Compuestos de Isoxazol Como Inhibidores de Las Proteínas de Choque Térmico

OFICINA ESPAOLA DE
PATENTES Y MARCAS
19
ESPAA
11
Nmero de publicacin:
2 393 483
51
Int. CI.:
C07D 261/08
C07D 413/04
C07D 413/10
C07D 417/04
C07D 261/10
C07D 495/04
A61P 35/00
12
(2006.01)
(2006.01)
(2006.01)
(2006.01)
(2006.01)
(2006.01)
(2006.01)
TRADUCCIN DE PATENTE EUROPEA

96
Nmero de solicitud europea: 04709273 .9
96
Fecha de presentacin: 09.02.2004
97
Nmero de publicacin de la solicitud: 1611112
97
Fecha de publicacin de la solicitud: 04.01.2006
54
Ttulo: Compuestos de isoxazol como inhibidores de las protenas de choque trmico
30
Prioridad:
73
11.02.2003 GB 0303105
21.03.2003 GB 0306560
13.06.2003 GB 0313751
45
45
Titular/es:
VERNALIS (R&D) LIMITED (33.3%)
100 Berkshire Place, Wharfedale Road, Winnersh
Berkshire RG41 5RD , GB;
CANCER RESEARCH TECHNOLOGY LIMITED
(33.3%) y
THE INSTITUTE OF CANCER RESEARCH (33.3%)
Fecha de publicacin de la mencin BOPI:

21.12.2012
T3
72
Inventor/es:
DRYSDALE, MARTIN, JAMES;
DYMOCK, BRIAN, WILLIAM;
FINCH, HARRY;
WEBB, PAUL;
MCDONALD, EDWARD;
JAMES, KAREN E.;
CHEUNG, KWAI M. y
MATHEWS, THOMAS P.
Fecha de la publicacin del folleto de la patente:

21.12.2012
74
Agente/Representante:
ES 2 393 483 T3
DE ELZABURU MRQUEZ, Alberto
Aviso: En el plazo de nueve meses a contar desde la fecha de publicacin en el Boletn europeo de patentes, de
la mencin de concesin de la patente europea, cualquier persona podr oponerse ante la Oficina Europea
de Patentes a la patente concedida. La oposicin deber formularse por escrito y estar motivada; slo se
considerar como formulada una vez que se haya realizado el pago de la tasa de oposicin (art. 99.1 del
Convenio sobre concesin de Patentes Europeas).

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16-11-2012
DESCRIPCiN
Compuestos de isoxazol como inhibidores de las protenas de choque trmico
Esta invencin se refiere a isoxazoles sustituidos que tienen actividad inhibitoria de HSP90, al uso de tales
compuestos en medicina, en relacin con las enfermedades que son sensibles a la inhibicin de la actividad de
HSP90, tales como cnceres, ya las composiciones farmacuticas que contienen tales compuestos.
Antecedentes de la invencin
10
Las chape ron as moleculares mantienen el plegamiento y la conformacin adecuadas de las protenas, y son
cruciales en la regulacin del equilibrio entre la sntesis y la degradacin de protenas. Se ha demostrado que son
importantes en la regulacin de muchas funciones celulares importantes, tales como la proliferacin y la apoptosis
celular (Jolly y Morimoto, 2000; Smith et al., 1998; Smith, 2001).
Protenas de Choque Trmico (HSPs)
15
20
25
30
40
45
50
55
La exposicin de las clulas a varias agresiones ambientales, que incluyen el choque trmico, alcoholes, metales
pesados y agresin oxidativa, da como resultado la acumulacin celular de varias chaperonas, conocidas
habitualmente como protenas de choque trmico (HSPs). La induccin de HSPs protege a la clula de la lesin por
agresin inicial, potencia la recuperacin y conduce al mantenimiento de un estado tolerante a la agresin. Se ha
hecho evidente, sin embargo, que ciertas HSPs pueden desempear tambin un papel de chaperona molecular
importante en condiciones normales, sin agresiones regulando, el plegamiento, degradacin, localizacin y funcin
correctas de una lista creciente de protenas celulares importantes.
Existen varias familias multignicas de HSPs, con productos gnicos individuales que varan en la expresin, funcin
y localizacin celular. Se clasifican segn el peso molecular, p.ej., HSP70, HSP90, y HSP27.
Se pueden adquirir diversas enfermedades en seres humanos como resultado del plegamiento errneo de protenas
(revisado en Tytell et al., 2001; Smith et al., 1998). Por lo tanto, el desarrollo de terapias que alteren la maquinaria de
las chaperonas moleculares puede resultar beneficioso. En ciertas afecciones (p.ej., enfermedad de Alzheimer,
enfermedades por priones y enfermedad de Huntington), las protenas plegadas errneamente pueden provocar una
agregacin de protenas, lo que da como resultado trastornos neurodegenerativos. Adems, las protenas plegadas
errneamente pueden dar como resultado la prdida de la funcin de la protena de tipo natural, lo que conduce a
funciones moleculares y fisiolgicas desreguladas en la clula.
Las HSPs tambin se han implicado en el cncer. Por ejemplo, existen pruebas de la expresin diferencial de las
HSPs que se puede relacionar con el estadio de la progresin tumoral (Martin et aL, 2000; Conroy et aL, 1996;
Kawanishi et al., 1999; Jameel et al., 1992; Hoang et al., 2000; Lebeau et al., 1991). Como resultado de la
implicacin de HSP90 en diversas rutas oncognicas crticas y el descubrimiento de que ciertos productos naturales
con actividad anticancerosa estn seleccionando como objetivo esta chaperona molecular, se ha desarrollado el
nuevo concepto fascinante de que la inhibicin de la funcin de HSP puede ser til en el tratamiento del cncer. El
primer inhibidor de chaperona molecular se est sometiendo actualmente a ensayos clnicos.
HSP90 constituye alrededor del 1-2% de la protena celular total, y est presente normalmente en la clula en forma
de un dmero en asociacin con una de varias protenas (vase, p.ej., Pratt, 1997). Es esencial para la viabilidad de
la clula, y exhibe una funcin de chaperona doble (Young et aL, 2001). Desempea un papel clave en la respuesta
a la agresin celular interaccionando con muchas protenas despus de que su conformacin nativa se haya
alterado por diversas agresiones ambientales, tales como choque trmico, lo que asegura el plegamiento adecuado
de la protena e impide la agregacin inespecfica (Smith et aL, 1998). Adems, los resultados recientes sugieren
que HSP90 puede desempear tambin un papel en la amortiguacin de los efectos de una mutacin,
probablemente corrigiendo el plegamiento inadecuado de las protenas mutantes (Rutherford y Lindquist, 1998). Sin
embargo, HSP90 tiene tambin un papel regulador importante. En condiciones fisiolgicas normales, junto con su
homlogo del retculo endoplsmico GRP94, HSP90 desempea un papel de mantenimiento en la clula,
manteniendo la estabilidad conformacional y la maduracin de varias protenas cliente claves. Estas se pueden
subdividir en tres grupos: (a) receptores de hormonas esteroides, (b) SerfThr o tirosina quinasas (p.ej., ERBB2, RAF1, CDK4, y LCK), y (c) una coleccin de proteinas aparentemente no relacionadas, p.ej., p53 mutante y la subunidad
cataltica de la telomerasa hTERT. Todas estas protenas desempean papeles reguladores claves en muchos
procesos fisiolgicos y bioqumicos en la clula. Se estn identificando continuamente nuevas protenas cliente de
HSP90.
La familia de HSP90 muy conservada en seres humanos consiste en cuatro genes, concretamente las isoformas
HSP90a y HSP90~ citoslicas (Hickey et al., 1989), GRP94 en el reticulo endoplsmico (Argon et al., 1999) y
HSP75fTRAP1 en la matriz mitocondrial (Felts et al., 2000). Se cree que todos los miembros de la familia tienen un
modo de accin similar, pero se unen a protenas cliente diferentes dependiendo de su localizacin dentro de la
clula. Por ejemplo, se sabe que ERBB2 es una proteina cliente especifica de GRP94 (Argo n et al., 1999) y se ha

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demostrado que el receptor del factor de necrosis tumoral de tipo 1 (TNFR1) Y RB son clientes de TRAP1 (Song et
al., 1995; Chen et al., 1996).
HSP90 participa en una serie de interacciones complejas con una diversidad de protenas cliente y protenas
reguladoras (Smith, 2001). Aunque los detalles moleculares concretos todava se tienen que dilucidar, los estudios
bioquimicos y de cristalografia de rayos X (Prodromou et al., 1997; Stebbins et al., 1997) llevados a cabo a lo largo
de los ltimos aos han proporcionado percepciones cada vez ms detalladas sobre la funcin de chaperona de
HSP90.
10
Tras la controversia anterior sobre este tema, ahora est claro que HSP90 es una chaperona molecular dependiente
de ATP (Prodromou et al, 1997), y la dimerizacin de los dominios de unin a los nucletidos es esencial para la
hidrlisis de ATP, que a su vez es esencial para la funcin de chaperona (Prodromou et al, 2000a). La unin del ATP
da como resultado la formacin de una estructura dimrica toroidal en la que los dominios N-terminales pasan a
estar en contacto ms cercano entre s, lo que da como resultado un cambio conformacional conocido como el
"mecanismo de abrazadera" (Prodromou y Pearl, 2000b).
Inhibidores Conocidos de HSP90

15
La primera clase de inhibidores de HSP90 en ser descubierta fue la clase de benzoquinona ansamicina, que incluye
los compuestos herbimicina A y geldanamicina. Se demostr que invertan el fenotipo maligno de los fibroblastos
transformados por el oncogn v-Src (Uehara et aL, 1985), y posteriormente exhiban una actividad antitumoral
potente en modelos animales tanto in vi/ro (Schulte et al., 1998) como in vivo (Supko et al., 1995).
20
de geldanamicina implica la unin a HSP90 (Whitesell et al., 1994; Schulte y Neckers, 1998). Adems, los estudios
Los estudios de inmunoprecipitacin y de matriz de afinidad han demostrado que el mecanismo principal de accin
cristalogrficos de rayos X han demostrado que la geldanamicina compite en el sitio de unin de ATP e inhibe la
actividad intrinseca de ATPasa de HSP90 (Prodromou et al., 1997; Panaretou et al., 1998). Esto a su vez impide la
formacin de complejos de HSP90 multimricos maduros capaces de actuar como chaperonas en las protenas
cliente. Como resultado, las protenas cliente son seleccionadas para la degradacin por medio de la ruta ubiquitina-
25
proteosoma. 17-Alilamino, 17-desmetoxigeldanamicina (17AAG) mantiene la propiedad de inhibicin de HSP90 que

da como resultado la disminucin de las protenas cliente y la actividad antitumoral en cultivo celular y en modelos
de xenoinjerto (Schulte et al, 1998; Kelland et al, 1999), pero tiene una hepatotoxicidad significativamente ms baja
que geldanamicina (Page et al, 1997). 17 AAG se est estudiando actualmente en ensayos clnicos de fase 1.
Radicicol es un antibitico macrocclico que se ha demostrado que invierte el fenotipo maligno de los fibroblastos
30
transformados con v-Src y v-Ha-Ras (Kvvon et al, 1992; Zhao et al, 1995). Se ha demostrado que degrada varias
protenas de sealizacin como consecuencia de la inhibicin de HSP90 (Schulte et aL, 1998). Los datos
cristalogrficos de rayos X confirmaron que radicicol tambin se une al dominio N-terminal de HSP90 e inhibe la
actividad intrnseca de ATPasa (Roe et aL, 1998). Radicicol carece de actividad antitumoral in vivo debido a la
naturaleza qumica inestable del compuesto.
35
Se sabe que los antibiticos de cumarina se unen a la ADN girasa bacteriana en un sitio de unin de ATP homlogo
al de HSP90. Se ha demostrado que la cumarina novobiocina se une al extremo carboxilo de HSP90, es decir, a un
sitio diferente del ocupado por las benzoquinonas ansamicina y radicicol, que se unen en el extremo N-terminal
(Marcu et al., 2000b). No obstante, esto todavia dio como resultado la inhibicin de la funcin de HSP90 y la
40
degradacin de varias protenas de sealizacin sometidas a la accin de chaperona de HSP90 (Marcu et aL,
2000a). Geldanamicina no se puede unir a HSP90 despus de novobiocina; esto sugiere que debe existir cierta
interaccin entre los dominios N- y C-terminales, y es coherente con la visin de que ambos sitios son imx>rtantes
para las propiedades de chaperona de HSP90.

Se ha demostrado que un inhibidor de HSP90 basado en purina, PU3, da como resultado la degradacin de las
molculas de sealizacin, que incluyen ERBB2, y provoca la detencin del ciclo celular y la diferenciacin hasta
45
clulas de cncer de mama (Chiosis et al., 2001).

HSP90 como Objetivo Teraputico
50
Debido a su implicacin en la regulacin de varias rutas de sealizacin que son de crucial importancia en el control
del fenotipo de un tumor, y el descubrimiento de que ciertos productos naturales bioactivos ejercen su efecto por
medio de la actividad de HSP90, la chaperona molecular HSP90 se est estudiando actualmente como un objetivo
nuevo para el desarrollo de frmacos anticancerosos (Neckers et aL, 1999).
El mecanismo de accin predominante de geldanamicina, 17AAG, y radicicol implica la unin a HSP90 en el sitio de
unin de ATP localizado en el dominio N-terminal de la protena, que conduce a la inhibicin de la actividad ATPasa
intrinseca de HSP90 (vase, p.ej., Prodromou et al., 1997; Stebbins et al., 1997; Panaretou et al., 1998).
55
La inhibicin de la actividad ATPasa de HSP90 impide la adquisicin de co-chaperonas y estimula la formacin de

un tipo de heterocomplejo de HSP90 a partir del cual estas protenas cliente se seleccionan como objetivo para la
degradacin por medio de la ruta ubiquitina-proteosoma (vase, p.ej., Neckers et al., 1999; Kelland et al., 1999).
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El tratamiento con inhibidores de HSP90 conduce a la degradacin selectiva de protenas importantes implicadas en
la proliferacin celular, la regulacin del ciclo celular y la apoptosis, procesos que son de vital importancia en el
cncer.
5
10
Se ha demostrado que la inhibicin de la funcin de HSP90 provoca la degradacin selectiva de protenas de

sealizacin importantes implicadas en la proliferacin celular, la regulacin del ciclo celular y la apoptosis, procesos
que son de vital importancia y que normalmente estn desregulados en el cncer (vase, p.ej., Hostein et al., 2001).
Un fundamento atractivo para el desarrollo de frmacos contra este objetivo para el uso en la clnica es que al
disminuir simultneamente las protenas asociadas al fenotipo transformado, se puede obtener un efecto antitumoral
potente y conseguir una ventaja teraputica contra el cncer respecto de las clulas normales. Se cree que estos
eventos posteriores a la inhibicin de HSP90 son responsables de la actividad antitumoral de los inhibidores de
HSP90 en cultivo celular yen modelos de animales (vase, p.ej., Schulte et al., 1998; Kelland et al., 1999).
Descripcin breve de la invencin
15
La presente invencin se refiere al uso de una clase de compuestos de isoxazol sustituidos como inhibidores de
HSP90, por ejemplo para la inhibicin de la proliferacin de clulas cancerosas. La invencin tambin incluye
compuestos de isoxazol nuevos per se, y composiciones farmacuticas que los contienen.
Descripcin detallada de la invencin
Segn la presente invencin, se proporciona un compuesto de frmula (A) o (B) o una sal, N-xido, hidrato o solvato
del mismo:
(B)
(A)
20
en la que
R1 es un grupo de frmula (lB)
Q-(Alk2),_(Z),-(Alkl)~
(lB)
OH
en la que en cualquier combinacin compatible

R representa uno o ms sustituyentes opcionales,
25
1
2
Alk Y Alk son radicales alquileno C1-C6 o alquenileno C2-C6 diva lentes sustituidos opcionalmente,
p, r y s son independientemente O 1 ,
Z es -0-, -S-, -(C=O)-, -(C=S)-, -S02-, -C(=O)O-, -C(=O)NRA-, -C(=S)NRA-, -S02NRA-, -NRAC(=O)-, -NRAS02- o
_NRA_ en las que RA es hidrgeno o alquilo C1-C6, y
Q es hidrgeno o un radical carbocclico o heterocclico sustituido opcionalmente;
30
R2 es (i) un grupo de frmula (lA):

1
Ar es un radical arilo o heteroarilo sustituido opcionalmente, y
2
A
Alk\ Alk , p, r, s, Z, R y Q son como se definen en relacin con R1;
35
(ii) un radical carboxamida; o

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(jii) un anillo carbocclico o heterocclico no aromtico en el que un carbono del anillo est sustituido
opcionalmente, y/o un nitrgeno del anillo est sustituido opcionalmente con un grupo de frmula -(Alk 1)P_(Z)r
2
2
(Alk )s-Q en la que Q, Alk 1, Alk , Z, p, r y s son como se definieron anteriormente en relacin con el grupo (lA);
y
10
15
R3 es un grupo carboxilo, carboxamida o ster de carboxilo,

la expresin "sustituido opcionalmente" significa sustituido con hasta cuatro sustituyentes compatibles, y cada uno
de los cuales se selecciona independientemente de alquilo (C 1-C 6), alcoxi (C 1-C 6), hidroxi, hidroxialquilo (C 1-C 6),
mercapto, mercaptoalquilo (C , -C 6), alquiltio (C , -C 6), halgeno (que incluye Iluoro, bromo y cloro), trilluorometilo,
A
A
trilluorometoxi, nitro, nitrilo (-CN), oxo, lenilo, -COOH, -COOR , -coR', -S02RA, -CONH 2, -S02NH 2, -CONHR , A
A
B
B
B
A
S02NHRA, _CONRAR , _S02NRARB, -NH 2, _NHR , _NRAR , -OCONH 2, -OCONHR , _OCONRAR , -NHCOR , A
A
B
B
A
A
A
B
NHCOOR , _NRBCOOR , -NHS0 20R , -NR S020H, _NR S020R , -NHCONH 2, -NR CONH2, -NHCONHR , B
B
B
A
B
NRACONHR , _NHCONRAR , o _NRACONRAR en las que R y R son independientemente un grupo alquilo (C , -C 6),
y
el trmino "carboxamida" significa un grupo de frmula -CONH 2 o un grupo metilaminocarbonilo, etilaminocarbonilo o
A
isopropilamino carbonilo, o un grupo de lrmula -CONRB(Alk)cR en la que
Alk es un radical alquileno, alquenileno o alquinileno divalente sustituido opcionalmente,
nesO1,
B
R es hidrgeno o un grupo alquilo C 1-C 6 o alquenilo C 2 -C 6 ,

A
R es hidroxi o carbocclico o heterociclilo sustituido opcionalmente,

20
o R y R junto con el nitrgeno al que estn unidos forman un anillo N-heterocclico que puede contener
opcionalmente uno o ms heterotomos adicionales seleccionados de O, S Y N, Y que pueden estar sustituidos
opcionalmente en uno o ms tomos de C o N del anillo.
Tal como se usa en la presente memoria:
la expresin "grupo carboxilo" se refiere a un grupo de frmula -COOH; y
25
30
la expresin "grupo ster de carboxilo" se refiere a un grupo de frmula -COOR, en la que R es un radical
realmente o tericamente derivado del compuesto de hidroxilo ROH.
Tal como se usa en la presente memoria, la expresin "alquilo (Ca-C b)", en la que a y b son nmeros enteros, se
refiere a un radical alquilo de cadena lineal o ramificada que tiene de a a b tomos de carbono. As, cuando a es 1 y
b es 6, por ejemplo, el trmino incluye metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, n-butilo, isobutilo, sec-butilo, t-butilo, npentilo y n-hexilo.
Tal como se usa en la presente memoria, la expresin "radical alquileno (Ca-C b) divalente", en la que a y b son
nmeros enteros, se refiere a una cadena de hidrocarburo saturado que tiene de a a b tomos de carbono y dos
valencias libres.
35
Tal como se usa en la presente memoria, la expresin "alquenilo (Ca-C b)", en la que a y b son nmeros enteros, se
refiere a un radical alquenilo de cadena lineal o ramificada que tiene de a a b tomos de carbono y que contiene al
menos un enlace doble de configuracin E o Z, que incluye, por ejemplo, etenilo y alilo.
Tal como se usa en la presente memoria, la expresin "radical alquenileno (Ca-Cb) divalente", en la que a y b son
nmeros enteros, se refiere a una cadena de hidrocarburo que tiene de a a b tomos de carbono, al menos un
enlace doble, y dos valencias libres.
40
45
Tal como se usa en la presente memoria, la expresin "alquinilo (C a-C4)", en la que a y b son nmeros enteros, se
refiere a un radical alquinilo de cadena lineal o ramificada que tiene de a a b tomos de carbono y que contiene al
menos un enlace triple, que incluye, por ejemplo, etinilo y prop-2-inilo.
Tal como se usa en la presente memoria, la expresin "radical alquinileno (Ca-C b) divalente", en la que a y b son
nmeros enteros, se refiere a un radical alquinilo de cadena lineal o ramificada que tiene de a a b tomos de
carbono y que contiene al menos un enlace triple, y dos valencias libres.
Tal como se usa en la presente memoria, el trmino "cicloalquilo" se refiere a un radical carbocclico saturado que
tiene 3-8 tomos de carbono e incluye, por ejemplo, ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo, cicloheptilo y
ciclooctilo.
50
Tal como se usa en la presente memoria, el trmino "cicloalquenilo" se refiere a un radical carbocclico que tiene 3-8
tomos de carbono que contiene al menos un enlace doble, e incluye, por ejemplo, ciclopentenilo, ciclohexenilo,

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cicloheptenilo y ciclooctenilo.
Tal como se usa en la presente memoria, el trmino "arilo" se refiere a un radical aromtico carbocclico mono-, bi- o
tri-cclico. Los ejemplos ilustrativos de tales radicales son fenilo, bifenilo y naftilo.
Tal como se usa en la presente memoria, el trmino "carbocclico" se refiere a un radical cclico cuyos tomos del
anillo son todos carbono, e incluye los radicales arilo monocclico, cicloalquilo y cicloalquenilo.
10
Tal como se usa en la presente memoria, el trmino "heteroarilo" se refiere a un radical aromtico mono-, bi- o tricclico que contiene uno o ms heterotomos seleccionados de S, N Y O. Los ejemplos ilustrativos de tales radicales
son tienilo, benzotienilo, fu rilo, benzofurilo, pirrolilo, imidazolilo, bencimidazolilo, tiazolilo, benzotiazolilo, isotiazolilo,
bencisotiazolilo, pirazolilo, oxazolilo, benzoxazolilo, isoxazolilo, bencisoxazolilo, isotiazolilo, triazolilo, benzotriazolilo,
tiadiazolilo, oxadiazolilo, piridinilo, piridazinilo, pirimidinilo, pirazinilo, triazinilo, indolilo e indazolilo.
15
20
25
30
35
40
Tal como se usa en la presente memoria, el trmino sin calificar "heterociclilo" o "heterocclico" incluye "heteroarilo"
tal como se defini anteriormente, y en particular significa un radical no aromtico mono-, bi- o tri-cclico que
contiene uno o ms heterotomos seleccionados de S, N Y O, Y grupos que consisten en un radical no aromtico
monocclico que contiene uno o ms de tales heterotomos que est unido de manera covalente a otro radical o a un
radical carbocclico monocclico. Los ejemplos ilustrativos de tales radicales son los grupos pirrolilo, furanilo, tienilo,
piperidinilo, imidazolilo, oxazolilo, isoxazolilo, tiazolilo, tiadiazolilo, pirazolilo, piridinilo, pirrolidinilo, pirimidinilo,
morfolinilo, piperazinilo, indolilo, morfolinilo, benzofuranilo, piranilo, isoxazolilo, bencimidazolilo, metilendioxifenilo,
etilendioxifenilo, maleimido y succinimido.
A menos que se especifique de otra manera en el contexto en el que se da, el trmino "sustituido", tal como se aplica
a cualquier resto de la presente memoria, significa sustituido con hasta cuatro sustituyentes compatibles, cada uno
de los cuales puede ser independientemente, por ejemplo, alquilo (C , -C 6), alcoxi (C , -C 6), hidroxi, hidroxialquilo (C , C6), mercapto, mercaptoalquilo (C,-C6), alquiltio (C,-C6), halgeno (que incluye Iluoro, bromo y cloro), trilluorometilo,
A
A
A
trilluorometoxi, nitro, nitrilo (-CN)" oxo, lenilo, - COOH, _COOR , _CORA, -S02R , -CONH2 , -S02NH2, -CONHR , S02NHRA, _CONRAR B, -S02NR R B, -NH 2, _NHR A, _NRARB, -OCONH 2, -OCONHR A, _OCONRAR B, -NHCOR A, A
A
A
B
B
A
A
B
NHCOOR , _NRBCOOR , -NHS020R , -NR S020H, _NR S020R , -NHCONH2, -NR CONH 2. -NHCONHR , NRACONHR B, _NHCONRAR B, o _NRACONRARB en las que R A y R B son independientemente un grupo alquilo (C , -C 6).
Un "sustituyente opcional" puede ser uno de los grupos sustituyentes anteriores. De los sustituyentes anteriores,
alquilo (C1-C6), halgeno, trifluorometilo, trifluorometoxi, trifluorometilsulfonilo, y fenilo son los que se consideran ms
habitualmente como lipfilos. Otros sustituyentes enumerados que contienen grupos alquilo pueden ser lipfilos
dependiendo de los grupos alquilo particulares presentes.
Tal como se usa en la presente memoria, el trmino "sal" incluye las sales de adicin de bases, de adicin de cidos
y las sales cuaternarias. Los compuestos de la invencin que son cidos pueden formar sales, que incluyen las sales
farmacuticamente o veterinariamente aceptables, con bases tales como hidrxidos de metales alcalinos, p.ej.
hidrxidos de sodio y potasio; hidrxidos de metales alcalinotrreos, p.ej. hidrxidos de calcio, bario y magnesio; con
bases orgnicas, p.ej. N-metil-D-glucamina, colina tris(hidroximetil)aminometano, L-arginina, L-lisina, N-etil
piperidina, dibencilamina y similares. Los compuestos (1) que son bsicos pueden formar sales, que incluyen las
sales farmacuticamente o veterinariamente aceptables, con cidos inorgnicos, p.ej. con haluros de hidrgeno tales
como cidos clorhdrico o bromhdrico, cido sulfrico, cido ntrico o cido fosfrico y similares, y con cidos
orgnicos, p.ej. con cidos actico, tartrico, succnico, fumrico, maleico, mlico, saliclico, ctrico, metanosulfnico,
p-toluenosulfnico, benzoico, bencenosulfnico, glutmico, lctico, y mandlico, y similares.
El trmino "Iipfilo", tal como se usa en la presente memoria en relacin con un sustituyente, significa que tiene una
constante de hidrofobicidad (TI) positiva para el sustituyente. (Un valor positivo para TI indica que el sustituyente es
ms lipfilo que el hidrgeno, mientras un valor negativo indica que es menos lipfilo, es decir, ms hidrfilo, que el
hidrgeno).
45
50
Algunos compuestos de la invencin contienen uno o ms centros quirales reales o potenciales debido a la
presencia de tomos de carbono asimtricos. La presencia de varios tomos de carbono asimtricos da lugar a
varios diaestereoismeros con estereoqumica R o S en cada centro quiral. La invencin incluye tales
diaestereoismeros y las mezclas de los mismos.
Un aspecto de la invencin incluye los compuestos de frmula (A) o (8) anteriores y las sales, N-xidos, hidratos o
solvatos de los mismos, y profrmacos de los mismos, excepto los tres compuestos siguientes (X), (Y) Y (Z) que
estn disponibles comercialmente:
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HO
(Y)
(X)
(Z)
Sujeta a esas exclusiones, la invencin incluye en particular aquellos en los que los sustituyentes R1, R2 Y R3 son
como se discute y se especifica en las siguientes secciones tituladas "El radical R1", "El radical R2", y "El radical R3".
Otro aspecto incluye el uso de tales compuestos para el tratamiento de enfermedades sensibles a la inhibicin de la
actividad de HSP90.
El radical R1
El grupo R1 tiene la frmula (lB)
Q-(Alk2)s-(Z),-(Alkl)~
(lB)
OH
10
15
20
2
en la que Alk \ Alk , p, r, s, Z y Q son como se definieron anteriormente en relacin con R1, Y R representa uno o
ms sustituyentes opcionales. En tales estructuras, se prefiere adems que el tomo de carbono del anillo
adyacente al grupo hidroxilo ste sin sustituir. En la discusin posterior de R1 que sigue, se aplica esta preferencia
adems de cualquier otra posibilidad mencionada.
En las estructuras ms simples con las que est relacionada la invencin, cada p, r y s puede ser O, y Q puede ser
hidrgeno, de forma que R1 es arilo o heteroarilo sustituido opcionalmente. En tales casos, R1 puede ser, por
ejemplo, fenilo sustituido opcionalmente, preferiblemente 2-hidroxifenilo que puede estar sustituido adicionalmente,
por ejemplo con uno o ms de hidroxi, metilo, etilo, metoxi, etoxi, cloro, o bromo. Los preferidos actualmente son los
compuestos en los que R1 es 2,4-dihidroxifenilo, sustituido en la posicin 5 con un sustituyente lipfilo pequeo, por
ejemplo que tiene un volumen molecular igualo menor del de terc-butilo, tal como metilo, etilo, isopropilo, isobutilo,
terc-butilo, cloro, o bromo, en especial etilo, isopropilo, o cloro. En tales compuestos de 2,4-dihidroxi fenilo
sustituidos en la posicin 5 de la invencin, los grupos hidroxilo se pueden proteger mediante grupos que se
escinden en el organismo para liberar los grupos hidroxilo. Los grupos de tipo profrmaco conocidos de este tipo que
se escinden hasta hidroxilos incluyen grupos alquilcarboniloxi tales como metilcarboniloxi, y grupos
alquilaminocarboniloxi tales como dialquilamino- o isopropilamino-carboniloxi.
25
En otras estructuras simples con las que la invencin est relacionada, p, r y s pueden ser de nuevo O, y Q puede
ser un anillo carbocclico o heterocclico sustituido opcionalmente, por ejemplo un anillo fenilo o piridilo. En tales
1
casos, Q es un sustituyente directo en el anillo Ar sustituido opcionalmente.
30
En estructuras ms complejas con las que la invencin est relacionada, uno o ms de p, r y s pueden ser 1, Y Q
puede ser hidrgeno o un anillo carbocclico o heterocclico sustituido opcionalmente. Por ejemplo, p y/o s pueden
1
ser 1 y r puede ser O, de forma que Q est unido a Ar mediante un radical alquileno o alquenileno, por ejemplo un
radical alquileno C1-C3, que est sustituido opcionalmente. En otros casos, cada p, r, y s puede ser 1, en cuyo caso
1
Q est unido a Ar mediante un radical alquileno o alquenileno que est interrumpido por el radical Z que contiene el
1
heterotomo. En otros casos, p y s pueden ser O y r puede ser 1, en cuyo caso Q est unido a Ar por medio del
radical Z que contiene el heterotomo.
35
Los ejemplos especficos de grupos R1 de los tipos anteriores estn presentes en los compuestos de los Ejemplos
de la presente memoria.
El radical R2
Cuando R2 es de tipo (i), es decir, un grupo de frmula (lA), los ejemplos incluyen fenilo, 2-, 3-, o 4-piridilo, 2- o 3furanilo, 2- o 3-tienilo, y tiazolilo en los que los sustituyentes opcionales incluyen cualquiera de los enumerados
anteriormente en la definicin de "sustituido", por ejemplo metoxi, etoxi, metilendioxi, etilendioxi, fluoro, cloro, bromo,

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y trifluorometilo. Por ejemplo, R2 puede ser fenilo sustituido en la posicin 4 con alcoxi C1-C6 tal como metoxi o etoxi,
o con fluoro, cloro, bromo, piperazinilo, N-metilpiperazinilo, o piperidinilo.
Los sustituyentes R2 preferidos actualmente incluyen los que tienen la estructura parcial:
10
15
10 11
en la que el grupo ami no sustituido _NR R es un grupo solubilizante. Se conocen muchos grupos solubilizantes en
la qumica mdica. Los ejemplos incluyen morfolinilo, piperidinilo, piperazinilo, pirrolidinilo, etilamino, isopropilamino,
dietilamino, ciclohexilamino, ciclopentilamino, metoxietilamino, piperidin-4-ilo, N-acetilpiperazinilo, metilsulfonilamino,
tiomorfolinilo, dixido de tiomorfolinilo, 4-hidroxietilpiperidinilo, y 4-hidroxipiperidinilo.
La solicitud de patente internacional pendiente junto con la presente nO PCT/GB2003/005275 describe compuestos
de pirazol inhibidores de HSP90 anlogos a los isoxazoles con los que est relacionada esta invencin, y se cree
que se unen al objetivo de HSP90 de una forma anloga. Esos compuestos de pirazol tienen un grupo carboxamida
en la posicin correspondiente a R2 de los isoxazoles presentes. Por lo tanto, cuando R2 en los isoxazoles presentes
es un radical carboxamida del tipo (ii) anterior, los ejemplos incluyen aquellos presentes en los compuestos de
A
pirazol del documento PCT/GB2003/005275, por ejemplo carboxamidas de frmula -CONRB(Alk)nR en la que
Alk es un radical alquileno, alquenileno o alquinileno divalente, por ejemplo un radical -CHr, -CH2CHr, CH2CH2CH2-, -CH2CH=CH-, o -CH2CCCH2-, y el radical Alk puede estar sustituido opcionalmente,
nesO1,
B
R es hidrgeno o un grupo alquilo C1-C6 o alquenilo C2-C6, por ejemplo metilo, etilo, n- o iso-propilo, o alilo,
A
20
25
R es hidroxi o carbocclico sustituido opcionalmente, por ejemplo hidroxi y/o fenilo sustituido con cloro y 3,4
metilendioxifenilo; o heterociclilo, por ejemplo piridilo, fu rilo, tienilo, N-piperazinilo, o N-morfolinilo, cualquiera de
cuyos anillos heterocclicos pueden estar sustituidos,
A
B
opcionalmente en uno o ms tomos de C o N del anillo, y los ejemplos de tales anillos N-heterocclicos
incluyen morfolino, piperidinilo, piperazinilo y N-fenilpiperazinilo.
El radical R3
R3 es un grupo carboxilo, carboxamida o ster de carboxilo.
Un subgrupo particular de los compuestos con los que est relacionada esta invencin consiste en los de frmula
(ID), y los regioismeros de frmula B de los mismos, y sus sales, solvatos e hidratos, y profrmacos de los mismos:
HO
30
(ID)
3
en la que cada R representa independientemente un sustituyente opcional y R representa un grupo carboxamida.
Un subgrupo preferido de los compuestos con los que est relacionada esta invencin consiste en los de frmula
(lE), y los regioismeros de frmula B de los mismos, y sus sales, solvatos e hidratos, y profrmacos de los mismos:

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HO
(lE)
10
en la que R3 representa un grupo carboxamida (tal como etilaminocarbonilo CH 3CH 2NHC(=O)-, o

isopropilaminocarbonilo (CH3)2CHNHC(=O)-); Rg representa _CH2NR 10 R11 0 _NR 10 R11 en las que el grupo ami no
sustituido _NR 10 R11 es un grupo solubilizante, (tal como morfolinilo, piperidinilo, piperazinilo, pirrolidinilo, etilamino,
isopropilamino, dietilamino, ciclohexilamino, ciclopentilamino, metoxietilamino, piperidin-4-ilo, N-acetilpiperazinilo, Nmetilpiperazinilo, metilsulfonilamino, tiomorfolinilo, dixido de tiomorfolinilo, 4-hidroxietilpiperidinilo, y 4hidroxipiperidinilo); y Rs representa un sustituyente opcional, en especial un grupo lipfilo pequeo (tal como etilo,
isopropilo, bromo, o cloro).
Los compuestos especficos con los que est relacionada la invencin incluyen los de los Ejemplos, en particular los
siguientes, y sus sales, N-xidos, hidratos y solvatos, y profrmacos de los mismos:
Etilamida de cido 5-(2,4-dihidroxi-5-isopropil-fenil)-4-(4-morfolin-4-ilmetil-fenil)-isoxazol-3-carboxlico
Etilamida de cido 5-(2,4-dihidroxi-5-isopropil-fenil)-4-(4-piperidin-1-ilmetil-fenil)-isoxazol-3-carboxlico
Etilamida de cido 4-(4-dietilaminometil-fenil)-5-(2,4-dihidroxi-5-isopropil-fenil)-isoxazol-3-carboxlico
Etilamida de cido 5-(2,4-dihidroxi-5-isopropil-fenil)-4-[4-(4-metil-piperazin-1-ilmetil)-fenil]-isoxazol-3-carboxlico
15
Etilamida de cido 5-(2,4-dihidroxi-5-isopropil-fenil)-4-(4-etilaminometil-fenil)-isoxazol-3-carboxlico

Etilamida de cido 5-(2,4-dihidroxi-5-isopropil-fenil)-4-[4-(isopropilamino-metil)-fenil]-isoxazol-3-carboxlico
Etilamida de cido 4-(4-ciclohexilaminometil-fenil)-5-(2,4-dihidroxi-5-isopropilfenil)-isoxazol-3-carboxlico
Etilamida de cido 4-[4-(terc-butilamino-metil)-fenil]-5-(2,4-dihidroxi-5-isopropilfenil)-isoxazol-3-carboxlico
Etilamida de cido 5-(2,4-dihidroxi-5-isopropil-fenil)-4-{4-[(2-metoxi-etilamino)-metil]-fenil}-isoxazol-3-carboxlico
20
Isopropilamida de cido 5-(2,4-dihidroxi-5-isopropil-fenil)-4-(4-morfolin-4-ilmetil-fenil)-isoxazol-3-carboxlico

Isopropi lamida de cido 5-(2,4-di hidroxi -5-isopropil-feni 1)-4-[4-(4-meti l-piperazin-1-i Imeti I)-feni 1]-isoxazol-3-carboxlico
Etilamida de cido 5-(5-terc-butil-2,4-dihidroxi-fenil)-4-[4-(4-metil-piperazin-1-ilmetil)-fenil]-isoxazol-3-carboxlico
Etilamida de cido 5-(5-terc-butil-2,4-dihidroxi-fenil)-4-(4-piperidin-1-ilmetil-fenil)-isoxazol-3-carboxlico
Etilamida de cido 5-(2,4-dihidroxi-5-isobutil-fenil)-4-(4-morfolin-4-ilmetil-fenil)-isoxazol-3-carboxlico
25
Etilamida de cido 5-(2,4-dihidroxi-5-isobutil-fenil)-4-(4-piperidin-1-ilmetil-fenil)-isoxazol-3-carboxlico

Etilamida de cido 5-(5-terc-butil-2,4-dihidroxi-fenil)-4-(4-morfolin-4-ilmetil-fenil)-isoxazol-3-carboxlico
Etilamida de cido 5-(5-terc-butil-2,4-dihidroxi-fenil)-4-(4-dietilaminometil-fenil)-isoxazol-3-carboxlico
Etilamida de cido 3-(5-cloro-2,4-dihidroxi-fenil)-4-(4-morfolin-4-ilmetil-fenil)-isoxazol-5-carboxlico
Etilamida de cido 4-(4-dietilaminometil-fenil)-5-(4,6-dihidroxi-2'-metil-bifenil-3-il)-isoxazol-3-carboxlico
30
Etilamida de cido 4-(4-dietilaminometil-fenil)-5-(4'-fluoro-4,6-dihidroxi-bifenil-3-il)-isoxazol-3-carboxlico

Etilamida de cido 4-(4-dietilaminometil-fenil)-5-(4,6-dihidroxi-bifenil-3-il)-isoxazol-3-carboxlico
Etilamida de cido 5-(2'-fluoro-4,6-dihidroxi-bifenil-3-il)-4-(4-pirrolidin-1-ilmetil-fenil)-isoxazol-3-carboxlico
Etilamida de cido 5-(4,6-dihidroxi-bifenil-3-il)-4-(4-morfolin-4-ilmetil-fenil)-isoxazol-3-carboxlico
Etilamida de cido 5-(2,4-dihidroxi-5-fenetil-fenil)-4-(4-morfolin-4-ilmetil-fenil)-isoxazol-3-carboxlico
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Isopropi lamida de cido 5-(5-cloro-2,4-dihidroxi-feni 1)-4-(4-pi peridi n-1-i Imeti I-feni 1)-isoxazol-3-carboxlico
Etilamida de cido 4-(4-dietilaminometil-fenil)-5-(5-etil-2,4-dihidroxi-fenil)-isoxazol-3-carboxlico
Etilamida de cido 5-(5-etil-2,4-dihidroxi -fenil)-4-[ 4-(4-meti I-pi perazin-1-ilmeti 1)-fenil]-isoxazol-3-carbox lico
Etilamida de cido 5-(5-etil-2,4-dihidroxi-fenil)-4-(4-morfolin-4-ilmetil-fenil)-isoxazol-3-carboxlico
5
Etilamida de cido 5-(5-cloro-2,4-dihidroxi-fenil)-4-(4-dietilaminometil-fenil)-isoxazol-3-carboxlico

Etilamida de cido 5-(5-cloro-2,4-dihidroxi-fenil)-4-[4-(4-metil-piperazin-1-ilmetil)-fenil]-isoxazol-3-carboxlico
Los compuestos con los que est relacionada la invencin se pueden preparar mediante mtodos de la bibliografa,
tales como los de los Ejemplos preparativos de la presente memoria, y mtodos anlogos a los mismos.
10
Por ejemplo, algunos compuestos de frmula (lA) se pueden preparar mediante la reaccin de hidroxilamina y un
compuesto de frmula (111)
(111)
15
en la que el anillo A corresponde al grupo R1 de los compuestos (lA) y R2 Y R3 son como se definieron en relacin
con la frmula (1). Los compuestos preparados de esta manera se pueden modificar qumicamente despus para
introducir los sustituyentes deseados, para producir otros compuestos de frmula (A). Por ejemplo, cuando R1 es un
anillo fenilo, que opcionalmente ya porta sustituyentes, la introduccin de un sustituyente de bromo posibilitar a
menudo la introduccin de otros sustituyentes en el sitio del bromo mediante acoplamiento sp2.
En otra ruta hacia ciertos compuestos de frmula (A), el anillo isoxazol se forma mediante la reaccin de un
compuesto (IV) con hidroxilamina
R1
20
1yR1 3
O
(IV)
OH
en la que R'1 y R'3 son miembros de las clases de sustituyentes R1 y R3 definidos anteriormente, para producir el
isoxazol M
R1 1
h--R1
N
25
(V)
3
seguido por la introduccin del sustituyente adicional R2 (por ejemplo mediante bromacin o yodacin del carbono
del anillo en M y acoplamiento sp2, y/o modificacin de los sustituyentes R \ R \ Y R2 resultantes del isoxazol.
Adems, ciertos regioismeros del isoxazol (B) se pueden preparar a partir de los isoxazoles (A) mediante reaccin
con trifluoruro de boro-trimetiloxonio, y de nuevo los compuestos preparados de esta manera se pueden modificar
qumicamente despus para introducir los sustituyentes deseados, para producir otros compuestos de frmula (lA).
30
35
Se entender que durante las sntesis anteriores, puede ser deseable proteger los grupos reactivos, tales como
hidroxilos, y desprotegerlos ms tarde. Se describen detalles sintticos adicionales en los ejemplos de la presente
memoria.
Los compuestos de la invencin son inhibidores de HSP90 y, as, son tiles en el tratamiento de enfermedades que
son sensibles a la inhibicin de la actividad de HSP90, tales como el cncer; enfermedades virales tales como
Hepatitis C (HCV) (Waxman, 2002); Inmunodepresin, tal como en el transplante (Bijlmakers, 2000 y Yorgin, 2000);
Enfermedades auto-inflamatorias (Bucci, 2000) tales como Artritis reumatoide, Asma, EM, Diabetes Tipo 1, Lupus,
10

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Psoriasis y Enfermedad Inflamatoria Intestinal; Fibrosis qustica (Fuller, 2000); Enfermedades relacionadas con la
angiognesis (Hur, 2002 y Kurebayashi, 2001): retinopata diabtica, hemangiomas, psoriasis, endometriosis y
angiognesis tumoral. Adems, un inhibidor de Hsp90 de la invencin puede proteger a las clulas normales de la
toxicidad inducida por la quimioterapia y puede ser til en enfermedades en las que la incapacidad de experimentar
la apoptosis es un factor subyacente. Tal inhibidor de Hsp90 puede ser til tambin en enfermedades en las que
podra ser beneficiosa la induccin de una respuesta de protenas de agresin celular o choque trmico, por ejemplo,
la proteccin de la hipoxia-Iesin isqumica debida a la elevacin de Hsp70 en el corazn (Hutter, 1996 y Trost,
1998) y cerebro (Plumier, 1997 y Rajder, 2000). Un inhibidor de Hsp90 tambin podria ser til en enfermedades en
las que el plegamiento errneo o la agregacin de las protenas es un factor causal importante, por ejemplo,
encefalopatia espongiforme ovina/CJD, enfermedad de Huntingdon y enfermedad de Alzheimer (Sittler, 2001;
Trazelt, 1995 y Winklhofer, 2001).
Por lo tanto, la invencin tambin proporciona:
15
(i) un mtodo de tratamiento de enfermedades o afecciones sensibles a la inhibicin de la actividad de HSP90 en

mamferos, en particular seres humanos, y el mtodo comprende administrar al mamfero una cantidad de un
compuesto de frmula (A) o (B) como se defini anteriormente, o una sal, hidrato o solvato del mismo, eficaz para
inhibir dicha actividad de HSP90; y
(ii) un compuesto de frmula (A) o (B) como se defini anteriormente, o una sal, hidrato o solvato del mismo, para el
uso en medicina humana o veterinaria, en particular en el tratamiento de enfermedades o afecciones sensibles a la
inhibicin de la actividad de HSP90;
20
25
30
35
40
45
50
55
(iii) una composicin farmacutica que comprende un compuesto de frmula (A) o (B) como se defini y especific
anteriormente, junto con un vehculo farmacuticamente aceptable. En particular, la invencin incluye una disolucin
o suspensin de tal compuesto en un vehculo fisiolgicamente aceptable, estril, por ejemplo solucin salina
acuosa.
Se entender que el nivel de dosis especfico para cualquier paciente particular depender de una diversidad de
factores, que incluyen la actividad del compuesto especfico empleado, la edad, el peso corporal, el estado de salud
general, el sexo, la dieta, el momento de la administracin, la va de administracin, la velocidad de excrecin, la
combinacin de frmacos y el mecanismo causal y la gravedad de la enfermedad particular que se somete a terapia.
En general, una dosis adecuada para las formulaciones administrables de manera oral estar normalmente en el
intervalo de 0,1 a 3000 mg una vez, dos veces o tres veces al da, o la cantidad diaria equivalente administrada
mediante infusin u otras vas. Sin embargo, los niveles de dosis y la frecuencia de dosificacin ptimas se
determinarn en ensayos clnicos, como es convencional en la tcnica.
Los compuestos que conciernen a la invencin se pueden preparar para la administracin mediante cualquier va
coherente con sus propiedades farmacocinticas. Las composiciones administrables oralmente pueden estar en
forma de comprimidos, cpsulas, polvos, grnulos, pastillas, preparaciones lquidas o en gel, tales como soluciones
o suspensiones orales, tpicas, o parenterales estriles. Los comprimidos y las cpsulas para administracin oral
pueden estar en una forma farmacutica de dosis unitaria, y pueden contener excipientes convencionales tales como
agentes aglutinantes, por ejemplo jarabe, goma arbiga, gelatina, sorbitol, tragacanto, o polivinilpirrolidona; rellenos,
por ejemplo lactosa, azcar, almidn de maz, fosfato clcico, sorbitol o glicina; lubricantes para produccin de
comprimidos, por ejemplo estearato magnsico, talco, polietilen glicol o slice; disgregantes, por ejemplo almidn de
patata, o agentes humectantes aceptables, tales como lauril sulfato sdico. Los comprimidos se pueden revestir
segn mtodos bien conocidos en la prctica farmacutica normal. Las preparaciones lquidas orales pueden estar
en forma de, por ejemplo, suspensiones, soluciones, emulsiones, jarabes o elixires acuosos u oleosos, o se pueden
presentar en forma de un producto seco para la reconstitucin con agua u otro vehculo adecuado antes del uso.
Tales preparaciones lquidas pueden contener aditivos convencionales tales como agentes de suspensin, por
ejemplo sorbitol, jarabe, metil celulosa, jarabe de glucosa, gelatina, grasas hidrogenadas comestibles; agentes
emulsionantes, por ejemplo lecitina, monooleato de sorbitn, o goma arbiga; vehculos no acuosos (que pueden
incluir aceites comestibles), por ejemplo aceite de almendra, aceite de coco fraccionado, steres oleosos tales como
glicerina, propilen glicol, o alcohol etlico; conservantes, por ejemplo p-hidroxibenzoato de metilo o propilo o cido
srbico, y, si se desea, agentes aromatizantes o colorantes.
Para la aplicacin tpica en la piel, el frmaco se puede preparar en una crema, locin o pomada. Las formulaciones
en crema o pomada que se pueden usar para el frmaco son formulaciones convencionales muy conocidas en la
tcnica, por ejemplo como se describe en libros de texto habituales de farmacia, tales como la Farmacopea
Britnica.
El ingrediente activo se puede administrar tambin de manera parenteral en un medio estril. Dependiendo del
vehculo y de la concentracin usada, el frmaco se puede suspender o disolver en el vehculo. De manera
ventajosa, se pueden disolver en el vehculo adyuvantes tales como un anestsico local, conservantes y agentes de
tamponamiento.
11
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Los compuestos de la invencin son tiles tambin en ensayos in vitro dependientes de la inhibicin de la actividad
de HSP90, por ejemplo en el cribado en busca de clases alternativas de inhibidores de HSP90 en los que el
compuesto de ensayo compite con o desplaza un compuesto de esta invencin. Por lo tanto, en otro aspecto, la
invencin incluye un mtodo para inhibir la actividad de HSP90, que comprende poner en contacto, in vitro, una
enzima HSP90 y un compuesto de frmula (A) o (B) como se defini y especific anteriormente.
Los ejemplos siguientes ilustran la preparacin y actividades de los compuestos especficos de la invencin.
Ejemplos 1-4
Esquema 1: Preparacin de intermedio de bromo y arilacin posterior
o
HO~OH
~lo
-~
HO
d?
I"'=::
-C6?
~
I "'=::
HO
OH
"' O
"' O
----<.~ BnO
--_~ HO
OBn
OH
"'O
..
BnO
dPO
"' O
Ph
"'=::
HO
Ph
HO
O
OH
10
Ejemplo 1
4-[4-(4-Metoxi-fenil)-3-metil-isoxazol-5-il]-benceno-1 ,3-diol
Etapa 1
1-(2,4-Di h id roxi -fe n i 1)-2-(4-metoxi -fe n i 1) -etan ona
15
20
.;rl
d?
'<:::
HO 1
:::,..
OH
Se calent resorcinol (4,4 g, 40 mmol) y cido 4-metoxifenilactico (6,6 g, 40 mmol) en trifluoruro de boro - eterato
(25 mi, 0,2 mol), bajo una atmsfera de nitrgeno, a 90 oC durante -90 mins. para proporcionar una disolucin roja
plida. La disolucin se dej enfriar y se verti en acetato sdico acuoso (200 mi, 10%) Y la mezcla se agit para
proporcionar un precipitado amarillo plido. El slido se extrajo mediante filtracin y se lav con agua (200 mi). El
slido se resuspendi en acetato de etilo (250 mi) y se lav con agua (200 mi). La disolucin se sec sobre sulfato
magnsico anhidro y se concentr, hasta un semi-slido amarillo. La trituracin con ter dietlico (100 mi)
proporcion la 1-(2,4-dihidroxi-fenil)-2-(4-metoxi-fenil)-etanona en forma de un slido naranja plido, se sec a vaco,
(2,2 g).
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Tiempo de retencin en LC 2,39 minutos [M+Hf 259,2 (Tiempo de funcionamiento 3,75 mins)
R.M.N. (DMSO-d6) 7,95 (d J 8,9 Hz ArH) 7,2 (d J 8,7 Hz 2ArH) 6,9 (d J 8,7 Hz 2ArH) 6,4 (d J 9,9 ArH) 6,25 (s ArH)
4,2 (s 2CH2) 3,75 (s 30CH3)
Etapa 2
7-Hidroxi-3-(4-metoxi-fenil)-2-metil-cromen-4-ona
dP
~
I '-'::
HO
10
~I
Se aadi anhdrido actico (3 mi, 30 mmol) a una suspensin de carbonato potsico (4,0 g, 29 mmol) y 1-(2,4dihidroxi-fenil)-2-(4-metoxifenil)-etanona (1,95 g, 7,5 mmol) en DMF (10 mi), y la suspensin resultante se calent a
115 oC durante -90 mins. La mezcla se dej enfriar y se verti en agua (200 mi), para proporcionar un precipitado
blanquecino. El slido se extrajo mediante filtracin y se lav con agua (100 mi) y ter dietlico (2x40 mi) para
proporcionar 7 -hidroxi-3-(4-metoxi-fenil)-2-metil-cromen-4-ona en forma de un polvo blanquecino, y se sec a vaco
(1,65 g)
Tiempo de retencin en LC 2,26 minutos [M+H( 283,2 (Tiempo de funcionamiento 3,75 mins)
15
R.M.N. (DMSO-d6) 7,8 (d J 8,7 Hz ArH) 7,2 (d J 8,8 Hz 2ArH) 7,0 (d J 8,8 Hz 2ArH) 6,9 (d J 8,7 ArH) 6,8 (s ArH) 3,8
(s 30CH3) 2,2 (s 3CH3)
Etapa 3
4-[4-(4-Metoxi-fenil)-3-metil-isoxazol-5-il]-benceno-1 ,3-diol
20
25
Se aadi hidrocloruro de hidroxilamina (0,35 g, 5 mmol) a una suspensin de 7 -hidroxi-3-(4-metoxi-fenil)-2-metilcromen-4-ona (0,14 g, 0,5 mmol) en piridina (3 mi) y la mezcla se calent a reflujo durante -4 hrs. La disolucin se
dej enfriar y se verti en agua (50 mi) y se extrajo con ter dietlico (50 mi). Los extractos se lavaron con agua (3x
50 mi) y disolucin acuosa saturada de cloruro sdico (30 mi). La disolucin se sec sobre sulfato magnsico
anhidro y se concentr para proporcionar una goma de color marrn plido.
El producto bruto se purific mediante cromatografa en columna, de slice, mediante elucin con acetato de etilo/
hexano (1 :2), para proporcionar una goma incolora. La trituracin con hexano proporcion 4-[4-(4-metoxi-fenil)-3metil-isoxazol-5-il]-benceno-1 ,3-diol en forma de un polvo blanco, secado vaco, (0,087 g)
R.M.N. (DMSO-d6) 7,1 (d J 8,8 Hz 2ArH) 6,85 (d J 8,6 Hz ArH) 6,8 (d J 8,8 Hz 2ArH) 6,25 (s ArH) 6,15 (d J 8,6 Hz
ArH) 3,65 (s 30CH3) 2,15 (s 3CH3)
30
Ejemplo 2
4-Bromo-6-[4-(4-metoxi-fenil)-3-metil-isoxazol-5-il]-benceno-1 ,3-diol
"-
HO
Se aadi tri bromuro de benciltrimetilamonio (3,95 g, 10 mmol) en porciones a una suspensin enfriada en hielo de
4-[4-(4-metoxi-fenil)-3-metilisoxazol-5-il]-benceno-1 ,3-diol (Ejemplo 1) (2,95 g, 10 mmol) en diclorometano (50 mi), y
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la mezcla se agit durante -60 mins, a temperatura ambiente. Se aadi acetato de etilo (300 mi) y la mezcla se
lav con agua (3x200 mi) y disolucin acuosa saturada de cloruro sdico (50 mi). La disolucin se sec sobre sulfato
magnsico anhidro y se concentr para proporcionar un slido marrn plido. El producto bruto se purific mediante
cromatografa en columna, de slice, eluyendo con acetato de etilo / hexano (1 :2), para proporcionar 4-bromo-6-[4-(4metoxi-fenil)-3-metil-isoxazol-5-il]-benceno-1 ,3-diol en forma de un slido blanco, secado a vaco, (3,42 g)
R.M.N. (Acetona-d6) 7,35 (s ArH) 7,2 (d J 8,8 Hz 2ArH) 6,9 (d J 8,8 Hz 2ArH) 6,65 (s ArH) 3,8 (s 30CH3) 2,25 (s
3CH3)
Ejemplo 3
10
5-[ 4-(4-Metoxi-fen il)-3-metil-isoxazol-5-il]-bifen il-2,4-d iol
HO
Etapa 1
5-(2,4-Bis-benciloxi-5-bromo-fenil)-4-(4-metoxi-fenil)-3-metilisoxazol
"-
15
20
Se aadi una suspensin en bromuro de bencilo (0,36 mi, 3 mmol) de 4-bromo-6-[4-(4-metoxi-fenil)-3-metilisoxazol-5-il]-benceno-1 ,3-diol (Ejemplo 2) (0,55 g, 1,5 mmol) y carbonato de cesio (0,85 g, 2,6 mmol) en DMF (5 mi),
y la mezcla se agit durante -18 hrs, a temperatura ambiente. Se aadi agua (100 mi) y la mezcla se extrajo con
ter dietlico (2x30 mi). Los extractos combinados se lavaron con agua (4x75 mi) y disolucin acuosa saturada de
cloruro sdico (50 mi). La disolucin se sec sobre sulfato magnsico anhidro y se concentr para proporcionar una
goma de color marrn plido. La trituracin con hexano proporcion 5-(2,4-bis-benciloxi-5-bromo-fenil)-4-(4-metoxifenil)-3-metil-isoxazol en forma de un slido blanquecino, secado a vaco, (0,5 g).
R.M.N. (Cloroformo-d) 7,55 (s ArH) 7,35-7,25 (m 5ArH) 7,2 (m 3ArH) 6,95 (d J 8,8 Hz 2ArH) 6,85 (m 2ArH) 6,7 (d J
8,8 Hz 2ArH) 6,35 (s ArH) 4,95 (s 2CH2) 4,6 (s 2CH2) 3,75 (s 30CH3) 2,25 (s 3CH3)
25
Etapa 2
5-(4,6-Bis-benciloxi-bifenil-3-il)-4-(4-metoxi-fenil)-3-metilisoxazol
30
Se aadi fosfato potsico (0,1 g, 0,5 mmol) a una disolucin de 5-(2,4-bis-benciloxi-5-bromo-fenil)-4-(4-metoxifenil)-3-metil-isoxazol (0,14 g, 0,25 mmol) y cido fenil bornico (0,095 g, 0,75 mmol) en 1 ,4-dioxano (4 mi) bajo una
atmsfera de nitrgeno. Se aadi tetrakis(trifenilfosfina)paladio(O) (cat.) y la suspensin se calent, 80 oC durante
-18 hrs. La suspensin se dej enfriar y se aadi acetato de etilo (25 mi). La mezcla se lav con agua (3x25 mi) y
disolucin acuosa saturada de cloruro sdico (25 mi). La disolucin se sec sobre sulfato magnsico anhidro y se
concentr para proporcionar una goma de color marrn plido. La trituracin con hexano proporcion 5-(4,6-bisbenciloxibifenil-3-il)-4-(4-metoxi-fenil)-3-metil-isoxazol en forma de un slido blanquecino, secado a vaco.
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Tiempo de retencin en LC 3,08 minutos [M+Ht 554,4 (Tiempo de funcionamiento 3,75 mins)
R.M.N. (Cloroformo-d) 7,4 (m 2ArH) 7,35 (s ArH) 7,3-7,1 (m 11ArH) 6,95 (d J 8,8 Hz 2ArH) 6,9 (m 2ArH) 6,7 (d J 8,8
Hz 2ArH) 6,45 (s ArH) 4,9 (s 2CH2) 4,7 (s 2CH2) 3,75 (s 30CH3) 2,25 (s 3CH3)
Etapa 3
5
7-Hidroxi-3-(4-metoxi-fenil)-2-metil-6-fenil-cromen-4-ona
10
Se aadi formiato de amonio (3,2 g, 50 mmol) a una disolucin de 5-(4,6-bis-benciloxi-bifenil-3-il)-4-(4-metoxi-fenil)3-metil-isoxazol (1,4 g, 2,5 mmol) en metanol (20 ml)/acetato de etilo (10 mi) bajo una atmsfera de nitrgeno. Se
aadi paladio sobre carbono (10%) (cat.) y la suspensin se calent a 60 oC durante -18 hrs. La suspensin se
dej enfriar y se aadi acetato de etilo (150 mi), y la suspensin se filtr. El filtrado se lav con agua (3x100 mi) y
disolucin acuosa saturada de cloruro sdico (50 mi). La disolucin se sec sobre sulfato magnsico anhidro y se
concentr para proporcionar una goma de color marrn plido. La trituracin con metanol proporcion 7-hidroxi-3-(4metoxi-fenil)-2-metil-6-fenil-cromen-4-ona en forma de un slido blanquecino, secado a vaco.
15
R.M.N. (DMSO-d6) 7,9 (s ArH) 7,5-7,3 (m 5ArH) 7,25 (d J 8,8 Hz 2ArH) 7,1 (s ArH) 7,05 (d J 8,8 Hz 2ArH) 3,85 (s
30CH3) 2,2 (s 3CH3)
Etapa 4
5-[4-(4-Metoxi-fenil)-3-metil-isoxazol-5-il]-bifenil-2,4-diol
HO
20
25
Se aadi hidrocloruro de hidroxilamina (75 mg, 1,08 mmol) a una suspensin de 7-hidroxi-3-(4-metoxi-fenil)-2-metil6-fenil-cromen-4-ona (105 mg, 0,29 mmol) en piridina (2 mi), y la mezcla se calent a reflujo durante -6 hrs., para
proporcionar una disolucin amarilla plida. La disolucin se dej enfriar y se aadi agua (20 mi). La mezcla se
extrajo con ter dietlico (2x10 mi). Los extractos combinados se lavaron con agua (2x20 mi) y disolucin acuosa
saturada de cloruro sdico (10 mi). La disolucin se sec sobre sulfato magnsico anhidro y se concentr. El
producto bruto se purific mediante cromatografa en columna, slice, eluyendo con acetato de etilo/hexano (1 :1),
para proporcionar el compuesto del ttulo en forma de un polvo blanquecino (80 mg)
R.M.N. (Acetona-d6) 7,5-7,3 (m 5ArH) 7,2 (d J 8,8 Hz 2ArH) 7,0 (d J 8,8 Hz 2ArH) 6,9 (d J 8,6 Hz ArH) 6,35 (s ArH)
6,1 (d J 8,7 Hz ArH) 3,85 (s 30CH3) 2,25(s 3CH3)
30
Ejemplo 4
4-Cloro-6-[4-(4-metoxi-fen i 1)-3-metil-isoxazol-5-il] -benceno-1 ,3-d iol
"O
HO
35
Se aadi hidrocloruro de hidroxilamina (0,7 g, 10 mmol) a una suspensin de 6-cloro-7-hidroxi-3-(4-metoxi-fenil)-2metil-cromen-4-ona [preparada de manera anloga al Ejemplo 1, Etapa 2] (0,32 g, 1,0 mmol) en piridina (4 mi), y la
mezcla se calent a reflujo durante -6 hrs., para proporcionar una disolucin amarilla plida. La disolucin se dej
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enfriar y se aadi agua (20 mi). La mezcla se extrajo con ter dietlico (2x10 mi). Los extractos combinados se
lavaron con agua (2x20 mi) y disolucin acuosa saturada de cloruro sdico (10 mi). La disolucin se sec sobre
sulfato magnsico anhidro y se concentr. El producto bruto se purific mediante cromatografa en columna, slice,
eluyendo con acetato de etilo/hexano (1: 1), para proporcionar 4-cloro-6-[ 4-( 4-metoxi-fenil)-3-metil-isoxazol-5-il]benceno-1 ,3-diol en forma de un polvo blanquecino (0,103 g)
R.M.N. (Acetona-d6) 7,2 (d J 8,8 Hz 2ArH) 7,15 (s ArH) 6,9 (d J 8,8 Hz 2ArH) 6,6 (s ArH) 3,85 (s 30CH3) 2,25 (s
3CH3)
10
15
Los compuestos de los Ejemplos 1-4 tuvieron una CI50 para HSP90 en el intervalo A cuando se analizaron en el
ensayo de ATPasa con Verde Malaquita descrito ms adelante. En las tablas siguientes, la columna final
proporciona el resultado basndose en el mismo ensayo para el compuesto en cuestin, excepto en el caso del
Ejemplo 12b, en el que la actividad indicada es la que se mide en el ensayo de polarizacin de fluorescencia descrito
ms adelante.
Los Ejemplos 5-16 se prepararon mediante el uso de la reaccin descrita para los Ejemplos 1-4. Otros detalles de la
preparacin de los Ejemplos 6 y 7 son anlogos a los de los Ejemplos 86 y 87.
MH+
CI50 de
Hsp90
5*
326
330
296
349
Ejemplo
Estructura
16
E04709273
16-11-2012

HO
286
10
303
11
342
375
367
323
A***
351
HO
12
12a
HO
0-
12b**
q
12c
HO
ot-f'J
17
S
~
'
E04709273
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343
HO
* Tambin disponible comercialmente de Interbioscreen
disponible comercialmente de Enamine

** preparado a partir de intermedio protegido de bromo resorcinol con cianuro de cobre (1) en dimetilformamida
a 150 oC
*** Ensayo de Polarizacin de Fluorescencia:
~'=
<10 uM; 'B' = >10 uM
Ejemplo 14
4-[4-(4-Metoxi-fenil)-3-metil-isoxazol-5-il]-6-fenetil-benceno-1 ,3-diol
HO
10
Se prepar a partir del acoplamiento con cido estirilbornico del compuesto de bromo isoxazol del Ejemplo 2 Etapa
1, como se describi anteriormente, seguido de reduccin y tratamiento con hidroxilamina, de manera anloga al
Ejemplo 3.
Tiempo de retencin en
Le 2,56 minutos [M+Hf 402 (Tiempo de funcionamiento 3,75 mins)
Ejemplo 15
15
4-[ 4-(4-Metoxi-fenil)-3-metil-isoxazol-5-il]-2,6-bis-( 4-metilpiperazi n-1-ilmetil)-benceno-1 ,3-diol
Esquema 2: Reaccin de Mannich
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Se aadi N-metilpiperazina (0,125 mi, 1,1 mmol) a una suspensin de 4-[4-(4-metoxi-fenil)-3-metil-isoxazol-5-il]benceno-1,3-diol (0,15 g, 0,5 mmol) y paraformaldehdo (0,040 g) en 1,4-dioxano (4 mi), y la mezcla se calent a
reflujo durante -18 hrs., para proporcionar una disolucin de color amarillo parduzco. La disolucin se dej enfriar y
se aadi acetato de etilo (25 mi). La mezcla se lav con agua (3x25 mi) y disolucin acuosa saturada de cloruro
sdico (25 mi). La disolucin se sec sobre sulfato magnsico anhidro y se concentr hasta una goma de color
marrn plido. La trituracin con hexano proporcion 4-[4-(4-metoxi-fenil)-3-metil-isoxazol-5-il]-2,6-bis-(4-metilpiperazin-1-ilmetil)-benceno-1 ,3-diol (0,121 g) en forma de un polvo marrn plido.
R.M.N. (Acetona-d6) 7,2 (d J 8,8 Hz 2ArH) 6,95 (s ArH) 6,8 (d J 8,8 Hz 2ArH) 3,85 (s 30CH3) 3,75 (s 2CH2) 3,65 (s
10
2CH2) 2,9-2,0 (s ancho 16 CH2) 2,3 (s 3CH3) 2,25 (s 3CH:,) 2,2 (s 3CH3)
Ejemplo 16
ster metlico de cido 2,4-dihidroxi-5-[4-(4-metoxi-fenil)-3-metil-isoxazol-5-il]-benzoico
I
HO~O
- O
~
~ /
HO
0-
O ..:
'N
Esquema 3: Formacin del ster
~O-
BnOM
E
f b __
'
BnO
O, ....:
N
15
BnORf~
f ~OO
BnO
....:
'N
HO~Ob
f ~
__
0-
HOO
....:
'N
Etapa 1
20
25
Se aadi n-butil-litio (100 JI) a una disolucin de 5-(2,4-bis-benciloxi-5-bromo-fenil)-4-(4-metoxi-fenil)-3-metilisoxazol (154 mg, 0,28 mmol) en tetrahidrofurano (2,5 mi) bajo una atmsfera de nitrgeno a -78 oC. La disolucin se
agit a -70 oC durante 30 minutos para proporcionar una disolucin naranja. El in se neutraliz con cloroformiato de
metilo (100 JI, 3 eq) y se dej calentar a temperatura ambiente durante 30 minutos. La disolucin se diluy con
cloruro amnico acuoso saturado (5 mi). La mezcla se extrajo con acetato de etilo (3 x 5 mi). Los extractos
combinados se lavaron con agua (2x5 mi) y disolucin acuosa saturada de cloruro sdico (5 mi). La disolucin se
sec sobre sulfato magnsico anhidro y se concentr. El producto se purific mediante cromatografa en columna,
slice, eluyendo con acetato de etilo en hexano (gradiente del 20% al 60% de acetato de etilo) para proporcionar
ster metlico de cido 2,4-bis-benciloxi-5-[4-(4-metoxi-fenil)-3-metil-isoxazol-5-il]-benzoico (72 mg).
R.M.N. (DMSO-d6) 7,8 (s ArH) 7,55 (d J 7,1 Hz 2ArH) 7,4 (t J 6,2 Hz 2ArH) 7,35 (d J 6,1 Hz ArH) 7,3 (m 3ArH) 7,1 (m
4ArH) 7,0 (s ArH) 6,9 (d 8,8 Hz 2ArH) 5,3 (s 2CH2) 5,1 (s 2CM) 3,78 (s OCH3) 3,76 (s OCH:,) 2,28 (s CH3)
Etapa 2
30
35
Se aadi formiato de amonio (172 mg, 20 eq) a una disolucin de ster metlico de cido 2,4-bis-benciloxi-5-[4-(4metoxi-fenil)-3-metil-isoxazol-5-il]-benzoico (72 mg, 0,13 mmol) en metanol (2 ml)/acetato de etilo (1 mi) bajo una
atmsfera de nitrgeno. Se aadi un 10% de paladio sobre carbono (cat.) y la suspensin se calent a 60 oC
durante la noche. La disolucin se dej enfriar. Se aadi acetato de etilo (5 mi), la disolucin se lav con agua (2x5
mi) y disolucin acuosa saturada de cloruro sdico (5 mi). La disolucin se sec sobre sulfato magnsico anhidro y
se concentr. El producto bruto se purific mediante cromatografa en columna, slice, eluyendo con acetato de etilo
en hexano (gradiente del 25% al 45% de acetato de etilo) para proporcionar ster metlico de cido 2,4-dihidroxi-5[4-(4-metoxifeni 1)-3-meti l-isoxazol-5-i I]-benzoico (7, O mg).
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R.M.N. (CDCi3) = 10,85 (s ArOH) 7,52 (s ArOH) 7,12 (d J 8 Hz 2ArH) 6,98 (s ArH) 6,91 (d J 8 Hz 2ArH) 6,45 (s
ArH) 3,78 (s 3 OCH3) 3,71 (s 3 OCH3) 2,21 (s 3 CH3).
Los compuestos de los Ejemplos 14-16 tuvieron una CI50 de HSP90 en los intervalos 'A', 'B' Y 'B', respectivamente,
cuando se ensayaron en el ensayo de ATPasa con Verde Malaquita descrito ms adelante.
5
De forma similar, los Ejemplos 17-20 se prepararon tratando con N-formil piperidina, tioisocianato de fenilo,
isocianato de 2-metoxifenilo y benzaldehdo, respectivamente. La reaccin de desproteccin final se llev a cabo con
tricloruro de boro como se describe para el ejemplo 23 (ltima reaccin del Esquema 5). El Ejemplo 21 fue un
subproducto de la Etapa 1, Ejemplo 16. Las actividades indicadas son las obtenidas en el ensayo de Verde
Malaquita descrito ms adelante.
10
Ejemplo
17
Estructura
HO
MH+
CI50 de
Hsp90
326
433
447
418
OH
0"""'-
18
HO
OH
-O
Q
HN
0-
19
HO
OH
OMe
20
20
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OMe
21
354
HO
Ejemplo 22
4-Bencil-6-[4-(4-metoxi-fenil)-3-metil-isoxazol-5-il]-benceno-1 ,3-diol
Esquema 4: Sntesis de bencil resorcinol
HO~OHV
ster etlico ster 2-benzoil-5-etoxicarboniloxi-fenlico de cido carbnico
10
15
Se aadi trietilamina (10 mi, 72,2 mmol) a una disolucin de 2,4-dihidroxibenzofenona (1) (5,4 g,23,3 mmol) en THF
(50 mi), y la disolucin se enfri a O oC. Se aadi cloroformiato de etilo (6,9 mi, 72,2 mmol) lentamente, y la
suspensin se agit durante -30 mins a O oC, y durante -3 hrs a temperatura ambiente. Se aadi agua (150 mi) y la
mezcla se extrajo con ter dietlico (150 mi). Los extractos se lavaron con agua (2x 150 mi) y disolucin acuosa
saturada de cloruro sdico (100 mi). La disolucin se sec sobre sulfato magnsico anhidro y se concentr para
proporcionar 4-bencil-benceno-1 ,3-diol en forma de una goma verde plida, solidificada en reposo, (8,2 g).
(Cloroformo-d) 7,7 (m 2ArH) 7,5 (m 2ArH) 7,35 (m 2ArH) 7,15 (m 2ArH) 4,25 (q J 7,1 Hz 2CH2) 4,05 (q J 7,1 Hz 2
CM) 1,35 (t J 7,1 Hz 3CH3) 1,15 (t J 7,1 Hz 3 CM)
4-bencil-benceno-1,3-diol
20
25
Se aadi una disolucin de borohidruro sdico (1,85 g, 49 mmol) en agua (30 mi) a una disolucin enfriada con
hielo de ster etlico ster 2-benzoil-5-etoxicarboniloxi-fenlico de cido carbnico (3,6 g, 10 mmol) en THF (30 mi).
La mezcla se agit durante -60 mins. a O oC, y durante -60 hrs. a temperatura ambiente, para proporcionar una
suspensin roja plida. Se aadi agua (150 mi) y la mezcla se extrajo con ter dietlico (150 mi). Los extractos se
lavaron con agua (2x 100 mi) y disolucin acuosa saturada de cloruro sdico (50 mi). La disolucin se sec sobre
sulfato magnsico anhidro y se concentr para proporcionar una goma de color amarillo plido. La goma se
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resuspendi en hidrxido sdico acuoso (20 mi, 10%), Y la disolucin se calent a reflujo durante -60 mins. La
disolucin se dej enfriar y se acidific con cido clorhdrico (5 mi, 37%). La mezcla se extrajo con ter dietlico (50
mi). Los extractos se lavaron con agua (3x 40 mi) y disolucin acuosa saturada de cloruro sdico (30 mi). La
disolucin se sec sobre sulfato magnsico anhidro y se concentr para proporcionar 4-bencilbenceno-1 ,3-diol en
forma de una goma roja oscura, (2,1 g).
Tiempo de retencin en LC 2,28 minutos [M+Hf sin in (Tiempo de funcionamiento 3,75 mins)
(Cloroformo-d)
7,2 (m 3ArH) 7,1 (m 2ArH) 6,85 (d J 8,1 Hz ArH) 6,3 (d J 8,1 Hz ArH) 6,2 (s ArH) 3,85 (s 2CM)
El 4-bencil-benceno-1,3-diol se us como material de partida en una sntesis del Esquema 1 para proporcionar el
Ejemplo 23.
10
Ejemplo 23
cido 3-{2,4-dihidroxi-5-[4-(4-metoxi-fenil)-3-metil-isoxazol-5-il]-fenil}-acrlico
HO
Esquema 5: Reaccin de Heck y desproteccin con tri cloruro de boro

"-
BnO
15
HO
O-
--_;o
___
o
HO
BnO
Etapa 1
ster terc-butlico de cido 3-{2,4-bis-benciloxi-5-[4-(4-metoxi-fenil)-3-metil-isoxazol-5-il]-fenil}-acrlico
20
25
Se aadi diisopropiletilamina (1 mi, 5,7 mmol) a una suspensin de 5-(2,4-Bis-benciloxi-5-bromo-fenil)-4-(4-metoxifenil)-3-metil-isoxazol (0,56 g, 1,0 mmol) en acrilato de terc-butilo (1 mi, 6,8 mmol) y 1-butanol (8 mi) bajo una
atmsfera de nitrgeno. Se aadi diclorobis(tri-o-tolilfosfina)paladio (11) (cat.) y la suspensin se calent, 140 oC
durante -18 hrs., para proporcionar una disolucin amarilla/verde. La disolucin se dej enfriar y se concentr hasta
una goma amarilla/verde. El producto bruto se purific mediante cromatografa en columna, slice, eluyendo con
acetato de etilo/ hexano (1 :9), para proporcionar ster terc-butlico de cido 3-{2,4-bis-benciloxi-5-[4-(4-metoxi-fenil)3-metil-isoxazol-5-il]-fenil}-acrlico en forma de una goma amarilla/verde (315 mg). Se recuper material de partida
(170 mg).
R.M.N. (Cloroformo-d) 7,85 (d J 16,1 Hz CH) 7,6 (s ArH) 7,4-7,25 (m 8ArH) 7,05 (d J 8,8 Hz 2ArH) 6,9 (m 2ArH) 6,8
(d J 8,8 Hz 2ArH) 6,5 (s ArH) 6,35 (d J 16,1 Hz CH) 5,05 (s 2CH2) 4,75 (s 2CM) 3,75 (s 30CM) 2,25 (s 3CM) 1,5 (s
9CCH3)
30
Etapa 2
cido 3-{2,4-dihidroxi-5-[4-(4-metoxi-fenil)-3-metil-isoxazol-5-il]-fenil}-acrlico
22
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HO
10
Se aadi lentamente una disolucin de tricloruro de boro (2 mi, 1,0 M en diclorometano) a una disolucin de ster
terc-butlico de cido 3-{2,4-bis-benciloxi-5-[4-(4-metoxi-fenil)-3-metil-isoxazol-5-il]-fenil}-acrlico (50 mg, 0,09 mmol)
en diclorometano (1 mi), a -78 oC (hielo seco/ acetona) bajo una atmsfera de nitrgeno. La disolucin resultante se
agit durante -1 hr a -78 oC, y durante - 90 mins. a temperatura ambiente. La disolucin se enfri a -78 oC y se
aadi agua (2 mi), y la mezcla se agit durante -30 mins a temperatura ambiente. Se aadi acetato de etilo (30
mi) y la disolucin se lav con agua (2x5 mi) y disolucin acuosa saturada de cloruro sdico (10 mi). La disolucin se
sec sobre sulfato magnsico anhidro y se concentr hasta una goma amarilla plida. La trituracin con hexano
proporcion un slido amarillo, el slido se retir mediante filtracin y se lav con hexano, se sec a vaco, para
proporcionar cido 3-{2,4-dihidroxi-5-[4-(4-metoxi-fenil)-3-metil-isoxazol-5-il]-fenil}-acrlico (10 mg) en forma de un
polvo amarillo.
R.M.N. (Acetona-d6) 7,85 (d J 16,1 Hz CH) 7,5 (s ArH) 7,25 (d J 8,8 Hz 2ArH) 6,95 (d J 8,8 Hz 2ArH) 6,6 (s ArH) 6,35
(d J 16,1 Hz CH) 3,8 (s 30CH3) 2,25 (s 3CH3)
15
De forma similar, se prepar 4-[4-(4-metoxi-fenil)-3-metil-isoxazol-5-il]-6-estirilbenceno-1 ,3-diol (Ejemplo 24)

mediante desproteccin con tricloruro de boro de 5-(2,4-bis-benciloxi-5-estiril-fenil)-4-(4-metoxi-fenil)-3-metil-isoxazol
(preparado a partir de acoplamiento con cido estiril bornico del intermedio de bromo isoxazol, Ejemplo 3).
20
Los compuestos de los Ejemplos 22 - 24 tuvieron una CI50 de HSP90 en los intervalos 'A', 'B' Y 'C', respectivamente,
cuando se ensayaron en el ensayo de ATPasa con Verde Malaquita descrito ms adelante.
Esquema 6: Sntesis de 5-carboxamido isoxazoles
HO~
~ Bno~
y ::~HO~ ~C03 yy
OH
OH
CH 3CN
CI
H2NOH.HCI
EtOH
EtNH2
OBn O
OH
B o~CI
Bno~
Br2
I
o_n
I ~
Br
OEt
AcOH
9" /,
OBn O-N
NHEt NaOAc
OMe
CI
BCI3
BnO
NaHC03
CI2Pd(PPha)2
~OEt
EtOH I MeOH
9" /,
MeOC6H4B(OH)2
DMF/H20
Na/EtOH
OBn O
CI
Bno~
I
O
OBn O-N
~~a~:i~~ Bno~
HO
CH2C~
NHEt
OH
23
OBn;~
O
NHEt
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Ejemplo 25
Etilamida de cido 5-(5-cloro-2,4-dihidroxifenil)-4-(4-metoxi-fenil)-isoxazol-3-carboxlico
OMe
HO
Etapa 1
5
1-( 5-Cloro-2,4-dihidroxi-fenil)-etanona
HO~
lrY
OH
10
Se aadi cido actico (17,5 mL) gota a gota a una suspensin de 4-clororesorcinol (42,5 g, 0,293 mmol) en
trifluoruro de boro - eterato (200 mL) bajo una atmsfera de nitrgeno. La mezcla de reaccin se calent a 90 oC
durante 3,5 horas y despus se dej enfriar a temperatura ambiente. Se form un slido despus de
aproximadamente 1 hora de enfriamiento. La mezcla se verti en 700 mL de una disolucin acuosa de acetato
sdico del 10% p/v. Esta mezcla se agit enrgicamente durante 2,5 horas. Se form un slido marrn claro que se
filtr, se lav con agua y se sec al aire durante la noche para proporcionar 1-(5-cloro-2,4-dihidroxi-fenil)-etanona
(31,6 g, 58%). LCMS: [M-Hf 185.
Etapa 2
15
1-(2,4-Bis-benciloxi-5-cloro-fenil)-etanona
el.
Bno~
lrY
OBn O
20
Se aadi bromuro de bencilo (30 mL) a una mezcla de 1-(5-cloro-2,4-dihidroxifenil)-etanona (20 g, 0,107 moles) y
carbonato potsico (37 g, 2,5 equiv.) en acetonitrilo (350 mL). La mezcla se calent a reflujo durante 6 horas,
despus se dej enfriar y se agit durante la noche. La mezcla se filtr y el slido se lav con diclorometano (3 x 100
mL). Los extractos orgnicos combinados se evaporaron a vaco para proporcionar un slido amarillo plido que se
tritur con una mezcla de hexano (350 mL) / acetato de etilo (15 mL) y se filtr para proporcionar un slido
blanquecino, 1-(2,4-bis-benciloxi-5-cloro-fenil)-etanona (35,4 g, 90%). 1H RMN (400 MHz) coherente con la
estructura.
Etapa 3
25
ster etlico de cido 4-(2,4-bis-benciloxi-5-clorofenil)-2-hidroxi-4-oxo-but-2-enoico
el
I
o
~o~
~
,.
~o
30
'-'::
O~
OH
Se aadi sodio metlico (1,35 g, 0,058 mol) en trozos pequeos a lo largo de un periodo de 20 minutos a etanol
anhidro agitado bajo una atmsfera de nitrgeno. La mezcla de reaccin se agit despus durante otros 10 minutos
hasta que todo el sodio hubo reaccionado para proporcionar una disolucin homognea. Se aadi 1-(2,4-bisbenciloxi-5-clorofenil)-etanona (10,0 g, 0,027 mol) en porciones a lo largo de 2-3 minutos, y la suspensin resultante
se agit durante 5 minutos antes de la adicin de oxalato de dietilo (6 mi, 0,043 mol), lo que proporcion un
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precipitado amarillo ms espeso. La mezcla de reaccin se calent a reflujo (lo que proporcion una disolucin
marrn homognea) durante 4 horas, despus se dej enfriar a temperatura ambiente y se aadi cido actico (6
mi). El slido resultante que se form se tritur, se filtr, se lav con etanol y se sec para proporcionar un slido
amarillo (12,0 g, 95%). 1H RMN (400 MHz, CDCb) 1,2 (t, 3H), 4,19 (q, 2H), 5,05 (s, 2H), 5,10 (s, 2H), 6,50 (s, 1H),
7,22-7,41 (m, 10H), 7,97 (s, 1H).
Etapa 4
ster etlico de cido 5-(2,4-bis-benciloxi-5-clorofenil)-isoxazol-3-carboxlico
CI
o~
10
15
Se aadi hidrocloruro de hidroxilamina (0,89 g; 12,8 mmol) a una suspensin de ster etlico de cido 4-(2,4-bisbenciloxi-5-clorofenil)-2-hidroxi-4-oxo-but-2-enoico (5,00 g; 10,7 mmol) en etanol absoluto (100 mi). La mezcla de
reaccin se calent a reflujo durante cuatro horas y despus se dej enfriar a temperatura ambiente (durante este
tiempo la mezcla sigue siendo heterognea, pero adquiere un color amarillo ms claro). La mezcla se filtr y el slido
filtrado se lav con agua (2 x 20 mi), etanol (2 x 20 mi) y se sec a vaco a 45 oC. Esto proporciona ster etlico de
cido 5-(2,4-bis-benciloxi-5-clorofenil)-isoxazol-3-carboxlico en forma de un slido amarillo esponjoso, 4,49 g (91 %)
7
LCMS: [M+H( 466, 464 CI; 35 CI). 1H RMN (400 MHz, CDCb) 1,42 (t, 3H), 4,42 (q, 2H), 5,13 (s, 2H), 5,14 (s, 2H),
6,62 (s, 1H), 7,01 (s, 1H), 7,35-7,43 (m, 10H), 8,00 (s, 1H).
Etapa 5
Etilamida de cido 5-(2,4-bis-benciloxi-5-clorofenil)-isoxazol-3-carboxlico
N~
20
25
Se aadi una disolucin de etilamina en metanol (2,0 M; 40 mL; 80 mmol) a una suspensin agitada de ster etlico
de cido 5-(2,4-bis-benciloxi-5-clorofenil)-isoxazol-3-carboxlico (4,40 g; 9,51 mmol) en etanol absoluto (50 mi). La
mezcla de reaccin se calent a 80 oC (temperatura del bao de aceite) durante cinco horas. La mezcla de reaccin
se dej enfriar a temperatura ambiente y se dej reposar durante la noche. Se form un producto slido incoloro y la
mezcla de reaccin se enfri adicionalmente en un bao de agua helada, se filtr y se lav con etanol fro (2 x 20
mi). El producto incoloro se sec a vaco para proporcionar etilamida de cido 5-(2,4-bis-benciloxi-5-clorofenil)isoxazol-3-carboxlico 3,42 g (78%) LCMS: [M+H( 465, 463 7 CI; 35 CI). 1H RMN (400 MHz, CDCb) 1,25 (t, 3H),
3,48 (m, 2H), 5,10 (s, 2H), 5,2 (s, 2H), 6,59 (s, 1H), 6,83 (t ancho, 1H), 7,08 (s, 1H), 7,30-7,41 (m, 10H), 7,97 (s, 1H).
Etapa 6
Etilamida de cido 5-(2,4-bis-benciloxi-5-clorofenil)-4-bromo-isoxazol-3-carboxlico
CI
~O~B
I
O
:~ ~~
r
30
35
0::
Se aadi una disolucin de bromo en cido actico (0,6 M; 7,2 mL; 4,32 mmol) a una suspensin agitada de
etilamida de cido 5-(2,4-bis-benciloxi-5-clorofenil)-4-bromoisoxazol-3-carboxlico (2,00 g; 4,32 mmol) y acetato
sdico (0,708 g, 8,64 mmol) en cido actico (30 mi) a temperatura ambiente. La mezcla se calent a 80 oC y se hizo
homognea en 5-10 minutos, para proporcionar una disolucin roja oscura. Despus de calentar durante 2,5 horas,
la disolucin fue de color amarillo. El anlisis mediante CCF demostr que haba presente material de partida y
producto. Se aadieron otros 2,0 mi (1,2 mmol) de la disolucin de bromo en cido actico a lo largo de las dos
25
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10
horas siguientes. La mezcla de reaccin se dej enfriar a temperatura ambiente y el cido actico se elimin a vaco
para proporcionar un residuo slido, que se reparti entre ter (200 mi) yagua (200 mi). Las fases se separaron y la
fase orgnica se lav con agua (3 x 100 mi), disolucin acuosa saturada de bicarbonato sdico (2 x100 mi) y
disolucin saturada de cloruro sdico (1 x 200 mi). La fase orgnica se sec sobre sulfato sdico, se filtr y los
disolventes del filtrado se eliminaron a vaco para proporcionar un aceite amarillo que se purific mediante
cromatografa rpida con gel de slice, eluyendo con un 1-20% de acetato de etilo en hexano. Esto proporcion el
producto en forma de un slido incoloro, 1,2 g (52%) LCMS: [M+Hf 543, 541 (81 Sr; 79 Sr). 1H RMN (400 MHz, CDCb)
1,26 (t, 1H), 3,50 (m, 2H), 5,01 (s, 2H), 5,12 (s, 2H), 6,62 (s, 1H), 6,74 (t ancho, 1H), 2,28-7,41 (m, 10H), 7,53 (s,
1H).
Etapa 7
Etilamida de cido 5-(2,4-bis-benciloxi-5-clorofenil)-4-(4-metoxi-fenil)-isoxazol-3-carboxlico
0--
N~
15
20
25
A una mezcla de cido 4-metoxifenilbornico (0,178 g, 1,17 mmol) y etilamida de cido 5-(2,4-bis-benciloxi-5clorofenil)-4-bromo-isoxazol-3-carboxlico (0,507 g, 0,94 mmol) se le aadi bicarbonato sdico (237 mg, 2,82 mmol)
seguido de DMF (5 mL) yagua (1,0 mL). La mezcla se desgasific mediante evacuacin e inyeccin de nitrgeno
(tres veces), seguido de burbujeo de gas nitrgeno a travs de la mezcla durante cinco minutos. Se aadi
diclorobis(trifenilfosfina)paladio (11) (66 mg, 0,094 mmol) y la mezcla de reaccin se calent bajo una atmsfera de
nitrgeno a 90 oc durante dos horas (la mezcla de reaccin adquiere un color marrn oscuro). Se aadieron otros 10
mg de diclorobis(trifenilfosfina)paladio (11) y la mezcla de reaccin se calent a 90 oc durante 15 horas, y despus se
dej enfriar a temperatura ambiente. La mayora de los disolventes se eliminaron a vaco y el residuo se reparti
entre acetato de etilo (50 mL) yagua (50 mL). Esta mezcla se filtr a travs de una almohadilla de celite para
eliminar los residuos de paladio, y despus se separaron las fases y la fase orgnica se lav con agua (2 x 30 mL),
disolucin acuosa saturada de cloruro sdico (50 mL) y despus se sec sobre sulfato sdico. La mezcla se filtr y
los disolventes del filtrado se eliminaron a vaco para proporcionar un aceite amarillo (598 mg). El producto de la
reaccin en bruto se purific mediante adsorcin en gel de slice y despus cromatografa rpida con gel de slice
(20 g 1ST) eluyendo con un gradiente de disolventes del 1 al 20 % de acetato de etilo en hexano. Esto proporciona
etilamida de cido 5-(2,4-bis-benciloxi-5-clorofeni9-4-~4-metoxi-fenil)-isoxazol-3-carboxlico en forma de un slido
incoloro (0,223 g, 40%). LCMS: [M+Hf 571, 569
CI; 5cl). 1H RMN (400 MHz, CDCI3) 1,21 (t, 3H), 3,44 (m, 2H),
3,79 (s, 3H), 4,73 (s, 2H), 6,45 (s, 1H), 6,65 (t, 1H), 6,80 (d, 2H), 7,14 a 7,44 (m, 8H), 6,95 (m 2H).
30
Etapa 8
Etilamida de cido 5-(5-cloro-2,4-dihidroxifenil)-4-(4-metoxi-fenil)-isoxazol-3-carboxlico

OMe
HO
35
40
A una disolucin enfriada en un bao de hielo de etilamida de cido 5-(2,4-bis-benciloxi-5-clorofenil)-4-(4-metoxifenil)-isoxazol-3-carboxlico (0,213 mg, 0,374 mmol) en diclorometano (5 mL) bajo una atmsfera de nitrgeno se le
aadi una disolucin 1,0 M de tricloruro de boro en diclorometano (1,12 mL; 1,12 mmol). La mezcla de reaccin se
agit a O oc durante 15 minutos y despus a temperatura ambiente durante 35 minutos. La mezcla de reaccin se
volvi a enfriar a O oc y se par mediante la adicin de una disolucin acuosa saturada de bicarbonato sdico (5
mL). Despus de agitar durante 5 minutos se elimin el diclorometano a vaco y el residuo se reparti entre acetato
de etilo (30 mL) yagua (30 mL). Las fases se separaron y la fase orgnica se lav con agua (30 mL), disolucin
acuosa saturada de cloruro sdico (30 mL) y despus se sec sobre sulfato sdico. La mezcla se filtr y los
disolventes del filtrado se eliminaron a vaco para proporcionar un slido incoloro espumoso que se purific mediante
adsorcin en gel de slice y despus cromatografa rpida con gel de slice (10 g 1ST) eluyendo con un 50 % de
acetato de etilo en hexano. Esto proporciona etilamida de cido 5-(5-cloro-2,4-dihidroxifeni~-4-(4-metoxi-fenil)
isoxazol-3-carboxlico en forma de un slido incoloro (0,097 g; 67%). LCMS: [M+Hf 391, 389 ( CI; 35cl). 1H RMN
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(400 MHz, d6-DMSO) 1,08 (t, 3H), 3,22 (m, 2H), 3,73 (s, 3H), 6,59 (s 1H), 6,87 (d, 1H), 7,13-7,17 (m, 3H), 8,88 (t
ancho, 1H), 10,09 (s, 1H), 10,62 (s, 1 H).
El Ejemplo 25 tuvo una actividad 'A' en el Ensayo de Polarizacin de Fluorescencia, como se describe ms adelante.
De forma similar, el Ejemplo 26 se prepar acoplando el ster de boronato de 4-piperazinofenilo protegido con Boc
como se mencion anteriormente. Este ster de boronato se produjo a partir de 1-(4-bromofenil)piperazina mediante
proteccin con boc seguido de la formacin del ster de boronato mediante acoplamiento catalizado por Pd con
bis(tetrametilpinacolato)diboro. El Ejemplo 27 se produjo de forma similar. El Ejemplo 27a se produjo mediante la
des proteccin de etilamida de cido 5-(2,4-bis-benciloxi-5-clorofenil)-4-bromo-isoxazol-3-carboxlico:
Estructura
Ejemplo
MH+
CI50 de
Hsp90*
443
377
362
()
N
26
27
NA...
HO
27a
N~
H
10
* Ensayo de Polarizacin de Fluorescencia
Esquema 7: Preparacin del intermedio 5-(2,4-bis-benciloxi-5-cloro-fenil)-4-yodo-3-metil-isoxazoI
27
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sodio
Bno~
el
acetato
~
de etilo
BnO
~
H 2 NOH.Hel
----~;a~
~
.,;
~
EtOH
OSn O
OSn O
Bno~ ,_I_CI--;;a~
__
~ACOH
OBn O-N
OH
agua
Bno~~
I acoplamiento BnO~R Bel
HO~
.,;
I
-----.~~ I
R
3
.,;
/,
OSn O-N
OSn O-N
~ acoPla~ento
OH
O-N
NR'R"
CI
NR'R"
el
H
BnO
.,;
BnO
HO
aminacin
reductora
OSn
OBn
Ejemplo 28
4-eloro-6-[3-metil-4-(3-morfolin-4-ilmetil-fenil)-isoxaz01-5-il]-benceno-1 ,3-diol
HO
Etapa 1
1-(2,4-Bis-benciloxi-5-cloro-fenil)-3-hidroxi-but-2-en -1-ona:
10
A una disolucin de cetona (15 g) en EtOAc (200 mi) se le aadi sodio metlico (3,0 g) en trozos pequeos. La
suspensin se agit a temperatura ambiente durante 15 mins, y despus se calent a reflujo durante la noche. La
reaccin se par con cido actico, y se filtr el precipitado amarillo. Esto se tritur en hexanos para proporcionar
cristales amarillos brillantes. La RMN indic que este era el producto deseado - principalmente en forma enol pequea traza en forma ceto.
Etapa 2
5-(2,4-Bis-benciloxi-5-cloro-fenil)-3-metil-isoxazol:
15
20
La dicetona (4,0 g) se suspendi en un 80% de EtOH ac. Se aadi hidrocloruro de hidroxilamina (3,4 g) Y acetato
sdico (4,0 g), Y el pH se ajust a 8/9 con NaOH 2 M. La disolucin se someti a reflujo durante 24 hrs (difcil de
monitorizar mediante eeF debido a valores de R muy similares). Tras este tiempo se acidific la disolucin a pH 5
con Hel 1 M Y se verti en agua. El precipitado blanco se filtr, se lav con agua, y se tritur con hexano para
proporcionar un slido blanco.
Notas; El compuesto se puede lavar tambin con ter si es necesario para eliminar las trazas de impurezas, pero
normalmente no es necesario. La RMN indic que este era el producto deseado.
Etapa 3
5-(2,4-Bis-benciloxi-5-cloro-fenil)-4-yodo-3-metil-isoxazol:
25
Se coloc isoxazol (2 g) en una mezcla de cido actico (24 mi) yagua (30 mi). Se aadi monocloruro de yodo (2 g
en exceso) y la disolucin se calent a 80 e durante 2-3 hrs. Despus de enfriar a temperatura ambiente, se aadi
un 10% de Na 2 S03 (sulfito sdico) en agua (50 mi). Se separ un slido/aceite naranja viscoso de la mezcla y se
lav con agua. Despus se disolvi en acetona y se filtr. La eliminacin de la acetona a vaco proporcion un aceite
naranja pegajoso que se solidific hasta un slido naranja durante la noche. La RMN y LeMS indicaron que este era
el producto deseado.
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Etapa 4
3-[5-(2,4-Bis-benciloxi-5-cloro-fenil)-3-metil-isoxazol-4-il]-benzaldehdo
CHO
BnO
1.
OBn O-N
5
10
Se disolvi 5-(2,4-bis-benciloxi-5-cloro-fenil)-4-yodo-3-metil-isoxazoI (200 mg, 0,38 mmol), y cido 3-formilbenceno

bornico (85 mg, 1,5 equiv.) en DMF (12 mi) antes de aadir una disolucin de bicarbonato sdico 1 M (1,1 mi, 3,0
equiv) y Pd(Ph3P)2Cb (21 mg, 0,08 equiv.) con agitacin. La mezcla de reaccin se transfiri a tres tubos de
microondas que se sellaron y las mezclas del interior se desgasificaron antes de irradiarlas mediante una potencia
inicial de 200 Wa una temperatura de 150 oC durante 15 minutos en un aparato de microondas CEM. Despus de
enfriar, las mezclas de reaccin se combinaron y se repartieron entre acetato de etilo (10 mi) yagua (10 mi). La capa
acuosa se separ y se extrajo de nuevo con acetato de etilo (10 mi). Las capas orgnicas se combinaron despus,
se lavaron con agua (2 x 20 mi), salmuera (20 mi), se secaron sobre Na2S04 antes de condensarlas a vaco y se
purificaron mediante cromatografa rpida con gel de slice, eluyendo con un 25% de acetato de etilo en hexano.
LCMS tR = 9,06, MS miz 510,4 [M+Hf
Etapa 5
15
4-{3-[ 5-( 2,4-Bis-benci loxi -5-clo ro-fe n i 1) -3-metil-iso xazo 1-4-il] -benc i I}-morfo Ii na
BnO
20
25
Se mezcl 3-[5-(2,4-bis-benciloxi-5-cloro-fenil)-3-metil-isoxazol-4-il]-benzaldehdo (25 mg, 0,05 mmol) y morfolina

(0,3 mi) con DCE (0,5 mi) en un tubo de microondas. Se aadi triacetoxiborohidruro sdico (15 mg. 1,4 equiv), el
tubo se sell, y se introdujo una atmsfera de nitrgeno. Despus de 1 hr se aadi ms triacetoxiborohidruro sdico
(15 mg) y la reaccin se dej con agitacin durante la noche. El anlisis de CCF demostr que la reaccin no haba
llegado a la finalizacin, por lo que se aadi una gota de cido actico y la reaccin se dej de nuevo con agitacin
durante la noche, tras lo cual la reaccin se par con una disolucin de NaHC0 3 1 M (7 mi) y se extrajo en EtOAc (5
mi). Esto se sec sobre MgS0 4 y el disolvente se elimin a vaco para proporcionar 13 mg del producto bruto en
forma de un polvo blanquecino que se llev a la etapa de desproteccin.
Etapa 6
4-Cloro-6-[3-metil-4-(3-morfolin-4-ilmetil-fenil)-isoxazol-5-il]-benceno-1 ,3-diol
HO
30
Se desprotegi 4-{3-[5-(2,4-bis-benciloxi-5-cloro-fenil)-3-metil-isoxazol-4-il]-bencil}-morfolina como se mostr

previamente y el producto bruto se purific mediante CCF preparativa eluyendo con un 10% de Etanol en
diclorometano para proporcionar 0,6 mg (7% de rendimiento) del producto en forma de un polvo blanco.
LCMS tR = 5,46, MS miz 399,3 [M-Hr
Ejemplo 29
Amida de cido 1-{3-[5-(2,4-bis-benciloxi-5-cloro-fenil)-3-metil-isoxazol-4-il]-bencil}-piperidin-4-carboxlico
29
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BnO
Se prepar mediante el uso de un procedimiento similar al de 4-cloro-6-[3-metil-4-(3-morfolin-4-ilmetil-fenil)-isoxazo15-il]-benceno-1,3-diol, excepto que isonipecotamida sustituy a la morfolina y se aadi inicialmente
triacetoxiborohidruro sdico (3 equiv.) y cido actico (1 gota). La reaccin se complet tras 18 hrs, y el producto
bruto obtenido tras el procedimiento se llev a la etapa de desproteccin.
Amida de cido 1-{3-[5-( 5-cloro-2,4-dih idroxi-fen il)-3-metil-isoxazol-4-il]-bencil}-piperidin-4-carboxlico
10
Se desprotegi amida de cido 1-{3-[5-(2,4-bis-benciloxi-5-cloro-fenil)-3-metil-isoxazol-4-il]-bencil}-piperidin-4carboxlico como se mostr previamente y el producto bruto se purific mediante CCF preparativa eluyendo con un
10% de Etanol en diclorometano para proporcionar 0,7 mg (3% de rendimiento) del producto en forma de un polvo
blanco.
Se prepar el ejemplo 30 de una forma similar:
15
Ejemplo
Estructura
30
~O}#
_
~
MH+
CI50 de
Hsp90
359
A*
o,~
Ejemplo 31
Esquema 8:
el
O----
BnO~f"
~
OBn
20
o.... N#
CI
CONHEt
Etapa 1
Etilamida de cido 5-(2,4-bis-benciloxi-5-cloro-fenil)-4-yodo-isoxazol-3-carboxlico
30

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16-11-2012
BnO
CONHEt
Se suspendi etilamida de cido 5-(2,4-bis-benciloxi-5-cloro-fenil)-isoxazol-3-carboxlico (0,90 g, 1,94 mmol), Nyodosuccinimida (0,44 g, 1 equiv.) y nitrato de amonio y cerio (IV) (0,53 g, 0,5 equiv) en Acetonitrilo (55 mi) antes de
calentar a reflujo (bao de aceite a 100 oC), cuando la mezcla se hizo homognea. Despus de 18 hrs la disolucin
se enfri y el disolvente se elimin a vaco para proporcionar un aceite naranja espeso. Este se reparti entre DCM
(25 mi) yagua (10 mi), la capa orgnica se retuvo y se lav con salmuera (2 x 25 mi) antes de secarla sobre Na2S04.
El DCM se elimin a vaco para proporcionar 0,88 g (77% de rendimiento) del producto en forma de un polvo de
color naranja/marrn claro.
10
Etapa 2
1-(3-Bromo-fenil)-4-metil-piperazina
15
20
25
Se aadi 1 ,3-dibromobenceno (0,90 mi, 7,49 mmol), N-metilpiperazina (0,28 mi, 2,50 mmol) y tolueno anhidro (7 mi)
mediante una jeringa a un matraz seco lleno de argn. La disolucin se mezcl bien antes de suministrar BINAP (47
mg) y Pd2dba3 (23 mg), y el matraz se llen de nuevo con argn y DBU (0,93 g, 2,5 equiv.) aadidos por medio de
una jeringa. La mezcla de reaccin se calent a 60 oC antes de aadir terc-butxido sdico recin pulverizado en
una porcin para comenzar la reaccin. La reaccin se dej con agitacin a 60 oC durante la noche, y los anlisis de
CCF parecieron mostrar que todava haba presente algo de piperazina, de manera que la reaccin se calent a 100
oC y se agit durante otras 24 hrs, tras lo cual se reparti entre EtOAc (20 mi) yagua (20 mi). La capa acuosa se
extrajo de nuevo con EtOAc y las capas orgnicas combinadas se lavaron con disolucin de HCI 1,6 M (2 x 10 mi).
La disolucin cida que contena el producto se basific primero con un volumen similar de disolucin de NaOH 1 M
respecto de la disolucin de cido y despus se aadi cuidadosamente bicarbonato sdico slido para alcanzar un
pH=8,5 antes de extraer de nuevo en EtOAc (2 x 15 mi), que se lav con salmuera, se sec sobre MgS04 y se
evapor hasta sequedad para proporcionar 0,50 g (78% de rendimiento) del producto puro en forma de un aceite
amarillo.
LCMS tR = 4,55, MS miz 255,4/257,3 [M+Hf
Etapa 3
1-Meti 1-4-[3-(4,4,5,5-tetrameti 1-[1 ,3 ,2]d i oxa borolan-2-i 1) -fe n i 1] -p i perazi na
30
35
A una disolucin de PdCb (dppf).DCM (10 mg, 0,012 mmol) en tolueno anhidro (4 mi) en un tubo de microondas
sellado lleno de argn se le aadi la 1-(3-Bromofenil)-4-metil-piperazina (100 mg, 0,39 mmol), EbN (0,11 mi, 2
equiv.), y 4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolano (0,09 mi, 1,5 equiv). El tubo de microondas se vaci y se volvi a
llenar con argn antes de irradiarlo en un reactor de microondas CEM a 100 oC durante 1 hr mediante el uso de una
potencia inicial de 200 W. La mezcla de reaccin se reparti entre ms tolueno (6 mi) yagua (10 mi), la capa
orgnica se separ, se lav con agua (1 x 10 mi), se sec sobre MgS04 y despus se evapor a vaco para
proporcionar un residuo prpura/marrn que se us para un acoplamiento de Suzuki sin purificacin adicional.
31

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Etapa 4
Etilamida de cido 5-(2,4-bis-benciloxi-5-cloro-fenil)-4-[3-(4-metil-piperazin-1-il)-fenil]-isoxazol-3-carboxlico
Etilamida de cido 5-(2,4-bis-benciloxi-5-cloro-fenil)-4-bromo-isoxazol-3-carboxlico (38 mg, 0,07 mmol) y 1-Metil-4[3-(4,4,5,5-tetrametil-[1 ,3,2]dioxaborolan-2-il)-fenil]-piperazina (31 mg, 2 equiv.) se acoplaron mediante el uso del
mtodo de Suzuki descrito previamente para proporcionar 37 mg (83% de rendimiento) del producto bruto en forma
de un aceite marrn que se llev a la etapa de desproteccin.
Etapa 5
10
Etilamida de cido 5-(5-cloro-2,4-dihidroxi-fenil)-4-[3-(4-metil-piperazin-1-il)-fenil]-isoxazol-3-carboxlico
HO
15
Se desprotegi etilamida de cido 5-(2,4-bis-benciloxi-5-cloro-fenil)-4-[3-(4-metil-piperazin-1-il)-fenil]-isoxazol-3carboxlico de la manera mostrada previamente. El precipitado formado durante la reaccin se separ, y se reparti
entre EtOAc yagua. La capa acuosa se guard, se basific mediante el uso de bicarbonato sdico slido y el
producto se extrajo mediante el uso de EtOAc (2 x 10 mi). Las capas orgnicas combinadas se lavaron con salmuera
(10 mi), se secaron sobre MgS04 y se evaporaron a vaco para proporcionar 5,2 mg (20% de rendimiento) del
producto en forma de un polvo de color marrn.
20
4
OH (d -MeOH), 7,17 (1H, m, Ar-H), 7,09 (1H, s, Ar-H), 6,94 (1H, m, Ar-H), 6,80 (1H, m, Ar-H), 6,49 (1H, s, Ar-H), 3,13
(4H, t, NCH2CH2N-CH3), 2,69 (2H, q, CONHCH2CH3), 2,61 (4H, t, NCH2CH2N-CH3), 2,37 (3H, s, NCH2CH2N-CH3),
1,19 (3H, t, CONHCH2CH3).
Los Ejemplos 32 - 38 de la Tabla siguiente se prepararon de forma similar, pero con las siguientes variaciones:
1. Para el Ejemplo 36, el intermedio de dioxaborolano se prepar como sigue:
25
Esquema
PdCI2(dppf)
KOAc
DMSO
Etapa 1
1-(4-Bromo-fenil)-4-metil-piperazina
32
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1-(4-Bromo-fenil)-piperazina (1 g, 4,1 mmol) y carbonato potsico (1,8 g, 3 eq) en DMF (15 mi) se trataron con
yoduro de metilo (250 JI, 1,1 equivalentes), y la disolucin se agit a temperatura ambiente durante la noche. La
reaccin se par con agua desionizada (10 mi), y se extrajo con acetato de etilo. La fase orgnica se lav con
bicarbonato sdico para eliminar cualquier impureza dimetilada, se sec y el disolvente se elimin para proporcionar
1-(4-Bromo-fenil)-4-metil-piperazina con un 73% de rendimiento.
Tiempo de retencin en LC 2,21 minutos [M+Hf 256 (Tiempo de funcionamiento 3,75 mins).
Etapa 2
1-Metil-4-[4-(4,4,5,5-tetrametil-[1 ,3,2]dioxaborolan-2-il)-fenil]-piperazina
10
15
1-(4-Bromo-fenil)-4-metil-piperazina (750 mg, 3 mmol) en DMSO (15 mi) con bis(pinacolato)diborano (1,1 g, 1,5
equivalentes) y acetato potsico (900 mg, 3 equivalentes). La suspensin se desgasific antes del tratamiento con
PdCb(dppf) (cat.), y se agit a 80 oC. Se aadi ms bis(pinacolato)diborano (1 eq) despus de 3 horas, y se agit
durante otras 2 horas. La suspensin se reparti entre acetato de etilo yagua. La purificacin mediante
cromatografa en columna con un gradiente del 0-8% de metanol en diclorometano proporcion 1-Metil-4-[4-(4,4,5,5tetrametil-[1 ,3,2]dioxaborolan-2-il)-fenil]-piperazina con un 62% de rendimiento.
2. Para los ejemplos 37 y 38, se us un intermedio de cido bornico en vez de un dioxaborolano, y el primero se
prepar como sigue:
20
cido 4-[(2-metilsulfonil)-etilaminometil]-fenil bornico (intermedio para el Ejemplo 37)
NH 2 .HCI
N~~:
,,,::::
1"::::
h-
HO . . S'OH
25
O O
HO",S'OH
Se trat hidrocloruro de cido 4-aminometil fenil bornico (560 mg, 3 mmol) en etanol (5 mi) con metil vinil sulfona
(260 JI, 1 equivalente) y trietil amina (1,2 mi, 3 equivalentes). La disolucin se agit a 100 oC durante 2 hrs. El etanol
se elimin a vaco, se reparti en agua y butanol para proporcionar cido 4-[(2-metilsulfonil)-etilaminometil]-fenil
bornico con un 94% de rendimiento.
cido 4-[N-metil S,S-dioxo-tiomorfolino]-fenil bornico (Intermedio para el Ejemplo 38)
33
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NH2 .Hel
Q
I~
rs~o
~s~
00
'1 \'
h-
NJ
Q
I~
h-
HO,B'OH
HO,B'OH
Se trat hidrocloruro de cido 4-aminometil fenil bornico (456 mg, 2,4 mmol) en etanol (8 mi) con vinil sulfona (244
JI, 1 equivalente) y trietilamina (2 equivalentes), y la disolucin se agit a 100 oC durante 3 hrs. El etanol se elimin a
vaco, y se reparti en agua y butanol para proporcionar el producto con un 88% de rendimiento.
5
Tiempo de retencin en LC 1,65 minutos [M+Hf 270 (Tiempo de funcionamiento 8 mins).

MH+
CI50 de Hsp90*
32
409
411
33
410
412
360
362
409
411
Ejemplo
Estructura
HO
O
el
HO
34
N\
H
el
35
34
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(J
N
el
457
459
37
494
496
38
506
508
36
HO
OH
NH
Ejemplo 39
Esquema 9:
CI
CI
BnO
BH3.THF
BnO
Etapa 1
Etilamida de cido 5-(2,4-bis-benciloxi-5-cloro-fenil)-4-(3-cloro-fenil)-isoxazol-3-carboxlico
10
Se acoplaron etilamida de cido 5-(2,4-bis-benciloxi-5-cloro-fenil)-4-bromo-isoxazol-3-carboxlico (60 mg, 0,11

mmol), y cido 3-clorobenceno bornico (23 mg, 1,3 equiv.) mediante el uso del mtodo de Suzuki descrito
previamente para proporcionar 35 mg (55% de rendimiento) del producto bruto en forma de un polvo marrn que se
35
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llev a la siguiente etapa.

Etapa 2
[5-(2,4-Bis-benciloxi-5-cloro-fenil)-4-(3-cloro-fenil)-isoxazol-3-ilmetil]-etil-amina
BnO
10
A una disolucin de etilamida de cido 5-(2,4-bis-benciloxi-5-cloro-fenil)-4-(3-cloro-fenil)-isoxazol-3-carboxlico (36

mg, 0,06 mmol) en THF anhidro bajo argn se le aadi complejo Borano-THF 1 M (1 mi) y la disolucin se someti
a reflujo durante la noche. Despus de enfriar, la disolucin se verti en una columna Isolute SPE Flash SCX-2 5 g
que se eluy rpidamente con metanol (2 x 20 mi). El producto deseado se recuper despus eluyendo con una
mezcla de un 10% de amoniaco en metanol (2 x 10 mi), que se evapor a vaco para proporcionar 23 mg (65% de
rendimiento) de un polvo amarillo claro.
LCMS (LCT) tR = 8,18, MS miz 558,8 [M+Hf
El Ejemplo 40 se prepar de forma similar:
Ejemplo
MH+
Estructura
CI50 de
Hsp90
0-
el
375
40
377
15
Ejemplo 41
Esquema 10:
N/"""\
'-.JO
Etapa 1
20
Etilamida de cido 5-(2,4-bis-benciloxi-5-cloro-fenil)-4-(4-formil-fenil)-isoxazol-3-carboxlico
36

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10
Se combin etilamida de cido 5-(2,4-bis-benciloxi-5-cloro-fenil)-4-yodo-isoxazol-3-carboxlico (preparada como en el

Ejemplo 31) (2 g, 3,4 mmol), cido 4-formilbornico (0,612 g, 4,08 mmol), NaHC03 (10,2 mi, disolucin ac. 1 M, 10,2
mmol), PdCI2(PPh3)2 (119 mg, 0,17 mmol) y DMF (50 mi). La mezcla se desgasific despus haciendo burbujear N2
en ella durante 5 minutos antes de calentarla a 80 oC durante 1 hora. La mezcla se evapor despus a vaco y se
reparti entre EtOAc (3 x 50 mi) yagua (50 mi). Las capas orgnicas combinadas y secadas (Na2S04) se
evaporaron a vaco para proporcionar un aceite bruto. Este se disolvi en EtOAc y se hizo pasar a travs de un
tapn de Si0 2, que se lav con EtOAc. El filtrado se evapor a vaco y el aceite resultante se tritur con EbO para
proporcionar etilamida de cido 5-(2,4-bis-benciloxi-5-cloro-fenil)-4-(4-formil-fenil)-isoxazol-3-carboxlico (1,577 g,
82%) en forma de un slido de color plido, LC/MS: RT = 2,908 mino 567,3 (MH+).
Etapa 2
Etilamida de cido 5-(2,4-bis-benciloxi-5-cloro-fenil)-4-(4-morfolin-4-ilmetil-fenil)-isoxazol-3-carboxlico
o
15
20
Se aadi cido actico (0,37 mi, 6,44 mmol) gota a gota a una mezcla de etilamida de cido 5-(2,4-bis-benciloxi-5cloro-fenil)-4-(4-formil-fenil)-isoxazol-3-carboxlico (730 mg, 1,29 mmol), morfolina (0,225 mi, 2,58 mmol), tamices
moleculares en polvo de 3 A (730 mg) y MeOH (21 mi). Esto se dej con agitacin durante la noche bajo N2. La
mezcla se evapor despus a vaco y el producto bruto resultante se reparti entre CH 2Cb (3 x 40 mi) y disolucin
sat. de NaHC03 (40 mi). Las capas orgnicas combinadas y secadas (Na2S04) se evaporaron a vaco para
proporcionar etilamida de cido 5-(2,4-bis-benciloxi-5-cloro-fenil)-4-(4-morfolin-4-ilmetil-fenil)-isoxazol-3-carboxlico
en bruto (810 mg) en forma de un slido amarillo, LC/MS: RT = 2,365 mino 638,4 (MH+).
Etapa 3
25
30
Se aadi 8Cb (disol. 1 M en CH2Cb, 3,87 mi, 3,87 mmol) gota a gota a una disolucin de la etilamida de cido 5(2,4-bis-benciloxi-5-cloro-fenil)-4-(4-morfolin-4-ilmetil-fenil)-isoxazol-3-carboxlico bruta (810 mg, - 1,29 mmol) en
CH2Cb (30 mi) a O oC. Despus se dej que la reaccin alcanzase la TA. Despus se aadi lentamente NaHC03
acuoso saturado (40 mi) y la mezcla resultante se concentr a vaco. Esto se reparti despus entre EtOAc (3 x 50
mi) yagua (50 mi). Las capas orgnicas combinadas y secadas (Na2S04) se evaporaron a vaco. La cromatografa
rpida mediante elucin con CH2Cb - 10% de MeOH / 1% de NH3 / CH2Cb proporcion la etilamida de cido 5-(5cloro-2,4-dihidroxi-fenil)-4-(4-morfolin-4-ilmetil-fenil)-isoxazol-3-carboxlico (380 mg, 64% a lo largo de 2 etapas) en
forma de una espuma amarilla, LC/MS: RT = 1,751 mino 458,2 (MH+).
37
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En la Tabla siguiente, los Ejemplos 42-64 se prepararon mediante mtodos anlogos a los del Ejemplo 41, mediante
el uso del aldehdo o la cetona adecuada.
Ejemplo
MH+
Estructura
CI50 de
Hsp90*
472
42
474
HO
458
43
460
~\
()
N
HO
472
44
474
NH
(o
N)
HO
45
458
NH
38

39
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E04709273
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N0
HO
456
52
458
O
NJ--OH
HO
472
53
474
O
N0
54
442
452
A**
450
A**
55
HO
OH
NH
\.
Nr:)
56
HO
N\
OH
40
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57
465
HO
A**
~\
OH
~JJ
~ !.
479
58
481
O
CI
\
416
59
418
~J
O
I
OH
60
446
A
448
O
t~
CI
61
N~
471
A
473
41
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499
62
501
o
o}CI
63
f<)
N
517
A
519
476
64
478
o
** preparado a partir de material de partida de etil resorcinol
Los compuestos adicionales 41 a-s se prepararon mediante mtodos anlogos a los del Ejemplo 41 :
5
Ejemplo
Estructura
MH+
CI50 de
Hsp90*
468
N~
41a
42
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41b
HO
OH
438
A**
442
395
474
476
428
NH
NO
41c
41e
41f
HO
HO
N~
OH
41g
HO
N~
OH
NO
41h
43
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16-11-2012

HO
41i
470
472
502
458
389
A***
NH
\
HO
41j
NH
(0)
N
HO
41k
NH
~\
ro
N~
HO
41m
~\
41n
44
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41p
471
41q
475
A****
41 r
507
A*****
41s
472

** preparado a partir de material de partida de etil resorcinol
*** preparado mediante la reduccin del intermedio de aldehdo
**** preparado mediante la alquilacin del intermedio de fenal
***** preparado a partir del naftil aldehdo
Ejemplo 65
Esquema de Reaccin:
45
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Bno"ll1
H0"ll1
yY
OH
yY
MeCN
Bno~o
,
NaOEt
OBn O
Bno~:O
I;
EtOH
/,
OBn O-N
O~
B(OH)2
/,
OBn O-N
OBn O
Bno~:
',.
7
HONH2
O~
EtOH
DMF
OBn O
O
Br
(COOEt)2
___
o
Bno~
NBS
NHEt
DMF / H20
NaHC03
CI2 Pd(PPh3 )2
NBS/CAN
MeCN
!1
NaHC03
CI 2Pd(PPh3h
1. BCI 3 ! CH 2CI 2
O oC -7 rt .
2. HCI! Et:p ! EtOH
Etapa 1
1-(2,4-Bis-benciloxi-fenil)-etanona
Bno'll1
yY
OBn
10
Se disolvieron 35 9 de 2,4-dihidroxiacetofenona (0,230 mol, 1 eq) en 500 mi de acetonitrilo. Se aadieron 79,5 9 de

carbonato potsico (0,575 mol, 2,5 eq) y 86,6 9 de bromuro de bencilo (0,506 mol, 2,2 eq). La mezcla se someti a
reflujo durante 64 horas, se enfri y el acetonitrilo se elimin a presin reducida. El residuo se separ entre agua y
acetato de etilo. El residuo fue principalmente resorcinol mono-bencilado.
El producto bruto (43 g) se disolvi despus en 250 mi de DMF. Se aadi carbonato potsico (29 g, 0,210 mol, 1,2
eq) y 25 mi de bromuro de bencilo (0,210 mol, 1,2 eq), y la mezcla se agit durante la noche. El disolvente se elimin
a presin reducida y el residuo se separ entre acetato de etilo yagua. Tras la eliminacin del disolvente, el residuo
se tritur con hexano para eliminar el exceso de bromuro de bencilo.
LC-MS [M+Hr = 333
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Rendimiento: 51,2 9 (67%)

Etapa 2
1-(2,4-Bis-benciloxi-5-bromo-fenil)-etanona
Bno~
OSn O
Se disolvieron 51,2 9 de 1-(2,4-bis-benciloxi-fenil)-etanona (0,154 mol, 1 eq) en 250 mi de DMF. Se aadieron gota a
gota 27,42 9 de N-bromosuccinimida (0,154 mol, 1 eq) en 100 mi de DMF. La mezcla se agit a temperatura
ambiente durante la noche. La mezcla de reaccin se verti en 700 mi de agua y el precipitado se filtr. La torta de
filtracin se lav con agua y el slido incoloro se recristaliz a partir de 370 mi de acetonitrilo.
LC-MS [M+Hr = 411 Y 413
10

Etapa 3
ster etlico de cido 4-(2,4-bis-benciloxi-5-bromo-fenil)-2,4-dioxo-butrico
Sr
SnO
OSn O
15
Se disolvieron 9,75 9 de sodio (0,424 mol, 3 eq) en 500 mi de etanol absoluto (1,5 horas). Se aadieron 58 9 de 1(2,4-bis-benciloxi-5-bromo-fenil)-etanona (0,141 mol, 1 eq) y 30,98 9 de oxalato de dietilo (0,212 mol, 1,5 eq), y la
mezcla se someti a reflujo durante 2 horas. Despus de enfriar, la mezcla se verti en 220 mi de HCI acuoso 2 N Y
el producto se extrajo en 700 mi de diclorometano. El disolvente se elimin a presin reducida y el residuo amarillo
se tritur con 150 mi de ter dietlico.
20
1H RMN (400 MHz, CDCI3) 1,27 (t, 3H), 4,27 (q, 2H), 5,13 (d, 2H), 6,54 (s, 1H), 7,37 (m, 10H), 8,17 (s, 1H).
Etapa 4
ster etlico de cido 5-(2,4-bis-benciloxi-5-bromo-fenil)-isoxazol-3-carboxlico
Br
BnO
OSn
25
O~
Se disolvieron 69,3 9 de ster etlico de cido 4-(2,4-bis-benciloxi-5-bromo-fenil)-2,4-dioxo-butrico (0,135 mol, 1 eq)

en 750 mi de etanol. Se aadieron 14,11 9 de hidrocloruro de hidroxilamina (0,203 mol, 1,5 eq). La mezcla se
someti a reflujo durante 2,5 horas y se enfri. Despus se verti en 1000 mi de agua, y el precipitado se filtr. La
torta de filtracin se lav con 500 mi de agua, seguido de 75 mi de ter dietlico, y se sec.
30
1H RMN (400 MHz, CDCI3) 1,39 (t, 3H), 4,41 (q, 2H), 5,11 (d, 2H), 5,15 (d, 2H), 6,58 (s, 1H), 6,99 (s, 1H), 7,35 (m,
10H), 8,16 (s, 1H).
Etapa 5
47
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16-11-2012

Etilamida de cido 5-(2,4-bis-benciloxi-5-bromo-fenil)-isoxazol-3-carboxlico

Br
BnO
o
OBn
NH
Se suspendi ster etlico de cido 5-(2,4-bis-benciloxi-5-bromo-fenil)-isoxazol-3-carboxlico en etanol y etilamina (2

M en metanol, 3 eq), la suspensin amarilla resultante se calent a reflujo (80 oC) bajo nitrgeno, en cuyo punto los
reactivos se disolvieron. Se calent durante 14 horas, y despus se dej enfriar a temperatura ambiente. Se form
un precipitado blanco, que se filtr y se lav con ms etanol antes de secarlo a vaco.
Tiempo de retencin en LC-MS 2,868 minutos [M+Hf = 507 Y 509 (tiempo de funcionamiento 3,75 minutos)
Etapa 6
Etilamida de cido 5-(2,4-bis-benciloxi-5-estirilfenil)-isoxazol-3-carboxlico
N~
10
A una mezcla de cido trans-2-fenilvinilbornico (0,472 g, 3,2 mmol) y etilamida de cido 5-(2,4-bis-benciloxi-5bromofenil)-isoxazol-3-carboxlico (1,079 g, 2,13 mmol) se le aadi bicarbonato sdico (536 mg, 6,39 mmol)
seguido de DMF (25 mL) yagua (5 mL). La mezcla se desgasific mediante evacuacin e inyeccin de nitrgeno
(tres veces), seguido de burbujeo de gas nitrgeno a travs de la mezcla durante cinco minutos.
15
20
25
Se aadi diclorobis(trifenilfosfina)paladio (11) (149 mg, 0,21 mmol) y la mezcla de reaccin se calent bajo una
atmsfera de nitrgeno a 80 oC durante siete horas (la mezcla de reaccin adquiere un color marrn oscuro despus
de 10 minutos). La mezcla de reaccin se dej enfriar a temperatura ambiente, y la mayora del disolvente se elimin
a vaco. El residuo resultante se reparti entre acetato de etilo (100 mL) yagua (100 mL), y esta mezcla se filtr a
travs de una almohadilla de celite para eliminar el residuo de paladio. Las fases se separaron y la fase orgnica se
lav con agua (2 x 50 mL), disolucin acuosa saturada de cloruro sdico (100 mL) y despus se sec sobre sulfato
sdico. La mezcla se filtr y los disolventes del filtrado se eliminaron a vaco para proporcionar un slido marrn (800
mg). La torta de filtracin de celite se lav con diclorometano y despus se sec sobre sulfato sdico. La mezcla se
filtr y los disolventes del filtrado se eliminaron a vaco para proporcionar un slido marrn (541 mg). Los lotes
combinados de producto se purificaron mediante trituracin con una mezcla de acetato de etilo-hexano. Esto
proporciona etilamida de cido 5-(2,4-bis-benciloxi-5-estirilfenil)-isoxazol-3-carboxlico en forma de un slido marrn
claro (808 mg, 71 %). LCMS: [M+Hf 531. 1H RMN (400 MHz, CDCI3) 1,12 (t, 3H), 3,37 (m, 2H), 4,95 (s, 2H), 5,07
(s, 2H), 6,46 (s, 1H), 6,70 (t ancho, 1H), 7,11 (s, 1H), 7,17 (d, 1H), 7,23 (d, 1H), 7,32-7,44 (m, 15H), 8,09 (s, 1H).
Etapa 7
Etilamida de cido 5-(2,4-bis-benciloxi-5-fenetilfenil)-isoxazol-3-carboxlico
N~
30
48
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10
Se aadi catalizador de paladio sobre carbono (10%; 50 mg) a una disolucin desgasificada de etilamida de cido
5-(2,4-bis-benciloxi-5-estirilfenil)-isoxazol-3-carboxlico (690 mg, 1,30 mmol) en 1,4-dioxano (50 mL) bajo una
atmsfera de nitrgeno. La mezcla de reaccin se hidrogen durante un total de 4,75 hrs con ms catalizador de Pd
sobre carbono (50 mg) aadido a las 0,75 y 2,5 hrs. La mezcla de reaccin se filtr a travs de una almohadilla de
celite, que se lav con 1,4-dioxano (20 mL) y diclorometano (20 mL). Los disolventes combinados del filtrado se
eliminaron a vaco para proporcionar un slido de color crema, que se purific mediante cromatografa rpida con gel
de slice (20 g, 1ST) eluyendo con un 10 a 50 % de acetato de etilo en hexano. Esto proporciona etilamida de cido
5-(2,4-bis-benciloxi-5-fenetilfenil)-isoxazol-3-carboxlico en forma de un slido amarillo plido (609 mg, 88%). LCMS:
[M+Hf 533. 1H RMN (400 MHz, CDCI3) 1,26 (t, 3H), 2,86-2,96 (m, 4H), 3,49 (m, 2H), 5,03 (s, 2H), 5,18 (s, 2H),
6,56 (s, 1H), 6,81 (t, 1H), 7,07 (s, 1H), 7,15-7,20 (m, 3H), 7,23-7,28 (m, 2H), 7,31-7,42 (m, 10H), 7,73 (s, 1H).
Etapa 8
Etilamida de cido 5-(2,4-bis-benciloxi-5-fenetilfenil)-4-bromo-isoxazol-3-carboxlico
Sr
N~
15
20
Se aadi N-bromosuccinimida (207 mg, 1,16 mmol) a una suspensin de etilamida de cido 5-(2,4-bis-benciloxi-5fenetilfenil)-isoxazol-3-carboxlico (564 mg, 1,06 mmol) en acetonitrilo (20 mL). Se aadi nitrato de cerio y amonio
(290 mg, 0,53 mmol) y la mezcla de reaccin se calent a reflujo (lo que proporcion una disolucin naranja
homognea) y se agit durante 30 minutos. La mezcla de reaccin se dej enfriar a temperatura ambiente y el
acetonitrilo se elimin a vaco. El residuo se reparti entre acetato de etilo (50 mL) yagua (50 mL), y las fases se
separaron. La fase orgnica se lav con disolucin acuosa saturada de cloruro sdico (50 mL) y se sec sobre
sulfato sdico. La mezcla se filtr y los disolventes del filtrado se eliminaron a vaco para proporcionar un aceite
amarillo que se purific mediante cromatografa rpida con gel de slice (20 g, 1ST) eluyendo con un 10-30% de
acetato de etilo en hexano. Esto proporciona etilamida de cido 5-(2,4-bis-benciloxi-5-fenetilfenil)-4-bromoisoxazol-3carboxlico en forma de un aceite amarillo (326 mg, 53%). LCMS: [M+Hf 613, 611.
Etapa 9
25
Etilamida de cido 5-(2,4-bis-benciloxi-5-fenetil-fenil)-4-(4-morfolin-4-ilmetilfenil)-isoxazol-3-carboxlico
N~
30
35
40
A una mezcla de 4-morfolin-4-ilmetil-fenil pinacol borano (0,215 g, 0,71 mmol) y etilamida de cido 5-(2,4-bisbenciloxi-5-fenetilfenil)-4-bromo-isoxazol-3-carboxlico (0,347 g, 0,57 mmol) se le aadi bicarbonato sdico (142
mg, 1,69 mmol) seguido de DMF (10 mL) yagua (2,0 mL). La mezcla se desgasific mediante evacuacin e
inyeccin de nitrgeno (tres veces), seguido de burbujeo de gas nitrgeno a travs de la mezcla durante cinco
minutos. Se aadi diclorobis(trifenilfosfina)paladio (11) (40 mg, 0,057 mmol) y la mezcla de reaccin se calent bajo
una atmsfera de nitrgeno a 80 oC durante 5 horas (la mezcla de reaccin adquiere un color marrn oscuro). Se
aadieron otros 20 mg (0,029 mmol) de diclorobis(trifenilfosfina)paladio (11) y la mezcla de reaccin se calent a 80
oC durante 15 horas, y despus se dej enfriar a temperatura ambiente. La mayora de los disolventes se eliminaron
a vaco y el residuo se reparti entre acetato de etilo (50 mL) yagua (50 mL). Esta mezcla se filtr a travs de una
almohadilla de celite para eliminar los residuos de paladio, y despus se separaron las fases y la fase orgnica se
lav con agua (2 x 50 mL), disolucin acuosa saturada de cloruro sdico (50 mL) y despus se sec sobre sulfato
sdico. La mezcla se filtr y los disolventes del filtrado se eliminaron a vaco para proporcionar un aceite marrn. El
producto de reaccin bruto se purific mediante cromatografa rpida con gel de slice (20 g, 1ST) eluyendo con un
gradiente de disolvente del 30 al 70 % de acetato de etilo en hexano. Esto proporciona etilamida de cido 5-(2,4-bis-
49
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benciloxi-5-fenetil-fenil)-4-(4-morfolin-4-ilmetil-feni1)-isoxazol-3-carboxlico en forma de un aceite amarillo (0,110 g,

27%). LCMS: [M+Hf 708.
Etapa 10
5
Hidrocloruro de etilamida de cido 5-(2,4-dihidroxi-5-fenetil-fenil)-4-(4-morfolin-4-ilmetiIfenil)-isoxazol-3carboxlico
.Hel
N~
OH
10
15
20
A una disolucin enfriada en un bao de hielo de etilamida de cido 5-(2,4-bis-benciloxi-5-fenetil-fenil)-4-(4-morfolin4-ilmetil-fenil)-isoxazol-3-carboxlico (0,109 g, 0,15 mmol) en diclorometano (4 mL) bajo una atmsfera de nitrgeno
se le aadi una disolucin 1,0 M de tricloruro de boro en diclorometano (0,45 mL; 0,45 mmol). La mezcla de
reaccin se agit a O oC durante 20 minutos, despus a temperatura ambiente durante 3,5 horas. La mezcla de
reaccin se volvi a enfriar a O oC y se par mediante la adicin de una disolucin acuosa saturada de bicarbonato
sdico (5 mL). Despus de agitar durante 5 minutos se elimin el diclorometano a vaco y el residuo se reparti entre
acetato de etilo (20 mL) yagua (20 mL). Las fases se separaron y la fase orgnica se lav con agua (20 mL),
disolucin acuosa saturada de cloruro sdico (20 mL) y despus se sec sobre sulfato sdico. La mezcla se filtr y
los disolventes del filtrado se eliminaron a vaco para proporcionar un aceite marrn claro que se purific mediante
adsorcin en gel de slice y despus mediante cromatografa rpida con gel de slice (10 g 1ST) eluyendo con un O a
5% de metanol en acetato de etilo. Esto proporciona un aceite incoloro que se tritur con HCI 1,0 M en una
disolucin de ter dietlico (5 mL) para proporcionar hidrocloruro de etilamida de cido 5-(2,4-dihidroxi-5-fenetil-fenil)4-(4-morfolin-4-ilmetil-fenil)-isoxazol-3-carboxlico (0,019 g; 24%). LCMS: [M+Hf 528. 1H RMN (400 MHz, d6-DMSO)
1,08 (t, 3H), 2,60 (m, 4H), 2,90-3,30 (m, 6H), 3,67 (m, 2H), 3,87 (m, 2H), 4,30 (s, 2H), 6,46 (s, 1H), 6,84 (s, 1H),
7,05-7,49 (m, 5H), 7,40-7,68 (m, 4H), 8,90 (s ancho, 1H), 9,67 (s, 1H), 9,89 (s, 1H), 10,75 (s ancho, 1H).
Los ejemplos de la Tabla siguiente se prepararon mediante mtodos anlogos a los del Ejemplo 64, y tuvieron las
actividades mostradas en el Ensayo de Polarizacin de Fluorescencia, como se describe ms adelante.
25
MH+
Estructura
Ejemplo
CI50 de
Hsp90*
()
N
el
66
457
HO
459
OH
NH
50
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Ha
67
OH
419
459
544
546
437
NH
\
68
N~
OH
69
el
N~
H
OH
F
70
~\
OH
F
71
HO
51
E04709273
16-11-2012

72
HO
516
73
HO
518
74
HO
500
546
N\
H
OH
r:-"O
~~
)lO
75
Los ejemplos adicionales 75a-v de la tabla siguiente se prepararon tambin mediante mtodos anlogos a los del
Ejemplo 65.
Ejemplo
Estructura
75a
52
MH+
CI50 de
Hsp90
540
E04709273
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{J
HO
75b
498
542
516
544
518
531
NH
~OH
75c
OH
NH
\
F
75d
N~
OH
75e
)lOH
75f
el -
HO
N~
H
r-\
N-
'--1
75g
HO
53
E04709273
16-11-2012

75h
532
526
502
512
545
)l.OH
)lOH
75i
NH
\
F
75k
N~
OH
75m
HO
N~
OH
75n
OH
NH
54
E04709273
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HO
75p
OH
486
531
504
527
500
NH
\
F
75q
Ha
N'\
OH
75r
Ha
CI
N~
OH
75s
N~
OH
Cr
75t
N~
H
OH
55
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75u
HO
OH
501
517
NH
O
75v
Ejemplo 76
Esquema de Reaccin
Etapa 1
3-(2,4-Bis-benciloxi-5-bromo-fenil)-4-(4-metoxi-fenil)-5-metilisoxazol
10
15
Se aadi trifluoruro de boro-trimetiloxonio (Aldrich; 70 mg, 0,47 mmol) a una disolucin agitada de 5-(2,4-bisbenciloxi-5-bromo-fenil)-4-(4-metoxi-fenil)-3-metil-isoxazol (Ejemplo 3, Etapa 1) (120 mg, 0,22 mmol) en
diclorometano (3 mi), y la agitacin continu durante 3 h. La mezcla resultante se concentr a vaco para
proporcionar un semislido blanco, que se mezcl con hidrocloruro de hidroxilamina (70 mg, 1,0 mmol), carbonato
potsico (120 mg, 0,87 mmol) y metanol (2 mi), y se calent a reflujo durante 18 h. La mezcla de reaccin se reparti
entre agua (20 mi) y acetato de etilo (2x10 mi), y las fases orgnicas combinadas se secaron sobre sulfato
magnsico anhidro y se evaporaron a vaco para proporcionar un aceite incoloro. El producto bruto se purific
mediante cromatografa en columna, slice (10 g), eluyendo con hexano, seguido de ter dietlico/hexano (1 :1), para
proporcionar 3-(2,4-bis-benciloxi-5-bromo-fenil)-4-(4-metoxi-fenil)-5-metil-isoxazol en forma de un slido blanco (44
mg,37%)
56
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Tiempo de retencin en LC 5,55 minutos [M+Hf 556,0 Y 558,0 (Tiempo de funcionamiento 8,00 mins)
R.M.N. (Cloroformo-d) 7,64 (s ArH) 7,35-6,76 (m 14 ArH) 6,34 (sArH) 4,90 (s 2CH2) 4,60 (s 2CH2) 3,79 (s 3CH3) 2,46
(s 3CH3)
Etapa 2
5
4-Bromo-6-[4-(4-metoxi-fenil)-5-metil-isoxazol-3-il]-benceno-1 ,3-diol
HO~Br
f ~O~
HO
fI
'/ ~
NO
10
Se aadi una disolucin de tricloruro de boro (1 M en diclorometano, 1 mi, 1 mmol) a una disolucin de 3-(2,4-Bisbenciloxi-5-bromo-fenil)-4-(4-metoxi-fenil)-5-metil-isoxazol (38 mg, 0,068 mmol) en diclorometano (1 mi), y se
continu con la agitacin durante 1 h. La mezcla de reaccin se reparti entre agua (20 mi) y diclorometano (2x20
mi), y las fases orgnicas combinadas se secaron sobre sulfato magnsico anhidro y se concentraron a vaco para
producir un aceite marrn. El producto bruto se purific mediante cromatografa en columna, slice (10 g), eluyendo
con hexano, seguido de hexano/ter dietlico (3:1, despus 1 :1), para proporcionar 4-Bromo-6-[4-(4-metoxi-fenil)-5metil-isoxazol-3-il]-benceno-1 ,3-diol en forma de un aceite incoloro (11 mg, 43%).
Tiempo de retencin en LC 2,52 minutos [M+Hf 376,1 Y 378,1 (Tiempo de funcionamiento 3,75 mins)
15
R.M.N. (DMSO-d6) 10,40 (s OH) 9,69 (s OH) 7,22 (ArH) 7,10-6,89 (m 4ArH) 6,5 (s ArH) 3,7 (s OCH3) 2,46 (s CH3)
Este compuesto tuvo una actividad 'A' en el ensayo de polarizacin de fluorescencia de Hsp90.
Ejemplo 76A
El compuesto siguiente est disponible comercialmente (lnterbioscreen) y tuvo una actividad 'B' en el ensayo de
polarizacin de fluorescencia:
20
Ejemplo
MH+
Estructura
76A
343
Los compuestos siguientes se produjeron segn el Ejemplo 76:
Ejemplo
Estructura
76B
57
MH+
CI50 de Hsp90
389
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N/\
~O
76C
458
o
Ejemplo 77
Preparacin de etilamida de cido 5-(5-terc-butil-2,4-dihidroxi-fenil)-4-(4-morfolin-4-ilmetil-fenil)-isoxazol-3-carboxlico
HO
OH
NH
\
5
Esquema de Reaccin:
~-
HO)lAOH
~"JCl"..
A OH
HO
snO,
-
~
B~"
o
sno
~o -~Oo
\
\
rO
N~
08n O-N
OSn O-N
NH
BnoM~~
lA
0-
?"
1.
OSn O-N
NH
\
Etapa 1
1-( 5-terc-Butil-2,4-d ihidroxi-fenil)-etanona
~
'oU
O
58
~O
,~")l;l,,n_
OSn
SnO
/6
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Se aadi cido sulfrico (4 mi, 75 mmol) a una suspensin de 2,4-dihidroxiacetofenona (22,8 g, 150 mmol) en una
mezcla de 2-metil-2-propanol (35 g, 470 mmol) y cido trifluoroactico (80 mi), bajo una atmsfera de nitrgeno. La
suspensin resultante se calent, a una temperatura del bao de aceite de 75 oC, durante -3 hrs para proporcionar
una disolucin roja plida. La disolucin resultante se dej enfriar y se verti en hielo/agua (350 mi), para
proporcionar un precipitado rosa plido. El slido se retir mediante filtracin y se lav con agua (600 mi) y hexano
(200 mi) para proporcionar un polvo rosa plido. Se sec a vaco (40 oC) para proporcionar 1-(5-terc-butil-2,4dihidroxi-fenil)-etanona en forma de un polvo naranja plido (28,8 g, 92%).
RM.N. (Cloroformo-d) 7,35 (s ArH) 6,05 (s ArH) 7,35 (m 2ArH) 2,35 (s 3CH3) 1,15 (s 9 CH3)
10
Etapa 2
1-(2,4-Bis-benciloxi-5-terc-butil-fenil)-etanona
BnO
15
20
25
OBn
Se aadi bromuro de bencilo (10 mi, 84 mmol) a una disolucin de la acetofenona (13,5 g, 65 mmol) en DMF (50
mi), se aadi carbonato potsico (20 g, 145 mmol) y la suspensin se agit, a temperatura ambiente, durante -4
hrs. La suspensin resultante se verti en agua (200 mi) para proporcionar un precipitado naranja plido. El slido se
retir mediante filtracin y se lav con agua. El slido se resuspendi en diclorometano (150 mi) y la disolucin se
lav con agua (2x100 mi) y disolucin acuosa saturada de cloruro sdico (100 mi). La disolucin se sec sobre
sulfato sdico anhidro y se concentr hasta un aceite rojo plido.
El aceite se resuspendi en 2-metil-2-propanol (100 mi) y se aadi terc-butxido potsico (7,5 g, 67 mmol), para
proporcionar un precipitado amarillo plido, se aadi bromuro de bencilo (8 mi, 67 mmol) y la mezcla se calent a
reflujo durante -1 hr. La suspensin resultante se dej enfriar y se verti en agua (250 mi), para proporcionar un
precipitado naranja plido. El slido se retir mediante filtracin y se lav con agua. El slido se resuspendi en
acetato de etilo (150 mi) y se lav con agua (2x200 mi) y disolucin acuosa saturada de cloruro sdico (100 min). La
disolucin se sec sobre sulfato sdico anhidro y se concentr hasta un semi-slido naranja, y la trituracin con
metanol proporcion un slido rosa plido. El slido se filtr y se sec a vaco (40 oC), para proporcionar 1-(2,4-bisbenciloxi-5-terc-butil-fenil)-etanona en forma de un polvo rosa plido (9,1 g, 36%).
RM.N. (Cloroformo-d) 7,65 (s ArH) 7,25-7,15 (m 10ArH) 6,35 (s ArH) 4,95 (s 2CH2) 4,9 (s 2 CH2) 2,4 (s 3CH3) 1,2 (s
9CM)
30
Etapa 3
ster etlico de cido 4-(2,4-bis-benciloxi-5-terc-butil-fenil)-2-hidroxi-4-oxo-but-2-enoico
35
40
Se aadi etxido sdico (2,8 g, 41 mmol) a una suspensin de la 1-(2,4-bis-benciloxi-5-terc-butil-fenil)-etanona (7,8

g, 20 mmol) en etanol (40 mi). Se aadi oxalato de dietilo (4 mi, 29,5 mmol) y la suspensin resultante se calent a
reflujo durante -2 hrs para proporcionar una disolucin roja plida. La disolucin se dej enfriar y se verti en agua
(200 mi), la mezcla se acidific con cido clorhdrico (50 mi, 1 M) Y se extrajo con diclorometano (150 mi). Los
extractos se lavaron con agua (2x200 mi) y disolucin acuosa saturada de cloruro sdico (100 mi). La disolucin se
sec sobre sulfato sdico anhidro y se concentr hasta una goma amarilla. La trituracin con hexano proporcion un
slido amarillo. El slido se filtr y se lav con hexano y se sec a vaco (40 oC), para proporcionar ster etlico de
cido 4-(2,4-bis-benciloxi-5-terc-butil-fenil)-2-hidroxi-4-oxo-but-2-enoico en forma de un polvo amarillo (9,1 g, 93%).
RM.N. (Cloroformo-d) 8,0 (s ArH) 7,5-7,35 (m 11ArH) 6,6 (s ArH) 5,2 (s 2CH2) 5,15 (s 2 CH2) 4,3 (q J 7,1 Hz 2 CH2)
1,4 (s 9 CM) 1,25 (t J 7,1 Hz 3CH3)
Etapa 4
59
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16-11-2012

ster etlico de cido 5-(2,4-bis-benciloxi-5-terc-butil-fenil)-isoxazol-3-carboxlico
BnO
10
Se aadi hidrocloruro de hidroxilamina (3,6 g, 52 mmol) a una disolucin de ster etlico de cido 4-(2,4-bisbenciloxi-5-terc-butil-fenil)-2-hidroxi-4-oxo-but-2-enoico (9,0 g, 18,5 mmol) en etanol (75 mi), y la suspensin se
calent a reflujo durante -4 hrs. La disolucin resultante se dej enfriar y se verti en agua (200 mi) para
proporcionar un precipitado blanquecino. El slido se filtr y se resuspendi en diclorometano (150 mi). La disolucin
se lav con agua (150 mi) y disolucin acuosa saturada de cloruro sdico (50 mi). La disolucin se sec sobre
sulfato sdico anhidro y se concentr hasta un slido blanquecino. El slido se lav con hexano y se sec a vaco
(40 oC), para proporcionar ster etlico de cido 5-(2,4-bis-benciloxi-5-terc-butil-fenil)-isoxazol-3-carboxlico en forma
de un polvo marrn plido (8,0 g, 89%).
R.M.N. (Cloroformo-d) 7,85 (s ArH) 7,4-7,25 (m 10ArH) 6,9 (s ArH) 6,5 (s ArH) 5,1 (s 2CH2) 5,0 (s 2 CH2) 4,35 (q J
7,1 Hz2CM) 1,4 (s 9 CH3) 1,35(tJ7,1 Hz3CH3)
Etapa 5
15
Etilamida de cido 5-(2,4-bis-benciloxi-5-terc-butil-fenil)-isoxazol-3-carboxlico
BnO
NH
"
20
Se aadi ster etlico de cido 5-(2,4-bis-benciloxi-5-terc-butil-fenil)-isoxazol-3-carboxlico (10,0 g, 20,6 mmol) a una

disolucin de etilamina en metanol (60 mi, 2,0 M), Y la suspensin se calent, a una temperatura del bao de aceite
75 oC, durante -2 hrs. La disolucin resultante se dej enfriar y se concentr hasta un aceite marrn plido, se
aadi diclorometano (150 mi) y la disolucin se lav con agua (100 mi) y disolucin acuosa saturada de cloruro
sdico (75 mi). La disolucin se sec sobre sulfato sdico anhidro y se concentr hasta un aceite marrn, que se
solidific en reposo (9,9 g, -cuant.).
25
R.M.N. (Cloroformo-d) 7,8 (s ArH) 7,4-7,2 (m 10ArH) 7,0 (s ArH) 6,75 (t ancho J 5,4 Hz NH) 6,5 (s ArH) 5,1 (s 2CM)
5,0 (s 2 CM) 3,4 (dq J 5,4 Hz, 7,1 Hz 2 CH2) 1,35 (s 9 CH3) 1,15 (t J 7,1 Hz 3CM)
Etapa 6
Etilamida de cido 5-(2,4-bis-benciloxi-5-terc-butil-fenil)-4-yodo-isoxazo1-3-carboxlico
BnO
NH
60
"
E04709273
16-11-2012

10
Se aadi N-yodosuccinimida (9,0 g, 40 mmol) a una suspensin de etilamida de cido 5-(2,4-bis-benciloxi-5-tercbutil-fenil)-isoxazol-3-carboxlico (9,9 g, 20,4 mmol) en acetonitrilo (60 mi). Se aadi nitrato de cerio y amonio (0,25
g, 0,46 mmol) y la suspensin se agit durante -18 hrs. La suspensin resultante se concentr, y el residuo se
resuspendi en diclorometano (125 mi). La disolucin resultante se lav con una disolucin acuosa de metabisulfito
sdico (2x100 mi, 5%), agua (100 mi) y disolucin acuosa saturada de cloruro sdico (100 mi). La disolucin se sec
sobre sulfato sdico anhidro y se concentr hasta una goma roja plida. La trituracin con etanol (25 mi) proporcion
un slido blanquecino, el slido se retir mediante filtracin y se lav con etanol. Se sec a vaco (40 oC), para
proporcionar etilamida de cido 5-(2,4-bis-benciloxi-5-terc-butil-fenil)-4-yodo-isoxazol-3-carboxlico en forma de un
polvo blanquecino (7,75 g, 62%).
R.M.N. (Cloroformo-d) 7,45-7,25 (m 11ArH) 6,8 (t ancho J 5,4 Hz NH) 6,6 (s ArH) 5,05 (s 4CH2) 3,5 (dq J 5,4 Hz, 7,1
Hz 2 CH2) 1,35 (s 9 CH3) 1,2 (t J 7,1 Hz 3CH3)
Etapa 7
Etilamida de cido 5-(2,4-bis-benciloxi-5-terc-butil-fenil)-4-(4-formil-fenil)-isoxazol-3-carboxlico
BnO
NH
15
20
Se aadi una disolucin acuosa de fosfato potsico (25 mi, 1,2 M) a una disolucin de etilamida de cido 5-(2,4-bisbenciloxi-5-terc-butil-fenil)-4-yodo-isoxazol-3-carboxlico (6,1 g, 10 mmol) y cido 4-formilfenil bornico (2,35 g, 15,7
mmol) en 1,4-dioxano (75 mi), bajo una atmsfera de nitrgeno. Se aadi diclorobis(tri-o-tolil fosfina)paladio(ll)
(cat.) y la mezcla se calent, a una temperatura del bao de aceite de 100 oC, durante -1 hr. La mezcla se dej
enfriar, y la capa acuosa se separ y se extrajo con acetato de etilo (100 mi). Las capas orgnicas combinadas se
concentraron para proporcionar una goma marrn plida.
El producto bruto se purific mediante cromatografa en columna, slice (600 mi), eluyendo con acetato de etilo/
hexano (1 :3), para proporcionar etilamida de cido 5-(2,4-bis-benciloxi-5-terc-butil-fenil)-4-(4-formil-fenil)-isoxazol-3carboxlico en forma de una espuma amarilla plida (5,18 g, 88%).
25
R.M.N. (Cloroformo-d) 9,75 (s CHO) 7,5 (d J 6,9 Hz 2 ArH) 7,2 (d J 6,9 Hz 2 ArH) 7,15-7,0 (m 8ArH) 6,8 (m 2 ArH)
6,65 (t ancho J 5,4 Hz NH) 6,2 (s ArH) 4,8 (s 2CH2) 4,5 (s 2 CH2) 3,2 (dq J 5,4 Hz, 7,1 Hz 2 CH2) 1,1 (s 9 CM) 1,05 (t
J 7.Hz 3CH3)
Etapa 8
30
Etilamida de cido 5-(2,4-bis-benciloxi-5-terc-butil-fenil)-4-(4-morfolin-4-ilmetilfenil)-isoxazol-3-carboxlico
BnO
NH
Se aadi cianoborohidruro sdico (65 mg, 1,03 mmol) a una disolucin de etilamida de cido 5-(2,4-bis-benciloxi-5terc-butil-fenil)-4-(4-formil-fenil)-isoxazol-3-carboxlico (125 mg, 0,21 mmol), morfolina (50 JI, 0,57 mmol) y cido
61

actico (cat.) en metanol (4 mi), y la disolucin se agit durante -72 hrs. Se aadi diclorometano (50 mi) y la
disolucin se lav con agua (2x50 mi) y disolucin acuosa saturada de cloruro sdico (50 mi). La disolucin se sec
sobre sulfato sdico anhidro y se concentr hasta una goma incolora.
5
El producto bruto se purific mediante cromatografa en columna, slice (20 g), eluyendo con acetato de etilo/ hexano
(1: 1), para proporcionar etilamida de cido 5-(2,4-bis-benciloxi-5-terc-butil-fenil)-4-(4-morfolin-4-ilmetil-fenil)-isoxazol3-carboxlico en forma de un aceite incoloro (35 mg, 25%).
R.M.N. (Cloroformo-d) 7,35-7,05 (m 15ArH) 6,7 (t ancho J 5,4 Hz NH) 6,4 (s ArH) 4,9 (s 2CH2) 4,75 (s 2 CH2) 3,6 (t J
4,5 Hz 4 CM) 3, (s 2 CH2) 3,35 (dq J 5,4 Hz, 7,1 Hz 2 CH2) 2,35 (s ancho 4 CH2) 1,15 (t J 7,1 Hz 3CH3) 1,1 (s 9 CH3)
10
Etapa 9
Etilamida de cido 5-(5-terc-butil-2,4-dihidroxi-fenil)-4-(4-morfolin-4-ilmetil-fenil)-isoxazol-3-carboxlico
HO
OH
NH
\
15
Se aadi una disolucin de tricloruro de boro (1 mi, 1,0 M en diclorometano) a una disolucin de etilamida de cido
5-(2,4-bis-benciloxi-5-terc-butil-fenil)-4-(4-morfolin-4-ilmetil-fenil)-isoxazol-3-carboxlico (35 mg, 0,05 mmol) en
diclorometano (1 mi) a -20 oC (hielo/metanol), bajo una atmsfera de nitrgeno. La disolucin resultante se agit a O
oC (hielo/agua) durante -90 mins. Se aadi metanol (2 mi) y la disolucin se concentr hasta una goma marrn.
El producto bruto se purific mediante HPLC preparativa, para proporcionar etilamida de cido 5-(5-terc-butil-2,4dihidroxi-fenil)-4-(4-morfolin-4-ilmetil-fenil)-isoxazol-3-carboxlico en forma de un polvo blanco (sal de formiato) (21
mg,75%).
20
R.M.N. (DMSO-d6) 8,8 (t J 5,6 Hz NH) 7,25 (d J 7,2 Hz 2ArH) 7,15 (d J 7,2 Hz 2ArH) 6,7 (s ArH) 6,45 (s ArH) 3,45 (s
ancho 4 CH2) 3,2 (dq J 5,6 Hz, 7,2 Hz 2 CH2) 2,3 (s ancho 4 CH2) 1,1 (s 9 CH3) 1,05 (t J 7,2 Hz 3CH3)
De una manera similar a la preparacin del compuesto del Ejemplo 77, se prepararon los Ejemplos 77a-f.
25
Ejemplo
HO
77a
M{)
Estructura
MH+
CI50 de
Hsp90
480
OH
0:1
~ ~
-...::::
lb
OH
,;o-
0-':
o
NH
62

77b
HO
OH
466
478
493
399
411
NH
NJ
HO
77e
OH
NH
\
HO
77d
OH
NH
Ha
77e
OH
NH
\
"-
Ha
77f
OH
NH
\
Ejemplo 78
Preparacin de etilamida de cido 5-(2,4-dihidroxi-5-isopropilfenil)-4-(4-morfolin-4-ilmetilfenil)-isoxazol-3-earboxlieo
63

Esquema de Reaccin
X
y
O
HO .....
K,CO.
BnBr.
MeCN
BnO
1.<:'
NaOEt
EtOH
(Et02C)2
OBn
Bno.....x
~COzEt
OBn
OBn o
NIS. CAN
-MeCN
'N
h
o
OH
"
0-'"
'N
CO~t
Pd(PP~hClz
NazCO. 1 M
DMF
OH
.<:'
Bno~
---
BnO
0-'"
'N
"'"
OH
'"'," "
BnO
~~~H.HCI
Bno~
NHEt
OE~
BF.
AcOH
XOH
OH
OBn
Bno~
--~ "
BnO
Hz. Pd-C
EtOH
"'"
OBn
1 .<:'
EtNH2
MeOH
tQ
1.<:'
OH
BnBr.
K,CO,
DMF
PPh,PMeBr
nBuU. THF BnO
"'"
~o
NHEt
(HOl,sN
O
r-\
NaCNBH AcOH BnO

morfolina, MeOH
N
O
\..J
BCI.
DCM
r-\
\..J
CONHEt
Etapa 1
1-(2,4-Bis-benciloxi-fenil)-etanona
Bno,Xo
OBn
10
Se aadi carbonato potsico (2,5 eq) a una disolucin de 2',4'-dihidroxiacetofenona (1 eq) en acetonitrilo (400 mL),
y la suspensin se agit a temperatura ambiente. Se aadi bromuro de bencilo (2,5 eq) gota a gota a lo largo de 10
minutos, y la mezcla se calent a reflujo durante 18 horas. La mezcla se enfri y se evapor a vaco para
proporcionar una suspensin espesa. La suspensin espesa se reparti entre agua y acetato de etilo, y las capas se
separaron. La capa acuosa se extrajo adicionalmente con diclorometano, y los extractos orgnicos se combinaron,
se secaron (MgS04) y se evaporaron a vaco. El producto se tritur con hexano, se filtr y se lav con hexano fro y
se sec a vaco a 45 oC para proporcionar 1-(2,4-bis-benciloxi-fenil)-etanona en forma de un polvo blanco.
Tiempo de retencin en LC 2,704 min [M+Hf 333,3
15
Etapa 2
2,4-Bis-benciloxi-1-isopropenil-benceno
64

Bno,X
y
OBn
10
Se suspendi bromuro de metiltrifenilfosfonio (1,1 eq) en THF ano y se enfri a O oC bajo nitrgeno. Se aadi nbutillitio 1,6 M en hexanos (1,1 eq) gota a gota, y se agit durante 30 minutos. Se disolvi 1-(2,4-bis-benciloxi-fenil)etanona (1 eq) en THF ano y se aadi gota a gota a la suspensin. Cuando se complet la adicin, se retir el bao
de hielo y la mezcla de reaccin se agit a temperatura ambiente bajo nitrgeno durante la noche. Se aadi
metanol a la mezcla de reaccin, y la disolucin resultante se evapor a vaco. Se aadi hexano al aceite resultante
y se calent a reflujo durante 30 minutos, y despus se filtr a travs de Celite. El licor se evapor a vaco para
proporcionar un aceite que se purific mediante cromatografa en columna, eluyendo con un 30% de EtOAc en
hexano, para proporcionar 2,4-bis-benciloxi-1-isopropenil-benceno. Tiempo de retencin Rf 0,722, 3:1 Hexano:
EtOAc.
Etapa 3
4-lsopropil-benceno-1,3-diol
:COH
y
OH
15
2,4-Bis-benciloxi-1-isopropenil-benceno se resuspendi en disolucin en etanol y se aadi un 10% de paladio sobre

carbono, que se haba humedecido previamente con agua. Se introdujo hidrgeno en el matraz y la mezcla se dej
con agitacin durante 16 horas. El catalizador se filtr de la mezcla de reaccin, mediante un mtodo adecuado, y el
licor se concentr a vaco, para proporcionar 4-isopropil-benceno-1 ,3-diol en forma de un slido cristalino blanco.
Etapa 4
20
1-(2,4-Dih idroxi-5-isopropil-fenil)-etanona
:COH
yy
O
25
OH
Se resuspendi 4-isopropil-benceno-1 ,3-diol (1 eq) en BF 3.OEb (6 eq) y se aadi cido actico (2 eq). La disolucin
se calent durante 16 horas a 90 oC y despus se dej enfriar a temperatura ambiente. La disolucin se aadi gota
a gota a un 10% de NaOAc (ac.) y se dej reposar durante 4 horas, antes de ser extrada con EtOAc. Las fases
orgnicas se combinaron y se lavaron con NaHC03 sat. (ac.), despus se secaron sobre MgS04, se filtraron y se
concentraron a vaco. El aceite residual se purific mediante cromatografa en columna, eluyendo con diclorometano,
para proporcionar 1-(2,4-Dihidroxi-5-isopropil-fenil)-etanona en forma de un slido blanco.
Etapa 5
30
1-(2,4-Bis-benciloxi-5-isopropil-fenil)-etanona
65

::Cosn
Yl(
o
OSn
Se disolvi 1-(2,4-dihidroxi-5-isopropil-fenil)-etanona (1 eq) en DMF y se aadi carbonato potsico (2,2 eq) y

despus bromuro de bencilo (2,2 eq). La suspensin se calent, con agitacin a 150 oC, bajo nitrgeno, durante 16
hrs. La disolucin se enfri a temperatura ambiente y la mezcla se verti en HCI 1 M (ac.) y despus se extrajo en
acetato de etilo. Las fases orgnicas se combinaron y se lavaron de nuevo con HCI 1 M (ac.) y despus cinco veces
con una disolucin de salmuera. La fase orgnica se sec sobre MgS04, se filtr y se concentr a vaco para
proporcionar un slido, que se purific mediante trituracin con ter dietlico: hexano (1 :1) para proporcionar 1-(2,4bis-benci loxi -5-iso pro pi 1-feni I)-etanona.
10
Etapa 6
ster etlico de cido 4-(2,4-bis-benciloxi-5-isopropil-fenil)-2-hidroxi-4-oxo-but-2-enoico
SnO
15
20
Se aadi sodio (2,8 eq) a etanol bajo nitrgeno a temperatura ambiente y se agit durante 25 minutos para generar
etxido sdico. Se disolvi 1-(2,4-bis-benciloxi-5-isopropil-fenil)-etanona (1 eq) en ms etanol y se aadi a la
disolucin de etxido sdico. Se aadi oxalato de dietilo (1,64 eq) y la mezcla de reaccin se calent a reflujo
durante 4 horas. La mezcla se dej enfriar a temperatura ambiente y se aadi suficiente HCI 1 M (ac.) para
acidificar la mezcla de reaccin, que se concentr despus a vaco. La goma resultante se reparti entre
diclorometano y salmuera, y la fase orgnica se sec sobre MgS0 4, se filtr y se evapor a vaco para proporcionar
ster etlico de cido 4-(2,4-bis-benciloxi-5-isopropil-fenil)-2-hidroxi-4-oxo-but-2-enoico en forma de una goma
amarilla.
Tiempo de retencin en LC 3,057 min [M+Hf 475
Etapa 7
ster etlico de cido 5-(2,4-bis-benciloxi-5-isopropil-fenil)-isoxazol-3-carboxlico
25
30
Se disolvi ster etlico de cido 4-(2,4-bis-benciloxi-5-isopropil-fenil)-2-hidroxi-4-oxo-but-2-enoico (1 eq) en etanol

con agitacin. Se aadi hidrocloruro de hidroxilamina (1,2 eq) y la disolucin se calent a reflujo durante 4 horas
bajo una atmsfera de nitrgeno. La mezcla de reaccin se enfri a temperatura ambiente y se concentr a vaco. El
residuo se reparti entre salmuera y diclorometano. La fase orgnica se sec sobre MgS04, se filtr y se concentr a
vaco para proporcionar ster etlico de cido 5-(2,4-bis-benciloxi-5-isopropil-fenil)-isoxazol-3-carboxlico en forma de
un slido.
Tiempo de retencin en LC 3,059 min [M+Hf 472
Etapa 8
Etilamida de cido 5-(2,4-bis-benciloxi-5-isopropil-fenil)-isoxazol-3-carboxlico
66

NHEt
Se disolvi ster etlico de cido 5-(2,4-bis-benciloxi-5-isopropil-fenil)-isoxazol-3-carboxlico en un exceso de

etilamina 2 M en metanol y se calent en el microondas Smith Synthesiser a 120 oC durante 600 segundos. La
disolucin se concentr a vaco para proporcionar un slido que se purific mediante trituracin en hexano, para
proporcionar etilamida de cido 5-(2,4-bis-benciloxi-5-isopropil-fenil)-isoxazol-3-carboxlico.
Etapa 9
Etilamida de cido 5-(2,4-bis-benciloxi-5-isopropil-fenil)-4-yodo-isoxazol-3-carboxlico
NHEt
o
10
15
Se disolvi etilamida de cido 5-(2,4-bis-benciloxi-5-isopropil-fenil)-isoxazol-3-carboxlico (1 eq) en acetonitrilo an., y

se aadi N-yodosuccinimida (2,0 eq), seguido de nitrato de cerio y amonio (0,05 eq), y la disolucin se agit a
temperatura ambiente durante la noche. La mezcla de reaccin se concentr a vaco y la goma resultante se reparti
entre acetato de etilo y salmuera. La fase orgnica se sec sobre MgS04, se filtr y se concentr a vaco. El residuo
se purific mediante cromatografa en columna, eluyendo con 9:1 de hexano: acetato de etilo, para proporcionar
etilamida de cido 5-(2,4-bis-benciloxi-5-isopropil-fenil)-4-yodo-isoxazol-3-carboxlico en forma de un aceite. Tiempo
de retencin en LC 2,975 min [M+Hf 597,2
Etapa 10
Etilamida de cido 5-(2,4-bis-benciloxi-5-isopropil-fenil)-4-yodo-isoxazol-3-carboxlico
20
25
Se disolvi etilamida de cido 5-(2,4-bis-benciloxi-5-isopropil-fenil)-4-yodo-isoxazol-3-carboxlico (1 eq) en DMF ano

Se aadi Na2C03 1 M (ac.), seguido de cido 4-formilfenilbornico (2 eq) y despus PdCb(PPh3)2 cataltico. Se hizo
burbujear nitrgeno a travs de la disolucin durante diez minutos a temperatura ambiente, tras lo cual la
temperatura se elev a 80 oC bajo una atmsfera de nitrgeno, durante 15 minutos. La mezcla de reaccin se dej
enfriar a temperatura ambiente y la mezcla de reaccin se diluy con acetato de etilo. Esta disolucin se lav con
salmuera, despus se sec sobre MgS0 4, se filtr y se concentr a vaco para proporcionar un aceite. Se purific
mediante cromatografa en columna, eluyendo con un 10% de EtOAc en hexano, para proporcionar etilamida de
cido 5-(2,4-bis-benciloxi-5-isopropil-fenil)-4-yodo-isoxazol-3-carboxlico en forma de un slido blanco.
Etapa 11
67

Etilamida de cido 5-(2,4-bis-benciloxi-5-isopropil-fenil)-4-(4-morfolin-4-ilmetil-fenil)-isoxazol-3-carboxlico
/\
BnO
10
"---1
Se disolvi etilamida de cido 5-(2,4-bis-benciloxi-5-isopropil-fenil)-4-yodo-isoxazol-3-carboxlico (1 eq) en metanol y

se aadieron tamices moleculares de 3 A en polvo. Se aadi morfolina (2 eq), seguido de cianoborohidruro sdico
(2 eq). Se aadi cido actico (5 eq) gota a gota y la suspensin se agit bajo nitrgeno a temperatura ambiente
durante 16 horas. La mezcla de reaccin se diluy con DCM y se lav con NaHC03 sat. (ac.). La fase orgnica se
sec sobre MgS04, se filtr y se concentr a vaco. La goma resultante se purific mediante cromatografa rpida,
eluyendo con 1% de MeOH en DCM para proporcionar etilamida de cido 5-(2,4-bis-benciloxi-5-isopropil-fenil)-4-(4morfolin-4-ilmetil-fenil)-isoxazol-3-carboxlico en forma de un aceite incoloro.
Tiempo de retencin en LC 4,42 min [M+Hf 646,2 mtodo 8
Etapa 12
/\
HO
15
"---1
Se disolvi etilamida de cido 5-(2,4-bis-benciloxi-5-isopropil-fenil)-4-(4-morfolin-4-ilmetil-fenil)-isoxazol-3-carboxlico

(1 eq) en DCM ano y, bajo una atmsfera de nitrgeno, se enfri a O oC. Se aadi 8Cb 1 M en DCM gota a gota y la
disolucin se agit en estas condiciones durante 30 minutos. Se aadi metanol (2 mi) y la mezcla de reaccin se
concentr a vaco. La purificacin de la muestra mediante LC/MS preparativa proporcion etilamida de cido 5-(2,4dihidroxi-5-isopropil-fenil)-4-(4-morfolin-4-ilmetil-feni1)-isoxazol-3-carboxlico en forma de un slido blanco.
20
De una manera similar a la preparacin del compuesto del Ejemplo 78, se prepararon los Ejemplos 78a-u.
CI50 de
Ejemplo
MH+
Estructura
Hsp90
NJ
78a
464
68

78b
452
479
424
439
680
o
1\
HO
N-
'-1
78c
O
N
H
78d
>-
N
H
78e
o
H~S
78f
H~N~
o
~
HO
~ ~
H
HN"i,NH
O'N"
-../
1\
N
o
'-1
78g
Pro-frmaco
636
vase el
Ejemplo 78v
69

Pro-frmaco
550
78h
vase el
Ejemplo 78v
N
H
78i
478
464
480
452
):J
N
H
78j
H
78k
Y-
N
H
781
70

78m
HO
OH
454
495
465
479
NH
\.
H
N",--",
N~
.-1
~
HO
78n
OH
78p
NH
\.
HO
OH
NH
\.
H
HO
aH
78q
OH
NH
\.
Pro-frmaco
78r
608
NH
71
vase el
Ejemplo 78v

78s
78t
78u
HO
HO
HO
:?"
OH
Ejemplo
480
493
466
MH+
CI50 de
Hsp90
492
O-N
NH
-\
Estructura
78w
HN-(
72

N
H
78y
478
78z
466
78aa
514
478
500
HN-(
N~
78ab
HO
OH
NH
F
Nr::fF
HO
78ac
NH
73

~N-\
H
N
H
78ad
HO
495
521
479
481
481
NH
9t
H
78ae
NH 2
HO
NH
N~NH2
HO
78af
NH
~N-
~
78ag
HO
NH
~N~
H
N
H
78ah
HO
NH
74

"'o
N~
Pro-frmaco
78ai
608
vase el
Ejemplo 78v
NH
\
Ejemplo 78v
ster dietlico - ster 4-cloro-5-(dietoxi-fosforiloxi)-2-[3-etilcarbamoil-4-(4-metoxi-fenil)-isoxazol-5-il]-fenlico

de cido fosfrico
'"
CONHEI
10
A una mezcla slida de etilamida de cido 5-(5-cloro-2,4-dihidroxi-fenil)-4-(4-metoxifenil)-isoxazol-3-carboxlico (11

mg, 2,1 x 10-2 mmol) y MgO (25 mg) en un vial pequeo, se le aadieron 10 gotas de clorofosfato de dietilo. La
mezcla resultante se calent y se agit a 70 oC durante una hora, y el progreso de la reaccin se monitoriz
mediante CCF. Cuando se enfri, se aadi MeOH (1 mi) y DCM (1 mi). Tras la filtracin, los disolventes se
evaporaron y se obtuvo un aceite amarillo. El ster de di-fosforilo se separ mediante CCF preparativa, lo que
produjo 4 mg. R = 0,35; 1H RMN = 7,95 (1 H, s, ancho); 7,74 (1 H, s); 7,55 (1 H, s); 7,32 (2H, d, J = 9,0 Hz); 6,90
(2H, d, J = 9,0 Hz); 4,30 (8H, q); 3,80 (3H, s); 3,40 (2H, q); 1,35 (12H, t) Y 1,25 (3H, t). LCMS: (M+1f = 661,1 (RT =
7,60 min.)
Ejemplo 79
15
Preparacin de etilamida de cido 5-(2,4-dihidroxi-5-isobutil-fenil)-4-(4-morfolin-4-ilmetiIfenil)-isoxazol-3-carboxlico
NH
OH
"
Esquema de Reaccin
75

HOO{
,HO
OH
,HO{_.
1f!rO
Y{
OH
snO
SnO
OH
SnO
OSn O
Sno
OSn
NH
"
SnO
OSn
~H
NH
\.
Etapa 1
OSn
NH
"
1-(2,4-Dihidroxi-fenil)-2-metil-propan-1-ona
HO
OH
5
10
Se resuspendi resorcinol (1 eq) en BF3.0Eb (6 eq) y se aadi cido isobutrico (1 eq). La disolucin se calent
durante 1,5 horas a 90 oC y despus se dej enfriar a temperatura ambiente. La disolucin se aadi gota a gota a
un 10% de NaOAc (ac.) y se dej reposar durante 4 horas, antes de ser extrada con EtOAc. Las fases orgnicas se
combinaron y se lavaron con NaHC03 sat. (ac.), despus se secaron sobre sulfato magnsico, se filtraron y se
concentraron a vaco para proporcionar 1-(2,4-dihidroxi-fenil)-2-metil-propan-1-ona en forma de un aceite rojo que se
us sin purificacin adicional.
Etapa 2
4-lsobutil-benceno-1,3-diol
HO
OH
15
Se aadi cloroformiato de etilo (3 eq) lentamente a una disolucin enfriada (O oC) de 1-(2,4-dihidroxi-fenil)-2-metilpropan-1-ona (1 eq) y trietilamina (3 eq) en THF. La mezcla se calent a temperatura ambiente y se agit durante
tres horas antes de filtrarla, y el slido se lav con THF fro. Los filtrados combinados se enfriaron a O oC y se aadi
lentamente borohidruro sdico (4 eq) en un volumen de agua igual al de los filtrados de THF. La mezcla se calent a
temperatura ambiente, se agit durante tres horas y se diluy con agua. La mezcla se extrajo dos veces con ter
76

dietlico, los extractos combinados se concentraron hasta sequedad y se resuspendieron en una disolucin acuosa
de hidrxido sdico del 10% (4 eq). Despus de someterla a reflujo durante 90 minutos, la mezcla se enfri, se
acidific con HCI ac. 5 M Y se extrajo dos veces con ter dietlico. Los extractos orgnicos se secaron sobre sulfato
magnsico, se filtraron y se concentraron hasta sequedad para proporcionar 4-isobutil-benceno-1 ,3-diol en forma de
un aceite turbio, que se us sin purificacin adicional.
RMN coherente con la estructura.
Ejemplo 3:
1-(2,4-Dihid roxi-5-isobutil-fenil)-etanona
HO
o
10
15
Se resuspendi 4-isobutil-benceno-1 ,3-diol (1 eq) en BF3.0Eb (6 eq) y se aadi cido actico (2 eq). La disolucin
se calent durante 16 horas a 90 oC y despus se dej enfriar a temperatura ambiente. La disolucin se aadi gota
a gota a un 10% de NaOAc (ac.) y se dej reposar durante 4 horas, antes de extraerla dos veces con ter dietlico.
Las fases orgnicas se combinaron y se lavaron con NaHC03 sat. (ac.), despus se secaron sobre sulfato
magnsico, se filtraron y se concentraron a vaco para proporcionar 1-(2,4-dihidroxi-5-isobutil-fenil)-etanona, que se
us sin purificacin adicional.
RMN coherente con la estructura.
Etapa 4
1-(2,4-Bis-benciloxi-5-isobutil-fenil)-etanona
BnO
o
20
25
Se disolvi 1-(2,4-dihidroxi-5-isobutil-fenil)-etanona (1 eq) en DMF y se aadi carbonato potsico (4,4 eq) y despus
bromuro de bencilo (4,4 eq). La suspensin se calent, con agitacin a 150 oC bajo nitrgeno durante 16 hrs. La
disolucin se enfri a temperatura ambiente, se filtr y se concentr hasta sequedad. Este slido se purific
mediante cromatografa en columna (slice, hexanos:acetato de etilo 4:1) y despus se re-cristaliz a partir de
acetato de etilo:hexanos para proporcionar 1-(2,4-bis-benciloxi-5-isobutil-fenil)-etanona en forma de cristales
incoloros.
Etapa 5
ster etlico de cido 4-(2,4-bis-benciloxi-5-isobutil-fenil)-2,4-dioxo-butrico
BnO
O
OBn O
30
Se aadi sodio (3 eq) a etanol bajo nitrgeno a temperatura ambiente y se agit hasta que se disolvi
77

completamente. Se aadi 1-(2,4-bis-benciloxi-5-isobutilfenil)-etanona (1 eq), seguido de oxalato de dietilo (1,5 eq), y

la mezcla de reaccin se calent a reflujo durante 4 horas. La mezcla se dej enfriar a temperatura ambiente y se
acidific con Hel 2 M (ac.) para proporcionar un precipitado amarillo de ster etlico de cido 4-(2,4-bis-benciloxi-5isobutil-fenil)-2,4-dioxo-butrico, que se obtuvo mediante filtracin.
5
Tiempo de retencin en Le 3,254 min [M+Hf 489,3

Etapa 6
ster etlico de cido 5-(2,4-bis-benciloxi-5-isobutil-fenil)-isoxazol-3-carboxlico
BnO
OBn
10
Se disolvi ster etlico de cido 4-(2,4-bis-benciloxi-5-isobutil-fenil)-2,4-dioxo-butrico (1 eq) en etanol con agitacin.

Se aadi hidrocloruro de hidroxilamina (1,2 eq) y la disolucin se calent a reflujo durante 2 horas. La mezcla de
reaccin se enfri a temperatura ambiente, para proporcionar un precipitado. Este precipitado se obtuvo mediante
filtracin para proporcionar ster etlico de cido 5-(2,4-bis-benciloxi-5-isobutilfenil)-isoxazol-3-carboxlico en forma
de un slido blanco.
15
Etapa 7
Etilamida de cido 5-(2,4-bis-benciloxi-5-isobutil-fenil)-isoxazol-3-carboxlico
BnO
OBn
20
NH
\.
Se disolvi ster etlico de cido 5-(2,4-bis-benciloxi-5-isobutil-fenil)-isoxazol-3-carboxlico en etilamina 2 M en

metanol (10 eq) y se calent en el microondas Smith Synthesiser a 120 e durante 600 segundos. La disolucin se
concentr a vaco para proporcionar etilamida de cido 5-(2,4-bis-benciloxi-5-isobutil-fenil)-isoxazol-3-carboxlico en
forma de un slido blanco que se us sin purificacin adicional.
Etapa 8
Etilamida de cido 5-(2,4-bis-benciloxi-5-isobutil-fenil)-4-yodo-isoxazol-3-carboxlico
BnO
OBn
25
NH
\.
Se disolvi etilamida de cido 5-(2,4-bis-benciloxi-5-isobutil-fenil)-isoxazol-3-carboxlico (1 eq) y N-yodosuccinimida

(2,0 eq), en acetonitrilo, se aadi nitrato de cerio y amonio (0,1 eq) y la disolucin se agit a temperatura ambiente
78

durante la noche. La mezcla de reaccin se concentr a vaco y la goma resultante se reparti entre acetato de etilo
y salmuera. La fase orgnica se sec sobre sulfato magnsico, se filtr y se concentr a vaco. El residuo se purific
mediante cromatografa en columna, eluyendo con 4:1 hexano: acetato de etilo, para proporcionar etilamida de cido
5-(2,4-bis-benciloxi-5-isobutilfenil)-4-yodo-isoxazol-3-carboxlico en forma de un aceite.
5

Etapa 9
Etilamida de cido 5-(2,4-bis-benciloxi-5-isobutil-fenil)-4-(4-formil-fenil)-isoxazol-3-carboxlico
OBn
10
15
NH
Se disolvi etilamida de cido 5-(2,4-bis-benciloxi-5-isobutil-fenil)-4-yodo-isoxazol-3-carboxlico (1 eq) en DMF y se

aadi Na2C03 1 M (ac.) (3 eq), seguido de cido 4-formilfenilbornico (2 eq) y PdCb(PPh3)2 cataltico. Se hizo
burbujear nitrgeno a travs de la disolucin durante diez minutos a temperatura ambiente, tras lo cual la
temperatura se elev a 80 oC bajo una atmsfera de nitrgeno, durante 2 horas. La mezcla de reaccin se dej
enfriar a temperatura ambiente, y la mezcla de reaccin se diluy con acetato de etilo. Esta disolucin se lav con
salmuera, despus se sec sobre sulfato magnsico, se filtr y se concentr a vaco para proporcionar un aceite que
se purific mediante cromatografa en columna, eluyendo con un 10% de EtOAc en hexano, para proporcionar
etilamida de cido 5-(2,4-bis-benciloxi-5-isobutil-fenil)-4-(4-formil-fenil)-isoxazol-3-carboxlico en forma de un slido
blanco.
Tiempo de retencin en LC 5,57 min [M+Hf 589,1 mtodo B
Etapa 10
20
Etilamida de cido 5-(2,4-bis-benciloxi-5-isobutil-fenil)-4-(4-morfolin-4-iImetilfenil)-isoxazol-3-carboxlico
OBn
25
NH
Se disolvi etilamida de cido 5-(2,4-bis-benciloxi-5-isobutil-fenil)-4-(4-formil-fenil)-isoxazol-3-carboxlico (1 eq) en

metanol y se aadieron tamices moleculares de 3 A en polvo. Se aadi morfolina (2 eq), seguido de cido actico
(5 eq). Despus de agitar durante 30 minutos, se aadi cianoborohidruro sdico (2 eq) por partes y la suspensin
se agit bajo nitrgeno a temperatura ambiente durante 16 horas. La mezcla de reaccin se filtr a travs de celite y
se concentr hasta sequedad. La cromatografa en columna, eluyendo con un 5% de MeOH en DCM, proporcion
etilamida de cido 5-(2,4-bis-benciloxi-5-isobutil-fenil)-4-(4-morfolin-4-ilmetilfenil)-isoxazol-3-carboxlico en forma de
un aceite incoloro.
Tiempo de retencin en LC 4,53 min [M+Hf 660,2 mtodo B
30
Etapa 11
Etilamida de cido 5-(2,4-dihidroxi-5-isobutil-fenil)-4-(4-morfolin-4-ilmetil-fenil)-isoxazol-3-carboxlico
79

NH
OH
Se disolvi etilamida de cido 5-(2,4-bis-benciloxi-5-isobutil-fenil)-4-(4-morfolin-4-ilmetil-fenil)-isoxazol-3-carboxlico

(1 eq) en DCM ano y bajo una atmsfera de nitrgeno se enfri a O oC. Se aadi 8Cb 1 M en DCM (9 eq) gota a
gota y la disolucin se agit durante 30 minutos. Se aadi metanol (2 mi) y la mezcla de reaccin se concentr a
vaco. La purificacin de la muestra mediante LC/MS preparativa proporcion etilamida de cido 5-(2,4-dihidroxi-5isobutil-fenil)-4-(4-morfolin-4-ilmetil-fenil)-isoxazol-3-carboxlico en forma de un slido blanco.
10
De una manera similar a la preparacin del compuesto del Ejemplo 79, se prepar el Ejemplo 80. La purificacin de
la muestra mediante LC/MS preparativa proporcion el compuesto en forma de un slido blanco
Ejemplo
Estructura
80
MH+
CI50 de
Hsp90
480
NH
OH
Ejemplo 81
N-[5-(5-Cloro-2,4-dihidroxi-fenil)-4-(4-fluoro-fenil)-isoxazol-3-ilmetil]-metanosulfonamida
HO
15
Ejemplo 82
N-[5-(5-Cloro-2,4-dihidroxi-fenil)-4-(4-fluoro-fenil)-isoxazol-3-ilmetil]-acetamida
Amida de cido 5-(2,4-bis-benciloxi-5-cloro-fenil)-4-(4-fluoro-fenil)-isoxazol-3-carboxlico
80

BnO
La amida de cido 5-(2,4-bis-benciloxi-5-cloro-fenil)-4-yodo-isoxazol-3-carboxlico (0,45 g, 0,80 mmol) se acopl de

manera cruzada a cido 4-fluorofenilbornico (0,17 g, 1,5 equiv.) mediante el uso de las condiciones estndar
descritas anteriormente. El producto bruto, un slido naranja (0,40 g), se llev a la siguiente etapa sin purificacin
adicional.
LCMS (LCO) tR =8,70, MS miz 529,1 [M+Hf
C-[5-(2,4-bis-benciloxi-5-cloro-fenil)-4-(4-fluoro-fenil)-isoxazol-3-il]-metilamina
BnO
10
A una disolucin de amida de cido 5-(2,4-bis-benciloxi-5-cloro-fenil)-4-(4-fluoro-fenil)-isoxazol-3-carboxlico (0,40 g,

0,76 mmol) en THF anhidro (20 mi) bajo argn se le aadi complejo Borano 1 M-THF (1 mi) y la disolucin se
someti a reflujo durante la noche. Despus de enfriar, la reaccin se par con metanol (10 mi) y el producto se
purific mediante el uso de una columna Isolute SPE Flash SCX-2 5 9 para proporcionar 0,30 9 (77% de
rendimiento) en forma de un polvo.
LCMS (LCO) tR = 7,54, MS miz 515,2 [M+Hf
HO
15
N-[5-(5-Cloro-2,4-dihidroxi-fenil)-4-(4-fluoro-fenil)-isoxazol-3-ilmetil]-metanosulfonamida
20
Se disolvi C-[5-(2,4-bis-benciloxi-5-cloro-fenil)-4-(4-fluoro-fenil)-isoxazol-3-il]-metilamina (100 mg, 0,19 mmol) en

DCM (3 mi) antes de la adicin de cloruro de metano sulfonilo (17 JI, 1,1 equiv.) y trietilamina (30 JI, 1,1 equiv.). La
disolucin se agit a temperatura ambiente durante la noche antes de evaporarla hasta sequedad a vaco, lo que
proporcion el producto bruto protegido con bencilo en forma de un residuo de color azul (90 mg). Este se
desprotegi mediante el uso del procedimiento estndar con tricloruro de boro descrito anteriormente y se purific
mediante CCF preparativa (10% de etanol en DCM), y la extraccin Soxhlet de la slice mediante ter proporcion el
compuesto puro en forma de un slido prcticamente incoloro (8 mg, 10% de rendimiento).
LCMS (LCO) tR = 6,65, MS miz 411 ,2 [M-H]-
25
4
OH (d -MeOH), 7,19 (2H, m, Ar-H), 7,04 (1H, s, Ar-H), 7,03 (2H, m, Ar-H), 6,34 (1H, s, Ar-H), 4,27 (2H, s, CH2NH),
2,81 (3H, s, S02CH3).
HO
81

N-[5-(5-Cloro-2,4-dihidroxi-fenil)-4-(4-fluoro-fenil)-isoxazol-3-ilmetil]-acetamida
A una disolucin de C-[5-(2,4-bis-benciloxi-5-cloro-fenil)-4-(4-fluoro-fenil)-isoxazol-3-il]-metilamina (100 mg, 0,19

mmol) en DCM se le aadi anhdrido actico (130 !JI, 7,0 equiv.) y trietilamina (81 !JI, 3,0 equiv.). La disolucin se
agit a temperatura ambiente hasta que se consumi la amina. El disolvente se elimin a vaco para proporcionar el
producto aceitoso bruto protegido con bencilo teido de amarillo. Este se desprotegi mediante el uso del
procedimiento estndar con tricloruro de boro descrito anteriormente, y se purific mediante CCF preparativa, y la
extraccin Soxhlet de la slice mediante ter proporcion el compuesto puro en forma de un slido incoloro (10 mg,
14% de rendimiento).
LCMS (LCQ) tR =6,57, MS miz 377,1 [M+Hf
10
OH (d -MeOH), 7,17 (2H, m, Ar-H), 7,01 (1H, s, Ar-H), 6,98 (2H, m, Ar-H), 6,32 (1H, s, Ar-H), 4,37 (2H, s, CH2NH),
1,77 (3H, s, COCH3).
Ejemplos 83, 84 Y 85
15
Etilamida de cido 5-(5-etil-4-hidroxi-2-metoxi-fenil)-4-(4-morfolin-4-ilmetilfenil)-isoxazol-3-carboxlico (83);

Etilamida de cido 5-(5-etil-2-hidroxi-4-metoxi-fenil)-4-(4-morfolin-4-ilmetil-fenil)isoxazol-3-carboxlico (84);
Etilamida de cido 5-(5-etil-2,4-dimetoxifenil)-4-(4-morfolin-4-ilmetil-fenil)-isoxazol-3-carboxlico (85)
20
25
A un matraz cargado con argn que contena etilamida de cido 5-(5-etil-2,4-dihidroxi-fenil)-4-(4-morfolin-4-ilmetilfenil)-isoxazol-3-carboxlico (25 mg, 0,055 mmol) y N,N-(Diisopropil)aminometilpoliestireno [PS-DIEA] (35 mg, 3,83
mmol/g, 2,4 equiv.) se le aadi DCM anhidro (2,3 mi) y metanol anhidro (0,25 mi). Con una agitacin suave, se
aadi (Trimetilsilil)diazometano 2 M en hexanos (28 !JI, 1,0 equiv.) y la disolucin se agit durante la noche a
temperatura ambiente. Se hizo burbujear argn a travs de la disolucin durante 10 mins, la resina se filtr, y los
compuestos voltiles se eliminaron a vaco. El residuo bruto se purific mediante HPLC semi-preparativa para
proporcionar etilamida de cido 5-(5-etil-4-hidroxi-2-metoxifenil)-4-(4-morfolin-4-ilmetil-fenil)-isoxazol-3-carboxlico
(83) (5,52 mg, 21 %), etilamida de cido 5-(5-etil-2-hidroxi-4-metoxi-fenil)-4-(4-morfolin-4-ilmetil-fenil)-isoxazol-3carboxlico (84) (1,14 mg, 4%), etilamida de cido 5-(5-etil-2,4-dimetoxi-fenil)-4-(4-morfolin-4-ilmetilfenil)-isoxazol-3carboxlico (1,46 mg, 5%) y el material de partida sin metilar.
83: LCMS (LCT) tR = 4,95, MS miz 466,4 [M+Hf
84: LCMS (LCT) tR = 5,14, MS miz 466,4 [M+Hf
(85): LCMS (LCT) tR = 5,45, MS miz 480,4 [M+Hf
30
Los datos de RMN confirmaron las asignaciones.

Ejemplo 86
5-( 5-Clo ro-2-h id roxi -fe n i 1)-4-(4-mo rfol i n-4-i Imeti I-fen i I)-isoxazo 1-3-carboxam ida de eti lo
Etapa 1
35
2-Benzoiloxi-5-cloro-benzoato de metilo
82

Una mezcla de 5-cloro-2-hidroxi-benzoato de metilo (2,5 g, 13,4 mmol), K2C03 (3,7 g, 26,8 mmol) y bromuro de
bencilo (2,98 g, 17,4 mmol) en acetona (30 mi) se someti a reflujo durante 12 horas. Despus de enfriar, se
evapor la acetona. Se aadi EtOAc (100 mi) y se filtr. La capa orgnica se lav despus con HCI1 M (1 x 80 mi),
salmuera (2 x 80 mi) y se sec con Na 2S04. Tras la filtracin y la evaporacin del disolvente, se obtuvo un semislido amarillo (3,2 g). 1H RMN (d 6-acetona) = 7,73 (1 H, d); 7,60 - 7,30 (1 H + 5H, m); 7,28 (1 H, d); 5,30 (2H, s) y
3,90 (3H, s).
Etapa 2
5
1-(2-Benciloxi-5-cloro-fen il)-2-(trifenil-A -fosfan iliden)-etanona

C1
10
15
A una suspensin agitada de bromuro de trifenilfosfonio (2,14 g, 6,0 mmol) en THF seco (30 mi) a temperatura
ambiente se le aadi n-BuLi 1,6 M en hexano (5,25 mi, 8,39 mmol). La suspensin naranja se agit durante 3
horas. A continuacin, se aadi lentamente una disolucin de 2-benzoiloxi-5-cloro-benzoato de metilo (0,83 g, 3,0
mmol) en THF (8 mi). La mezcla resultante se agit a 60 oC durante 2 horas y se filtr despus de enfriarla. Se
aadi DCM (100 mi) al filtrado y las capas orgnicas combinadas se lavaron con salmuera (2 x 80 mi). Tras la
filtracin y la evaporacin del disolvente, se obtuvo un aceite amarillo (2,0 g). Despus se purificaron mediante
cromatografa, se eluyeron con EtOAc : hexano / 1 : 1, lo que proporcion 0,97 9 de slidos. R = 0,43. 1H RMN (d6acetona) = 7,80 - 7,52 (20H, m); 7,40 - 7,20 (1 H + 1H + 1H, m); 5,25 (2H, s); 4,72 (1 H, s, trans-H) y 4,62 (1 H, s,
cis-H). LCMS: (M+1f = 521,2 (RT = 5,94 min.)
20
Etapa 3
5
4-(2-Benciloxi-5-cloro-fenil)-2,4-dioxo-3-(trifenil-A -fosfaniliden)-butirato de etilo
CI
COOE!
oaz
25
30
A una disolucin de 1-(2-benciloxi-5-cloro-fenil)-2-(trifenil-A5-fosfaniliden)-etanona (0,49 g, 0,94 mmol), NEb (96 mg,

0,94 mmol) y DMAP (12 mg, 0,09 mmol) en tolueno seco (20 mi) a temperatura ambiente, se le aadi
clorooxoacetato de etilo (0,38 g, 2,78 mmol) en tolueno (5 mi). La mezcla se agit durante 2 horas y se verti en
agua (50 mi). La capa orgnica se separ y la capa ac. se extrajo con EtOAc (2 x 40 mi). Las capas orgnicas
combinadas se lavaron despus con disolucin sat. de NaHC03 (2 x 40 mi), cido ctrico sat. (1 x 40 mi), salmuera
~1 x 40 mi) y se secaron. Se purific el aceite bruto (0,36 g) mediante cromatografa, eluyendo con EtOAc. R = 0,88.
H RMN (d6-acetona) = 7,75 - 7,40 (15H, m); 7,30 (1 H, dd); 7,15 (1 H, d); 7,05 (1 H, d); 5,10 (2H, s); 3,60 (2H, q) Y
1,10 (3H, s). LCMS: (M+1f = 621,2 (RT = 6,49 min.)
Etapa 4
3-(2-Benzoiloxi-5-cloro-benzoil)-3-bromo-3H-azirin-2-carboxilato de etilo
83

CI
A una disolucin de 4-(2-benciloxi-5-cloro-fenil)-2,4-dioxo-3-(trifenil-A5-fosfaniliden)-butirato de etilo (0,143 g, 0,23

mmol) en DCM (8 mi) a temperatura ambiente, se le aadi una mezcla de TMSN3 (40 mg, 0,35 mmol) y NBS (62
mg, 0,35 mmol) en DCM (6 mi). La disolucin resultante se agit durante 2 horas. Tras la evaporacin del disolvente,
el producto bruto se purific mediante CCF preparativa. Se obtuvo un slido amarillo (38 mg). Rr = 0,73
(EtOAc:hexano 1:2). 1H RMN (d 6-acetona) = 7,80 (1 H, d); 7,60 (1 H, dd); 7,40 (5H, m), 7,30 (1 H, d); 5,20 (2H, s);
4,10 (2H, q) Y 1,00 (3H, t). LCMS: (M+1f = 438,0 (RT = 7,32 min.)
Etapa 5
5-(2-Benzoiloxi-5-cloro-fenil)-4-bromo-isoxazol-3-carboxilato de etilo
CI
10
15
Se calent a reflujo 3-(2-benzoiloxi-5-cloro-benzoil)-3-bromo-3H-azirin-2-carboxilato de etilo (55 mg, 0,12 mmol) en

tolueno seco durante 2 horas. Tras la evaporacin del disolvente, se obtuvo un slido bruto (34 mg) y se purific
mediante CCF preparativa (EtOAc: hexano /1 : 2). R = 0,73 (fluorescente). 1H RMN (d6-acetona) = 7,60 (1H, d);
7,50 (1 H, dd); 7,40 (1 H, d); 7,30 (5H, m); 5,25 (2H, s); 4,42 (2H, q) Y 1,40 (3H, t). LCMS: (M+1f = 438,0 (RT = 7,09
min.)
Etapa 6
5-(2-Benciloxi-5-cloro-fenil)-4-bromo-isoxazol-3-carboxamida de etilo
a
CONHEI
20
25
A una disolucin de 5-(2-benzoiloxi-5-cloro-fenil)-4-bromo-isoxazol-3-carboxilato de etilo (30 mg, 6,8 x 10-2 mmol) en

EtOH (1 mi), se le aadi etilamina (70 % en agua, 1 mi). La disolucin se calent a 100 oC en un reactor de
microondas CEM (200 W) durante una hora. Tras ello, el disolvente se evapor y el compuesto se purific mediante
CCF preparativa para proporcionar un slido (20 mg). R = 0,39 (EtOAc: hexano / 1 : 4). 1H RMN (d 6-acetona) =
8,10 (1H, s, ancho); 7,50 (1H, d); 7,45 -7,35 (1H + 1H, m); 7,25 (5H, m); 5,20 (2H, s); 3,40 (2H, q) Y 1,20 (3H, t).
LCMS: (M+1f = 437,1 (RT = 6,57 min.)
Etapa 7
5-(2-Benciloxi-5-cloro-fenil)-4-(4-morfolin-4-ilmetilfeni1)-isoxazol-3-carboxamida de etilo
84

Una mezcla de 5-(2-benciloxi-5-cloro-fenil)-4-bromo-isoxazol-3-carboxamida de etilo (30 mg, 5,6 x 10-2 mmol),

Pd(Ph3P)4 (4 mg, 3,5 x 10-2 mmol), 4[4-(4,4,5,5-Tetrametil-[1 ,3,2]dioxaborolan-2-il)-bencil]morfolina (63 mg, 0,2
mmol) y disolucin de NaHC03 1 M (0,2 mi) en DME (1 mi) se agit a 80 oC bajo gas argn durante 16 horas.
Despus de enfriar, la disolucin se diluy con agua (8 mi) y se extrajo con EtOAc (2 x 20 mi). Las capas orgnicas
combinadas se lavaron con salmuera (1 x 20 mi) y se secaron. Tras la filtracin y evaporacin de los disolventes, el
producto bruto se purific mediante CCF preparativa, lo que proporcion 30 mg de slido. R = 0,44 (EtOAc). 1H
RMN (d6-acetona) = 8,25 (1 H, s, ancho); 7,60 (1 H, d); 7,55 (1 H, dd); 7,45 (1 H, d); 7,30 - 6,90 (9H, m); 5,00 (2H, s);
3,55 (4H, m); 3,45 (2H + 2H, s + q); 2,30 (4H, m) y 1,20 (3H, t). LCMS: (M+1f = 532,2 (RT = 4,39 min.)
Etapa 8
10
5-( 5-Cloro-2-hidroxi-fenil)-4-(4-morfolin-4-ilmetil-fen il)isoxazol-3-carboxamida de etilo
CONHEt
15
20
A una disolucin de 5-(2-benciloxi-5-cloro-fenil)-4-(4-morfolin-4-ilmetil-fenil)-isoxazol-3-carboxamida de etilo (25 mg,

4,7 x 10-2 mmol) en DCM (5 mi) a O oC, se le aadi 8Cb 1 M en DCM (0,15 mi). La disolucin amarilla turbia
resultante se agit despus a O oC durante 15 minutos y a temperatura ambiente 3 a 4 horas hasta que se aclar.
Despus, la disolucin se diluy con MeOH (1 mi). Despus se aadi NaHC0 3 sat. (1 mi) y se extrajo con EtOAc (2
x 2 mi) y se sec. Despus el disolvente se filtr y se evapor, el aceite bruto se purific mediante CCF preparativa
(EtOAc: MeOH /50: 1), lo que proporcion 12 mg de slido. 1H RMN (d4-MeOD) = 7,60 (2H, d); 7,50 - 7,30 (1H +
1H + 1H, m); 7,00 (2H, d); 3,70 (4H, m); 3,60 (2H, s); 3,50 (2H, q); 2,60 (4H, m) y 1,25 (3H, t). LCMS: (M+1f = 442,2
(RT = 3,54 min.)
El ismero 4-hidroxi se prepar de una manera similar a la de su homlogo 2-hidroxi como sigue:
Ejemplo 87
5-(3-Cloro-4-hidroxi-fenil)-4-(4-morfolin-4-ilmetil-fenil)isoxazol-3-carboxamida de etilo
Etapa 1
25
4-Benzoiloxi-3-cloro-benzoato de metilo
3-Cloro-4-hidroxi-benzoato de metilo (1,0 g, 5,36 mmol) proporcion un slido bruto (1,57 g). 1H RMN (d6-acetona)
= 8,00 (1 H, d); 7,95 (1 H, dd); 7,60 - 7,40 (5H, m); 7,35 (1 H, d); 5,40 (2H, s) y 3,90 (3H, s).
Etapa 2
30
1-(4-Benciloxi-3-cloro-fen il)-2-(trifenil-A5 -fosfan iliden)-etanona
85

el
4-Benzoiloxi-3-cloro-benzoato de metilo (1,5 g, 5,40 mmol) proporcion un slido bruto (2,5 g). Rf = 0,31 (EtOAc :
hexano / 1 : 1). 1H RMN (d6-acetona) = 8,05 (1 H, d); 7,90 (1 H, dd); 7,85 - 7,35 (20H, m); 7,20 (1 H, d); 5,30 (2H, s);
4,60 (1 H, s, trans-H) y 4,50 (1 H, s, cis-H). LCMS: (M+1f = 521,2 (RT = 5,29 min.)
5
Etapa 3
5
4-(4-Benciloxi-3-cloro-fenil)-2,4-dioxo-3-(trifenil-J... -fosfaniliden)-butirato de etilo
~~ ~.h
~oo
o
10
1-(4-Benciloxi-3-cloro-fenil)-2-(trifenil-A -fosfaniliden)-etanona (1,84 g, 3,53 mmol) proporcion un slido bruto (1,43

g). 1H RMN (d6-acetona) = 8,00 - 7,35 (22H, m); 7,20 (1H, d); 5,35 (2H, s); 3,55 (2H, q) Y 1,14 (3H, s). LCMS:
(M+1f = 621,2 (RT = 7,29 min.)
Etapa 4
3-(4-Benzoiloxi-3-cloro-benzoil)-3-bromo-3H-azirin-2-carboxilato de etilo
B~~
Br,
~
o
15
4-(4-Benciloxi-3-cloro-fenil)-2,4-dioxo-3-(trifenil-A5-fosfaniliden)-butirato de etilo (0,74 g, 1,19 mmol) proporcion un

slido (0,168 g) tras purificacin en columna y CCF preparativa. R= 0,24 (EtOAc : hexano / 1 : 6). 1H RMN (d6acetona) = 8,00 (1 H, d); 7,90 (1 H, dd); 7,50 (1 H, d); 7,40 (5H, m); 5,40 (2H, s); 4,05 (2H, q) Y 0,95 (3H, t). LCMS:
(M+1f = 438,1 (RT = 7,27 min.)
Etapa 5
5-(4-Benzoiloxi-3-cloro-fenil)-4-bromo-isoxazol-3-carboxilato de etilo
CI
B.o
Br
CDDE.
20
3-(4-Benzoiloxi-3-cloro-benzoil)-3-bromo-3H-azirin-2-carboxilato de etilo (68 mg, 0,16 mmol) proporcion un slido
(20 mg) tras CCF preparativa y cristalizacin (EtOH). R = 0,26 (fluorescente) (EtOAc: hexano /1 : 4). 1H RMN (d6acetona) = 8,00 (1 H, d); 7,90 (1 H, dd); 7,50 (1 H, d); 7,40 (5H, m); 5,35 (2H, s); 4,45 (2H, q) Y 1,40 (3H, t). LCMS:
(M+1f = 438,0 (RT = 7,39 min.)
25
Etapa 6
5-(4-Benciloxi-3-cloro-fenil)-4-bromo-isoxazol-3-carboxamida de etilo
86

CI
BzO
CONHEt
5-(4-Benzoiloxi-3-cloro-fenil)-4-bromo-isoxazol-3-carboxilato de etilo (10 mg, 2,3 x 10-2 mmol) proporcion un slido

bruto (8 mg). R = 0,53 (EtOAc: hexano / 1 : 2). 1H RMN (d6-acetona) = 8,15 (1 H, s, ancho); 8,00 (1 H, d); 7,90 (1 H,
dd); 7,50 (1 H, d); 7,40 (5H, m); 5,32 (2H, s); 3,42 (2H, q) Y 1,20 (3H, t).
5
Etapa 7
5-(4-Benciloxi-3-cloro-fenil)-4-(4-morfolin-4-ilmetilfeni1)-isoxazol-3-carboxamida de etilo
5-(4-Benciloxi-3-cloro-fenil)-4-bromo-isoxazol-3-carboxamida de etilo (10 mg, 2,3 x 10-2 mmol) proporcion un slido

bruto (10 mg), que se us despus en la siguiente etapa sin purificacin adicional.
10
Etapa 8
5-(3-Cloro-4-hidroxi-fenil)-4-(4-morfolin-4-ilmetil-feni1)-isoxazol-3-carboxamida de etilo
15
5-(4-Benciloxi-3-cloro-fenil)-4-(4-morfolin-4-ilmetil-feni1)-isoxazol-3-carboxamida de etilo (8 mg, 1,5 x 10-2 mmol)

proporcion un slido bruto (2 mg) despus de purificarla dos veces mediante CCF preparativa (EtOAc: MeOH / 50 :
1). 1H RMN (d4-MeOD) = 7,70 (2H, d); 7,60 (1H, d); 7,45 (1H + 1H, m); 7,00 (2H, d); 3,80 (4H, m); 3,75 (2H, s);
3,50 (2H, q); 2,82 (4H, m) y 1,25 (3H, t). LCMS: (M+1f = 442,2 (RT = 4,47 min.)
Ejemplo 88
3-[4-(4-Bromo-fenil)-isoxazol-5-il]-5-cloro-2,6-dihidro xibenzaldehdo
Bt
20
Etapa 1
3-(4-Bromo-fenil)-6-cloro-7-hidroxi-4-oxo-4H-cromeno-8-carbaldehdo
87

Sr
CHO
Se disolvi 3-(4-bromo-fenil)-6-cloro-7-hidroxi-cromen-4-ona (0,35 g, 1 mmol) y hexametilentetramina (0,14 g, 1

mmol) en cido actico glacial (20 mi) y se calent durante la noche a 100 oC. Se aadi HCI 6 M caliente (10 mi) y
la mezcla se calent durante otra hora antes verterla en agua. El precipitado formado se filtr, se lav y se sec para
proporcionar el producto deseado puro en forma de un slido marrn plido.
LCMS (LCQ) tR = 8,27, MS miz 377,3 / 379,2 [M-Hr
Etapa 2
3-[4-(4-Bromo-fenil)-isoxazol-5-il]-5-cloro-2,6-dihidroxibenzaldehdo
Bf
OH
10
A una disolucin de 3-(4-bromo-fenil)-6-cloro-7-hidroxi-4-oxo-4H-cromeno-8-carbaldehdo (53,5 mg, 0,14 mmol) en

EtOH (6 mi), se le aadi hidrocloruro de hidroxilamina (100 mg, 1,4 mmol). La mezcla resultante se calent a reflujo
durante 16 horas. El EtOH se evapor y se aadi EtOAc (20 mi). La capa orgnica se lav con NaHC03 sat. y se
sec. Se obtuvo un slido (33 mg) cuando el aceite resultante se tritur con ter. 1 H RMN (d 6 -DMSO) = 9,83 (1 H,
s); 8,70 (1H, s); 8,21 (1H, s); 7,78 (2H, d) Y 7,68 (2H, s). LCMS: (M+1f = 394,1 (RT = 8,60 min.)
15
Ejemplo 89
Hidroxiamida de cido 5-(5-etil-2-hidroxi-4-metoxi-fenil)-4-(4-fluoro-fenil)-isoxazol-3-carboxlico
MeO
Etapa 1
1-( 5-Etil-2,4-d ihid roxi-fenil)-2-(4-fluoro-fenil)-etanona
HO
20
25
Se disolvi etil resorcinol (5,37 g, 39 mmol) y cido 4-fluorofenilactico (6,00 g, 39 mmol) en eterato - SF3 (40 mi). La
disolucin se calent a 80 oC durante 4 horas. Cuando se enfri, se aadi agua (100 mi) cuidadosamente y la
disolucin se extrajo con EtOAc (2 x 80 mi). Las capas orgnicas se lavaron despus con NaHC03 sat. (precaucin)
(2 x 100 mi) y salmuera (2 x 100 mi), y se secaron con Na2S04. Tras la purificacin con carbn decolorante, se
obtuvo un jarabe verde oscuro (10,5 g). R = 0,4 (EtOAc:n-hexano / 1 :3). El compuesto se us en la siguiente etapa
88

sin purificacin adicional. 1H RMN (d6-acetona) = 7,80 (1 H, s); 7,35 (2H, m); 7,00 (1 H, m); 6,35 (1 H, s); 4,35 (2H,
s); 2,55 (2H, q) Y 1,10 (3H, t).
Etapa 2
ster etlico de cido 4-(5-etil-2,4-dihidroxi-fenil)-3-(4-fluoro-fenil)-2,4-dioxo-butrico
HO
OH
10
15
A una disolucin de 1-(5-etil-2,4-dihidroxi-fenil)-2-(4-fluoro-fenil)-etanona (10,3 g, 37,6 mmol) en piridina seca (100

mi) a O oC se le aadi clorooxoacetato de etilo (15,4 g, 112,8 mmol). La disolucin se agit a O oC durante 4 horas y
a temperatura ambiente durante 16 horas. La capa ac. se neutraliz con HCI 1 M Y se extrajo con DCM (2 x 100 mi).
Las capas de DCM combinadas se lavaron despus con HCI 2 M (2 x 80 mi), NaHC03 sat. (1 x 100 mi), salmuera (1
x 100 mi) y se secaron con Na 2S04. Tras la filtracin y la evaporacin del disolvente, se obtuvo un aceite marrn
oscuro (11,4 g). R = 0,22 (EtOAc:n-hexano / 1 :2). La LCMS demuestra que es una mezcla del producto deseado
[(M-1r = 373,1, RT = 7,27) Y el carboxilato de cromeno ciclado [(M-1r = 355,4, RT = 7,83) en una proporcin de
aprox.6 : 1. Se purific una pequea cantidad de muestra mediante CCF prep. para el anlisis espectroscpico. 1H
RMN (d6-acetona) = 7,75 (1 H, s); 7,30 (2H, m); 7,00 (1 H, m); 6,45 (1 H, s); 4,65 (1 H, s); 4,25 (2H, q); 2,55 (2H, q) Y
1,10 (6H,t)
Etapa 3
ster etlico de cido 6-etil-3-(4-fluoro-fenil)-7 -hidroxi-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxlico
20
25
Se someti a reflujo ster etlico de cido 4-(5-etil-2,4-dihidroxi-fenil)-3-(4-fluoro-fenil)-2,4-dioxo-butrico (3,22 g, 8,6

mmol) en una mezcla de HCI 0,8 M Y MeOH (20 mi / 20 mi) durante 3 horas a 100 oC. Tras ello, se evapor el MeOH
y la capa ac. se extrajo con EtOAc (2 x 60 mi). Las capas orgnicas combinadas se lavaron con NaHC03 sat. (1 x 80
mi), salmuera (2 x 80 mi), agua (1 x 80 mi) y se secaron con Na2S04. Tras la purificacin con carbn decolorante y la
evaporacin del disolvente, se obtuvo un slido marrn pegajoso. Despus se extrajo con ter caliente, y se obtuvo
un slido amarillo oscuro (0,26 g). R = 0,43 (EtOAc:n-hexano /1 :2). LCMS: (M + 1f = 357,3 (RT = 7,83). 1H RMN
(d6-acetona) = 9,75 (1 H, s); 7,80 (1 H, s); 7,25 (2H, m); 7,10 (1 H, m); 6,90 (1 H, s); 4,05 (2H, q); 2,70 (2H, q); 1,20
(3H, t) Y 0,95 (3H, t).
Etapa 4
ster etlico de cido 6-etil-3-(4-fluoro-fenil)-7 -metoxi-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxlico
30
Se aadi yodometano (0,10 mi, 12 equiv.) a una disolucin de ster etlico de cido 6-etil-3-(4-fluoro-fenil)-7-hidroxi4-oxo-4H-cromeno-2-carboxlico (50 mg, 0,14 mmol) y carbonato potsico (58 mg, 3,0 equiv.) en acetona, y la
mezcla se someti a reflujo durante la noche. Despus se evaporaron los compuestos voltiles a vaco y el residuo
se reparti entre agua (15 mi) y EtOAc (15 mi). La capa orgnica se lav con salmuera, se sec sobre MgS04 y se
evapor hasta sequedad a vaco para proporcionar un producto cristalino blanco (45 mg, 87% de rendimiento)
89

OH (CDCi3), 7,96 (1H, s, Ar-H), 7,27 (2H, m, Ar-H), 7,12 (2H, m, Ar-H), 6,92 (1H, s, Ar-H), 4,16 (2H, q, C02CH2CH3),
3,95 (3H, s, OCH3), 2,71 (3H, q, CH2CH3), 1,24 (3H, t, C02CH2CH3), 1,04 (3H, t, CH2CH3)
Etapa 5
Hidroxiamida de cido 5-(5-etil-2-hidroxi-4-metoxi-fenil)-4-(4-fluoro-fenil)-isoxazol-3-carboxlico
5
A ster etlico de cido 6-etil-3-(4-fluoro-fenil)-7-metoxi-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxlico (25 mg, 0,068 mmol) en
etanol (2,5 mi) se le aadi hidroxilamina (50% en agua, 1 mi) y la disolucin se agit durante 48 h. Los compuestos
voltiles se evaporaron a vaco y el residuo se purific mediante CCF preparativa (10% de MeOH en DCM) para
proporcionar el producto deseado en forma de un slido marrn claro (3 mg, 12% de rendimiento).
10

OH (d6-Acetona), 10,73 (1 H, s ancho), 8,59 (1 H, s ancho), 7,39 (2H, m, Ar-H), 7,07 (2H, m, Ar-H), 7,00 (1 H, s, Ar-H),
6,55 (1 H, s, Ar-H), 3,82 (3H, s, OCH3), 2,48 (2H, q, CH2CH3), 1,30 (1 H, s ancho), 1,01 (3H, t, CH2CH3).
Ejemplo 90
Hidroxiamida de cido 5-(5-etil-2,4-dihidroxi-fenil)-4-(4-fluoro-fenil)-isoxazol-3-carboxlico
HO
15
A ster etlico de cido 6-etil-3-(4-fluoro-fenil)-7-hidroxi-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxlico (25 mg, 0,070 mmol) en
etanol (2,5 mi) se le aadi hidroxilamina (50% en agua, 1 mi) y la disolucin se agit durante 48 h. Los compuestos
voltiles se evaporaron a vaco y el residuo se purific mediante CCF preparativa (15% de MeOH en DCM) para
proporcionar el producto deseado en forma de un slido marrn (2 mg, 8% de rendimiento).
20

OH (d6-Acetona), 10,72 (1 H, s ancho, CONH), 8,69 (1 H, s ancho, Ar-OH), 8,59 (1 H, s ancho, Ar-OH), 7,39 (2H, m, ArH), 7,06 (2H, m, Ar-H), 6,99 (1 H, s, Ar-H), 6,52 (1 H, s, Ar-H), 2,49 (2H, q, CH2CH3), 1,31 (1 H, s ancho), 1,08 (3H, t,
CH2CH3).
25
Resultados Biolgicos
La actividad ATPasa intrnseca de HSP90 se puede medir mediante el uso de HSP90 de levadura como sistema
modelo. El ensayo, basado en el uso de verde malaquita para la medida del fosfato inorgnico, se us para ensayar
la actividad inhibitoria de HSP90 de algunos de los compuestos de los Ejemplos de la presente memoria.
Ensayo de ATPasa con Verde Malaquita
30
Materiales
35
Los productos qumicos son de la pureza ms alta disponible comercialmente, y todas las disoluciones acuosas se
producen en agua AR. Debido a la necesidad de minimizar la contaminacin con fosfato inorgnico, se deberan
tomar precauciones con las disoluciones y los aparatos utilizados en los ensayos. El material de vidrio y los
pHmetros se lavan con agua doblemente destilada o desionizada antes del uso, y, cuando sea posible, se debera
usar material de plstico. Se usan guantes para todos los procedimientos.
(1)
Placas multipocillo de poliestireno de fondo plano de 384 pocillos Greiner (Greiner 781101) o de 384 pocillos
90

Costar (VWR).
(2)
Tampn de ensayo de (a) Tris-HCI 100 mM, pH 7,4, (b) KCI 150 mM, (c) MgCI2 6 mM. Almacenado a
temperatura ambiente.
(3)
Verde malaquita del 0,0812% (p/v) (M 9636, Sigma Aldrich Ud., Poole, RU.). Almacenado a temperatura
ambiente.
(4)
Poli(alcohol vinilico) al 2,32% (p/v) USP (P 1097, Sigma Aldrich Ud, Poole, RU.) en agua en ebullicin (vase
el Comentario 1), dejado enfriar, y almacenado a temperatura ambiente.
(5)
Molibdato de amonio al 5,72% (p/v) en cido clorhidrico 6 M. Almacenado a temperatura ambiente.
(6)
Citrato sdico del 34% (p/v). Almacenado a temperatura ambiente.
(7)
ATP 100 mM, sal disdica, calidad especial (47699, Sigma Aldrich). Almacenado a -20 oC.
(8)
Proteina HSP90 de levadura expresada en E. coli, purificada >95% (vase, p.ej., Panaretou et al., 1998) y
almacenada en alcuotas de 50 uL a -80 oC.
1.
Diluir los compuestos de ensayo hasta 500 !-1M en agua AR (la concentracin de DMSO ser del 2,5%).
Transferir 2,5 1-11 de estos compuestos directamente desde la placa hija a la placa de ensayo, proporcionando
una concentracin de ensayo final de 100 fJM. Para obtener valores de CI50 de 12 puntos, se llevan a cabo
diluciones en serie 1:2 para producir un intervalo de concentraciones de ensayo de 100 !-1M a 97,6 nM (2,5% de
DMSO), y se transfieren 2,5 1-11 de cada concentracin a la placa de ensayo. La columna 1 de la placa de
ensayo no contiene compuesto, como control negativo. Tambin se usa una fila adicional sin compuesto como
valor de fondo.
2.
Preparar ATP diluyendo una disolucin de reserva 100 mM hasta 925 I-IM con tampn de ensayo, y poner una
alcuota de 5 1-11 de ATP diluido en cada pocillo, incluyendo los controles (concentracin final de ensayo 370
10
15
20
~M).
25
Aadir 5
4.
Diluir la preparacin de enzima hasta 1,05 I-IM con tampn de ensayo, y poner una alcuota de 5 1-11 en cada
pocillo de compuesto y en la columna de control negativo.
5.
Colocar los reactivos en el fondo del pocillo, cubrir la placa con un sellador de placas e incubar durante la
noche a 37 oC.
6.
En primer lugar por la maana preparar el Reactivo de Verde Malaquita. Aadir 2 partes de Disolucin de
Verde Malaquita, 1 parte de Disolucin de Poli(alcohol vinlico), 1 parte de Disolucin de Molibdato de Amonio,
y 2 partes de agua AR
7.
Invertir para mezclar, y dejar en reposo durante aproximadamente 1 hora hasta que el color cambie de marrn
a amarillo dorado.
8.
Aadir 401-11 de Reactivo de Verde Malaquita a cada pocillo, dejando 5 mins para que se desarrolle el color.
9.
Aadir 51-11 de Reactivo de Citrato Sdico a cada pocillo (vase el comentario 2)
10.
Volver a cubrir con un sellador de placas y agitar en un agitador de placas durante al menos 15 mins.
11.
Medir la absorbancia a 620 nM mediante el uso de un lector de placas adecuado (p.ej. Victor, Perkin Elmer Life
Sciences, Milton Keynes, R.U.). En estas condiciones, la absorbancia del control es 0,9 a 1,4, Y el valor de
fondo es 0,2-0,35, lo que da una proporcin de seal respecto de ruido de -12. El factor Z' calculado a partir de
los datos obtenidos mediante el uso de estas condiciones est entre 0,6 y 0,9.
30
35
~I
3.
40
de tampn a la fila de valor de fondo.
Comentarios
(1)
El poli(alcohol vinlico) se disuelve en agua en ebullicin con dificultad, y es necesario agitar durante 2-3 h.
(2)
El intervalo de tiempo entre la adicin del reactivo de verde malaquita y el citrato sdico se debera mantener
tan corto como sea posible para reducir la hidrlisis no enzimtica del ATP. Una vez que se aade citrato
sdico, el color es estable durante hasta 4 h a temperatura ambiente.
(3)
Los compuestos se pueden aadir a las placas de ensayo mediante el uso de un Robot Biomek FX (Beckman
Coulter). Se puede usar de manera conveniente un dispensador Multidrop 384 (Thermo Labsystems,
45
91

Basingstoke, R.U.) para aadir los reactivos a la placa.
(4)
Las condiciones de ensayo se optimizaron con respecto al tiempo, la concentracin de protena y de sustrato
para alcanzar una concentracin de protena mnima a la vez que se mantena el diferencial de seal respecto
del ruido.
(5)
La seal respecto del ruido (S/N) se calcula mediante el uso de la ecuacin siguiente:
(S-B)/~(SD de S)2 + (SD de B)2
(6)
Para determinar la actividad especfica de HSP90, se prepara un intervalo de concentraciones de fosfato

inorgnico (0-10 I-IM) Y se mide la absorbancia a 620 nm como se ha descrito. La actividad especfica se
calcula a partir de la curva de calibracin resultante.
10
Los compuestos ensayados en el ensayo anterior se asignaron a uno de dos intervalos de actividad, concretamente
A = <50 I-IM; B = >50 I-IM, Y esas asignaciones se informaron anteriormente.
Tambin se emple un ensayo de inhibicin del crecimiento para el estudio de los inhibidores de HSP90 candidatos:
15
Determinacin de la citotoxicidad mediante ensayo de Sulforrodamina B (SRB): clculo de la concentracin

inhibitoria del 50% (CI 50).
Dia 1
20
1)
Determinar el nmero de clulas mediante un hemocitmetro.
2)
Mediante el uso de una multipipeta de 8 canales, aadir 160 1-11 de la suspensin de clulas (3600
4
clulas/pocillo o 2 x 10 clulas/mi) a cada pocillo de una placa de microtitulacin de 96 pocillos.
3)
Incubar durante la noche a 37 oC en un incubador de CO 2 .
Dia2
4)
Se preparan disoluciones de reserva de los frmacos, y se llevan a cabo diluciones en serie de cada frmaco
en medio para proporcionar las concentraciones finales en los pocillos.
5)
Mediante el uso de una multipipeta, se aaden 40 1-11 de frmaco (a concentracin final 5x) a pocillos
cuadruplicados.
6)
Los pocillos de control estn a cada lado de las placas de 96 pocillos, en los que se aaden 40 1-11 de medio.
7)
Incubar las placas en un incubador de CO 2 durante 4 dias (48 horas).
25
Dia6
8)
Desechar el medio y sumergir la placa lentamente en un 10% de cido tricloroactico (TCA) helado. Dejarlo
durante alrededor de 30 mins en el hielo.
9)
Lavar las placas tres veces en agua del grifo sumergiendo las placas en baos de agua del grifo y eliminarla
mediante una pipeta.
10)
Secar en un incubador.
11)
Aadir 100 ~I de SRB del 0,4% en cido actico del1% a cada pocillo (excepto la ltima fila (lado derecho) de
la placa de 96 pocillos, esta es el control del 0%, es decir, sin frmaco, sin tincin. La primera fila ser el control
del 100% sin frmaco, pero con tincin). Dejarlo durante 15 mins.
12)
Eliminar mediante lavado la tincin SRB sin unir con cuatro lavados de cido actico deI1%.
13)
Secar las placas en un incubador.
14)
Solubilizar SRB mediante el uso de 100

durante 5 mins.
15)
Determinar la absorbancia a 540 nm mediante el uso de un lector de placas. Calcular la absorbancia media
para los pocillos cuadruplicados y expresarla como un porcentaje del valor de los pocillos de control sin tratar.
16)
Trazar los valores de % de absorbancia frente allog. de la concentracin de frmaco y determinar la C15o.
30
35
40
~I
de Tris-base 10 mM y poner las placas en un agitador de placas
92

A modo de ilustracin, el compuesto del Ejemplo 2 proporcion una CI50 en el intervalo 'A' 50 uM) para el ensayo
de detencin del crecimiento con SRB.
Tambin se emple un ensayo de Polarizacin de Fluorescencia para el estudio de algunos de los compuestos de
los Ejemplos:
5
Ensayo de Polarizacin de Fluorescencia

La polarizacin de fluorescencia {tambin conocida como anisotropa de fluorescencia} mide la rotacin de una
especie fluorescente en disolucin, en la que cuanto ms grande sea la molcula ms polarizada estar la emisin
de fluorescencia.
10
Cuando el fluorforo se excita con luz polarizada, la luz emitida tambin est polarizada. El tamao molecular es
proporcional a la polarizacin de la emisin de fluorescencia.
La sonda marcada con fluorescena - RBT0045864-FAM -
se une a HSP90 { humano de longitud completa, de levadura de longitud completa o del dominio N-terminal de
HSP90 } y se mide la anisotropa {rotacin del complejo sonda:protena}.
15
El compuesto de ensayo se aade a la placa de ensayo, se deja equilibrar y la anisotropa se mide de nuevo.
Cualquier cambio de la anisotropa es debido a la unin competitiva del compuesto a HSP90, lo que libera la sonda.
Materiales
Los productos qumicos son de la pureza ms alta disponible comercialmente, y todas las disoluciones acuosas se
producen en agua AR.
20
1)
Placa de ensayo negra de 96 pocillos Costar nO 3915
2)
Tampn de ensayo de (a) Tris 100 mM de pH 7,4; (b) KCI 20 mM; (c) MgCb 6 mM. Almacenado a temperatura
ambiente.
3)
BSA (albmina de suero bovino) de 10 mglml (New England Biolabs nO B9001 S)
4)
Sonda 20 mM en 100 % de concentracin de reserva en DMSO. Almacenado en la oscuridad a TA. La

concentracin de trabajo es 200 nM diluido en agua AR y almacenado a 4 oC. Concentracin final en el ensayo
80nM.
5)
Protena HSP90 humana de longitud completa expresada en E. coli, purificada >95% (vase, p.ej., Panaretou
et al., 1998) Y almacenada en alcuotas de 50 JL a -80 oC.
25
Protocolo
30
1)
Aadir 100 JI de tampn 1x a los pocillos 11 A Y 12A (=Blanco de PF)
2)
Preparar la mezcla de ensayo - todos los reactivos se mantienen en hielo con una tapa sobre el recipiente, ya
que la sonda es sensible a la luz.
i. Conc Final n
Tampn de FP 1x de Hsp90
10 mi
1x
10 mglml de BSA (NEB)
5,0 JI
5 Jg/ml
Sonda 200 JM
4,0 JI
80 nM
Hsp90 humano de longitud completa
6,25 JI
200 nM
93

3)
Alicuotar 100
4)
Sellar la placa y dejarla en la oscuridad a temp. ambiente durante 20 minutos para equilibrarla
1-11
de mezcla de ensayo en todos los dems pocillos
Placa de Dilucin de Compuestos - serie de diluciones 1 x 3
1)
En una placa de fondo en v de 96 pocillos claros - {n' VVVR 007/008/257} aadir 1O ~I de DMSO del 100% a los
pocillos B1 a H11
2)
A los pocillosA1 a A11 aadirles 17,5
3)
Aadir 2,5
4)
Repetir para los pocillos A2 a A1 O. Control en las columnas 11 y 12.
5)
Transferir 5
~I
de la fila A a la fila B - no a la columna 12. Mezclar bien.
6)
Transferir 5
~I
de la fila B a la fila C. Mezclar bien.
7}
Repetir para la fila G.
8)
No aadir compuesto a la fila H - esta es la fila O.
9)
Esto produce una serie de diluciones 1x3 desde 50
10)
En el pocillo B12 preparar 20
11)
Tras la primera incubacin, la placa de ensayo se lee en un lector de placas Fusin a-FP (Packard
BioScience, Pangboume, Berkshire, R.U.).
12)
Tras la primera lectura, se aaden 2 1-11 de compuesto diluido a cada pocillo para las columnas 1 a 10. En la
columna 11 {proporciona la curva patrn} solamente aadir el compuesto en B11 - H11. Aadir 2 1-11 de comp.
patrn 100 mM a los pocillos B12 - H12 {es el control positivo}
13)
El factor Z' se calcula a partir de los controles de valor cero y los pocillos positivos. Generalmente proporciona
un valor de 0,7 - 0,9.
10
15
20
~I
~I
de DMSO del 100%
de comp. a A1. Esto proporciona comp. de reserva 2,5 mM {5Ox} - suponiendo comp. 20 mM.
~I
~M
hasta 0,07
de compuesto patrn 100
~M.
~M.
Los compuestos ensayados en el ensayo anterior se asignaron a uno de dos intervalos de actividad, concretamente
A = <10 I-IM; B = >10 I-IM, Y esas asignaciones se informaron anteriormente. A modo de ilustracin, el compuesto del
Ejemplo 2 proporcion una CI50 en el intervalo 'A'.
25
94

REFERENCIAS
Anteriormente se citaron varias publicaciones para describir y revelar de manera ms completa la invencin y el
estado de la tcnica a la que pertenece la invencin. A continuacin se proporcionan las citas completas de estas
referencias.
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30
97

REIVINDICACIONES
1.
Un compuesto de frmula (A) o (B) o una sal, N-xido, hidrato o solvato del mismo:
(B)
(A)
en la que
5
R1 es un grupo de frmula (lB)
Q_(Alk2).-(Z),-(Alkl)~
(lB)
OH
R representa uno o ms sustituyentes opcionales,
Alk1 y Alk 2 son radicales alquileno C 1-C6 o alquenileno C 2-C 6 divalentes sustituidos opcionalmente,
10
p, r y s son independientemente O 1 ,
A
A
A
A
Z es -0-, -S-, -(C=O)-, -(C=S)-, -S02-, -C(=O)O-, -C(=O)NR -, -C(=S)NR -, -S02NR -, -NRAC(=O)-, -NR S02- o
A
A
_NR _ en las que R es hidrgeno o alquilo C1-C6, y
Q es hidrgeno o un radical carbocclico o heterocclico sustituido opcionalmente;
R2 es (i) un grupo de frmula (lA):

-Ar 1_(Alk1) p-(Z), -(Alk2)s-Q (lA)
15

1
Ar es un radical arilo o heteroarilo sustituido opcionalmente, y
2
A
Alk\ Alk , p, r, s, Z, R y Q son como se definen en relacin con R1;
(ii) un radical carboxamida; o
20
(iii) un anillo carbocclico o heterocclico no aromtico en el que un carbono del anillo est sustituido
opcionalmente, y/o un nitrgeno del anillo est sustituido opcionalmente con un grupo de frmula -(Alk 1)P-(Z)r
2
2
(Alk )s-Q en la que Q, Alk\ Alk , Z, p, r y s son como se definieron anteriormente en relacin con el grupo (lA);
y
R3 es un grupo carboxilo, carboxamida o ster de carboxilo,
25
30
la expresin "sustituido opcionalmente" significa sustituido con hasta cuatro sustituyentes compatibles, y cada uno
de los cuales se selecciona independientemente de alquilo (C1-C6), alcoxi (C1-C6), hidroxi, hidroxialquilo (C1-C6),
mercapto, mercaptoalquilo (C1-C6), alquiltio (C1-C6), halgeno (que incluye fluoro, bromo y cloro), trifluorometilo,
trifluorometoxi, nitro, nitrilo (-CN), oxo, fenilo, -COOH, -COORA, -CORA, -S02RA, -CONH2, -S02NH2, -CONHRA, S02NHRA, -CONRARB, -S02NRARB, -NH2, -NHRA, _NRARB, -OCONH2, -OCONHRA, -OCONRARB, -NHCORA, NHCOORA, -NRBCOORA, -NHS020RA, -NRBS020H, -NRBSO~ORA, -NHCONH2, -NRACONH2, -NHCONHRB, A
B
B
B
NRACONHR , -NHCONRAR , o -NRACONRAR en las que R y R son independientemente un grupo alquilo (C1-C6),
y
el trmino "carboxamida" significa un grupo de frmula -CONH2 o un grupo metilaminocarbonilo, etilaminocarbonilo o
A
isopropilamino carbonilo, o un grupo de frmula -CONRB(Alk)nR en la que
98

Alk es un radical alquileno, alquenileno o alquinileno divalente sustituido opcionalmente,

nesO1,
B
R es hidrgeno o un grupo alquilo C 1-C 6 o alquenilo Cr C6 ,

A
R es hidroxi o carbocclico o heterociclilo sustituido opcionalmente,

A
10
opcionalmente en uno o ms tomos de C o N del anillo.
2.
Un compuesto segn la reivindicacin 1 en el que R3 es un grupo carboxamida.
3.
Un compuesto segn la reivindicacin 1 o la reivindicacin 2 en el que el compuesto es uno de frmula (A).
4.
Un compuesto segn cualquiera de las reivindicaciones precedentes en el que el tomo de carbono del anillo
adyacente al grupo hidroxilo en el radical (lB) est sin sustituir.
5.
Un compuesto segn cualquiera de las reivindicaciones precedentes en el que, en R1, cada uno de p, r y s es
O, y Q es hidrgeno.
15
6.
Un compuesto segn la reivindicacin 2 o cualquiera de las reivindicaciones 3 a 5 cuando sean dependientes
de la reivindicacin 2, en el que R1 es fenilo sustituido opcionalmente, en el que la expresin "sustituido
opcionalmente" tiene el significado definido en la reivindicacin 1.
7.
Un compuesto segn la reivindicacin 5 en el que R 1 es 2-hidroxifenilo, sustituido opcionalmente adems con
uno o ms de hidroxi, metilo, etilo, metoxi, etoxi, cloro, o bromo.
20
8.
Un compuesto segn la reivindicacin 5 en el que R 1 es 2,4-dihidroxifenilo, sustituido en la posicin 5 con
metilo, etilo, isopropilo, isobutilo, terc-butilo, cloro, o bromo.
9.
Un compuesto segn cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 en el que, en R 1, p, r y s son cada uno O, y Q es
un anillo carbocclico o heterocclico sustituido opcionalmente, en el que la expresin "sustituido opcionalmente"
tiene el significado definido en la reivindicacin 1.
25
30
10. Un compuesto segn la reivindicacin 9 en el que Q es un anillo fenilo o piridilo sustituido opcionalmente, en el
que la expresin "sustituido opcionalmente" tiene el significado definido en la reivindicacin 1.
11.
Un compuesto segn cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 en el que, en R1, p y/o s son cada uno 1 y res O.
12.
Un compuesto segn cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 en el que, en R1, cada uno de p, r, y s es 1.
13.
Un compuesto segn cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 en el que, en R1, P Y s son cada uno O y res 1.
14. Un compuesto segn cualquiera de las reivindicaciones precedentes en el que R2 es 2-, 3-, o 4-piridilo, 2- o 3furanilo, 2- o 3-tienilo, o tiazolilo sustituidos opcionalmente, en el que la expresin "sustituidos opcionalmente" tiene
el significado definido en la reivindicacin 1
15. Un compuesto segn la reivindicacin 14 en el que los sustituyentes opcionales presentes en R2 se
seleccionan de metoxi, etoxi, metilendioxi, etilendioxi, fluoro, cloro, bromo, y trifluorometilo.
35
16. Un compuesto segn cualquiera de las reivindicaciones 1 a 14 en el que R2 es fenilo sustituido en la posicin 4
con metoxi, etoxi, fluoro, cloro, bromo, piperazinilo, N-metilpiperazinilo, o piperidinilo.
17.
40
Un compuesto segn cualquiera de las reivindicaciones 1 a 13 en el que R2 tiene la estructura parcial:
en la que el grupo amino sustituido _NR 10 R11 se selecciona de morfolinilo, piperidinilo, piperazinilo, pirrolidinilo,
etilamino, isopropilamino, dietilamino, ciclohexilamino, ciclopentilamino, metoxietilamino, piperidin-4-ilo, Nacetilpiperazinilo, metilsulfonilamino, tiomorfolinilo, dixido de tiomorfolinilo, 4-hidroxietilpiperidinilo, y 4hidroxipiperidinilo.
99

18. Un compuesto segn cualquiera de las reivindicaciones 2 a 17 en el que R3 es etilaminocarbonilo o

isopropilaminocarbonilo.
19.
Un compuesto segn la reivindicacin 1 que tiene la frmula (ID), o el regioismero de frmula B del mismo,
HO
(ID)
5
en la que cada R representa independientemente un sustituyente opcional seleccionado de los sustituyentes

opcionales como se definieron en la reivindicacin 1 y R3 representa un grupo carboxamida como se defini en la
reivindicacin 1.
20.
Un compuesto segn la reivindicacin 1 que tiene la frmula (lE), o el regioismero de frmula B del mismo,
HO
(lE)
10
15
en la que R3 representa una carboxamida como se defini en el grupo de la reivindicacin 1; Rg representa CH2NR 10 R11 o _NR 10 R11 en las que el grupo amino sustituido _NR10 R11 es un grupo solubilizante seleccionado de
morfolinilo, piperidinilo, piperazinilo, pirrolidinilo, etilamino, isopropilamino, dietilamino, ciclohexilamino,
ciclopentilamino, metoxietilamino, piperidin-4-ilo, N-acetilpiperazinilo, N-metilpiperazinilo, metilsulfonilamino,
tiomorfolinilo, dixido de tiomorfolinilo, 4-hidroxietilpiperidinilo, o 4-hidroxipiperidinilo; y Rs representa un sustituyente
opcional seleccionado de los sustituyentes opcionales como se definieron en la reivindicacin 1.
20
21. Un compuesto segn la reivindicacin 20 en el que R3 es etilaminocarbonilo CH3CH2NHC(=O)-, o

isopropilaminocarbonilo (CH3)2CHNHC(=O)-; el grupo amino sustituido _NR 10 R11 en R9 es morfolinilo, piperidinilo,
piperazinilo, pirrolidinilo, etilamino, isopropilamino, dietilamino, ciclohexilamino, ciclopentilamino, metoxietilamino,
piperidin-4-ilo, N-acetilpiperazinilo, N-metilpiperazinilo, metilsulfonilamino, tiomorfolinilo, dixido de tiomorfolinilo, 4hidroxietilpiperidinilo, o 4-hidroxipiperidinilo; y Rs es etilo, isopropilo, bromo, o cloro.
22. Un compuesto segn la reivindicacin 1 seleccionado de:
Etilamida de cido 5-(2,4-dihidroxi-5-isopropil-fenil)-4-(4-piperidin-1-ilmetil-fenil)-isoxazol-3-carboxlico
Etilamida de cido 4-(4-dietilaminometil-fenil)-5-(2,4-dihidroxi-5-isopropil-fenil)-isoxazol-3-carboxlico
25
Etilamida de cido 5-(2,4-dihidroxi-5-isopropil-fenil)-4-[4-(4-metil-piperazin-1-ilmetil)-fenil]-isoxazol-3-carboxlico

Etilamida de cido 5-(2,4-dihidroxi-5-isopropil-fenil)-4-(4-etilaminometil-fenil)-isoxazol-3-carboxlico
Etilamida de cido 5-(2,4-dihidroxi-5-isopropil-fenil)-4-[4-(isopropilamino-metil)-fenil]-isoxazol-3-carboxlico
Etilamida de cido 4-(4-ciclohexilaminometil-fenil)-5-(2,4-dihidroxi-5-isopropil-fenil)-isoxazol-3-carboxlico
Etilamida de cido 4-[4-(terc-butilamino-metil)-fenil]-5-(2,4-dihidroxi-5-isopropil-fenil)-isoxazol-3-carboxlico
30
Etilamida de cido 5-(2,4-dihidroxi-5-isopropil-fenil)-4-{4-[(2-metoxi-etilamino)-metil]-fenil}-isoxazol-3-carboxlico
100

1sopropilamida de cido 5-(2, 4-d ih id roxi -5-isopropil-fen i 1) -4-( 4-morfoli n-4-i Imelil-fen i 1) -isoxazol-3-carboxi 1ico
1sopropilamida de cido 5-(2, 4-d ih id roxi -5-isopropil-fen i 1) -4-[4- (4-melil- piperazi n-1-i Imelil) -fen il]-isoxazol-3-carboxi 1ico
Eli lamida de cido 5- (5-lerc-bulil-2, 4-d ih id rox i-fen i 1) -4-[4-( 4-melil-pi peraz in -1-i Imeli 1)-fen il]-isoxazol-3-carboxi lico
Eli lamida de cido 5- (5-lerc-bulil-2, 4-d ih id rox i-fen i 1) -4-( 4-pi perid i n-1-i Imelil-fen i 1) -isoxazol-3-carboxi lico
5
Elilamida de cido 5-(2,4-dihidroxi-5-isobulil-fenil)-4-( 4-piperidin-1-ilmelil-fenil)-isoxazol-3-carboxilico

Eli lamida de cido 5- (5-lerc-bulil-2, 4-d ih id rox i-fen i 1) -4-( 4-morfoli n-4-i Imeli 1-fen il)-isoxazol-3-carboxil ico
Eli lamida de cido 5- (5-lerc-bulil-2, 4-d ih id rox i-fen i 1) -4-( 4-d ieli laminomelil-fen i 1)- isoxazol-3-carboxi 1ico
Eli lamida de cido 3- (5-cloro-2, 4-d ih id roxi-fen il)-4- (4-morfoli n-4-i Imeli 1-fen i 1) -isoxazol-5-carboxi lico
Elilamida de cido 4-(4-dielilaminomelil-fenil)-5-(4,6-dihidroxi-Z -melil-bifenil-3-il)-isoxazol-3-carboxilico
10
Eli lamida de cido 4- (4-d ieli laminomelil-fen i 1)-5-( 4'-fl uoro-4,6-d i h id rox i-bifen i 1-3-il)- isoxazol-3-carboxi lico
Elilamida de cido 4-(4-dielilaminomelil-fenil)-5-(4,6-dihidroxi-bifenil-3-il)-isoxazol-3-carboxilico
Eli lamida de cido 5- (2'-fl uoro-4, 6-d ih id roxi -bifen i 1-3-il)-4-(4-pi rrol id i n-1- il meli I-fen il)-isoxazol-3-carboxil ico
Eli lamida de cido 5- (4, 6-d ih id rox i-bifen i 1-3-il) -4-( 4-morfol in -4-il melil-fen i 1)-isoxazol-3-carboxi lico
Eli lamida de cido 5- (2, 4-d ih id rox i-5-feneli 1-fen i 1) -4-( 4-morfoli n-4-il meli I-fen il)-isoxazol-3-carboxi lico
15
Isopropilamida de cido 5-(5-cloro-2,4-dihidroxi-fenil)-4-( 4-piperidin-1-ilmelil-fenil)-isoxazol-3-carboxilico

Elilamida de cido 4-(4-dielilaminomelil-fenil)-5-(5-elil-2,4-dihidroxi-fenil)-isoxazol-3-carboxilico
Eli lamida de cido 5- (5-elil-2, 4-di h id rox i-fen i 1) -4-[4-( 4-melil-piperazin -1-il meli 1) -fen i 1]- isoxazol-3-carboxi lico
Eli lamida de cido 5- (5-elil-2, 4-di h id rox i-fen i 1) -4- (4-morfoli n-4- i Imeli I-fen i 1)- isoxazol-3-carboxi lico
Elilamida de cido 5-(5-cloro-2,4-dihidroxi-fenil)-4-(4-dielilaminomelil-fenil)-isoxazol-3-carboxilico
20
Elilamida de cido 5-(5-cloro-2, 4-dihidroxi-fenil)-4-[4-(4-melil-piperazin-1-ilmelil)-fenil]-isoxazol-3-carboxilico

Eli lamida de cido 5- (5-cloro-2, 4-d ih id roxi-fen il)-4- (4-morfoli n-4-i Imeli 1-fen i 1) -isoxazol-3-carboxi lico
y las sales, hidratos y solvatos de los mismos.

23.
Un compuesto segn la reivindicacin 1 que es etilamida de cido 5-(2,4-dihidroxi-5-isopropil-fenil)-4-(4-
morfolin-4-ilmetil-fenil)-isoxazol-3-carboxlico, o una sal, hidrato o solvato del mismo.
25
24.
Un compuesto segn cualquiera de las reivindicaciones precedentes, para el uso en medicina humana o
veterinaria.
25. Una composicin farmacutica que comprende un compuesto segn cualquiera de las reivindicaciones 1 a 23,
junto con un vehculo farmacuticamente aceptable.
26.
30
Una composicin farmacutica segn la reivindicacin 25 en forma de una disolucin o suspensin del
compuesto en un vehculo fisiolgicamente aceptable estril, por ejemplo solucin salina acuosa.
27. Una composicin farmacutica segn la reivindicacin 26 en forma de una disolucin o suspensin del
compuesto en solucin salina acuosa estril.
28.
El compuesto segn cualquiera de las reivindicaciones 1 a 21 para el uso en el tratamiento del cncer.
101

Compuestos de Isoxazol Como Inhibidores de Las Proteínas de Choque Térmico

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OFICINA ESPAOLA DE

TRADUCCIN DE PATENTE EUROPEA

Nmero de solicitud europea: 04709273 .9

Fecha de presentacin: 09.02.2004

Nmero de publicacin de la solicitud: 1611112

Fecha de publicacin de la solicitud: 04.01.2006

Ttulo: Compuestos de isoxazol como inhibidores de las protenas de choque trmico

Fecha de publicacin de la mencin BOPI:

Fecha de la publicacin del folleto de la patente:

DE ELZABURU MRQUEZ, Alberto

Inhibidores Conocidos de HSP90

proteosoma. 17-Alilamino, 17-desmetoxigeldanamicina (17AAG) mantiene la propiedad de inhibicin de HSP90 que

para las propiedades de chaperona de HSP90.

clulas de cncer de mama (Chiosis et al., 2001).

La inhibicin de la actividad ATPasa de HSP90 impide la adquisicin de co-chaperonas y estimula la formacin de

Se ha demostrado que la inhibicin de la funcin de HSP90 provoca la degradacin selectiva de protenas de

en la que en cualquier combinacin compatible

R2 es (i) un grupo de frmula (lA):

en la que en cualquier combinacin compatible

(ii) un radical carboxamida; o

R3 es un grupo carboxilo, carboxamida o ster de carboxilo,

R es hidrgeno o un grupo alquilo C 1-C 6 o alquenilo C 2 -C 6 ,

R es hidroxi o carbocclico o heterociclilo sustituido opcionalmente,

en la que R3 representa un grupo carboxamida (tal como etilaminocarbonilo CH 3CH 2NHC(=O)-, o

Etilamida de cido 5-(2,4-dihidroxi-5-isopropil-fenil)-4-(4-etilaminometil-fenil)-isoxazol-3-carboxlico

Isopropilamida de cido 5-(2,4-dihidroxi-5-isopropil-fenil)-4-(4-morfolin-4-ilmetil-fenil)-isoxazol-3-carboxlico

Etilamida de cido 5-(2,4-dihidroxi-5-isobutil-fenil)-4-(4-piperidin-1-ilmetil-fenil)-isoxazol-3-carboxlico

Etilamida de cido 4-(4-dietilaminometil-fenil)-5-(4'-fluoro-4,6-dihidroxi-bifenil-3-il)-isoxazol-3-carboxlico

Etilamida de cido 5-(5-cloro-2,4-dihidroxi-fenil)-4-(4-dietilaminometil-fenil)-isoxazol-3-carboxlico

(i) un mtodo de tratamiento de enfermedades o afecciones sensibles a la inhibicin de la actividad de HSP90 en

5-[ 4-(4-Metoxi-fen il)-3-metil-isoxazol-5-il]-bifen il-2,4-d iol

* Tambin disponible comercialmente de Interbioscreen

disponible comercialmente de Enamine

<10 uM; 'B' = >10 uM

Le 2,56 minutos [M+Hf 402 (Tiempo de funcionamiento 3,75 mins)

4-[ 4-(4-Metoxi-fenil)-3-metil-isoxazol-5-il]-2,6-bis-( 4-metilpiperazi n-1-ilmetil)-benceno-1 ,3-diol

Esquema 2: Reaccin de Mannich

Esquema 3: Formacin del ster

Esquema 4: Sntesis de bencil resorcinol

Esquema 5: Reaccin de Heck y desproteccin con tri cloruro de boro

De forma similar, se prepar 4-[4-(4-metoxi-fenil)-3-metil-isoxazol-5-il]-6-estirilbenceno-1 ,3-diol (Ejemplo 24)

ster etlico de cido 4-(2,4-bis-benciloxi-5-clorofenil)-2-hidroxi-4-oxo-but-2-enoico

Etilamida de cido 5-(2,4-bis-benciloxi-5-clorofenil)-4-(4-metoxi-fenil)-isoxazol-3-carboxlico

Etilamida de cido 5-(5-cloro-2,4-dihidroxifenil)-4-(4-metoxi-fenil)-isoxazol-3-carboxlico

Se disolvi 5-(2,4-bis-benciloxi-5-cloro-fenil)-4-yodo-3-metil-isoxazoI (200 mg, 0,38 mmol), y cido 3-formilbenceno

Se mezcl 3-[5-(2,4-bis-benciloxi-5-cloro-fenil)-3-metil-isoxazol-4-il]-benzaldehdo (25 mg, 0,05 mmol) y morfolina

Se desprotegi 4-{3-[5-(2,4-bis-benciloxi-5-cloro-fenil)-3-metil-isoxazol-4-il]-bencil}-morfolina como se mostr

* Ensayo de Polarizacin de Fluorescencia

LCMS tR = 0,97, MS miz 303,5 [M+Hf

Etilamida de cido 5-(5-cloro-2,4-dihidroxi-fenil)-4-[3-(4-metil-piperazin-1-il)-fenil]-isoxazol-3-carboxlico

cido 4-[(2-metilsulfonil)-etilaminometil]-fenil bornico (intermedio para el Ejemplo 37)

Tiempo de retencin en LC 1,65 minutos [M+Hf 270 (Tiempo de funcionamiento 8 mins).

Etilamida de cido 5-(2,4-bis-benciloxi-5-cloro-fenil)-4-(3-cloro-fenil)-isoxazol-3-carboxlico

Se acoplaron etilamida de cido 5-(2,4-bis-benciloxi-5-cloro-fenil)-4-bromo-isoxazol-3-carboxlico (60 mg, 0,11

llev a la siguiente etapa.

A una disolucin de etilamida de cido 5-(2,4-bis-benciloxi-5-cloro-fenil)-4-(3-cloro-fenil)-isoxazol-3-carboxlico (36

* Ensayo de Polarizacin de Fluorescencia

Etilamida de cido 5-(2,4-bis-benciloxi-5-cloro-fenil)-4-(4-formil-fenil)-isoxazol-3-carboxlico

Se combin etilamida de cido 5-(2,4-bis-benciloxi-5-cloro-fenil)-4-yodo-isoxazol-3-carboxlico (preparada como en el

** preparado a partir de material de partida de etil resorcinol

* Ensayo de Polarizacin de Fluorescencia

***** preparado a partir del naftil aldehdo

2. HCI! Et:p ! EtOH

Se disolvieron 35 9 de 2,4-dihidroxiacetofenona (0,230 mol, 1 eq) en 500 mi de acetonitrilo. Se aadieron 79,5 9 de