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EVALUACIN Y COMPARACIN DEL

NMERO DE PROPGULOS (NMP) DE


HONGOS MICORRIZGENOS
ARBUSCULARES

JOS ALBERTO RAMOS ZAPATA


MAYO 2011

Potencial de
inculo del suelo
Disponibilidad
de propgulos
de HMA que
permitan la
colonizacin de
races y el
incremento en el
establecimiento
de plntulas

Ecologa del
suelo
Restauracin

Propgulos de HMA
Hifas extrarradicales, esporas, restos de races con hifas y/o esporas, clulas
auxiliares.

(INVAM)

(INVAM)
(Azcn y Barea, 1980)

(S.E. Smith, 1997)

(Friese y Allen, 1997)

(Smith y Read, 2008)

POTENCIAL DE INCULO DEL SUELO


Capacidad del suelo para estimular el establecimiento de la asociacin
micorrcica en plantas hospederas.
Se relaciona con el estado de conservacin del suelo, la historia previa de
manejo, la disponibilidad de propgulos y la composicin de la comunidad de
hongos micorrizgenos.

Evaluar el estado de conservacin o salud de un ecosistema


Decidir si es necesaria la inoculacin de las plantas con HMA para facilitar su
establecimiento
Comparar el efecto en el suelo de diferentes manejos de agroecosistemas
Comparar entre diferentes etapas de una cronosecuencia
Evaluar diferentes zonas de un ecosistema

El mtodo de diluciones se ha empleado para calcular el nmero de


bacterias (UFC) en el suelo. Porter (1979) lo propone para calcular por
medio de diluciones del suelo, el nmero ms probable de propgulos
infectivos de HMA.

Crticas al mtodo del NMP de propgulos de HMA

Muy demandante de tiempo y esfuerzo, se rompen las hifas del suelo


(sobreestimacin o subestimacin)
Se emplea un jardn comn en condiciones diferentes a las naturales que
puede estimular la germinacin de esporas de especies que no son las
dominantes de la comunidad
No es posible conocer la contribucin relativa de cada uno de los propgulos
(esporas, hifas, races?)
Ventajas
Permite contrastar los valores de los propgulos viables capaces de colonizar
una raz hospedera
Si se usa el mismo hospedero y condiciones permite la comparacin a grandes
escalas
Se puede evidenciar las bondades de los inoculantes comerciales
Se obtiene una estimacin realista del estado de la comunidad de HMA

Se emplea sorgo como planta trampa,


se usan rplicas por cada dilucin.

7 ( o ms) diluciones de suelo: Sin diluir


y las diluciones: 4-1 , 4-2 , 4-3 , 4-4 , 4-5 , 4-6
De cada dilucin se evala 50 100 g en
cada replica (mL).
Despus de 6 semanas se observan las
races en busca de estructuras fngicas.

Log = [(x)(log a)] K


= nmero de propgulos
x = macetas positivas / macetas por dilucin
a = factor de dilucin (4)
K = valor de Fisher y Yates (1970).

Se toman races de 2 mm de
dimetro distribuidas en la
zona donde se distribuye la
dilucin a evaluar y se tien
con azul de tripano.

Se montan en portaobjetos y
se sellan con PVLG.

Con ayuda de un microscopio


ptico y los objetivos de 10 y
40X se evala la presencia de
estructuras fngicas.

MILPA ENERO 2002


REPLICAS
DILUCIN

4 POSITIVOS

Sin diluir

4-1

4-2

4-3

4-4

4-5

4-6

Log =[x * log a] K


x = macetas positivas / macetas por dilucin (12/4= 3)
a = factor de dilucin (4) (log 4 = 0.6020)
K = valor del cuadro de Fisher y Yates (1970) (0.552).
Log = (3)(0.6020) (0.552)
Log = 1.254
= 17.94

Anlisis de los resultados


Los valores del NMP de propgulos calculados se pueden analizar mediante una
prueba de Verosimilitud, que consiste en calcular los lmites inferiores y
superiores ms probables con base en los valores reales de las muestras,
estimados por mxima verosimilitud. Para desarrollar esta prueba se ha diseado
un programa denominado DILUTION.
BASE,4 (base de la dilucin)

MILPA ENERO 2002

DILUTIONS,7 (nmero de diluciones)


UNITS,4 (nmero de replicas)

REPLICAS
1

4 POSITIVOS

Sin diluir

4-1

4-2

4-3

4-4

4-5

4-6

4 (nmero de macetas positivas)


2
2

DILUCIN

Estimation of densities of organisms by the dilution method.


This program estimates by maximum likelihood the value of lambda, the number of organisms per sampling unit
(tube, plate) at the highest concentration
DATA READ FROM FILE: Uruapan.txt
Data summary
BASE= 4
DILUTIONS= 7
UNITS= 4
Dilution level Fertile units Sterile units
0
4
0
1
2
2
2
2
2
3
2
2
4
2
2
5
0
4
6
0
4
Initial values... 0.30000
1.40000
LAMBDA=
8.797298
LOG LIKELIHOOD=
-18.722039
OBSERVED INFORMATION= 0.094979
Relative likelihood Intervals
%

Lower Limit Upper Limit

La estimacin del NMP de cada muestra es el valor del eje X cuya verosimilitud
relativa es igual al 100%, que corresponde al pico de la curva de verosimilitud.

8.79

La cantidad de propgulos de HMA (esporas, races colonizadas, etc.) en el


suelo se ve influenciada por las condiciones ambientales.
Para caracterizar un sistema desde el punto de vista de los HMA es necesario
evaluar el NMP de propgulos en las diferentes estaciones.

Para comparar el NMP de diferentes muestras, se grafican los valores


obtenidos en el programa, colocando en el eje de las y los valores de
verosimilitud relativa y en el eje de las x los valores del NMP de propgulos.

Para decidir si existen diferencias estadsticas entre las muestras, se observa si


las curvas se sobreponen. Si no se sobreponen o se sobreponen por abajo de
un 15% de verosimilitud, entonces existen diferencias significativas entre los
valores del NMP calculado para las muestras.

3.97

57.8

Selva baja caducifolia, Nizanda, Oaxaca

Cul es el potencial de inculo de HMA del suelo en parches de vegetacin


secundaria con diferente grado de desarrollo?

Se evaluaron diferentes fuentes de propgulos: micelio extrarradical, races colonizadas,


esporas viables y se estim el NMP de propgulos infectivos de HMA.

(Guadarrama et al. 2008. Rev. Biol. Trop. 56:269-277)

(Guadarrama et al. 2008. Rev. Biol. Trop. 56:269-277)

Se encontraron propgulos en todas las parcelas.


No existe una relacin clara entre el tiempo de abandono y la densidad de
propgulos:
1.

La agricultura de R-T-Q que se practica en Nizanda, es de bajo impacto y no


afecta negativamente el nmero de propgulos infectivos de HMA

2.

El arribo de plantas, hospederas potenciales de los HMA, despus del


abandono de los cultivos mantiene el potencial de inculo del suelo

La dinmica de los HMA no se afecta, por lo que se mantienen el potencial de


inculo del suelo para soportar la regeneracin de la comunidad de plantas.
No se observa una clara relacin entre las diferentes fuentes de propgulos y la
densidad estimada por le mtodo del NMP.

Selva mediana subperennifolia, Noh Bec,


Quintana Roo
El establecimiento de
milpas y su posterior
abandono, afecta el
potencial de inculo
micorrzico del suelo en una
selva tropical?

Se compar el nmero de propgulos infectivos del suelo de una milpa


abandonada y de una selva tropical madura, en tres estaciones diferentes:
lluvias de verano, lluvias de invierno y sequa.

Lluvias de verano

(Ramos-Zapata et al. 2011. Mycorrhiza. 21:139-144)

Lluvias de invierno

Sequa

Se encontraron propgulos infcetivos en ambos sitios


Los propgulos de HMA se encuentran en la milpa abandonada debido a: la selva
circundante es fuente de propgulos que pueden arribar arrastrados por el
viento o agua, se facilita el establecimiento de plantas potencialmente
hospederas que a su vez promueven que se mantenga un nmero elevado de
propgulos viables de HMA.
La agricultura por R-T-Q es de bajo impacto y no afecta negativamente el nmero
de propgulos infectivos de HMA
(Ramos-Zapata et al. 2011. Mycorrhiza. 21:139-144)

Selva

Milpa abandonada

Vegetacin de duna costera, Sisal, Yucatn

Se presentan cambios espaciales y temporales en la disponibilidad de


propgulos de HMA en la vegetacin de duna costera?

Propgulos infectivos de
HMA en las tres zonas
analizadas

En ambas estaciones
analizadas
Diferencias solo en la duna
mvil entre estaciones
No existe relacin con
otros propgulos (esporas)
en la duna mvil

(Ramos-Zapata et al. 2011. Fungal Ecology. doi: 10.1016/j.funeco.2010.12.002)

La estimacin del nmero ms probable (NMP) de propgulos infectivos, por


medio del mtodo propuesto por Porter (1979) y el anlisis por verosimilitud,
nos permite explorar y comparar diferentes ambientes y estaciones.
Empleando las mismas condiciones en el bioensayo (planta hospedera,
tamao y tipo de maceta, forma de manipular el suelo, etc.) se puede realizar
comparaciones vlidas, de manera que se obtiene informacin real sobre el
estado de la comunidad de HMA en el suelo.
La combinacin de esta tcnica de deteccin y anlisis con otras tcnicas
(viabilidad y capacidad de germinacin de esporas, micelio, identificacin con
tcnicas moleculares) proporcionar mayor robustez a las conclusiones que
se construyan en relacin con la ecologa de los HMA en el suelo.