), induzido pelo estresse crnico e melhorou a resposta comportamental
a situaes estressantes e aversivas, sendo estes efeitos dose-dependentes (Lu et al., 2006).
Asakawa e colaboradores (2003) mostraram que camundongos ob/ob tratados com leptina
tiveram reduo do peso corporal e tambm dos nveis de ansiedade. Outros estudos mostram
baixos nveis de leptina em pacientes com depresso e esquizofrenia que no apresentam
alteraes na massa corporal (Kraus et al., 2001), mesmo quando estes pacientes so tratados
com psicotrpicos, sugerindo uma ao da leptina em condies psiquitricas (Farr et al.,
2006).
Acredita-se que os receptores de leptina hipocampais sejam um dos stios de ao para
seu efeito antidepressivo (Santarelli et al., 2003; Duman, 2004), j que foi observado que a
administrao i.c.v de leptina reduziu as respostas observadas quando os animais so
submetidos a situaes estressantes e aversivas (Lu et al., 2006; Harvey, 2007), como tambm
resultou no aumento da expresso de RNAm de c-fos na formao hipocampal, giro denteado,
e ncleo basolateral da amgdala, indicando que a leptina tem ao especfica em estruturas
lmbicas (Lu et al., 2006). Este achado corroborado por trabalhos que observaram uma alta
expresso de receptores de leptina no hipocampo e na amgdala (Hkansson et al., 1998;
Shanley et al., 2002; Funahashi et al., 2003). Sabe-se que o hipocampo exerce um papel
fundamental no s na memria e na aprendizagem, mas tambm sobre a atividade
exploratria e ansiedade (McNaughton, 1996; Bast e Feldon, 2003; Bannerman et al., 2004),
assim como a amgdala est essencialmente envolvida nas reaes inatas e condicionada ao
medo (Blanchard e Blanchard, 1972; LeDoux, 1990; Rizvi et al., 1991; Davis et al., 1994;
Vazdarjanova et al., 2001). A leptina pode tambm interferir nas respostas comportamentais
atravs de sua ao sobre o NPY em regies extra-hipotalmicas, uma vez que injees de
leptina causaram rpida infra-regulao dos genes que so responsveis pela expresso de
NPY (Asakawa et al., 2003). Sabe-se que a expresso de NPY na amgdala fortemente
influenciada por situaes de estresse (Thorsell et al., 1998, 1999).
Alm disso, Lu e colaboradores (2006) mostraram que a administrao de leptina no
hipocampo produz um efeito anti-estresse semelhante ao observado na sua administrao
sistmica. Isto pode explicar o fato de que a estimulao do eixo HHA pelo estresse inibido
pela leptina, a qual bloqueia a secreo do ACTH via inibio do CRH (Heiman et al., 1997;
Oates et al., 2000). A deteco de receptores da leptina no crtex de adrenais de porcos

31

tambm sugere que ela pode inibir diretamente a produo e secreo de glicocorticides
(Malendowicz et al., 2007) e muitos trabalhos mostram uma relao inversa entre leptina e
glicocorticides (Stephens et al., 1995; Huang et al., 1998; Ahima e Flier, 2000).
1.2.3. Leptina e atividade exploratria
Diversos trabalhos mostram uma relao entre a leptina e a atividade exploratria.
Russell e colaboradores (1987) observaram que ratos e outras espcies apresentam aumento
de sua atividade quando submetidos restrio alimentar. Contrariamente, estudos mostram
que a leptina diminui o comportamento exploratrio em animais com restrio alimentar
(Exner et al., 2000; Buyse et al., 2001). A hiperatividade induzida pela inanio parcial um
fenmeno bem caracterizado em estudos em animais (Russell et al., 1987; Morse et al., 1995).
O aumento da atividade proporcional restrio alimentar e a privao total de comida
altera o padro de atividade noturna (Morse et al., 1995). O rpido declnio da secreo de
leptina associada restrio calrica e perda de peso (Ahima et al., 1996; Kolaczynski et al.,
1996) poderia representar o fato desencadeador da hiperatividade observada na inanio
parcial e na anorexia nervosa (Exner et al., 2000).
A leptina pode modificar a atividade locomotora de ratos atravs de vrios sistemas
cerebrais como, por exemplo, via ncleo arqueado do hipotlamo (ARC) (Coppari et al.,
2005). Foi observado que a atividade locomotora regulada, em parte, pelo fator de
transcrio Bsx especfico do encfalo, o qual predominantemente expresso no ARC. Outros
estudos sugerem que a leptina exerce um papel sobre a motivao via sistema dopaminrgico
mesolmbico, incluindo a rea tegumentar ventral (VTA) e o ncleo accumbens (Choi et al.,
2008). Por exemplo, a reduo da funo de receptores mediada pelo RNAi na VTA resulta
em aumento de ingesto alimentar e atividade locomotora (Hommel et al., 2006), enquanto
que a administrao crnica de leptina em camundongos ob/ob diminui a atividade
locomotora em resposta anfetamina (Fulton et al., 2006). Outra regio relacionada com
atividade locomotora o hipotlamo ventromedial (VMH). Estudos mostram que leses no
VMH resultam em mudanas na atividade locomotora observada em diversos modelos
experimentais (Challet et al., 1995, 1997; Iwamoto et al., 1999). Alm disso, o ncleo
paraventricular

do

hipotlamo

(PVN)

age

sobre

esta

atividade,

pois

quando

orexina/hipocretina injetada no PVN h um aumento, dose-dependente, da atividade fsica

espontnea (Kiwaki et al., 2004; Novak et al., 2006). Crawley e Corwin (1994) atribuem o

32

efeito da leptina sobre a atividade exploratria via receptores da colecistoquinina tipo 1

(CCK1).
Buyse e colaboradores (2001) observaram que a administrao de leptina diminui o
nmero de orifcios explorados e a durao da explorao destes quando os animais foram
submetidos ao teste de campo vazado (CV), o que est mais relacionado diminuio da
motivao do que a uma alterao propriamente dita do seu comportamento exploratrio,
justificada pelo aumento da atividade locomotora observada quando estes foram submetidos
ao teste do labirinto em Y. Segundo Morrison (2009), esta diminuio pode estar relacionada
com a reduo da motivao para adquirir recompensa, j que a leptina reduz o consumo
alimentar. Embora as reas hipotalmicas estejam associadas com estas respostas, regies
extra-hipotalmicas tambm esto envolvidas. O sistema dopaminrgico mesolmbico
essencial na motivao para a obteno de estmulos prazerosos (Berridge, 1996; Berridge e
Robinson, 2003). As projees dopaminrgicas da rea VTA e do ncleo accumbens so
particularmente influentes no consumo de comida e de drogas (Wyvell e Berridge, 2000;
Cannon e Palmiter, 2003; Pecina et al., 2003). A leptina atua sobre este sistema, inibindo a
ingesto alimentar e modulando os neurnios dopaminrgicos (Figlewicz et al., 2003; Fulton
et al., 2006; Hommel et al., 2006), e tambm pode influenciar indiretamente este sistema via
efeitos hipotalmicos. Portanto, a ao da leptina sobre a inibio do consumo alimentar
envolve reas cerebrais relacionadas com antecipao, memria e motivao (Fulton et al.,
2000; Shalev et al., 2001; Fulton et al., 2006; Getchell et al., 2006).

1.3. Programao metablica

Diversos distrbios crnicos que se manifestam na vida adulta, como por exemplo,
obesidade, diabetes, doenas cardiovasculares, asma, ansiedade e depresso, podem ter suas
origens no incio da vida (Barker, 1995; Charney e Bremner, 1999). Estudos experimentais,
clnicos e epidemiolgicos tm demonstrado que influncias hormonais, nutricionais e
ambientais em perodos crticos do desenvolvimento do indivduo podem alterar
permanentemente parmetros fisiolgicos e comportamentais na idade adulta (Lucas, 1994;
Barker, 2003). A hiptese da origem fetal baseia-se em estudos epidemiolgicos e clnicos,
nos quais o peso ao nascer foi relacionado a desordens metablicas na idade adulta (Lucas,
1994; Barker, 2004; De Moura e Passos, 2005; De Moura et al., 2008). A gestao e a
lactao so perodos de intenso crescimento, replicao e diferenciao celular. Estes

33

processos so sensveis s alteraes do meio na vida intra-uterino e neonatal, resultando em

distrbios estruturais e funcionais que podem se tornar permanentes na idade adulta. A
hiptese do fentipo de poupana prope que o feto se adapta s condies adversas no
meio intra-uterino otimizando a utilizao do menor aporte de nutrientes, garantindo a sua
sobrevivncia. No entanto, essas condies resultam em prioridade no desenvolvimento de
alguns rgos em detrimento de outros, levando a alteraes permanentes no crescimento e na
funo de diversos tecidos (Simmons, 2005). Tambm observado que durante o perodo de
lactao o crebro passa por mudanas importantes no seu desenvolvimento (Spencer et al.,
2006), sendo que nesta fase ocorre um significativo desenvolvimento neurolgico e cognitivo
(De Moura e Passos 2005; Miana-Solis e Escobar, 2006, De Moura et al., 2008). Assim,
condies nutricionais adequadas so essenciais para o crescimento saudvel da prole, pois
atuam como um fator de imprinting para respostas fisiolgicas futuras. Em algumas situaes,
tanto na gestao quanto na lactao, mesmo depois que as condies do meio so restauradas
aos padres normais, algumas funes permanecem alteradas, deixando de ser uma vantagem
adaptativa para se tornarem deletrias para o organismo. Este fenmeno conhecido como
programao metablica (Barker, 1995, 2003, 2004; Gordon, 1997) e o perodo em que o
organismo susceptvel a intervenes denominado perodo crtico de programao (Lucas,
1994).
Tm sido realizados diversos estudos experimentais para testar a hiptese da origem
fetal ou programao, perturbaes tais como desnutrio materna moderada ou severa ou
exposio hormonal na gestao e/ou lactao tm sido impostas (De Moura e Passos, 2005;
De Moura et al., 2008). A grande maioria destes estudos confirma que estas perturbaes
levam ao desenvolvimento de excesso de peso (Passos et al., 2000), diminuio da
sensibilidade insulina (Holemans et al., 1996), aumento da presso arterial (Langley-Evans
et al., 1996; Woodall et al., 1996; Tonkiss et al. 1998) disfunes no eixo HHT (Lisboa et al.,
2008; Teixeira et al., 2003; De Moura et al., 2008) e resistncia ao anorexignica da
leptina (Passos et al., 2004, Toste et al., 2006b; Bonomo et al., 2007; Pereira-Toste et 2009).
A desnutrio neonatal produz alteraes nas concentraes sricas de leptina da
prole, com hipoleptinemia do incio aos meados da lactao e hiperleptinemia ao desmame
(Teixeira et al., 2002). Da mesma forma, a desnutrio causada pelo bloqueio da prolactina ao
final da lactao, produz aumento da passagem de leptina pelo leite e hiperleptinemia na prole
(Bonomo et al., 2005). Baseado nisto, nos questionamos se a leptina nesta fase poderia ser um
fator de impresso hormonal para a programao decorrente da desnutrio neonatal.

34

1.3.1. Programao metablica pela leptina

Diversos trabalhos do nosso laboratrio tm observado que a programao pela
hiperleptinemia na lactao programa o peso corporal, a ingesto alimentar e disfunes
endcrino-metablicas das proles adultas (De Oliveira Cravo et al., 2002, Teixeira et al.,
2003, Toste et al., 2006a,b; Trevenzoli et al, 2007). A programao pela injeo de leptina em
ratos nos 10 primeiros dias da lactao resulta em hiperleptinemia, maior peso corporal, o
qual foi relacionado a maior massa magra e hiperfagia na idade adulta (De Oliveira Cravo et
al., 2002; Toste et al., 2006b), resistncia ao anorexignica da leptina, menor expresso de
seu receptor hipotalmico (Toste et al., 2006b), hipertireoidismo (Toste et al., 2006a),
hipertenso e hiperfuno adrenal (Trevenzoli et al, 2007). Em outro modelo, onde as mes
foram tratadas com leptina nos 3 ltimos dias da lactao, as suas proles adultas apresentaram
sobrepeso por acmulo de gordura (Lins et al., 2005), sugerindo que a leptina transferida via
leite materno e programa para maior peso corporal e hiperfagia. No modelo de
hiperleptinemia materna, onde as ratas lactantes receberam leptina nos 10 primeiros dias da
lactao (Pereira-Toste et al., 2009), as proles tambm exibiram um fentipo de maior
adiposidade central e total na vida adulta.
interessante que tanto o estmulo com leptina, quanto o seu bloqueio atravs do uso
de antagonista especfico (mutena) produzem programaes semelhantes (Attig et al., 2008).

1.4. Modelos experimentais em animais

1.4.1. Modelo de aprendizagem e memria
Dentre os diversos procedimentos e aparelhos desenvolvidos para avaliar memria e
aprendizagem em modelos experimentais, o labirinto aqutico desenvolvido em 1981, por
Richard Morris, vem se destacando nos estudos sobre a neurobiologia da memria (Gallagher
et al., 1993). O teste de Morris baseia-se no fato de que roedores apresentam averso
imerso em gua (Filgueiras e Manhes, 2004, 2005), de modo que estes procuram sair da
gua o mais rpido possvel. Uma adaptao deste equipamento o labirinto aqutico de 8
braos (LAROB), em que se avalia a aprendizagem e memria espacial (Olton, 1987). O
animal deve aprender a localizao do brao que apresenta uma plataforma de escape
baseando-se nas pistas externas ao aparelho, j que ele no pode ver, ouvir ou cheirar a

35

plataforma. A orientao espacial deve ser aprendida e armazenada por perodos variveis de
tempo. A aprendizagem sobre locais pode envolver diferentes estratgias. Pode-se, por
exemplo, aprender as relaes espaciais que existem entre os objetos do ambiente e utilizar
essas relaes para formar um mapa alocntrico (ou mapa cognitivo) que ser utilizado para
encontrar o local desejado (OKeefe e Nadel, 1978). A excluso das pistas proximais e nfase
nas pistas distais fora o uso de estratgias de mapeamento espacial. Uma das principais
vantagens do LAROB a velocidade de treinamento: animais como o rato, nadadores natos
(Whishaw, 1995), normalmente demoram menos que 15 tentativas para aprender a tarefa
(Morris, 1984).
1.4.2. Modelo de ansiedade
Modelos animais de ansiedade so amplamente utilizados para pesquisas de drogas
ansiolticas assim como dos mecanismos cerebrais envolvidos na ansiedade (Graeff et al.,
1998). Dentre os testes comportamentais para se quantificar os nveis de ansiedade em
animais experimentais, o labirinto em cruz elevado (LCE) um dos mais populares testes em
uso atualmente (Pellow et al., 1985; Carobrez e Bertoglio, 2005; Marco et al., 2006). A
popularidade do teste, com mais de 3100 artigos publicados (Web of Science, 2009) se deve a
numerosas vantagens: um teste econmico, rpido, alm da simplicidade de desenho e
sensibilidade bidirecional a drogas (sensvel a efeitos ansiolticos ou ansiognicos) e do fato
de no requerer procedimentos de teste muito cansativos, privao de comida/gua ou uso de
choques eltricos (Pellow et al., 1985; Rodgers et al., 1997). O LCE foi validado em espcies
como ratos (Pellow et al., 1985) e camundongos (Lister, 1987), e mais recentemente espcies
como porquinhos da ndia (Rex et al., 1994), cobaias (Hendrie et al., 1997) e hamsters srios
(Yannielli et al., 1996). Os roedores de forma geral evitam as reas abertas do labirinto, as
quais se presumem sejam as mais aversivas, ou seja, ansiognicas, e mostram preferncia
pelas partes fechadas e protegidas pelas paredes do aparelho (Pellow et al., 1985; Marco et al.,
2006). O tempo no brao aberto (BA) e o nmero de entradas no BA so utilizados como
medidas de ansiedade (Hogg, 1996; Rodgers e Dalvi, 1997; Stead et al., 2006; Abreu-Villaa
et al., 2008; Manhes et al., 2008; Fraga-Marques et al., 2009a). Tambm comum a
avaliao de parmetros etolgicos durante um teste no LCE tais como: rearing (movimentos
verticais sobre as patas traseiras), stretched attend posture (SAP: o animal estica-se para fazer
explorao sem dar passos) e head dipping (HD: movimentos com a cabea ou ombros de

36

explorao), os quais tm sido utilizados, respectivamente, como medidas de atividade

vertical, avaliao de risco e explorao (Rodgers et al., 1997).
1.4.3. Modelo de busca pela novidade
A busca pela novidade, representada pelo aumento da explorao de objetos ou
estmulos desconhecidos, um dos comportamentos mais estudados como fator predisponente
para o uso drogas. Diversos trabalhos tm sugerido que a busca pela novidade em roedores
pode ser utilizada para avaliar alguns aspectos da busca por sensaes estimulantes em
humanos (Dellu-Hagerdon, 2006; Kliethermes et al., 2007). Modelos experimentais em
animais tm mostrado que a busca por drogas mais frequente na presena deste
comportamento (Piazza et al., 1989; Wills et al., 1994; Bardo et al., 1996; Bardo e Dwoskin,
2004; Abreu-Villaa et al., 2006; Pelloux et al., 2006). De acordo com estes achados, a busca
pela novidade, assim como o uso de drogas psicoestimulantes, compartilham um substrato
neurobiolgico similar, que a ativao de estruturas e vias mesolmbicas. A explorao a um
novo ambiente tem sido associada, em ratos, com o aumento dos nveis de dopamina no
ncleo accumbens, o qual freqentemente associado com o fenmeno de recompensa
(Hoebel et al., 1983; Robbins e Everitt, 1996; Wise, 1996; Ikemoto e Wise, 2004). Diversos
estudos em animais avaliam este comportamento submetendo-os ao teste de campo vazado
(CV) (Escorihuela et al., 1999; Vaglenova et al., 2004). O CV foi padronizado por Boissier e
Simon (1962) como medida geral da atividade motora e de explorao (File e Wardill, 1975;
Durcan e Lister, 1989; File, 2001). O nmero de orifcios explorados no CV utilizado como
medida da atividade exploratria (Escorihuela et al., 1999; Abreu-Villaa et al., 2006; FragaMarques et al., 2009a).

37

2. OBJETIVOS
Considerando-se que alteraes nos nveis de leptina na vida adulta esto associadas a
alteraes em funes cognitivas e no comportamento, e considerando-se adicionalmente que
a hiperleptinemia neonatal causa alteraes metablicas que se manifestaram ao longo da vida
do indivduo, atravs de programao, inclusive com hiperleptinemia e resistncia a este
hormnio, no presente trabalho procuramos avaliar se esta programao tambm se manifesta
em parmetros cognitivos e comportamentais.
Neste sentido, os objetivos especficos deste trabalho foram o de estudar o
desempenho de memria e aprendizado, os nveis de comportamento associado ansiedade e
os nveis de comportamento associado busca por novos estmulos em ratos adultos
submetidos a dois modelos experimentais de hiperleptinemia neonatal, quais sejam:
1) Hiperleptinemia induzida por injeo de leptina em ratos neonatos durante os dez
primeiros dias de vida;
2) Hiperleptinemia induzida por injeo de leptina em ratas lactentes durante os dez
primeiros dias de lactao.

38

3. ARTIGOS

3.1. Artigo 1
Mabel C. Fraga-Marques, Egberto G. Moura, Sylvio Claudio-Neto, Isis H. Trevenzoli,
Fabiane P. Toste, Magna C.F. Passos, Patrcia C. Lisboa, Alex C. Manhes. Neonatal
hyperleptinaemia programmes anxiety-like and novelty seeking behaviours but not
memory/learning in adult rats. Hormones and Behavior 55 (2009) 272279.
Hormones and Behavior: JCR2008 = 3.876

58

4. DISCUSSO
Um dos aspectos mais peculiares do presente estudo o fato de que os resultados
cognitivo-comportamentais divergiram entre os dois modelos de programao a despeito dos
seguintes fatos: 1) o perodo da hiperleptinemia neonatal foi o mesmo em ambos os estudos:
os 10 primeiros dias da lactao; 2) o nvel de hiperleptinemia observado nos animais adultos
foi similar nos dois modelos: aproximadamente 2 vezes o normal; 3) foram utilizados os
mesmos procedimentos de manuteno dos animais e os mesmos equipamentos de avaliao
cognitivo-comportamentais em ambos os estudos.
Na programao pela hiperleptinemia induzida pela injeo de leptina diretamente nos
filhotes observamos que os ratos programados apresentaram, do ponto de vista cognitivocomportamental, nveis elevados de comportamentos associados ansiedade e busca por
novos estmulos, enquanto que a memria e aprendizagem no foram afetadas.
Adicionalmente, indicando que os efeitos da programao neste modelo eram especficos, no
foram observadas alteraes no nvel de atividade locomotora nem no processo de tomada de
decises (Fraga-Marques et al., 2009a). Na programao pela hiperleptinemia induzida pela
injeo de leptina nas progenitoras durante a lactao observamos que a prole programada
exibiu reduo dos nveis de comportamentos associados ansiedade e melhor desempenho
de memria e aprendizado. Tambm se encontravam elevados os nveis dos comportamentos
associados avaliao de risco e de explorao. Por outro, no foram observadas alteraes
nos nveis de comportamento de busca por novos estmulos, no nvel de atividade locomotora
nem no processo de tomada de decises (Fraga-Marques et al., 2009b).
Alm das diferenas e similaridades cognitivo-comportamentais descritas acima, as
seguintes comparaes entre parmetros somticos, endcrinos e metablicos entre os dois
modelos podem ser realizadas:
Na programao pela hiperleptinemia induzida pela injeo de leptina diretamente nos
filhotes observamos que os ratos programados apresentaram aumento da ingesto alimentar e
da massa corporal quando adultos, embora o aumento do peso deste modelo tenha sido
associado a maior massa magra (Toste et al., 2006b). Estes animais tambm apresentaram na
idade adulta hipertrigliceridemia, hiperleptinemia hiperinsulinemia (Toste et al, 2006b),
hipertireoidismo, (Toste et al., 2006a), hipertenso, aumento de catecolamina (Trevenzoli et
al., 2007) e de corticosterona (Fraga-Marques et al., 2009a), e baixos nveis de adiponectina.
Na programao pela hiperleptinemia materna na lactao observamos que os ratos

59

programados, quando adultos, apresentaram hiperfagia, aumento da massa corporal

relacionado ao aumento de tecido adiposo (Pereira-Toste et al., 2009). Quanto ao seu perfil
endcrino e metablico tambm foram observadas alteraes, como a hiperleptinemia e
hiperglicemia, porm estes animais apresentaram normoinsulinemia (Pereira-Toste et al.,
2009), triglicerdeos normais e eutireoidismo.
Na programao pela hiperleptinemia induzida pela injeo de leptina diretamente nos
filhotes observamos achados cognitivo-comportamentais que diferem dos descritos na
literatura (Fraga-Marques et al., 2009a). Sabe-se, por exemplo, que a administrao aguda de
leptina, no animal adulto, melhora a aprendizagem e memria tanto em modelos
experimentais (Shanley et al., 2001; Li et al., 2002; Harvey et al., 2005; Farr et al., 2008)
quanto em seres humanos (Paz-Filho et al., 2008). Os nveis elevados de ansiedade e de busca
pela novidade que observamos na prole programada (Fraga-Marques et al., 2009a) tambm
divergem dos diversos trabalhos que afirmam que a leptina tem efeito ansioltico (Wahlestedt
et al., 1989; Heilig et al., 1993; Sajdyk et al., 1999; Asakawa et al., 2003) e que diminui a
motivao como uma forma de inibir a busca por recompensa, o que est possivelmente
associado ao fato de que a leptina reduz o consumo alimentar (Buyse et al., 2001; Fulton et
al., 2006; Morrison, 2009). Alm disso, a leptina no alterou a atividade locomotora dos
animais tratados (Fraga-Marques et al., 2009a), dado tambm inesperado j que trabalhos
mostram que a leptina reduz a atividade locomotora (Crawley e Corwin, 1994; Coppari et al.,
2005). As diferenas entre os nossos achados cognitivo-comportamentais (Fraga-Marques et
al., 2009a) e os resultados descritos na literatura podem ser explicadas por uma provvel
resistncia central a leptina (Toste et al., 2006b). Esta hiptese corroborada por estudos
prvios do nosso laboratrio, os quais observaram que, apesar destes animais apresentarem
hiperleptinemia, eles apresentam aumento da ingesto alimentar (De Oliveira Cravo et al.,
2002, Toste et al., 2006b) e reduo da expresso do Ob-Rb hipotalmico (Toste et al.,
2006b), indicando resistncia ao efeito anorexignico da leptina.
Em contraste ao modelo anterior, observamos que os animais adultos programados
pela injeo de leptina nas progenitoras mostraram achados cognitivo-comportamentais mais
tpicos da ao da leptina. No entanto, verificamos que alguns comportamentos no sofreram
os efeitos esperados, sugerindo que, tambm neste modelo, um mecanismo de resistncia
central a leptina tambm est presente. De fato, Pereira-Toste et al (2009) demonstraram que
estes animais adultos (obesos, hiperfgicos e hiperleptinmicos) no respondem a injeo
aguda e sistmica de leptina com a reduo esperada do consumo alimentar, evidenciando

60

ento o desenvolvimento da resistncia ao efeito anorexignico da leptina neste modelo de

programao. Nossos dados com este modelo mostraram que a leptina melhorou a memria e
aprendizagem e reduziu os nveis de ansiedade, sem afetar a atividade locomotora, a busca
por novos estmulos e a tomada de decises (Fraga-Marques et al., 2009b). Por outro lado,
pesquisas mostram que a leptina reduz a atividade locomotora (Crawley e Corwin, 1994;
Coppari et al., 2005) e a busca por novos estmulos (Crawley e Corwin, 1994; Buyse et al.,
2001). Alm disso, neste modelo, os animais apresentaram aumento da atividade exploratria
(Fraga-Marques et al., 2009b), efeito oposto ao observado na literatura (Exner et al., 2000;
Buyse et al., 2001). Outro efeito inesperado foi o fato da leptina elevar os nveis dos
comportamentos associados avaliao de risco. Trabalhos experimentais em animais
sugerem que apenas os neuropeptdeos orexignicos atuam aumentando os nveis desta
atividade (Kiwaki et al., 2004; Novak et al., 2006). A ausncia de diferenas entre os grupos
na atividade locomotora, busca pela novidade e tomada de decises indica que os efeitos
comportamentais da programao neonatal so seletivos (Fraga-Marques et al., 2009a).
Assim, pode haver uma resistncia hipotalmica, porm em outras estruturas extrahipotalmicas, a leptina pode estar funcionando normalmente.
Embora os dois modelos apresentem praticamente os mesmos nveis de
hiperleptinemia na idade adulta (124% e 110%) e resistncia central leptina, as diferenas
entre seus comportamentos podem ser justificadas pela presena de perfis metablicos
diferentes. Associao de hipertenso, hipertrigliceridemia, hiperinsulinemia e obesidade so
tpicas da sndrome metablica (SM). Deste modo, sugerimos que o aumento dos nveis de
ansiedade e atividade exploratria e a ausncia de melhora da aprendizagem/memria, no
modelo de hiperleptinemia neonatal induzida pela administrao de leptina nos filhotes,
podem estar ligados SM. Diversos trabalhos tm demonstrado uma associao entre SM, ou
entre seus componentes isoladamente, e prejuzos cognitivos (Vanhanen et al., 2006; Yaffe,
2007; Razay et al., 2007; Taylor e MaccQueen, 2007; Lee et al., 2009). Recentemente, foi
reconhecido que a presena concomitante de hipertrigliceridemia, hipertenso e diabetes pode
exercer efeitos negativos sobre o desempenho cognitivo em humanos (Yaffe et al., 2004;
Taylor e MacQueen, 2007). Tambm foi observado dficit cognitivo em camundongos que
apresentavam obesidade associada hipertrigliceridemia (Farr et al., 2008). Diversos
trabalhos mostram que modelos animais de diabetes apresentam prejuzos na memria
espacial, concomitantemente a mudanas na plasticidade hipocampal (Biessels et al., 1996;
Kamal et al., 1999; Shanley et al., 2001), e que estes achados esto associados deficincia

61

ou resistncia a insulina (Shanley et al., 2001; Harvey et al., 2003; Lu, 2007), ou ainda
resistncia a leptina, quando h presena de hiperleptinemia (Sinha et al., 1996). Estudos
tambm em humanos tm observado que pacientes diabticos apresentam dficits cognitivos
(Gispen e Biessels, 2000; Harvey et al., 2003). O mecanismo pelo qual a sndrome metablica
est associada com dficits cognitivos no est totalmente elucidado, mas existem hipteses
plausveis. Uma das hipteses o aumento na freqncia de doenas cerebrovasculres em
diabticos, as quais so fatores de risco para a doena de Alzheimer e demncia (Launer et al.,
2000, 2002). Outro mecanismo possvel que pacientes hipertensos apresentam uma
agregao acelerada de -amilide e o aparecimento de resistncia insulina (Gasparini et al.,
2001; Razay et al., 2007). Alm disso, tambm observado aumento da degradao neuronal
e atrofia cerebral em pacientes obesos (Jagust et al., 2005; Whitmer et al., 2005). Outro
mecanismo plausvel o fenmeno inflamatrio observado na SM, pois sabe-se que a
presena de marcadores inflamatrios est associada com maior risco de demncia e dficits
cognitivos (Yaffe et al., 2004). Ainda em relao aos mecanismos de controle da glicemia, foi
encontrada uma diferena entre os modelos no que diz respeito resistncia insulina: no
primeiro, a manuteno da glicemia normal estava associada presena de hiperinsulinemia,
enquanto que no segundo modelo provvel que a secreo de insulina esteja inadequada,
face hiperglicemia. A insulina sabidamente afeta o comportamento de ratos. Por exemplo, a
injeo intraventricular deste hormnio diminui os nveis de comportamento associados
ansiedade (Shestakova et al., 2009).
Alm das diferenas metablicas e endcrinas supracitadas entre os modelos de
programao, a presena de perfis endcrinos diferenciados tambm pode ser responsvel
pelos diferentes achados cognitivo-comportamentais. Na programao com hiperleptinemia
induzida pela injeo de leptina diretamente nos filhotes, os animais tratados tambm
apresentaram hipotireoidismo aos 30 dias de vida e hipertireoidismo na idade adulta (Toste et
al., 2006a), o que no observado no modelo de programao pela hiperleptinemia materna.
Foi demonstrado que no hipotireoidismo neonatal, a baixa biodisponibilidade de tiroxina pode
prejudicar a maturao cerebral em estgios iniciais do desenvolvimento e afetar as funes
cerebrais superiores e os processos metablicos na idade adulta (Tucker et al., 1984; Hetzel et
al., 1988, 1994; Stein et al., 1991). Diversos trabalhos tm avaliado os efeitos
comportamentais em longo prazo induzido pelo hipotireoidismo ps-natal (Tamasy et al.,
1986), neonatal (Schalock et al., 1977, 1979; Tamasy et al., 1986) e perinatal (MacNabb et al.,
1999, 2000; Sala-Roca et al., 2002; Darbra et al., 2003). Nestes, foram observadas reduo na

62

capacidade de aprendizagem e de habituao, aumento nos nveis de ansiedade e da atividade

exploratria. Estes achados foram similares aos encontrados no nosso modelo de
hiperleptinemia induzida pela injeo de leptina diretamente nos filhotes. Outros trabalhos
tambm observaram relao entre distrbios da tireide e dficits cognitivos, particularmente,
dificuldades de aprendizagem e memria (Erlanger et al., 1999). Recentemente, Nishimura et
al. (2003) observaram que alteraes na tireide no perodo neonatal so fatores de risco para
o surgimento do transtorno do dficit de ateno e hiperatividade (TDAH). Alguns trabalhos
tm encontrado uma relao entre disfuno tireiodeana e distrbios neuropsiquitricos
(Monzani et al., 1993), dentre eles, distrbios compulsivos, pnico, fobias (Placidi et al.,
1998), distrbios de humor (Hendrick et al., 1998), e principalmente depresso e ansiedade
(Darbra, 1994; Stern et al., 1996; Placidi et al., 1998; Sala, 1999). No hipertireoidismo, h
presena de sintomas psiquitricos semelhantes ao da sndrome depressiva e da ansiedade
(Rodewig, 1993), alm de insnia, hiperatividade (Eayrs, 1960; Maletzky e Blachly, 1971),
respostas exageradas a estmulos ambientais e a instabilidades emocionais (Eayrs, 1960).
Estudos mostram que os hormnios tireoideanos provavelmente afetam as funes
neuropsiquitricas aumentando os nveis de catecolaminas (Rastogi et al., 1976; Sulser, 1987;
Howland, 1993), particularmente aumentando o nmero e atividade dos receptores dos
receptores -adrenrgicos a noradrenalina, servindo como um mecanismo neuromodulador
adaptativo (Whybrow e Prange, 1981; Dratman e Gordon, 1996). Acredita-se que estas
alteraes sejam responsveis pelo prejuzo na aprendizagem e pelo surgimento dos distrbios
comportamentais encontrados no hipertireoidismo (Rastogi e Singhal, 1974a,b; Rastogi et al.,
1975a,b, 1976). Sendo assim, o hipertireoidismo (Toste et al, 2006a) e o aumento da secreo
de catecolaminas (Trevenzoli et al, 2007) demonstrados no modelo de hiperleptinemia
induzida por injees na prole podem estar agindo de forma sinrgica, contribuindo para as
alteraes cognitivo-comportamentais, representadas pela inexistncia de uma melhora na
memria e aprendizagem, e o aumento dos nveis da ansiedade e de atividade exploratria
(Fraga-Marques et al, 2009a).
A divergncia nos resultados obtidos nos dois modelos estudados tambm pode estar
associada ao fato de que a aplicao de leptina, com seu efeito ansioltico (Asakawa et al.,
2003; Stoving et al., 2009), tenha reduzido os nveis de ansiedade das mes afetando, por
consequncia, o padro de cuidados destas em relao s proles. Alm disso, possvel que
animais que apresentem mes menos ansiosas mamem mais. Assim, podemos sugerir que as
diferenas comportamentais entre os modelos sejam ocasionadas por alteraes no

63

desenvolvimento destes filhotes. Acredita-se que uma boa e estvel relao entre me e filho,
particularmente em mamferos, seja uma das maiores garantias para um bom desenvolvimento
do filhote (Walker et al., 2004). Esta relao foi primeiramente estabelecida em trabalhos que
observaram as influncias ambientais, como cuidados da prole, podem promovem mudanas
comportamentais e hormonais frente a situaes de estresse destes animais quando adultos
(Levine, 1960; Denenberg et al., 1966; Levine et al., 1967; Ader e Grota, 1969). Durante
dcadas, diversos trabalhos tm estudado como as variaes comportamentais e nutricionais
maternas no perodo de lactao podem alterar o eixo HHA dos seus filhos e assim, ocasionar
mudanas nas respostas de estresse no longo prazo. Sugere-se que os cuidados maternos,
como a lambida e limpeza dos filhotes no perodo neonatal, essencial para o bom
desenvolvimento e equilbrio do eixo HHA, reduzindo assim as respostas neuroendcrinas e
comportamentais ao estresse na idade adulta (Van Oers et al., 1999; Champagne e Meaney,
2001; Walker et al., 2004). Alm destes achados, tambm foi observado que a repetida
separao da prole da me, a exposio da me ao estresse e mudanas nos cuidados da sua
prole e uma relao me-filho negativa no perodo neonatal esto associadas a diversos
prejuzos comportamentais e ao maior risco de doenas na idade adulta (Canetti et al., 1997;
McCauley et al., 1997; Kaufman et al., 2000; Repetti et al., 2002; Widom et al., 2007) e a
mudanas moleculares no SNC (Yi e Baram, 1994; Shalev et al., 1998; Lehmann et al., 1999;
Caldji et al., 2000; Ladd et al., 2000; Levine, 2001).
Finalmente, as diferenas comportamentais, somticas, endcrinas e metablicas
observadas em nossos estudos poderiam ser atribudas via de administrao de leptina nestes
modelos. A leptina pode modificar alguns componentes do leite, o que por sua vez, poderia
agir como um fator de imprinting metablico. Estudos mostram que a leptina transferida
pelo leite (Casabiell et al., 1997; Houseknecht et al., 1997; Bonomo et al, 2005; Lins et al.,
2005; Stocker et al., 2007). Casabiell et al. (1997) que demonstraram que quando a leptina
administrada em ratas lactantes, esta transferida da circulao materna para o leite, sendo
detectada no estmago dos filhotes de 4 dias de idade, sendo que, nestes, os nveis sanguneos
aumentam entre 4 e 8 h aps a injeo materna. A leptina ento pode induzir algum fator de
regulao no sistema gastrointestinal da prole, como por exemplo, a grelina (orexignico),
CCK (anorexignico), peptdeo YY (PYY anorexignico) ou peptdeo semelhante ao
glucagon (GLP anorexignico), os quais poderiam ocasionar mudanas comportamentais
(Daug et al., 1989; Crawley e Corwin, 1994; Carlini et al 2008; Carvajal et al, 2009) na idade

64

adulta. Portanto, os efeitos da programao tm uma dependncia maior da via de

administrao que do perodo em que ela foi administrada.
Tendo em vista o espectro de possibilidades para explicar as diferenas observadas
entre os estudos apresentados nesta Tese, ser necessrio dar continuidade aos estudos com
ambos os modelos no sentido de esclarecer quais so os mecanismos determinantes destas
diferenas. Tambm est implcito que os efeitos observados nos diferentes modelos podem
ser resultado de efeitos indiretos das alteraes nos nveis plasmticos de leptina, uma vez que
a leptina afeta no s neurnios ligados diretamente a funes cognitivas como tambm
neurnios e outros tipos celulares associados regulao e atividade de sistemas
neuroendcrinos que, por sua vez, sabidamente interferem com estas funes.
Independentemente dos mecanismos que geram os padres comportamentais observados neste
trabalho, mostramos que a hiperleptinemia durante os dez primeiros dias de lactao capaz
de afetar padres cognitivo/comportamentais na vida adulta.

65

5. CONCLUSO
A hiperleptinemia neonatal, induzida tanto pela injeo de leptina diretamente nos
filhotes quanto pela injeo de leptina nas progenitoras durante os dez primeiros
dias de vida ps-natal, altera o comportamento da prole na idade adulta;
Na programao pela hiperleptinemia induzida pela injeo de leptina diretamente
nos filhotes, verificamos aumento dos nveis de comportamentos associados
ansiedade e busca por novos estmulos, sem alteraes de funes associadas
memria e ao aprendizado visuo-espacial e a atividade locomotora;
Na programao pela hiperleptinemia induzida pela injeo de leptina nas
progenitoras, observamos melhora do desempenho associado memria e ao
aprendizado visuo-espacial e diminuio dos nveis de ansiedade da prole adulta,
apesar de no alterar os nveis de comportamentos associados busca por novos
estmulos e a atividade locomotora.

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6. ANEXO

6.1. Descrio dos testes comportamentais

6.1.1. Labirinto aqutico radial de 8 braos (LAROB fig. 3)
O LAROB composto por uma arena central em formato octogonal e oito braos
retangulares (braos: 29 cm de comprimento 13 cm largura 40 cm altura) radialmente
dispostos em relao a arena central (41 cm dimetro). Na extremidade final de um de seus
braos existe uma plataforma (8 cm de comprimento 10 cm de largura) localizada 1 cm
abaixo da superfcie da gua a qual permite o animal escapar do labirinto. O LAROB
reenchido com gua (26 1C) com uma profundidade de 34 cm para que os ratos no
toquem a cauda e as patas no cho enquanto nadam. Tinta atxica foi utilizada para deixar a
gua opaca, no permitindo que o animal visse a plataforma. Pistas espaciais externas eram
utilizadas na sala de teste e suas posies permaneciam inalteradas durante todos os
experimentos para que os animais utilizassem estratgias de mapeamento espacial na
localizao da plataforma de escape.

Figura 3. Vista superior do labirinto aqutico radial de 8 braos.

6.1.2. Labirinto em cruz elevado (LCE fig. 4)

O LCE tem formato em cruz, elevado 50 cm acima do cho, e consiste em 2 braos
abertos (sem paredes, 50 cm de comprimento 10 cm de largura), dois braos fechados (50
cm de comprimento 10 cm de largura 40 cm de altura), e uma rea central entre os braos.

92

Figura 4. Vista superior do labirinto em cruz elevado.

6.1.3. Campo vazado (CV fig. 5)

O CV tem formato de uma arena retangular (80 cm de comprimento 60 cm de
largura 40 cm de altura). A arena apresenta 16 orifcios (4 cm de dimetro) distribudos de
forma regular onde o animal pode inserir a face para explorar.

Figura 5. Vista superior do campo vazado.