PREPARACIN DE MEDIOS DE CULTIVO

OBJETIVOS

Preparar algunos medios de cultivo utilizados en el laboratorio de

microbiologa
Evaluar la calidad del proceso de esterilizacin de medios de cultivo
mediante indicadores fsicos y por control por lote
Valorar la calidad de los medios de cultivo a travs de evaluaciones
semicuantitativas de productividad y selectividad
Aplicar mtodos de asepsia bsicos para la realizacin del trabajo en el
laboratorio de microbiologa

MATERIALES Y REACTIVOS

Cajas de Petri
Balanza
Papel kraft
Frasco tapa rosca por 250 ml
Probeta
Esptula
Asa bacteriolgica
Cinta termoestable
Agua destilada
Gradilla
Mechero
Jabn liquido
Escobillones
Medio de cultivo deshidratado de salado manitol
Caldo Tetrationato
Agar EMB
Agar salado manitol
Agar nutritivo
Agar SS
Cepas en fase estacionaria de E. coli, S. aureus, Salmonella sp (en tubo de
caldo BHI y en cajas de agar selectivo)

PROCEDIMIENTO
Materiales de trabajo

Evaluacin del procedimiento de desinfeccin de manos (medida asptica bsica)

Manos sucias

Toma de muestra de
las manos estando
sucias

Manos limpias, toma

de muestras con
manos limpias

Manos sucias

Jabn (Intigym
Toma de muestra de
Manos limpias, toma
syndet) utilizado
las manos estando
de muestras con
para el lavado de
sucias
manos limpias
las manos

Evaluacin del proceso de esterilizacin

Procedimiento realizado por los compaeros del otro grupo, pero de igual manera
se evaluaron los criterios de control de calidad de la esterilizacin de los medios
de cultivo

Evaluacin de medio de cultivo liquido

Selectividad

Aprox.10 U.F.C.
microorganismo
deseado (Salmonella
sp)

+/- 100 U.F.C.

microorganismo no
deseado (E. coli)

Luego de las 24 horas

se debe revisar el
crecimiento

Se inoculo en caldo
Tetrationato

Productividad

Luego de las 24 horas

se debe revisar el
crecimiento
+/- 100 U.F.C.
microorganismo no
deseado (E. coli)

Se inoculo en caldo
Tetrationato

Evaluacin de medio de cultivo solido

Productividad y selectividad medio EMB

Microorganismo deseaso
(E.coli)

Inoculacion en el medio

Microorganismo no
deseado (S. aureus)

Inoculacion en el medio

Luego de las 24 horas se

debe revisar el
crecimiento

Productividad y selectividad de medio salado manitol

Microorganismo deseaso
(S. aureus)

Inoculacion en el medio

Microorganismo no
deseado (E. coli)

Inoculacion en el medio

Luego de las 24 horas se

debe revisar el crecimiento

PRE-LABORATORIO
1. Establezca diferencias entre medios de cultivo selectivos y medios no
selectivos
El medio de cultivo selectivo favorece el crecimiento de ciertas bacterias
contenidas en una poblacin polimicrobiana, facilitndoles nutrientes
necesarios para su crecimiento y conteniendo sustancias inhibidoras para
otros microorganismos.
El medio de cultivo no selectivo no contiene sustancias que inhiban el
crecimiento de ningn microorganismo.
2. Mencione 3 medios de cultivo selectivos
Agar salado manitol
Agar SS
Agar McConkey
3. Explique brevemente el mecanismo de accin sobre los microorganismos
del calor hmedo y calor seco
Calor hmedo; se fundamenta en la accin del calor transmitido por el
vapor saturado a presin superior a lo normal sobre los componentes
celulares, produciendo coagulacin proteica, ruptura de ADN y ARN,
perdida del material de bajo peso molecular, logrando as inactivacin del
microorganismo.
Calor seco; el mecanismo se basa en la oxidacin del aire seco caliente
que circula por convencin forzada a travs de los productos.
4. Defina cepa o clon y de ejemplos de la codificacin internacional para
algunas bacterias de acuerdo al tipo de coleccin
Conjunto de clulas homogneas que derivan de la reproduccin de una
clula inicial nica, seleccionada y aislada. Colonia pura de una bacteria.
CECT 516 (ATCC 8739) E.coli
CECT 4594 (ATCC 14028) Salmonella typhimurium
CECT 239 (ATCC 6538) S. aureus
CECT 231 (ATCC 12228) S epidermidis
CECT 111 (ATCC 9027) P. aeruginosa
5. Mencione al menos tres desinfectantes utilizados en el laboratorio de
microbiologa
Hipoclorito de sodio
Yodo
Perxido de hidrogeno
Permanganato de potasio

POST-LABORATORIO

FORMATO DE EVALUACIN DE MEDIO DE CULTIVO SOLIDO

Medio
de
cultivo
evaluad
o

Lote

Salado
manitol

VM574704
340

29/09/2014

EMB

VM982647
820

29/09/2014

Identificacin de cepa
(microorganismo deseado)

Fecha de
realizacin
de anlisis

Tipo

Identificacin de cepa
(microorganismo interferente)

Resultado (unidades)
(microorganismo
deseado)

Resultado (unidades)
(microorganismo
interferente)

Medio de
cultivo
conforme

Resp.

Cdigo

Genero/especie

Tipo

Cdigo

Genero/especie

Produc.

Selec.

Produc.

Selec.

Si

ATCC

6538

Staphylococcus
aureus

No

ATCC

8739

Escherichia coli

Saray Ortiz

ATCC

8739

Escherichia coli

ATCC

6538

Staphylococcus aureus

0,2

0,2

Saray Ortiz

FORMATO DE EVALUACIN DE MEDIO DE CULTIVO LQUIDO

Medio de
cultivo
evaluado

Lote

Fecha de
realizacin
de anlisis

Caldo
Tetrationato

VK620385
049

29/09/2014

Identificacin de cepa
(microorganismo deseado)

Identificacin de cepa
(microorganismo no deseado)

Medio de cultivo
selectivo (agar)

Tipo

Cdigo

Genero/especie

Tipo

Cdigo

Genero/especie

ATCC

14028

Salmonella
typhimurium

ATCC

6538

Escherichia coli

Produc.
U.F.C

Medio de
cultivo no
selectivo
(agar)

Selec. (cto
de m.o no
deseado)
Si

Agar SS

> 10 U.F.C Agar Nutritivo

Medio de
cultivo
conforme

No

Si

Resp.

No
Saray Ortiz

FORMATO DE EVALUCACION D EPROCESO DE ESTERILIZACION

Fecha de
vencimiento

Lote

Fecha de
preparacin
en el
laboratorio

Gramos

Fecha de
vencimiento
del medio de
Tipo
cultivo
preparado

Control de esterilizacin

Medio de
cultivo

Tiempo

Cinta

Biolgico

Incubacin

Salado
manitol

12/09/18

VM574704
340

29/08/14

21,6 gr

29/09/14

15 Lp

15 min.

121 C

Cambio

No

No
crecimiento

autoclave

Verificacin de esterilizacin

Responsable

Saray Ortiz

NOTA:
Cinta

Incubacin

Cinta inicialmente con lneas blancas,

luego del proceso de esterilizacin
cambiaron la tonalidad a negro.

Luego de someter a incubacin no

se evidencio crecimiento luego de
transcurridas 24 horas

ANLISIS DE RESULTADOS
Evaluacin del procedimiento de desinfeccin de manos (medida asptica
bsica)
En los resultados se evidenciaron diferencias en los tubos, los que
contenan las muestras de manos sucias, se presentaban aspecto turbio,
estaban opalescentes y se notaba una nata en su superficie y en los tubos
de las muestras de manos limpias si haba un aspecto turbio pero en una
escala muy inferior al que presentaba cuando las manos se hallaban
sucias, pero no se presentaba nata y era mucho mas transparente.
Evaluacin del proceso de esterilizacin
La cinta presento el cambio esperado que se sospechaba iba a realizar, en
cuanto a la incubacin el medio no presento crecimiento de ninguna clase
de patgenos
Evaluacin de medio de cultivo liquido

En cuanto a la productividad del caldo de Tetrationato, esta se realizo en un

agar SS en donde se evidencio la presencia de ms de 10 U.F.C. del
microorganismo deseado (Salmonella sp) y a la selectividad, en esta no se
presento crecimiento en el medio nutritivo de ningn microorganismo.
Evaluacin de medio de cultivo solido
Para el EMB el medio es productivo porque el ICA del microorganismo
deseado (E. coli) fue de 5 y es selectivo porque el microorganismo no
deseado (S. aureus) presento un ICA de 0,2 (este resultado se lo agrego al
tiempo excesivo de incubacin).
Para el Salado Manitol es productivo porque el ICA del microorganismo
deseado (S. aureus) fue de 5 y es selectivo porque el microorganismo no
deseado (E. coli) presento un ICA de 0.

BIBLIOGRAFA
Coleccin internacional bacteriana. 2014. En internet: www.sanilabo.com /
http://www.sanilabo.com/pdf/pdf_industria/02.Cepas.pdf
Medios selectivos. 2014. En internet:
http://perso.wanadoo.es/sergioram1/medios_de_cultivo.htm
Mecanismo de accin calor hmedo y seco. 2014. En internet:
http://www.fcn.unp.edu.ar/sitio/tecnofarma/wp-content/uploads/2013/08/Esterilizaci
%C3%B3n-por-calor.pdf