GUIA DE EJERCICIOS Y PROBLEMAS, Y

TRABAJOS PRACTICOS DE LABORATORIO

2015

MATERIAL ELABORADO POR EL PERSONAL DOCENTE A CARGO

DEL DICTADO DE LA ASIGNATURA

DEPARTAMENTOS DE FISICO QUIMICA Y DE QUIMICA ORGANICA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIMICAS
UNIVERSIDAD NACIONAL DE CORDOBA

QUIMICA ANALITICA AVANZADA

GUIA DE EJERCICIOS Y PROBLEMAS, Y TRABAJOS

PRACTICOS DE LABORATORIO

2015

PERSONAL DOCENTE:
Profesores:
Dra. Alicia Veglia
Dra. Beatriz Toselli
Dra. Mara Dolores Rubianes
Auxiliares Docentes:
Dr. Ricardo Rojas
Dra. Fabiana Gutierrez
Dr. Cesar Gmez
Dra. Mara Eugenia Budn

PROGRAMA TEORICO DE LA ASIGNATURA QUIMICA ANALITICA

AVANZADA

Objetivos: Capacitar al alumno en la aplicacin cuali-cuantitativa de diferentes mtodos

analticos.

Tema 1: Tratamiento Estadstico de Datos: Desviacin estndar. Lmite de confianza.

Estimacin del lmite de deteccin.

Tema 2: Mtodos Espectroscpicos de Anlisis I:

-Absorcin y Emisin Atmica. Atomizacin de la muestra. Espectroscopia atmica de
fluorescencia. Espectroscopia de emisin basada en fuentes de plasma.
-Mtodos de Rayos X. Fundamentos. Instrumental. Mtodos de fluorescencia, absorcin y
difraccin de Rayos-X.

Tema 3: Mtodos Espectroscpicos de Anlisis II: Absorcin Molecular: IR, Raman, UVVisible. Fundamentos. Aspectos cuantitativos de las medidas de absorcin. Instrumental.

Tema 4: Mtodos Espectroscpicos de Anlisis III: Emisin Molecular: Fluorescencia,

Fosforescencia y Quimioluminiscencia. . Fundamentos. Aspectos cuantitativos de las medidas
de emisin. Instrumental.

Tema 5: Mtodos Espectroscpicos de Anlisis IV:

-Resonancia Magntica Nuclear. Teora. Efectos del entorno en la frecuencia de resonancia
del ncleo. RMN-1H. Aplicacin de RMN a otros ncleos.
-Espectrometra de Masa. El espectrmetro de masa. Mtodos de ionizacin. Patrones de
degradacin.

Tema 6: Mtodos Cromatogrficos: Introduccin. Cromatografa Gas-lquido. Cromatografa

Lquida de Alta Resolucin (HPLC). Instrumentacin. Columnas y fases. Detectores.
Espectrometra acoplada a instrumental de separacin. Cromatografa de electroforesis
capilar.

Tema

7:

Mtodos

Electroqumicos:

Sensores

Potenciomtricos:

electrodos

de

membrana, electrodos compuestos. Sensores Amperomtricos: biosensores. Tcnicas

Voltamtricas de Pulso: polarografa de pulso, mtodos de adsorcin-desorcin.

Tema 8: Automatizacin del Laboratorio: Anlisis por Inyeccin de Flujo. Sistemas

Automticos.

Tema 9: Anlisis de Muestras Reales: Eleccin del Mtodo. Preparacin de la Muestra y

Eliminacin de Interferentes.

Referencias bibliogrficas recomendadas:

- Principios de Anlisis Instrumental, D.A. Skoog, F. J. Holler,S. R. Crouch, 6ta ed., Cengage
Learning. 2008.

- Principios de Anlisis Instrumental, D.A. Skoog, F. J. Holler, T.A. Nieman, 5ta ed., Mc.
Graw Hill. 2001.
-"Principles of Instrumental Analysis", D.A. Skoog, J.J.Leary, 4ta ed, Saunders College
Publishing. 1992. Traduccin Anlisis Instrumental, McGraw-Hill1/Interamericana de
Espaa, 1994.
- "Anlisis Instrumental", D.A. Skoog, D. M. West, 2da ed, Mc Graw Hill. 1990
-"Mtodos Instrumentales de Anlisis", H.H. Willard, L.L. Merrit Jr, J.A. Dean, F.A.Settle Jr,
Grupo Editorial Iberoamrica. 1991.
-"Fundamentals of Analytical Chemistry", D.A. Skoog, D.M. West, F.J. Holler,

7ma ed,

Saunders College Publishing. 1996.

- Anlisis Instrumental, K. A. Rubinson, J. F. Rubinson, Prentice Hall, Pearson Educacin,
S. A: 2001.
- Adems se recomendar Bibliografa Especfica para cada tema, la cual ser detallada por el
docente.

Programa de Ejercicios y problemas 2015

1. Tratamiento estadstico de datos.

2. Espectroscopia Atmica y Rayos X.
3. Espectroscopia UV-visible.
4. Espectroscopia IR.
5. Espectroscopia de Fluorescencia y Fosforescencia.
6. Resonancia Magntica Nuclear.
7. Espectrometra de Masas.
8. Mtodos Cromatogrficos.
9. Mtodos Electroqumicos.
10. Automatizacin del Laboratorio.

Programa de Trabajos Prcticos de Laboratorio 2015

1. Automatizacin del Laboratorio

2. Espectroscopia de Absorcin Atmica: Determinacin de elementos.
3. Espectroscopia UV-Visible: Determinacin de una constante de equilibrio.
4. Espectroscopia Infrarroja: Caracterizacin de grupos funcionales.
5. Fluorescencia: Determinacin de lmite de deteccin.
6. Resonancia Magntica Nuclear: Cuantificacin de los componentes de una mezcla.
7. Cromatografa Gas-Masas: Separacin e identificacin de aceites esenciales.
8. Mtodos cromatogrficos: Separacin, identificacin y cuantificacin de compuestos
aromticos por HPLC.
9. Mtodos electroqumicos: Voltamperometra Cclica. Aplicaciones Analticas.
10. Mtodos electroqumicos: Sensores Amperomtricos. Determinacin de glucosa.

CRONOGRAMA DE ACTIVIDADES 2015

Orden

Semana

Tema

Tipo

1 (02-06/03)

2,5

Si

Ninguna

3/3

1 (02-06/03)

1- Tratamiento Estadstico de Datos

Prctica Semanal 2,5

Si

Oral-Escrita

5/3

1 (02-06/03)

Introduccin a los Trabajos Prcticos

Prctica Laboratorio 2.5

Si

Ninguna

6/3

2 (09-13/03)

2- Espectroscopa Atmica y Rayos X

Terica - Prctica

2,5

Si

Ninguna

10/3

2 (09-13/03)

2- Espectroscopa Atmica y Rayos X

Terica - Prctica

2,5

Si

Ninguna

12/3

2 (09-13/03)

8- Automatizacin

Si

Oral-Escrita

13/3

3 (16-20/03)

2- Espectroscopa Atmica y Rayos X

Terica - Prctica

2,5

Si

Ninguna

17/3

3 (16-20/03)

2- Espectroscopa Atmica y Rayos X

Prctica Semanal 2,5

Si

Oral-Escrita

19/3

3 (16-20/03)

2- Espectroscopa Atmica y Rayos X

Si

Oral-Escrita

20/3

10

4 (23-27/03)

3- Espectroscopa Uv-Visible

Terica - Prctica

2,5

Si

Ninguna

26/3

11

4 (23-27/03)

8 y 9- Automatizacin del Laboratorio y Muestras Reales

Terica - Prctica

2,5

Si

Ninguna

27/3

12

5 (30/03-03/04)

3- Espectroscopa Uv-Visible

Prctica Semanal 2,5

Si

Oral-Escrita

31/3

13

5 (30/03-03/04)

3- Espectroscopa Uv-Visible

Si

Oral-Escrita

01/4

14

6 (06-10/04)

3- Espectroscopa IR

Terica - Prctica

2,5

Si

Ninguna

07/4

15

6 (06-10/04)

3- Espectroscopa IR

Prctica Semanal 2,5

Si

Oral-escrita

09/4

16

6 (06-10/04)

3- Espectroscopa IR

17

7 (13-17/04)

4- Luminiscencia

18

7 (13-17/04)

4- Luminiscencia

19

7 (13-17/04)

4- Luminiscencia

20

8 (20-24/04)

3-Espectroscopa Raman

Terica - Prctica

21

8 (20-24/04)

Consulta

Terica - Prctica

22

9-10 (27/04-09/05)

Parciales

23

11 (11-15/05)

24

11 (11-15/05)

25
26

1- Tratamiento Estadstico de Datos

Terica - Prctica

Hs Obligatoria Evaluacin

Prctica Laboratorio 6

Prctica Laboratorio 6

Prctica Laboratorio 6

Prctica Laboratorio 6

Fecha

Si

Oral-Escrita

10/4

2,5

Si

Ninguna

14/4

Prctica Semanal 2,5

Si

Oral-Escrita

16/4

Si

Oral-Escrita

17/4

2,5

Si

Ninguna

21/4

2,5

Si

Ninguna

23/4

Terica - Prctica

Si

Escrita

6- Mtodos Cromatogrficos

Terica - Prctica

2,5

Si

Ninguna

12/5

6- Mtodos Cromatogrficos

Prctica Semanal 2,5

Si

Ninguna

14/5

12 (18-22/05)

5- Espectrometra de Masas

Terica - Prctica

2,5

Si

Ninguna

19/5

12 (18-22/05)

5- Espectrometra de Masas

Terica - Prctica

2,5

Si

Ninguna

21/5

27

12 (18-22/05)

6- Mtodos Cromatogrficos-Masas

Si

Oral-Escrita

22/5

28

13 (25-29/05)

5- Resonancia Magntica Nuclear

Terica - Prctica

2,5

Si

Ninguna

26/5

29

13 (25-29/05)

5- Resonancia Magntica Nuclear

Terica - Prctica

2,5

Si

Ninguna

28/5

30

13 (25-29/05)

6-Mtodos Cromatogrficos-HPLC

31

14 (01-05/06)

5- Resonancia Magntica Nuclear

32

14 (01-05/06)

7- Mtodos Electroqumicos

33

14 (01-05/06)

5-Resonancia Magntica Nuclear

34

15 (08-12/06)

7- Mtodos Electroqumicos

35

15 (08-12/06)

7- Mtodos Electroqumicos

36

15 (08-12/06)

7- Mtodos Electroqumicos

37

16 (15-19/6)

7- Mtodos Electroqumicos

38

16 (15-19/6)

7- Mtodos Electroqumicos

Terica - Prctica

Prctica Laboratorio 6

Prctica Laboratorio 6

Prctica Laboratorio 6

Si

Oral-Escrita

29/5

Prctica Semanal 2,5

Si

Oral-Escrita

02/6

Terica - Prctica

Si

ninguna

4/6

Si

Oral-Escrita

5/6

ninguna

9/6

2,5

Prctica Laboratorio 6
Terica - Prctica

2,5

Si

Terica - Prctica

2,5

Si

ninguna

11/6

Si

Oral-Escrita

12/6

Si

ninguna

16/6

Si

Oral-Escrita

17/6

2,5

No

ninguna

18/6

Si

Escrita

Si

Escrita

Prctica Laboratorio 6
Terica - Prctica

2,5

Prctica Laboratorio 6

39

16 (15-19/6)

Consulta

40

17-18 (22/06-04/07)

Parciales

Terica - Prctica

41

19 (07-11/7)

Recuperatorios

Terica - Prctica

RECOMENDACIONES:
- Las clases de ejercicios y problemas requieren que los mismos sean resueltos por el alumno
con anterioridad para poder llevar a cabo la discusin en la clase correspondiente.

- Los alumnos asistirn al trabajo prctico de laboratorio conociendo el fundamento del

mismo y de la metodologa experimental a emplear, como as tambin las caractersticas
fsicas y qumicas de todos los compuestos a manejar. Para estas clases el grupo de alumnos
ser dividido en dos comisiones (maana y tarde). Se requerir la presentacin de un informe
por cada actividad prctica una vez que se hayan procesado los resultados correspondientes.

Aulas y horarios:
Tericos y Clases de ejercicios y problemas: martes y jueves de 8,00 a
10,30 hs en el aula B 4.
Trabajos Prcticos de Laboratorio: viernes de 8a 14 de 14a 20,00 hs en el
Lab 106-108.

EJERCICIOS Y PROBLEMAS Nro 1

TRATAMIENTO ESTADISTICO DE DATOS

.
1) Una muestra estndar de suero sanguneo humano contiene 42,0 g de albmina por litro.
Cinco laboratorios (A-E) realizan cada uno seis determinaciones (en el mismo da) de la
concentracin de albmina, con los siguientes resultados (en g/L):

41,5

42,6

41,1

42,9

41,2

42,1

40,8

42,6

43,1

41,1

42,9

40,9

42,5

43,8

42,8

42,1

43,7

42,2

36,0

42,0

38,1

39,5

37,8

41,2

43,2

40,6

43,0

40,8

43,6

38,0

Comente la exactitud y precisin de cada una de estas series de resultados.

Calcule el lmite de confianza al 95 % y al 99% de intervalo de confianza.

2) Las mediciones de la relacin entre las reas de dos picos en un experimento de

cromatografa gaseosa dieron los siguientes valores:

0,3921; 0,3889; 0,3942; 0,4009; 0,3998; 0,3981; 0,3992; 0,3906; 0,3881; 0,3954.

Calcule la media, la desviacin estndar y los lmites de confianza de la media al 99%.

Discuta los resultados.

3) En una investigacin de la exactitud y precisin de un mtodo para la determinacin de

metilparaben como funguicida en comestibles preparados, se realizaron siete determinaciones
repetidas de una formulacin de limonada fortificada con 100 mg/L de metilparaben. Los
resultados fueron:

107, 109, 107, 109, 102, 106, 106 mg/L

Calcule la media, la desviacin estndar y los lmites de confianza al nivel del 95% y
99%. Se encuentra el valor 100 mg/L dentro de los lmites de confianza al nivel (i) 95% y (ii)
del 99%?
Suponiendo que 100 mg/L fuera el valor verdadero indique si existe un error sistemtico en el
mtodo.

4) Los siguientes datos corresponden a la concentracin de tiol (mM) en sangre de dos grupos
de voluntarios, el primer grupo es normal y el segundo sufre de artritis reumatoidea.

1er grupo: 1,85; 1,90; 1,92; 1,93; 1,87; 1,92; 2,09.

2do grupo: 2,83; 4,08; 3,63; 3,25; 3,25; 3,74.

Verifique si el dato 2,09 en el primer grupo y el dato 4,08 en el segundo no son valores
anmalos para valores de intervalo de confianza de 90, 95 y 99%.
Indique si los niveles de tiol son significativamente diferentes para los dos grupos
considerando un intervalo de confianza del 99,9%.

5) Los siguientes valores se refieren a la concentracin de albumina (g/L) en el suero

sanguneo de 20 adultos sanos:

38, 38, 37, 41, 40, 44, 43, 40, 42, 39, 45, 41, 40, 46, 48, 47, 44, 42, 47,47

Las primeras 10 cifras corresponden a hombres y las segundas 10 a mujeres. Calcule si

la concentracin media para hombres y mujeres difiere significativamente considerando un
intervalo de confianza del 95%.

6) La respuesta de un ensayo colorimtrico para glucosa se control con la ayuda de

soluciones estndar de glucosa. Determine el coeficiente de correlacin momento producto a
partir de los siguientes datos, y comente los resultados.

Concentracin de glucosa (mM)

Absorbancia

0,001

0,148

0,293

0,433

0,570

10

0,703

12

0,845

14

0,978

7) Se obtuvieron los siguientes resultados cuando se analizaron una serie de soluciones

estndar de plata por espectrofotometra de absorcin atmica de llama.
Concentracin ng/mL

Absorbancia

0,002

0,125

10

0,248

15

0,388

20

0,495

25

0,624

30

0,763

35

0,888

Determine la pendiente y la ordenada al origen de la grfica de calibracin y los lmites

de confianza para ambas al 95%.

8) Estime el lmite de deteccin para el ensayo de glucosa del problema 6 y el correspondiente

al anlisis de plata de los datos del problema 7.

9) En la determinacin de plomo en solucin acuosa por espectrometra de absorcin atmica

con atomizacin de cmara de grafito, se obtuvieron los siguientes resultados.

Concentracin de plomo (ng/mL)

Absorbancia

10

0,07

25

0,18

50

0,36

100

0,64

200

1,10

300

1,45

400

1,70

Examine el intervalo de calibracin lineal de este experimento.

10) Los siguientes datos de calibracin se obtuvieron por medio de un mtodo instrumental
para la determinacin de la especie A en solucin acuosa.

[A], ppm

Nro de repeticiones

Absorbancia

Desviacin estndar

00,00

25

0,021

0,0077

02,00

0,163

0,0084

06,00

0,410

0,0073

10,00

0,690

0,0073

14,00

0,925

0,0072

18,00

1,235

0,0099

a) Calcule la sensibilidad de calibracin (m) y la sensibilidad analtica a cada

concentracin ().
b) Cal es el lmite de deteccin del mtodo?
c) Cal es el lmite de cuantificacin del mtodo?
d) Calcular el coeficiente de variacin para la media de cada serie de
repeticiones.

11) La determinacin de dulcina por fluorescencia en presencia de -ciclodextrina, un

oligmero cclico de glucosa que acta como acomplejante, permiti trazar el siguiente
grfico de calibracin por tratamiento de mnimos cuadrados

If=179,0 [Dulcina] + 20,8

(r = 0,9996; N = 8)
10

Sabiendo que el lmite de deteccin expresado en concentraciones es 0,04 g/mL y

el rango dinmico lineal fue entre 0,13-5 g/mL, calcule
a) La desviacin estndar del blanco.
b) El lmite de cuantificacin.
c) La sensibilidad analtica a concentracin cero.
d) Construya la grfica correspondiente para el rango dinmico lineal a intervalos de
0,50 g/mL a partir de 1,00 g/mL.

12) Discuta qu criterio podra utilizar para descartar un punto que considera dudoso en una
regresin lineal.

Bibliografa

Adems de la bibliografa general consultar:

-Miller, J.C.; Miller, J.N.; "Estadstica y Quimiometra para qumica analtica", 4ta Ed.,
Pearson Educacin , Madrid, 2002.
-Miller, J.C.; Miller, J.N.; Statistics for Analytical Chemistry, Third Ed., Ellis Horwood
PTR Prentice Hall, 1993.
-Miller, J.C.; Miller, J.N.; "Estadstica para qumica analtica", 2da Ed., Addison-Weslwy
Iberoamericana, U.S.A., 1993.

11

Seleccin de un mtodo analtico: Otras caractersticas a tener en cuenta en la eleccin del

mtodo
1. Velocidad
2. Facilidad y comodidad
3. Habilidad del operador
4. Coste y disponibilidad de equipo
-- 5. Coste por muestra

12

Critical Values for Rejection Quotient Q

# of Observations
3
4
5
6
7
8
9
10

90% Confidence
0.941
0.765
0.642
0.560
0.507
0.468
0.437
0.412

95% Confidence
0.970
0.829
0.710
0.625
0.568
0.526
0.493
0.466

99% Confidence
0.994
0.926
0.821
0.740
0.680
0.634
0.598
0.568

COEFICIENTE DE CORRELACION. MOMENTO PRODUCTO

13

METODO DE MINIMOS CUADRADOS:

14

TRABAJO DE LABORATORIO Nro 1

AUTOMATIZACION DEL LABORATORIO

1.- Introduccin
El equipamiento involucrado en un dado proceso y la adquisicin de los datos
devenidos del mismo, ya sea en un laboratorio o a escala industrial, puede ser controlado
desde un computador mediante una interfase adecuada. En muchos casos, la automatizacin
del sistema prev la posibilidad de generar cambios en la lnea de produccin de modo
autnomo, en base al anlisis de los datos registrados por el software de la interfase. As, la
potencialidad para la administracin de los recursos del computador y principalmente la
flexibilidad hacia la conectividad de diversos equipos y compatibilidad con diferentes
volmenes y tipos de datos, son dependientes de la versatilidad del software empleado.
Programas y lenguajes de programacin que cumplen con dichos requisitos existen en gran
nmero en el mercado actual, pero los dos ms ampliamente utilizados son VisualBasic y
LabVIEW. Sin embargo, es este ltimo el ms empleado en la actualidad para cumplimentar
con el objetivo de automatizacin de un dado proceso o laboratorio, debido a las siguientes
caractersticas:
Sencillez. Su programacin es totalmente grfica (lenguaje G). Es una plataforma
ideada para la instrumentacin virtual, que provee una interfase grfica conteniendo
indicadores y controladores de actualizacin en tiempo real.
Alto poder de manejo de grandes volmenes de datos. Cuenta con libreras
especializadas en manejo de redes, comunicacin, anlisis estadstico, adquisicin de
datos, generacin de seales de potencial, procesamiento matemtico, sistemas
grficos, etc.
Fcil manejo. El programa final puede ser empleado satisfactoria y eficientemente
por un operador que desconozca su estructura interna.
Versatilidad. Permite pasar a diferentes sistemas operativos como Linux o
plataformas de Macintosh y seguir funcionando perfectamente.
Fcil programacin. El compilado automtico y continuo del software, permite la
deteccin inmediata de errores, y su estructura de bloques posibilita crear y chequear
el ptimo funcionamiento de subrutinas parciales para finalmente ensamblarlas en una
nica aplicacin.

15

2.- Objetivos generales

de las herramientas bsicas del software LabVIEW.
Apreciar la sencillez y potencialidad del programa para la automatizacin del
equipamiento involucrado en diferentes procesos.
Adoptar destreza en el manejo

3.- LabVIEW, su estructura general:

Como ya se mencion, LabVIEW (acrnimo en ingls de Laboratory VIrtual
Engineering Workbench) es un lenguaje de programacin que utiliza un cdigo grfico
basado en diagramas de flujo que lo hace mas sencillo de utilizar que cualquier otro lenguaje
de programacin basado en texto (Fortran, C++, Basic, etc) y los programas construidos con
LabVIEW tienen extensin "vi" por virtual instrument.
Un programa desarrollado en este software, consta de dos partes principales:
El PANEL

FRONTAL, donde estn ubicados todos los Indicadores y Controles.

Front Panel

File Edit Operate Tools Browse Window Help

Pause
Abort Execution
Run Continously
Run
Dentro de los Controles e Indicadores, deben distinguirse dos grandes grupos: los
Numricos, que pueden tomar cualquier valor dentro de una escala predeterminada y los

16

Booleanos que funcionan de modo binario, es decir, cero-uno, on-off, apagado-encendido,

etc.
Numricos

Booleanos

Controles

Indicadores

El DIAGRAMA DE

BLOQUES, donde se encuentra el cdigo fuente del programa.

All puede observarse la secuencia lgica de operaciones que la computadora debe realizar.

Block Diagram

File Edit Operate Tools Browse Window Help

Start Single Stepping

Highlight Execution

Dentro del diagrama de bloques el programador cuenta, entre variadas herramientas,

con diferentes loops o secuencias de programacin. El alumno conocer durante el desarrollo
del presente trabajo la finalidad de cada una de ellas, aunque por cuestiones de tiempo,
emplear slo una de las estructuras.

17

While

Flat Sequence

For

Case

Formula Node

4.- Desarrollo:
El trabajo se divide secuencialmente en 5 actividades:
escribir una lnea en LabVIEW?
El objetivo de esta actividad es que el alumno tome contacto con el programa, y logre
sumar dos variables (a y b), para su resultado mostrarlo en un indicador (Y).
Actividad 1: Cmo

Actividad 2: Sumar dos

variables de modo continuo.

El alumno debe modificar el diagrama anterior, empleando la estructura de
programacin While.

18

 Actividad 3: Graficar una

funcin peridica en modo continuo.

Para cumplimentar con la presente actividad, el alumno tomar contacto con las
herramientas grficas del programa, especficamente Chart Graph.

Actividad 4:

Almacenar los datos.

Modificando el vi de la actividad anterior mediante el empleo de la herramienta Write
to spreadsheet file, deber lograr almacenar los datos de salida en un archivo de extencin .txt.
Actividad 5: Evaluacin del trabajo.

El alumno deber integrar los conocimientos bsicos adquiridos, para graficar una
funcin senusoidal del tipo:

Y a

Sen x b
x b

Donde pueda controlar el nmero de puntos a graficar, la amplitud a de la funcin, el centro b

y la frecuencia x.

19

EJERCICIOS Y PROBLEMAS Nro 2

ESPECTROSCOPIA ATOMICA y RAYOS X

1) Describa las diferencias generales entre mtodos de espectroscopia atmica y molecular.

2) Analice los procesos que ocurren durante la atomizacin de una muestra. En base a ello
discuta los diferentes mtodos de atomizacin.
3) Compare los espectros de absorcin, emisin y fluorescencia atmicas. Qu informacin
se obtiene de los mismos.
4) Describa los diferentes mtodos de absorcin atmica.
5) Indique porqu la emisin atmica es ms sensible a la inestabilidad de la llama que la
absorcin o la fluorescencia atmica.
6) Indique para qu sirve un estndar interno en los mtodos de emisin de llama.
7) Porqu los mtodos de emisin atmica con una fuente de plasma funcionan mejor que los
de absorcin atmica para un anlisis de multielementos?
8) Porqu las interferencias por ionizacin son menos severas en ICP que en espectroscopia
de emisin de llama?
9) Analice ventajas y desventajas de los mtodos de absorcin atmica y comprelos con los
de emisin en cuanto a sensibilidad, lmite de deteccin, aplicaciones, interferentes, etc.
10) Porqu razn los mtodos de fluorescencia atmica no tienen gran aplicacin?
11) El sodio contenido en una serie de muestras de cemento fue determinado por
espectroscopia de emisin de llama. El fotmetro fue calibrado con una serie de estndares
conteniendo 0; 20,0; 40,0; 60,0; y 80,0 mg de xido de sodio por mL.
Las lecturas del instrumento fueron las siguientes: 3,1; 21,5; 40,9; 57,1 y 77,3.
a) grafique los datos.
b) aplique el mtodo de cuadrados mnimos a los datos.
c) calcule la desviacin estndar en la pendiente y en la ordenada al origen.
d) los siguientes datos fueron obtenidos para muestras de 10 g de cemento disuelto en HCl y
diluidos a 100 mL despus de neutralizacin.

20

Lectura de emisin.
Blanco

muestra A

muestra B

muestra C

1er ensayo

5,1

28,6

40,7

73,1

2do ensayo

4,8

28,2

41,2

72,1

3er ensayo

4,9

28,9

40,2

------

Calcular el % de xido de sodio en cada muestra. Cules son las desviaciones estndar
absoluta y relativa para el promedio de cada determinacin. Informe el resultado con las cifras
adecuadas.
12) El Cobalto de una solucin acuosa fue determinado tomando 5 alcuotas de 20,0 mL de la
muestra y colocndolos en sendos matraces de 50 mL. Varios volmenes de un estndar
conteniendo 21,9 ppm de Cobalto fueron agregados a los matraces y diluidos a volumen final.

Muestra mL

Estndar, mL

Absorbancia

20,0

0,0

0,314

20,0

10,0

0,420

20,0

20,0

0,527

20,0

30,0

0,635

a) Grafique Absorbancia en funcin del volumen de estndar.

b) Derive una ecuacin para la relacin entre absorbancia y volumen de estndar.
c) Calcule la desviacin estndar para la pendiente y la ordenada al origen.
d) Calcule las ppm de Cobalto en la muestra.
e ) Calcule la desviacin estndar del resultado.
13) Una muestra de 5 mL de sangre fue tratada con cido tricloro actico para precipitar las
protenas. Despus de centrifugar y llevar a pH=3 se extrajo con dos porciones de 5mL de
metilisobutilcetona conteniendo un agente acomplejante. El extracto fue aspirado en una
llama de aire acetileno, dando una absorbancia de 0,444 a 283nm. Dos alcuotas de 5 mL de
soluciones estndar conteniendo 0,250 y 0,450 ppm de Pb fueron tratadas de la misma forma
dando lecturas de absorbancia de 0,450 y 0,799. Calcule las ppm de Pb en la muestra,
suponiendo que se cumple la ley de Lambert y Beer.
14) Cul es el lmite de longitud de onda corta del continuo producido por un tubo de rayos X
que tiene un blanco de plata y opera a 80 KV?

21

15) Cul es el voltaje mnimo necesario para excitar las series de lneas Ka y Lb para a) U, b)
K, c) Rb, d) W? .
16) Se determin manganeso en muestras de inters geolgico por fluorescencia de rayos X
utilizando bario como estndar interno. La intensidad de fluorescencia de las lneas aisladas
para cada elemento en una serie de estndares dio los siguientes datos:

Cuentas por Segundo

% peso Mn

Ba

Mn

0,0500

156

80

0,150

160

106

0,250

159

129

0,350

160

154

0,450

151

167

Cul es el porcentaje en peso de manganeso en una muestra que tiene una relacin de
cuentas Mn /Ba de 0,886?

Bibliografa
Adems de la bibliografa general consultar:
-

Ebdon, L.; Evans, E. H.; An Introduction to Analytical Atomic Spectrometry, Ed.

Fisher, A.; Hill, S. J.; John Wiley and Sons, 1998.

Moore, W. J. ; Qumica Fsica (Tomo 2), Ed. URMO, S.A., 1977.

22

TRABAJO DE LABORATORIO Nro 2

DETERMINACIN DE HIERRO EN SUELOS MEDIANTE ABSORCIN ATMICA

Objetivo
En este trabajo prctico se determinar la concentracin de hierro en una muestra de
suelo mediante el mtodo de absorcin atmica. Este mtodo es muy sensible. Se pueden
determinar las concentraciones de Fe en el rango de ppm con la llama de aire-acetileno. Se
consume muy poca muestra y la determinacin es muy rpida. Las interferencias que presenta
son mnimas comparadas con los mtodos de emisin de llama.

Introduccin
El elemento hierro es uno de los mayores constituyentes de los suelos. Puede estar
presente en forma altamente insoluble, causando deficiencia de hierro en algunos suelos, o en
forma suficientemente soluble como para ser txico a las plantas. Por lo tanto, se emplean
muchos mtodos analticos para caracterizar el estado de hierro en los suelos o para
diferenciar las distintas formas en las que se encuentra.
Este elemento puede existir en los suelos en la forma de ion ferroso (Fe2+) y frrico
(Fe3+), donde el primero puede ser determinado a partir de una mezcla, que en general para la
mayora de los anlisis requiere de la determinacin de hierro total seudo total.

Procedimiento Experimental
Se realizar la determinacin de la biodisponibilidad de hierro en el suelo y la
determinacin de hierro seudo total. El mtodo descripto emplea cido
dietilentriaminopentaactico (DTPA) como agente acomplejante de Fe. El acomplejamiento
de Fe+3 con DPTA es mayor a pH menor que 7,00 pero es lo suficientemente grande a pH
7,30 que es el valor de acidez que se utiliza en la extraccin. Debido a que la deficiencia de Fe
es muy importante en los suelos calcreos, la extraccin ha sido diseada para evitar la
disolucin excesiva de CaCO3 con el Fe que queda ocluido. Esto se hace extrayendo con una
solucin reguladora de pH levemente alcalina e incluyendo el in Ca soluble. Para esta
solucin reguladora se utiliza trietanolamina (TEA) porque su pKa es 7,8, la cual desarrolla
una combustin completa sin exhibir problemas en el equipo de absorcin atmica.
Mtodos para la determinacin de hierro presente en una muestra de suelo
a- Descomposicin de la muestra-Fe Pseudo Total
Tome una muestra de suelo de 1,0 g, previamente secada al horno y pasada por un
tamiz 100 y colquela en un erlenmeyer de 100 mL. Poner a digerir con 15 ml de agua regia
(3 volmenes de HCl + 1 volmen de HNO3) durante 1,5 horas en caliente con agitacin
constante. Poner la plancha de calentamiento al mnimo, en posicin 1, y controlar que no
caliente mucho y no hierva la solucin. Al cabo del tiempo de digestin, diluir con agua al
triple del volumen residual y transvasar todo el contenido con pipeta pasteur a tubos de
centrifuga, lavando con pequeos agregados de agua desde una piseta, cuidando de no
sobrepasar un volumen total de 100 mL. Centrifugar durante 8 minutos a velocidad media y

23

recoger el sobrenadante de los tubos en un matraz de 100mL. Enrasar con H2SO4 0,35M. Esta
ser la SOLUCION 1.
Como queda muy concentrada, es necesario realizar una segunda dilucin (SOLUCION 2):
Tomar 1,50 mL de SOLUCION 1 y llevar a un matraz de 100mL enrasando con H2SO4
0,35M.
La SOLUCION 2 se llevar al equipo de absorcin atmica para su anlisis.

b- Descomposicin de la muestra-Fe biodisponible

Preparacin del Buffer de Extraccin (previamente preparado)
Disolver en agua deionizada 3,934 g de cido dietilentriaminopentaacetico (DPTA),
29,9 g de trietanolamina TEA y 2,94 g de cloruro de calcio dihidratado (CaCl2.2H2O).
Mezclar el DPTA con una pequea cantidad de agua y luego disuelva con la solucin de
TEA. Una vez realizada esta solucin agregar aproximadamente 1,5L de agua y ajustar el pH
a 7,30 con cido HCl concentrado. Es muy importante mantener el valor de pH en 7,30
porque es crtico para la extraccin. Enrasar a 2 L con agua deionizada.
Tome una muestra de 7,5 g de suelo previamente secado al horno y pasado por un
tamiz 100 y colquelo en un erlenmeyer de 100 mL. Agregue 30 mL de solucin de
extraccin de DPTA y agite durante 2 horas a temperatura ambiente. luego filtre la solucin.
Usar pequeas porciones de la solucin de extraccin para el lavado puesto que el filtrado
debe ser enrasado a un volumen final de 50 mL (con la solucin de extraccin).
Prepare una solucin blanco utilizando todos los reactivos para corregir por
contaminacin.
c- Reactivos
Se utiliza una solucin estndar de calibracin para absorcin atmica de Fe 1.000
ppm. Para ello, disolver 1 g de Fe grado analtico en 100 mL de H2SO4 (3.5M). Si es
necesario caliente hasta que la muestra de Fe se disuelva completamente. Diluya esta solucin
a un litro con agua de-ionizada. Esta solucin ser utilizada luego para preparar las soluciones
de la curva de calibracin.

d- Soluciones estndar para calibracin.

Se deben preparar dos curvas de calibracin por comisin: una para Fe pseudo total,
empleando H2SO4 0,35 M como disolvente, y otra para Fe biodisponible, empleando el Buffer
de Extraccin como disolvente.
A partir de la solucin estndar de Fe 1000 ppm, se preparan 50 mL una dilucin
madre de 50 ppm, la cual se utilizar para preparar 8 soluciones estndares de Fe de 0 a 10
ppm en variaciones de 2 ppm en matraces de 25 mL. Recuerde rotularlos.

e- Curva de Calibracin y medicin de la absorcin de la muestra. Fe Pseudo total y

Biodisponible
Trasvasar el filtrado de la solucin preparada en a a una matrz de 100 mL y enrasar
con agua destilada. Preparar una dilucin 1/50 de esta ltima y medir su seal. Adems
preparare una solucin blanco con todos los reactivos utilizados en la preparacin de la

24

muestra y de las soluciones estndar. Estos blancos se utilizarn para corregir por la
contaminacin proveniente de cualquier fuente. Tambin debe mantener la concentracin del
cido en las muestras y en los estndares aproximadamente al mismo nivel.
Para la determinacin del contenido de Fe biodisponible, tome la solucin preparada
en b y realice el mismo procedimiento.
Una vez preparadas las soluciones determine la absorcin de cada una de ellas, la del
blanco y la de la muestra, a la longitud de onda adecuada (normalmente para Fe es de
248,3 nm).

3. Resultados
Una vez realizadas las mediciones, confeccione una tabla de las concentraciones de
las soluciones estndar de Fe en funcin de la absorcin mediada. Realice las correcciones
por blanco y determine la curva de calibracin. Luego, con el valor de absorbancia de la
muestra, determine su concentracin en ppm. Analice cuidadosamente las fuentes de errores
y prepare le informe correspondiente.

Bibliografa
- Segoe Rd., Methods of Soil Analysis, Part 2. Chemical and Microbiological Properties
Agronomy Monograph n 9. 2nd Ed. ASA-SSSA, 677 S. Madison, WI 53711, USA, 1982.

25

EJERCICIOS Y PROBLEMAS Nro 3

ESPECTROSCOPA MOLECULAR DE ABSORCIN: UV-Visible

1) En un artculo publicado en Anal. Chem., 35, 47 (1963) se cuantifica simultneamente

cobalto y nquel en base a la absorcin de sus correspondientes complejos con el 8-quinolinol.
Las absortividades molares correspondientes a los mximos de absorcin son:

365 nm

700 nm

CO (M-1 cm-1)

3529

428,9

NI (M-1 cm-1)

3228

0,00

a) Calcule las concentraciones de nquel y cobalto en cada una de las siguientes

soluciones, de acuerdo con los datos que se proporcionan:
Absorbancia (celda=1 cm)

Solucin

365 nm

700 nm

0,816

0,074

0,516

0,033

b) Ya que las bandas de cobalto y nquel estn solapadas a 365 nm, qu tcnica
podra utilizarse para resolverlas y mejorar la cuantificacin?

2) La Figura 1 presenta los espectros de absorcin de procana penicilina G (P.P.G.) y

benzatina penicilina G (B. P. G.) y de una mezcla de ambos compuestos (Anal. Lett. 1992 25,
1275). La Figura 2 corresponde a los espectros de segundas derivadas. a) Qu mtodo sera el
ms adecuado para la cuantificacin de la mezcla? b) Qu longitud de onda elegira para
cuantificar una mezcla por el mtodo de "zero crossing"?

3) La espectrofotometra de derivada ha sido usada para determinar mezclas binarias en

inyecciones comerciales y cpsulas de dicloxacilina y ampicilina de sodio (J. Pharm. Sci.
1988, 77,1042). La Figura 3 corresponde a los espectros de absorcin y la Figura 4 a los de
26

segundas derivadas de ambas drogas. Seleccione las longitudes de onda a las cuales podra
realizarse la cuantificacin.

4) a) Cul es la principal desventaja que presenta la espectroscopa de derivadas? b) Qu

ocurre con la forma de las bandas al aumentar el orden de derivacin ? (Ver Anexo)

5) Se prepar una serie de soluciones en las que la cantidad de hierro (II) se mantuvo
constante e igual a 2,00 mL a partir de una solucin de concentracin 7,12 x 10-4 M, mientras
se vari el volumen agregado de 1,10-fenantrolina 7,12 x 10-4 M. Despus de una dilucin a
25 mL, los datos de absorbancia para estas soluciones en celdas de 1,00 cm y a 510 nm se
muestran en la siguiente tabla. a) Determine la composicin del complejo. b) Estime el valor
de su constante de formacin.
1,10-fenantrolina (mL)

Absorbancia

2,00

0,240

3,00

0,360

4,00

0,480

5,00

0,593

6,00

0,700

8,00

0,720

10,00

0,720

12,00

0,720

6) Discuta el efecto del disolvente sobre la posicin e intensidad de las bandas de absorcin
UV-visible de las molculas.

7) Las cinticas de la reaccin de hidrlisis de la amida 7a en agua se siguen midiendo la

aparicin de p-nitroanilina a =380 nm (= 15800 cm-1.M-1). La mxima concentracin de
amida que es posible disolver como monmero es 3 x 10-6 M. Qu estrategia experimental
debe emplearse para obtener medidas de absorbancia dentro del rango de menor error
instrumental?

7a
27

8) Las siguientes polienonas tienen max a 284 nm (= 28000 cm-1.M-1), 315 nm (= 7000 cm1

.M-1) y 348 nm (= 26500 cm-1.M-1) en etanol. Cul de ellas corresponde a cada valor?

8a

8b

8c

9) Se quiere cuantificar una mezcla de acetofenona y benzofenona en etanol por

espectrofotometra ultra violeta visible. Los espectros de los compuestos presentan las
siguientes caractersticas: acetofenona: max = 230 nm, punto de inflexin = 270 nm
benzofenona: max = 270 nm, punto de inflexin = 229 nm
Cmo llevara a cabo la cuantificacin?

10) Deduzca la Ley de Beer: a) para la radiacin monocromtica considerando un bloque de

material absorbente. y b) para la radiacin policromtica partiendo de la expresin obtenida
en a.
Bibliografa (Adems de la bibliografa general consultar)
- Pasto, D. J.; Johnson, C. R.,"Determinacin de Estructuras Orgnicas", Ed. Revert S. A.,
Barcelona, Espaa, 1974.
- Dyer, J. R.; "Aplicaciones de Espectroscopa de Absorcin en compuestos orgnicos",
Prentice-Hall Internacional, 1973.
- OHaver, T. C.; Anal. Chem., 1979, 51, 91. A.Sanchez Rojas, F. ; Posch Ojeda, C.; Cano
Pavon, J. M.; Talanta, 1988, 35, 753.
- Thomas, M. J. K.; Ultraviolet and Visible Spectroscopy, 2da Ed, Ando, D. J., John
Wiley and Sons, 1996.
Anexo
Discriminacin de banda ancha: la amplitud (Dn) de una banda gausiana en la
ensima derivada, es inversamente proporcional a la anchura de la banda original (W) elevada
al grado n
Dn

1
Wn

Por lo tanto para dos bandas coincidentes de igual intensidad pero diferente anchura
en el orden cero, la amplitud de la derivada n de la banda ms aguda ser mayor que la de la
banda ms ancha.

28

Figura 1:Espectro de absorcin de (A) P.P.G, (B) B.P.G. y (C) su mezcla (Problema 2).

Figura 2: Espectros de segunda derivada de (A) P. P. G., (B) B.P.G. , y (C) su mezcla
(Problema 2).

29

Figura 3: Espectro de absorcin de (a) ampicilina de sodio, (b) dicloxacilina de sodio y (c) su
mezcla (Problema 3).

Figura 4: Espectro de segundas derivadas de (a) ampicilina de sodio, (b) dicloxacilina de

sodio (Problema 3).

30

31

TR
32

TRABAJO PRCTICO DE LABORATORIO Nro 3

DETERMINACION DE CIDO SALICLICO EN ASPIRINA POR

ESPECTROFOTOMETRA ULTRAVIOLETA DE DERIVADA SEGUNDA

Objetivo
-Determinar el contenido de cido saliclico en muestras de aspirina mediante
espectrofotometra ultravioleta, empleando el mtodo de derivada segunda y de adicin de
estndares.

Introduccin

El compuesto cido saliclico, el mayor producto de descomposicin de la aspirina

(cido acetilsaliclico), irrita el sistema digestivo, por lo tanto las farmacopeas prescriben un
0,1 % como lmite del contenido de este cido en aspirina (Figura 1).
O

OH

OH

H2O

OH

HO

+
O

cido acetilsaliclico

cido saliclico

cido ctico

Figura 1: Reaccin de descomposicin del cido Acetilsaliclico

Existen algunos ensayos informados para determinar cido saliclico al 0,1 % en
aspirina por cromatografa gas-lquido (CGL) y lquida de alta performance (HPLC). La
desventaja de estos mtodos cromatogrficos es que si bien los tiempos de retencin de cido
saliclico son de 10 minutos, el acondicionamiento de las columnas (esencial para todos ellos)

33

es muy tedioso; en el caso de CGL es necesaria la previa derivatizacin qumica de la

columna.
Por otro lado, los mtodos espectroscpicos presentan la ventaja de ser
experimentalmente simples y rpidos. La aplicacin del anlisis matemtico de la curva
espectral en espectrometra, tal como la diferenciacin, es sumamente til cuando existe un
solapamiento de seales o interferencias. En los ltimos aos stas tcnicas han sido aplicadas
a un gran nmero de analitos y en mltiples condiciones.

Figura 2: Espectro de absorcin de orden cero y de derivada segunda (a) cido acetilsaliclico
(3,0 pg/mL) y aspirina (12,1 pg/mL). (b) mezcla cido acetilsaliclico y aspirina en relacin
1:2000.
Los espectros ultravioleta de orden cero para aspirina y cido saliclico no se solapan
en gran medida y en concentraciones semejantes ambos podran ser determinados en una
mezcla por separado empleando solamente el espectro de orden cero sin derivar (Figura 2 a).
Sin embargo segn los requerimientos de la farmacopea cido saliclico se encuentra en muy
baja proporcin con respecto al contenido de aspirina, lo que dificulta su anlisis en una
mezcla de ambos, dado que slo se observa un pequeo hombro solapado por la seal de
aspirina. Por lo tanto, es necesario realizar la derivada segunda de la seal obtenida por
espectrofotometra de la mezcla (Figura 2 b) para lograr la seal analtica de cuantificacin de
cido saliclico. En este trabajo prctico se utilizar la tcnica de la derivada segunda y el
mtodo de la adicin estndar en la determinacin analtica del contenido de cido saliclico
en una muestra comercial de aspirina.
34

Procedimiento Experimental
1- Pesar 2 pastillas de aspirina comercial (Ej: Cafiaspirina, bayaspirina, aspirina Vent3),
anotar la masa y disolverlas en un vaso de precipitado con solucin de cido
cloroactico 1 % en etanol, sin superar los 50 mL.
2- Transvasar la dispersin a tubos de centrifuga y sonicar durante 7-10 minuntos. Luego
centrifugar 8 minutos, tomar el sobrenadante y llevar a volumen final de 50 mL con
cido cloroactico 1 % en etanol. Si la solucin no quedase transparente, filtrar previo
a enrasar.
3- Preparar 500 mL de solucin madre de cido saliclico de concentracin 100 mgL-1.
(La solucin ya se encuentra preparada)
4- Tomar 6 alcuotas con ball pipeta de 5 mL de la solucin de aspirina comercial y
disponerlas en matraces de 25 mL. Rotular los matraces como 0; 1; 2; 3; 4 y 5.
5- El matraz 0 (CERO) se enrasa con solucin de cido cloroactico 1 % en etanol.
6- La solucin madre de cido saliclico 100 ppm se emplear para efectuar las adiciones
estndares mediante el agregado de volmenes sucesivos de 1 a 5 mL para
incrementar en 4 ppm sucesivamente la concentracin de cido saliclico. Enrasar en
todos los casos con solucin de cido cloroactico 1 % en etanol.
7- Realizar el blanco de la curva espectral con la solucin de cido cloroactico/etanol.
Los barridos espectrales se realizarn en condiciones de VELOCIDAD BAJA (ver la
opcin en el men del espectrofotmetro) entre 330 y 338 nm.
8- Realizar la curva espectral de cada muestra en condiciones de VELOCIDAD BAJA
entre 300 y 338 nm.
9- Graficar cada curva espectral. Calcular la derivada 1ra y 2da de las curvas simuladas
(utilizando programas de clculo como Origin o Sigma Plot); comparar con los
resultados de los espectros originales y discutir los cambios.
10- Calcular la concentracin de cido saliclico en la solucin y en el comprimido de
aspirina comercial.
Bibliografa
-

K. Kitamura and R. Majima, Anal. Chem. 1983, 55, 54-56

35

EJERCICIOS Y PROBLEMAS Nro 4

ESPECTROSCOPIA MOLECULAR DE ABSORCION: Infrarrojo

1) Calcule el nmero de onda y la longitud de onda aproximados del pico de absorcin
fundamental correspondiente a la vibracin de tensin de un grupo C-O
2) Discuta el efecto de acoplamiento vibracional de una molcula triatmica lineal y de una
no lineal.
3) En base al espectro infrarrojo que se muestra en la Figura 1 establezca la estructura de una
sustancia desconocida que tiene la frmula C8H10. Indique de qu ismero se trata.
4) El espectro de la Figura 2 corresponde a un lquido de frmula emprica C3H6O. Identifique
el compuesto.
5) Cules son las ventajas de un espectrmetro de transformada de Fourier en comparacin
con un instrumento dispersivo?
6) Si se presenta la siguiente reaccin qumica de una resina, cules son los cambios
fundamentales que deberan observarse en el espectro infrarrojo para decir que se ha
producido la reaccin?

36

7) Cules son las principales seales que esperara encontrar en los espectros de los siguientes
compuestos:
- cido benzoico
- 1-propanol
- Anhdrido ftlico

8) Si el espectro infrarrojo de una sustancia desconocida presenta las siguientes bandas:

2820-2910 cm-1, 1753,2 cm-1, 1691,7 cm-1, 1606 cm-1, 1419,6 cm-1, 1385,3 cm-1, 1188,7 cm-1,
917,9 cm-1, 755,4 cm-1. Qu grupos funcionales poseer el compuesto?

9) El alcohol isopropanol comercial contiene generalmente una impureza que corresponde a

su producto de oxidacin. Luego de analizar el espectro de la Figura 3 diga de qu compuesto
se trata.

Figura 1: Espectro infrarrojo de la sustancia del Problema 3.

37

Figura 2: Espectro infrarrojo de la sustancia del Problema 4.

Figura 3: Espectro infrarrojo de la sustancia del Problema 9.

38

Bibliografa

Adems de la bibliografa general consultar:

- Pasto, D. J.; Johnson, C. R.,"Determinacin de Estructuras Orgnicas", Ed. Revert S. A.,

Barcelona, Espaa, 1974.
- Rubio, J.M., "Espectroscopa Infrarroja", 2da. Ed., monografa editada por la O.E.A., 1981.
- Dyer, J. R.; "Aplicaciones de Espectroscopa de Absorcin en compuestos orgnicos",
Prentice-Hall Internacional, 1973.

39

40

41

42

43

Frecuencia

Longitud de onda

44

TRABAJO PRCTICO DE LABORATORIO N 4

ESPECTROSCOPA INFRARROJA:
CUANTIFICACIN DE IBUPROFENO EN COMPRIMIDOS
CARACTERIZACIN DE GRUPOS FUNCIONALES

Objetivos
-Conocer y aplicar distintos mtodos de preparacin de muestras para anlisis en la regin del
infrarrojo medio a partir de compuestos slidos o lquidos.
-Cuantificar Ibuprofeno en formulaciones farmacuticas por espectroscopia IR-TF empleando
celdas para lquidos.
-Reconocer, identificar y asignar los diversos grupos funcionales presentes en distintos
compuestos a partir de sus espectros IR.

Introduccin
La regin del espectro electromagntico comprendido entre los valores de longitud
de onda de 4000 cm-1 (2,5 m) a 650 cm-1 (15 m), es la ms utilizada en la espectroscopia
infrarroja (IR). Las absorciones en esta regin son originadas por transiciones
vibracionales, cuyas energas tpicas varan en el orden de 0,6 0,06 eV, normalmente
acompaadas de transiciones rotacionales (cuyas energas son del orden de 0,01 eV o
menos). Estas absorciones son observadas normalmente como un nmero de bandas
caractersticas para una dada molcula.
Una de las posibles aplicaciones de la espectroscopia IR en qumica es la
identificacin de sustancias, puesto que el espectro infrarrojo provee informacin acerca de
los modos de vibracin de una especie, y stas a su vez se relacionan estrechamente a los
grupos funcionales presentes en la misma. Las frecuencias vibracionales que aparecen en
la regin comprendida entre 4000 1300 cm-1 son caractersticas de un grupo de tomos
asociados que no dependen del resto de la molcula. Por ejemplo, los grupos carbonilo
(C=O), hidroxilo (OH), ciano (CN) y nitro (NO2), pueden ser relacionados con frecuencias
de absorcin caractersticas, lo que permite su identificacin y de esta manera es posible
dilucidar, en parte, la estructura de los compuestos que los contienen.
Desde el punto de vista experimental, una etapa importante de la obtencin del
espectro de IR es la preparacin de la muestra que vara de acuerdo al estado de agregacin

45

del compuesto y de la disponibilidad presente en el laboratorio. Se pueden hacer espectros de

gases o de lquidos de bajo punto de ebullicin en celdas donde previamente se ha hecho
vaco; estas celdas pueden tener pasos pticos de unos pocos centmetros a varios metros de
longitud. Se puede obtener el espectro IR de un lquido ya sea en disolucin, usando celdas
para tal fin, o puro entre discos de KBr. Por su parte, las muestras de slidos pueden hacerse
en disolucin, o dispersos en matrices slidas (discos o pastillas de KBr) o lquidas (Nujol o
Fluorolube). Se debe tener presente que los solventes tambin absorben en la zona del
infrarrojo, lo que implica una seleccin previa del solvente ms adecuado para llevar a cabo
las muestras en solucin.
Otra importante utilidad de la espectroscopia IR es desde el punto de vista
cuantitativo, cuyo xito depende fundamentalmente del equipo con el que se trabaje. Los
espectrofotmetros dispersivos presentan algunos inconvenientes, siendo uno de los
principales el hecho de que el ancho de las rendijas que controlan la cantidad de radiacin
infrarroja que pasa por el instrumento es del mismo orden que el ancho tpico de las bandas de
infrarrojo. Esto crea una dependencia de la densidad ptica con la anchura de la rendija, esto
sumado a otros factores hacen que frecuentemente la Ley de Beer no se cumpla. Por otra
parte, los espectrofotmetros infrarrojos con transformada de Fourier (IR-TF) presentan
algunas ventajas: por un lado, la muestra recibe todas las frecuencias simultneamente con lo
cual se evita el problema que presentan los equipos de dispersin, adems presentan una
mayor relacin seal/ruido por un incremento en la intensidad de la luz incidente. Finalmente,
con el IR-TF se pueden tomar espectros de muestras que tengan muy baja absorbancia o se
pueden usar cantidades muy pequeas sin perder la resolucin del espectro. La cuantificacin,
por lo general se hace en absorbancia, aunque en aquellos casos donde los espectros presentan
bandas asimtricas se determina el rea bajo la curva de una dada banda. Se debe buscar que
la banda se asemeje a un tringulo perfecto con una buena lnea de base.
En el Trabajo Prctico se ilustrar la utilidad del empleo de IR-TF para la
cuantificacin de Ibuprofeno (IBU), un compuesto muy conocido por sus propiedades como
anti-inflamatorio, analgsico y antipirtico, y que es el ingrediente activo de una gran
variedad de formulaciones comerciales.

46

HO

Estructura qumica de IBU

Desarrollo del Prctico

Primera Parte: Preparacin de muestras e identificacin de compuestos
orgnicos.

En una primera actividad se mostrarn cuales son las distintas metodologas

disponibles para la preparacin de las muestras para la posterior adquisicin de un espectro
IR. Se discutir principalmente acerca de cuando utilizar uno u otro mtodo, lo cual depende
fundamentalmente del estado de agregacin de la muestra, y en caso de tener la posibilidad de
utilizar ms de uno para una dada muestra, cules son las ventajas y desventajas de utilizar
uno u otro mtodo, y como esta eleccin se ve reflejada en el espectro que se obtiene.
En otra actividad se proceder al registro y anlisis de los espectros, comparando con
espectros de Bases de Datos y de Recopilaciones Espectrales.

Nota: El informe deber constar con una tabla que indique el/los compuestos analizados y
las seales que le permiten asignar un determinado grupo funcional a la molcula. Todos los
espectros realizados debern ser adjuntados con el informe.

Segunda Parte: Determinacin de ibuprofeno (IBU) presente en formulaciones

farmacuticas slidas mediante absorcin IR.

Este mtodo se utilizar para la determinacin de IBU contenido en diferentes

formulaciones farmacuticas en base a la absorcin de la banda a 1720 cm-1 atribuida al
estiramiento del grupo carbonilo.
En primera instancia se lleva a cabo la extraccin de IBU a partir de comprimidos
farmacuticos de uso comercial a travs de la disolucin selectiva del ingrediente activo en

47

cloroformo acorde a las indicaciones de la USP (United States Pharmacopeia) para la

identificacin de IBU.
Para realizar el anlisis cuantitativo se considera la absorcin IR de las muestras en la
regin 1750 1683 cm-1 (Qu tipo de vibraciones fundamentales son las responsables de
la absorcin en esta regin del espectro?). Es necesario realizar una curva de calibracin,
para lo que se utiliza IBU calidad USP.

* Materiales

- Matraz de 50 mL.
- Matraz de 25 mL.
- 10 Matraces de 10 mL
- Ball pipetas doble aforo de 1, 2 y 3 mL.
- Pipetas doble aforo de 5 y 10 mL
- Esptula
- Propipetas
- Probeta 25 mL
- Vasos de precipitados 50 (2) y 100 mL
- Jeringas de 1 y 10 mL
- Celda para lquidos de NaCl
- Erlenmeyer de 50 mL
- Barrita magntica
- 2 Tubos de centrifuga
- Pipeta Pasteur de vidrio
- Mortero
- Balanza

* Reactivos

- Solvente Cloroformo calidad espectroscpica o similar (CHCl3).

- Ibuprofeno calidad USP
- Tabletas farmacuticas comerciales conteniendo Ibuprofeno como ingrediente activo

48

* Curva de calibracin

1- Solucin madre: Pesar 25 mg de IBU calidad USP en un matraz de 50 mL.

Disolver y enrasar con cloroformo. Calcule la concentracin como % P/V. Esta solucin se
usara para toda la comisin.
2- Soluciones de calibracin: Preparar las diluciones para la curva de calibracin por
duplicado en matraces de 10 mL tomando alcuotas de 1, 2, 3, 4 y 5 mL de la solucin madre
previamente preparada y enrasar con cloroformo. Calcular la concentracin exacta en
trminos de % P/V.
3- Medir el blanco del solvente.
4- Medir las soluciones de calibracin y determinar el valor del rea en absorbancia
bajo la banda del/los picos que aparecen entre 1750 y 1683 cm-1. La lnea de base debe
realizarse entre 1850 y 1653 cm-1.
5- Obtener la curva de calibracin y los parmetros correspondientes.

* Extraccin del ingrediente activo y preparacin de solucin problema:

Pesar 3 comprimidos de una formulacin farmacutica conteniendo IBU.

Morterear hasta obtener un polvo fino y homogneo.

Pesar entre 20 y 25 mg de esta mezcla en un erlenmeyer y anotar la masa exacta.

Agregar aproximadamente 7 mL de cloroformo y agitar por 5 minutos.

Trasvasar cuantitativamente a un tubo de centrifuga de 15 mL, y centrifugar por 2

min a velocidad mxima con el fin de separar los excipientes.

Trasvasar el sobrenadante con la pipeta Pasteur a un matraz de 10 mL y enrasar

con cloroformo (sol A).

Preparar una dilucin 1:10 a partir de la sol A

Medir la solucin problema (dil1:10) y determinar el valor del rea bajo la curva
del/los picos que aparecen entre 1750 y 1683 cm-1. La lnea de base debe
realizarse entre 1850 y 1653 cm-1. Tambin determinar el valor de Absorbancia a
1747 cm-1 (lnea de base: 1784-1734 cm-1) y a 1708 cm-1 (lnea de base: 17241695 cm-1)

* Clculos

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-Determinar la cantidad de IBU en la formulacin comercial utilizando la curva de

calibracin: expresar en mg de IBU por comprimido.
-Comparar la cantidad de IBU determinada con la informada por el fabricante.
- Comparar los resultados obtenidos para diferentes marcas.

Bibliografa
- C. F. Most, "Experimental Organic Chemistry", 1988, cap. 15, pg. 190.
- D. T. Sawyer, W. R. Heinman, J. M. Beebe, "Chemistry Experiments for Instrumental
Methods", 1984, cap. 8, pg. 222.
- D. J. Pasto, C. R. Johnson, "Determinacin de Estructuras Orgnicas", 1974, cap. 4, pg.
121.
- B. Scharder, Infrared and Raman Spectroscopy, Methods and Applications. 1995
- S.R. Matkovic, G.M. Valle, L.E. Briand, Quantitative Analysis of Ibuprofen in
Pharmaceutical Formulations through FTIR Spectroscopy Latin Am. Appl. Res. 2005, 35,
189-195.

50

EJERCICIOS Y PROBLEMAS Nro 5

FLUORESCENCIA, FOSFORESCENCIA Y QUIMIOLUMINISCENCIA

1) Explique la diferencia entre un espectro de emisin fluorescente y un espectro de

excitacin fluorescente. Cul se parece ms a un espectro de absorcin?

2) Por qu la espectrofluorimetra es potencialmente ms sensible que la espectrofotometra?

3) La fluorescencia de la anilina ser mayor a pH=3 que a pH=7? Explique la causa.

4) Cul de los compuestos siguientes es de esperar que tenga mayor rendimiento cuntico de
fluorescencia? Explicarlo.

HO
HO
OH

H
N

OH
N N

N
H

5) Por qu algunos compuestos absorbentes fluorescen y otros no?

6) Un derivado indlico estudiado en nuestro laboratorio presenta un mximo de absorcin a

279 nm y un mximo de emisin dependiente del pH de 355 nm a pH=7 y 364 nm a pH=11
con una relacin de fluorescencia (reas) favorable a pH bsico de 1,28.
a) Construir la curva de calibracin correspondiente con los datos siguientes a pH=11
usando como referencia la solucin de pH neutro.
b) Deducir por mnimos cuadrados la ecuacin para la curva de calibracin.
c) Calcular la desviacin estndar de la pendiente, de la interseccin y de los
residuales.
d) Calcule el lmite de deteccin y el de cuantificacin a partir de la curva de
calibracin. Compare con los valores que se obtienen si la desviacin estndar de blanco
medido 15 veces es 0,0003.

51

e) Calcule la concentracin de una solucin de fluorescencia relativa

0,8345.

Calcular el coeficiente de variacin del resultado anterior si la lectura de fluorescencia relativa

corresponde a la media de tres medidas.

Concentracin, M

Fluorescencia relativa

0,000

0,0009

0,044

0,0149

0,222

0,0675

0,888

0,2571

2,222

0,6375

4,438

1,2769

7) Los iones Fe2+ catalizan la reaccin del luminol con perxido de hidrgeno. Se ha
comprobado que la intensidad quimioluminiscente resultante aumenta linealmente en el rango
10-10 a 10-8 de concentraciones de Fe+2. A una alcuota de 2,00 mL de una solucin problema
de Fe+2 se adicionaron 1,00 mL de agua, 2,00 ml de H2O2 y 1,00 mL de luminol alcalino
producindose una seal quimioluminiscente integrada en 10 s de 6,1. A una segunda alcuota
del mismo volumen de la solucin problema se le agreg 1,00 mL de una solucin de Fe+2
0,515 M seguido del mismo volumen de los dems reactivos, rindiendo una seal integrada
de 29,6.

Cul es la molaridad de la muestra problema?

52

TRABAJO PRCTICO DE LABORATORIO No 5

FLUORESCENCIA: DETERMINACION DEL LIMITE DE DETECCION DE ACIDO
SALICILICO A PH 7
Objetivo
-Familiarizarse con la tcnica de fluorescencia y la determinacin de parmetros
analticos.
-Determinar la concentracin de cido saliclico en una muestra problema.
Introduccin
Aspirina (cido acetil saliclico) es an en nuestros das, la droga ms extensamente
usada en el mundo, a pesar de la gran variedad de nuevos y potentes agentes teraputicos que
existen.
Uno de los productos de descomposicin de cido acetil saliclico es cido saliclico y
los qumicos siguen en la bsqueda de tcnicas ms sensibles para su determinacin.
En el Trabajo Prctico se realizar la determinacin analtica de cido saliclico
utilizando un mtodo espectrofluorimtrico. El mismo implica la realizacin de una curva de
calibracin con soluciones de cido saliclico de concentraciones conocidas. Adems se
determinaran los lmites de deteccin y de cuantificacin del mtodo.
Adicionalmente, se realizar una experiencia demostrativa con un ncleo tpicamente
fluorescente, como lo es la estructura molecular de pireno.
* Procedimiento
a) Preparar buffer de pH 7 (HPO4=/H2PO4- , concentracin analtica=0,1 M).
b) Preparar una solucin (M1) de cido saliclico pesando aproximadamente 10 mg en un
matraz de 25,0 mL, disolviendo con buffer de pH=7 y registrar su espectro UV-visible
para determinar la concentracin mxima de trabajo en fluorescencia y la max de
absorcin.
c) A partir de M1, preparar una dilucin 1:100 en un matraz de 25,0 mL (sol M2)
d) Preparar 10 soluciones de cido saliclico en buffer de pH=7 de distinta concentracin
(mxima concentracin a preparar estar determinada por el UV-visible). Las soluciones
se termostatizarn en un bao a 25 C.
e) - Realizar un espectro de emisin fijando la exc. al valor de la mxima absorcin.

53

- Realizar el espectro de excitacin fijando la em al valor de la mxima emisin.

- Registrar los espectros de emisin de todas las soluciones preparadas y de la solucin
problema, midiendo las intensidades de fluorescencia (reas debajo de las curvas) en cada
caso.
- Medir por lo menos 10 veces la fluorescencia del blanco.
e)

-Realizar sendas curvas de calibracin graficando intensidades y reas de pico de

fluorescencia respectivamente.
-Calcular los correspondientes lmites de deteccin y de cuantificacin.
-Basndose en los lmites de deteccin y sensibilidades de cada curva analice cual de las
dos metodologas para construir una curva de calibracin es mas adecuada para el caso
particular de este prctico de laboratorio.
-Calcule la concentracin de la muestra problema e informe correctamente el resultado
obtenido.
Por ltimo, compare y discuta las siguientes diferencias en los anlisis

espectrofluorimtricos realizados de cido acetil saliclico y pireno:

- parmetros instrumentales
- concentraciones utilizada
- reas de fluorescencia medidas

Frmulas
COOH

COOH
OH

OCH3
C
O

2-hydroxybenzoic acid

Acido Acetilsaliclico

Acido Saliclico

Aspirina

Pireno

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Bibliografa
Adems de la bibliografa general puede consultar:
"Chemistry Experiments for Instrumental Methods" D. T. Sawyer, W. R. Heinman, J. M.
Beebe, cap. 10, pg. 266.

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