Capitulo+10 +diseño+de+biorreactores

Aprovechamiento de la biomasa para uso energtico
CAPITULO X. DISEO DE BIORREACTORES

Un gran nmero de tratamientos qumicos de los distintos tipos de biomasa para
producir biocombustibles lquidos y gaseosos, tales como etanol, biodiesel y biogs,
estn basados en procesos microbianos de degradacin de la materia orgnica. El
dominio del proceso, su control y diseo pasa por tener conocimientos de biorreactores.
En este captulo se abordan todos los aspectos tcnicos de las instalaciones orientados al
proyecto de ingeniera y control del proceso industrial, tales como
CLCULO DE FLUJOS Y TIEMPOS DE RETENCIN
Anlisis de la cintica de procesos qumicos y microbiolgicos

Dimensionado de bombas y conexiones
Sistema de inoculacin
DISEO SISTEMA DE AIREACIN EN PROCESOS AEROBIOS
Control de la aireacin
Dimensionado del compresor
Filtros y Sparger
Dimensionado de turbinas y potencia de agitacin

Diseo del sello mecnico
Determinacin de la resistencia de los materiales para soportar los esfuerzos y

cargas en el biorreactor
Condiciones de unin de piezas y sus propiedades
Acabado superficial de los materiales
DIMENSIONADOSISTEMAS DE AGITACIN
CLCULO MECNICO DEL RECIPIENTE
DISEO DEL SISTEMA DE CONTROL TRMICO DEL REACTOR
Sistemas de calentamiento
Sistemas de refrigeracin
DISEO DEL SISTEMA CONTROL DE pH
DISEO DEL LIMPIEZA Y ESTERILIZACIN
Esterilizacin qumica
Cleaning In Place Technology (CIP)
Control del sistema
Instalaciones para desinfeccin de tanque con calor
Estos aspectos no slo son tiles y aplicables para la produccin de biocombustibles,

sino se pueden aplicar tambin a la industria alimentaria, a la industria farmacutica, a
la industria cosmtica, depuracin de aguas y lodos residuales, y biorrefineras
industriales.
1. Fundamento del funcionamiento del biorreactor

Se define como reactor al recipiente donde ocurre un cambio en la composicin de las
sustancias de alimentacin a travs de una reaccin qumica. Las sustancias iniciales se
denominan reactivos, a las finales productos. Dentro de los reactores debemos distinguir
los reactores biolgicos o biorreactores como el recipiente donde las reacciones que
se producen estn vinculadas al metabolismo de seres vivos, generalmente el
crecimiento de clulas.
1
Durante su crecimiento las clulas secretan sustancias que pueden ser tiles para el ser
humano, como alcoholes combustibles, antibiticos, o sustancias qumicas de aplicacin
agrcola o industrial. Para obtener esas sustancias se hacen crecer las clulas deseadas
en un biorreactor, para ello se le deben proporcionar las condiciones ptimas en cuanto
a alimento, eliminacin de inhibidores, eliminacin de competencia (a travs de
desinfeccin previa), condiciones determinadas de temperatura y pH. Tras la produccin
de la sustancia deseada, sta queda diluida en el caldo del biorreactor, por tanto su
extraccin pasa por un proceso de destilacin, o purificacin del fluyente.
En microbiologa a la cantidad o concentracin de microorganismos en el biorreactor se
denomina biomasa. En este contexto no hay que confundir el trmino biomasa
(microorganismos) con el tipo de materia prima que se desea procesar, que en el mbito
de la bioenerga tambin se denomina biomasa pero que en el mbito de la
microbiologa se denomina sustrato.
En cuanto a la alimentacin, los microorganismos precisan tres tipos de sustancias
principales: una fuente de carbono, una fuente de nitrgeno y, en su caso, oxgeno (en
reacciones aerobias). Para determinar cuanta cantidad de alimento es necesario y cuanto
producto se puede obtener en un determinado proceso, se puede partir de la reaccin
estequiomtrica del mismo. Los microorganismos pueden ser analizados en cuanto a su
composicin elemental de carbono C, hidrgeno H, oxgeno O y nitrgeno N,
obteniendo su frmula emprica CHxOyNz. Existen ya numerosas referencias en cuanto
a la composicin elemental de los microorganismos ms comunes, como se muestra en
la Tabla 1. Tambin debe ser conocida la frmula del sustrato y del producto secretado
durante su crecimiento. De acuerdo a las composiciones del microorganismo, sustrato, y
productos se puede escribir la ecuacin estequiomtrica general como se muestra en (1),
donde no se incluyen todos los elementos del medio de reaccin, slo aquellos que se
consideran limitantes, que suelen ser la fuente de C, el O2 y la fuente de N, aunque
pueden haber otros.
Tabla 1. Frmula elemental de microorganismos fermentadores
Microorganismos
Aerobacter aerogenes
Klebsiella aerogenes
Candida utilis
Saccharomyces cerevisiae
Frmula emprica
CH1.78O0.33N0.24
CH1.74O0.43N0.22
CH1.84O0.55N0.2
CH1.70O0.46N0.17
CHmOn + a O2 + b NH3 c CHxOyNz + d CO2 + e H2O+ f CsHrOw
(1)
Por ejemplo si consideramos un proceso de fermentacin alcohlica con levaduras

Saccharomyces cerevisiae con glucosa C6H12O6 como la fuente de carbono, y amoniaco
NH3 como la fuente de nitrgeno para producir etanol, la reaccin se modeliza segn la
ecuacin (2)
C6H12O6 + a O2 + b NH3 c CH1.703O0.459N0.171 + d CO2 + e H2O + f C2H6O
(2)
Para la determinacin de los coeficientes estequiomtricos se resuelve el sistema de

ecuaciones del balance de cada uno de los elementos. El coeficiente a indica los moles
de oxgeno consumidos en la reaccin por mol de sustrato (glucosa). El coeficiente b
indica los moles de amoniaco consumidos en la reaccin por mol de sustrato. El
2
coeficiente c indica los moles de microorganismos (biomasa) que se obtienen por mol
de glucosa consumido. Los valores c, e y f son los moles de dixido de carbono, agua y
etanol producidos por mol de glucosa respectivamente.
Como se puede observar el nmero de ecuaciones obtenidas en los balances de cada
elemento es inferior al nmero de incgnitas, lo que hace que el sistema de ecuaciones
lineales resultante sea indeterminado. Esto nos obliga para resolver el sistema a realizar
determinaciones empricas complementarias como la obtencin de la relacin
biomasa/oxgeno (c/a) y biomasa/dixido de carbono (c/d) a travs generalmente de
experimentos especficos. La relacin biomasa/oxgeno es el nmero de clulas que se
obtiene por mol de oxgeno consumido. Es justamente la inversa de la demanda
biolgica de oxgeno (DBO). Es decir, la DBO se define como el oxgeno consumido
por mol de clulas reproducido. La biomasa/oxgeno (c/a) y biomasa/dixido de
carbono (c/d) se obtienen mediante un sencillo experimento en el que una concentracin
de clulas conocida se hace crecer en un medio de cultivo en el cual se ha colocado una
sonda que mide de forma instantnea la concentracin de O2 o CO2 segn el caso. En
cuanto se modifica la concentracin de estos gases se mide la variacin del nmero de
clulas. As se obtiene el sistema de ecuaciones siguiente para la reaccin indicada:
C:
H:
O:
N:
6 = c+d+2 f
12+3 b=1,703 c+2 e+6 f
6+2 a=0 ,459 c+2 d+e+f
b=0,171 c
c/a= 1,70
c/d= 1,98
La resolucin del sistema de ecuaciones se muestra en la reaccin (3)
C6H12O6 + 2 O2+ 0,585 NH3 3,42 CH1.703O0.459N0.171 + 2,41 CO2 + 3,47 H2O +0,16 C2H6O (3)
Especial importancia tienen la relacin biomasa/sustrato (c = 3,42), biomasa/oxgeno

(c/a = 1,70) y biomasa/producto (c/f = 20,8) en el diseo de los flujos de alimentacin
del biorreactor. La relacin biomasa/sustrato se simboliza generalmente como Yx / s de
acuerdo a la ecuacin (4) y se puede expresar tanto como relacin de masas como
relacin de moles, es decir, como la masa de microorganismos producida en relacin a
la masa de sustrato consumida; o los moles de microorganismos producidos en relacin
a los moles de sustrato consumidos. Las relaciones biomasa/oxgeno y
biomasa/producto se calculan segn las ecuaciones (5) y (6) respectivamente, y del
mismo modo se pueden expresar en relacin de masa o de moles.
Yx / s
X1 X 0
S 0 S1
(4)
Yx / o
X1 X 0
O0 O1
(5)
Yx / p
X1 X 0
P1 P0
(6)
3
X0 es la masa (o moles) de clulas inicial, X1 es la masa (o moles) de clulas final. S0 es

la masa (o moles) de sustrato inicial, S1 es la masa (o moles) de sustrato final. O0 es la
masa (o moles) de oxgeno inicial, O1 es la masa (o moles) de oxgeno final. P0 es la
masa (o moles) de producto inicial, P1 es la masa (o moles) de producto final, en una
prueba especfica.
2. Tipos de biorreactores
De acuerdo a la configuracin del biorreactor se tienen dos tipos: biorreactor de tanque
agitado o biorreactor flujo-pistn.
Biorreactor de tanque agitado
El biorreactor de tanque agitado es un recipiente donde las condiciones de crecimiento
son homogneas y cada uno de sus componentes tiene la misma concentracin en todos
los puntos de su volumen, es decir, no existen gradientes de concentracin en cualquier
elemento, ni de temperatura, ni de pH. Esto se consigue por la accin de una turbina que
mantiene el caldo de cultivo en continuo movimiento, produciendo la mezcla. Segn el
rgimen de alimentacin los biorreactores de tanque agitado se clasifican en tres grupos:
- Biorreactor de tanque agitado en discontinuo, tambin llamado biorreactor Batch.
Este tipo de biorreactor trabaja por lotes, es decir, se llena con caldo de cultivo y se deja
reaccionar un periodo de tiempo, tras el cual se vaca. El tiempo que un determinado
elemento est dentro del reactor se denomina Tiempo de retencin, es decir en este tipo
de biorreactores comprende el periodo entre el llenado y el vaciado. Durante el tiempo
de retencin no entra ni sale material del reactor, es decir, los flujos son cero. La
concentracin de los componentes en el interior del reactor es variable. La
concentracin de clulas va aumentando hasta un lmite, la concentracin de sustrato va
disminuyendo y la concentracin de producto va aumentando.
- Biorreactor de tanque agitado en continuo, tambin llamado Quimiostato. En l se
alimenta de forma continua a las clulas con sustrato y se extrae tambin de forma
continua caldo con producto. Los flujos de entrada y salida son iguales, y la
concentracin de todos los componentes en el interior del reactor es constante. El
tiempo de retencin TR de los componentes se calcula por la ecuacin (7) donde V es el
volumen del reactor y F el flujo de entrada y salida.
TR
V
F
(7)
- Biorreactor de tanque agitado en semicontinuo. Es el biorreactor agitado en que la

reaccin se produce durante el proceso de llenado del mismo. Cuando termina el llenado
se da por concluida la reaccin comenzando el vaciado. El tiempo de llenado es el
tiempo de retencin. La concentracin de los distintos componentes durante el tiempo
de retencin es constante.
Figura 1. Tipos de biorreactor de tanque agitado (a) discontinuo, (b) continuo, (c)
semicontinuo
Biorreactor flujo-pistn
El biorreactor tipo flujo-pistn es un recipiente estratificado, la alimentacin se produce
de forma continua por un extremo, y circula en flujo laminar lentamente a travs del
mismo mientras se va produciendo la reaccin. Cuando el fluido llega al extremo
opuesto del reactor la reaccin ha concluido, y se realiza el vaciado tambin de forma
continua. Este tipo de reactor es muy conveniente cuando diferentes tipos de
microorganismos trabajan encadenadamente formando un mecanismo de tal modo que
el producto del primer tipo de microorganismos es el sustrato del siguiente tipo de
microorganismos. En cada estrato predominar un tipo y una composicin. A medida
que se forma el producto del primer microorganismo, la inhibicin hace que ste deje de
realizar su actividad cediendo el paso al siguiente. Al desplazarse durante la
transformacin, en cada punto del camino seguido el sustrato forma un estrato con
composicin concreta. En la Figura 2 se muestran diferentes configuraciones de
biorreactores flujo-pistn. La banda de color degradada representa la variacin de
composicin.
Figura 2. Distintas configuraciones de biorreactor flujo-pistn

Este tipo de biorreactor se ha utilizado tradicionalmente en la fermentacin metnica
para la produccin de biogs, donde existe una etapa inicial realizada por
microorganismos hidrolticos que produce cidos de cadena corta a partir de la
degradacin de la materia orgnica, seguidos de una etapa de produccin de cido
actico a partir de los cidos anteriores ejecutada por microorganismos llamados
acetognicos, y una ltima etapa de produccin de metano a partir de cido actico
realizada por los microorganismos metanognicos. El tiempo que un determinado
elemento est dentro del reactor se denomina Tiempo de retencin.
5
3. Clculo de flujos y tiempos de retencin
El clculo de los flujos de alimentacin y evacuacin de producto, y de los tiempos de

retencin estn basados en los balances de materia y energa en el biorreactor, que a su
vez dependen de la cintica del proceso de crecimiento celular. El balance de materia de
cualquier componente sigue la siguiente igualdad
Esta igualdad se expresa de forma matemtica segn la ecuacin (8)

d (VCi )
Fe Ce Fs C s V ri f V ric
dt
(8)
Donde
V = volumen del reactor (l)
Fe = caudal de alimentacin (l/s)
Fs = caudal de salida (l/s)
Ce = concentracin del componente i en la alimentacin (moles/l)
Cs = concentracin del componente i en la salida (moles/l)
ri2= velocidad de formacin del componente i (moles/l s)
ric = velocidad de consumo del componente i (moles/l s).
En la reproduccin celular existen procesos que pueden resultar globalmente
exotrmicos o endotrmicos. Los procesos exotrmicos liberarn calor al medio y ello
provocar un calentamiento del reactor. En esa circunstancia para mantener la
temperatura fija, segn los requerimientos de la cepa a reproducir, es necesario
refrigerar el reactor. En los procesos endotrmicos, la reproduccin de la cepa absorber
calor, de modo que la temperatura del reactor tender a disminuir, lo que obliga al
calentamiento del medio. Para mantener la temperatura fija el calor aportado o extrado
del reactor debe ser igual al absorbido o liberado en el proceso. Ello obliga al diseo de
un sistema de control de temperatura en el reactor basado en un sistema de
calentamiento y un sistema de refrigeracin para hacer el mismo verstil, que a su vez
se emplear en los procesos de desinfeccin previa, para evitar competencias de
especies de microorganismos no deseados.
Biorreactor Batch
El biorreactor Batch trabaja de forma discontinua por lotes. En l los flujos de entrada y
salida son cero. El caldo de cultivo inoculado con la cepa deseada se introduce en el
reactor y se deja un tiempo hasta que se considera que la reaccin ha concluido,
momento en que se vaca. La evolucin de la poblacin microbiana dentro del
biorreactor se divide en cuatro etapas representadas en la Figura 3. Inicialmente en el
caldo de sustrato recin inoculado la concentracin de microorganismos es baja y su
crecimiento muy lento. Esta etapa se denomina Fase de letargo. El crecimiento de la
concentracin es lento porque las clulas necesitan un tiempo de maduracin. stas
6
antes de la inoculacin se conservan en fro, por ello deben adaptarse a las nuevas
condiciones. Cuando se ha superado la fase de letargo el crecimiento celular se realiza
de forma exponencial. Las clulas en abundancia de alimento se reproducen a la mayor
velocidad posible, especfica para esas condiciones de pH y temperatura. Esta fase de
denomina Fase de crecimiento exponencial. Cuando el alimento empieza a escasear la
velocidad de reproduccin va disminuyendo. Empiezan a aumentar el nmero de
muertes celulares de forma que acaban por igualarse a las reproducciones, de modo que
la concentracin de clulas vivas permanece constante. A esta fase se le denomina Fase
estacionaria. Si la deficiencia de alimento persiste y finalmente aumenta, el nmero de
defunciones en la poblacin celular podr ser superior al de reproducciones de forma
que la concentracin de clulas vivas comienza a decrecer de forma exponencial. Esta
fase de denomina de Muerte celular.
Figura 3. Evolucin de la concentracin de clulas vivas en un biorreactor Batch
La mayor cantidad de producto se forma en la fase de crecimiento exponencial, es por

ello que se busca que el reactor batch trabaje siempre en esta fase. Para conseguir esto
se limita el tiempo de retencin a la duracin de esta etapa. Si representamos la
concentracin de producto en el reactor en funcin del tiempo (Figura 4) se puede
observar que en la fase de letargo no hay formacin de producto. En la fase de
crecimiento celular exponencial la variacin de concentracin de producto es muy alta
con alta productividad, y que en la fase estacionaria la variacin de concentracin es
Pexp .
Pest .
ms pequea y tiene productividad menor, es decir:
t exp
t est .
Figura 4. Variacin de la concentracin de producto en un biorreactor discontinuo. (Se

ha considerado un valor Yx/p= 0,45 respecto a la Figura 3)
Para evitar un nmero excesivo de inoculaciones y el consecuente gasto econmico en
cepas, en cada lote el reactor no se vaca completamente, sino que se deja
aproximadamente un tercio del volumen con caldo en el interior, reponiendo los dos
tercios restantes con sustrato nuevo previamente desinfectado. La agitacin del caldo a
travs de la turbina en el interior del reactor facilita la mezcla, de forma que las clulas
que no han llegado a la fase estacionaria y estn en pleno auge reproductivo se
aprovechan para la inoculacin del siguiente lote, reduciendo al mximo el tiempo de
letargo, y obteniendo la mxima productividad de producto.
Para modelizar el balance celular se particulariza la ecuacin general (8) de forma que
la concentracin de clulas vivas dentro del reactor se simboliza con la letra X, el
volumen de caldo permanece contante y los flujos de entrada y salida son cero, Fe = Fs =
0. Dado que se trabaja en la fase de crecimiento celular exponencial la tasa de
defunciones es despreciable respecto a la de reproducciones, de tal modo que la
ecuacin 8 se transforma del modo siguiente:
d (VX )
Fe X e Fs X s V rxf V rxc
dt
V cte , Fe Fs 0 , rxc 0
dX
ri f
dt
La velocidad de crecimiento celular es proporcional al nmero de clulas existentes. La

constante de proporcionalidad se denomina tasa de crecimiento celular y se simboliza
por la letra . A partir de la ecuacin (9) se demuestra el crecimiento exponencial de la

poblacin.
dX
X
dt
dX
dt
X
(9)
dX
dt
Xo X
tlag
ln
X
t tlag
Xo
X Xo e
(10)
t t lag
X0 representa la concentracin celular inicial en el reactor, que es muy baja; X

representa la concentracin celular en un tiempo t, tlag es el tiempo de letargo.
La tasa de crecimiento se moleliza generalmente con la ecuacin de Monhod (11). Su
aplicacin requiere el conocimiento de la tasa mxima de crecimiento max y la
constante de saturacin Ks denominados parmetros cinticos de la cepa, que dependen
de la temperatura y del pH, y se obtienen de forma experimental. Conocidas max y Ks,
la tasa de crecimiento microbiano slo depende de la concentracin de sustrato S.
Cuando la concentracin de sustrato es muy grande, el trmino Ks es despreciable frente
a S, por tanto, la tasa de crecimiento microbiano se aproxima mucho a la mxima.
Ahora bien, cuando la concentracin de sustrato es baja, Ks ya no es despreciable y la
tasa de crecimiento es menor a la mxima.
max S
(11)
Ks S
Si existe ms de un tipo de alimento limitante, por ejemplo G (fuente de carbono), N

(fuente de nitrgeno) o O (Oxigeno), de acuerdo a la ecuacin de Monhod, la tasa
mxima de crecimiento queda minorizada de la siguiente forma:
G N O

KG G K N N Ko O
(12)
max
El modelo de Monhod queda modificado en presencia de inhibidores. En caso de

inhibicin competitiva la constante de saturacin aumenta, multiplicndose por un
factor a (ecuacin 13). En caso de de inhibicin no competitiva la tasa mxima de
crecimiento se reduce tal como indica la ecuacin (14). El factor a depende de la
concentracin del inhibidor I y de una constante de afinidad KI.
Inhibicin competitiva
max
S
Ks a S
(13)
Inhibicin no competitiva
a 1
max
a
S
Ks S
(14)
I
KI
Hay que indicar que la modelizacin de Monhod para la tasa de crecimiento celular en
funcin del sustrato no es la nica. Existen diferentes modelos tal como se muestra en la
Tabla 2, pero el modelo de Monhod es el ms utilizado.
Tabla 2. Modelos de clculo de la tasa de crecimiento celular
Tipo de modelo
Autor
Modelo
Modelos cinticos sin

inhibicin
Tessier
max 1 e S / K s
Moser
Contois
Modelos cinticos con
inhibicin
Andrews y Noak
Webb
Aiba et al.
Teissier
Tseng y Wymann
Sn
max
max
max
Ks a S n
S
BX S
1
S2
Ks S
K is
S 1
K is
max
S2
Ks S
K is
S
max
e S / K si
Ks S
max e S / K si e S / K s
max
S
K si s s c
Ks S
De la ecuacin de Monhod se deduce que a medida que se va terminando el sustrato la

tasa de crecimiento celular disminuye. Para la determinacin del tiempo de retencin TR
se debe fijar un lmite al descenso de la tasa de crecimiento. Por ejemplo, para trabajar
en la fase exponencial del ciclo no se debe permitir que la tasa de crecimiento baje ms
de un 85% de la tasa de crecimiento mxima, es decir > 0.85max. De ah se deduce a
partir de la ecuacin de Monhod la concentracin lmite de sustrato en el reactor.
0.85 max
max S1
K s S1
S1 5.66 K s
10
Conocida la concentracin inicial de sustrato So, a partir de la relacin biomasa/sustrato

del proceso Yx/s, definida por la ecuacin (4), se obtiene la variacin de masa celular
durante el proceso. La concentracin inicial de clulas en el reactor tambin es conocido
Xo y por tanto tambin la biomasa final X1. A partir de la ecuacin (10) se obtiene el
tiempo de retencin.
Yx / s
ln
X1 X 0
S 0 S1
X1
max TR t lag
Xo
X 1 X 0 Yx / s S 0 S1
TR t lag
max
ln
X1
Xo
La variacin de la concentracin de sustrato en el reactor en funcin del tiempo se

puede obtener de la ecuacin (15)
d (VS )
Fe S e Fs S s V rsf V rsc
dt
V cte , Fe Fs 0 , rsf 0 ,
1
dS
X
dt
Yx / s
t t lag
1
Xo e
dt
tlag Y x / s
rsc
(15)
1
Yx / s
t t lag
1
dS
Xo e
dt
Yx / s
t t lag
1 2
1
X o e
Yx / s
Del mismo modo la variacin de la concentracin de producto en el reactor en funcin

del tiempo se puede obtener de la ecuacin (16)
d (VP )
Fe Pe Fs Ps V r pf V r pc
dt
V cte , Fe Fs 0 , r pc 0 ,
1
dP
X
dt Yx / p
P
tlag Yx / p
Xo e
t t lag
dt
r pf
(16)
1
Yx / p
t t lag
1
dP
Xo e
dt Yx / p
1
Yx / p
2 X o e
t t lag
11
Ejemplo 1
Determnese el tiempo de retencin recomendable en un biorrecator discontinuo de 3 m3
para fermentacin alcohlica con la levadura Sacharomyces cerevisae para produccin
de etanol, si la concentracin inicial es de 0,002 g/l de clulas y 6 g/l de glucosa. Se
supone que el microorganismo sigue una cintica de Monod con max= 0,37 h-1, tlag= 6
h y Ks= 1,35 g/l, un rendimiento biomasa/sustrato de 0,4, y un rendimiento
biomasa/producto 9,8. Clculese la productividad del sistema
Si consideramos una limitacin de reduccin de la tasa de crecimiento celular a un 75%
de la mxima, se tiene
0,75 max
Yx / s
ln
max S1
K s S1
X1 X 0
S 0 S1
S1 3 K s 3 1,35 4,05 g/l
X 1 X 0 Yx / s S 0 S1 = 0,002 0,4 6 4,05 = 0,38 g/l
X1
max TR t lag
Xo
Yx / p
TR t lag
max
ln
X1
0,38
1
6
20,18 h
ln
Xo
0,37 0,002
X1 X 0
1
1
P1 P0
X1 X 0 = 0
0,38 0,002 = 0,038 g/l
Yx / p
9,8
P1 P0
La cantidad total obtenida de etanol en cada lote ser: 3000 l 0,038 g/l = 114 g de
etanol. La productividad ser: 114 g/20,18 h = 5,65 g/h
Fin.
Biorreactor continuo, quimiostato
Un biorreactor continuo en equilibrio en estado estacionario, quimioestato, est siendo
continuamente alimentado con sustrato y se est extrayendo fluyente, de forma que el
flujo de entrada y el flujo de salida son iguales. Por otra parte, el volumen de caldo en
su interior V, junto la concentracin de cada uno de los componentes, tanto
concentracin celular X, concentracin del sustrato S, concentracin de producto P son
constantes. En condiciones de funcionamiento se busca que el biorreactor trabaje en la
zona de crecimiento celular exponencial de forma que la tasa de defuncin es
despreciable rxc 0. El flujo de entrada est compuesto exclusivamente por sustrato a
una concentracin Se, no existen clulas ni producto, es decir, Xe y Pe son cero. El flujo
de salida est compuesto por sustrato, producto y clulas a la concentracin de
equilibrio del interior del reactor, es decir X, S y P respectivamente. De manera en el
balance de biomasa general dado por la ecuacin (8) se particulariza de la siguiente
forma:
d (VX )
Fe X e Fs X V rxf V rxc
dt
12
dX
0,
dt
Fe Fs F , Xe=0, rxc 0
0
F
X rxf
V
Dado que se trabaja en la zona exponencial se tiene que rxf X , por tanto se debe
cumplir la igualdad (17) para que se cumpla el quimiostato, de lo contrario el sistema
evolucionar.
F
F
0 X
V
V
(17)
Si analizamos el balance de materia referido al sustrato, la ecuacin general (8) se

particulariza de la siguiente manera: la formacin de sustrato en el interior del reactor es
nula rsf 0 ; Slo existe consumo, que est relacionado con la produccin de biomasa
por la ecuacin del rendimiento biomasa/sustrato Yx/s.
d (VS )
Fe S e Fs S V rsf V rsc
dt
dS
0,
dt
Fe Fs F ,
rsf 0 ,
rsc
Yx / s
1
F
(Se S )
X 0
V
Yx / s
(S e S )
Yx / s
X 0
(18)
Si analizamos el balance de materia referido al producto, el consumo de producto en el

interior del reactor es nulo r pc 0 ; la produccin est relacionada con la reproduccin
celular por la ecuacin del rendimiento biomasa/producto Yx/p, de madera que la
ecuacin general (8) se particulariza del siguiente modo:
d (VP )
Fe Pe Fs P V r pf V r pc
dt
Pe 0 ,
dP
0,
dt
Fe Fs F ,
r pc 0 ,
r pf
1
Yx / p
13
F
1
P
X 0
V
Yx / p
P
1
Yx / p
X 0
Para el clculo de las condiciones de trabajo en un biorreactor continuo (flujos y

concentraciones de X, S y P) es necesario seleccionar la tasa de crecimiento celular en la
que se desea trabajar y su relacin respecto a la tasa mxima, por ejemplo el 75% de la
tasa mxima, es decir, > 0,75max. A partir de la ecuacin (17) se obtiene el valor del
flujo, y a partir de la ecuacin de Monhod se calcula la concentracin de sustrato
conseguida en el equilibrio S. Dado que la concentracin de sustrato en el equilibrio no
puede ser mayor que la concentracin de sustrato en el flujo de alimentacin se debe
comprobar que Se > S, en caso contrario debe elegirse otra tasa de crecimiento para que
el sistema funcione. Conocida S a partir de la ecuacin (18) se calcula la concentracin
de clulas en el reactor. A partir de la ecuacin (19) se calcula la concentracin de
producto en el reactor que es la que se extrae del fluyente de salida. La productividad
(moles de producto/h) se obtiene de la multiplicacin de P por el flujo.
F
V
max S
Ks S
F V
F
1
(S e S )
X 0
V
Yx / s
1
Yx / p
X 0
Ks
max
X Yx / s ( S e S )
1
Yx / p
Productivi dad (moles/h) F P
14
Ejemplo 2
Se plantea el diseo de un reactor continuo de 3 m3 para fermentacin alcohlica con la
levadura Sacharomyces cerevisae. Se desea conocer la concentracin de clulas,
sustrato y producto en el equilibrio, junto los flujos de alimentacin y productividad si
se alimenta con glucosa a una concentracin de 6 g/l, para obtener etanol. Se supone
que el microorganismo sigue una cintica de Monod con max= 0,37 h-1 y Ks= 1,35 g/l,
un rendimiento biomasa/sustrato de 0,4, y un rendimiento biomasa/producto 9,8.
Si consideramos una limitacin de reduccin de la tasa de crecimiento celular a un 75%
de la mxima, se tiene
.
F
F V 0,75 0,37 3000 832,5 l/h

V
max S
Ks S
1
F
(Se S )
X 0
V
Yx / s
1
Yx / p
X 0
Ks
max
0,75 1,35
4,05 g/l
1 0,75
X Yx / s ( S e S ) 0,4 6 4,05 0,8 g/l
1
Yx / p
1
0,8 0,078 g/l
9,8
Productivi dad (moles/h) F P 832,51 0,078 64,94 g/h
Se puede comprobar que la productividad es sustancialmente mayor en el biorreactor

continuo que en el discontinuo.
Fin.
Ejemplo 3
Se desea determinar cul es la tasa ptima de crecimiento a utilizar en un reactor
continuo de 3 m3 para fermentacin alcohlica con la levadura Sacharomyces cerevisae
si se alimenta con glucosa a una concentracin de 6 g/l, para obtener etanol. Se supone
que el microorganismo sigue una cintica de Monod con max= 0.37 h-1 y Ks= 1.35 g/l,
un rendimiento biomasa/sustrato de 0,4, y un rendimiento biomasa/producto 9,8.
La tasa de crecimiento ptima ser la que proporcione mayor productividad F P . Para
determinar sta se elabora la Tabla 3.
15
Tabla 3. Condiciones estacionario para distintas tasas de crecimiento celular en el

biorreactor del ejemplo 3.
%mu
1
10
20
30
40
50
60
70
80
90
95
mu
0,004
0,037
0,074
0,111
0,148
0,185
0,222
0,259
0,296
0,333
0,352
F (l/h)
11,1
111
222
333
444
555
666
777
888
999
1054,5
S (g/l)
0,01
0,15
0,34
0,58
0,90
1,35
2,03
3,15
5,40
12,15
25,65
X (g/l)
2,39
2,34
2,27
2,17
2,04
1,86
1,59
1,14
0,24
-2,46
-7,86
P (g/l)
0,24
0,23
0,23
0,22
0,20
0,19
0,16
0,11
0,02
-0,25
-0,79
FP (g/h)
2,66
25,97
50,28
72,21
90,58
103,23
105,89
88,58
21,31
-245,75
-828,84
Si se observa la representacin de cada una de las variables, se detecta que existe una
tasa de crecimiento celular para la cual la productividad es mxima. Para los datos
considerados ste se sita alrededor del 60% de la tasa mxima. Este valor cambia
cuando se incrementa la concentracin del sustrato de alimentacin.
Concentracin de S (g/l)
Concentracin des X (g/l)
3,00
2,50
2,00
1,50
1,00
0,50
0,00
0
50
Porcentaje de mu max
100
Productividadde P (g/ h)
Concentracin de P (g/l)
0,30
0,25
0,20
0,15
0,10
0,05
0,00
0
50
Porcentaje de mu max
100
30,00
25,00
20,00
15,00
10,00
5,00
0,00
0
50
Porcentaje de mumax
100
120
100
80
60
40
20
0
0
50
100
Porcentaje de mu max (h-1)
Figura 5. Variacin de la concentracin de los componentes del biorreactor continuo del

ejemplo 3
16
Ejemplo 4
Determnese las condiciones de crecimiento celular en un reactor de 1000 l de volumen
con levadura Sacharomyces cerevisae que es alimentado con una solucin de glucosa de
20 g/l de concentracin si se desea una productividad de 150 g de alcohol por hora. Se
supone que el microorganismo sigue una cintica de Monod con max= 0,37 h-1 y Ks=
1,35 g/l, un rendimiento biomasa/sustrato de 0,4, y un rendimiento biomasa/producto
9,8.
Pr oductivida d P F 150 g/h
F
1
150
P
X 0 X
9,8 1,47 g/lh
V
Yx / p
1000
1
F
(Se S )
X 0 ,
V
Yx / s
como
F max S
V Ks S
max S
Ks S
(Se S )
max S ( S e S )
max S 2 (
max S 2 (
Yx / s
1
Yx / s
0,37 S 2 (
Yx / s
Yx / s
X 0
X ( K s S ) 0
X max S e ) S
Yx / s
X S e max ) S
Yx / s
X K s 0
X K s 0
1
1
1,47 20 0,37) S
1,47 1,35 0
0,4
0,4
0,37 S 2 3,47 S 4,69 0
3,47 3,47 2 4 0,37 4,69

=8,48 g/l
2 0,37
X Yx / s ( S e S ) 0,4 20 8,48 4,60 g/l

P
1
Yx / p
X 0
1
Yx / p
1
4,60 0,47 g/l
9,8
X 1,47
0,32 0,863 max

X
4,60
17
F V 0,32 1000 320 l/h
Fin.
Biorreactor semicontinuo
En un reactor semicontinuo la reaccin ocurre durante el periodo de llenado que
corresponde al tiempo de retencin. Esto es as para todas las partculas puesto que las
primeras en entrar son las primeras en salir tras el llenado, y las ltimas en entrar son las
ltimas en salir. Durante la reaccin solo hay flujo de entrada o de salida, pero nunca
ambos simultneamente. Durante la reaccin (periodo de llenado) la concentracin de
todos los componentes, tanto clulas, sustrato como producto es constante. El volumen
del reactor es variable (se est llenando el tanque o se est vaciando).
Para el anlisis del balance de materia en el reactor se considera trabajando en la fase
exponencial, por tanto la tasa de defuncin celular se considera cero, tampoco hay
clulas en el flujo de entrada, por tanto Xe=0.
d (VX )
Fe X e Fs X V rxf V rxc
dt
Fs 0 , Xe=0, rxc 0
d (VX )
V rxf
dt
(19)
Dado que el volumen es variable la ecuacin (19) se desarrolla y
dX
dV
0,
Fe .
dt
dt
dX
dV
V
X V rxf
dt
dt
0 rxf
F
X
V
0 X
F
X
V
F
F
0 X
V
V
En el anlisis del balance de sustrato en el reactor se considera

d (VS )
Fe S e Fs S V rsf V rsc
dt
18
Fs 0 , rsf 0 ,
1
dS
0 , rsc
X
dt
Yx / s
dS
dV
V
S Fe S e V rsc
dt
dt
Fe
1
S e S
X 0
V
Yx / s
En el anlisis del balance de producto se tiene lo siguiente

d (VP )
Fe Pe Fs P V r pf V r pc
dt
dP
0,
dt
Fs 0 ,
r pc 0 ,
r pf
1
Yx / p
dP
dV
V
P V r pf
dt
dt
F
1
P
X 0
V
Yx / p
P
1
Yx / p
X 0
Como se puede comprobar las ecuaciones resultantes de los balances de materia en

clulas, sustrato y productos son similares a las obtenidas en el biorreactor continuo, por
tanto el procedimiento de resolucin se realiza de la misma manera, a partir de la
seleccin de la tasa de crecimiento celular en la que de desea trabajar.
4. Reactores en serie
Muchos procesos industriales requieren varias etapas encadenadas en las que se hace
una transformacin qumica distinta en cada una de ellas, y en la que es responsable un
microorganismo especfico diferente. Esto se denomina mecanismo de reaccin. Un
ejemplo de mecanismo de reaccin se tiene en la produccin de metano en
fermentaciones anaerobias. Inicialmente la materia orgnica se degrada mediante
microorganismos hidrolticos formando cidos carboxlicos de cadena corta (ac.
pentanoico, butanoico, propanoico). En una segunda etapa estos cidos carboxlicos son
transformados a cido actico por microorganismos acetognicos. En la tercera etapa el
cido actico se transforma en metano, dixido de carbono y agua. Otro ejemplo de
mecanismo es proceso de produccin de bioetanol a partir almidn. Inicialmente el
almidn formado por cadenas largas de glucosa con enlaces (1-4) debe ser hidrolizado
por hongos que posean las encimas -amilasa, -amilasa y pululanasa. Estos hongos
suelen ser del gnero Aspergillus sp. o Rhizopus Niveus. En una segunda etapa la
19
glucosa resultante de la hidrlisis debe ser fermentada en alcohol por microorganismos

especficos como las levaduras Saccharomyces cerevisiae, Pichia stipitis, Pachysolen
tannophilus, Candida shehate, Kluyveromyces marximus, o bacterias Zymomonas
mobilis, Clostridium acetobutylicum, Klebsiella oxytoca, y Escherichia coli. Otro
mecanismo es necesario en el procesamiento de los materiales lignocelulsicos para
obtener bioetanol. Estos materiales estn formados por tres estructuras bsicas: celulosa,
hemicelulosa y lignina. La celulosa y la hemicelulosa estn formadas por cadenas de
azcares que pueden ser transformados a bioetanol por fermentacin si previamente
estos materiales son hidrolizados. El proceso de hidrolizacin de las fibras de celulosa y
hemicelulosa est dificultado por la lignina, producto propilfenlico que las envuelve.
El mecanismo del proceso consiste primero en la degradacin de la lignina. Esto puede
hacerse mediante accin microbiana por ejemplo con hongos Phanerochaete
chysosporium. Tras la degradacin de la lignina se puede proceder a la hidrlisis de la
celulosa y hemicelulosa con microorganismos con las enzimas endo--glucanasas, exo-glucanasas y -glucosidasa, presentes por ejemplo en hongos de los gneros
Trichoderma, Phanerochaete y Fusaruim. Por ltimo, una vez liberados los azcares
monosacridos o disacridos se procede a la fermentacin con los mismos
microorganismos ya mencionados en el procesamiento del almidn (levaduras y
bacterias fermentativas).
En estos casos se tiene la opcin de hacer crecer dos o ms especies de
microorganismos en un mismo reactor, de forma que el producto formado por alguno de
ellos es sustrato de otro, o utilizar distintos biorreactores en serie haciendo crecer una
especie en cada uno de ellos. El uso de un solo reactor tiene el inconveniente de que
generalmente cada organismo requiere unas condiciones ptimas de crecimiento
distintas, lo que obliga a trabajar en condiciones intermedias. El uso de varios reactores
en serie permite trabajar en cada fase del proceso en condiciones ptimas.
Anlisis de dos biorreactores en serie con procesos distintos
Si suponemos dos biorreactores en serie continuos en estado estacionario, el primer
biorreactor realizar la primera fase del proceso deseado y poseer una especie celular
concreta, el segundo biorreactor realizar la segunda fase del proceso y tendr en su
interior otra especie celular distinta a la anterior. El primer tanque estar alimentado con
un flujo F1 con un sustrato inicial a una concentracin So. Al estar en equilibrio la
concentracin de clulas, la concentracin de sustrato y la concentracin de producto en
el caldo sern constantes (X1, S1 y P1 respectivamente). El flujo de salida ser igual al
de entrada y poseer la misma composicin que el caldo interior. El flujo de salida del
primer reactor sirve de alimentacin del segundo. La diferencia es que as como la
alimentacin del primer biorreactor se haca slo con sustrato, el segundo biorreactor se
alimenta con clulas, sustrato y producto proveniente del primero. Se supone que el
producto del primer tanque es el sustrato del segundo. En ocasiones puede ser
alimentado con dos flujos, es decir uno proveniente del primer reactor mas otro
adicional Ff con concentracin Sf. Los volmenes de los reactores no tienen porqu ser
iguales. El objetivo del anlisis es determinar la concentracin celular, sustrato y
producto en cada biorreactor junto la productividad del conjunto.
20
Figura 6. Esquema de funcionamiento de dos reactores continuos en serie

a) Tanque 1
Los parmetros del tanque 1 quedan definidos con las mismas ecuaciones que un reactor
continuo simple. Limitando el descenso de la tasa de crecimiento para que siempre est
trabajando en la fase exponencial, por ejemplo 0,85 max , se tiene:
1 0,85 1 max
1
( S 0 S1 )
1 max S1
K s1 S1
1
Y1 x / s
P1
F1
V1
X1 0
1
Y1 x / p
F1 1 V1
S1
X1 0
1 Ks1
1max 1
X1
P1
Y1 x / s F1
( S 0 S1 )
1 V1
1
Y1 x / p
X1
Productivi dad tanque 1 (moles/h) F1 P1
b) Tanque 2
El balance de biomasa en el biorreactor 2 quedara segn la ecuacin (20) de la cual se
obtiene el valor de Ff necesario.
2 0,85 2 max ,
F2 F1 F f
0 ( F1 F f ) X 2 V2 2 X 2
(20)
21
F1 F f
V2
F2 F1 F f 2 V2
De la ecuacin de Monhod se obtiene la concentracin de sutrato 2 (Producto 1) que

hay en este tanque. Del balance de sustrato se obtiene la concentracin celular 2.
2 max S 2
S2
K s2 S 2
2 Ks 2
2 max 2
F1 F f
Ff
F
1
0 1 P1
Sf
S2
2 X 2 X2
V2
Y2 x / s
V2
V2
Y finalmente del balance de producto se obtiene la productividad

0
F1 F f
V2
P2
1
Y2 x / p
2 X 2 P2
Productivi dad (moles/h) F2 P2
Anlisis de dos biorreactores en serie con el mismo proceso

Supongamos ahora que por razones de espacio deseamos realizar una reaccin
microbiana en dos tanques en serie. En ambos biorreactores se realiza el mismo
proceso, es decir el mismo microorganismo, mismo tipo de sustrato y producto.
Podemos decidir que trabajen los dos con la misma en la fase exponencial, por
ejemplo 0,85 max . Los parmetros del tanque 1 quedan definidos con las mismas
ecuaciones que en el caso anterior. En el tanque 2 los balances se modifican del
siguiente modo:
Balance de biomasa reactor 2
0 F1 X 1 ( F1 F f ) X 2 V2 X 2
F1 F f
V2
F2 F1 F f V2
Si la limitacin del descenso de la tasa de crecimiento celular es la misma en ambos

reactores, 1 y 2, se la ecuacin de Monhod se deduce que la concentracin de sustrato
en el caldo de los reactores ser la misma.
max S1
K s S1
max S 2
K s S2
S1 S 2
Ks
max
22
La condicin anterior hace que un flujo adicional de alimentacin con concentracin Sf

>S1 sea absolutamente necesario en el tanque 2, por tanto el balance de sustrato queda
definido por la ecuacin (21) del cual se obtiene la concentracin celular del mismo X2.
0 F1 S1 F f S f ( F1 F f ) S1
0 ( S f S1 ) F f
1
Yx / s
1
Yx / s
V2 X 2
V2 X 2
(21)
X2
Balance de producto reactor 2

F1 F f
F
1
P2
2 X 2 P2
0 1 P1
V2
V2
Y2 x / p
Si se decide que los dos reactores trabajen a distinta velocidad de crecimiento celular,
tenemos en el tanque 2 lo siguiente:
Balance de biomasa reactor 2

0 F1 X 1 ( F1 F f ) X 2 V2 2 X 2
2
2
F1 F f
V2
F2 F1 F f 2 V2
max S 2
K s S2
S2
2 Ks
max 2
Balance de sustrato reactor 2

0 F1 S1 F f S f ( F1 F f ) S 2
1
Yx / s
V2 X 2
X2
Si Ff es cero, se obliga a que S1 > S2 , lo que implica que

0 ( S1 S 2 ) F1
1
Yx / s
V2 X 2
X2
Balance de producto reactor 2

F1 F f
F
1
P2
2 X 2 P2
0 1 P1
V2
V2
Y2 x / p
23
Reactor continuo con recirculacin y purga

Se trata de un biorreactor continuo al que se ha acoplado un sistema de separacin de
biomasa (clulas) por decantacin, filtracin o centrifugacin, que permite recircular
parte de las clulas que salen por la corriente de salida y aumentar la concentracin del
reactor. Este tipo de sistemas se caracterizan por dos parmetros:
a) Relacin de recirculacin, R: Es la relacin entre el flujo de entrada Fe y el flujo
de recirculacin FR, de manera que
F
R R tal que F Fe FR F (1 R) Fe
Fe
b) El factor de concentracin del sedimentador respecto al torrente de salida del
fermentador, C: Es la relacin entre la concentracin de clulas antes del
sedimentador X y la concentracin de clulas que es recirculada XR.
C
XR
X
Figura 7. Esquema de funcionamiento de un reactores continuo con recirculacin y

purga
La definicin del sistema es complicada puesto que requiere determinar 17 variables,
mostradas en la Tabla 4.
Tabla 4. Variables a definir en el diseo de un reactor continuo con recirculacin y
purga
Entrada
Salida
Recirculacin
Alimentacin
Reactor
Flujo
(l/h)
Fe
Fs
FR
F
-
Biomasa
(g clulas/l )
Xs
XR
Xo
X
Sustrato
(g sustrato/l )
Se
Ss
SR
So
S
Producto
(g producto/l )
Ps
PR
Po
P
24
Para resolver el diseo se deben fijar algunas variables tomadas como datos. Estos
sern:
Concentracin de sustrato de alimentacin Se
Limitacin de la tasa de crecimiento celular, tal que se tiene S por la ecuacin de
Monhod
Productividad deseada, es decir, gramos de producto obtenidos por unidad de
tiempo: Fs Ps
La determinacin del resto de variables se realiza a partir de las siguientes relaciones:
Equilibrio de flujos
Dado que es sistema es estacionario se tiene que Fe= Fs.
FR R Fe
F Fe FR Fe
1
F
1 R
Equilibrio de concentraciones de productos

La productividad es dato, gramos o moles de producto extrados del sistema por unidad
de tiempo
Productividad Ps Fs
Se parte de dos balances: antes del reactor se realiza una dilucin del producto en
recirculacin pasando de concentracin PR a Po, de la cual sale la ecuacin (22);
despus, en el sedimentador que produce una divisin de caudal, parte del flujo sale del
sistema y otra parte retorna al reactor. Esta divisin de caudal permite escribir la
ecuacin (23). La divisin de caudal no produce dilucin por lo que P Ps PR
F Po FR PR
(22)
F P FR PR Fs Ps
(23)
Se demuestra que si P Ps tenemos de (23) lo siguiente F P FR PR Fs Ps

(1 R) Fe P R Fe PR Fe P , (1 R) P R PR P P Ps PR .
De (22) se obtiene F Po FR PR Po
R
Ps
1 R
Del balance de producto se obtiene la concentracin de clulas en el biorreactor

dP F
1
( P0 P)
X 0
dt V
Yx / p
25
Yx / p Fs P
dP Fs .P
R
1
(1 R ) (
1)
X 0 X
V
dt
V
1 R
Yx / p
Equilibrio de concentraciones de sustrato
Se es dato. De la limitacin de la tasa de crecimiento celular, se tiene S, concentracin
de sustrato en el interior de reactor, por la ecuacin de Monhod
max S
Ks S
Ks
max
Antes del reactor se realiza una mezcla de caudales con sustrato de la cual sale la
ecuacin (24); despus, en el sedimentador se produce una divisin de caudal, parte del
flujo sale del sistema y otra parte retorna al reactor. Esta divisin de caudal permite
escribir la ecuacin (25).
F S FR S R S e RS R
Fe Se FR S R F S0 (24) S o e e
F
R 1
Fs S s FR S R F S (25)
Ss
F S FR S R (1 R ) Fe S R Fe S R
(1 R ) S R S R
Fs
Fe
La divisin de caudal no produce dilucin por lo que S=Ss=SR., es decir que la particin
de caudal no influye en las concentraciones de los flujos resultantes. Por lo que
S RS
So e
R 1
Del balance de sustrato dentro del biorreactor se obtiene F, caudal que se extrae del
interior del reactor.
dS F
1
(S 0 S )
X 0
dt V
Yx / s
1
Yx / s
X
S0 S
Determinacin de concentraciones celulares

Del balance de sustrato dentro del biorreactor se obtiene X, y por otra parte X R C X
Las clulas provenientes del retorno (recirculacin) son diluidas antes del biorreactor
obteniendo la ecuacin (26).
X 0 F X R FR (26) X 0 1 R Fe C X R Fe
X0
CR
X
1 R
26
Tras el biorreactor en el sedimentador s existe una concentracin de clulas en el

retorno, por tanto se obtiene el balance de la ecuacin (27)
X F X s Fs X R FR (27)
Xs
X F X R FR X (1 R) Fe X C R Fe
Fs
Fe
X s ((1 R C R ) X
Ejemplo 5
Se desea poner a punto un biorreactor de tanque agitado continuo con recirculacin para
fermentacin alcohlica con una productividad de 500 g de alcohol por hora. El
volumen del tanque es de 1000 l. El sistema trabaja bajo glucosa como sustrato
limitante, el rendimiento biomasa vs sustrato es de 0,5 y el rendimiento biomasa vs
producto es de 2,23 La concentracin de glucosa en el alimento Se = 10 g/l. Las
constantes cinticas del microorganismo son m =0,2 h-1 y Ks=1,3 g/l. El factor de
concentracin del sedimentador respecto al torrente de salida del fermentador es de
C=1,5 y la relacin de recirculacin es de 0,7.
Considerando el sistema al estado estacionario, determnese.
a) Flujos de alimentacin del reactor y recirculacin
b) La concentracin de sustrato y producto en el torrente de recirculacin
c) La concentracin de biomasa en el reactor, a la salida del sistema, y en la corriente
de recirculacin
a) Clculo de concentraciones celulares
Si se desea una productividad Ps Fs P Fs = 500 g de alcohol/h
X
Yx / p Fs P 2,23 500
4,305 g/l
V
0,26 1000
X R C X 1,5 4,305 6,458 g/l

X0
CR
1,5 0,7
X
4,305 = 2,659 g/l
1 R
1 0,7
X s (1 R C R) X = (1 0,7 1.5 0,7) 4,305 = 2,798 g/ml

b) Determinacin de concentraciones de sustrato
Se =10 g/l
27
Si limitamos la tasa de crecimiento celular tal que > 0,70 max se tiene S por la
ecuacin de Monhod
S SR Ss
Ks
max
0,70
1,3 = 0,454 g/ml
1 0,70
S RS
=9,81 g/ml
So e
R 1
c) Determinacin de flujos
Del balance de sustrato dentro del biorreactor se obtiene F.
F
1
Yx / s
1
4,305
X
1000 0.26
=238,28 l/h
=
9,91 0,454
S 0 S 0,5
F Fe FR Fe
1
238,28 140,17 l/h
1 0,7
FR R Fe = 0,7 140,17 98,12 l/h

Fe= Fs
d) Determinacin de concentraciones de productos
P PR Ps
Po
Productividad
500
= 3,56 g/l
Fs
140,168
R
0,7
Ps
3,56 1,47 g/l
1 R
1 0,7
Fin.
5. Determinacin de los parmetros cinticos de una cepa
Como se ha mostrado en el apartado anterior, la determinacin de los flujos y la

concentracin de los distintos componentes en el reactor requieren el conocimientos de
los parmetros cinticos y rendimientos, max, Ks, Yx/s. Yx/p. Estos parmetros pueden ser
encontrados en la literatura para numerosas especies celulares, no obstante has
variaciones entre cepas y generalmente la determinacin de estos parmetros se debe
hacerse de forma experimental en laboratorio. Existen bsicamente dos tipos de
experimentos: reaccin en discontinuo (tipo batch) y reaccin en continuo.
28
Experimento de discontinuo
Consiste en hacer crecer una cepa en una concentracin conocida de sustrato, y analizar
la variacin de concentracin celular, sustrato y producto en intervalos de tiempo
determinados.
La determinacin de la concentracin celular en la disolucin se puede hacer por varias
tcnicas:
Recuento directo: consiste en la observacin al microscopio de volmenes muy
pequeos de suspensiones de celulares. Se usan unos portaobjetos especiales
denominados cmaras de Petroff-Hausser. Para que la medida sea correcta es
necesario que la densidad de clulas sea del orden de 105 por ml.
Figura 8. Diagrama de las celdas del portaobjetos Petroff-Hausser

Tabla 4. rea y volumen de las celdas de los portaobjetos Petroff-Hausser
Tipo de cuadro
Area
Volumen
[ml]
[cm ]
Cuadrado total
1.00 x 10
Cuadrado grande
4.00 x 10
Cuadrado pequeo
2.50 x 10
-2
-4
-5
2.00 x 10
8.00 x 10
5.00 x 10
-5
-7
-8
Factor
[1/Vol.]
5.00 x 10
1.25 x 10
2.00 x 10
6
7
Medida de clulas por dispesin de la luz: el sistema se basa en que las

clulas en suspensin dispersan la luz causando la turbidez del cultivo. La
turbidez depende de la masa en suspensin y, por tanto, midiendo esta se puede
estimar aquella. Este es el parmetro de medida ms fcil de usar en los cultivos
de laboratorio. La densidad de clulas debe ser del orden de 105 por ml.
Medida usando contadores electrnicos de partculas. Estos sistemas no nos

indican si las partculas corresponden a clulas vivas o muertas; pero nos pueden
dar una idea del tamao de las partculas.
Medida de parmetros bioqumicos tales como la cantidad de ADN, ARN,

protenas, peptidoglicano, etc. por unidad de volumen.
29
Medida de actividad metablica de las bacterias como que respiran producen

una disminucin del potencial redox del medio en que se encuentran como
consecuencia del consumo de oxgeno (utilizacin de colorantes sensibles a
oxidacin-reduccin tales como el azul de metileno).
Si el sustrato es glucosa su concentracin se puede medir hacindola reaccionar con

cido 3,5-dinitrosalicilico (DNS), el cual se oxida a cido 3-amino-5-dinitrosalicilico
pasando de un color amarillo a un color rojizo, la concentracin de glucosa se mide a
travs de la lectura de la absorbancia en un espectrofotmetro a 575 nm, habiendo
realizado una calibracin previa.
Para el clculo de los parmetros cinticos se toman logaritmos en la ecuacin de la
X
concentracin de clulas en funcin del tiempo (ecuacin x). Si se representa el ln
Xo
En funcin del tiempo, la curva es una recta en la que la pendiente es la tasa de
crecimiento y el trmino independiente el producto t lag del cual se obtiene el tiempo
de letargo.
X X oe
t tlag
ln
X
t tlag
Xo
Ejemplo 6
Los datos siguientes corresponden al crecimiento de Rhodospirillum rubrum sobre
cido actico. Calclese la duracin del periodo de latencia en este cultivo y el tiempo
de duplicacin.
X (g/L)
0,0002
0,0002
0,0002
0,0002
0,0002
0,0012
0,0027
0,0061
0,0135
0,0301
0,0670
0,1492
0,3320
0,7398
1,6445
2,0500
2,2100
2,3500
2,4000
2,4500
2,4500
2,4700
2,4800
2,4800
3,0
2,5
X (g/l)
Tiempo (h)
0
15
30
45
60
80
100
110
Fase de
120
crecimiento
130
exponencial
140
150
160
170
Fase
180
estacionaria
190
200
210
220
230
240
260
270
280
Fase de
letargo
2,0
1,5
1,0
0,5
0,0
0
100
200
300
t (h)
Figura 9. Variacin de la concentracin de clulas del

biorreactor del ejemplo 4
30
Para el clculo se determina el logaritmo neperiano de la relacin que existe entre la

concentracin celular y la concentracin inicial. A partir de este valor se representa una
recta en funcin del tiempo cuya pendiente es la tasa de crecimiento celular.
LN(X/Xo)
100
0,003
2,603
110
0,006
3,418
120
0,014
4,212
130
0,030
5,014
140
0,067
5,814
150
0,149
6,615
160
170
0,332
0,740
7,415
8,216
LN(X/Xo)
Tiempo (h) X (g/L)
9,0
8,0
7,0
6,0
5,0
4,0
3,0
2,0
1,0
0,0
y = 0,0801x - 5,4003
0,0
50,0
100,0
t (h)
150,0
200,0
Figura 10. Liberalizacin de la variacin de clulas

ln2
t lag 5,4003 , 0,0801 h 1 , t lag 67,4 h , t d
8,65 h .
Fin.
Ejemplo 7
Se ha llevado a cabo una fermentacin aerobia en discontinuo del microorganismo con
Candida Rugosauna concentracin inicial de cido oleico de 4 g/l. En el transcurso de
la fermentacin se ha realizado el seguimiento de la biomasa. Los resultados se recogen
en la siguiente tabla
A partir de estos datos calcular:
1) La velocidad especfica de crecimiento
2) El rendimiento biomasa / sustrato
Biomasa Sustrato
(g/l)
(g/l)
8
0
0,48
5
0,6
7,94
1
7,60
10
1,5
7,18
12
14,5
3,1
5,81
5,8
3,50
16
8,9
0,85
17,25
9,6
0,25
20
9,5
0,34
23
Biomasa (g/l)
t (h)
12
10
8
6
4
2
0
0
10
t (h)
15
20
25
Figura 11. Variacin de la concentracin de clulas del

biorreactor del ejemplo 5
31
X1 X 0
S 0 S1
t (h)
Biomassa (g/l)
0,48
Yx / s
9,5 0,48
1,17 g biomasa/g sustrato
8 0,34
LN(X/Xo)
0,6
10
0,73
12
1,5
1,14
14,5
3,1
1,87
16
5,8
2,49
17,25
20
23
8,9
9,6
9,5
2,92
LN(X/Xo)
Yx / s
3,50
3,00
2,50
2,00
1,50
1,00
0,50
0,00
y = 0,306x - 2,4387
R = 0,9858
10
t (h)
15
20
Figura 12. Linealizacin de la variacin de

concentracin de clulas
0,306 h 1 , t lag 2,387 , t lag 7,93h
Fin,
Experimento en continuo
Como se ha mostrado en los ejemplos 4 y 5 no es posible calcular la constante de
saturacin Ks de un experimento donde no se determine la velocidad de crecimiento
celular. En un reactor experimental trabajando en discontinuo la tasa de crecimiento
celular se puede estimar midiendo la variacin de concentracin en periodos muy cortos
de tiempo mediante la ecuacin (28). Pero esta estimacin soso sirve si el intervalo t1-t2
es pequeo,
X1 X 0
X 0 (t1 t 0 )
(28)
Otra opcin es realizar el experimento en un reactor continuo en laboratorio a travs de

una pequea bomba peristltica de alimentacin y evacuacin de caldo. Determinando
las condiciones de trabajo para distintas tasas de crecimiento celular se representa las
inversas de la tasa de crecimiento frente a la inversa de la concentracin de sustrato. A
partir de la ecuacin de Monhod se puede comprobar que esta relacin es un lnea recta
cuya pendiente es Ks/ max y el trmino independiente es la 1/max. Las diferentes tasas
de crecimiento se consigue modificando el caudal de alumentacin puesto que =F/V.
max S
Ks S
max
KS 1
max S
32
Ejemplo 8
En la tabla siguiente se indican las concentraciones de sustrato y biomasa en un
biorreactor continuo de tanque agitado operando en estado estacionario a varias
velocidades de dilucin. Si la concentracin de sustrato en la alimentacin es de 70 g/l
calcular los valores de las constantes de Monod KS y max y los rendimientos.
A la tasa de crecimiento tambin se le llama dilucin. En la tabla se muestran las
inversas de la tasa de crecimiento y la inversa de la concentracin de sustrato cuya
relacin lineal se representa en la grfica.
(h-1)
1/mu
0.30
0.25
0.20
0.12
0.08
Sustrato
(g/l)
4.5
4.1
1.6
0.8
0.4
Biomasa
(mg/l)
3.26
3.36
3.96
4.06
4.16
14
12
10
8
6
4
2
0
0,00
1/
3.33
4.00
5.00
8.33
12.50
1/S
0.22
0.24
0.63
1.25
2.50
Yx/s
0.0000498
0.0000510
0.0000579
0.0000587
0.0000598
y = 3,9714x + 2,7881
R = 0,9891
1,00
2,00
3,00
1/S
Figura 13. Relacin entre la inversa de la tasa de crecimiento y la inversa de la

concentracin de sustrato
1
KS
max
3.9714 ,
max
max
KS 1
max S
2.7881 , K S 1.424 g/l , max 0.3586 h -1
Fin.
A travs de este tipo de ensayo se puede determinar el tipo de inhibicin que producen
distintas sustancias. Una sustancia con inhibicin competitiva la recta que relaciona 1/
y 1/S tendr un cambio de pendiente respecto a la recta obtenida sin inhibicin tomada
como control, pero tendr el mimo trmino independiente (punto de corte con la
abscisas). En una inhibicin no competitiva la recta se modificaran ambos, la pendiente
y el trmino independiente, respecto al del control.
33
Sin inhibicin
max S
Ks S
max
S
Ks a S
max
a
S
Ks S
max
1
max
a
max
KS 1
max S
KS a 1
max S
KS a 1
max S
Ejemplo 9
Se obtienen los siguientes datos de velocidad de reaccin primero con ausencia de
sustancias inhibidoras (control) y despus bajo la presencia de L y M, en la
concentracin que se indica en la tabla, que son inhibidores de esta enzima. Las
unidades de velocidad son siempre en nmol/min. Determnese grficamente qu tipo de
inhibicin causan L y M y determina las constantes aparentes a y Ki.
(control) (min-1)
16,67
20,00
24,70
30,00
50,50
66,67
70,00
71,50
80,00
81,00
S (mM)
0,20
0,25
0,33
0,50
1,00
2,00
2,50
3,33
4,00
5,00
con L (6M)
5,75
7,69
10,00
14,29
25,00
40,00
45,45
52,63
57,14
62,50
con M (30 M)
5,56
6,67
8,33
12,11
16,67
22,22
23,81
25,64
26,67
27,77
A partir de los datos de la tabla del enunciado se calculan las inversas de la tasa de
crecimiento y de la concentracin de sustrato en cada uno de los experimentos. A partir
de stas se representan las rectas correspondientes.
1/
0,06
0,05
0,04
0,03
0,02
0,01
0,01
0,01
0,01
0,01
1/s
5,00
4,00
3,00
2,00
1,00
0,50
0,40
0,30
0,25
0,20
1/ L
0,17
0,13
0,10
0,07
0,04
0,03
0,02
0,02
0,02
0,02
1/ M
0,18
0,15
0,12
0,08
0,06
0,05
0,04
0,04
0,04
0,04
34
1/
0,20
0,18
0,16
0,14
0,12
0,10
0,08
0,06
0,04
0,02
0,00
0,00
y = 0,0299x + 0,0294
R = 0,998
y = 0,0317x + 0,0086
R = 0,9965
y = 0,01x + 0,0105
R = 0,9965
1,00
2,00
3,00
4,00
5,00
6,00
1/S
Control
Con Inhibidor L
Control
KS
max
0,010 ,
max
Con Inhibidor M
Con inhibidor L
0,011 min,
K S 0,952 mM , max 95,238 min -1
K S a
max
0,032 ,
max
0,009 min,
K S a 3,686 , max 116,279min -1

K S 0,952 mM , a 3,870 ,
K i 0,0021mM
Con inhibidor M
K S a
0,0294 min,
max
max
K S a 3,686 , K S 1,017 mM ,
a 2,8 , K i 0,0017mM
0,0299 ,
Fin.
6. Bombas y conexiones
Una vez calculados los flujos de entrada y salida del bioerreactor se pueden dimensionar
las bombas. La bomba convierte energa mecnica, procedente de un motor elctrico (o
endotrmico), en energa hidrulica. La potencia hidrulica (Nh) se manifiesta en hacer
circular un caudal de un fluido (Q) a determinada presin (P).
Nh Q P
El caudal de un circuito indica la cantidad de fluido que circula en un conducto por
unidad de tiempo. Resulta, por tanto, del producto de la velocidad de circulacin del
fluido (v) por la seccin de la tubera (S).
35
Q vS
Generalmente los biorreactores requieren presiones pequeas aunque la alimentacin y

evacuacin de caldo se suelen hacer por la parte inferior para evitar la entrada accidental
de aire, que podra contaminar el proceso. La presin necesaria en la bomba se calcula
de acuerdo a la ecuacin de Benouilli.
Pbomba
Pbomba
P
v 2
P v 2 Pprdidas
z o o o z1 1 1
2g
2g
P1 Po v12 vo 2 Pprdidas
( z1 z o )
2 g 2 g
Donde z o Po y vo son la altura, presin y velocidad de circulacin antes de la bomba y

v2 v 2
z1 , P1 y V1 despus de la bomba. 1 o y Po suelen ser cero y z1 es la altura del
2g 2g
medio de cultivo dentro del reactor

Se entiende por desplazamiento o cilindrada de la bomba, el volumen de fluido activado
por revolucin; la posibilidad de regulacin de la velocidad de giro, permite una
variacin continua de caudal suministrado por las bombas, principalmente en las
mquinas de paletas y pistones. No obstante no todo el volumen de fluido movilizado
por la bomba se integra en el caudal til proporcionado, pues existe una recirculacin en
su interior debido a las pequeas holguras de los elementos impulsores. Adems de
estas recirculaciones pueden existir fugas al exterior originadas por la imperfeccin de
la estanqueidad. A la relacin entre el caudal til que proporciona la bomba y el caudal
total que pone en movimiento se le denomina rendimiento volumtrico.
Q
Q qi q e
donde Q es el caudal til proporcionado por la bomba, qi caudal que recircula en el

interior y qe es el caudal que se pierde por fugas al exterior.
De la presin generada en el interior de la bomba, tambin existe una parte que se
pierde por las turbulencias existentes en el fluido o por el rozamiento de las partculas
con las superficies internas del propio dispositivo. Por tanto, tambin ser necesario
definir un rendimiento hidrulico, que ser la relacin entre la presin real disponible a
la salida de la bomba y la presin generada en su interior.
36
P
P Pi
siendo P la presin a la salida de la bomba y Pi prdidas de presin en el interior.

Adems en el acoplamiento bomba-motor existen rozamientos entre las piezas que
componen los diferentes elementos. Esto dar lugar a unas prdidas de energa
mecnica. La relacin entre la energa mecnica utilizada para su transformacin en
energa hidrulica y la consumida se denomina rendimiento mecnico m .
Finalmente la potencia hidrulica obtenida ser N h Q P , y la potencia demanda al
motor vendr dada por
QP
N demand
v h m
Las bombas quedan definidas a partir de sus curvas caractersticas. Las curvas
caractersticas de una bomba relacionan el caudal y la presin proporcionados,
indicando el rendimiento total obtenido.
Las bombas las podemos clasificar en rotativas o de movimiento alternativo. Las
bombas rotativas para su funcionamiento requieren que estn cebadas, es decir, llenas
de fluido. stas pueden ser centrfugas, de engranajes, de paletas, o persistlticas. Las
bombas de movimiento alternativo pueden ser de membrana o de pistones.
Bombas rotativas de engranajes o lbulos
Estas mquinas son de construccin sencilla, utilizan ruedas dentadas o de lbulos,
entre cuyos intersticios queda retenido el fluido. Suelen ser de tamao reducido, fcil
acoplamiento y de mayor tolerancia a la suciedad. De forma general, las mquinas de
engranajes y lbulos pueden trabajar con presiones mximas de 140 bares, aunque
existen modelos 250 bares; los caudales pueden oscilar de 1 a 600 1/min, y la velocidad
de giro se sita sobre un valor mximo de 2400 rev/min.
Figura 14. Bombas rotativas de engranajes y lbulos
37
Bombas paletas
Estas bombas estn constituidas por una cmara fija llamada estator de diseo circular o
elptico y un rotor en el que unas paletas sueltas van alojadas en unas ranuras que
permiten su desplazamiento por su interior. En estas mquinas el rotor se encuentra
descentrado respecto al estator. El desplazamiento de las paletas hacia el exterior
chocando contra el estator es debido a la fuerza centrfuga del movimiento giratorio. Al
sobresalir empuja al fluido hacindolo discurrir por un volumen variable lo que le
confiere la presin. La cilindrada se puede regular variando la excentricidad.
Figura 15. Bomba rotativa de paletas

Las mquinas de paletas equilibradas se han diseado para trabajar con presiones de un
orden similar a las de engranajes. En las desequilibradas no sobrepasan los 70 bar; los
caudales y velocidades de giro son de mayor valor (de 2 - 950 litros/min y 4000 rev/min
como mximo), y mejoran los rendimientos totales.
Bombas peristlticas
Las bombas peristlticas constan de una tubera de goma flexible y un rotor con varias
levas. Al girar las levas van presionando la goma empujando el fluido que queda
ocluido en la tubera. Este proceso es llamado peristalsis por similitud a los sistemas
biolgicos de transporte como en el aparato digestivo. Este tipo de bombas es el ms
usado cuando se desean condiciones elevadas de asepsia, para evitar contaminaciones
del cultivo, dado que permite una desinfeccin sencilla pasando un fluido desinfectante
limpiador por la tubera.
38
Figura 16. Bomba peristltica

Bombas centrifugas
Estas bombas estn constituidas por un rodete con labes en el interior de una carcasa.
El fluido entra a la carcasa por la parte central coaxial al rodete. Al girar los labes
empujan a las partculas dndoles un movimiento giratorio. La fuerza centrfuga hace
que tiendan a desplazarse radialmente ejerciendo una presin sobre las paredes de la
carcasa, en la cual se inserta tangencialmente la tubera de impulsin. Estas bombas son
las que proporcionan mayor presin y caudal.
Bombas de membrana o de pistones
En este tipo de mquinas el desplazamiento del fluido se realiza por mediacin de una
variacin del volumen por el movimiento alternativo del elemento impulsor. ste puede
ser un pistn alojado en un cilindro, o la deformacin de una membrana a travs de la
accin de una leva. Las mquinas de pistones son las de mayor rendimiento, con presin
mxima de 350 bar, caudal de 2 a 1700 1/min y velocidad mxima de 6000 rev/min.
Conexiones
Uno de los aspectos ms importantes en el diseo de la instalacin es evitar puntos
ciegos que queden fuera del alcance de los fluidos de desinfeccin, en donde puedan
acumularse clulas indeseadas contaminantes o inhibidores. Para evitar esto, todas las
conexiones de los biorreactores son de tipo clamp. Este tipo de conexiones consisten en
la unin de dos superficies planas muy pulidas unidas una abrazadera externa. Entre las
superficies se coloca una junta que suele ser de EPDM.
EPDM (Etileno Propileno Dieno tipo M ASTM) es un termopolmero elastmero que
tiene buena resistencia a la abrasin y al desgaste. La composicin de este material
contiene entre un 45% y un 75% de etileno, siendo en general ms resistente cuanto
mayor sea este porcentaje. Tiene una resistencia muy buena a los agentes atmosfricos,
cidos y lcalis, y a los productos qumicos en general. La temperatura de trabajo oscila
entre los -40 y los 140 C. Esto es muy importante dado que la desinfeccin se suele
hacer con la circulacin de un cido fuerte, seguido de un lcali y agua o vapor a alta
temperatura. Los tipos de piezas a unir sern tuberas, codos, piezas en T, vlvulas,
bomba etc.
39
Figura 17. Junta tipo clamp.
7. Diseo sistema de aireacin
En procesos aerobios el mantenimiento de la colonia de clulas en reproduccin

requiere suministrar, junto con sustrato, oxgeno para la respiracin. Cuestiones claves
en el diseo de la instalacin de aporte de aire son la determinacin del caudal a aportar,
seleccin del compresor, el acondicionamiento del aire para dejarlo sin clulas
contaminantes o inhibidores, como pueden ser residuos de aceite con distintos
hidrocarburos.
Clculo del flujo de aire para respiracin
Las necesidades de oxgeno por mol de microorganismos reproducidos pueden ser
obtenidos de la reaccin estequiomtrica del proceso, cuya forma general se muestra en
la ecuacin (1), dado por a/c. Este valor tambin puede ser obtenido por ensayos
especficos de respirometra. No obstante, para conocer el consumo de oxgeno por
unidad de tiempo es necesario tener en cuenta la cinetica del crecimiento microbiano
segn la ecuacin (29) donde Yx / o es el rendimiento biomasa/oxigeno.
roc2
dX
1
X
Yx / o dt Yx / o
1
moles de O 2
) (29)
sl
Si se denomina Faire al flujo de aire que se introduce en el reactor este puede ser
calculado por la ecuacin de los gases. El aire contiene aproximadamente 21% de
oxgeno.
n
Faire Paire aire RT
t
o2
no 2
0,21
naire
n
Faire 0,21 Paire o 2 RT
t
Faire 0,21 Paire V
1
Yx / o
X RT
Faire (necesidades tericas)
40
El problema tcnico que surge cuando se burbujea aire en el caldo de cultivo es que
gran parte del oxgeno no se disuelve en el lquido sino sale por la superficie
acumulndose en forma gaseosa en la parte superior del reactor, donde la presin del
gas aumenta hasta un determinado valor definido por el valor lmite de una vlvula de
alivio colocada en la tapa superior. La cantidad de oxgeno disuelta en el lquido viene
definida por la Ley de Henry: La solubilidad de los gases en los lquidos es
proporcional a la presin parcial del gas. La constante proporcionalidad se denomina
constante de Henry Kh, de tal forma que
Kh
Presin parcial del gas

Fraccin molar en la solucin
Hay que advertir que para el oxgeno la solubilidad disminuye con la temperatura. Este
es el origen de las primeras burbujas que se producen al calentar el agua. La constante
de Henrry para el oxigeno en agua a 20C es 2.95 107 mm Hg, para 30C es 3.52 107
mm Hg.
Tabla 5. Kh (mmHg) para 298K
Gas
CH4
CO2
H2
N2
O2
Lquido
Agua
3,14 105
1,25 106
5,34 107
6,51 107
3,30 107
Benceno
4,27 105
8,57 104
2,75 106
1,79 106
Ejemplo 10
Si se hace burbujear O2 en agua a 30C con una presin de 742,5 mm Hg Cuantos ml
de oxgeno se disolvern en el agua por litro? Cul sera la concentracin de oxgeno
disuelto en el equilibrio?
PO2
3.52 10 7 mmHg
X O2
no 2
n
P
742,5 mmHg
o2 o2
X o2
n o 2 n H 2O n H 2O
K h 3.52 10 7 mmHg
Kh
1000 g/l
55,55 moles de H2O/l
18 g/mol
742,5
C o*2 no 2
55,55 1,17 10 3 moles de O2/l
7
3,52 10
n H 2O
no 2
1,17 10 3
Vo 2
RT
0,082 303 0,0297 litros
Po 2
742,5 / 760
Fin.
41
La Ley de Henry implica:
Existe una concentracin mxima de gas en el disolvente en funcin de la

presin parcial del gas soluto. Esta concentracin la denominamos: Co*2
Si existe un consumo de oxgeno en el seno del disolvente esta concentracin
disminuir, apareciendo un gradiente.
La cuestin que se plantea es la velocidad a la cual el oxgeno se disolver en la

direccin del gradiente, es decir: Cul ser la velocidad de transferencia del oxgeno de
la fase gaseosa a la fase lquida, secuestrado como soluto?
La velocidad de transferencia de O2 (rO2) desde el seno de la fase gaseosa (burbujas)
hasta la fase lquida (medio lquido) est determinada por la siguiente ecuacin (30)
dCo 2
K L a Co*2 Co 2
dt
(moles/ l s)
(31)
donde:
Kla (s-1) es el coeficiente volumtrico de transferencia de oxgeno;
Co 2 : la concentracin de O2 disuelto en el seno del lquido (moles/l)
Co*2 : la concentracin de O2 disuelto en equilibrio con la presin parcial de oxgeno de
la fase gaseosa.
El Kla, y por lo tanto el grado de transferencia de oxgeno desde el seno del lquido
hasta las clulas o microorganismos en cultivo, dependen de las condiciones de
operacin del sistema de cultivo: caudal de aire, volumen del lquido, rgimen de
agitacin, rea de transferencia y viscosidad del cultivo. En general, la viscosidad y el
volumen del lquido disminuyen la Kla; El rea de transferencia, la agitacin aumentan
la Kla. Esto implica que la determinacin de Kla debe realizarse de forma experimental
mediante sensor de oxgeno disuelto.
Para considerar la velocidad de transferencia de oxgeno en la alimentacin celular debe
analizarse el balance de la ecuacin (32), donde

X representa el consumo de
Yx / o
oxgeno de las clulas por unidad de tiempo. La ecuacin (31) representa la velocidad
de transferencia de oxgeno entre las burbujas y el lquido pero su concentracin estar
influenciada por el consumo.
dC o 2
Kla (C o*2 C o 2 )
X
dt
Yx / o
(32)
En el diseo de un biorreactor la alimentacin de aire debe conseguir que la

dCo 2
concentracin de oxgeno en el lquido sea constante, es decir
0 , por tanto, la
dt
ecuacin de balance de oxgeno se expresa como:
42
Kla (Co*2 Co 2 )
Yx / o
Para el clculo del flujo de aire necesario que retomemos la ecuacin que
Faire 0,21 Paire V
1
Yx / o
X RT
Donde V= volumen del reactor

Sustituyendo tenemos
Faire 0,21 Paire V Kla (C o*2 C o 2 ) RT
Para relacionar con las presiones tenemos que

n
no 2
n
1000
o 2 , no 2 X o 2
,
C o*2 o 2 , X o 2
no 2 nH 2O nH 2O
V
18
Faire 0,21 Paire V Kla (
1000 1
X o 2 C o 2 ) RT
18 V
Como Po 2 X o 2 K h 0,21 Paire

Faire 0,21 Po 2 V Kla (
Faire
1000 0,21
Paire C o 2 ) RT
18 V K h
1
1000 0,21
V Kla (
Paire C o 2 ) RT
0,21 Paire
18 V K h
La presin del gas en la parte superior del reactor Paire se mide con un manmetro
colocado en la tapa, la concentracin de oxgeno en el lquido se mide con una sonda. A
mayor presin parcial de oxgeno mayor es la concentracin del mismo en el caldo.
Para mantener el sistema en estado estacionario el flujo de aire a aportar debe ser Faire,
la pregunta que se suscita ahora es: Cul ser la presin adecuada para el
mantenimiento de las clulas?
Si el biorreactor continuo X es constante y por tanto se cumple
Kla (Co*2 Co 2 )
Yx / o
1000 0,21
Kla (
Paire C o 2 )
X
18 V K h
Yx / o
43
Si el reactor en discontinuo
Kla (
1000 0,21
Paire C o 2 )
X o e t
18 V K h
Yx / o
De donde se obtiene Po2. En caso de que el medio de cultivo tenga densidad distinta a la
del agua la ecuacin anterior se convierte en
Kla (
dmc 0,21
Paire C o 2 )
X o e t
pm V K h
Yx / o
Donde dmc es la densidad del medio de cultivo y pm su peso molecular.

Clculo de Kla
Los tres mtodos experimentales ms usados se basan en la formulacin de un balance
de oxgeno y se evala el valor de KLa
En un primer mtodo se deja una poblacin celular crecer hasta que no existe oxgeno y
por tanto se produce la muerte celular, posteriormente se inyecta el oxgeno en
condiciones de trabajo (presin y agitacin) durante un tiempo t. La variacin de
concentracin de oxgeno se expresa segn la ecuacin (31). En la ecuacin no consta
el trmino de consumo ya que no tenemos poblacin microbiana. Tambin el oxgeno
puede ser desplazado con nitrgeno, y despus proceder a la inyeccin para la
reaireacin. La concentracin puntual de oxigeno en la biorreactor se evala con una
sonda. La presin de gas en la parte superior se determina con el manmetro de la tapa y
es fija por la accin de la vlvula de alivio regulable. De ese modo queda perfectamente
determinado el valor Co*2 .
C o*2
1000 0,21
Paire
18 V K h
dCo 2
K L a Co*2 Co 2
dt
C (t )
dCo 2
Co*2 Co 2
(31)
K L adt
Al inyectar oxgeno su concentracin aumentar con el tiempo. Al resolver la integral

de la ecuacin diferencial (31) la variacin de oxgeno nos permitir construir una recta
cuya pendiente es la constante -Kla.
C (t )
ln1 * K L at
C
(33)
44
Ejemplo 11
Un proceso de obtencin de antibiticos se realiza en un fermentador de lecho
fluidizado, utilizando biomasa en forma de agregados o plets. Para la determinacin
del coeficiente de transferencia de oxgeno se utiliza la tcnica de eliminacin de gases
con N2 y, posteriormente, se reairea con aire en las condiciones de cultivo. Calclese el
valor del KLa a partir de los datos obtenidos en la fase de reaireacin que se presentan en
el cuadro siguiente. La concentracin de saturacin de O2 en las condiciones de
operacin es de 8.1 mg/kg
Co2 (mg/kg)
0,02
0,02
0,03
0,37
1,03
3,06
4,09
4,96
5,46
6,01
6,33
6,79
7,04
7,25
7,47
7,53
7,57
7,67
7,73
7,86
7,89
7,97
7,99
9
8
7
6
C (ppm)
t (min)
1,0
2,0
3,0
4,0
5,0
6,0
6,5
7,0
7,5
8,0
8,5
9,0
9,5
10,0
10,5
11,0
11,5
12,0
12,5
13,0
13,5
14
15
5
4
3
2
1
0
0
10
15
20
t (min)
Figura 18. Evolucin concentracin O2 disuelto
45
Segn esta ecuacin (29) se calcula el ln y representaremos grficamente:
10
15
20
Ln (1-(C/C*))
0,0
-1,0
-2,0
-3,0
-4,0
-5,0
Tiempo (min)
0
10
15
20
25
30
0,0
Ln (1-C/C*))
Co2
t (min) (mg/kg) Ln(1-(C/C*))
0
0,02
-0,0025
1,0
0,02
-0,0025
2,0
0,02
-0,0025
3,0
0,03
-0,0037
4,0
0,37
-0,0468
5,0
1,03
-0,1360
6,0
3,06
-0,4745
6,5
4,09
-0,7031
7,0
4,96
-0,9476
7,5
5,46
-1,1211
8,0
6,01
-1,3547
8,5
6,33
-1,5209
9,0
6,79
-1,8218
9,5
7,04
-2,0336
10,0
7,25
-2,2544
10,5
7,47
-2,5539
11,0
7,53
-2,6540
11,5
7,57
-2,7267
12,0
7,67
-2,9358
12,5
7,73
-3,0861
13,0
7,86
-3,5190
13,5
7,89
-3,6525
14
7,97
-4,1321
15
7,99
-4,2991
-1,0
-2,0
-3,0
-4,0
y = -0,2189x + 1,0764
R = 0,9935
-5,0
Tiempo (min)
Si cogemos el tramo lineal comprendido entre los tiempos 5 y 14, el valor del KLa es de
0.219 min-1
Fin.
Ejemplo 12
Se utiliza el mtodo indirecto para medir el Kla en un fermentador que opera en 30 C.
Los datos de concentracin de oxgeno disuelto en funcin del tiempo durante la etapa
de reoxigenacin son las siguientes. La concentracin de saturacin de oxgeno en el
caldo es de 7,9 10-3 kg m-3. Calcula Kla
Tiempo (s)
10
15
20
30
40
50
70
100
130
CO2 (% de
saturacin de
aire)
43,5
53,5
60,0
67,5
70,5
72,0
73,0
73,5
73,5
Ln(1-C/C*)
-0,571
-0,766
-0,916
-1,124
-1,221
-1,273
-1,309
-1,328
-1,328
46
50
100
150
0
0,0
-0,2
-0,2
-0,4
-0,4
Ln (1-C/C*)
Ln (1-C/C*)
0
0,0
-0,6
-0,8
-1,0
-1,2
-1,4
10
20
30
40
y = -0,0271x - 0,3367
R = 0,9761
-0,6
-0,8
-1,0
-1,2
-1,4
Tiempo (s)
Tiempo (s)
C (t )
ln1 * K L at
C
K L a 0.0271 s -1
Fin.
Una segunda alternativa para el clculo de la contante Kla es medir la concentracin de

oxgeno a la entrada y salida de gases del biorreactor. El balance de oxgeno sigue la
ecuacin (30), donde C eo 2 es la concentracin de oxigeno a la entrada del flujo de aire y
C so 2 es la concentracin de oxgeno en el flujo de salida de gases.
dCo 2
1
Faire Ceo2 C so 2 V
X
dt
Yx / o
En estado estacionario el trmino acumulacin desaparece:

Faire C eo 2 C so 2 V
1
Yx / o
(30)
dCo 2
0
dt
Si combinamos la ecuacin con la de velocidad de transferencia obtenemos:
Faire C eo 2 C so 2 V K L a C o*2 C o 2
Podemos calcular el coeficiente si disponemos la medida de la concentracin de

oxgeno en el caudal del gas a la salida (analizador de gas).
Ceo2 C so 2
F
K L a aire
V Co*2 Co 2
Una tercera opcin para el clculo de la contante Kla es la llamada tcnica dinmica.
Este mtodo consiste en introducir una perturbacin en el sistema cuando se encuentra
en estado estacionario y analizar la respuesta. En un momento determinado se
interrumpe el suministro de oxgeno del sistema, visualizando un descenso lineal de la
47
concentracin de O2 disuelta. Este descenso se debe al consumo por parte de las clulas.
Antes de llegar a la concentracin crtica de oxgeno se restablece la entrada de aire. En
la Figura 19 se observan tres fases.
Figura 19. Variacin de concentracin de oxgeno tras interrupcin de suministro en

biorreactor continuo
Hasta el punto A el biorreactor est en estado estacionario, y por tanto la concentracin
de cualquier compuesto, incluido el oxgeno, es constante.
dC o 2
Kla (C o*2 C o 2 )
X 0
dt
Yx / o
Kla (C o*2 C o 2 )
X
Yx / o
Entre el punto A y B se experimenta un descenso lineal de la concentracin de oxgeno.
La transferencia de oxgeno desde el aire al fluido es despreciable.
dC o 2
X
dt
Yx / o
Desde el punto B hasta el C se produce un aumento de la concentracin de oxgeno a

causa de la reaireacin del reactor, a travs de burbujeo.
Co2
1 dC o 2
X ) C o*2
Kla dt
Yx / o
Desde donde se obtiene Kla
48
Ejemplo 13
Empleando un electrodo de oxgeno disuelto en un fermentador con levaduras, se
obtuvieron los siguientes resultados con el mtodo directo. A los 30 segundos se corta la
aireacin, volviendo a suministrar aire despus de 110 segundos. Encuentre los valores
de
X , Kla y C o*2
Yx / o
Tiempo (s)
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
110
120
130
140
150
O2
disuelto
(mg/kg)
5,2
5,2
5,2
5,2
4,7
4,2
3,7
3,1
2,6
2,0
1,5
0,9
2,8
3,8
4,2
4,4
Kla (C o*2 C o 2 )
Los primeros 30 segundos
Yx / o
Entre 30 s y 110 s
O2 Disuelto mg/kg
6
y = -0,0538x + 6,8683
R = 0,9993
5
4
3
2
1
0
0
20
40
60
Tiempo (s)
80
100
120
dC o 2
X
dt
Yx / o
49
Co 2
Yx / o
Yx / o
X t Cio 2
X 0,0538 mg de oxgeno por kg y segundo
Despus de 110 s, linealizado este balance en el tramo B-C obtenemos una recta de
pendiente 1/Kla
Co 2
dC o2
dt
dCo 2
X
dt
Yx / o
110
120
130
140
150
0,9
2,8
3,8
4,2
4,4
0,19
0,100
0,040
0,020
0,029
0,243
0,153
0,093
0,073
0,082
Concentracin de O2 (mg/kg)
4,50
4,00
3,50
y = -19,27x + 5,6325
R = 0,9972
3,00
2,50
2,00
1,50
1,00
0,50
0,00
0
Co2
0,05
0,1
0,15
0,2
dC/dt+muX/Yo/x
0,25
0,3
1 dC o 2
X ) C o*2
Kla dt
Yx / o
C o*2 5,63 mg/kg

1
19,27 , Kla 0,052 s-1
Kla
Fin.
Con este mtodo hay que tener en cuenta:
- No llevar el cultivo hasta el valor crtico de concentracin de oxgeno
50
- Si el cultivo presenta valores muy elevados de demanda de oxgeno el tramo A-B ser
muy corto pues la concentracin ser prxima a la crtica
- Tcnica difcil si la demanda de oxgeno es cercana a la capacidad de suministro
Seleccin del compresor
La funcin del compresor ser por un lado proporcionar el aire de oxigenacin, por otro
regular la abertura y cierre de las vlvulas de accionamiento neumtico. Los parmetros
de seleccin del compresor sern kg aire/h, presin y potencia. El rango habitual de
presiones requeridas en biorreactores oscila entre 8 y 15 bar, con caudales entre 1 y
1100 m3/h, con potencia entre 4 y 15 kW, dependiendo del volumen.
Existen tres tipos de compresores: compresores de pistones, compresores rotativos y
turbocompresores. Los compresores rotativos pueden ser de paletas o de tornillo. Los
turbocompresores pueden ser de flujo axial o de flujo radial. El compresor almacena el
aire a presin en un caldern. ste est formado por una estructura metlica en cuyo
interior existe una membrana elstica. Al llenarse el caldern la membrana se estira,
como lo hace un globo hinchado. Cuando el aire es requerido se abre la vlvula de
salida expulsando el aire almacenado a cierta presin. La cada de presin en el interior
del caldern se detecta con un manmetro. En ese momento se acciona el compresor
para que introduzca ms aire.
Figura 20. Instalacin del sistema de alimentacin de aire en un biorreactor
51
Ejemplo 14
El equipo de produccin de aire comprimido en un reactor de 500 l est compuesto por
un compresor de tornillo de las siguientes caractersticas:
Caudal de aire a 10 bar: 1450 l/min
Caudal de aire a 6 bar: 300 l/min
Potencia consumida: 11kW
Tensin: 400V (3 fases)
Nivel sonoro: 64 dB(A)
Dimensiones: 700x600x970
Peso: 200 kg
Vlvulas de alivio
Las vlvulas de alivio de presin, tambin llamadas vlvulas de seguridad, estn
diseadas para liberar fluido cuando la presin interna supera el umbral establecido. Su
misin es evitar una explosin, el fallo del equipo en caso un exceso de presin. Existen
tambin las vlvulas de alivio que liberan el fluido cuando la temperatura supera un
lmite establecido. Estas vlvulas son llamadas vlvulas de alivio de presin y
temperatura.
Mecnicos
Elctricos
Electrnicos
8. Sistemas de esterilizacin del reactor
Los procesos desarrollados en los biorreactores son muy sensibles a la contaminacin.

La mayora de los microorganismos utilizados en la industria alimentaria, farmacutica,
cosmtica o de biocombustibles crecen de forma ptima bajo sustrato de glucosa y a
temperaturas entre 20-30C en microorganismos mesfilos, y 35-65C en
microorganismos termfilos. En estas condiciones cualquier clula que se introduzca en
el interior del reactor crecer con las clulas deseadas provocando una enorme
competencia, e incluso producir sustancias qumicas inhibidoras del proceso objetivo.
Las clulas contaminantes pueden crecer a velocidad mayor que las no contaminantes.
Esto nos obliga a tener especial cuidado en el diseo para conseguir condiciones de
asepsia, e introducir un sistema de desinfeccin o esterilizacin en el biorreactor.
Se denomina desinfeccin o sanitizacin a la reduccin significante del nmero de
clulas mediante una limpieza cuidadosa, que lleve la poblacin microbiana a niveles no
perjudiciales para el proceso. Se denomina esterilizacin a la eliminacin o destruccin
completa de todos los microorganismos presentes, capaces de competir con el
organismo deseado en las condiciones de cultivo.
Antes de la carga del biorreactor con el sustrato es necesario esterilizar el interior de los
equipos y de las conducciones. Posteriormente se debe esterilizar el propio sustrato bien
en un esterilizador a parte o bien en el interior del propio reactor. Slo en esas
circunstancias se puede proceder a la inoculacin de la cepa objetivo.
52
Existen cinco sistemas que se pueden utilizar en la esterilizacin de un biorreactor.

stos son los siguientes:
Esterilizacin por filtracin
Esterilizacin por radiacin
Esterilizacin por calor
Esterilizacin por calor hmedo
Existen multitud de sustancias qumicas nocivas para las clulas que nos permiten
esterilizar las conducciones y los equipos, como bombas, sensores, interior del reactor,
etc. Tras la aplicacin del agente qumico es necesario un enjuague profundo para el
arrastre de los contaminantes, generalmente con agua esterilizada caliente. Las
sustancias qumicas no son aplicables para esterilizacin del sustrato. Los compuestos
qumicos ms usados son los siguientes:
Alcoholes, el grupo OH en solucin acuosa libera protones que penetran las

membranas celulares provocando la acidificacin del citoplasma y disrupcin de
membranas. Generalmente se utilizan soluciones acuosas al 70% de etanol.
cidos orgnicos como cido srbico, cido benzoico o propinato clcico.
Actan de forma muy semejante a los alcoholes, provocan disrupcin de
membranas y desactivacin de protenas. Son comunes en la preservacin de
alimentos.
Compuestos fenlicos: Actan del mismo modo provocan disrupcin de
membranas y desactivacin de protenas.
Compuestos con amonios cuaternarios. Son agentes catinicos. Deben trabajar a
concentraciones elevadas y no son totalmenmte eficaces contra endosporas,
Mycobacterium tuberculosis y Pseudomonas spp.
Agentes oxidantes: Ozono, hipoclorito, perxido de hidrgeno.
Aldehdos: Mata por inactivacin de protenas: Formaldehdo, Gluteraldeido.
Esteriliza despus de horas de contacto.
Halgenos: Son agentes oxidantes y desnaturalizantes de protenas.
xido de Etileno: Gas utilizado para esterilizar plsticos.
Sales de metales pesados con poder antimicrobiano, como por ejemplo nitrato de
plata
La instalacin requiere un depsito de almacenamiento del compuesto qumico con

dispensador basado en un venturi o con una bomba especfica. Para poder pasar el
fluido esterilizador por todas las tuberas se requieren vlvulas de tres vas, tambin
llamadas de asiento doble (bloqueo y purgado). Por una de las vas entra el esterilizador
en la conduccin permaneciendo la va de entrada de sustrato cerrada. Despus del
enjuague se cierra el circuito de esterilizacin abrindose la va de alimentacin de
sustrato. Para la esterilizacin del interior del reactor el fluido desinfectante se emite a
travs de unos emisores, generalmente esfricos con finas perforaciones, de modo que
inyectando el lquido a presin se pulveriza el chorro mojando completamente las
paredes internas. El efecto es similar al de una ducha. La disposicin de los emisores
esfricos debe ser tal que no quede ninguna superficie sin tratar. La presencia del eje de
53
la turbina de agitacin en ocasiones puede generar un obstculo. Para una adecuada

distribucin del chorro se suelen colocar dos emisores en la parte superior, simtricos
respecto al eje de agitacin, y otros dos en la parte inferior. Una vez se ha desinfectado
la instalacin el lquido residual se elimina a travs de una vlvula de vaciado colocada
en la parte ms baja del biorrecator.
Un sistema particular de desinfeccin o esterilizacin qumica son los llamados
Cleaning In Place Technology (CIP) y Sterilizer In Place (SIP). stos son sistemas
diseados para la limpieza y esterilizacin automticos con capacidad de aislar una
parte de la instalacin permitiendo que el resto contine su produccin. Los sistemas
CIP se basan en una serie cuatro fases de desinfeccin: Primero un pase de una solucin
custica que permite solubilizar grasas, aceites y otros compuestos orgnicos; segundo
un pase de solucin cida para neutralizar restos del lavado alcalino y extraer depsitos
de minerales como la cal del agua; tercero el pase de un detergente y por ltimo agua
esterilizada.
Las soluciones de limpieza se preparan y mantienen listas para su uso en tanques
separados donde se monitoriza el nivel, la temperatura y la concentracin. Las
condiciones de operacin quedan definidas por el caudal emitido, la presin, la
temperatura y el tiempo efectivo de cada tratamiento.
Figura 21. Esquema de funcionamiento de un CIP

Una bomba, generalmente centrifuga, se encarga de impulsar las soluciones desde los
tanques depsito hasta los emisores del biorreactor a desinfectar en donde est instalado
el dispositivo de aspersin interna. En la tubera de vaciado existe otra bomba para el
retorno de las mismas a la planta CIP. El control de las lneas se hace con vlvulas con
accionamiento neumtico. La velocidad mnima del flujo de un sistema CIP a travs de
los sistemas de aspersin debe ser mayor o igual a 1,5 m/s normalmente hasta de 3 m/s
54
para facilitar el arrastre. El caudal y presin llegan por lo general hasta 140 m3/h y 10
bar, respectivamente. El nmero de tanques depende de los volmenes de detergente y
de desinfectantes requerido, raras veces excede 8 tanques por sistema. El volumen de
los tanques depende del volumen fluido requerido para limpiar los tubos, reactores, etc.
La superficie de contacto con el producto debe ser lisa, libre de grietas o agujeros, no
porosa, no absorbente y no txica. Las soldaduras tambin deben cumplir estas
condiciones. Los materiales ms comunes con estas caractersticas son el acero
inoxidable tipo 304 y 316, algunos cristales y algunos elastmeros. Las lneas deben ser
horizontales y acabar en puntos de drenaje. La base del tanque debe permitir el vaciado
total. El sistema precisa sensores de monitorizacin y tener capacidad de regulacin de
caudal, presin y concentracin de la solucin.
Esterilizacin por filtracin
Este sistema es generalmente usado para esterilizacin de fluidos, ya sea sustrato, agua
o aire. Consiste en un lecho poroso a travs del cual se hace circular el fluido a
desinfectar o esterilizar. Si las clulas contaminantes son de mayor tamao que el poro
quedan retenidas y no pueden pasar. En lquidos se utilizan membranas con poros de 2
m, en gases se suelen utilizar membranas con poros 0,02 m, llamados High Efficiency
Particulate Air Filters (HEPA).
Se utiliza especialmente cuando los lquidos llevan sustancias que se degradan con
calor, como compuestos orgnicos nutricionales, sustratos etc.; para la esterilizacin del
aire de entrada y salida del fermentador.; o para mantener el aire libre de contaminantes
en la sala de fermentacin.
Esterilizacin por radiacin
La radiacin ionizante que produce radicales libres en el agua que alteran las
membranas celulares y las protenas. La eficiencia depende de la penetracin de la onda.
La radiacin UV es muy eficaz para la esterilizacin de instrumentacin porque permite
la esterilizacin de superficies, pero en lquidos es poco penetrante. Los rayos Gamma
penetran se utilizan para esterilizar alimentos
Esterilizacin por calor seco
Consiste en la aplicacin de calor mediante resistencias elctricas en las paredes del
reactor o la circulacin de aire caliente. Destruye los microorganismos por oxidacin
(quema). Necesita ms temperatura que el calor hmedo (170C durante 2 horas).
Adecuado para objetos con elevada resistencia a la temperatura.
Esterilizacin por calor hmedo
Consiste en la aplicacin de agua hirviendo, vapor saturado o vapor sobrecalentado para
provocar desnaturalizacin de protenas metablicas y con ello la muerte del
55
microorganismo contaminante. Este principio es el que se utiliza en los autoclaves. Es

el mtodo ms usado. Elimina casi todo: excepto microorganismos termfilos extremos,
endoesporas y algunos virus. La eficacia depende de la presin y el tiempo de
aplicacin. Generalmente se utiliza vapor a 121C, durante 30 min, y 10 bares de
presin.
La instalacin requiere una caldera, el vapor se hace pasar por el interior de las tuberas
y del reactor del mismo modo que se hace en las instalaciones de esterilizacin con
productos qumicos.
9. Desinfeccin del aire de alimentacin
El aire que se introduce en el biorreactor para el aporte de oxgeno en los procesos

aerobios es un vector de partculas y microorganismos contaminantes del caldo de
cultivo. Cualquier microorganismo que se introduzca en el biorreactor puede encontrar
un medio propicio para su reproduccin y competir con las clulas deseables para el
proceso principal en el biorreactor. Ello obliga a un tratamiento de limpieza y
depuracin antes de su inyeccin. El nivel normal de contaminacin atmosfrica es
cerca de 140 millones de partculas por metro cbico. Casi el 80% de estas partculas
tienen dimensiones inferiores de 2 micras, por ello atraviesan el filtro de entrada de aire
del compresor alcanzado el circuito de aire comprimido. A presin de 7 bar el nmero
de partculas contenidas en el aire comprimido alcanza 1120 millones/m3. A las
partculas anteriores se aaden otras del propio sistema, como vapor de agua, que se
condensa en el interior del circuito de aire comprimido, vapor, gotas de aceite,
contaminantes slidos producidos en la red de la distribucin. Las distintas calidades del
aire estn especificadas en la norma ISO 5873-1
Los efectos de las partculas en el aire comprimido son los siguientes:
Desgaste de instrumentos por corrosin: electrovlvulas, sensores y tuberas
Inhibicin del crecimiento microbiano
Aparicin de cepas competitivas por el sustrato
Contaminacin del producto del reactor
Aumento de costes de mantenimiento
Interrupciones durante el proceso de produccin
Los filtros biolgicos generalmente estn constituidos por una carcasa desenrroscable
porta cartuchos en cuyo interior est el elemento filtrante, dispuestos en serie en la
conduccin de alimentacin. El aire entra por la parte central del cartucho y es obligado
a pasar hacia el exterior por donde se evaca (Figura 22).
Figura 22. Esquema del filtro biolgico
56
Esta constitucin permite su limpieza o sustitucin cuando ste est taponado. El

taponamiento del filtro impide el paso del aire y se incrementa la diferencia de presin.
Hay que tener en cuenta que el filtro no puede abrirse mientras este bajo presin. El
medio filtrante es tejido de microfibra de vidrio una parte hilvanada y otra parte no
hilvanada que protege el medio filtrante de variaciones de presin. La fibra puede ser de
polipropileno, poliestersulfona, PTFE, celulosa o nylon. Son diseados para
proporcionar caudales excepcionalmente altos con bajas cadas de presin, lo que obliga
a que no se humecten en presencia de agua en el aire dado que puede provocar la
obstruccin de los poros impidiendo el paso, ocasionando en ltima instancia el fallo
del filtro. Los materiales de las membranas deben haber estado sometidos a ensayo de
eficacia (LBC) mediante exposicin a bacterias en lquido para comprobar su
capacidad de retencin. Ensayos de exposicin a aerosoles (X-174).
En la Figura 20 se muestra que, tras el caldern del compresor, se debe instalar un filtro
de partculas slidas de 3 micras. Posteriormente se instala un secador-deshidratador
para la eliminacin del agua por condensacin. Tanto en el filtro como en el secador
existe una tubera de evacuacin de condensado (lnea roja). Tras el desecadordeshidratador se colocan cuatro filtros en serie: Eliminacin de partculas slidas 1 m;
filtro de eliminacin de aceite 0,1 micras; filtro de carbn activo (Desoleador Absoluto
Eficacia de filtracin 999%), elimina olores.
Los filtros utilizados para filtrar el aire venteo o fermentacin deben esterilizarse
frecuentemente. Los filtros de aire empleados en los procesos de fermentacin tienen
una vida til de hasta dos aos por lo que, si se esterilizan semanalmente, estarn
sometidos a ms de 100 ciclos de vapor.
Las aplicaciones de los filtros biolgicos son diversas
Venteo estril de tanques de proceso

Filtracin estril de aire de proceso
Venteo estril de liofilizadoras
Venteo estril de autoclaves
Filtracin estril de aire en mquinas de soplado, llenado y sellado de bebidas
Filtracin estril de aire de entrada y salida de fermentadores
Filtracin estril de lquidos agresivos
10. Control trmico en el biorreactor
Como es sabido existe un rango de temperaturas en las que los microorganismos crecen
de forma idnea, alcanzando la velocidad de crecimiento mxima para unas condiciones
de pH fijas. Si la temperatura es mayor o menor del rango ptimo, la velocidad de
crecimiento disminuye. Los valores lmite para el crecimiento ptimo dependern de la
especie. Durante la reproduccin celular el balance neto de energa en los procesos
metablicos puede ser positivo, cuando se libera calor (proceso exotrmico) o negativo,
cuando se absorbe calor (proceso endotrmico). Si en el crecimiento celular se libera
calor el caldo de cultivo tiende a aumentar su temperatura, si se absorbe calor el caldo
de cultivo tiende a disminuir su temperatura. El sistema de control trmico tiene las
funciones de eliminar o aportar el calor necesario para mantener la temperatura
57
constante. Por tanto necesitaremos un subsistema de calentamiento y un subsistema de

refrigeracin.
Generalmente el control trmico en el reactor se realiza a partir de la transferencia de
calor entre el caldo cultivo y unas tuberas por las que se hace pasar agua caliente, vapor
saturado o vapor sobrecalentado para el calentamiento o agua fra para la refrigeracin,
funcionando como intercambiador de calor. La disposicin de la tubera puede ser
diversa, segn se muestra en la Figura 23.
Figura 23. Enchaquetado (a), serpentn interno (b), serpentn externo (c), tubos internos
(d), intercambiador de calor externo (e), calentador a fuego directo (f).
El sistema ms utilizado consiste en un serpentn, en el que las tuberas se sueldan con
seccin semicircular a la cara externa metlica. La distancia entre los centros suele ser
del doble del dimetro elegido de modo que la superficie de intercambio de calor es el
50% del total de las caras laterales. Para volmenes de biorreactor de 1000 l se suelen
colocar tuberas de dimetros de 70 mm.
El calor a disipar o transmitir al biorreactor se calcula a partir de anlisis calormetricos
del proceso, definindose el rendimiento energtico del mismo como el calor disipado o
absorbida por unidad de biomasa.
g de biomasa
Calor absorbido o emitido
En un reactor continuo la potencia calorfica total absorbida (proceso endotrmico) o la

potencia calorfica generada (proceso exotrmico) se definir como
58
dQ 1
X
dt Y
Si el proceso es exotrmico el balance trmico viene definido por la ecuacin (34) en
caso de un proceso endotrmico el balance se define por la ecuacin (35)
Q disipar Q generado Q prdidas
(34)
Q aportar Q absorbido Q prdidas
(35)
El sistema de intercambio de calor es por conveccin, tal que el calor a aportar o disipar
se calcula con la ecuacin 34, de la cual se puede calcular la temperatura a la que debe
de circular el fluido caloportador por su interior, por la ecuacin (36).
dQ
Dr U L (Tint Text )
dt
(36)
donde
U Dr
1
d
d
1
1
1
d
1
d
1
1
ln i ....
ln 2 ....
ln 1
ln int
2k 2 d 2 2k1
he d ext 2k n d ext
2 ki d i
d1 hi d int
La misma se utiliza para determinarlas prdida.

Por otra parte, el sistema de control trmico puede ser aprovechado para otras
funciones. Adems de ser diseado para regular la temperatura durante el proceso, el
subsistema de calentamiento puede utilizarse para la produccin de agua hirviendo,
vapor saturado o vapor sobrecalentado para la desinfeccin/esterilizacin de las
tuberas, reactor y sustrato. Una vez aplicado el agua o vapor para no tener que esperar
un tiempo excesivo en el enfriamiento, se procede a la refrigeracin.
11. Control de pH y espuma
Toda clula o microorganismo posee un rango de acidez (pH) dentro del cual, es posible
su crecimiento con normalidad. Dentro de ese rango existe un pH ptimo muy bien
definido en el cual el crecimiento es mximo. El pH en el medio de cultivo puede verse
alterado por la naturaleza bsica o cida de los productos de desecho del propio
metabolismo del cultivo celular. El sistema de control de pH tiene como objetivo
mantener el pH constante en el medio de cultivo. El sistema de control de acidez consta
de los siguientes elementos:
Dispensador de cido (HCl);

Dispensador asptico de lcali (NaOH);
Filtro microporo en lnea;
Manguera flexible resistente al cido;
Bomba peristltica;
59
Sensor de pH: sonda o probeta electroqumica que mide la acidez y dice al

controlador de pH, la situacin del medio.
Autmata controlador de pH: ordena y regula la accin accionando el motor de
la bomba
En la Figura 24 se muestra el esquema de instalacin de los diferentes dispensadores.

Los rangos de pH considerados ptimos ms habituales son los siguientes:
para levaduras entre 3,5 y 5,5;
para bacterias entre 6,0 y 7,5;
para mohos, segn la cepa, se extiende entre 3 y 7;
para clulas en cultivo entre 6,0 y 7,5.
La medicin del pH en el biorreactor se realiza generalmente a travs de sensores
potenciomtricos que miden la diferencia de voltaje entre dos electrodos separados por
una membrana. Los electrodos estn formados bien por cloruro de plata y plata atmica
AgCl/Ag, bien mercurio Hg/Hg2Cl2 (Calomel). Uno de los electrodos est
encapsulado en una disolucin salina que acta como puente. ste se denomina
electrodo de referencia, sumergido en una solucin normalmente de KCl 3M. El otro
est en contacto con el lquido a analizar, protegido por una carcasa de vidrio. La
capsula del electrodo de referencia evita el contacto directo lquido-electrolito, permite
el paso selectivo de protones. En presencia de protones H+ se produce una reaccin de
oxidacin-reduccin en los dos electrodos
La diferencia de potencial se calcula segn la ecuacin de Nersrt. Una mayor
concentracin de protones H+ producirn un mayor potencial elctrico que a travs de
un transistor se amplifica para indicar el pH. La variacin de la concentracin de Clobliga a calibracin previa.
2 H 2e H 2
2 Ag 2Cl 2 AgCl 2e
E 0,222
0,059
log Cl H
2
2 H 2e H 2
2 Hg 2Cl H g 2 Cl 2 2e
E 0,244
0,059
log Cl H
2
El diafragma del electrodo de referencia presenta distintas capas de materiales para

conseguir que slo pueda atravesarlo los protones: Presenta una placa cermica porosa
que permite pequeo flujo de electrolitos hacia dentro; anillo poroso de PTFE
(politetrafloruro de etileno) que es el que entra en contacto muestra y electrolito.
El electrolito de KCl debe ser rellenado en caso de desecacin. Existen modelos de pHmetros llamados de bajo mantenimiento, que sustituyen el KCl por un gel de glicerina o
60
un slido polmero conductor. Estos materiales evitan el mantenimiento que supone el

rellenado.
Estos sensores pueden experimentar algunos problemas: por ejemplo, la obturacin del
diafragma; contaminacin del sistema de referencia; suciedad en membrana;
envejecimiento o erosin de membrana; burbujas de aire en la membrana o la solucin
interna; concentracin pobre del compuesto de referencia; presencia de fuerzas
electrostticas elevadas cerca del lugar de medida.
61
Figura 24. Esquema de instalacin de los distintos dispensadores

62
12. Sensores asociados al biorreactor
De denominan sensores a resistencias cuya resistividad se modifica en funcin de la

variacin de una magnitud fsica (desplazamiento, temperatura, presin, luminosidad
etc..).
R
l
S
R es la resistencia en Ohmios, es la resistividad en Ohmios/m, l es la longitud en m y

S es la seccin en m2.
El control de los procesos que se desarrollan en el biorreactor requiere el conocimiento
de los distintos parmetros de operacin a travs de distintos tipos de sensores. Los ms
importantes son los siguientes:
-
Carga del biorreactor

Temperatura
Presin
pH
Concentracin de clulas, sustrato y producto
Medidores de DBO
Medidores de Concentracin de O2
Potencia y velocidad de agitacin
Caudales de lquidos y gases
Deteccin de espumas
Deteccin del contenido del biorreactor (volumtrico o msico)
La variacin de resistividad de la resistencia provoca una ligera corriente que se hace

pasar por un transistor que al abrirse provoca una corriente de mayor intensidad en el
circuito principal (Figura 25 y 26).
Control de carga
La carga del biorreactor se detecta por la diferencia de peso a travs de clulas de carga
colocadas en las bases del reactor. Estas clulas poseen un resorte que se desplaza segn
sea comprimido modificando la resistencia del circuito secundario de control.
En la figura 25 se muestra un circuito en el que el desplazamiento de un interruptor IN1
conecta el circuito secundario cuya resistencia provoca que la intensidad de corriente
sea pequea, pero suficiente para conectar el circuito principal, donde la intensidad es
mucho mayor e indica el la carga.
V I R I2
I1
12
V
0,0054 A
R 2200
V 12
1,2 A
R 10
63
Figura 25. Esquema del circuito de control a travs de transistores

Sensores de concentracin celular
En la Figura 27 se muestra el principio de medicin de un sensor de concentracin
celular. En una celda se coloca una resistencia LDR a la que se le hace llegar un haz de
luz de determinada frecuencia. La resistencia modifica su resistividad en funcin de la
intensidad luminosa. Cuando la concentracin celular crece aumenta la dispersin de la
luz. La menor intensidad luminosa en el receptor provoca que la resistencia aumente lo
que provoca que se cierre el transistor. Y viceversa, si disminuye la concentracin
celular aumenta tambin disminuye la resistencia y el transistor se abre.
.
64
Figura 26. Principio de funcionamiento del sensor de concentracin celular

Sensores de O2
Existes dos sistemas: el polarimtrico y el galvnico. En el polarimtrico se induce una
voltaje entre dos electrodos. En el galvnico el voltaje est se induce en la propia celda.
Sistema polarimtrico
65
El sensor de O2 est formado por dos electrodos. Uno de ellos est sumergido en
electrolito (normalmente de KCl) separada del medio a analizar por una membrana de
tefln permeable al O2. Uno de los electrodos suele ser de plata (nodo) y el otro de
platino (ctodo). Sobre el ctodo se reduce el oxgeno produciendo grupos hidroxilos.
Entre los electrodos es generado un voltaje constante de 0,8 V, la intensidad depende de
la resistencia que a su vez es proporcional a la presin parcial del oxgeno en la muestra
4Ag + 4Cl- 4 AgCl + 4e(oxidacin-nodo)
O2 + 2H2O + 4e 4OH
(reduccin)
Sistema galvnico
Generalmente est formado por un ctodo de Au y nodo de Pb (o Zn o Cd
autopolarizados). Igual que en el caso anterior sobre el ctodo, en este caso de oro, se
produce la reduccin del oxgeno.
2 Pb 2 Pb2+ + 4e- (oxidacin-anodo)
O2 + 2 H2O + 4 e- 4OHLa temperatura influye en la presin parcial del oxgeno disuelto y por tanto en la
solubilidad de ste.
RT
E Eo
log[OH ] [ Pb 2 ]
nF
0
.059
E Eo
log[OH ] [ Pb 2 ]
n
Concentracin de CO2
El CO2 es uno de los productos finales de la oxidacin completa de algunos sustratos
por parte los microorganismos. Puede afectar en concentraciones altas el metabolismo
celular. Se mide basndose en el pH ya que la concentracin de CO2 disuelto es
proporcional a la de protones, debido al siguiente equilibrio
CO2 + H2O HCO3- + H+
HCO H
Ka
CO2

logCO log HCO log H log Ka
HCO3
logCO2 log
pH
log Ka log HCO3 log H logCO2

2
Ka
66
13. Control de espuma

La espuma es una capa de glbulos de gas formados por lquido de elevada tensin
superficial. Es un subproducto no deseado formado en la fabricacin de mltiples
sustancias bioqumicas debido a que aumenta la dificultad de la transferencia de gases
entre la fase lquida y la atmsfera el reactor. Ello influye en el equilibrio de los gases
disueltos, como el CO2 que puede actuar como contaminante. En los biorreactores es
comn la formacin de espuma por la utilizacin de sustratos ms o menos espesos y la
aplicacin de agitacin y aireacin.
Los mtodos de eliminacin de la espuma (o prevencin) se basan bien en productos

qumicos antiespumantes, como los aceites minerales, siliconas, steres del cido
fosfrico, alcoholes grasos, tributilfosfatos, derivados de flor o polialcoholes, que
disminuyen la tensin superficial, o medios mecnicos, discos u otras configuraciones
que rompen la espuma. Hay que tener en cuenta que los mtodos qumicos de control de
la espuma pueden dar problemas de contaminacin, especialmente en las industrias
alimentaria y farmacutica, donde la calidad del producto es de gran importancia.
El sistema de control de espuma consta de tres elementos
Controlador de antiespuma: comanda la bomba peristltica que dispensa el

antiespumante y recibe la seal de medicin del sensor de espuma
Detector de espuma: es el sensor que mide el nivel de espuma en el medio de
cultivo. Generalmente est basado en la dispersin de la luz. El detector hace un
barrido vertical de forma que detecta la variacin de la intensidad luminosa
modificando la conductividad o capacitancia de la resistencia.
Dispensador de antiespumante: debe contar con su propio sistema de filtracin y
presurizacin
67
Cuando la luz se enva a travs de la muestra, es dispersada por las burbujas. La

intensidad de la retrodispersin es directamente proporcional a la fraccin de tamao y
volumen de la fase dispersa. Entonces se activa el sistema antiespumante que puede ser
qumico. Generalmente existen 2 sensores uno detecta otro lo comprueba.
14. Dimensionado mecnico del biorreactor

Aunque los biorreactores pueden tener formas diversas (cilindros verticales, cilindros
horizontales, esfricos, prismticos), la mayora se construyen como cilindros verticales.
En el caso de tanques agitados la experiencia ha demostrado que las dimensiones del
cilindro y de los agitadores requeridas para una adecuada mezcla de los componentes y
evitar la aparicin de gradientes estn relacionadas de forma como se indica en la Tabla
6. En la Figura 21 se observa un esquema de las dimensiones del biorreactor con turbina
de agitacin vertical. La turbina puede ser accionada tanto desde la parte superior como
por la parte inferior. Cerca de la superficie interna del cilindro se colocan unas lminas
verticales denominadas Bafflers cuya finalidad es crear puntos de turbulencia.
Figura 21. Esquema del birreactor

68
Tabla 6. Relaciones entre las dimensiones de los distintos elementos de un biorreactor

Turbina de
disco
Turbina de
palas
planas
Turbina de
hlice
1-1.5Dt
Dt/3
2Dt/3
6
Dt/5
Turbina
de ancla
Turbina
Helicoidal
1-1.5Dt
Dt/3
2Dt/3
3
Dt/3
Dt/5
1-1.5Dt
Dt/3
2Dt/3
2
0.95Dt
Dt/5
1-1.5Dt
Dt/3
2Dt/3
0.95Dt
Dt/5
Dimensiones
depsito
Dt
H
Dimensiones
ejes
Dimensiones
Turbina
C
S
n
Dd
W
1-1.5Dt
Dt/3
2Dt/3
6
Dt/3
Dt/5
Dt/6
Dt/3
Da
Dt/2
Dt/2
B
E
nb
Dt/12
Dt/60
4
Dt/12
Dt/60
4
Dt/12
Dt/60
4
<102
<20
<20
<20
<50
Re
<102
Laminar
Bafflers
Viscosidad
Reynols
Rgimen
<10
<10
<10
<10
Ejemplo 15
Se pretende determinar las dimensiones de un biorreactor de 3 m3 con agitacin con
turbina de disco.
Considerando las relaciones de la Tabla 6 aplicamos la ecuacin del volumen del
cilindro.
D2
V T H ,
4
DT 3
1,4 DT H ,
DT3
1,4
4
4 V
43
3
1,4 m
1,4
1,4
H 1,4 DT 1,96 m
DT 1,4
1,668 m
12 12
D
1,4
0,023 m
Separacin de los bafflers de la pared E T
60 60
Anchura de los bafflers B
Longitud del eje de la turbina Le H C

Dimetro del disco Dd
2
1,4 0,93 m
3
DT 1,4
0,47 m
3
3
69
DT 1,4
0,23 m
6
6
D
1,4
0,28 m
Alto de las paletas de la turbina W T
5
5
Longitud de las paletas de la turbina L
Fin.
Resistencia de los materiales
Los biorreactores suelen ser fabricados de materiales fcilmente maleables y que
adems presenten superficies poco rugosas para evitar que puedan incrustarse sustancias
o microorganismos contaminantes para el crecimiento celular deseado. Los materiales
ms comunes son el acero, aluminio, cobre, latn, o plomo. El clculo mecnico del
reactor consiste tanto en la determinacin de las resistencias de los materiales para
soportar los esfuerzos y cargas a los que se ven sometidos, junto la definicin del
acabado superficial de los materiales. El clculo de espesores de paredes y tapas de los
biorreactores debe seguir las siguientes disposiciones:
Directiva 87/404/CEE del Consejo de 25 de junio de 1987 relativa a la

aproximacin de las legislaciones de los Estados Miembros en materia de
recipientes a presin simples
Directiva 97/23/CE del Parlamento Europeo y del Consejo de 29 de mayo de
1997 relativa a la aproximacin de las legislaciones de los Estados miembros
sobre equipos a presin
Directiva de Seguridad de Mquinas 98/37/CE.
Directiva sobre Material Elctrico 73/23/CEE.
Directiva de Compatibilidad Electromagntica 89/336/CEE
Por otra parte la American Society of Mechanical Engineers (ASME) establece un

cdigo de clculo y construccin de los recipientes a presin (Cdigo ASME VIII).
Cuando el biorreactor est sometido a presin interior se generan esfuerzos que tienden
a modificar la estructura reticular del material. El criterio para el diseo mecnico del
equipo es aquel que mantiene los esfuerzos inducidos en el biorreactor dentro de la
regin elstica del material de construccin con el fin de evitar la deformacin plstica
como resultado de exceder el punto de cedensia. Estos esfuerzos en cada seccin del
material se cuantifican por unidad de superficie denominndose Tensiones. La tensin
en los materiales depende del tipo de carga. Las cargas puntuales F, perpendiculares a
una seccin provocan esfuerzos axiales; las cargas puntuales V paralelas tangentes a una
superficie provocan esfuerzos cortantes; los momentos que provocan flexin de la pieza,
M, producen esfuerzos flectores, los momentos que provocan torsin de la pieza, T,
producen esfuerzos torsores. Los esfuerzos axiales y flectores producen tensiones
normales, , los cortantes y torsores producen tensiones tangenciales en el material , de
acuerdo a las siguientes ecuaciones, donde y es el canto de la pieza:
Esfuerzo axial
Esfuerzo flector
F
S
M
y
I
70
Esfuerzo torsor
T
y
J
Esfuerzo cortante
3 V
(en secciones rectangulares)
2 S
El valor mximo de la resistencia a traccin de los recipientes de acero 360-L sometidos

a presin es de 580 N/mm2 con un grosor mnimo de 3 mm si el alargamiento supera el
20%
Las variables dimensionales del cilindro de pared delgada sometido a presin interior P,
son: D =dimetro, r = radio, H = altura t = espesor. Se considera pared delgada cuando
el espesor es igual o menor la dcima parte del radio (t<r/10). En esas condiciones, el
esfuerzo radial es mucho menor que el tangencial y est uniformemente distribuido en
todo el espesor de la pared. La paredes del reactor se construyen de chapa curvada La
chapa es un producto siderrgico plano obtenido por laminacin (Curvado de virolas).
a) Calculo de la envolvente vertical

Se considera la presin P de clculo constante en todas las paredes del recipiente. La Ps
presin mxima de servicio es la presin relativa mxima que puede ejercerse en
condiciones normales de utilizacin, y P es la presin de clculo que es superior a la de
servicio. Para controlar la presin en el recipiente nos ayuda la vlvula de alivio
En la parte lateral la fuerza vendr dada por F P S P D H
71
Tensin tangencial
P D H P D
2t H
2t
En cilindros totalmente cerrados hay tambin un esfuerzo longitudinal l , fruto de la

fuerza que se ejerce sobre las tapas, que se obtiene multiplicando la presin P por el
D2
, en
4
caso de una tapa toroesfrica (casquete esfrico de h de altura) S tapa _ esf . D h , en
rea superficial de la tapa, en caso de una tapadera plana S tapa _ plana.
D 2 a2 1 e
ln
caso de una semielipsoide, S semielipsoide

, siendo e la
4
2
1
e
e
excentricidad e 1 4 (a 2 / D 2 ) , a es el semieje situado en el eje de coordenadas z,

tal que a < D.
Tensin longitudinal con tapas planas
Tensin longitudinal con tapas toroesfricas l
P D 2 P D
4 D t
4t
P D h P h
4 D t
4t
D 2 a2 1 e
P
ln
4
e
1
Tensin longitudinal con tapas semielipsoidales l

4 D t
La tensin tangencial en las paredes de biorreactor se calcula de acuerdo a la ecuacin
(37) en secciones rectangulares.
3 P D H 3 P H
3 V
=

2
2
2 S
D t
t
(37)
Las tensiones normales mximas vendrn dadas por la ecuacin
1, 2
t l
2
l
t
2
2
Particularizada para paredes toroesfricas segn la teora de la tensin normal mxima:

2
2
adm
P
P
2 3 PH
( D h)
( D h)
<
8t
t
n
2
8t
72
P
( D h)
8 adm
8 adm
3 PH
( D h) 2
2 adm
2
n
< t

Segn la teora de la tensin tangencial mxima:

2
adm
l
max t
2
2
2n
Esta teora slo es aplicable en materiales dctiles. En ellos la tensin tangencial

mxmia es aproximadamente la mitad que la tensin normal admisible.
Se deja como ejercicio el clculo del espesor para biorreactores de tapas planas y
semielipsoidales.
El valor de depende de la eficiencia de la soldadura. Se denomina soldadura a la
unin de dos piezas metlicas que se derriten en el punto de soldadura por la accin de
arco elctrico entre un electrodo y el material base, a veces es usado material de relleno.
La diferencia de potencial provoca una elevada transferencia de electrones (intensidad
de corriente) que produce elevadas temperaturas (efecto Joule). Para evitar la oxidacin
en muchas ocasiones la regin de la soldadura es protegida por un gas inerte o
seminerte, conocido como gas de proteccin. Existen dos tipos de soldadura: Soldadura
manual con electrodo consumible revestido (SMAW, Shielded Metal Arc Welding) y
soldadura de arco metlico con gas (GMAW).
Las soldaduras en acero inoxidable son ejecutadas generalmente con un electrodo de
tungsteno, no consumible (TIG), utilizando gas Argn del 99,99% de pureza como gas
protector (GTAW). El electrodo, el arco y el rea que rodea al bao de fusin, estn
protegidos de la atmsfera por un gas inerte. Si es necesario aportar material de relleno,
debe de hacerse desde un lado de fusin.
Tabla 7. Factores de soldadura
0,70
0,85
1,00
0,65
0,80
0,90
Tipo de soldadura
Soldadura H, V y X no radiografiada
Soldadura H y V radiografiada
Soldadura X radiografiada
Soldadura Y, Z y chapa dorsal no radiografiada
Soldadura Z y Chapa dorsal radiografiada
Soldadura Y radiografiada
73
Figura 22. Tipos de soldadura

b) Clculo de tapas
La estructura cilndrica de los biorreactores se cierra con dos tapas, una superior y otra
inferior. Las tapas planas no sirven para altas presiones, por lo que las formas ms
utilizadas son semielpticas y toriesfericas. El proceso de fabricacin de estas tapas es el
troquelado. Una plancha se curva por presin en caliente sobre un molde con forma
definida.
74
Figura 23. Tipos de tapas

La tapa plana circular se apoya directamente sobre la envolvente. Para mejorar su
resistencia se pueden doblar unos alargamientos verticales llamados pestaas. La tapa
semielptica queda definida por el dimetro del reactor (eje mayor de la elipse) y por el
abombamiento vertical (semieje menor) a la cual se le aade tambin pestaas. La tapa
torosfrica debe definirse por el radio de curvatura R (generalmente se toma igual a Dt),
radio de acordonamiento rtap, y longitud de pestana p.
El espesor de la tapa es mayor que el de la envolvente siempre. Cada uno de los tipos de
tapa presenta variaciones del clculo del espesor mnimo. El espesor mnimo requerido
para tapas planas se calcula por la ecuacin (38) segn el cdigo ASME sec. VIII Div.
1.
ttap D
CP
1,9 W
adm amd D 3
(38)
Donde
ttap = Espesor de la tapa
P = Presin de clculo
C = Constante adimensional
W = Fuerza admisible en los tornillo = Ab x Sa
D = Dimetro interno de la tapa
= Eficiencia de la soldadura
adm = Tensin admisible de la chapa de acero
El espesor mnimo requerido para tapas toroesfricas segn el valor mayor de las
ecuaciones (39 y 40) segn el cdigo ASME VIII.
75
t tap
PLM
2 adm 0,2 P
0,885 P L
e
adm
(39)
(40)
Donde
P = presin
M = factor que depende de la relacin L/ rtap
L = Radio de curvatura de la tapa
rtap = radio de la ceja o acordonamiento
L
M 0,25 3
rtap
El espesor mnimo requerido para tapas semielptica con pestaas se calcula por la
ecuacin (41) si a semieje menor de la elipse es menor a Dt/4
t tap
P Dt
2 adm 0,2 P
(41)
La longitud mnima de la pestaa viene definida por

p 0,3 Dt t c
Ejemplo 16
Se desea calcular el espesor de la envolvente cilndrica y de la tapa toriesfrica de un
recipiente de 1,2 m de diametro, a 7,5 kg/cm2 de presin, construido con acero
inoxidable AISI 316L, siendo la temperatura mxima de 200C. La soldadura ser
simple cordn, parcialmente radiografiada. El producto almacenado es corrosivo.
Se considera
Curvatura de la tapa L = D = 1200 mm
radio acordamiento r = 0,06 x L = 7.2 cm
pestaa 5 cm
Chapa acero inoxidable AISI 316L = 500 N/mm2
Por tanto
Si se considera r = 0.06 x L M = 1.77
Tomando la eficiencia de la soldadura = 0.85
Presin = 7,5 kg/cm2 =0.075 kg/mm2
76
Espesor de la virola cilndrica t
P R
0,075 600
3.33 mm
50 0,85
adm
Espesor de la tapa
t tap
PLM
0,75 1200 1,77
1,87 mm
2 adm 0,2 P 2 50 0,85 0,2 0,075
t tap
0,885 P L
0,885 0,075 1200
e
1,6 3,47 mm
50 0,5
adm
Fin.
Tras la construccin del reactor se debe probar el dispositivo a una presin de prueba
definida por la ecuacin
Sta
(42)
Pp 1,5 P
Std
Donde
Sta = Limite elstico del material a temperatura ambiente
Std= Lmite elstico del material a temperatura de diseo
Rugosidad de la superficie
Toda superficie metlica presenta una rugosidad superficial microscpica que puede
retener clulas indeseables o sustancias contaminantes para el proceso que se lleva a
cabo en el biorreactor. Por ello la rugosidad debe ser limitada a unos valores mnimos.
Se denomina rugosidad al conjunto de las irregularidades superficiales de paso
relativamente pequeo, correspondiente a las huellas dejadas por el proceso de
laminacin del material u otros tratamientos posteriores. Esta irregularidad se
inspecciona observando el perfil transversal de la lmina, interseccin de una superficie
con el plano normal perpendicular a la direccin de las irregularidades.
Figura 24. Perfil transversal a la superficie laminar del reactor
77
Para la evaluacin de la irregularidad se define la lnea media, que servir de referencia.

La lnea media es aquella que hace mnima la suma de los cuadrados de las desviaciones
(diferencias entre la lnea y las crestas de las irregularidades).
Figura 25. Perfil rugoso y lmina media

A partir de la lnea media de la superficie se calculan:
Altura mxima del perfil, Ry : Distancia entre el pico de cresta mas alto y el fondo
del valle mas profundo dentro de la longitud bsica.
Altura de las irregularidades en diez puntos, Rz: Media de los valores absolutos de
las alturas de las cinco crestas yp mas altas y los cinco valles ms profundos yv
dentro de la longitud bsica.
5
y y
pi
R z i 1
vi
i 1
Valor de rugosidad Ra media aritmtica del perfil: Media aritmtica de los valores
absolutos de las desviaciones del perfil, en los lmites de la longitud bsica l.
1
Ra
y ( x) dx
l 0
El Ra requerido normalmente en aplicaciones alimentarias es 1,6 m, y para

aplicaciones biotecnologa ente 0,5 y 0,8 m. Los valores de rugosidad Ra pueden
indicarse bien por su valor normalizado o por su nmero de clase indicados en la Tabla
6.
78
Tabla 8. Calses de rugosidad

Valor de rugosidad Ra (m)
50
25
12,5
6,3
3,2
1,6
0,8
0,4
0,2
0,1
0,5
0,025
Clase de rugosidad
N12
N11
N10
N9
N8
N7
N6
N5
N4
N3
N2
N1
Desviacin media cuadrtica del perfil Rq: Valor medio cuadrtico de las
desviaciones del perfil, en los lmites de la longitud bsica, (valor utilizado con
preferencia en normas americanas RMS).
1
Rq
y ( x) 2 dx
l 0
Las especificaciones de las superficies de las distintas piezas se indican segn los
smbolos de la Tabla 9.
Tabla 9. Smbolos de especificacin de superficies en planos
Superficie mecanizada con arranque de viruta
con carcter facultativo, con un valor mximo
de rugosidad, indicado por una nota (en el
dibujo Ra mximo 3,2 microas)
con carcter obligatorio, con un valor mximo
de rugosidad, indicado por una nota (en el
dibujo Ra mximo 3,2 microas)
con carcter prohibido, es decir, con valor
mnimo de rugosidad, indicado por una nota
(en el dibujo Ra mximo 3,2 microas)
Ejemplo 17
79
CAPITUTLO X. RECUERDA
En un biorreactor que por definicin tiene clulas en reproduccin para la obtencin de

sustancias qumicas concretas la aparicin de otras clulas supone la una competencia
indeseable que puede frenar el proceso principal. El proceso de asepsia debe ser
contemplado en el diseo de todos los elementos, convirtindose en un factor clave del
proyecto.
80

Capitulo+10 +diseño+de+biorreactores

Загружено:

Сведения о документе

Оригинальное название

Авторское право

Доступные форматы

Поделиться этим документом

Поделиться или встроить документ

Параметры публикации

Этот документ был вам полезен?

Это неприемлемый материал?

Авторское право:

Доступные форматы

Capitulo+10 +diseño+de+biorreactores

Загружено:

Авторское право:

Доступные форматы

Aprovechamiento de la biomasa para uso energtico

CAPITULO X. DISEO DE BIORREACTORES

Anlisis de la cintica de procesos qumicos y microbiolgicos

Dimensionado de turbinas y potencia de agitacin

Determinacin de la resistencia de los materiales para soportar los esfuerzos y

CLCULO MECNICO DEL RECIPIENTE

DISEO DEL SISTEMA DE CONTROL TRMICO DEL REACTOR

Estos aspectos no slo son tiles y aplicables para la produccin de biocombustibles,

1. Fundamento del funcionamiento del biorreactor

Aprovechamiento de la biomasa para uso energtico

CHmOn + a O2 + b NH3 c CHxOyNz + d CO2 + e H2O+ f CsHrOw

Por ejemplo si consideramos un proceso de fermentacin alcohlica con levaduras

Para la determinacin de los coeficientes estequiomtricos se resuelve el sistema de

Aprovechamiento de la biomasa para uso energtico

Especial importancia tienen la relacin biomasa/sustrato (c = 3,42), biomasa/oxgeno

Aprovechamiento de la biomasa para uso energtico

X0 es la masa (o moles) de clulas inicial, X1 es la masa (o moles) de clulas final. S0 es

- Biorreactor de tanque agitado en semicontinuo. Es el biorreactor agitado en que la

Aprovechamiento de la biomasa para uso energtico

Figura 2. Distintas configuraciones de biorreactor flujo-pistn

Aprovechamiento de la biomasa para uso energtico

3. Clculo de flujos y tiempos de retencin

El clculo de los flujos de alimentacin y evacuacin de producto, y de los tiempos de

Esta igualdad se expresa de forma matemtica segn la ecuacin (8)

Aprovechamiento de la biomasa para uso energtico

Figura 3. Evolucin de la concentracin de clulas vivas en un biorreactor Batch

La mayor cantidad de producto se forma en la fase de crecimiento exponencial, es por

Aprovechamiento de la biomasa para uso energtico

Figura 4. Variacin de la concentracin de producto en un biorreactor discontinuo. (Se

La velocidad de crecimiento celular es proporcional al nmero de clulas existentes. La

Aprovechamiento de la biomasa para uso energtico

por la letra . A partir de la ecuacin (9) se demuestra el crecimiento exponencial de la

X0 representa la concentracin celular inicial en el reactor, que es muy baja; X

Si existe ms de un tipo de alimento limitante, por ejemplo G (fuente de carbono), N

El modelo de Monhod queda modificado en presencia de inhibidores. En caso de

Aprovechamiento de la biomasa para uso energtico

Modelos cinticos sin

De la ecuacin de Monhod se deduce que a medida que se va terminando el sustrato la

Aprovechamiento de la biomasa para uso energtico

Conocida la concentracin inicial de sustrato So, a partir de la relacin biomasa/sustrato

La variacin de la concentracin de sustrato en el reactor en funcin del tiempo se

Del mismo modo la variacin de la concentracin de producto en el reactor en funcin

Aprovechamiento de la biomasa para uso energtico

S1 3 K s 3 1,35 4,05 g/l

X 1 X 0 Yx / s S 0 S1 = 0,002 0,4 6 4,05 = 0,38 g/l

Aprovechamiento de la biomasa para uso energtico

Si analizamos el balance de materia referido al sustrato, la ecuacin general (8) se

Si analizamos el balance de materia referido al producto, el consumo de producto en el

Aprovechamiento de la biomasa para uso energtico

Para el clculo de las condiciones de trabajo en un biorreactor continuo (flujos y

Productivi dad (moles/h) F P

Aprovechamiento de la biomasa para uso energtico

F V 0,75 0,37 3000 832,5 l/h

X Yx / s ( S e S ) 0,4 6 4,05 0,8 g/l

Productivi dad (moles/h) F P 832,51 0,078 64,94 g/h

Se puede comprobar que la productividad es sustancialmente mayor en el biorreactor

Aprovechamiento de la biomasa para uso energtico

Tabla 3. Condiciones estacionario para distintas tasas de crecimiento celular en el

Concentracin des X (g/l)

Figura 5. Variacin de la concentracin de los componentes del biorreactor continuo del

Aprovechamiento de la biomasa para uso energtico

3,47 3,47 2 4 0,37 4,69

X Yx / s ( S e S ) 0,4 20 8,48 4,60 g/l