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Compte rendu de TP

TP du 04/02/2014
Proprits des enzymes
11/02/2014

Lauriane Moll 1S1

Compte rendu de TP
Les proprits des enzymes

Introduction :
Un tre vivant htrotrophe a besoin de consommer des aliments pour son dveloppement ainsi que pour son
fonctionnement. Les aliments renferment des macromolcules (lipides et glucides et protines) qui devront tre
simplifies (ou hydrolyses) en lments plus petits, assimilables par les cellules : Les nutriments.
La digestion chimique des aliments se fait grce des enzymes qui sont des catalyseurs (acclrateurs des ractions
chimiques). Une enzyme est une protine (enchainement dacides amins) code par un gne.
Lamidon est un glucide constitu dun enchainement de glucose. Sa digestion enzymatique dbute dans la bouche
sous laction de l amylase (enzyme), mais il est galement le glucide de rserve des vgtaux

Ce TP a pour objectifs de mettre en vidence les proprits chimiques de lamylase ainsi que la spcificit
dune enzyme par rapport son substrat.

I. Hydrolyse de lamidon
On se propose de raliser lhydrolyse in vitro de lamidon par une enzyme digestive : lamylase.

Matriel :
Pour cette exprience, nous utiliserons :
Tubes essai
Porteur de tubes
Plateau de coloration
Pipettes
Propipette en caoutchouc
Pipette jauge 5mL

Eau iode
Amylase
Eau distille
Bain marie
Becher (pour ne pas polluer la solution mre)
Empois damidon

Manipulations :
Pour tester si lamylase peut catalyser lhydrolyse des liaisons glucidiques, il faut la mettre en prsence dun glucide
complexe (ici, il sagit de lamidon) dans les conditions de son action (ici, la temprature optimale, identique celle
du corps, est de 37C). Cependant, pour sassurer que cest bien grce lamylase que lamidon est hydrolys, nous
allons faire un tube tmoin sans amylase.
Leau iode, initialement de couleur jaune, est un test colorimtrique qui met en vidence la prsence damidon. Sil
y a beaucoup damidon, la solution prendra une couleur bleu-nuit.

Protocole de ralisation des manipulations :


- Verser de lempois damidon dans un bcher. Avec laide de la propipette et de la pipette jauge pralablement
rince, prlever 5mL damidon et le dverser dans un tube essai (not A ). Verser de lamylase dans un autre
bcher. Avec laide de la propipette et de la pipette jauge pralablement rince, prlever 5mL damylase et le
verser dans le tube A . Glisser le tube dans le porte-tube.
- Avec laide de la propipette et de la pipette jauge pralablement rince, prlever 5mL damidon et le dverser
dans un autre tube essai (not B ). Verser de leau distille dans un troisime bcher. Avec laide de la
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propipette et de la pipette jauge pralablement rince, prlever 5mL deau distille et le verser dans le tube B .
Glisser le tube dans le porte-tube. Ce tube B sera le tube tmoin .

Tube A
Tube B

5mL dempois damidon (substrat) + 5mL damylase (enzyme)


5mL dempois damidon (substrat) + 5mL deau distille

Tube test
Tube tmoin

- Placer les deux tubes au bain marie ( 37C).


- Prlever toutes les deux minutes, laide de pipettes, une goutte dans chaque tube, et dposer chacune de ces
gouttes dans un puit du plateau de coloration. Faire un test leau iode en y dposant une goutte.

Rsultats :

Lamidon est toujours prsent dans des quantits identiques dans le tube tmoin B, puisquaprs le test leau iode
les chantillons sont tous de couleur bleue/noire.
Par contre, les chantillons du tube A ont leur couleur qui sclaircie et qui sapproche de plus en plus du jaune
(couleur initiale de leau iode). La prsence damidon diminue donc. Nous pouvons alors conclure quen fonction
du temps et une temprature optimale (37C), lamylase (enzyme digestive) hydrolyse lamidon (substrat).

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II. Nature chimique de lamylase


Matriel :
Pour cette exprience, nous utiliserons :
Tubes essai
Porteur de tubes
Plateau de coloration
Pipettes
Propipette en caoutchouc
Pipette jauge 5mL

Eau iode
Amylase
Empois damidon
Bain marie
Becher (pour ne pas polluer la solution mre)

Manipulations :
- Verser de lamylase dans un bcher. Avec laide de la propipette et de la pipette jauge pralablement rince,
prlever 5mL damylase et le verser dans un tube essai (not C ).Porter bullition lamylase contenue dans ce
tube.
- Verser de lempois damidon dans un autre bcher. Avec laide de la propipette et de la pipette jauge
pralablement rince, prlever 5mL damidon et le dverser dans le tube C .

Tube C

5mL dempois damidon + 5mL damylase (pralablement porte bullition)

- Placer le tube au bain marie ( 37C).


- Prlever toutes les deux minutes, laide de pipettes, une goutte dans le tube, et dposer une goutte dans un puit
du plateau de coloration. Faire un test leau iode en y dposant une goutte.

Rsultats :
Contrairement lexprience
prcdente avec lamylase, les
rsultats de cette exprience sont
similaires aux rsultats du tube
sans enzyme.
Aprs avoir t chauffe 100C,
lamylase ne marche plus : elle
a t dnature. Il ne se forme
donc pas de glucose puisquil ny a
plus denzyme.
Nous pouvons donc conclure que
si la temprature est trop leve, il
y a un risque de dnaturer
lenzyme ce qui la rendrait inutile.

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III. Spcificit dune enzyme


Les enzymes ne peuvent dgrader que des substrats bien prcis. Par exemple, lamylase ne dgrade que lamidon.
Pour prouver quune enzyme est spcifique, nous pouvons alors faire un test avec des protases (qui dgradent les
protines) ou des lipases (qui dgradent les lipides) mais avec pour substrat de lamidon.

Manipulations :
Protocole de ralisation des manipulations :
- Verser de lempois damidon dans un bcher. Avec laide de la propipette et de la pipette jauge pralablement
rince, prlever 5mL damidon et le dverser dans un tube essai (not D ). Verser de la protase dans un autre
bcher. Avec laide de la propipette et de la pipette jauge pralablement rince, prlever 5mL de protase et le
verser dans le tube D . Glisser le tube dans le porte-tube.
- Avec laide de la propipette et de la pipette jauge pralablement rince, prlever 5mL de protine et le dverser
dans un autre tube essai (not E ). Avec laide de la propipette et de la pipette jauge pralablement rince,
prlever 5mL de protase et le verser dans le tube E . Glisser le tube dans le porte-tube. Ce tube E sera le
tube tmoin puisque lon sait que la protase dgrade les protines.

Tube D 5mL dempois damidon (substrat) + 5mL de protase (enzyme) Tube test
Tube E
5mL de protine (substrat) + 5mL de protase (enzyme)
Tube tmoin
- Placer les deux tubes au bain marie ( 37C).
- Prlever toutes les deux minutes, laide de pipettes, une goutte dans chaque tube, et dposer chacune de ces
gouttes dans un puit du plateau de coloration. Faire un test leau iode en y dposant une goutte.

Rsultats :
Nous obtiendrons les mmes rsultats quavec les tubes A et B, cest--dire que lamidon ne sera pas dgrade par la
protase (comme pour le tube B avec leau distille la place de lenzyme) et la protine sera dgrade pas la
protase (comme pour le tube A avec lamidon et lamylase).

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