Laboratorio de Bioqumica Metablica.

Semestre: 5 A
Equipo 6:
Gabriel Snchez Kristal Ivonne
Garca Martnez Alfredo Ivn
Juan Carlos
Prez Ramrez Oscar Enrique
Siordia Paz Yuneisi

INTRODUCCIN
La glucosa es una importante fuente de energa, especialmente para el cerebro,
que consume aproximadamente el 30% de la glucosa que ingerimos. La cantidad
de glucosa en sangre es controlada por el sistema endcrino, concretamente el
pncreas. El pncreas endcrino vierte al torrente sanguneo dos hormonas: La
insulina y el glucagn. La insulina acta como una llave que abre las puertas de
las clulas y permite la entrada de la glucosa. Sin insulina, la glucosa no puede
penetrar en las clulas y permanece en el flujo sanguneo. Como consecuencia,
los niveles de azcar en sangre son mayores de lo normal. Cuando la glucosa en
sangre est muy baja, se secreta glucagn que mantiene los niveles de glucosa
en sangre. De tal forma que la insulina permite la degradacin de la glucosa y el
glucagn la evita.
La diabetes es la causa ms comn del aumento anormal del azcar en la sangre.
La gente que sufre de diabetes no puede generar o responder a la insulina
correctamente. Esto significa que deben controlar muy de cerca los niveles de
glucosa y seguir el plan que le indica el mdico para controlar su enfermedad, el
cual incluye dieta, medicamentos (como inyecciones de insulina) y ejercicio fsico
para mantener el azcar en sangre dentro de un nivel normal.
Los valores normales de glucosa en sangre son entre 70 y 110 mg/dl. Valores ms
altos se conoce como hiperglucemia y si son ms bajos se conoce como
hipoglucemia.
La determinacin de glucosa sangunea es una prueba muy frecuente en
bioqumica y se puede llevar a cabo tanto por mtodos qumicos como
enzimticos, siendo estos ltimos los ms especficos. Hay dos tipos de mtodos
qumicos:
a) Reductimtricos: que se basan en la capacidad reductora de la glucosa.
Debido a la presencia en la muestra de otros compuestos reductores, estos
mtodos dan cifras superiores a las correspondientes a la glucosa
verdadera.
b) Furfurlicos: se basan en la capacidad de la glucosa para formar furfural al
sufrir deshidratacin en un medio cido. Un ejemplo es el mtodo que
emplea o-toluidina.
En cuanto a los mtodos enzimticos:
a) Mtodo de la hexoquinasa: emplea las enzimas hexoquinasa y glucosa-6fosfato deshidrogenasa. Por cada molcula de glucosa se forma una de
NADPH, que puede medirse espectrofotomtricamente a 340 nm. Es el
mtodo de referencia recomendado por las organizaciones internacionales.

b) Mtodo de glucosa oxidasa y peroxidasa (GOD-POD): es el que se utiliza en

esta prctica para medir los niveles de glucosa sangunea de ratas diabticas
y controles.
OBJETIVO:
Determinar el consumo de glucosa en clulas sanguneas.
FUNDAMENTO:
Uno de los mtodos ms utilizados para la determinacin de glucosa, se basa en
la reaccin catalizada por la enzima glucosa oxidasa, que a partir de la glucosa y
oxgeno molecular produce cido glucnico y perxido de hidrogeno.

El perxido de hidrgeno se elimina mediante la accin de una segunda enzima, la

peroxidasa, que en presencia de fenol y 4-aminofenazona da lugar a un
compuesto coloreado. El fenol-ampirona es un aceptor cromognico y provoca
una oxidacin del perxido. La intensidad del color se mide fotomtricamente y es
directamente proporcional a la cantidad de glucosa presente en la muestra. El
rango fotomtrico debe estar entre 500 y 525nm.
Esta reaccin se conoce como acoplada y se da de la siguiente manera:

La determinacin enzimtica con la glucosa oxidasa es la nica prueba especfica

para medir la glucemia.

Para convertir los valores de la absorbancia dados por el espectrofotmetro a los

valores reales de la glucosa se usa la siguiente frmula.

MATERIALES:

Kit de determinacin de glucosa

Material para extraer sangre:
a) Tubo de extraccin rojo
b) Aguja vacutainer.
c) Soporte vacuitainer
d) Torniquete
e) Torundas con alcohol.
12 tubos de ensaye
3 cubetas de 1.0 cm de paso de luz
Espectrofotmetro
Centrfuga
Bao Mara.

El kit cuenta con los siguientes reactivos:

PROCEDIMIENTO
Para la preparacin del reactivo A: (este procedimiento no fue realizado por ningn
miembro del equipo, sin embargo es importante mencionar su preparacin).
1) Disolver el contenido de un vial de R2 Enzimas en un frasco de R1
Tampn.
2) Tapar y mezclar suavemente hasta disolver su contenido.
Procedimiento realizado en la prctica:

1)
2)
3)
4)

Extraer una muestra de sangre.

Esperar de 15-20 minutos a que la sangre coagule
Centrifugar 5 minutos de 1500-2000 r.p.m (se usara el plasma)
Disponer 3 tubos de la siguiente manera:

TUBO

Blanco

Estndar

Muestra

1 ml

1 ml

1 ml

SUSTANCIA

Reactivo A
Solucin
estndar
(patrn)

10 l

Muestra (suero)

10 l

5) Incubar los 3 tubos en el bao Mara a 37C por 5 minutos

6) Leer la absorbancia (As) del patrn y de la muestra frente al blanco de
reactivos a 505 nm.
7) Repetir los pasos 4-6 despus de 10, 20 y 30 minutos.
8) Calcular la concentracin de glucosa usando la frmula correspondiente.

RESULTADOS
Tiempo
0 minutos
10 minutos
40 minutos
Tiempo
minutos
0
10
40

As Glucosa
0.325 A
0.264 A
0.253 A
[glucosa]
mg/dl
104.50
84.88
81.35

[glucosa]
mmol/l
5.799
4.711
4.515

concentracin de glucosa
7
6 5.8
5
4

4.71

4.52

mmol / l 3
2
1
0

10

40

tiempo (minutos)

Fig: 1: Grfica de la concentracin de glucosa con respecto al

tiempo. Se incluyen todos
los datos. El valor
correspondiente a los 10 minutos se realiz con suero
separado del tubo original de la muestra sangunea, por tal
razn solo representa una degradacin de la glucosa mas no
un consumo por parte de los eritrocitos, es por consiguiente

Concentracin de glucosa
7
6

5.8

4.52

4
mmol / l 3
2
1
0

40
Tiempo (minuto)

ANALISIS Y
DISCUSIN DE RESULTADOS.
1)

Fig. 2: Grfica de la concentracin de glucosa con respecto al

Describe
la gliclisis
y explica
tiempo. Solo
con el valor
inicial yporque
final. es una va de degradacin

incompleta. Apyate haciendo un esquema de la ruta.

La glicolisis es una va de degradacin incompleta ya que la

degradacin del piruvato contina con su transformacin a
acetil CoA y de ah al ciclo de Krebs o bien se transforma el
piruvato a lactato y entra al ciclo de Cori.
2) Explica cmo se enlaza la gliclisis con la fermentacin lctica, anota las
reacciones. Indica porque se dice que la gluclisis es una ruta anaerobia

Glucosa

NAD

Etanol
AcetaldehdoANAEROBIA
NAD
NADH
CO

Piruvato
Lactato

NADH

NAD
NADH

Oxidacin
posterior
Acetil
CoA

CO

3) Con base a los resultados obtenidos de las grficas podemos

decir que, sin lugar a dudas hubo una disminucin de la
concentracin de glucosa con el paso del tiempo. Algo que se
puede observar y que resulta interesante es que el principal
motivo de la disminucin de la concentracin de la glucosa no es
tanto por el consumo de los eritrocitos, sino mas bien por la
degradacin que tiene con el paso del tiempo. Esto se logra
apreciar al comparar la pendiente de las dos grficas, es decir,
en la figura 1 se puede notar un descenso bastante abrupto de la

concentracin entre el tiempo inicial y a los 10 minutos. Sin

embargo de los 10 minutos a los 40, la disminucin es menos
abrupta.
Aqu es importante destacar que los datos de
absorbancia correspondientes a los 10 minutos se realizaron con
una muestra de suero separado del tubo original; esto nos lleva
a pensar que si a los 40 minutos hubiramos utilizado de ese
mismo suero separado, se observara una grfica con una
pendiente mayor a la que realmente se observ.
El motivo de la poca disminucin de la glucosa por parte de los
eritrocitos se debe a que stos no poseen gran cantidad de
organelos, mucho menos mitocondrias y por consiguiente no
llevan a cabo la degradacin de glucosa hasta CO Y HO,
adems de que el transporte y liberacin de oxgeno y dixido de
carbono es un proceso pasivo que no requiere energa. Sin
embardo si tienen un consumo de ATP, para otros procesos
necesarios para mantener la vitalidad de la clula. Dichos
procesos ocurren por otras vas, por ejemplo la va de Embden
Meyerhof, entre otras.

CONCLUSIONES
Tras el anlisis de los resultados podemos concluir que la glucosa se
degrada con el paso del tiempo, sin embargo tambin es,
principalmente, consumida por las clulas para la conversin a ATP.
Sin embargo el objetivo de la prctica no era comprobar esto, sino
mas bien observar el consumo de glucosa de los eritrocitos, objetivo
que no se cumpli en su totalidad por no poner suficiente atencin al
momento de realizar la prctica. El dato final fue posible obtenerlo ya
que no se separ todo el suero que haba en el tubo. Esto nos deja la
enseanza de que si bien se aprende bastante de los errores, es
necesario tambin evitar cometerlos y ser ms cuidadosos al realizar
las prcticas de laboratorio y an ms cuando se labora en un
laboratorio de anlisis clnicos.

BIBLIOGRAFA:
Manual de auxiliar de farmacia. Mdulo III. Farmacia Prctica.
Pg. 286-287.
http://kidshealth.org/parent/en_espanol/medicos/test_glucose_es
p.html#
http://es.scribd.com/doc/22632512/1-Determinacion-Cuantitativade-Glucosa-en-suero
Battaner Arias, Enrique; Biomolculas. Una introduccin
estructural a la bioqumica. Ediciones Universidad Salamanca;
1 edicin. (2012). Pg. 93-94.
Remington Gennaro, Alfonso, Farmacia, Ed. Medica
Panamericana, 2 edicin (2003). Tomo 1. Pg. 657

http://es.wikipedia.org/wiki/Eritrocito#Metabolismo_energ.C3.A9ti
co_del_eritrocito