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20/11/13

Las
funciones
especficas
metabolismo son 4 :

CO2

del

autotrofas
1. Obtencin de energa qumica de las molculas
combustibles o de la luz solar absorbida

Glucosa
heterotrofas
Luz como
fuente de
energa
Dadores de
electrones a los
que oxidan p/
obtener su
energa

fototrofas

2. La conversin de los principios nutritivos exgenos


en sillares de construccin o precursores de los
macromoleculares de la clula.

quimiotrofas

3. El ensamblaje de estos materiales para formar


protenas, cidos nucleicos, lpidos y otros
componentes celulares.
4. La formacin y degradacin de las biomolculas
necesarias para las funciones especializadas

20/11/13

Energa solar

Fotosntesis
Aerobios

Organismos
heterotrofos

Energa qumica
(ATP, NADPH, Glucosa)

Anaerobios
acta
Facultativos

Concentracin

transporte

O2 agente reductor
alguna otra molcula
como agente reductor
Puede usar O2 cuando dispone de l.

biosntesis

Energa disipada
(calor, entropa)

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Ciclo del nitrgeno

Ciclo del carbono y del Oxgeno


glucosa

Aminocidos

O2
Energa solar

Plantas
superiores
Clulas
Heterotrofas

Clulas
fotosintticas

H 2O

Animales
superiores

nitrato

Bacterias
fijadoras de
nitrgeno

Amoniaco, urea

Bacterias
Nitrificantes
(Nitrobacter)

Nitrgeno
atmosfrico

Bacterias
Nitrificantes
(Nitrosomonas)

CO2
nitrito

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Que es catabolismo?
Es la fase degradativa del metabolismo de las molculas
relativamente grandes

nutritivas

(glcidos, lpidos y protenas ). stas se degradan

para producir molculas ms pequeas tales como cido lctico, cido


actico, CO2, urea o amoniaco.
Esta va a acompaado de la generacin de energa qumica en forma de ATP
(tri fosfato de adenosina).

Que es el anabolismo?
Es la fase constructiva de o biosinttica del metabolismo, tiene lugar
biosntesis enzimtica de componentes moleculares de las clulas, como el
caso de cidos nucleicos, protenas, polisacridos y lpidos.
La biosintesis precisa del consumo de energa el cual ha sido generado
durante el catabolismo.

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Glucosa

Gluclisis
Ruta de Embden-Meyerhof
Prcticamente todas las clulas realizan gluclisis
10 reacciones iguales en todas las clulas - diferente
velocidad
dos fases:
Primera fase: conversin de la glucosa a dos G-3-P
Segunda fase: se producen dos piruvatos
Productos: dos piruvatos, ATP y NADH
Tres posibles destinos para el piruvato

Gluclisis
10 reacciones
sucesivas

2 piruvatos
Anaerobiosis

Aerobiosis

Anaerobiosis
- CO2

2 etanol + CO2

2 acetil-CoA

Fermentacin
alcohlica
levaduras

4CO2 + H2O

2 lactato
Fermentacin lctica
Contraccin
muscular vigorosa,
eritrocitos, algunos
microorganismos.

Respiracin:
Animales, plantas y
microorganismos
aerobios

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Destino de NADH y Piruvato


Aerbico o anaerbico?

Piruvato tiene alta energa - dos


posibles vas:
aerbica: ciclo del cido ctrico
anaerbico: la LDH produce lactato

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Balance energtico de la
gluclisis
Glucosa + 2 ATP + 2 NADH + 2Pi+ 4ADP + 2NADH+ 2 H+
2 lactato + 2ADP + NADH + 2H+ + 4ATP + 2NAD2 + 2H2O

Glucosa + 2Pi+ 2ADP 2 lactato + 2 ATP + 2 H2O

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Metabolismo
de
Hexosas

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CAT
Degradacin del
glucgeno

Piruvato (de hecho acetato)de la


gluclisis de degrada a CO2
Se produce algo de ATP
Se produce ms NADH
NADH se utiliza para sintetizar ms ATP
en el transporte de electrones y
fosforilacin oxidativa

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Precursores
biosintticos

Energa
(ATP,NADH)

Energa

Protenas
enzimas

cidos nucleicos
(RNA, DNA)

polisacridos
lpidos

Precursores
biosintticos
Energa
Producto
(metabolitos, aminoacidos, penicilina,etc

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Culturas antiguas: fermentacin alcohlica y fermentacin aerobica en la


elaboracin de pan.

Crecimiento microbiano

A mediados del siglo 19 Pasteur realiz fermentacin alcohlica con levaduras.


Control de fermentaciones de aerbicas y anaerbicas
La biotecnologa avanz con pasos agigantados durante la segunda guerra
mundial.
Se desarrollo la produccin de antibiticos, cido lctico, actico y ctrico.
Desarrollo de bioreactores automatizados para el control de variables como pH,
temperatura, oxigenacin.
Uso de nuevas tcnicas biotecnolgicas en la optimizacin de procesos: ingeniera
gentica,

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Diferencias entre clulas eucariotas y procariotas


Eucariota

Citoplasma

Membrana
nucleolar

ADN

Diferencias entre procariotas y eucariotas

Mitocondria

Aparato de Golgi
Membrana
ciplasmtica

Pared celular
Membrana citoplasmtica

Retculo
endoplsmico
Plsmido
(ADN extracromosmico)

Ribosomas

Pared celular
(clulas vegetales)

ADN cromosmico

Citoplasma

Mesosoma

Ribosomas

Procariota

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Microorganismos
Bacterias
Levaduras
Hongos
Tejido celular

Factores que regulan el crecimiento


microbiano

Frecuencia de td

Diferencias significativas entre cada una de los organismos

Nutrientes
Condiciones fsicas: Temperatura,
pH, presin osmtica, radiacin.

bacterias levaduras

moho

protozoarios

Tiempo de generacin
Tiempo de duplicacin td (min)

El control del crecimiento de Microorganismos es importante


para:controlar contaminaciones evitando la competencia por el sustrato

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Factores que afectan la sobrevivencia


y desarrollo microbiano
Intrnsecos
Nutrientes disponibles
pH
Eh (potencial de xidoreduccin)
actividad de agua
Adaptacin al sustrato
Estado fisiolgico
Asociaciones microbianas

Factores que afectan la sobrevivencia y


desarrollo microbiano
Extrnsecos
Temperatura
Composicin de la
atmsfera
Humedad relativa

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CO2
autotrofas

Glucosa
heterotrofas

Luz como fuente


de energa

fototrofas

Elementos
nutrientes
C,H,O,N,S,P
Metales
Vitaminas

Es necesario que el medio


de
cultivo
de
los
microorganismos contenga
todos
los
elementos
Hidratos
constitutivos de la masa
de
PERO celular
en
sus
Carbono
proporciones
requeridas
principalmente
por
su
composicin
interna.
Composicin de elementos
constituyentes de clulas microbianas
elemento

Dadores de electrones a
los que oxidan p/
obtener su energa

quimiotrofas

% del peso seco

20

50

14

Mg

0.5

Mn

0.1

Ca

0.5

Fe

0.2

Co
Zn

Factores intrnsecos del crecimiento


microbiano

AW
0.995 - 0.92 mayora de bacterias patgenas
0.99 - 0.90 mayora de bacterias
deterioradoras
0.95 - 0.91 cocos, lactobacilos, levaduras
< 0.85
levaduras deterioradoras
< 0.85
hongos, S aureus
0.80 - 0.75 mayora de bacterias halfilas
0.75 - 0.65 hongos xerfilos
0.65 0.60 lavaduras osmfilas

0.03

Cu
Mo

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Factores extrnsecos
Temperatura: alta
resistencia a las temperaturas altas
gram negativas > levaduras > hongos >
cocos gram positivos >enterococos
esporas de hongos > esporas de
bacterias

Temperatura Optima
La temperatura ptima de crecimiento
est en el tope del rango de
crecimiento.
La muerte se desenlaza arriba de la
temperatura mxima por inactivacin
de las enzimas.
A los 5C se detiene el crecimiento de
la mayora de los microorganismos

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Factores extrnsecos
Composicin de la atmsfera
nitrgeno, oxgeno y dixido de carbono
Efecto del CO2 sobre algunos mos
ninguno: Streptococcus, lactobacilos,
levaduras
ninguno o dbil: levaduras
Inhibitorio: Salmonella, Pseudomonas,
Bacillus
Estimulante: C. Jejuni, Brucella,
Lactobacillus

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Requerimientos de Oxgeno
Microorganismos crecen se reproducen y segregan materiales biolgicos tiles
para el hombre (principio bsico de la biotecnologa).

Aerobios Obligados requiren O2


Anaerobios Facultativos Pueden
usar O2 ,pero pueden crecer sin el.

Microorganismos
Elementos
Bacterias
nutrientes
Levaduras
+ C,H,O,N,S,P +
Hongos
Metales
Tejido celular
Vitaminas

Condiciones
ambientales
pH,temperatura,
O2 disuelto. Etc.

fermentacin

microorganismos + CO2

Productos
+ intra y extracelulares

Anaerobios Obligados Mueren en la


presencia del O2

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FERMENTACIN
Cultivo discontinuo (cultivo en batch)
Los microorganismos crecern en un medio de cultivo el cual tiene los nutrientes
necesarios en una forma disponible y con los factores ambientales necesarios.
Los microorganismos estn limitados a la concentracin de los

nutrientes. Los

Mos crece hasta que se agota el nutriente esencial y de igual manera se presenta
la acumulacin de sustancias txicas.

CRECIMIENTO MICROBIANO.
En un medio de cultivo los microorganismos realizan dos funciones
bsicas:
1. Crecer
2. Reproducirse.
Sin embargo, el trmino crecer en general se refiere a las dos funciones

La fermentacin es un proceso catablico de oxidacin incompleta,


totalmente anaerbico, siendo el producto final un compuesto orgnico.
Estos productos finales son los que caracterizan los diversos tipos de
fermentaciones.

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TIPOS DE BIORREACTORES
CULTIVO POR LOTE:
Representa un sistema cerrado
Se agrega en un inicio todos los nutrientes del medio
Solo se agrega oxgeno y controladores de pH y espuma

Sistema de agitacin
Aire Estril

Vasija del cultivo

Cultivo

20

20/11/13

21

20/11/13

22

20/11/13

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20/11/13

Cuales son las diferencias?

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Donde:
X es la concentracin de clulas (mg cm3)
T es el tiempo de incubacin (h-1)

= es la velocidad especifica de crecimiento


Si integramos esta ecuacin tenemos:
Donde:
X0 es la concentracin de clulas en el tiempo 0.
Xt es la concentracin de clulas en el tiempo
despus de un tiempo de t (hrs).
Aplicando a la ecuacin logaritmos naturales queda de la siguiente forma:

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El tiempo de duplicacin de los microorganismos se describe por td y se hace


median simple calculo algebraico. Si a un medio se inoculara a travs de una solo
clula se duplicara de la forma siguiente:

RENDIMIENTO

1,2,4,8,16,32,64,128 .etc
Entonces:

Entonces si t = td y Xt = 2X0
Tenemos:

Entonces:

Donde :
X = concentracin de clulas
Y = factor de rendimiento para el sustrato limitante
Sr = es la concentracin original en el medio

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20/11/13

3
s

2
1

Concentracin

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20/11/13

problema

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A una sola concentracin

Sustrato 2
s
max

Sustrato 1

2
1

Ks Ks
Concentracin

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Precio glucosa

7 pesos kilo

volumen de
reactor 5000
litros

precio xilosa 3.5 pesos kilo

Tiempo (h)

problema

0
5
7
9
11
13
16
19
21
23
25
26
28
30

Biomasa x (gL) Xilosa (g/L)


0.151
0.173
0.231
0.322
0.504
0.760
1.000
1.322
1.533
1.630
1.795
1.889
1.865
1.865

19.50
17.82
16.42
15.89
15.35
15.01
14.67
14.28
13.88
13.50
13.11
12.49
11.95
11.48

Tiempo (h)
0
5
7
9
11
13
16
19
21
23
25
26
28
30

biomasa Glu (g/L) glucosa (g/L)


0.153
0.182
0.238
0.457
0.697
0.985
1.345
1.667
1.889
1.89
1.893
1.896
1.899
1.902

19.5
17.17
15.69
14.21
13.5
12.3
11.6
10.7
9.98
9.55
9.12
9.03
8.91
8.83

30

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De la ecuacin de Monod se pueden considerar los recprocos para obtener la


expresin:

La concentracin por sustrato esta


representada por la ecuacin de
Monod:

Una grfica de 1/m contra 1/S produce una lnea recta con pendiente Ks/
mmax y abscisa al origen -1/Ks y ordenada al origen:

1/

max

Ks/max

1/max
-1/Ks
Ks

1/S

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Teora de la pelcula

Agitacin y aireacin
Transferencia de masa: Se produce en mezclas que
contienen diferentes concentraciones locales.
Difusin molecular: Es el movimiento de las
molculas de los componentes de una mezcla,
debido a la diferencia de concentraciones existentes
en el sistema.

Fase lmite
Fase
Gas
Fase
Acuosa
CA1

CA1

CA1i

a
Concentracin
de A, CA

CA2i

CA2

Direccin de la
transferencia de masa
Distancia, y

CA2
Pelcula Gaseosa

Pelcula acuosa

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Consumo de oxgeno de cultivos celulares

Velocidad de transferencia de masa

TRANSFERENCIA DE OXGENO DESDE LAS BURBUJAS DE GAS A


LAS CLULAS

Q0

La velocidad de transferencia de masa es el tiempo que le tomar en llegarle a


las clulas los requerimientos necesarios para que estas se desarrollen,
en caso muy particular O2
Interfase
lq-sol
Pelcula
lquida

Lugar de
reaccin del
oxgeno

(VII)

(VIII)

(VI)
(V)
Burbuja
de gas

(IV)

Clula individual

(III)
(I)

Agregado celular

(II)
(IV)
Clula individual
Pelcula
lquida

Interfase gaslquido

Donde:
CAL Es la concentracin de oxigeno disuelto (mmol/dm-3)
CAL Es la concentracin saturada de oxigeno disuelto (mmol/dm3)
t
Es tiempo
KL
Es el coeficiente de transferencia de masa (cm/h)
a
es el rea interfacial gas/liquido por unidad de volumen (cm)
dCL/dt es la velocidad de transferencia de masa o de oxigeno.
(mmol/
hdm3)
Q02

Tasa especifica de consumo de oxigeno ( mmol O2/g de clulas-h)

Lugar de
reaccin del
oxgeno

(V), (VI),
(VIII)
Pelcula
lquida

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DETERMINACIN DEL kLa

Debido a la dificultad que existe para predecir el kLa


en bioreactores mediante correlaciones, se
determina experimentalmente.
Existen mtodos principales para la determinacin
del kLa y son:
1.
2.
3.
4.

Mtodo de eliminacin de gas

Mtodo de eliminacin de gas


Mtodo del balance de oxgeno
Mtodo dinmico
Mtodo de oxidacin del sulfito de sodio.

Los mtodos tienen sus dificultades y exactitudes,


sin embargo el ms utilizado por su versatilidad es
el mtodo dinmico.

Cuando C1=0 y t1=0

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Mtodo de eliminacin de gas

Mtodo de eliminacin de gas


o mtodo no fermentativo

a 100 rpm
DO(%)

Cg*-CL

Ln(Cg*-CL)

18.1
30.7
45.3
57.2
68.4
74.7
79.2
80.5
84.6
88.7
91.6
94.7
95.8
96.3
96.3

81.2
69.2
54.7
42.8
31.6
25.3
20.8
19.5
15.4
11.3
8.4
5.3
4.2
3.7
3.7

4.40
4.24
4.00
3.76
3.45
3.23
3.03
2.97
2.73
2.42
2.13
1.67
1.44
1.31
1.31

5.00
4.50
4.00

ln(Cg*-CL)

Jempo
(min)
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15

3.50

Pendiente = -Kla

3.00
2.50
2.00

y = -0.2367x + 4.6993
R = 0.98878

1.50
1.00
0.50
0.00
0

10

12

14

16

Tiempo (min)

Si la pendiente es = a -0.235 entonces tenemos:


Kla= -(-0.235)*60= 14.1 /h

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Mtodo de eliminacin de gas


o mtodo no fermentativo

Cg*-CL

Ln(Cg*-CL)

1
2
3
4
5
6
7
8

48.2
80.5
91.8
93.5
95.9
96
96.2
96.2

51.8
19.5
8.2
6.5
4.1
4
3.8
3.8

3.95
2.97
2.10
1.87
1.41
1.39
1.34
1.34

4.50
4.00
3.50
3.00
2.50
2.00
1.50
1.00
0.50
0.00

a 600 rpm

tiempo (min)

10

/empo
(min)

DO(%)

Cg*-CL

Ln(Cg*-CL)

66.8

33.2

3.50

96.4

9.6

2.26

93.8

6.2

1.82

95.1

4.9

1.59

95.7

4.3

1.46

95.7

4.3

1.46

ln(Cg*-CL)

DO(%)

ln(Cg*-CL)

A 300 rpm
/empo
(min)

4.00
3.50
3.00
2.50
2.00
1.50
1.00
0.50
0.00
0

4
tiempo (min)

De cuanto es la Kla =20.7 h-1


De cuanto es la KLa

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Mtodo del balance de oxgeno

Mtodo del balance de oxgeno

Na= consumo de oxigeno

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Mtodo dinmico

Mtodo dinmico

Este mtodo considera un balance de masa del oxgeno en estado no


estacionario. Existen tambin una gran variedad de versiones de este mtodo
sin embargo se mencionar el ms comn.
Como se observa en la figura, en un determinado instante t0 el caldo es
desoxigenado ya sea por la introduccin de nitrgeno o deteniendo el flujo si el
cultivo consume oxgeno

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Mtodo dinmico

Cg*

Si graficamos C (CL) versus dC/dt se obtiene la figura que se presenta en donde la


pendiente es -1/KLa Y la interseccin con el eje C nos da Cg*

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